合成頭孢克洛的方法
2023-04-30 21:44:01
專利名稱：合成頭孢克洛的方法
技術領域：
本發明涉及合成頭孢克洛(cefaclor)的方法，所述方法包括在存在酶的情況下用7-氨基-3-氯-頭孢烷酸(7-ACCA)與活性形式的D-苯基甘氨酸反應，本發明涉及包含頭孢克洛的水性混合物以及用於從該水性混合物中回收頭孢克洛的方法。
用於對頭孢克洛進行酶促合成的方法可從多種來源已知。EP 567 323公開了一種方法，用於在0至20℃的溫度以及環境pH下對頭孢克洛進行酶促合成，其中採用了高的D-苯基甘氨酸甲酯與7-ACCA的摩爾比(5至6)，這導致了93％和88.2％的產率。活性側鏈與β-內醯胺核的高摩爾比是人們不期望，因為這增加了成本以及酶促合成反應中形成的副產物(例如，D-苯基甘氨酸)，所述副產物難於與最終的抗生素(頭孢克洛)分開。
EP 730 035目的在於在用於合成頭孢克洛的酶促工藝中降低D-苯基甘氨酸醯胺對7-ACCA的摩爾比。通過將青黴素G醯胺酶固定於吖內酯(azlactone)聚合物上，獲得的相對7-ACCA的頭孢克洛產率為98％和94％，其中，D-苯基甘氨酸醯胺與7-ACCA的摩爾比在2至3之間。
我們發現，當活性形式的D-苯基甘氨酸與7-ACCA的摩爾比在大約2至3之間時，對頭孢克洛的酶促合成反應期間形成的副產物的量仍然太大，這導致在從反應混合物回收頭孢克洛期間的操作性問題，和/或無法獲得實質上純的形式的頭孢克洛。
本發明的目的是提供從7-ACCA和活性形式的D-苯基甘氨酸對頭孢克洛進行酶促合成的方法，該方法沒有上述缺點。
這根據本發明通過用於對頭孢克洛進行酶促合成的方法來獲得，所述方法包括在存在酶的情況下，用7-氨基-3-氯頭孢烷酸(7-ACCA)與活性形式的D-苯基甘氨酸(PGa)在反應混合物中反應，形成頭孢克洛，其中，7-ACCA和/或PGa在反應期間向反應混合物中加入。
令人吃驚地，我們發現，在根據本發明的用於合成頭孢克洛的方法中，相對7-ACCA而言產生的頭孢克洛的量高於其中在反應開始即加入用於反應的全部量的7-ACCA和PGa的酶促合成方法所得到的。
令人吃驚地，我們發現，在根據本發明的用於合成頭孢克洛的方法中，頭孢克洛的轉化率可以高於90％，優選高於92％，優選高於95％，更優選高於96％。
本文中使用的頭孢克洛的轉化率被定義為相對加入到反應混合物中的7-ACCA的總量(以摩爾表示)而言產生的頭孢克洛的量(以摩爾表示)。
頭孢克洛的產率被定義為相對加入的7-ACCA的總量(以摩爾表示)從反應混合物中回收的頭孢克洛的量(以摩爾表示)。
此外，我們發現，在根據本發明的用於合成頭孢克洛的方法中，形成非常少量的副產物。當副產物(例如D-苯基甘氨酸)的濃度在反應混和物中較低時，看起來可從反應混合物中回收實質上純的形式的頭孢克洛。頭孢克洛的實質上純的形式被定義為包含至少94(w/w)％，優選至少95(w/w)％，優選至少96(w/w)％，優選至少97(w/w)％，優選至少98(w/w)％的頭孢克洛，優選至少99(w/w)％的頭孢克洛的產品。
在根據本發明的用於合成頭孢克洛的方法中，優選地，以低於2的PGa與7-ACCA的摩爾比將7-ACCA和PGa加入到反應混合物中，優選地，低於1.8，更優選地，低於1.5，最優選地，低於1.2。我們發現，當PGa與7-ACCA的摩爾比保持為低於這些值時，在合成反應期間幾乎不形成副產物，在回收頭孢克洛期間幾乎遇不到操作性問題。
本文中使用的PGa與7-ACCA的摩爾比被定義為以摩爾表示的加入到反應混合物中的PGa的總量除以以摩爾表示的加入到反應混合物中的7-ACCA的總量。
在根據本發明的酶促合成頭孢克洛的方法中，在反應期間向反應混合物中加入7-ACCA和/或PGa。優選地，在超過10分鐘，優選超過20分鐘，優選超過30分鐘，優選超過60分鐘，優選超過90分鐘，優選小於360分鐘，優選少於240分鐘，優選少於120分鐘的合成反應期間將待加入到反應混合物中的7-ACCA和/或PGa的重量中的至少一部分以連續或間斷模式加入到反應混合物中。
根據本發明的用於合成頭孢克洛的方法優選是下述方法，其中，在合成反應期間向反應混合物中加入PGa。PGa可以以固體形式或在溶液中加入進反應混合物。
用於本發明的方法中的PGa可以是醯胺，例如一級、二級或三級醯胺，或D-苯基甘氨酸的酯。優選地，PGa是D-苯基甘氨酸的酯，例如，D-苯基甘氨酸的低級烷基(C1-4)酯，例如D-苯基甘氨酸的甲、乙或異丙酯。優選的是D-苯基甘氨酸甲酯(PGM)，最優選的是以鹽的形式存在的PGM，例如PGM的甲酸、甲磺酸或HCl鹽。其它D-苯基甘氨酸酯的甲酸、甲磺酸或HCl鹽也可以使用。
適合在7-ACCA與PGa的反應中作為催化劑以製備頭孢克洛的任何酶都可在本發明的方法中使用。此類酶例如是作為一般性術語「青黴素醯基轉移酶」或「青黴素G醯基轉移酶」已知的酶，其還可被稱為「青黴素G醯胺酶」或「苯甲基青黴素醯基轉移酶」(EC 3.5.1.11)。青黴素G醯基轉移酶指來自微生物(尤其是細菌)的一組水解酶，其能水解青黴素的6-醯基或頭孢菌素的7-醯基。可基於其底物特異性以及基於其分子結構，對青黴素醯基轉移酶加以分類，這在多份公開文獻中有所描述，見，例如WO 03/055998和WO98/20120。
可從中獲得青黴素醯基轉移酶的微生物例如Acetobacter(特別是Acetobacter pasteurianum)、Aeromonas、Alcaligenes(特別是Alcaligenesfaecalis)、Aphanocladium、Bacillus sp.(特別是Bacillus megaterium)、Cephalosporium、Escherichia(特別是Escherichia coli)、Flavobacterium、Fusarium(特別是Fusarium oxysporum和Fusariumsolani)、Kluyvera、Mycoplana、Protaminobacter、Proteus(特別是Proteus rettgari)、Pseudomonas和Xanthomonas(特別是Xanthomonascitrii)。
在本發明的一種優選實施方式中，在用於合成頭孢克洛的方法中的酶是突變體酶。
可從任何已知的青黴素醯基轉移酶來製造青黴素醯基轉移酶的突變體或醯基轉移酶突變體。經突變的醯基轉移酶例如按照如下方式獲得由本領域已知的重組DNA方法，通過將一個胺基酸殘基取代為新的殘基，從野生型醯基轉移酶來獲得。
本發明的方法中使用的突變體青黴素醯基轉移酶可以例如是較之E.coli的野生型醯基轉移酶而言具有更高S/H比的青黴素醯基轉移酶。
在本文中，合成/水解(S/H)比應當被理解為是在酶促反應期間特定時刻合成產物與水解產物的摩爾比。合成產物應當被理解為從活化側鏈和β-內醯胺核心形成的β-內醯胺抗生素。水解產物應當被理解為活化側鏈的相應的酸。
S/H比是反應物濃度、活性側鏈對β-內醯胺核心的摩爾比、溫度、pH和酶的函數。在理想狀況下進行比較實驗，其中，在相同條件下，針對參照酶(優選地，E.coli PenG醯基轉移酶)對特定候選者加以測試。關於如何測定S/H比的詳細描述在WO 03/055998中給出。
優選地，突變體酶是下述突變體青黴素醯基轉移酶，其在對應於E.coli青黴素醯基轉移酶β-亞基的β-亞基第24位具有胺基酸取代。在一種優選的實施方式中，對應於E.coli青黴素醯基轉移酶β-亞基的β-亞基的第24位上的L-苯丙氨酸已被該位置上的L-丙氨酸取代，如WO 98/20120所述。該突變可應用於來自E.coli的Pen G醯基轉移酶，但是也可使用來自其它來源的Pen G醯基轉移酶。對胺基酸位置的編號對應於對E.coli野生型青黴素G醯基轉移酶的胺基酸序列的編號。
在本發明的另一種優選的實施方式中，可將酶固定於載體上。酶以固定形式存在時可容易地分離並重複應用。固定的酶本身是已知的，並可通過商業途徑獲得，例如按照WO 92/12782所述分離並按照EP 222 462和WO 97/04086所述固定的E.coli青黴素醯基轉移酶。
根據本發明的用於合成頭孢克洛的方法可在任何合適的pH下進行。優選地，酶促合成反應在6至8之間的pH下進行，優選地，6.5至7.7之間，更優選地，6.8至7.2之間。可用任何合適的有機或無機鹼或任何合適的有機或無機酸，將反應混合物的pH調節至正確的pH值。
根據本發明的用於合成頭孢克洛的方法可在任何合適的溫度下進行。優選地，酶促合成反應在5至35℃之間的溫度下進行，優選地，8至25℃之間，更優選地，18至23℃之間。酶促合成反應還可以在8至16℃之間的溫度下進行，優選地，9至15℃之間，優選地，10至14℃之間。
用於對頭孢克洛酶促合成的方法中的反應混合物原則上是水性反應混合物。水性反應混合物可含有有機溶劑或有機溶劑的混合物，優選地，有機溶劑或有機溶劑的混合物少於30vol％，更優選地，少於20vol％，更優選地，少於10vol％，更優選地，少於5vol％(相對於液體總體積而言)。優選地，有機溶劑是具有1-7個碳原子的醇，例如一元醇，特別是甲醇或乙醇；二醇，特別是乙二醇，或三醇，特別是甘油。優選地，水性反應混合物含有至少70vol％的水，更優選地，至少80vol％，更優選地，至少90vol％，最優選地，至少95vol％的水(相對於液體總體積而言)。
在酶促合成反應結束時，可將反應混合物的溫度降低至低於5℃的溫度，優選地，低於4℃的溫度，優選地，高於0℃。
在酶促合成反應結束時，可從水性反應混合物中回收形成的頭孢克洛，例如通過離心或過濾來進行。
本發明還涉及水性混合物，其中包含頭孢克洛、7-氨基-3-氯-頭孢烷酸(7-ACCA)和D-苯基甘氨酸(PG)，其中水性混合物包含＞10(w/w)％的量的頭孢克洛、＜2(w/w)％的量的7-氨基-3-氯頭孢烷酸以及＜2(w/w)％的量的D-苯基甘氨酸。有利地，可通過本發明的頭孢克洛合成方法來獲得該水性混合物。優選地，水性混合物包含＞12(w/w)％的量的頭孢克洛，更優選地，＞15(w/w)％；優選地，水性混合物中頭孢克洛的量＜50(w/w)％，更優選地，＜30(w/w)％。優選地，水性混合物包含＜1.5(w/w)％的量的7-ACCA，更優選地，＜1(w/w)％，更優選地，＜0.8(w/w)％，更優選地，＜0.6(w/w)％，更優選地，＜0.4(w/w)％。優選地，水性混合物包含＜1.5(w/w)％的量的PG，優選地，＜1.2(w/w)％，更優選地，＜1(w/w)％，更優選地，＜0.8(w/w)％。令人吃驚地，我們發現，可以容易地從本發明的水性混合物中回收以實質上純的形式存在的頭孢克洛，而幾乎沒有或沒有遇到操作性問題。
本發明還涉及從本發明的水性混合物中回收頭孢克洛的方法，例如通過離心或過濾。優選地，在朝上的攪拌(upwards stirring)下通過底篩(bottom sieve)從水性混合物中回收頭孢克洛(見，例如NL1006267)，得到包含頭孢克洛晶體的懸浮液。
包含頭孢克洛晶體的懸浮液或根據本發明的水性混合物可被酸化至0.5至2之間的pH，得到包含溶解的頭孢克洛的酸性溶液。將pH酸化至0.5至2之間可用任何合適的無機酸(例如鹽酸、硝酸和硫酸)或者任何合適的有機酸(例如甲酸、乙酸和檸檬酸)來進行。優選地，用鹽酸酸化包含頭孢克洛晶體的懸浮液或根據本發明的水性混合物，得到包含溶解的頭孢克洛的酸性溶液。
包含溶解的頭孢克洛的酸性溶液或根據本發明的水性混合物可被調節至4至6之間的pH，由此形成頭孢克洛晶體。用於將包含溶解的頭孢克洛的酸性溶液或根據本發明的水性混合物調節至4至6之間的pH的合適的鹼是無機鹼(例如氨水、氫氧化鈉或氫氧化鉀)或有機鹼(例如三乙胺或胍)。優選地，用氨水來將包含溶解的頭孢克洛的酸性溶解調節至4至6之間的pH。
頭孢克洛可以以任何合適的形式結晶，典型地，是頭孢克洛水合物的形式，例如單水合頭孢克洛。
可通過本領域已知的任何方法，例如通過離心或過濾，將頭孢克洛晶體與溶液分離開，得到包含頭孢克洛晶體的溼餅(wet cake)，其中頭孢克洛晶體是通過將包含溶解的頭孢克洛的酸性溶液調節至4至6之間的pH形成的。
隨後可通過本領域已知的任何方法，對包含頭孢克洛晶體的溼餅進行洗滌並乾燥。
令人吃驚地，我們發現，通過本發明的方法從本發明的水性混合物獲得了具有非常低著色度(coloration)的頭孢克洛晶體。優選地，具有低著色度的頭孢克洛晶體是下述水性混合物獲得的，所述水性混合物是通過本發明的用於對頭孢克洛酶促合成的方法獲得的。
在本發明的範圍內，頭孢克洛晶體的低著色度可被定義為在400nm處的低吸光度，例如，在400nm的吸光度低於0.250。
因此，在一種實施方式中，本發明涉及以晶體形式存在的頭孢克洛，其在400nm處的吸光度(A400)小於0.250，優選小於0.200，優選小於0.150，優選小於0.100，優選小於0.090，優選小於0.080，優選小於0.070，優選小於0.060，優選小於0.050，這是通過在室溫下90s後對溶解於10ml 1N HCl溶液的0.5g以晶體形式存在的頭孢克洛的溶液測量A400得到的。
可通過絡合劑的存在來穩定頭孢克洛。絡合劑可在合成反應期間加入進反應混合物，或可在合成反應已完成之後加入反應混合物，或加入根據本發明的水性混合物中。絡合劑還可在對頭孢克洛的回收期間加入。合適的絡合劑可以是萘類、膽鹼類、蒽醌磺酸(anthrachinonsulphonic acid)類或對羥基苯甲酸酯類(parabene)。絡合劑的例子是1-萘酚、2-萘酚、2，6-二羥基萘和蒽醌-1，5-二磺酸。
下述實施例將對本發明加以闡述，其不應被解釋為對本發明的限制。
實施例酶和固定本文中使用的青黴素醯基轉移酶是E.coli PenG醯基轉移酶突變體Phe-B24-Ala，如WO 98/20120所述。按照EP 222 462和WO-A-97/04086所述，用明膠和殼聚糖(chitosan)作為膠凝劑，戊二醛作為交聯劑，對酶加以固定。
實施例1a)對頭孢克洛的酶促合成向具有175μm篩底的反應器中加入5.0g固定的PenG醯基轉移酶突變體Phe-B24-Ala。在20℃加入13.9g(58.1mmol)7-ACCA、0.1g亞硫酸鈉和60g水，用氨將pH調節至7.0。
20℃時，在單獨的容器中，通過將12.9g(63.8mmol)PGM HCl鹽和21g水混合來製備PGM溶液。
從t＝0至t＝117分鐘，按照恆定速率，將PGM溶液加入反應器。酶促縮合反應在t＝0時開始，這是剛開始加入PGM的時間。用氨將pH保持於7.0。
t＝150分鐘時，頭孢克洛、7-ACCA、PGM和PG的濃度分別為17.5(w/w)％、0.33(w/w)％、0.23(w/w)％和0.79(w/w)％。
t＝150分鐘時，相對加入7-ACCA而言向頭孢克洛的轉化率為97.0％，S/H比為9.1。
隨後，用鹽酸溶液將pH降低至5.3。溫度降低至2℃。
b)回收頭孢克洛在朝上的攪拌下，通過底篩使反應器排水。將得到的頭孢克洛懸浮液濾經玻璃過濾器。將得到的母液轉移回反應器。重複5次該步驟順序。以這種方式，將＞95％的固體頭孢克洛與固體生物催化劑分開。
合併頭孢克洛溼餅和母液，將溫度保持為2℃。用鹽酸將合併的頭孢克洛溼餅和母液的pH降低為0.8，將得到的溶液濾經0.45μm的過濾器。
向結晶反應器中裝入34g水和1.0g作為晶種的頭孢克洛。35℃，在60分鐘內，將上述酸性頭孢克洛溶液加入進結晶反應器。用氨將pH保持為5.0。隨後，以下述步驟降低溫度30℃，30分鐘，25℃，30分鐘以及20℃，60分鐘。將懸浮液濾經玻璃過濾器，用一倍體積的水和兩倍體積的丙酮洗溼餅。乾燥後，獲得15.7g單水合頭孢克洛(純度99.4％)。
比較例a)對頭孢克洛的酶促合成向具有175μm篩底的反應器中加入5.0g固定的PenG醯基轉移酶突變體Phe-B24-Ala。在20℃加入13.9g(58.1mmol)7-ACCA、0.1g亞硫酸鈉和60g水，用氨將pH調節至7.0。
將12.9g(63.8mmol)PGM HCl鹽加入反應器，這起始了酶促縮合反應。用氨將pH保持為7.0。
形成了非常粘稠、果汁雪條(sorbet)狀的懸浮液。
t＝150分鐘時，頭孢克洛、7-ACCA、PGM和PG的濃度分別為10.5％、4.71％、0.11％和3.96％。相對7-ACCA而言向頭孢克洛的轉化率為59％，S/H比為1.1。
隨後，用鹽酸溶液將pH降低至5.3。溫度降低至2℃。
b)回收頭孢克洛試圖在朝上的攪拌下，通過底篩使反應器排水。但是，由於非常高的粘稠度，無法將頭孢克洛懸浮液與固定的生物催化劑分開。
實施例2a)對頭孢克洛的酶促合成向具有175μm篩底的反應器中加入10.0g固定的PenG醯基轉移酶突變體Phe-B24-Ala。在10℃加入13.9g(58.1mmol)7-ACCA和52.5g水，用氨將pH調節至7.0。
10℃時，在單獨的容器中，通過將16.7g(63.7mmol)PGM甲磺酸鹽和20g水混合來製備PGM溶液。
從t＝0至t＝90分鐘，按照恆定速率，將PGM溶液加入反應器。酶促縮合反應在t＝0時開始，這是剛開始加入PGM的時間。用氨將pH保持於7.0。溫度被保持為12℃。從t＝120至t＝180分鐘，溫度從12℃線性降低至2℃。
t＝190分鐘時，頭孢克洛、7-ACCA、PGM和PG的濃度分別為18.1(w/w)％、0.20(w/w)％、0.04(w/w)％和0.64(w/w)％。
t＝190分鐘時，相對加入7-ACCA而言產生的頭孢克洛的轉化率為98.0％，S/H比為12。
隨後，用鹽酸溶液將pH降低至5.0。
b)回收頭孢克洛在朝上的攪拌下，通過底篩使反應器排水。將得到的頭孢克洛懸浮液濾經玻璃過濾器。將得到的母液轉移回反應器。重複5次該步驟順序。隨後，用2×10ml水來洗酶。以這種方式，將≥95％的固體頭孢克洛與固體生物催化劑分開。
合併頭孢克洛溼餅、母液和洗滌用水，將溫度保持為2℃。用鹽酸將合併的頭孢克洛溼餅和母液的pH降低為0.5，將得到的溶液濾經0.45μm的過濾器。
向結晶反應器中裝入10g水。25℃，在30分鐘內，將上述酸性頭孢克洛溶液加入進結晶反應器。用氨將pH保持為5.0。隨後，在10℃對懸浮液再進行30分鐘攪拌。將懸浮液濾經玻璃過濾器，用2×15ml的水和2×15ml的丙酮洗溼餅。乾燥後，獲得18.3g單水合頭孢克洛(純度99.6％)。
實施例3頭孢克洛的著色度通過測量400nm處的吸光度來測定從實施例2獲得的單水合頭孢克洛的著色度。
將0.5g單水合頭孢克洛溶解於10ml 1N HCl溶液中。在PerkinElmer 550S分光光度計上，室溫下在400nm處測定吸光度(＝A400)，用1N HCl溶液作為參照溶液。90s後測定A400。在按照實施例2所述分離和乾燥之後直接測量的單水合頭孢克洛的吸光度為0.036。室溫以及70％相對溼度的條件下對來自實施例2的單水合頭孢克洛晶體進行4周貯存後，單水合頭孢克洛的吸光度為0.043。
權利要求
1.用於合成頭孢克洛的方法，所述方法包括在存在酶的情況下，用7-氨基-3-氯頭孢烷酸(7-ACCA)與活性形式的D-苯基甘氨酸(PGa)在反應混合物中反應，形成頭孢克洛，其特徵在於，7-ACCA和/或PGa在反應期間向反應混合物中加入。
2.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，在反應期間向反應混合物中加入活性形式的D-苯基甘氨酸(PGa)。
3.如權利要求1或2所述的方法，其特徵在於，7-ACCA和PGa以低於2的PGa與7-ACCA的摩爾比加入到反應混合物中。
4.如權利要求1至3中任意一項所述的方法，其特徵在於，PGa是D-苯基甘氨酸的酯。
5.如權利要求1至4中任意一項所述的方法，其特徵在於，所述的酶是突變體酶。
6.如權利要求5所述的方法，其特徵在於，所述突變體酶是下述突變體青黴素醯基轉移酶，其在對應於E.coli青黴素醯基轉移酶β-亞基的β-亞基第24位具有胺基酸取代。
7.如權利要求1至6中任意一項所述的方法，其特徵在於，所述合成反應在6至8之間的pH進行。
8.如權利要求1至7中任意一項所述的方法，其特徵在於，所述合成反應在5至35℃之間的溫度進行。
9.水性混合物，其中包含＞10(w/w)％的量的頭孢克洛、＜2(w/w)％的量的7-氨基-3-氯頭孢烷酸以及＜2(w/w)％的量的D-苯基甘氨酸。
10.用於獲得頭孢克洛的方法，其中，所述方法包括從權利要求9的水性混合物中回收頭孢克洛。
11.如權利要求10所述的方法，其特徵在於，所述方法包括將所述水性混合物的pH調節至4至6之間。
12.如權利要求10所述的方法，其特徵在於，所述方法包括在朝上的攪拌下通過底篩回收頭孢克洛，得到包含頭孢克洛晶體的懸浮液。
13.用於獲得頭孢克洛的方法，其中，所述方法將權利要求9的水性混合物或權利要求12的包含頭孢克洛晶體的懸浮液酸化至0.5至2之間的pH，得到包含溶解的頭孢克洛的酸性溶液。
14.如權利要求13所述的方法，其進一步特徵在於，用合適的鹼將所述包含溶解的頭孢克洛的酸性溶液調節至4至6之間的pH，由此形成頭孢克洛晶體。
15.以晶體形式存在的頭孢克洛，其在400nm處的吸光度(A400)小於0.250，這是通過相對於1N HCl參照溶液，在室溫下90s後對溶解於10ml 1N HCl溶液的0.5g以晶體形式存在的頭孢克洛的溶液測量A400得到的。
全文摘要
本發明涉及一種方法，用於合成頭孢克洛，所述方法包括在存在酶的情況下，用7－氨基－3－氯頭孢烷酸(7－ACCA)與活性形式的D－苯基甘氨酸(PGa)在反應混合物中反應，形成頭孢克洛，其中，7－ACCA和/或PGa的至少一部分在反應期間向反應混合物中加入。本發明還涉及水性混合物，其中包含＞10(w/w)％的量的頭孢克洛、＜2(w/w)％的量的7－氨基－3－氯頭孢烷酸以及＜2(w/w)％的量的D－苯基甘氨酸，還涉及從該水性混合物中回收頭孢克洛的方法。本發明還涉及晶體形式的頭孢克洛，其在400nm處的吸光度(A
文檔編號C12P37/04GK101090978SQ200580045005
公開日2007年12月19日 申請日期2005年12月23日 優先權日2004年12月27日
發明者哈羅德·莫洛·穆迪, 西奧多瑞斯·約翰內斯·格德弗裡德·瑪麗亞·杜勒恩範 申請人:帝斯曼智慧財產權資產管理有限公司