微波促進固相合成苦瓜mc-jj0107多肽類似物及其應用的製作方法

2023-04-30 19:05:21

專利名稱：：微波促進固相合成苦瓜mc-jj0107多肽類似物及其應用的製作方法
技術領域：
：本發明涉及MC-JJ0107多肽類似物及其微波促進固相合成方法。
背景技術：
：糖尿病是當今危害人類健康的重要疾病，目前全世界約有5%-7%的人受糖尿病困擾，被認為是繼心腦血管疾病、惡性腫瘤之後，導致人類傷殘、死亡的第三大殺手。糖尿病分為I型和II型，I型糖尿病是一種自身免疫疾病，患者的存活需要注射胰島素。II型糖尿病佔眾多糖尿病患者總數的95%左右。II型糖尿病的原因是胰島細胞代謝發生障礙，胰島素分泌不足，或者產生胰島素抵抗，是以胰島素抵抗為主伴胰島素分泌相對不足，或者以胰島素分泌相對不足為主伴胰島素抵抗導致的代謝性疾病。胰島素分泌不足，或者產生胰島素抵抗都可造成血液中葡萄糖過量，當血糖含量超過腎閾時，葡萄糖就轉移到尿中排出，從而產生葡萄糖尿。苦瓜(Momordicacharantia)是一種人類有長期安全食用歷史的蔬菜。近二十年來，人們在苦瓜的果實中發現了許多具有降血糖活性的成分，其中的多肽成分逐漸得到人們的認識並得到一些運用，但是由於苦瓜多肽的提取分離過於複雜，成本較高又難於得到純的多肽，現在我們運用現代多肽合成技術能夠解決這一問題。多肽可以通過基因工程的方法或者化學合成的方法得到。基因工程的方法在獲取長肽(胺基酸殘基長度大於50)或蛋白質上比化學方法有優勢，但是多肽的化學合成方法尤其是在固相合成策略出現後，在製備胺基酸殘基長度小於40的多肽或小肽上有基因工程方法難以比擬的靈活性、多樣性和高效性等。1963年Merrifield創立並開發了固相合成多肽的方法。固相多肽合成一般有兩種策略即Boc/Bzl正交保護固相合成策略和Fmoc/tBu正交保護固相合成策略，Merrifield創立的固相合成法即為Boc/Bzl正交保護固相合成策略。但是，Boc/Bzl正交保護固相合成策略中存在一些缺點，如副反應多、條件苛刻以及在延長肽鏈的過程中多肽鏈會從固相上丟失等。而隨後出現的Fmoc/tBu正交保護固相合成策略則反應條件溫和的多。當近年來微波技術運用於多肽的固相合成中後，使多肽的合成技術產生了一個飛躍。微波促進化學反應是由於其使極性分子在微波場中快速旋轉，使得一些反應速率較常規加熱方法快10到1000倍，而且產率大大提高。1986年Gedye等人首次報導了將微波應用於有機合成中，微波可以促進許多化學反應，如Diels-Alder反應，皂化反應等，可以顯著地加快反應速率並提高收率。在1992年，Hui-mingYu等首先報導了將微波應用於多肽固相合成領域中，他們完成了醯基載體蛋白片斷十肽(acylcarrierprotein,ACP6574)的合成。如何高效的合成長肽(大於20肽)在世界上仍然是一個挑戰，因為多肽隨著肽鏈的增加，其合成難度成倍增加。用傳統的固相方法合成長肽，其收率往往很低雜質較多純化困難，從而從實用的角度上說失去了合成的意義。其次合成周期長，在中間不出現困難肽序的情況下30肽一般需要近一個星期時間才能完成合成周期，如果出現困難肽序，往往就無法合成得到目標多肽。而使用微波促進固相合成多肽，可以克服困難肽序，合成傳統固相方法無法得到的多肽，而且合成時間大大縮短，且顯著提高多肽粗品純度及收率，使得產品的純化大大方便，只要經過一次製備型HPLC就能得到純度較高的產品；此外還可以非常方便的用D型胺基酸及非天然胺基酸等對多肽進行定點修飾，去尋找活性更高、生物半衰期更長的多肽，這更是基因工程技術無法做到的。因此，我們在苦瓜降血糖(MC-JJ0107)多肽類似物的合成中採用此種方法快速高效的合成得到MC-JJ0107系列類似物。多肽可以通過基因工程的方法或者化學合成的方法得到。基因工程的方法在獲取長肽(胺基酸殘基長度大於50)或蛋白質上比化學方法有優勢，但是多肽的化學合成方法尤其是在固相合成策略出現後，在製備胺基酸殘基長度小於40的多肽或小肽上有基因工程方法難以比擬的靈活性、多樣性和高效性等。1963年Merrifield創立並開發了固相合成多肽的方法。固相多肽合成一般有兩種策略即Boc/Bzl正交保護固相合成策略和Fmoc/tBu正交保護固相合成策略，Merrifield創立的固相合成法即為Boc/Bzl正交保護固相合成策略。但是，Boc/Bzl正交保護固相合成策略中存在一些缺點，如副反應多、條件苛刻以及在延長肽鏈的過程中多肽鏈會從固相上丟失等。而隨後出現的Fmoc/tBu正交保護固相合成策略則反應條件溫和的多。當近年來微波技術運用於多肽的固相合成中後，使多肽的合成技術產生了一個飛躍。微波促進化學反應是由於其使極性分子在微波場中快速旋轉，使得一些反應速率較常規加熱方法快10到1000倍，而且產率大大提高。1986年Gedye等人首次報導了將微波應用於有機合成中，微波可以促進許多化學反應，如Diels-Alder反應，皂化反應等，可以顯著地加快反應速率並提高收率。在1992年，Hui-mingYu等首先報導了將微波應用於多肽固相合成領域中，他們完成了醯基載體蛋白片斷十肽(acylcarrierprotein,ACP6574)的合成。如何高效的合成長肽(大於30肽)在世界上仍然是一個挑戰，因為多肽隨著肽鏈的增加，其合成難度成倍增加。用傳統的固相方法合成長肽，其收率往往很低雜質較多純化困難，從而從實用的角度上說失去了合成的意義。其次合成周期長，在中間不出現困難肽序的情況下30肽一般需要近一個星期時間才能完成合成周期，如果出現困難肽序，往往就無法合成得到目標多肽。而使用微波促進固相合成多肽，可以克服困難肽序，合成傳統固相方法無法得到的多肽，而且合成時間大大縮短，且顯著提高多肽粗品純度及收率，使得產品的純化大大方便，只要經過一次製備型HPLC就能得到純度較高的產品；此外還可以非常方便的用D型胺基酸及非天然胺基酸等對多肽進行定點修飾，去尋找活性更高、生物半衰期更長的多肽，這更是基因工程技術無法做到的。因此，我們在苦瓜降血糖(MC-JJ0107)多肽類似物的合成中採用此種方法快速高效的合成得到MC-JJ0107系列類似物。
發明內容本發明有兩個目的第一個母的是從具降血糖活性的藥食同源植物苦瓜中得到多肽進行修飾得到降血糖活性更高的MC-JJ0107多肽類似物。本發明的第二個目的是提供了MC-JJ0107衍生物的固相製備方法，本發明採用微波促進Fmoc/tBu正交保護固相合成策略高效快速地合成得到系列MC-JJ0107類似物。其特徵在於採用微波促進Fmoc/tBu正交保護固相合成策略，於固相載體上先合成得到載有第一個Fmoc保護胺基酸的樹脂，茚三酮法檢測為陰性後脫去Fmoc保護基得到載有第一個胺基酸殘基的樹脂；再進入下一個偶聯循環，按照相應的肽序用不同的保護胺基酸重複偶聯和脫保護的步驟，依次延長所需的胺基酸序列，合成得到載有相應多肽的樹月旨，最後用裂解劑將多肽從樹脂上切割下來得到多肽粗品。粗品經製備級高效液相色譜純化，凍幹得多肽純品。載有第一個Fmoc保護胺基酸的樹脂的製備方法，其特徵是通過在微波照射條件下Fmoc保護胺基酸先經活化劑活化後再與固相載體偶合得到，反應中加入1-羥基_苯並三氮唑(HOBT)或其衍生物抑制消旋，並使用有機鹼中和反應的酸性。載有第一個Fmoc保護胺基酸的樹脂所使用的固相載體是Rink樹脂、Wang樹脂或2-氯三苯甲基氯樹脂。活化劑是二環己基碳二亞胺(DCC)、N，N』-二異丙基碳二亞胺(DIC)、N,N"-羰基二咪唑(⑶I)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC.HCl)、2-(7-偶氮苯並三氮唑)-N，N，N』，N』-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯並三氮唑-N，N，N』，N』-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)或使用的1-羥基-苯並三氮唑(HOBT)衍生物為N-羥基琥珀醯亞胺(H0SU)、1_羥基-7-偶氮苯並三氮唑(HOAT)或3-羥基-1，2，3-苯並三嗪_4(3H)-酮(HOOBT)。有機鹼為三乙胺(TEA)、N-甲基嗎啉(NMM)或二異丙基乙胺(DIEA)；微波促進條件是微波頻率2450MHz，反應溫度20100°C，反應時間為515min。Fmoc保護基的脫除是通過使用含有0.lmol.L—1的1_羥基-苯並三氮唑(HOBT)的六氫吡啶溶液在微波促進下反應，選用二甲基甲醯胺(DMF)、二甲亞碸(DMSO)、或N-甲基吡咯烷酮(NMP)為反應溶劑。微波促進條件是微波頻率2450MHz，反應溫度20100°C，反應時間為1IOmin。本發明的優點在於1.提出的一種MC-JJ0107類似物可以在保留降糖活性的基礎上，提高MC-JJ0107的穩定性，延長作用時間。2.微波促進固相合成MC-JJ0107類似物大大的提高了偶合反應速率，常規固相合成方法充分偶合一個胺基酸到樹脂上去，往往需要2小時到20小時不等，甚至更長。而微波促進則平均只需要10分鐘左右；常規固相合成方法脫Fmoc保護基，往往需要30分鐘到1小時不等，而微波促進則平均只需要5分鐘左右，這極大的提高了多肽合成的效率，縮短了合成周期。3.微波促進固相合成MC-JJ0107類似物合成得到的粗品的純度大於80%，較常規固相合成方法大大提高，這方便了後續的純化工作，只需要經過一次製備液相純化，凍幹即可得到目標純品。4.微波促進固相方法合成MC-JJ0107類似物，其成本低，由於偶合效率較高，所需要保護胺基酸平均只需要2倍過量，較常規固相合成方法需要4到5倍過量大為降低。5.微波促進固相合成MC-JJ0107類似物方法易於實現自動化、大規模化，這使其更適合工業化生產。因此用本發明提供的微波促進固相合成技術製備的MC-JJ0107類似物，收率高、合成周期短、粗品純化容易，生產成本低、易於工業自動化生產。製備得到的MC-JJ0107類似物，比天然MC-JJ0107更加穩定，適合作為治療糖尿病藥物的活性成分。具體實施例方式在本說明書全文中採用以下縮寫Et3N三乙胺；NMM:N_甲基嗎啉；DIEA:N，N，_二異丙基乙胺；DMF二甲基甲醯胺；DMSO二甲亞碸；DCM二氯甲烷；Fmoc:N_9芴甲氧羰基；DIC:N，N，-二異丙基碳二亞胺；CDI:N，N』_羰基二咪唑；DMAP:4_二甲氨基吡啶；HOSU:N_羥基琥珀醯亞胺；EDC.HC1乙基_(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽；HATU2-(7-偶氮苯並三氮唑)-N,N，N，，N，-四甲基脲六氟磷酸酯；HBTU苯並三氮唑-N，N，N，，N，-四甲基脲六氟磷酸酯；HCTU:6_氯苯並三氮唑_1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯；H0AT羥基-7-偶氮苯並三氮唑；H0BT羥基-苯並三氮唑；PyBOP六氟磷酸苯並三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷；HPLC高效液相色譜；ESI-MS電噴霧質譜；Gly甘氨酸；Ser絲氨酸；Ala丙氨酸；Thr蘇氨酸；Val纈氨酸；lie異亮氨酸；Leu亮氨酸；Tyr酪氨酸；Phe苯丙氨酸；His組氨酸；Pro脯氨酸；Asp天門冬氨酸；Met蛋氨酸；Glu穀氨酸；Trp色氨酸；Lys賴氨酸；Arg精氨酸。Asn天冬醯胺；Gin穀氨醯胺。本發明是通過下列實施列來進行說明的，但這些實施例不做任何限制本發明的解釋。實施例1Ala-Pro-Ala-Ala-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO2)的微波促進固相合成(1)樹脂的溶脹稱取Fmoc-rinkamide-MBHAResin50mg(取代量0.4mmol/g)，經7mLDCM溶脹30min，抽濾去DCM，再用lOmLNMP溶脹30min，最後分別用NMP，DCM,NMP7mL衝洗乾淨。(2)微波促進Fmoc保護基的脫除將溶脹好的樹脂放入反應器中，加入7mL含0.1MH0BT的25%哌啶/NMP(V/V)溶液，在微波反應器中反應lmin，微波功率為15W，反應溫度控制在50°C以內，使用空氣壓縮機壓縮空氣冷卻，反應結束後濾去溶液；再加入7mL含0.1MH0BT的25%哌啶/NMP(V/V)溶液在微波反應器中再反應4min，微波功率為25W，反應溫度控制在50°C，使用空氣壓縮機壓縮空氣冷卻。反應結束後濾去溶液，用NMP洗滌乾淨。得到脫去初始連接的Fmoc保護基的樹脂。(3)微波促進Fmoc-Ser-rinkamide-MBHAResin的合成將Fmoc-Ser-0H(0.04mmol)，HBTU(0.04mmol)，H0BT(0.04mmol)禾口DIPEA(0.08mmol)溶於lOmLNMP中，再將此溶液加入上面的樹脂中，在微波反應器中反應7min，微波功率為25W，反應溫度控制在50°C.，使用空氣壓縮機壓縮空氣冷卻。反應結束後濾除反應液，用DCM和NMP各7mL洗滌樹脂3次。(4)偶合效率的檢測用茚三酮法或者溴酚蘭法定性檢測樹脂的偶合效率，顯色反應為陰性即可進入下一個偶合循環。茚三酮法取少量樹脂顆粒用乙醇洗滌，放入透明小瓶中加入5%茚三酮乙醇、KCN吡啶溶液(2ml0.001MKCN稀釋於98ml吡啶中)、80%苯酚乙醇溶液各2滴，於100°C加熱5分鐘，如果樹脂顯藍色即為陽性。溴酚蘭法取少量樹脂顆粒用二甲醯乙醯胺洗滌，放入透明小瓶中加入3滴的溴酚藍二甲基乙醯胺溶液，常溫下振搖3分鐘，如果樹脂顯藍色即為陽性。(5)肽鏈的延長按照Ala1-MC-JJ0107_(19)_NH2的序列，重複上述脫保護和偶合的步驟依次連接上相應的胺基酸，偶合微波促進反應時間520min不等。得到連有Ala1-MC-JJ0107-(19)-NH2的樹脂。(6)樹脂上多肽的裂解將上述得到的連有Ala1-MC-JJO107-(19)-NH2的樹脂放入反應瓶中，各加入裂解劑ReagentK(TFA/苯甲硫醚/水/苯酚/EDT，82.55552.5，V/V)10mL，先在0°C下振搖30min，再在常溫下反應3h。反應結束後抽濾，加少量TFA和DCM洗滌三次，合併濾液。將濾液加入大量的冰乙醚中析出白色絮狀沉澱，冷凍離心得到目標多肽的粗品。最終得到Ala1-MC-JJO107-(19)-NH2粗品63.2mg，收率為94.3%0(7)Ala1-MC-JJ0107-(19)-NH2粗品的純化將上面得到的Alal-MC-JJ0107-(l9)-NH2粗品，溶於少量的水中，用島津製備型反相HPLC純化粗品。純化中採用C18反相製備柱(340mmX28mm，5μm)；流動相A:0.1%TFA/水(V/V)，流動相B0.1%TFA/乙腈(V/V)；流動相梯度流動相B20%65%，40min；流速為6mL/min；檢測波長為214nm。收集的溶液凍幹得純品，最終得到純品29.7mg。理論相對分子質量814.9ESI-MSm/zfound[M+3H]3+272.6,[Μ+4Η]4+204·5，[Μ+5Η]5+164.1；calu[M+3H]3+272.6，[M+4H]4+204.7，[M+5H]5+164.0根據實施例1所述的方法，根據相應的序列合成得到實施例249的多肽，通過電噴霧質譜(ESI-MS)確證各自的分子量。實施例2Ala-Pro-Ala-Cys-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO3)；理論相對分子質量847.0ESI-MSm/zfound[M+3H]3+283.4,[M+4H]4+212.6,[M+5H]5+170.5；calu[M+3H]3+283.3，[Μ+4Η]4+212·7，[Μ+5Η]5+170.4實施例3Ala-Pro-Ala-Gly-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO4)；理論相對分子質量800.9ESI-MSm/zfound[M+3H]3+268.0,[M+4H]4+201·2，[M+5H]5+161·3；calu[M+3H]3+268.0，[M+4H]4+201.2，[M+5H]5+161.2實施例4Ala-Pro-Ala-His-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO5)；理論相對分子質量881.0ESI-MSm/zfound[M+3H]3+294.7,[M+4H]4+221·3，[M+5H]5+177·3；calu[M+3H]3+294.7，[Μ+4Η]4+221·2，[Μ+5Η]5+177.2實施例5Ala-Pro-Ala-Lys-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO6)；理論相對分子質量872.0ESI-MSm/zfound[M+3H]3+291.7,[M+4H]4+219·2，[M+5H]5+175·6；calu[M+3H]3+291.7，[Μ+4Η]4+219·0，[Μ+5Η]5+175.4實施例6Ala-Pro-Ala-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO7)；理論相對分子質量907.0ESI-MSm/zfound[M+3H]3+303.4,[M+4H]4+227.7,[M+5H]5+182.4；calu[M+3H]3+303.3，[M+4H]4+227.8，[M+5H]5+182.4實施例7Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO8)；理論相對分子質量999.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+334.0,[M+4H]4+250.7,[M+5H]5+200.9；calu[M+3H]3+334.0，[M+4H]4+250.8，[M+5H]5+200.8實施例8Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-(D-Ala)-Ser(SEQ.IDNO9)；理論相對分子質量985.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+329.5,[M+4H]4+247.4,[M+5H]5+198.0；calu[M+3H]3+329.4，[M+4H]4+247.3，[M+5H]5+198.0實施例9Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser(SEQ.IDNO10)；理論相對分子質量985.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+329.4,[M+4H]4+247.5,[M+5H]5+198.0；calu[M+3H]3+329.4，[M+4H]4+247.3，[M+5H]5+198.0實施例10Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser(SEQ.IDNO11)；理論相對分子質量1031.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+344.6,[M+4H]4+258.8,[M+5H]5+207.3；calu[M+3H]3+344.7，[M+4H]4+258.8，[M+5H]5+207.2實施例11Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser(SEQ.IDNO12)；理論相對分子質量1059.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+354.1,[M+4H]4+265.8,[M+5H]5+212.7；calu[M+3H]3+354.1，[M+4H]4+265.8，[M+5H]5+212.8實施例12Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ser-Ser(SEQ.IDNO:13)；理論相對分子質量1015.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+339.5,[M+4H]4+254.8,[M+5H]5+204.1；calu[M+3H]3+339.4，[M+4H]4+254.8，[M+5H]5+204.0實施例13Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO14)；理論相對分子質量1059.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+353.2,[M+4H]4+265.1，[M+5H]5+212.3；calu[M+3H]3+353.1，[M+4H]4+265.1，[M+5H]5+212.2實施例14Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO:15)；理論相對分子質量909.OESI-MSm/zfound[M+3H]3+304.1,[M+4H]4+228·1，[M+5H]5+183·O；calu[M+3H]3+304.0，[M+4H]4+228.2，[M+5H]5+182.8實施例I5Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser(SEQ.IDNO16)；理論相對分子質量909.OESI-MSm/zfound[M+3H]3+304.O,[Μ+4Η]4+228.3,[Μ+5Η]5+183.O；calu[M+3H]3+304.0，[Μ+4Η]4+228.2，[Μ+5Η]5+182.8實施例16Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser(SEQ.IDNO17)；理論相對分子質量955.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+319.2,[M+4H]4+239.7,[M+5H]5+192.O；calu[M+3H]3+319.4，[M+4H]4+239.8，[M+5H]5+192.O實施例17Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Arg-Ser(SEQ.IDNO18)；理論相對分子質量1008.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+337.1,[M+4H]4+253.2,[M+5H]5+202.7；calu[M+3H]3+337.0，[M+4H]4+253.0，[M+5H]5+202.6實施例18Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser(SEQ.IDNO19)；理論相對分子質量983.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+328.7,[M+4H]4+246.9,[M+5H]5+197.8；calu[M+3H]3+328.7，[M+4H]4+246.8，[M+5H]5+197.6實施例19Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ser-Ser(SEQ.IDNO20)；理論相對分子質量939.OESI-MSm/zfound[M+3H]3+314.1,[M+4H]4+235.9,[M+5H]5+188.6；calu[M+3H]3+314.0，[M+4H]4+235.8，[M+5H]5+188.8實施例20(D-Ala)-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser(SEQ.IDNO21)；理論相對分子質量985.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+329.5,[M+4H]4+247.4,[M+5H]5+198.1；calu[M+3H]3+329.4，[M+4H]4+247.3，[M+5H]5+198.O實施例21(D-Ala)-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser(SEQ.IDNO22)；理論相對分子質量1031.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+344.8,[Μ+4Η]4+258.7,[Μ+5Η]5+207.1；calu[M+3H]3+344.7，[M+4H]4+258.8，[M+5H]5+207.2實施例22(D-Ala)-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser(SEQ.IDNO23)；理論相對分子質量1059.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+354.0,[M+4H]4+265.7,[M+5H]5+212.8；calu[M+3H]3+354.1，[M+4H]4+265.8，[M+5H]5+212.8實施例23(D-Ala)-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ser-Ser(SEQ.IDNO24)；理論相對分子質量1015.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+339.3,[M+4H]4+254.7,[M+5H]5+204.0；calu[M+3H]3+339.4，[M+4H]4+254.8，[M+5H]5+204.0實施例24(D-Ala)-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO25)；理論相對分子質量999.1ESI-MSm/z:found[M+3H]3+334.1,[M+4H]4+250.9,[M+5H]5+200.7；calu[M+3H]3+334.0[M+4H]4+250.8，[M+5H]5+200.8實施例25(D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO26)；理論相對分子質量909.0ESI-MSm/zfound[M+3H]3+304.1,[M+4H]4+2281，[M+5H]5+1827；calu[M+3H]3+304.0[M+4H]4+228.2，[M+5H]5+182.8實施例26(D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser(SEQ.IDNO27)；理論相對分子質量909.0ESI-MSm/zfound[M+3H]3+304.2,[M+4H]4+228.2,[M+5H]5+182.6；calu[M+3H]3+304.0[M+4H]4+228.2，[M+5H]5+182.8實施例27(D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser(SEQ.IDNO28)；理論相對分子質量955.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+319.5,[M+4H]4+239.7,[M+5H]5+192.1；calu[M+3H]3+319.4[M+4H]4+239.8，[M+5H]5+192.0實施例28(D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Arg-Ser(SEQ.IDNO29)；理論相對分子質量1008.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+337.1,[M+4H]4+253.2,[M+5H]5+202.5,calu[M+3H]3+337.0[M+4H]4+253.0，[M+5H]5+202.6實施例29(D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser(SEQ.IDNO30)；理論相對分子質量939.0ESI-MSm/zfound[M+3H]3+314.2,[M+4H]4+235.7,[M+5H]5+188.9；calu[M+3H]3+314.0[M+4H]4+235.8，[M+5H]5+188.8實施例30(D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ser-Ser(SEQ.IDNO31)；理論相對分子質量939.OESI-MSm/zfound[M+3H]3+314.2,[M+4H]4+235.9,[M+5H]5+188.8；calu[M+3H]3+314.0[M+4H]4+235.8，[M+5H]5+188.8實施例31Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser(SEQ.IDNO32)；理論相對分子質量971.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+324.6,[Μ+4Η]4+243.9,[Μ+5Η]5+195·3;calu[Μ+3Η]3+324.7[Μ+4Η]4+243.8，[Μ+5Η]5+195.2實施例32Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser(SEQ.IDNO33)；理論相對分子質量1017.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+340.1,[M+4H]4+255.3,[M+5H]5+204.5；calu[M+3H]3+340.1[M+4H]4+255.3，[M+5H]5+204.4實施例33Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser(SEQ.IDNO34)；理論相對分子質量1045.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+349.5,[M+4H]4+262.3,[M+5H]5+210.1；calu[M+3H]3+349.4[M+4H]4+262.3，[M+5H]5+210.O實施例34Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ser-Ser(SEQ.IDNO35)；理論相對分子質量1001.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+334.7,[M+4H]4+251·3，[M+5H]5+201.1；calu[M+3H]3+334.7[M+4H]4+251.3，[M+5H]5+201.2實施例35Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO36)；理論相對分子質量1042.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+348.5,[M+4H]4+261·3，[M+5H]5+209.3；calu[M+3H]3+348.4[M+4H]4+261.5，[M+5H]5+209.4實施例36Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO37)；理論相對分子質量909.OESI-MSm/zfound[M+3H]3+304.1,[M+4H]4+228.3,[M+5H]5+182.7；calu[M+3H]3+304.O[M+4H]4+228.2，[M+5H]5+182.8實施例37Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser(SEQ.IDNO:38)；理論相對分子質量895.OESI-MSm/zfound[M+3H]3+299.1,[M+4H]4+224.8,[M+5H]5+180.0；calu[M+3H]3+299.3[M+4H]4+224.7，[M+5H]5+180.0實施例38Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser(SEQ.IDNO39)；理論相對分子質量941.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+314.6,[Μ+4Η]4+236.4,[Μ+5Η]5+189.1；calu[Μ+3Η]3+314.7[Μ+4Η]4+236.3，[Μ+5Η]5+189.2實施例39Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Arg-Ser(SEQ.IDNO40)；理論相對分子質量941.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+332.5,[M+4H]4+249.4,[M+5H]5+199.8；calu[M+3H]3+332.4[M+4H]4+249.5，[M+5H]5+199.8實施例40Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser(SEQ.IDNO41)；理論相對分子質量941.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+332.3,[M+4H]4+249.5,[M+5H]5+199.9；calu[M+3H]3+332.4[M+4H]4+249.5，[M+5H]5+199.8實施例41Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ser-Ser(SEQ.IDNO42)；理論相對分子質量925.OESI-MSm/zfound[M+3H]3+309.3,[M+4H]4+232.3,[M+5H]5+186.1；calu[M+3H]3+309.3[M+4H]4+232.2，[M+5H]5+186.O實施例42Ala-Pro-Ala-(D-Ala)-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO43)；理論相對分子質量814.9ESI-MSm/zfound[M+3H]3+272.7,[M+4H]4+204.6,[M+5H]5+164.1；calu[M+3H]3+272.6[M+4H]4+204.7，[M+5H]5+164.O實施例43Ala-Pro-Ala-Arg-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO44)；理論相對分子質量900.OESI-MSm/zfound[M+3H]3+301.1,[M+4H]4+226.2,[M+5H]5+181.1；calu[M+3H]3+301.0[M+4H]4+226.0，[M+5H]5+181.O實施例44Ala-Pro-(D-Ala)-Cys-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO45)；理論相對分子質量1063.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+355.2,[M+4H]4+266.7,[M+5H]5+213.8；calu[M+3H]3+355.4[M+4H]4+266.8，[M+5H]5+213.6實施例45Ala-Pro-(D-Ala)-Gly-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO46)；理論相對分子質量800.9ESI-MSm/zfound[M+3H]3+268.1,[M+4H]4+2013，[M+5H]5+1612；calu[M+3H]3+268.0[M+4H]4+201.2，[M+5H]5+161.2實施例46Ala-Pro-(D-Ala)-His-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO47)；理論相對分子質量881.0ESI-MSm/zfound[M+3H]3+294.6,[M+4H]4+2213，[M+5H]5+177.2；calu[M+3H]3+294.7[M+4H]4+221.2，[M+5H]5+177.2實施例47Ala-Pro-(D-Ala)-Lys-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO48)；理論相對分子質量872.0ESI-MSm/z:found[M+3H]3+291.6，[M+4H]4+2191，[M+5H]5+1755；calu[M+3H]3+294.7[M+4H]4+219.0，[M+5H]5+175.4實施例48Ala-Pro-(D-Ala)-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO49)；理論相對分子質量907.0ESI-MSm/zfound[M+3H]3+303.3,[M+4H]4+227.9,[M+5H]5+182.5；calu[M+3H]3+303.3[M+4H]4+227.8，[M+5H]5+182.4實施例49Gly-Pro-Ala-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser(SEQ.IDNO50)；理論相對分子質量879.0ESI-MSm/zfound[M+3H]3+294.1,[M+4H]4+220.6,[M+5H]5+176.8；calu[M+3H]3+294.0[M+4H]4+220.7，[M+5H]5+176.8實施例50MC-JJO107及其類似物體內降糖活性實驗取10周齡雄性昆明小鼠(體重1822g)，隨機分組，每組6隻。尾靜脈注射四氧嘧啶給藥建模，給藥劑量為60mg/kg，72小時後，小鼠禁食56小時測血糖挑選血糖值範圍在1323的小鼠隨機分組，每組6隻。成模後的小鼠lmg/kg連續給藥10d腹腔注射MC-JJ0107多肽及其類似物。在0，30，60，90，120用血糖儀測定血糖值。如表1所示，MC-JJ0107多肽及其類似物的降血糖活性強於二甲雙胍。表1MC-JJ0107及其類似物降血糖的效應tableseeoriginaldocumentpage15tableseeoriginaldocumentpage16η=6，l士s.*P<0.05，**P<0.01，***P<0.OOlvssaline權利要求一種具有降血糖活性的含有式I(SEQ.IDNO1)結構的苦瓜MC-JJ0107多肽類似物，得到的苦瓜MC-JJ0107多肽類似物；其特徵在於其結構具有以下形式Xaa1-Pro-Xaa2-Xaa3-Ser-Ile-Xaa4-Xaa5-Ser(SEQ.IDNO1)Xaa1Ala，D-Ala，Gly或SerXaa2Ala，D-Ala，Arg，Cys，Gly，His，Lys，Met，Tyr或SerXaa3Ala，D-Ala，Gly，Lys，Tyr或SerXaa4Lys或SerXaa5Ala，D-Ala，Gly，Cys，Arg，Lys，Met或Ser2.根據權利要求1所述的多肽，具有如下序列Ala-Pro-Ala-Ala-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO2)Ala-Pro-Ala-Cys-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO3)Ala-Pro-Ala-Gly-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO4)Ala-Pro-Ala-His-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO5)Ala-Pro-Ala-Lys-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO6)Ala-Pro-Ala-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO7)Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO8)Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-(D-Ala)-Ser(SEQ.IDNO9)Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser(SEQ.IDNO10)Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser(SEQ.IDNO11)Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser(SEQ.IDNO12)Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ser-Ser(SEQ.IDNO13)Ala-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-(SEQ.IDNO14)Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO15)Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser(SEQ.IDNO16)Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser(SEQ.IDNO17)Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Arg-Ser(SEQ.IDNO18)Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser(SEQ.IDNO19)Ala-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ser-Ser(SEQ.IDNO20)(D-Ala)-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser(SEQ.IDNO21)(D-Ala)-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser(SEQ.IDNO22)(D-Ala)-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser(SEQ.IDNO23)(D-Ala)-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ser-Ser(SEQ.IDNO24)(D-Ala)-Pro-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO25)(D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Ala-Ser(SEQ.IDNO26)(D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Gly-Ser(SEQ.IDNO27)(D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Cys-Ser(SEQ.IDNO28)(D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Arg-Ser(SEQ.IDNO29)(D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Met-Ser(SEQ.IDNO30)(D-Ala)-Pro-Ser-Tyr-Ser--Ile-Lys-Ser--Ser(SEQ.IDNO31)Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ser--Ile--Lys-Gly-Ser(SEQ.IDNO32)Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ser--Ile--Lys-Cys-Ser(SEQ.IDNO33)Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ser--Ile--Lys—Met—Ser(SEQ.IDNO34)Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ser--Ile--Lys-Ser-Ser(SEQ.IDNO35)Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ser--Ile--Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO36)Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser--Ile--Lys—Ala—Ser(SEQ.IDNO37)Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser--Ile--Lys-Gly-Ser(SEQ.IDNO38)Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser--lle--Lys-Cys-Ser(SEQ.IDNO39)Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser--Ile--Lys-Arg-Ser(SEQ.IDNO40)Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser--Ile--Lys—Met—Ser(SEQ.IDNO41)Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser--Ile--Lys-Ser-Ser(SEQ.IDNO42)Ala-Pro-Ala-(D_Ala)--Ser--Ile—Lys—Ala—Ser(SEQ.IDNO43)Ala-Pro-Ala-Arg-Tyr-Ser--Ile—Lys—Ala—Ser(SEQ.IDNO44)Ala-Pro-(D-Ala)-Cys--Ser--Ile—Lys—Ala—Ser(SEQ.IDNO45)Ala-Pro-(D-Ala)-Gly-Ser--Ile—Lys—Ala—Ser(SEQ.IDNO46)Ala-Pro-(D-Ala)-His--Ser--Ile—Lys—Ala—Ser(SEQ.IDNO47)Ala-Pro-(D-Ala)-Lys--Ser--Ile—Lys—Ala—Ser(SEQ.IDNO48)Ala-Pro-(D-Ala)-Tyr--Ser--Ile-Lys-Ala--Ser(SEQ.IDNO49)Gly-Pro-Ala-Tyr-Ser--Ile--Lys-Gly-Ser(SEQ.IDNO50)Gly-Pro-Ala-Tyr-Ser--Ile--Lys-Cys-Ser(SEQ.IDNO51)Gly-Pro-Ala-Tyr-Ser--Ile--Lys—Met—Ser(SEQIDNO:52)Gly-Pro-Ala-Tyr-Ser--Ile--Lys-Ser-Ser(SEQIDNO:53)Gly-Pro-Ala-Tyr-Ser--Ile--Lys-Lys-Ser(SEQIDNO:54)Gly-Pro-Ala-Tyr-Ser--Ile--Lys—Ala—Ser(SEQIDNO:55)Gly-Pro-Ala-Tyr-Ser--Ile--Lys-Gly-Ser(SEQIDNO:56)Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser--Ile--Lys-Cys-Ser(SEQIDNO:57)Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser--Ile--Lys-Arg-Ser(SEQIDNO:58)Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser--Ile--Lys—Met—Ser(SEQIDNO:59)Gly-Pro-Ser-Tyr-Ser--Ile--Lys-Ser-Ser(SEQIDNO:60)3.—種藥物組合物，包括治療有效量的權利要求1中所述的MC-JJ0107多肽類似物或者其藥學上可接受的鹽和藥學上可接受的載體或稀釋劑。4.權利要求1中所述的MC-JJ0107多肽類似物或者其藥學上可接受的鹽和藥學上可接受的載體或稀釋劑在製備用於治療糖尿病的藥物中的運用。5.權利要求1中所述的MC-JJ0107多肽類似物的製備方法，其特徵在於採用微波促進Fmoc/tBu正交保護固相合成策略，於固相載體上先合成得到載有第一個Fmoc保護胺基酸的樹脂，茚三酮法檢測為陰性後脫去Fmoc保護基得到載有第一個胺基酸殘基的樹脂；再進入下一個偶聯循環，按照相應的肽序用不同的保護胺基酸重複偶聯和脫保護的步驟，依次延長所需的胺基酸序列，合成得到載有相應多肽的樹脂，最後用裂解劑將多肽從樹脂上切割下來得到多肽粗品。粗品經製備級高效液相色譜純化，凍幹得多肽純品。6.根據權利要求5中所述微波促進固相合成MC-JJ0107多肽類似物方法，其特徵是載有第一個Fmoc保護胺基酸的樹脂的製備方法，是通過在微波照射條件下Fmoc保護胺基酸先經活化劑活化後再與固相載體偶合得到，反應中加入1-羥基-苯並三氮唑(HOBT)或其衍生物抑制消旋，並使用有機鹼中和反應的酸性。7.根據權利要求6所述的載有第一個Fmoc保護胺基酸的樹脂的製備方法，其特徵在於使用的固相載體是Rink樹脂、Wang樹脂或2-氯三苯甲基氯樹脂；使用的活化劑是二環己基碳二亞胺(DCC)、N，N'-二異丙基碳二亞胺(DIC)、N，N"-羰基二咪唑(⑶I)、1_乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC.HCl)、2-(7-偶氮苯並三氮唑)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯並三氮唑-N，N，N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)或6-氯苯並三氮唑_1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)；使用的1_羥基-苯並三氮唑(HOBT)衍生物為N-羥基琥珀醯亞胺(HOSU)U-羥基-7-偶氮苯並三氮唑(HOAT)或3-羥基-1，2，3-苯並三嗪-4(3H)_酮(HOOBT)；使用的有機鹼為三乙胺(TEA)、N-甲基嗎啉(NMM)或二異丙基乙胺(DIEA)；微波促進條件是微波頻率2450MHz，反應溫度20100°C，反應時間為515min。8.根據權利要求5中所述微波促進固相合成MC-JJ0107多肽類似物合成方法，其特徵是Fmoc保護基的脫除是通過使用含有0.lmol.L—1的1-羥基-苯並三氮唑(HOBT)的六氫吡啶溶液在微波促進下反應，選用二甲基甲醯胺(DMF)、二甲亞碸(DMSO)、或N-甲基吡咯烷酮(NMP)為反應溶劑；微波促進條件是微波頻率2450MHz，反應溫度20100°C，反應時間為1IOmin。全文摘要本發明涉及新型高效降血糖苦瓜MC-JJ0107多肽類似物及其微波促進固相合成方法。通過對天然苦瓜多肽的1，3，4，7或8位點進行改造得到具有更長藥理作用時間的MC-JJ0107多肽類似物；其化學合成是通過微波促進固相合成方法而得以高效快速實現，粗品經製備級高效液相純化，最後凍幹得到MC-JJ0107多肽類似物。文檔編號A61P3/10GK101824074SQ20101017794公開日2010年9月8日申請日期2010年5月20日優先權日2010年5月20日發明者張惠斌,杜闊,王敬傑,金晶,錢海,陳巍,黃文龍申請人:中國藥科大學