用於治療外傷性腦損傷、脊髓損傷及相關病症的補體旁路抑制的製作方法

2023-04-26 11:14:41 2

專利名稱：：用於治療外傷性腦損傷、脊髓損傷及相關病症的補體旁路抑制的製作方法
技術領域：
：本發明主要涉及通過選擇性抑制補體旁路——在一個具體的實施方案中通過抑制因子B—一來治療由外傷性腦損傷、脊髓損傷或相關病症導致的生理損害。
背景技術：
：補體激活主要通過三種途徑發生所謂的經典途徑、凝集素途徑和旁路途徑。旁路激活所涉及的關鍵蛋白為因子B(ffi)和因子D(fD)。這些蛋白共同作用來啟動和/或放大C3的激活，然後這會導致許多炎性事件的啟動。第三種蛋白即備解素會穩定C3和因子B的複合物但是並不一定是旁路途徑起作用時所需的。因子B也有助於溶解免疫複合物，已有報導稱因子B可以作為B細胞生長因子起作用並且能激活單核細胞(Takahashi，1980;Hall,1982;Peters,1988)。已經生成了因子B缺陷型小鼠(/8-/-小鼠)，並且在這些小鼠體內響應於T細胞依賴性抗原的IgGl抗體和對內毒素性休克的敏感性似乎都是正常的(Mats腿oto，1997)。補體旁路通常是由細菌、寄生蟲、病毒或真菌啟動，但是已有報導稱IgAAb和某些IgL鏈會激活這一途徑。當循環的因子B與激活的C3(C3b或C3H20)結合時，旁路途徑的激活就會被啟動。然後該複合物會被循環的因子D切割產生具有酶活性的片段C3bBb。C3bBb會切割C3生成C3b，這會導致炎症並且也會進一步》t大所述的激活過程，形成正反饋環。需要全部兩種組分(因子B和因子D)來使得所述旁路途徑能夠被激活。最近的研究已經證明所述補體旁路在幾種動物疾病模型的發病機理中起到重要作用。例如，在缺血再灌注損傷(1/R)後的腎臟中，補體激活幾乎僅由旁路途徑介導(Thurmanetal"2003，//畫歸/170:1517-1523),並且所述旁路途徑在炎性關節炎的發展中起到重要作用。可能最令人吃驚的是，已經證明旁路途徑有缺陷的小鼠在狼瘡腎炎的MRL/lpr模型中不會患腎炎(Watanabeetal.，2000，//附/mmo/164:786-794),並且不會引起抗磷脂介導的流產(Girardietal.，2003，/CY,Vi/wve^112:1644-1654)，所述才莫型傳統上祐j人為是由經典補體途徑介導的。此外，Nataf等人已經證明，在C3和因子B兩種小鼠的實驗性自身免疫腦脊髓炎(EAE)模型中，與它們的野生型同窩小鼠相比，幾乎沒有巨噬細胞和T細胞的實質浸潤，並且誘導了EAE的C3(-/-)和因子B(-/-)小鼠的中樞神經系統(CNS)不會有脫髓鞘作用(Natafetal"2000,//附附朋o/.165:5867-5873)。對EAE模型的C4(-/-)小鼠的自身免疫病理的後續研究表明，與具有完全完整補體系統的對照相比，C4基因的缺失不會明顯地改變發作的時間或髓磷脂少突膠質細胞誘導的EAE的嚴重程度和進展速度，說明鼠補體對脫髓鞘病發病作用是通過旁路途徑實現的(Boosetal.，2005，49:158-160)。外傷性腦損傷(本文也稱為TBI)是一種對個體健康非常有害的目前尚沒有有效療法的病症。已經證明TBI後的腦損害的發展涉及補體激活(Bellanderetal"2001，丄TVeM贈戱腳18:1295-1311;Kaczorowskietal"1995，/.O/^.Af由A.15:860-864^Keelingetal"2000，/.A^歸/柳附朋t/.105:20-30;Schmidtetal"2004，丄7Vflw歸30:135-149;Natafetal"1999,7>ew<fciVe詢s"'22:397-402;Staheletal"1998，忍/vwVi及m.Wev.27:243-256;Staheletal"2001，/.iVC，附fl18:773-781;VanBeeketal"2003，j朋iV"^992:56-71;Rancanetal"2003,/.C^6.脅W&23:1070-1074)。但是，這些研究都集中於補體級聯作用的某一點，此時激活補體的全部三種途徑都集中在這一點，例如在C3(例如，參見Rancanetal.，2003，/^V/.)。因此，在本發明之前，還沒有才艮道顯示補體途徑中是否有一種會由於TBI而被優先地或排他地激活，或者為發展TBI所需。在對頭部損傷患者的治療中，近期目標是通過快速矯正低血壓、低氧血、高碳酸血和低血糖症來防止繼發性腦損害。在對頭部創傷患者的早期治療中，重點是維持足夠的腦灌注壓(CPP)，它應該在70-80mmHg以上。不同的治療方法的目標都在於降低顱內壓(ICP)以保持足夠的CPP。治療方式有通過手術清除顱內血肺來減少大面積損傷、用滲透性藥物(例如甘露醇)減輕腦腫脹和通過腦室內導管來治療性排出腦脊液(CSF)。在最初時患有嚴重TBI的患者被轉移到重症監護病房(ICU)中並且按標準方案進行治療。ICU治療的目標包括實現並維持足夠的氣體交換和循環穩定性、預防低氧血和高碳酸血、定期重複進行計算機控制斷層攝影術(CT)掃描以檢測延緩的繼發性顱內病理狀態、深度鎮靜和鎮痛以避免應激和疼痛、實現並維持最適的CPP(>70mmHg)和腦氧平衡、避免體溫過高(15mmHg，>5分鐘)，可以通過如下方式來對患者進行治療(1)加深鎮靜、鎮痛和肌肉鬆弛的程度；(2)通過腦室內導管來排出CSF;(3)適度增加通氣(在某些情況下)；(4)滲透療法；(5)適度降溫(土34。C)和(6)巴比妥酸鹽昏迷。脊髓損傷(本文也稱為SCI)也是一種對個體健康非常有害的目前尚沒有有效療法的中樞神經系統病症。已經證明SCI後損害的發展涉及補體激活(Andersonetal"2004，/7Ve歸/屍録歸21(12):1831-46;Reynoldsetal"2004，j/mTVF為</1035:165-78;Rebhunetal"1991，J朋v4〃erg^66(4):335-8)。但是與TBI—樣，這些研究都集中於補體級聯作用的某一點，此時激活補體的全部三種途徑都集中在這一點；或是提出所有的補體途徑在SCI後有作用。因此，在本發明之前，還沒有報導顯示補體途徑中是否有一種會由於SCI而被優先地或排他地激活，或者為發展SCI所需。SCI通常被定義為會導致功能(例如運動和感覺)喪失的脊髓損害。損害的常見原因是外傷(例如交通事故、槍擊、跌倒等)或疾病(脊髓灰質炎、脊柱裂、弗裡德賴希(氏)共濟失調(Friedreich'sAtaxia)等)。不必切斷脊髓也可出現功能喪失。事實上，在大多數患有SCI的個體中，脊髓是完整的，但是對其的損害會導致功能喪失。除了感覺喪失或運動功能喪失，患有SCI的個體也可能會經歷腸和膀胱功能障礙、性功能障礙和生育功能障礙、不能有效調節血壓，體溫控制減弱、不能在損傷位置以下出汗以及慢性疼痛。較高位的損傷(C-l、C-2)會導致包括呼吸能力在內的許多非自主功能的喪失，被迫使用呼吸輔助裝置，例如機械呼吸機或膈肌起搏器。目前尚無法治癒SCI。在對SCI患者的治療中，近期目標集中於在損傷發生後儘可能快的降低損害。類固醇類藥物例如曱潑尼龍會減輕腫脹，腫脹是損傷時繼發性損害的主要誘因。對於脊髓損傷有幾種短期治療方法。首先，將受損脊髓區的脊柱固定以防止對脊髓的進一步傷害(例如，使用頭環、石膏、支具和固定帶)。為了減輕由損傷導致的脊髓腫脹，通常在損傷後的最初24個小時內進行類固醇藥物療法，但是更典型的方式是對那些有神經功能缺損的患者進行類固醇藥物療法，並且啟動治療的時間窗是在創傷後不到8小時內(Bracken,2001，&/we26(24S):S47-S54)。根據可能產生的併發症，通常需要其他的藥物療法。由於對脊髓的外傷性損傷通常包括對脊柱的骨和韌帶的損傷，所以可以進行外科手術。一些手術的目的是移開壓在脊髓上或壓入脊髓的骨(減壓)，或者是當推骨或韌帶受到損害時，穩定或復位脊髓損傷區域的脊柱。可以將金屬杆或支架或螺釘與正常的推骨連接起來以防止骨折的推骨移動，並使用骨移植物或通過類似方法使推骨"融合"起來。使用負重和滑輪(即牽引)也可以幫助脊柱復位。儘管有用於治療TBI患者的方案，但是TBI治療的潛在併發症可能包括腦血管痙攣或心血管抑制、肝毒性、免疫抑制，和肺部感染的發病率升高。此外，儘管用於SCI的療法可以適當降低生理損害，但是許多方案主要是用於幫助減少進一步損害的可能性並穩定患者。沒有一種方案被證明能完全令人滿意地抑制由TBI或SCI導致的生理損害的發展。因此，本領域中仍舊需要具有更小的毒性並且對由TBI或SCI導致的損害的深層原因更加特異的治療方法和試劑。
發明內容本發明的一個實施方案涉及一種用於在動物體內減少或預防由外傷性腦損傷(TBI)導致的生理損害的至少一種症狀或用於加強動物從TBI恢復的方法。所述方法包括選擇性抑制遭受TBI的動物體內的補體旁路。一方面，所述症狀選自腦血管痙攣、心血管抑制、肝毒性、免疫抑制和/或肺部感染。另一方面，所述症狀選自〗氐血壓、低氧血症、高碳酸血症和/或低血糖症。本發明的另一個實施方案涉及一種用於在動物體內減少或預防由脊髓損傷(SCI)導致的生理損害的至少一種症狀或用於加強動物從SCI恢復的方法。所述方法包括選擇性抑制遭受SCI的動物體內的補體旁路。一方面，所述症狀為脊髓肺脹。本發明的又一個實施方案涉及一種選擇性抑制補體旁路的試劑用於治療外傷性腦損傷(TBI)的藥物組合物中的用途。本發明的另一個實施方案涉及一種選擇性抑制補體旁路的試劑用於治療脊髓損傷(SCI)的藥物組合物中的用途。在上述任一種方法或用途中，所述抑制步驟可包括給予所述動物一種選擇性抑制補體旁路中蛋白質表達或蛋白質活性的試劑。所述補體旁路中的蛋白質選自因子B、因子D和/或備解素。這類試劑包括但不限於所述補體旁路中蛋白質表達的抑制劑、所述補體旁路中蛋白質生物活性的抑制劑和/或所述補體旁路中蛋白質的拮抗劑。一方面，在上述任一種方法或用途中所用的試劑為抗體、抗體的抗原結合片段、或抗原結合多肽，它們選擇性結合併抑制所述補體旁路中的所述蛋白質。一方面，所述抗體或其抗原結合片段選擇性結合因子B的第三短同源重複序列(SCR)結構域，其中所述抗體阻止了C3bBb複合物的形成。一方面，所述抗體或其抗原結合片段結合因子B並阻止或抑制因子D切割因子B。一方面，所述抗體或抗原結合片段結合人因子B的第三短同源重複序列(SCR)結構域。另一方面，所述抗體或其抗原結合片段選擇性結合因子B的第三SCR結構域的表位，所述表位選自(a)包括至少一部分的人因子B(SEQIDNO:2)的因子B的表位，所述部分包括從約Tyrl39位至約Serl85位或其在非人因子B序列中的等效位置；(b)包括至少一部分的人因子B(SEQIDNO:2)的因子B的表位，所述部分包括從約Tyrl39位至約Serl41位或其在非人因子B序列中的等效位置；(c)包括至少一部分的人因子B(SEQIDNO:2)的因子B的表位，所述部分包括從約Glul82位至約Serl85位或其在非人因子B序列中的等效位置；和/或(d)包括至少一部分的人因子B(SEQIDNO:2)的因子B的表位，所述部分包括任何一個或多個下列位置或它們在非人因子B序列中的等效位置Tyrl39、Cysl40、Serl41、Glul82、Glyl84或Serl85。一方面，所述抗體或其抗原結合片段選擇性結合因子B(SEQIDNO:2)的第三SCR結構域的表位，所述表位包括一個或多個下列胺基酸位置或它們在非人因子B序列中的等效位置Alal37、Tyrl39、Serl41、Glul82、Serl85、Thrl89、Glul90和Serl92。另一方面，所述抗體或其抗原結合片段選擇性結合因子B(SEQIDNO:2)的第三SCR結構域的表位，所述表位包括或由下列胺基酸位置或它們在非人因子B序列中的等效位置組成Alal37、Tyrl39、Serl41、Glul82、Serl85、Thrl89、Ghil卯和Serl92。又一方面，所述抗體或其抗原結合片段選擇性結合因子B第三SCR結構域的一部分的三維結構內的非線性表位，其中所述部分由至少SEQIDNO:2的Alal37-Ser192的胺基酸位置或非人因子B序列中的等效位置所限定。又一方面，所述抗體或其抗原結合片段選擇性結合來自多個哺乳動物物種的因子B並阻止C3bBb複合物的形成。一方面，所述抗體或其抗原結合片段選擇性結合來自人和動物的因子B,所述動物選自非人靈長類、小鼠、大鼠、豬、馬和兔。對於任一種上述抗體來說，所述抗體包括但不限於非補體激活的同種型或亞類的抗體、單克隆抗體、人源化抗體、雙特異性抗體和/或單價抗體。一方面，所述抗原結合片段為Fab片段。在本發明一個優選的方面中，所述抗體為單克隆抗體1379(由ATCC保藏號PTA-6230的菌林產生)或其抗原結合片段。在涉及TBI的方法和用途中，在一個優選的實施方案中，所述試劑為靜脈內給藥或被給予到動物的腦。在涉及SCI的方法和用途中，在一個優選的實施方案中，所述試劑為靜脈內給藥或被給予到動物的脊髓或脊髓的硬膜外隙。優選地，所述試劑被以某一個量給予到動物，與未給予所述試劑的情況相比，所述量能有效在動物體內顯著減少由TBI或SCI導致的生理損害的至少一種症狀。對TBI來說，一方面，所述試劑以有效維持70-80mmHg以上的腦灌注壓(CPP)的量給予，或以有效降低顱內壓(ICP)的量給予。對SCI來說，一方面，所述試劑以有效量給予以減輕脊髓內肺脹。一方面，所述試劑是在可藥用載體中給予的，所述可藥用載體包括但不限於能夠穿過血腦屏障的化合物或組合物和/或可注射的賦形劑。在涉及TBI的上述任一種方法或用途的一個方面中，進一步給予所述動物另一種用於治療TBI的症狀的化合物，所述症狀選自體格缺陷(physicalimpairment),認知障礙和心理社會-行為-情緒障礙。這類化合物包括但不限於滲透性藥物、鎮靜藥、鎮痛藥、肌肉鬆弛藥和/或巴比妥酸鹽。在涉及SCI的上述任一種方法或用途的一個方面中，進一步給予所述動物一種類固醇。在涉及TBI的上述任一種方法或用途的一個方面中，所述方法進一步包括通過一種方案來治療動物的TBI，所述方案選自通過手術清除顱內血腫來減少大面積損傷；用滲透性藥物減輕腦腫脹；通過腦室內導管來治療性地排出腦脊液(CSF);計算機控制斷層攝影術(CT)掃描；鎮靜；鎮痛；肌肉鬆弛；適度增加通氣；適度降溫和/或巴比妥酸鹽昏迷。在涉及SCI的上述任一種方法或用途的一個方面中，所述方法進一步包括通過一種方案來治療動物的SCI，所述方案選自給予類固醇、脊柱固定、減壓手術、手術穩定推骨、手術復位推骨和/或牽引。在上述任一種方法和用途中，所述動物優選為哺乳動物，包括但不限於人。本發明的進一步的實施方案涉及(1)一種用於在遭受外傷性腦損傷(TBI)的動物體內減少或預防由TBI導致的生理損害的至少一種症狀的方法，或(2)—種用於在遭受脊髓損傷(SCI)的動物體內減少或預防由SCI導致的生理損害的至少一種症狀的方法，每種方法均包括給予所述動物一種試劑，所述試劑通過結合或阻斷因子B的第三短同源重複序列(SCR)結構域來抑制因子B。在這些實施方案的一個優選的方面中，所述試劑為選擇性結合因子B的抗體或其抗原結合片段。本發明的另一個實施方案涉及一種組合物，包括(a)—種選自分離的抗體、其抗原結合片段、和/或抗原結合多肽的第一試劑，其中所述第一試劑選擇性地抑制補體旁路中蛋白質的表達或生物活性；和(b)—種用於治療外傷性腦損傷(TBI)的症狀的第二試劑。一方面，所述第二試劑為一種用於治療TBI的症狀的化合物，所述TBI的症狀選自體格缺陷、認知障礙和/或心理社會-行為-情緒障礙。另一方面，所述第二試劑選自滲透性藥物、鎮靜藥、鎮痛藥、肌肉鬆弛藥和巴比妥酸鹽。本發明的又一個實施方案涉及一種組合物，包括(a)—種選自分離的抗體、其抗原結合片段、和/或抗原結合多肽的第一試劑，其中所述第一試劑選擇性地抑制補體旁路中蛋白質的表達或生物活性；和(b)—種用於治療脊髓損傷(SCI)的症狀的第二試劑。一方面，所述第二試劑為類固醇。在上述兩種組合物的任一種中，所述第一試劑可以包括但不限於抑制選自因子B、因子D和/或備解素的蛋白質的表達或生物活性的試劑。一方面，所述第一試劑結合因子B中的第三短同源重複序列(SCR)結構域，並抑制或阻止C3bBb複合物的形成。另一方面，所述第一試劑為抗體或其抗原結合片段。在一個優選的方面中，所述抗體為單克隆抗體1379。用於本發明的方法或用途的上述任一種試劑可用於本發明的組合物中。圖1為示出了構建因子B-Ig融合蛋白的示意圖。圖2A為線形圖，示出了當向含10jd血清的反應體系中加入3ng抗因子B時，用酵母聚糖測定法測得抗因子B完全抑制了補體旁路。圖2B為線形圖，示出了當向10nl人血清加入6pg抗體時，用兔紅細胞裂解測定法測得抗因子B完全抑制了補體旁路。圖3為示出了給予小鼠抗因子B來抑制補體旁路的線形圖。圖4為示出了人因子B表面上mAbl379的表位定位模型的示意圖。圖5為示出了結合了因子B的mAB1379(—個Fab片段)的模式化複合物的示意圖，所述Fab的抗原結合側已經被建模為覆蓋整個定位表位區。圖6為示出了TBI後Crry-Ig抑制神經障礙的線形圖。圖7為示出了TBI後Crry-Ig抑制體重減輕的線形圖。圖8為示出了給予抗因子B(mAb1379)來減輕TBI相關腦損害的柱狀圖。圖9為示出了給予抗因子B(mAb1379)促進脊髓損傷恢復的線形圖。圖10為柱狀圖，示出了腦損傷的C57BL/6(ffi+/+)小鼠血清中C5a水平是升高的，而在缺少功能性補體旁路的因子B基因缺陷(ffi-/-)型小鼠體內C5a水平卻顯著降低。圖11為由蛋白質印跡分析測定得的蛋白質印跡的數碼照片，示出了外傷性腦損傷(TBI)後，ffi-A型小鼠的血清和腦內抗凋亡介質Bcl-2上調。圖12為數碼照片，示出了閉合性頭部外傷後4小時，因子B基因缺陷型小鼠的受傷半球中神經元細胞死亡減輕情況。圖13為數碼照片，示出了閉合性頭部外傷後24小時，因子B基因缺陷型小鼠的受傷半球中神經元細胞死亡減輕情況。圖14為數碼照片，示出了閉合性頭部外傷後7天，因子B基因缺陷型小鼠的受傷半球中神經元細胞死亡減輕情況。具體實施方式本發明主要涉及發明人的發現，所述發現是指通過旁路途徑激活補體級聯是外傷性腦損傷(TBI)誘導生理損害所必需的，以及對補體旁路的抑制足以減輕由TBI或脊髓損傷(SCI)導致的損害(或促進恢復)。更具體地說，本發明的發明人在本說明書中公開了以下發現在TBI的實驗模型中，抑制補體旁路會抑制生理損害(例如腦損害)；並且在SCI的實驗模型中，抑制補體旁路也會抑制損害(通過增強的恢復程度來測定)。因此，本發明涉及化合物、組合物，以及這些化合物或組合物在通過選擇性抑制補體旁路來預防和/或治療TBI、SCI或其他神經元損害或腦損害的方法中的用途。首先，本發明的發明人首次證明了補體激活的旁路途徑在促成總主要作用。此外，發明人已經證明通過抑制因子B來特異性抑制補體旁路，以及通過使用C3補體轉化酶抑制劑Crry-Ig對C3的抑制作用來總體抑制補體途徑，均能抑制TBI相關的損害。現認為本發明首次公開了TBI相關的生理損害和效應能夠通過特異性和選擇性地抑制補體旁路系統來抑制。其次，本發明的發明人已經證明了通過抑制因子B來抑制補體旁路可抑制SCI相關的損害。現認為本發明首次^^開了SCI相關的生理損害和效應能夠通過特異性和選擇性地抑制補體旁路系統來抑制。將補體旁路中的因子B和其他蛋白質(例如因子D或備解素)確定為特異性治療靶標，這提供了可用於通過選擇性抑制補體旁路來抑制由TBI或SCI導致的生理損害或效應的合理策略和先導化合物。已經開發了幾種抑制劑來在激活的各個階段抑制補體系統(Holers,V.M.2003，C7/"/附廳即/107:140-151)，但是補體旁路的特異性抑制劑還未被廣泛報導。與已有的補體級聯抑制劑相比，特異性抑制旁路途徑具有幾種優勢。首先，由於本發明的發明人已經發現由TBI或SCI導致的生理損害主要是由補體激活的旁路途徑介導的，所以該途徑的特異性抑制劑與廣語補體抑制劑(pan-complementinhibitor)—樣有效，並且應該幾乎沒有免疫抑制副作用。此外，O/-/-小鼠(缺少經典補體途徑、旁路途徑和凝集素補體途徑中通用的C4補體組分的小鼠)而非(因子B缺陷)小鼠，似乎對全身的實驗性細菌感染更加敏感，這表明通過保持經典途徑的完整性，旁路途徑的抑制劑使得嚴重感染的風險更小。雖然僅報導過一名患有因子B先天缺陷症的人類患者(Densenetal.，1996，/附附""o/33:68(Abstract270))，但是針對基因打靶的因子B缺陷型小鼠的研究尚沒有證明該因子具有免疫調節作用(Densenetal.，Matsumotoetal.，1997，iVfl"^crw/C7^94:8720-8725)。相比而言，經典途徑組分先天缺陷的患者感染的風險似乎會增加(最常見的葡萄球菌(5Vfl/;/^oc^cc附)和鏈球菌(Ar印似cocc附))。經典途徑組分或C3(所有補體途徑所共有的)的抑制也可能與自身免疫相關(FigueroaandDe雄n，1991，C7/w她油》/i^v4:359-395)，這可負g解釋了為什麼因子B缺陷能使得MRL/lpr小鼠不會患腎小球腎炎，而C3缺陷卻無此作用(Watanabeetal，)。選擇性抑制旁路途徑會防止生成C3a受體以及補體受體l-4和C5a的C3來源配體。事實上，由於尚不能很好地對激活過程中產生的因子B的Ba或Bb激活產物的受體進行表徵，阻斷旁路途徑的效果可能更加直接。因此，旁路途徑的抑制有望會比經典補體途徑抑制更耐受且更有效。考慮到用於本發明的治療TBI和SCI及相關病症的方法中的補體旁路特異性抑制劑具有極大的潛在療效，本發明的發明人已經開發了幾種抗因子B的抑制性單克隆抗體並且已經在TBI實驗模型和SCI實驗模型中對它們中的一種進行了測試。這些抗體在2005年11月24日^^開的公開號為2005-0260198-Al的美國專利申請和2005年8月25日公開的公開號為WO2005/077417的PCT申請中有詳細的描述，上述專利申請全文以引用的方式納入本說明書。簡言之，為產生抗體，給基因打靶的因子B缺陷型小鼠(/B-/-)注射一種融合蛋白，所述融合蛋白由與小鼠IgGl同種型的鉸鏈、CH2和CH3結構域連接的因子B的第二和第三短同源重複序列(SCR)結構域構成(參見圖1)。選擇這些81結構域是因為它們是/-/-型小鼠的因子B基因缺失區段的一部分。篩選出對因子B有免疫應答的小鼠(例如使用ELISA)，並且將一隻注射後小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞融合。一種所得的雜交瘤(命名為1379)會產生能抑制體外(圖2A和2B)和體內(圖3)補體旁路激活的IgGl抗體。具體地說，在兩種旁路途徑活性的體外測定中測試了這種抗體(圖2A和2B)，並且顯示出所述抗體能夠完全抑制人血清造成的紅細胞裂解，因此確證了該試劑具有完全阻斷補體旁路激活的能力。在單次注射抑制性抗體後的各個時間測試小鼠的旁路途徑抑制情況時，1mg抗體會導致在IV注射後的1小時內以及IP注射後的2小時內的完全抑制(圖3)。IP注射了1mg注射液的小鼠在24小時時，旁路途徑保持完全抑制，注射了2mg注射液的小鼠在注射後直至48小時時保持完全抑制。每隔一天本發明的發明人會重複i.p.注射2mg所述1379抗體，持續14天，結果顯示最後一次注射後，補體旁路的完全抑制維持至少48小時。此外，由該抗體製備的Fab片段也會導致旁路途徑的完全抑制，其摩爾水平與完整的1379抗體大致相等。1379抗體抑制下列動物血清中的旁路途徑激活小鼠、大鼠、人、狒狒、恆河猴、獼猴(cynomonkey)、豬、兔和馬(表1)。表1_tableseeoriginaldocumentpage17tableseeoriginaldocumentpage18表2中示出了本發明人生產的抗因子B抗體的列表。如上所述，本發明的發明人已經證明了所述mAbl379能結合併抑制小鼠和人的因子B。相比而言，命名為624的mAb能夠結合小鼠和人的因子B，但不抑制人的旁路途徑。如竟爭試驗中所示，抗體624、691和1231不會阻斷1379的結合。因此，這些抗體一定是在不同的位點與蛋白結合的，這解釋了為什麼它們能在體外結合因子B而不抑制其功能。但是，抗體395、1322和1060是1379的竟爭性抑制劑。表2tableseeoriginaldocumentpage18使用表位定位來證明該抗體結合因子B的第三短同源重複序列(SCR)結構域，且該抗體阻止C3bBb複合物的形成。此外，針對mAbl379抗體的表位定位實驗表明因子B上的表位或抗體結合位點是非線性的。實驗證明向人因子B的SCR2和SCR3而非SCR1中引入某些丙氨酸置換會導致1379抗體結合因子B的能力的喪失或基本喪失，這包括進行了以下置換的突變體用His-Cys-Pro置換139-Tyr-140-Cys-141-Ser(所述位置與SEQIDNO:2所代表的成熟的人因子B相關)；用Gly-Asn-Gly-Val置換182畫Glu畫183-Gly-184-Gly-185-Ser。對能被mAbl379識別的人因子B的推定保守性結合表面或表位進行建模。簡言之，人因子B的三級結構是基於所解析出的CR2-SCR1-2(蛋白質資料庫(PDB)編號1GHQ)的三維結構建立的。圖4示出了因子B結構的模型，註明了對應於mAbl379表位(相對於SEQIDNO:2)的胺基酸位置。被認為能構成針對mAbl379抗體的構象表位的殘基為Alal37、Tyrl39、Serl41、Glul82、Serl85、Thrl89、Glul90和Serl92，但是所述表位可以僅含有一些圖4中所示的殘基、基本上含有全部的圖4中所示的殘基或者所含殘基比圖4中所示的殘基多。圖5為示出結合了因子B的mAB1379(—個Fab片段)的模式化複合物的示意圖，所述Fab的抗原結合側已經被建模為覆蓋整個定位表位區，如上述圖4中所示。上述本發明的發明人所製備的抗體(在公開號為2005-0260198-A1的美國專利申請和7>開號為WO2005/077417的PCT申請中有更詳細的描述)能識別因子B上的、人和許多其他動物物種所共有的位點，對此已進行了臨床前的原理求證實驗，因此，使得能夠容易地將人疾病模型中的發現轉變為人類療法。這些抗體被認為是第一批顯示出能在多個物種中抑制因子B的抗因子B抗體。因此，已經在因子B上鑑定了一個獨特位點，針對該位點可以開發出新的抑制劑。在本發明中，本發明的發明人發現了並在本文中首次報導了抑制旁路途徑會抑制外傷性腦損傷(TBI)中的生理損害，並且也會抑制脊髓損傷(SCI)中的生理損害，現在這一信息可以被用於設計、分離和/或鑑定用於治療TBI和SCI的新型治療劑。此外，先前本發明人所製備和描述的抗體是用於本發明的方法的優良試劑。本發明的一個實施方案涉及一種用於在動物體內減少或預防由外傷性腦損傷(TBI)導致(與之相關)的至少一種症狀或病症(殘疾、缺損、生理損害)、或用於加強(促進)從TBI導致的損害中恢復的方法，包括選擇性抑制遭受TBI的動物體內的補體旁路。本發明的另一個實施方案涉及一種用於在動物體內減少或預防由脊髓損傷(SCI)導致(與之相關)的至少一種症狀或病症(殘疾、功能缺損、生理損害)、或用於加強(促進)從SCI導致的損害中恢復的方法，包括選擇性抑制遭受SCI的動物體內的補體旁路。在一個優選的實施方案中，所述方法包括給予所述動物一種抑制補體旁路的試劑，特別是一種抑制因子B的試劑。在一個特別優選的實施方案中，所述試劑為抗因子B抗體或其抗原結合片段。因此，本發明的方法包括選擇性抑制動物體內的補體旁路的步驟，所述動物具有分別由TBI或SCI導致的生理損害，或有產生分別由TBI或SCI導致的生理損害的風險。根據本發明，抑制動物體內的補體旁路是指抑制至少一種下述蛋白或編碼這類蛋白的核酸分子的表達和/或生物活性，所述蛋白為補體旁路的一部分。這類蛋白包括但不限於因子B、因子D或備解素。"選擇性"抑制補體旁路是指本發明的方法優先地或排他地抑制補體旁路，但不抑制或至少基本不抑制補體激活的其他途徑，包括經典補體途徑或凝集素途徑。例如，本發明的新型因子B抗體及其抗原結合片段就是選擇性抑制補體旁路的試劑的一個實例。"選擇性"抑制特定的蛋白是指本發明的方法優先地或排他地抑制該特定蛋白質的表達和/或生物活性，但不抑制或至少基本上不抑制其它蛋白質的表達和/或生物活性(除非這種生物活性是與所述特定蛋白共有的，如下遊事件)。根據本發明，外傷性腦損傷(TBI)被定義為由任何類型的頭部創傷例如對頭部的撞擊或震蕩等導致的任何損傷、創傷或損害。更具體地說，TBI是由外部物理作用力造成的獲得性腦損傷，導致全部或部分的功能喪失或心理社會障礙，或兩者都會導致。該術語用於會導致一個或多個方面功能缺損的開放性和閉合性頭部損傷，所述一個或多個方面為例如認知，語言，記憶，注意力，推理，抽象思維，判斷，問題求解，感覺、知覺和運動能力，心理社會行為，軀體功能，信息處理和言語。該術語通常不用於先天性或退行性腦損傷或者產傷導致的腦損傷，但是後一種類型的創傷也可以用本發明的方法來治療。TBI可導致各種生理和心理症狀、病症或功能缺損，包括體格缺陷(例如言語、視力、聽力和其它感覺障礙；頭痛；缺乏精細運動協調；肌肉痙攣；一側或兩側輕癱或麻痺及癲癇發作；平衡障礙和其它的步態障礙)、認知障礙(例如短期和長期記憶喪失、注意力不集中、思維遲鈍和注意力廣度受限，以及知覺障礙、交流技能障礙、閱讀技能障礙和書寫技能障礙、計劃障礙、排序障礙和判斷障礙)和心理社會-行為-情緒障礙(例如疲勞、心態不穩、否認、自我中心、焦慮、抑鬱、自尊下降、性功能障礙、不安、缺乏動力、無法自我監控、情緒控制困難、無法應付、激動、過度的大笑或大哭和其它相關困難)。TBI診斷的詳細討論如上所述。本領域中診斷TBI的方法已很成熟。通常，TBI是通過創傷歷史、臨床狀況和成像研究(例如x射線和計算機控制斷層攝影術(CT)掃描)來診斷的。特別重要的是使用復甦後格拉斯哥(Glasgow)昏迷(GCS)評分(TeasdaleandJe廳tt，1974，丄flwc"2(7872):81-84)，因為這一參數是治療結果的重要預測指標。當評估GCS時，用最好的反應來計算評分。患有輕度頭部損傷(GCS14或15)的患者佔急診科所收納的所有頭部創傷患者的約80%。中度頭部損傷對應的GCS評分在9至13之間，並且與顱內病症相對於輕度頭部損傷患者風險上升相關。8分或更少的GCS評分對應於昏迷的患者，所述昏迷的患者被定義為不能崢開眼睛、不能服從命令和無語言反應。因此，嚴重的頭部損傷被定義為GCS評分在3至8之間。當對患者進行評估時，除GCS和意識水平評估外，神經檢查通常包括對瞳孔大小和反應性的評估和對外周運動能力的簡單評價。進一步的臨床檢查包括對頭皮撕裂的檢查，對顱骨陷入性骨折(impressionfacture)的觸診和對顱底骨折間接體徵的檢查，所述間接體徵包括眼眶周圍瘀斑("黑眼圏")、耳後痴斑("巴特爾徵，，)、CSF漏導致的鼻漏/耳漏，以及第VII神經麻痺。在某些情況下，會進行CT掃描。其他昏迷或意識狀態改變的原因也會在分析中加以研究，例如通過篩選藥物、代謝功能障礙、內出血或外出血源、原有的非外傷性腦損害(例如缺血性或出血性腦損傷)、癲癇、基底動脈血栓形成、細菌性腦膜炎、腦膿肺或腫瘤。閉合性頭部損傷的形態學分類是基於根據Marshall和其同事的指導(Marshalletal"/A^"m"/^.1991，75:S14國S20)進行的CT掃描的結果來進行的。顱內損傷可以是局灶的(硬膜下出血、硬膜外出血、腦內出血；"清除的，，與"未清除的，，)或彌散的(I-IV級)。例如，在Vosetal"2002，/.iVe歸/.9:207-219和Gaetz，2004,C7/".7Ve歸/7A—/.115:4-18中記載了對用於評估TBI的參數所進4亍的詳細討論。根據本發明，脊髓損傷(SCI)被定義為任何導致功能(如運動或感覺)喪失的脊髓損傷、創傷或損害。損傷的常見原因是外傷(例如交通事故、槍擊、跌倒等)或疾病(脊髓灰質炎、脊柱裂、弗裡德賴希(氏)共濟失調等)。不必切斷脊髓也可出現功能喪失。在大多數患有SCI的個體中，脊髓是完整的，但是對其的損害會導致功能喪失。除了感覺喪失或運動功能喪失，患有SCI的個體也可能會經歷包括腸和膀胱功能障礙、性功能障礙和生育功能障礙、不能有效調節血壓、體溫控制減弱、在損傷位置以下不能出汗和慢性疼痛在內的症狀、病症或功能缺損。患有SCI的患者可能具有任何水平的SCI，這通常由受損位置來定義(例如在頸推8或胸推12處或其下任何位置)。較高位的損傷(C-l、C-2)會導致包括呼吸能力在內的許多非自主功能的喪失，被迫使用呼吸輔助裝置，例如機械呼吸機或膈肌起搏器。本領域中診斷脊髓損傷的方法已很成熟。在急診室中，醫生能夠通過仔細檢查受損傷的患者、測試感覺功能和運動情況以及詢問意外事故情況來排除脊髓損傷。如果受損傷的患者抱怨頸痛、不完全清醒或有明顯虛弱或神經損傷體徵，就需要進行急診測試。這類測試包括X射線、計算機控制斷層攝影術(CT)掃描、磁共振成像(MRI)或脊髓造影術。也會進行各種神經學檢查。SCI的影響取決於損傷的類型和損傷的位置。SCI通常可被分為兩類損傷一一完全損傷和不完全損傷。完全損傷是指在損傷位置以下無功能(即無感覺和無法隨意運動)。身體兩側都受到同樣的影響。不完全損傷是指在主要的損傷位置以下仍有某些功能。不完全損傷的患者可能不僅能夠移動一肢，可能能夠感覺到部分無法移動的身體或可能身體一側的功能比另一側要多。隨著在SCI緊急治療方面的進展，不完全損傷將變得越來越常見。損傷的位置非常有助於預測在SCI中身體的哪部分可能會受到麻痺和功能喪失的影響。頸部(頸)損傷通常會導致四肢癱瘓。C-4節段以上的損傷會導致患者需要呼吸機來呼吸。C-5損傷通常會導致可控制肩和二頭肌，卻無法控制腕或手。C-6損傷通常會導致可控制腕，卻無法控制手功能。C-7和T-l受損的個體可以伸直他們的手臂，但是手和手指仍有靈活性問題。胸位及以下位置的損傷會導致截癱而手不受影響。T-l至T-8處受損時常常可以控制手，但是由於無法控制腹肌而幾乎不能控制軀幹。較低的T-損傷(T-9至T-12)能夠很好的控制軀幹和腹肌。坐姿平衡很好。腰和骶骨損傷會使得對臀屈肌和腿的控制減弱。四肢癱瘓的患者的脊髓的8段頸推之一受到了損傷；截癱的患者在脊髓的胸、腰或骶骨段受到了損傷。本發明涉及抑制生理損害和與這類損害相關的症狀或病症(殘疾、功能缺損)，它們通常是由上文所詳述的TBI或SCI導致的。因此，並不要求完全預防或逆轉該生理損害或該病症的所有影響，但是本發明的方法的作用可能對患者有明顯的療效。因此，療效不必完全預防或治癒TBI或SCI所導致的特定病症或生理損害，但是可以包括以下結果減輕或預防TBI或SCI所導致的症狀或生理損害，減少或防止這類症狀或損害的發生(定量地或定性地)，減輕這類症狀或生理影響的嚴重程度和/或加強遭受TBI或SCI後的患者的恢復。特別是，本發明的組合物在被給至患者時優選地預防與腦損傷或脊髓損傷相關的損害，和/或減輕或緩解與所述損害相關(導致)的症狀或病症、所述損害的體徵甚至所述損害的原因，以及加強所述損害的恢復。因此，保護患者免受TBI或SCI(或相關病症)導致的生理影響或症狀包括預防或減少損害作用的發生和/或嚴重程度並且治療損害作用已經在其體內發生或開始發生的患者。本領域普通技術人員和/或正在治療患者的受訓過的臨床醫師可以容易地評估療效。例如，上述用於診斷TBI或SCI的許多方法可以被用於評估使用本發明方法治療前後的患者，以評估治療是否成功。優選地，與未用本發明治療的患者相比，至少有一種用於評估用本發明治療的患者的臨床或生物學評分、數值或量度顯示出在嚴重程度或發病率方面有積極的或有益的差異。為抑制由TBI或SCI導致生理損害和與這類損害相關的症狀或病症(殘疾、功能缺損)，根據本發明進行的補體旁路抑制可通過直接影響補體旁路中蛋白質的表達(轉錄或翻譯)或生物學活性來實現，或者通過直接影響某一蛋白質結合補體旁路中蛋白質的能力或直接影響某一蛋白質通過旁路途徑以其它方式幫助激活補體的能力來實現。更具體地說，在一個實施方案中，蛋白質表達是指蛋白質的轉錄或蛋白質的翻譯。因此，本發明的方法可以抑制動物體內的一種蛋白質的轉錄和/或翻譯(例如通過給予一種抑制所述蛋白表達的試劑，以及對動物進行遺傳改造以使蛋白表達下降)，所述動物天然地表達該蛋白。在另一個實施方案中，補體旁路的抑制在本文中被定義為通路活性的任何可測量(可檢測)的下降(即下降、下調、抑制)，例如糹皮定義為補體旁路中蛋白質的表達和/或生物活性的任何可測量的下降，並且可以包括阻斷或抑制蛋白或分子在補體旁路中起作用的能力。抑制蛋白質表達的方法包括但不限於給予一種(直接地或間接地)抑制所述蛋白表達的試劑，以及對動物進行遺傳改造以使蛋白表達下降(例如本文所用的、標註為/8-/-的小鼠)。優選地，蛋白質表達可通過給予所述動物一種直接抑制蛋白質表達的試劑來抑制。這類試劑包括但不限於特異性針對編碼所述蛋白質的RNA的核酶或RNAi、與編碼所述蛋白質的基因或RNA結合併抑制該蛋白質表達的DNA結合蛋白或藥物、結合所述蛋白質的適體、在細胞內與所述蛋白質結合併防止表達所述蛋白的細胞分泌所述蛋白的蛋白質或藥物、以及通過在高嚴格條件下與動物細胞內編碼所述蛋白的基因雜交來減少所述蛋白表達的分離的核酸分子(例如反義核酸分子)。這類選擇性抑制蛋白質表達的化合物可以用本領域技術人員已知的技術來生產。因此，本發明的方法包括使用各種試劑(即調節性化合物)，所述試劑通過直接作用於補體旁路中的蛋白質來選擇性抑制補體旁路中一種或多種蛋白質的表達和/或生物活性，從而減輕動物體內TBI或SCI相關的生理損害。本發明所用的試劑包括例如蛋白質、核酸分子、抗體和作為推理性藥物設計產物的化合物(即藥物)。本文中這類試劑通常是指抑制劑。根據本發明，抑制劑是任何能通過直接抑制或竟爭性抑制作用來抑制蛋白質(例如補體旁路中的蛋白質)的表達和/或生物活性的試劑，並包括作用於因子B、因子D或備解素的試劑。在本發明的一個實施方案中，補體旁路抑制或補體旁路中蛋白質的抑制在本文中被定義為補體旁路中蛋白質生物活性的任何可測量(可檢測)的下降(即減小、下調、抑制)。蛋白質的生物活性或生物作用是指由體內(即在蛋白質的天然的生理環境中)或體外(即在實驗室的條件下)所測量或觀察到的蛋白質的天然存在形式所呈現的或所執行的任何功能。例如，因子B的生物活性可以包括但不限於，結合激活的C3、溶解免疫複合物、B細胞生長因子活性和單核細胞激活。因子D的生物活性可以包括但不限於，催化切割與C3形成複合物時的因子B、催化Ba和Bb的形成。備解素的生物活性可以包括但不限於，結合併穩定與C3bBb結合的細胞或免疫複合物以及穩定C3/C5轉化酶。根據本發明，所述的蛋白質生物活性可以通過直接阻礙或抑制(減少、降低)蛋白質結合和/或激活另一種蛋白質(例如C3)的能力，從而抑制這類結合導致的下遊事件來抑制。優選地，補體旁路的生物活性可通過給予一種抑制該途徑中的至少一種蛋白質的試劑來抑制，這類試劑包括但不限於，與該途徑中的蛋白質結合或通過抑制或阻止該途徑中的蛋白質結合和/或激活另一種蛋白質的能力的方式來與所述途徑中的蛋白質竟爭的試劑。抑制補體旁路中蛋白質的試劑可包括但不限於，作為推理性藥物設計產物的化合物、天然產物和具有部分確定調節性質的化合物。包括所給定的蛋白質的拮抗劑在內的調節劑可以是基於蛋白質的化合物、基於碳水化合物的化合物、基於脂質的化合物、基於核酸的化合物、天然有機化合物、合成來源的有機化合物或藥物、抗體(包括其抗原結合片段)或其片段。本發明中所用的一類具體試劑為補體旁路的拮抗劑，包括該途徑中的蛋白質的拮抗劑。根據本發明，"拮抗劑"是指任何抑制(例如拮抗、減小、降低、阻斷、逆轉或改變)給定蛋白質作用的化合物。更具體地說，拮抗劑能夠以與所給定蛋白質活性相關的方式起作用，從而以拮抗(例如對抗、逆轉、對立於)給定蛋白質的天然作用的方式來降低或阻斷給定蛋白質的生物活性。拮抗劑可以包括但不限於抗體或其抗原結合片段、蛋白質、肽、核酸(包括核酶和反義核酸)或能提供拮抗作用的藥物/化合物/肽設計或選擇的產物。例如，本發明包括天然蛋白質、因子B、因子D或備解素的任何拮抗劑，包括抗體拮抗劑、蛋白質/肽拮抗劑、核酸拮抗劑或小分子拮抗劑(例如小分子抑制劑)。在一個實施方案中，本發明的調節試劑包括藥物，包括能調節一種或多種補體旁路蛋白的產生和/或功能的肽、寡核苷酸、碳水化合物和/或合成有機分子。例如，這類試劑可以通過分子多樣性策略(能夠快速構建大的化學多樣性分子文庫的相關策略的組合)、自天然或合成化合物文庫、特別是化學或組合文庫(即序列和大小不同但具有相同結構單元的化合物的文庫)或通過推理性藥物設計來獲得。例如，參見Mauliketal"1997，Afo/ec"/<ir忍/o^cAwo/owT7^r"peW/c々/7//cfl"o"51冊^式；上述Meinkothetal.的全文以引用的方式納入本說明書。在本發明的一個優選實施方案中，為抑制由TBI或SCI導致的生理損害(及這類損害相關的症狀或病症(殘疾、功能缺損))而用於抑制補體旁路的蛋白的試劑為抗體或其抗原結合片段。類似地，本發明也特別優選地使用抗原結合多肽。一方面，所述抗體選擇性結合所述補體旁路的蛋白質，從而抑制或阻止了所述蛋白質結合另一種通常(在天然或生理條件下)會與它相互作用的蛋白質。另一方面，所述抗體選擇性結合所述蛋白質，從而抑制或阻止了所述蛋白質激活另一種通常會與它相互作用的蛋白質，雖然所述蛋白可能至少部分地與另一種蛋白質結合。為抑制由TBI或SCI導致的生理損害而在選擇性抑制旁詳述(例如本文所述的因子B抗體，特別是本文所詳述的mAbl379抗體)。優選地，本發明所用的抗體或其抗原結合片段與選自因子B、因子D或備解素的蛋白質結合。最優選地，本發明包括與因子B結合的抗體或其抗原結合片段，以及它用於抑制由TBI或SCI導致的生理損害的用途。本說明書詳細描述並舉例說明了根據本發明的選擇性結合因子B並抑制補體旁路的抗體(和其抗原結合片段)。在一個實施方案中，抗體或其抗原結合片段與這樣一種蛋白質(例如因子B)的保守性結合表面或表位結合，所述蛋白質在動物物種特別是哺乳動物物種中是保守的(即所述抗體可與兩種或多種不同的哺乳動物物種的蛋白質交叉反應)。具體地，本發明包括能與至少兩種且優選多種不同的哺乳動物物種(包括但不限於人、非人靈長類、小鼠、大鼠、豬、馬和兔)的因子B結合的抗體。優選地，本發明包括能與人和至少另一種動物物種、優選至少另一種哺乳動物物種(包括但不限於非人靈長類、小鼠、大鼠、豬、馬和兔)的因子B結合的抗體。在一個實施方案中，所述抗體或其抗原結合片段與因子B的第三短同源重複序列(SCR)結合。在一個實施方案中，所述抗體或其抗原結合片段與阻止因子D切割因子B的因子B的一個區結合。在一個實施方案中，所述抗體為單克隆抗體。在一個實施方案中，所述抗體為本文中被稱為1379的抗體(即所述抗體是由相同編號的雜交瘤細胞系產生的，ATCC保藏號為PTA-6230)或其抗原結合片段。按照國際承認的用於專利程序的微生物保藏的布達佩斯條約的規定，本文中稱為1379的雜交瘤(或mAbl379)於2004年9月21日保藏於美國典型菌種保藏中心(ATCC,位於10801UniversityBlvd，Manassas,VA20110-2209)，ATCC保藏號為PTA國6230。根據本發明，蛋白質、蛋白質的一部分(例如片段、部分、結構域等)或者蛋白質的區域或表位的最小的尺寸是足夠作為用來生成抗體的表位或保守性結合表面或作為體外測定法的靶標的尺寸。在一個實施方案中，本發明的蛋白質的長度為至少約4、5、6、7或8個胺基酸(例如，適於抗體表位或適於作為測定中可檢測的肽)，或長度為至少約25個胺基酸、或長度為至少約50個胺基酸、或長度為至少約100個胺基酸、或長度為至少約150個胺基酸等等，長度為4個有整數形式的長度(例如8、9、10…25、26…500、501...)。編碼人因子B和其它補體蛋白質的基因和編碼區的核普酸序列以及這類蛋白質的胺基酸序列在本領域中是眾所周知的。例如編碼人因子B和其它補體蛋白的基因在NCBI資料庫中的登錄號為NG—000013。因子B的編碼序列在NCBI資料庫中的登錄號為NM—001710，因子B前蛋白原的胺基酸序列在NCBI資料庫中的登錄號為NP—001701或P00751。在NCBI資料庫中的登錄號為P00751的胺基酸序列在本文中被表示為SEQIDNO:1，它是人因子B前蛋白原序列。其它動物物種的序列在本領域中也是已知的。通過比較發現，在小鼠因子B序列(例如參見NCBI資料庫登錄號P04186,在本文中被表示為SEQIDNO:6)中，第三SCR結構域位於該761個胺基酸的前蛋白的160-217位，且成熟的鼠類因子B蛋白涵蓋SEQIDNO:6的23-761位。人因子D的編碼序列在NCBI資料庫中的登錄號為NM—001928.2，人因子D前蛋白原的胺基酸序列在NCBI資料庫中的登錄號為NP—001919(在本文中被表示為SEQIDNO:7)。人備解素的編碼序列在NCBI資料庫中的登錄號為NM—002621.1，人備解素的胺基酸序列在NCBI資料庫中的登錄號為NP—002612(在本文中4皮表示為SEQIDNO:8)。由SEQIDNO:1所代表的人因子B前蛋白為764個胺基酸的蛋白質，信號肽涵蓋l-25位的胺基酸。因子B的成熟鏈對應於SEQIDNO:l的26-764位，在本文中被表示為SEQIDNO:2。人因子B的三個SCR區域在本文中被表示為SEQIDNO:3(SCR1，也稱為Sushi1，涵蓋了SEQIDNO:1的約35-約100位或SEQIDNO:2的約5-約75位)，SEQIDNO:4(SCR2，也稱為Sushi2,涵蓋了SEQIDNO:1的約101-約160位或SEQIDNO:2的約76-約135位)和SEQIDNO:5(SCR3，也稱為Sushi3，涵蓋了SEQIDNO:1的約163-約220位或SEQIDNO:2的約138-約195位)。基於使用Hourcade,1995，/.肌CC7^w所述的片段的因子B的表位定位，在一個優選的實施方案中，本發明所用的抗因子B抗體優選地結合所述第三SCR結構域的一部分中的或含有所述第三SCR結構域的一部分的表位或保守性結合表面，更優選地，結合至少包括含有成熟因子B蛋白(SEQIDNO:2)的約Tyrl39位至約Serl85位的序列部分的人因子B的表位，結合至少包括含有成熟因子B蛋白(SEQIDNO:2)的約Tyrl39位至約Serl41位的序列部分的人因子B的表位，結合至少包括含有成熟因子B蛋白(SEQIDNO:2)的約Glul82位至約Serl85位的序列部分的人因子B的表位，結合至少包括人因子B(SEQIDNO:2)的一部分的因子B的表位，所述部分包括下列位置，或它們在非人因子B序列中的等效位置Tyrl39、Cys140、Serl41、Glul82、Glyl84或Serl85;或結合至少包括非人動物物種中等效位置的一部分的因子B的表位。本領域技術人員可以容易地將人因子B序列與另一種動物物種的因子B序列進行比對，並確定SCR區域的位置和對應於上述胺基酸位置的第三SCR區域的具體部分。例如可以使用TatusovaandMadden,(1999)，"Blast2sequences-anewtoolforcomparingproteinandnucleotidesequences",FEMSM/cra^/丄C.174:247-250中所述的BLAST2序列比對法對兩條具體的序列進行比對，所述文獻的全文以引用的方式納入本說明書。基於對本發明中所用的示例抗體的其他表位建模和表位定位，在另一個優選的實施方案中，本發明中所用的抗因子B抗體優選地結合因子B第三SCR結構域的部分或一部分中或含有因子B第三SCR結構域的部分或一部分的表位(保守性結合表面)，所述部分或一部分包括SEQIDNO:2的一個或多個下列胺基酸位置或它們在非人因子B序列中的等效位置A137、Y139、S141、E182、S185、T189、E190和S192。在本發明的一個方面中，所述表位在因子B第三SCR結構域的部分或一部分中或包含因子B第三SCR結構域的部分或一部分，所述部分或一部分包括全部或基本上全部(至少5、6或7個)下列的SEQIDNO:2的胺基酸位置或者它們在非人因子B序列中的等效位置Alal37、Tyrl39、Serl41、Ghi182、Serl85、Thrl89、Glul90和Serl92。又一方面，由本發明中所用的抗因子B抗體識別的表位在因子B第三SCR結構域的部分或一部分中或包含因子B第三SCR結構域的部分或一部分，所述部分或一部分由下列的SEQIDNO:2的胺基酸位置或者它們在非人因子B序列中的等效位置組成Alal37、Tyrl39、Serl41、Glul82、Serl85、Thrl89、Glul90和Serl92。在一個實施方案中，由本發明中所用的因子B抗體識別的表位也可以被更具體地定義為位於因子B第三SCR結構域的一部分的三維結構中的非線性表位。包含所述表位的部分為由SEQIDNO:2的Alal37-Ser192基本上全部(例如，至少約90%)胺基酸位置或非人因子B序列中的等效位置限定的因子B的三維結構，條件是這些序列是按照它們在天然全長因子B序列中的構象排列的。例如，圖4和圖5示出了因子B的三維結構模型，該模型示出了針對mAbl379的表位。本文所用的蛋白質"三維結構"或"三級結構，，是指蛋白質組成的三維排列。該術語是本領域技術人員公知的。本文所用的術語"模型"是指蛋白質、多肽或肽的三維結構在有形介質中的表現形式。例如，模型可以是三維結構在電子文件中、電腦屏幕上或紙上(即在二維介質上)的表現形式和/或為球棍圖。根據本發明，在提及抗體時，給定蛋白質或肽或其他分子的"表位，，通常被定義為將與抗體或其抗原結合片段結合併且將用來產生抗體的較大分子的一部分或其上的某一位點。術語"表位"可以與術語給定蛋白質或抗原的"抗原決定簇"、"抗體結合位點"或"保守性結合表面"互換使用。更具體地說，表位可以由參與抗體結合的胺基酸殘基定義，也可以由它們的三維空間構象(例如構象表位或保守性結合表面)來定義。表位可以包含於約4-6個胺基酸殘基的小肽中，或者可以包含於蛋白質的較大區段中，並且當提及表位(特別是提及抗體結合表位)的三維結構時，所述表位不必包含連續的胺基酸殘基。抗體結合表位通常是構象表位而不是序列表位(即線性表位)，換言之，是由在抗體所結合的蛋白質或多肽表面上按三維排列的胺基酸殘基所限定的表位。如上所述，所述構象表位不含連續的胺基酸殘基序列，相反，所述殘基在一級蛋白質序列中還可能是被遠遠隔開的，並且這些殘基通過蛋白質在三維空間按天然構象摺疊被匯集在一起以形成結合表面。由mAbl379識別的表位為構象表位而不是線性表位。本領域技術人員可以使用已知技術來鑑定和/或裝配構象表位和/或序列表位，所述已知技術包括突變分析(例如定點誘變)，預防蛋白水解性降解(蛋白質足跡法)，使用例如合成肽和肽掃描、BIACORE或ELISA進行的模擬表位分析，抗體竟爭性定位，組合肽文庫篩選，基質輔助雷射解吸/電離飛行時間(MALDI-TOF)質譜或三維建模(例如使用任何適合的軟體程序，包括但不限於MOLSCRIPT2.0(AvatarSoftwareAB，Heleneborgsgatan21C,SE國11731Stockholm,Sweden),圖像顯示程序O(Joneset.al"Jc似C，/"〃ogmp/^，vol.A47，p.110，1991)，圖像顯示程序GRASP或圖像顯示程序INSIGHT)。例如，技術人員可以使用分子置換或其他技術和相關蛋白質的已知三維結構來對因子B的三維結構建模並且預測會結合該結構的抗體的構象表位。事實上，技術人員可以使用這些技術中的一種或任何組合來定義抗體結合表位。圖4和圖5示出了使用三維建模以及模擬表位分析和突變分析的信息來鑑定本發明中所用的因子B抗體的表位。本文所用的術語"選擇性結合"是指一種蛋白質與另一種蛋白質(例如抗體、其片段或抗原結合配偶體)的特異性結合，其中按任何標準測定法(免疫測定法)所測定的結合水平在統計學上明顯高於該測定法的背景對照。例如，當進行免疫測定時，對照通常包括僅含有抗體或抗原結合片段(即無抗原)的反應孔/管，其中在無抗原的情況的量被;人為是^景。結合可以i用本領域中的各種標準方法來測量，包括但不限於蛋白質印跡、免疫印跡、酶聯免疫吸附測定法(ELISA)、放射免疫測定法(RIA)、免疫沉澱、表面等離子體共振、化學發光、螢光偏振、磷光、免疫組織化學分析、基質輔助雷射解吸/電離飛行時間(MALDI-TOF)質鐠、微細胞計量術、微陣列、顯微術、螢光激活細胞分類術(FACS)和流式細胞術。本發明的一個實施方案包括使用抗體或其抗原結合片段來抑制TBI或SCI相關的生理損害或作用，所述抗體或其抗原結合片段為因子B與抗因子B抗體(例如單克隆抗體1379)結合的竟爭性抑制劑。根據本發明，因子B與本發明的抗因子B抗體結合的竟爭性抑制劑為這樣一種抑制劑(例如另一種抗體或其抗原結合片段或多肽)它與本發明的已知的抗因子B抗體(例如mAbl379)在相同或相似的表位與因子B結合，從而使得所述已知的抗因子B抗體與因子B的結合被抑制。竟爭性抑制劑可以與所述靶標(例如因子B)結合，與所述靶標的親和性要高於抗因子B抗體。可以以與本文所述的抗因子B抗體1379相似的方式(例如抑制補體旁路、抑制由TBI或SCI導致的生理損害或影響)來使用竟爭性抑制劑。例如，本發明的一個實施方案涉及使用特異性結合因子B的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段竟爭性抑制mAbl379與因子B的特異性結合，並且其中當所述抗體或其片段與因子B結合時，補體旁路受到抑制或者mAbl379抑制補體旁路的能力受到抑制。另一個實施方案涉及使用特異性結合因子B的分離的抗體或其片段，其中所述分離的抗體或其片段竟爭性抑制另一種特異性結合因子B的抗體或其片段，並且其中所述另一種抗體或其片段結合因子B的第三SCR結構域。竟爭測定法可以使用本領域的標準技術來進行(例如竟爭性ELISA或其他結合測定法)。例如，竟爭性抑制劑可以根據它們抑制因子B與已知的標記過的抗因子B抗體(例如mAbl379)結合的能力來檢測和量化。上文公開號為2005-0260198-A1的美國專利申請和7>開號為WO2005/077417的PCT申請中描述了存在人因子B的情況下的抗體-抗體竟爭測定。上文公開號為2005-0260198-A1的美國專利申請和公開號為WO2005/077417的PCT申請中也描述了因子B與抗因子B1379結合的竟爭性抑制劑。根據本發明，抗體的特徵在於它們包含免疫球蛋白結構域，因而它們是蛋白質的免疫球蛋白超家族的成員。一般來講，抗體分子包括兩類鏈。一類鏈是指重鏈即H鏈，另一類鏈是指輕鏈即L鏈。這兩種鏈以等摩爾比存在，每個抗體分子通常具有兩條H鏈和兩條L鏈。所述兩條H鏈是由二石克鍵連接起來的，且每條H鏈通過二為t鍵與一條L鏈連接。L鏈只有兩種類型，lambda(1)鏈和kappa(k)鏈。相比而言，H鏈有五類主要的同種型。這五個類型包括免疫球蛋白M(IgM或H)、免疫球蛋白D(IgD或3)、免疫球蛋白G(IgG或l)、免疫球蛋白A(IgA或a)和免疫球蛋白E(IgE或s)。這些同種型之間的區別特徵根據免疫球蛋白的恆定域來界定，這在下文中有詳細討論。人免疫球蛋白分子包括九類同種型IgM、IgD、IgE、IgG的四個亞類(包括IgGl(yl)、IgG2(y2)、IgG3(y3)和IgG4(丫4))以及IgA的兩個亞類(包括IgAl(al)和IgA2(a2))。在人體內，IgG3亞類和IgM是最有效的補體激活劑(經典補體系統)，而IgGl亞類是經典補體系統的中度或低度激活劑，其次是IgG2亞類。IgG4亞類不會激活所述補體系統(經典或旁路途徑)。已知能激活補體旁路系統的唯一的人免疫球蛋白同種型是IgA。在小鼠體內，IgG亞類為IgGl、IgG2a、IgG2b和lgG3。鼠類IgGl不會激活補體，而IgG2a、IgG2b和IgG3是補體激活劑。免疫球蛋白分子的每條H或L鏈包括兩個區，稱為L鏈可變域(Vl域)和L鏈恆定域(Cl域)以及H鏈可變域(Vh域)和H鏈恆定域(Ch域)。完整的CH域包括三個亞域(CH1、CH2、CH3)和一個鉸鏈區。一條H鏈和一條L鏈能夠一起形成具有免疫球蛋白可變區的免疫球蛋白分子的一條臂。完整的免疫球蛋白分子包括兩條相連接(例如二硫鍵連接)的臂。因此，整個免疫球蛋白的每條臂均包括一個VH+L區和一個CH+L區。本文所用的術語"可變區"或"V區"是指VH+L區(也稱為Fv片段)、Vl區或Vh區。本文中所用的術語"恆定區"或"C區"是指Ch+l區、Cl區或Ch區。用蛋白酶限制性消化免疫球蛋白可以產生兩個片段。抗原結合片段被稱為Fab、Fab，或F(ab，)2片段。缺乏抗原結合能力的片段被稱為Fc片段。Fab片段包括免疫球蛋白分子的一條臂，包括與Vh區和部分Ch區(CHl域)配對的L鏈(VL+Ct域)。Fab，片段相當於具有與CH1域相連的鉸鏈區的一部分的Fab片段。F(ab，)2片段相當於兩個通常在鉸鏈區通過二硫鍵彼此共價相連的Fab，片段。CH域定義了免疫球蛋白的同種型並賦予了各同種型不同的功能特徵。例如，p恆定區能使IgM分子形成五聚體，a恆定區能使IgA形成二聚體。免疫球蛋白分子的抗原特異性是由可變區即V區的胺基酸序列賦予的。因此，根據其抗原特異性，不同免疫球蛋白分子的V區可以明顯不同。V區的某些部分比其他部分更加保守，；故稱為框架區(FW區)。相比而言，V區的某些部分高度可變，被稱為超變區。當Vl域和VH域在免疫球蛋白分子中配對時，每個結構域的超變區連接起來形成超變環，所述超變環形成抗原結合位點。因此，超變環決定了免疫球蛋白的特異性，並且因為其表面與抗原互補而被稱為互補決定區(CDR)。V區的更進一步的可變性是由編碼免疫球蛋白V區的基因區段的組合可變性賦予的。免疫球蛋白基因包括多個胚系基因區段，所述胚系基因區段發生體細胞性重排以形成編碼免疫球蛋白分子的重排的免疫球蛋白基因。Vl區是由L鏈V基因區段和J基因區段(連接區段)編碼的。Vh區是由H鏈V基因區段、D基因區段(多樣性區段)和J基因區段(連接區段)編碼的。L鏈和H鏈的V基因區段都含有基本的胺基酸序列可變性的三個區域。這類區域被分別稱為L鏈CDR1、CDR2和CDR3，以及H鏈CDR1、CDR2和CDR3。不同區之間的L鏈CDR1的長度會發生顯著變化。例如，CDR1的長度可以在約7個胺基酸至約17個胺基酸之間變化。相比之下，不同VL區之間的L鏈CDR2和CDR3的長度通常是不變的。不同VH區之間的H鏈CDR3的長度會發生顯著變化。例如，CDR3的長度可以在約1個胺基酸至約20個胺基酸之間變化。每個H和L鏈CDR區的側翼均為FW區。免疫球蛋白分子的其他功能方面包括免疫球蛋白分子的效價、免疫球蛋白分子的親和力和免疫球蛋白分子的親合力。本文所用的親和力是指在免疫球蛋白分子上的單個位點處免疫球蛋白分子與抗原結合(即單價Fab片段與單價抗原結合)的強度。親和力不同於親合力，親合力是指免疫球蛋白與抗原結合強度的總和。免疫球蛋白結合的親和力可以用本領域的標準技術來測量，例如竟爭性結合技術、平衡透析或BIAcore法。本文所用的效價是指每個免疫球蛋白分子的不同的抗原結合位點的數目(即每個抗體分子的抗原結合片段的抗原結合位點的數目)。例如，單價免疫球蛋白分子一次僅結合一個抗原，而二價免疫球蛋白分子一次能夠結合兩個或多個抗原，以此類推。本文包括選擇性結合補體旁路中的蛋白的單價和二價抗體。在一個實施方案中，所述抗體是雙特異或多特異抗體。雙特異性(或多特異性)抗體能夠結合兩個(或多個)抗原，如同二價(或多價)抗體一樣，但是此時所述抗原是不同的抗原(即所述抗體具有雙特異性或更多重的特異性)。例如，根據本發明的、選擇性結合補體旁路中的蛋白的抗體(例如本文所述的抗因子B抗體)可以被構建為雙特異抗體，其中第二抗原結合特異性是針對預期靶標的。因此本發明所包含的雙特異抗體包括具有以下部分的抗體(a)與補體旁路中的蛋白(例如因子B)結合的第一部分(例如第一個抗原結合部分)；和(b)與細胞表達的細胞表面分子結合的第二部分。在該實施方案中，所述第二部分可以與任何細胞表面分子結合。一種優選的細胞表面分子為受體或配體，這樣所述抗體可以靶向特定類型的細胞或組織和/或乾向給予了該抗體的動物體內的特定位點。在一個實施方案中，所述第二抗原結合特異性是針對補體受體的。特別優選的補體受體包括但不限於2型補體受體(CR2)。例如美國專利6,820,011描述了選擇性結合CR2並因此被用於本發明的該實施方案的抗體。在一個實施方案中，本發明的抗體包括人源化抗體。人源化抗體是具有來自非人物種的免疫球蛋白的抗原結合位點的分子，所述分子的其餘免疫球蛋白來源部分來自人免疫球蛋白。所述抗原結合位點可以包括融合到人恆定域上的完整的可變區，或僅包括移植到人可變域中的適當的人框架區上的互補決定區(CDR)。人源化抗體可以通過例如下述的方法來製備將所述抗體可變域建模，並且利用基因工程技術(例如，如下所述的CDR移植)來製備所述抗體。關於各種用於人源化抗體生產的4支術的i兌明請查閱例如Morrisonetal.(1984)TV",/.爿c"r/.JAS^81:6851-55;Whittleetal.(1987)/Vc1:499-505;Coetal.(19卯)/./附w"wo/.148:1149-1154;Coetal.(1992)iV"W.88:2869-2873;Carteretal.(1992)TV"W.^ctf^/.Sc/.89:4285-4289;Routledgeetal.(1991)//附/mwwo/.21:2717-2725和^>開號為WO91/09967、WO91/09968和WO92/113831的PCT申請。本發明的分離的抗體可包括含這類抗體的血清或已經純化到各種程度的抗體。本發明的全部抗體都可以是多克隆或單克隆的。或者，本發明也可以採用全部抗體的功能等價物，例如截短或缺失了一個或多個抗體結構域的抗原結合片段(例如Fv、Fab、Fab，或F(ab)2片段)；以及遺傳工程抗體或其抗原結合片段，包括單鏈抗體、人源化抗體(如上所述)、與不只一個表位結合的抗體(例如雙特異抗體)或與一個或多個不同抗原結合的抗體(例如雙特異或多特異抗體)。本發明的遺傳工程抗體包括那些通過標準的重組DNA技術製備抗體，所述重組DNA技術包括對編碼抗體可變區和/或恆定區的DNA的操作和重表達。具體的實例包括嵌合抗體和CDR移植抗體(及其抗原結合片段)，在嵌合抗體中，與抗體的其餘部分相比，所述抗體的Vh和/或Vl域來自於不同來源，在CDR移植抗體中，至少一個CDR序列和任選地至少一個可變區框架胺基酸來自一個來源，而可變區和恆定區(視情況而定)的其餘部分來自一個不同的來源。例如，歐洲專利申請EP-A0194276、EP-A0239400、EP-A0451216和EP-A0460617中描述了嵌合抗體和CDR移植抗體的構建。在一個實施方案中，根據本發明製備的嵌合抗體包括與補體旁路的蛋白質(例如因子B)結合的抗體可變域以及與這些結構域融合、作為第二靶向部分的蛋白質。例如，所述把向部分可以包括與所要把向的細胞或組織相關或與動物體內的特定系統相關的蛋白質。例如，所述靶向部分可以是選擇素或補體受體的一部分。本發明這一方面所用的優選的補體受體包括2型補體受體(CR2)。美國專利No.6,820,011詳細描述了CR2及其部分在融合蛋白或嵌合蛋白中的用途(例如，作為送遞系統)。通常，在抗體製備中，將適合的實驗動物(例如但不限於兔、綿羊、倉鼠、豚鼠、小鼠、大鼠或雞)暴露於所需抗體所針對的抗原。通常，用注射到動物體內的有效量的抗原來免疫動物。有效量的抗原是指用於誘導所述動物生成抗體所需的量。然後在一段預定的時間內，允許所述動物的免疫系統進行應答。重複免疫接種過程直至發現所述免疫系統產生針對所述抗原的抗體。為獲得抗原特異性多克隆抗體，從含有所需抗體的動物身上採集血清(或者如果是雞，可以從卵採集抗體)。這類血清可被用作試劑。例如，可以通過用石克酸銨處理所述血清來從血清(或卵)中進一步純化多克隆抗體。單克隆抗體可以按照KohlerandMilstein(A^m"256:495-497，1975)的方法來製備。例如，從免疫過的動物的脾(或任何適合的組織)回收B淋巴細胞，然後將其與骨髓瘤細胞融合以獲得能夠在適合的培養基中持續生長的雜交瘤細胞群。產生所需抗體的雜交瘤可通過測試由雜交瘤產生的抗體與所需抗原結合的能力來選擇。製備本發明的抗體的優選方法包括(a)給予動物有效量的蛋白質或肽(例如因子B蛋白或包括其結構域的肽)以產生抗體，和(b)回收抗體。在另一種方法中，本發明的抗體是通過重組生產的。例如，一旦獲得表達本發明的抗體的細胞系(例如雜交瘤)，就可能從中克隆cDNA並鑑定編碼所需抗體的可變區基因，包括編碼CDR的序列。由此，可通過製備一種或多種複製表達載體並且轉化/轉染適合的宿主細胞來製備本發明的抗體和抗原結合片段，在所述宿主細胞中將會進行抗體生產，所述複製表達載體至少包含編碼抗體重鏈或輕鏈可變域的DNA序列和任選的其它編碼所需重鏈或輕鏈的其餘部分的DNA序列。適合的表達宿主包括細菌(例如大腸埃希氏(E.co//)菌抹)、真菌(特別是酵母，例如畢赤酵母(屍/c/^Vi)、酵母(5Vicc/^ra附j;c")或克魯維酵母(K/wyve/wwyc^)屬的成員)和哺乳動物細胞系(例如非生產型骨髓瘤細胞系，如小鼠NSO系或CHO細胞)。為了獲得有效的轉錄和翻譯，每個載體中的DNA序列都應該包括適當的調節序列，特別是可操作地連接所述可變域序列的前導序列和啟動子。以這種方式產生抗體的具體的方法通常是眾所周知的並且是被常規使用的。例如，Maniatisetal.(MolecularCloning,ColdSpringHarborLaboratory,NewYork,1989)描述了基本的分子生物學方法；按照Sangeretal.(PNAS21，5463，(1977))和Amersham國際plc測序手冊中所述內容進行DNA測序；按照Krameretal.(7Vmc/.7^.Jl，9441，(1984))和AnglianBiotechnologyLtd.的手冊中的方法進行定向i秀變。此外，有許多包括專利說明書在內的出版物，它們詳細描述了適合通過操作DNA、構建表達載體和轉化合適的細胞來製備抗體的技術，例如，如MountainA和Adair,JR在BiotechnologyandGeneticEngineeringReviews(ed.Tombs,MP，jj[，Chapter1，1992，Intercept,Andover,UK)中以及前述歐洲專利申請中所綜述的那樣。採用例如噬菌體展示技術(參見例如US5969108、US5565332、US5871卯7、US5858657)的替4戈方法或US5627052所選擇的、淋巴細胞抗體法也可被用於生產本發明的抗體和/或抗原片段，這些對於本領域技術人員來說是極其顯而易見的。本發明也涉及非抗體多肽的用途，所述非抗體多肽有時被稱為抗原結合配偶體或抗原結合多肽，它被設計來選擇性結合本發明的蛋白質並且中和或抑制該蛋白。Besteetal.7VW/.5W.96:1898-1903，1999)中給出了具有規定的配體特異性的這類多肽設計的實例，其全文以引用的方式納入本說明書。本發明也包括用於減輕TBI或SCI相關的生理損害的製劑或組合物。所述製劑包括(a)任何一種或多種本文所述的補體旁路的抑制劑(例如本文所述的抗因子B抗體)；和(b)至少一種可藥用的載體。在一個實施方案中，所述製劑或化合物可以包括一種或多種附加試劑，例如另一種適合於治療至少一種TBI的症狀或TBI相關生理損害的試劑(例如滲透性藥物、鎮靜藥、鎮痛藥、肌肉鬆弛藥、巴比妥酸鹽等)。此外，可以將所述製劑與另一種用於治療或改善TBI相關損害的療法或方案共同給予患者。這類療法或方案包括但不限於通過手術清除顱內血腫來減少大面積損傷，用滲透性藥物(例如甘露醇)減輕腦肺脹，通過腦室內導管來治療性地排出腦脊液(CSF)，實現並維持足夠的氣體交換和循環穩定性，預防低氧血和高碳酸血，重複進行CT掃描以檢測延緩的繼發性顱內病理狀態，深度鎮靜和鎮痛以避免應激和疼痛，實現並維持最適的CPP(>70mmHg)和腦氧平衡，避免體溫過高(<38°C),預防高血糖症和低鈉血症，防止常規進行的頭部抬高，預防應激性潰瘍並維持腸黏膜完整性，預防並發因素(例如肺炎或腦膜炎)，顱內壓(ICP)靶向療法(例如深度鎮靜、深度鎮痛、深度肌肉放鬆，通過腦室內導管來排出CSF，在某些情況下適度增加通氣，滲透療法，適度降溫(士34。C)和/或巴比妥酸鹽昏迷)和/或用氣體(CO)進行的神經炎症弱化。各種用於TBI的療法是本領域公知的並且例如在Royoetal"2003,(7"rmi/iV^r扁co/.3:27-32;DuttonandMcCu叫2003，一Vi.CV,7.Cfl"9:503-509;Elfetal"2003，/.r腦腸29:74-80;Ghajaretal"2000,丄,"356:923-929中有所描述。在另一個實施方案中，所述製劑或組合物可以包括一種或多種附加試劑，例如另一種適合於治療至少一種SCI的症狀或SCI相關生理損害的試劑(例如類固醇，如曱潑尼龍)。此外，可以將所述製劑與另一種用於治療或改善SCI相關損害的療法或方案共同給予患者。這類療法或方案包括但不限於脊柱固定、減壓手術、手術穩定推骨、手術復位推骨、牽引。各種用於SCI的療法是本領域公知的並且在例如Rameretal.，2005，S/wVm/43(3):134-61中有所描述。根據本發明，"可藥用載體"包括可藥用的賦形劑和/或可藥用的送遞載體，它們適用於將製劑或組合物給予到適合的體內位點。適合的體內位點優選地是其中的補體旁路可被抑制的任何位點，但是在一個優選的實施方案中，所述適合的體內位點在患者的腦組織中，所述患者具有TBI或SCI相關生理損害，或有發展出TBI或SCI相關生理損害的風險。優選的可藥用載體能將本發明的製劑中所用的試劑維持於這樣一種形式，即當所述試劑到達患者體內的靶位點時，所述試劑能夠作用於其靶標上(例如作為補體旁路組成部分的蛋白質)，優選地對所述患者產生療效。織處，但不是特異性靶向到該細胞或組織處的賦形劑或配方(本文中也稱為非靶向載體)。可藥用賦形劑的實例包括但不限於水、磷酸鹽緩衝鹽水、Ringer，s溶液、葡萄糖溶液、含血清的溶液、Hank，s溶液、其他水性生理平衡溶液、油類、酯類和二醇類。水性載體可以包含例如通過增強化學穩定性和等滲性來接近接受者的生理狀況所需的適合的輔助物質。適合輔助物質包括，例如乙酸鈉、氯化鈉、乳酸鈉、氯化鉀、氯化鈣和其它用於產生磷酸鹽緩沖液、Tris緩沖液和碳酸氫鹽緩沖液的物質。輔助物質也可以包括防腐劑例如硫柳汞、間曱酚或鄰曱酚、曱醛和苯曱醇(benzolalcohol)。本發明的製劑可以通過常規方法來滅菌並且/或者可以進行冷凍乾燥。一類可藥用載體包括一種能將本發明的組合物緩慢釋放到動物體內的控釋製劑。本文所用的控釋製劑包括置於控釋載體中的本發明的試劑。適合控釋載體包括但不限於生物相容性聚合物、其他的聚合基質、膠嚢、微膠嚢、微粒、推注製品(boluspr印aration)、滲透泵、擴散裝置、脂質體、脂質球(liposphere)和透皮給藥系統。其它適合的載體包括能結合或摻有延長所要送遞的試劑的半衰期的試劑的任何載體。這類載體可以包括任何適合的蛋白質載體或甚至是當送遞到體內時能延長蛋白質半衰期的融合蛋白區段。適合的送遞載體在上文中已經描述過，包括但不限於脂質體、病毒載體或其它送遞載體，包括核酶。天然含脂質的送遞載體包括細胞和細胞膜。人工的含脂質的送遞載體包括脂質體和微團。可以對本發明的送遞載體進行修飾以使其耙向患者體內特定的位點，從而使抑制劑靶向該位點並在該位點利用抑制劑。適合的修飾包括對所述送遞載體的脂質部分的化學分子進行操作和/或在所述載體中引入能特異性地將送遞載體靶向優選位點(例如優選的細胞類型)的把向試劑。其他適合的送遞載體包括金顆粒、聚-L-賴氨酸/DNA-分子綴合物和人工染色體。能夠打靶的可藥用載體被稱為"靶向送遞載體"。本發明的靶向送遞載體能夠將製劑(包括抑制劑)送遞到患者體內的靶位點。"靶位點"是指患者體內的所要送遞治療製劑的位點。例如，靶位點可以是通過直接注射或使用脂質體、病毒載體或其它送遞載體(包括核酶)送遞所乾向的任何細胞或組織。可以對本發明的送遞載體進行修飾以使其耙向動物體內特定的位點，從而使核酸分子靶向該位點並在該位點利用核酸分子。適合的修飾包括對所述送遞栽體的脂質部分的化學分子進行操作和/或在所述載體中引入能特異性地使送遞載體靶向優選位點例如優選的細胞或組織類型(例如乾向腦或中樞神經系統)的化合物。具體地，靶向是指通過載體中的化合物與細胞表面分子之間的相互作用使所述送遞載體與特定的細胞結合。適合的靶向性化合物包括能夠在特定位點選擇性(即特異性)地結合另一種分子的配體。這類配體的實例包括抗體、抗原、受體和受體配體。特別有用的實例包括任何與補體途徑相關的配體(例如CR2、C3、C3d、C3dg、iC3b、C3b)或任何與所要治療的動物的體內細胞類型、組織類型或位點相關的配體(例如選擇素)。對所述送遞載體的脂質部分的化學分子進行操作可以調整所述送遞載體的胞外或胞內靶向性。例如，可以向脂質體的脂質配方中加入能改變該脂質體脂雙層電荷的化學物質，使得所述脂質體能與具有特定電荷特徵的特定細胞融合。在一個實施方案中，靶向送遞載體可以是使得化合物可以穿過血腦屏障的製劑。一種可用於各種給藥途徑和試劑的送遞栽體為脂質體。脂質體能夠在動物體內維持穩定達足夠長的時間，以將本發明所述的核酸分子送遞到動物體內的優選位點。本發明的脂質體含有能將核酸分子或其他化合物送遞到動物體內特定或選定位點的脂質組合物。根據本發明的脂質體包括能夠與靶細胞的質膜融合以將核酸分子送遞到細胞中的脂質組合物。本發明使用的適合的脂質體包括任何脂質體。本發明優選的脂質體包括那些通常用於例如本領域技術人員已知的基因送遞方法的脂質體。更優選的脂質體包括含有聚陽離子脂質組合物的脂質體和/或具有與聚乙二醇綴合的膽固醇骨架的脂質體。可以利用本領域的標準方法將脂質體與本發明的核酸分子或抑制劑混合。另一種送遞載體包括病毒載體。病毒載體含有本發明的方法中所用的分離的核酸分子，其中所述核酸分子被包裹於能使DNA進入細胞的病毒外殼中。可以使用許多病毒栽體，包括但不限於基於曱病毒、痘病毒、腺病毒、皰滲病毒、慢病毒、腺伴隨病毒和反轉錄病毒的病毒載體。本發明的試劑和製劑可以被給予到任何動物或患者，且優選給予到人。根據本發明，試劑或製劑的給藥可用來抑制TBI或SCI相關生理損害的任何症狀，或者類似的或相關的病症。適合於本發明方法的候選患者包括但不限於具有由於損傷(包括外傷性損傷)或疾病導致的對腦或脊髓的生理損害及與該損害相關的病症的患者，或者有發展出(例如可能發展出或預計會發展出)這類損害或病症風險的患者。根據本發明，本領域技術人員可以確定給予試劑或含所述試劑的組合物的可接受的方案，包括給藥途徑和所要給予動物的試劑的有效量。本發明的試劑或組合物可以在體內或活體外給藥。適合的體內給藥途徑包括但不限於口、鼻、吸入、局部、氣管內、透皮、直腸、腦(例如顱內)、脊柱(例如脊柱內或脊髓的硬膜外隙)和腸胃外途徑。優選的腸胃外途徑可以包括但不限於皮下、真皮內、靜脈內、肌內和腹膜內途徑。優選的局部途徑包括經氣霧劑(即噴霧)吸入或局部表面給予到動物皮膚上。優選地，試劑是通過全身途徑(例如腹膜內、靜脈內)給予的，特別優選靜脈內給藥，或者是通過腦、脊髓或脊髓硬膜外隙給予的。對於外傷性腦損傷，優選通過靜脈內給藥給予或給予到腦。對於脊髓損傷，優選通過靜脈內給藥、脊髓給藥給予或者給予到脊髓的硬膜外隙。活體外是指部分給藥步驟是在患者體外進行的。將試劑和組合物給予到腦和中樞神經系統的技術包括但不限於靜脈內給藥、腹膜內給藥、通過開放血腦屏障的動脈內送遞、利用對流增強型送遞方法將藥物持續注入腦中、植入、鞘內輸注、腦室內給藥、間質給藥和脊柱內給藥。靜脈內、腹膜內、肌內和脊柱內給藥可利用本領域中的標準方法來進行。氣霧劑(吸入)送遞可利用本領域中的標準方法來進行(例如，參見Striblingetal.，/Vw.7V"//.5W.fAR4189:11277-11281，1992，其全文以引用的方式納入本i兌明書)。適用於氣霧劑送遞的載體如上所述。用於送遞霧化製劑的裝置包括但不限於壓力計量吸入器(MDI)、乾粉吸入器(DPI)和計量溶液裝置(MSI),並且包括噴霧器和吸入器在內的裝置。可通過將本發明的治療組合物與能夠經受住動物消化道內消化酶降解的載體混合來進行口服給藥。這類載體的實例包括塑料膠嚢或片劑，例如本領域已知的那些載體。直接注射技術特別適用於將重組核酸分子給予到可通過外科手術達到的細胞或組織，特別是在身體表面或接近身體表面。在靶細胞區域的附近給予組合物是指將所述組合物注射到距靶細胞或組織幾釐米(優選幾毫米)處。本發明所公開的各種給藥方法和送遞載體已經被證明在將核酸分子送遞到靶細胞或組織時是有效的，藉此所述核酸分子可轉染所述細胞並且被表達。在許多研究中，異源基因的成功送遞和表達是通過在優選的細胞類型中和/或使用本發明的優選的送遞栽體和給藥途徑來實現的。可以通過給予編碼核酸序列的病毒載體來將很多核酸序列送遞到各種靶組織中。(例如，參見各種反轉錄病毒的實例；Blaeseetal.，1995,5W,e270:475-480;Bordig畫etal"1995，S"e髒270:470-475)、鼻內給藥(CFTR-腺伴隨病毒載體)、冠狀動脈內給藥(參見上文的腺病毒載體和日本血凝病毒)、靜脈內給藥(腺伴隨病毒載體；Koeberletal.，1997，AW/t/5^494:1426-1431)。Millecamps等人報導了利用位於轉基因的啟動子(磷酸甘油酸啟動子)上遊的神經元限制性增強子元件來將腺病毒載體靶向到神經元。可分別通過肌內和腦內給藥將這類栽體給予小鼠和大鼠，由此實現成功的神經元特異性轉染和轉基因的體內表達(Millecampsetal.,1999，A^.17:865-869)。Bennett等人報導了使用腺伴隨病毒載體通過視網膜下注射將基因送遞到神經視網膜並在體內表達超過一年(Bennett,1999,同上文)。給予動物的抑制劑的合適單次劑量是當在適合的時間段內進行一次或多次給藥時，能夠在動物體內減輕或預防由TBI或SCI導致的生理損害的至少一種症狀的劑量。優選的試劑(包括本文所述的方法中使用的蛋白質、小分子和抗體)單次劑量包括約0.01微克至約10毫克/千克動物體重。更優選的試劑單次劑量包括約1微克至約10毫克/千克動物體重。甚至更優選的試劑單次劑量包括約5微克至約7亳克/千克動物體重。甚至更優選的試劑單次劑量包括約IO微克至約5毫克/千克動物體重。如果試劑是以氣霧劑形式送遞的，則特別優選的試劑單次劑量包括約0.1毫克至約5亳克/千克動物體重。如果所述試劑是腸胃外送遞的，則另一個特別優選的試劑單次劑量包括約0.1微克至約10微克/千克動物體重。在一個實施方案中，本發明的核酸:脂質體複合物的合適的單次劑量為每千克所要給予所述複合物的患者體重約0.1fig至約100jig。在另一個實施方案中，合適的單次劑量為每千克體重約lng至約10照。在另一個實施方案中，核酸:脂質體複合物的合適的單次劑量為至少約O.lng核酸、更優選至少約ljig核酸、甚至更優選至少約10jig核酸、甚至更優選至少約50jig核酸、甚至更優選至少約100jig核酸。優選的抗體單次劑量包括約1ng至約不到1mg/千克動物體重。更優選的抗體單次劑量包括約20ng至約600jig/千克動物體重。甚至更優選的抗體單次劑量(特別是當所述抗體製劑是通過噴霧法送遞時)包括約20ng至約600ng/千克動物體重，更優選約20ng至約500|ig/千克動物體重、更優選約20ng至約400ng/千克動物體重、更優選約20ng至約300ng/千克動物體重、更優選約20ng至約200ftg/千克動物體重、更優選約20ng至約100jig/千克動物體重、更優選約20ng至約50fig/千克動物體重。另一個優選的抗體單次劑量(特別是當所述抗體製劑是通過噴霧法送遞時)包括約200ng至約600ng/千克動物體，更優選約200ng至約500jig/千克動物體重、更優選約200ng至約400jig/千克動物體重、更優選約200ng至約300pg/千克動物體重、更優選約200ng至約200fig/千克動物體重、更優選約200ng至約100jig/千克動物體重、更優選約200ng至約50ng/千克動物體重。另一個優選的抗體單次劑量(特別是當所述抗體製劑是通過吸入器直接吸入時)包括約2ng至約100ng/千克動物體重，更優選約2ng至約50jig/千克動物體重、更優選約2ng至約10ng/千克動物體重、更優選約2ng至約5jig/千克動物體重、更優選約2iig至約1pg/千克動物體重、更優選約2ng至約0.5jig/千克動物體重、更優選約2ng至約0.25jig/千克動物體重、更優選約2ng至約0.1jig/千克動物體重。在另一個實施方案中，所述抗體的給藥劑量為每毫升製劑少於約500jig抗體、優選每毫升製劑少於約250ng抗體、更優選每毫升製劑少於約100ng抗體、更優選每毫升製劑少於約50jig抗體、更優選每毫升製劑少於約40ng抗體、更優選每亳升製劑少於約30jig抗體、更優選每毫升製劑少於約20jig抗體、更優選每毫升製劑少於約10jig抗體、甚至更優選每毫升製劑約5jig抗體至約10fig抗體。根據本發明的方法，給予動物的抑制TBI或SCI所導致的生理損害的試劑的有效量為這樣一個量，該量能夠減少由TBI或SCI導致的生理損害的至少一個症狀或指徵，或者能夠加強TBI或SCI恢復，且不會對動物有毒性。對動物有毒性的量包括任何會對動物的結構或功能造成損害的量(即有毒的)。在本發明的一個實施方案中，在遭受TBI或SCI的動物體內，給予動物的試劑的有效量是指與給予所述試劑之前相比或與不給予所述試劑相比，在動物體內顯著減少由TBI或SCI導致的生理損害的至少一種症狀或指徵的量。在另一個實施方案中，給予動物的試劑的有效量是指與一群遭受基本類似的TBI或SCI而沒有給予所述試劑的動物的症狀水平相比，在動物體內顯著減少由TBI或SCI導致的損害的至少一種症狀或指徵的量。優選地，甚至在損害的生理症狀發作之後給予所述試劑，該試劑也能夠在動物體內減少由TBI(例如腦損害)或SCI(例如脊髓損害)導致的生理損害的至少一種症狀或指徵。最優選地，試劑的有效量是指在患者體內能將TBI或SCI導致的損害的一種或多種症狀或指徵減少到不再被檢測到的程度的量。在一個實施方案中，所述試劑的有效量是指促進患者從TBI或SCI中恢復的量，這可以通過生理損害的症狀或指徵的停止或逆轉來測定，或者通過患者體內神經或相關功能的可測量或可檢測生物評分、數值或量度的改善來測定。在一個優選的實施方案中，本發明的試劑的適合劑量是指與不給予所述試劑的情況相比，能有效抑制如本文所述的補體旁路中的至少一種蛋白質(例如因子B、因子D或備解素)的表達或生物活性的劑量。測定蛋白質表達或生物活性的方法如上文所述。在另一個實施方案中，本發明的試劑的適合劑量是指顯著抑制本發明的補體旁路的劑量。例如，技術人員可以如在實施例中所述的那樣在酵母聚糖A顆粒上進行C3沉積的體外分析。技術人員也可以測試所述試劑抑制人血清裂解未致敏紅細胞的能力。基於這些測定法由體外結果外推出體內劑量是在本領域技術人員能力範圍之內的。本領域技術人員應能夠根據TBI或SCI的程度、與該損傷相關的預期或實測生理損害以及個體患者對治療的反應來確定所要給予動物的試劑的劑量數。用於診斷TBI和SCI(包括所述病症的嚴重程度)的方法如上文所述並且在本領域中是已知的。此外，臨床醫生應能夠確定為在動物體內有效地減少TBI或SCI導致的或相關的一種或多種症狀而進行所述試劑送遞的適當時機。優選地，所述試劑在48小時之內送遞，更優選36小時、更優選24小時、更優選在12小時內、更優選在6小時、5小時、4小時、3小時、2小時或1小時內，或者甚至是在導致TBI或SCI的事件發生後的數分鐘內。在一個實施方案中，患者、臨床醫生或其他人一旦意識到該患者已遭受TBI或SCI就(即立即)給予所述試劑。在另一個實施方案中，當首次出現可能與TBI或SCI相關的腦或神經損害的症狀的體徵時就給予所述試劑，優選在一種或多種症狀出現至少2小時內，更優選在至少l小時內、更優選在至少30分鐘內、更優選在至少10分鐘內、更優選在一種或多種症狀出現至少5分鐘內。TBI或SCI相關生理損害的症狀以及用於測量或檢測這類症狀的方法在上文中已有詳細描述。優選地，一直進行這種給藥直至出現生理損害減輕或生理損害的潛在症狀減少的體徵，然後根據需要給藥至症狀消失或停止。本發明的方法可以被用於任何動物，特別是任何脊推動物哺乳綱(即哺乳動物)的動物，包括但不限於靈長類、嚙齒類、家畜和馴養的寵物。使用本發明的方法治療的優選的哺乳動物為人。提供以下實施例是出於說明的目的而並非意在限制本發明的範圍。實施例實施例1下列實施例描述了在外傷性腦損傷(TBI)後，給予的補體抑制劑Crry-Ig對生理功能的療效。Crry-Ig是補體受體相關蛋白-y(Crry)與免疫球蛋白Fc分子的融合蛋白。Crry是人衰變加速因子(CD55)和膜輔因子蛋白(CD46)的功能同源物，並且會抑制C3補體轉換酶。因此，Crry是經典補體途徑和補體旁路的抑制劑。在小鼠的閉合性頭部外傷的標準化模型(Chenetal.，/.A^wra^關附fl1996)中，與僅注射載體的對照小鼠相比，損傷後全身給予1mgCrry-Ig會使得TBI後24小時內神經恢復明顯改善(圖6),該損傷後Crry-Ig的全身給藥對應於該模型系統中創傷後1-24小時內由於血腦屏障受損所出現的治療"有效時間窗"。在這一實驗中，創傷後神經功能缺損的程度是由兩名獨立的研究者按盲法通過標準的10分制神經功能損傷程度評分(A^WY/og/c"/5^ver/0;Sco",7V5^)來評估的。此外，與注射載體的對照相比，創傷後1小時通過i.p.注射1mgCrry-Ig的頭部損傷的小鼠表現出明顯的體重下降(圖7),這說明Crry-Ig導致的補體抑制使小鼠避免了炎症誘導的創傷後異化狀態。這些結果證明在C3補體轉化酶水平上抑制所述補體途徑會抑制TBI相關的生理損害。實施例2下述實施例說明了因子B單克隆抗體能減輕外傷性腦損傷(TBI)相關的腦損害。初步滴定研究表明在體內，在重25-35g的C57BL/6小鼠體內通過腹膜內(i.p.)注射2mgmAb1379(因子B單克隆抗體即抗fB)會使得補體旁路活性完全受到抑制，抑制作用持續48小時。採用如下兩個實驗組在C57BL/6小鼠內(Chenetal.，/A^Mra""M附fl1996)進行實驗性閉合頭部外傷後的抗ffi抑制研究一組接受2mgmAbl379，在t^h、24h或72h時i.p.注射；第二組只接受載體介質，在相同的時間點注射。結果表明，基於創傷後24小時內明顯下降的10分制神經功能損傷程度評分(NSS),與注射載體的對照動物相比，在抗ffi(mAbl379)組中補體旁路的抑制有明顯的神經保護作用(表3;圖8)。這一結果證明對補體旁路的選擇性抑制作用能減輕由TBI導致的生理損害。表3tableseeoriginaldocumentpage47*中值實施例3下述實施例表明因子B單克隆抗體能減輕脊髓損傷(SCI)相關的腦損害。本研究使用6-8周齡、重16-20g(針對所有小鼠)的野生型雌性C57BL/6小鼠(CharlesRiver，MD)和雌性ffi-A小鼠。不限量地給動物提供水和食物並將其關在通氣的樹脂玻璃(Plexiglas)籠子裡(四隻小鼠/每個籠子)，用無病原屏障設備製造12/12小時的光-暗周期循環並按照美國衛生與公共服務部的實驗動物管理和使用NIH(美國國立衛生研究院，Bethesda，MD)指南進行飼養。小鼠在實驗前至少適應一周。動物手術和術後操作由南卡羅萊納醫科大學的動物研究委員會批准。手術操作是在無菌條件下進行的。使用用於誘導脊髓損傷(SCI)的重物墜擊裝置來在小鼠體內製造脊髓挫傷(Panmietal.(2005)/.7Vcsc/de固/rA79:340-350)。簡言之，通過腹膜內(i.p.)注射氯胺酮(75mg/kg)和賽拉溱(16mg/kg)對小鼠進行麻醉。對小鼠背部背側進行刮毛並用碘化溶液擦洗。在手術過程中通過在動物身體下放置37。C的加熱毯來維持體溫。在T9至T13節段之間的皮膚中線進行切口。在T12節段處進行推板切除術，保持硬膜完整。用立體定位裝置固定脊柱並通過從3cm高處向暴露出的硬膜上墜落5g的重物(15g-cm力)來誘導損傷。假手術動物僅進行推板切除術。損傷後，閉合肌肉層並縫合切口。將小鼠置於加熱墊上。術前或術後均沒有使用預防性抗生素或鎮痛藥，目的是防止它們與SCI的實驗性療法之間可能的相互作用。每天手動擠壓膀胱兩次直至恢復足夠的自發性排洩。所有的動物都被包括在功能恢復研究中。每周由不知情的觀察者採用後肢運動功能評分來評估實驗小鼠的後肢功能(ShuheiKJ.ofNeuropathologyandExperimentalNeurology(2004)64-72)。評分範圍從0至5，分數如下0:無後肢運動；1:任何後肢關節(髖、膝蓋或踝)幾乎沒有可察覺的運動；2:—只或兩隻後肢中一個或多個後肢關節(髖、膝蓋或踝)敏捷地運動，但不協調；3:後肢交替邁步和推進性(propulsive)運動，但無法負重；4:可以負重行走，但有缺陷；5:正常行走。圖9示出了研究給予因子B單克隆抗體對脊髓損傷功能恢復的作用的研究結果。在上述SCI鼠類模型中，C57BL/6小鼠在損傷後1小時和12小時時靜脈內注射了1mg/10g抗因子B(mAbl379)(各組數目，n=8)。如上所述，創傷後的21天內每天評估一次功能恢復情況。在該時間段內也對假手術處理小鼠、具有實驗性SCI的未治療小鼠和具有實驗性SCI的因子B(-/-)小鼠進行評估。如圖9所示，與具有實驗性脊髓損傷的未治療小鼠相比，因子B(-/-)小鼠和接受了抗因子B的小鼠在所述21天內的每一天的時間點都有顯著(p<0.01)改善的功能恢復評分。這些結果證明在SCI模型中，對補體旁路的選擇性抑制作用足以提供顯著的療效。實施例4下述實施例證明補體激活的旁路途徑在TBI病理生理學中起重要作用。材料與方法因子8-/-小鼠。所述因子B缺陷型(ffi-/-)基因敲除小鼠之前已經被表徵過，並且被證明完全喪失功能性補體旁路[58]。它們最初是使用Svl29胚胎千細胞生成的，並且在Fl群體繁殖前與C57BL/6小鼠雜交。然後將它們與純種C57BL/6回交10代以上，發現它們與C57BL/6小鼠基本上無差別[34]。敲除小鼠和野生型同窩出生小鼠(fB+/+)在實驗前適應數周，並且在整個研究過程中保持實驗動物不受外部影響。讓它們在如下條件下祠養選擇性無病原(SPF)環境、標準溫度條件(2rC)、標準溼度條件(60%)、標準光暗周期循環(12:12小時)、不限量提供食物和水。這一研究中僅使用雄性小鼠，目的是避免與補體活性水平相關的[59和對腦損傷的敏感性相關的性別傾向，所述敏感性似乎明顯受雌性生殖激素影響[60，61。所有的實驗都是按照歐洲實驗動物科學學會聯合會(FELASA)的標準進行的，並且得到動物管理委員會的批准(LandesamtftirArbeitsschutz，GesundheitsschutzundtechnischeSicherheit，Berlin,Germany,No.G0099/03andNo.G0308/04)。腦損傷模型。如先前所描述的[13、38、62-64，使用標準的重物墜擊裝置，對C57BL/6品系的敲除(ffi-/-)小鼠和野生型同窩出生小鼠(ffi+/+)進行實驗性閉合頭部損傷(每組和每個時間點均為n=6)。簡言之，在異氟烷麻醉誘導後，通過中線縱向頭皮切口暴露出顱骨。從2cm高處向固定的顱骨上墜落333g的重物，對左半球造成局灶性鈍器損傷。創傷後，用100%的氧氣對所述小鼠進行氧合支持直至完全甦醒，然後將其放回籠中。在既定的時間點(t=4小時、24小時和7天)將小鼠無痛致死並取出腦半球進行免疫組織化學、TUNEL組織化學和SDS-PAGE/蛋白質印跡分析。此外，收集血清樣品以便通過ELISA和Bcl-2蛋白質印跡測定補體過敏毒素C5a的水平(參加下文)。將假手術小鼠置於與創傷組同樣的條件下並且進行相同的操作(麻醉和頭皮切口)，但不進行頭部損傷。用於小鼠C5a的ELISA。為了測定頭部損傷的和正常的C57BL/6對照小鼠的血清樣品中的補體過敏毒素C5a的水平，使用了Dr.P.A.Ward實驗室(AnnArbor，MI，USA)開發的一種ELISA。簡言之，將ELISA板(Immulon4HBX，ThermoLabsystems，Milford，MA，USA)用純化的單克隆抗小鼠C5aIgG(5ng/ml,BDPharmingen,SanDiego,CA，USA)包被。在用1%的溶於含0.05%TWEEN20(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO，USA)的PBS(Gibco-Invitrogen，Carlsbad,CA，USA)的牛奶(Roth,Karlsruhe,Germany)封閉非特異性結合位點後，將所述板用100ml1:20稀釋(用0.1%的溶於含0.05%TWEEN的PBS的牛奶稀釋)的血清和用於建立標準曲線的確定濃度的鼠重組小鼠C5a包被。在孵育及隨後的洗滌步驟後，加入500ng/ml的生物素化的單克隆抗小鼠C5a抗體(BDPharmingen),然後進行洗滌，並用400ng/ml的鏈親和素-過氧化物酶(Sigma)孵育。為進行比色反應，加入底物(同時溶於0.05M磷酸鹽杼檬酸鹽緩沖液的0.4mg/mlOPD和0.4mg/ml脲過氧化氫；Sigma)，並且用3MAl酸終止該顯色反應。在490nm處讀取吸光度("SpectraMax190，，讀數器，MolecularDevices,Sunnyvale,CA，USA)。所有的樣品都在兩個孔中進行分析並且根據兩次樣品分析的平均值計算結果。標準曲線從50ng/ml至0.1ng/ml是線性的，0.1ng/ml代表了該測定法檢測的下限。蛋白質印跡。通過蛋白質印跡分析對所有本研究中所用的小鼠的血清中作為內部質量控制的因子B的存在情況進行篩選。在ffi-A和岱+/+小鼠體內頭部損傷或假手術操作後第4小時、第24小時和第7天，測定勻漿的小鼠腦和相應時間點的血清樣品中線粒體抗凋亡介質Bcl-2和凋亡前Fas受體的蛋白質水平。蛋白質印跡技術先前已有描述[321。簡言之，在麻醉下取出小鼠的腦，並分離為左半球和右半球，立即用UltraTurraxHomogenizer(IKAWerke,Staufen，Germany)在裂解緩衝液(Sigma)中勻漿，所述裂解緩衝液含有溶於去離子水的100mMTRIS-HC1(pH7.5)、150mMNaCl、0.5%十二烷基石克酸鈉(SDS)、0.5%NonidetP-40、10mg/ml抑肽酶、10mg/ml亮抑酶肽、5mg/ml胃蛋白酶抑制劑、lmM苯曱磺醯氟。以13,000xg離心15分鐘後，用市售的比色蛋白質測定試劑("BCAProteinAssay",Pierce/PerbioScience,Bonn,Germany)測定上清中的蛋白質含量。在上樣緩衝液中使60jig的總蛋白樣品變性並且在還原條件下，在12%的SDS-聚丙烯醯胺凝膠上進行分離，同時使用寬範圍的預染SDS-PAGE蛋白質標準(Bio-Rad，Munich,Germany)。然後通過電轉移印跡(Bio-Rad)將蛋白質轉移到ProtranBA83硝酸纖維素膜上(Schleicher&Schuell，Dassel，Germany)。將所述印跡物封閉過夜，然後用1:500稀釋的單克隆抗小鼠BcI-2(SantaCruzBiotechnology,Heidelberg,Germany)、1:200稀釋的多克隆兔抗小鼠Fas(A-20克隆，SantaCruz)或1:8,000稀釋的多克隆雞抗小鼠抗因子B(由Dr.ScottR.Barnum惠贈，UniversityofAlabamaatBirmingham,AL，USA)作為一抗進行孵育，用1:10，000稀釋的單克隆抗p-肌動蛋白抗體(AC-15克隆，Sigma)作為確定電泳條帶等量上樣的內部對照。在用1:5,000稀釋的過氧化物酶標記的二抗(Dako，Hamburg,Germany,andSantaCruzBiotechnology,Heidelberg,Germany)孵育後，4吏用市售的ECL蛋白質印跡試劑盒(AmershamPharmaciaBiotech,Freiburg,Germany)通過非放射性化學發光技術進行抗體結合顯影。通過麗春紅染色劑(Sigma)來確認蛋白質等量轉移到了印跡膜上。免疫組織化學。為評估神經元的形態、完整性和凋亡，將取出的小鼠腦在液氮中速凍，在OCT化合物(SakuraFinetek，Torrance,CA)中包埋並儲存於-80t:下直至用於分析。在-20。C下用恆冷切片機進行6-8微米厚的冠狀位組織切片。為了進行免疫組織化學分析，用丙酮固定切片，然後用DAB-四鹽酸鹽作為色原(Vector,Burlingame，CA)通過標準的生物素/親和素/過氧化物酶技術進行分析，如之前的文獻所述[13，32。下述一抗#:用作細胞標記滴定稀釋度為1:2,000的單克隆抗NeuN(Chemicon，Hampshire,UK)，用於神經元；1:100稀釋的多克隆兔抗GFAP(ShandonImmunon，Pittsburgh,PA，USA),用於星形膠質細胞；1:100稀釋的單克隆大鼠抗CDllb(AccurateChemical,Westbury，NY,USA),用於小膠質細胞；1:200稀釋的多克隆山羊抗CD144(SantaCruz)，用於內皮細胞。^_用與所省略的特異性抗體等稀釋度的未免疫IgG(栽體)作為陰性對照。為確定腦內神經元細胞死亡的程度，如在先的文獻所述[38，按照製造商的說明書使用"螢光素原位細胞死亡檢測試劑盒"(RocheDiagnosticsGmbH,Mannheim,Germany)進行TUNEL組織化學分析。簡言之，將切片乾燥30分鐘，然後在室溫下用10%福馬林溶液固定。用PBS洗滌(三次，每次洗滌3分鐘)後，在-20。C下用冰冷的乙醇-乙酸(2:1)溶液孵育切片5分鐘。之後用PBS洗滌，在室溫下用含有溶於PBS的3%TritonX-100的透化溶液孵育60min，然後在37。C下用溶於含螢光素-dUTP的反應緩衝液的TdT酶孵育90分鐘。陰性對照僅使用不含TdT酶的反應緩衝液進行分析。陽性對照是通過在室溫下用DNA酶I級溶液(500U/ml;Roche)消化等量的腦切片20分鐘來進行分析，之後要一直遠離其它的樣品。標記後，用PBS再次洗滌所述切片，為了將未染色(TUNEL陰性)細胞顯影，將所述切片用用於DAPI(載體)螢光的Vectashield6封固劑覆蓋。在染色後立即用Axioskop40焚光顯樣吏鏡(Zeiss,Germany)(對於DAPI螢光用460nm，而對於TUNEL螢光用520nm)評估所有樣品，並且用Alphadigidoc1201軟體(AlphaIimotech，SanLeandro，CA，USA)進行分析。統計分析使用市售的軟體(SPSS9.0forWindows)進行統計分析。通過非配對的Student，t檢驗來確定ffi-A和仿+/+小鼠血清中補體C5a水平的差異。P值〈0.05被認為具有統計學顯著性。結果補體激活在腦損傷的fB-Z-小鼠體內被減弱。對本研究中所用的所有ffi-A小鼠和野生型同窩出生小鼠(ffi+/+)的血清進行的篩選表明，僅在仿+/+動物的血清中可檢測到因子B，而-/-小鼠中沒有因子B。進行這些對照實驗以確定所述敲除小鼠的血清中完全不含因子B(數據未出示)。參照圖10，通過小鼠C5a特異的ELISA分析來C57BL/6品系的腦損傷《+/+和ffi-A小鼠(每組和每個時間點均有n=6)和正常C57BL/6小鼠(對照；n=4)的血清樣品(數據在圖10中被示出為平均水平士SD;*P<0.05，《+/+小鼠與對照小鼠比較且仿+/+小鼠與ffi-/-小鼠比較。TBI,外傷性腦損傷)。野生型C57BL/6小鼠的實驗性閉合頭部損傷會導致補體級聯的全身激活，這可以通過4小時-7天所評估的全部時間點的補體激活產物C5a的顯著升高的血清水平來確定(與正常小鼠血清相比p弛藥和巴比妥酸鹽。43.權利要求4的方法，還包括給予所述動物一種類固醇。44.權利要求1的方法，還包括通過一個方案來治療所述動物的TBI，所述方案選自通過手術清除顱內血腫來減少大面積損傷；用滲透性藥物減輕腦腫脹；通過腦室內導管來治療性地排出腦脊液(CSF);計算機控制斷層攝影術(CT)掃描；鎮靜；鎮痛；肌肉鬆弛；適度增加通氣；適度降溫和巴比妥酸鹽昏迷。45.權利要求4的方法，還包括通過一個方案來治療所述動物的SCI，所述方案選自給予類固醇、脊柱固定、減壓手術、手術穩定推骨、手術復位推骨和牽引。46.權利要求l-45任一項的方法，其中所述動物為哺乳動物。47.權利要求l-45任一項的方法，其中所述動物為人。48.—種用於在遭受外傷性腦損傷(TBI)的動物體內減少或預防由TBI導致的生理損害的至少一種症狀的方法，包括給予所述動物一種通過結合或阻斷因子B的第三短同源重複序列(SCR)結構域來抑制因子B的試劑。49.一種用於在遭受脊髓損傷(SCI)動物的體內減少或預防由SCI導致的生理損害的至少一種症狀的方法，包括給予所述動物一種通過結合或阻斷因子B的第三短同源重複序列(SCR)結構域來抑制因子B的試劑。50.權利要求48或49的方法，其中所述試劑為選擇性結合因子B的抗體或其抗原結合片段。51.—種組合物，包括a)—種選自分離的抗體、其抗原結合片段、和抗原結合多肽的第一試劑，其中所述第一試劑選擇性地抑制補體旁路中蛋白質的表達或生物活性；和b)—種用於治療外傷性腦損傷(TBI)的症狀的第二試劑。52.—種組合物，包括a)—種選自分離的抗體、其抗原結合片段、和抗原結合多肽的第一試劑，其中所述第一試劑選擇性地抑制補體旁路中蛋白質的表達或生物活性；和b)—種用於治療脊髓損傷(SCI)的症狀的第二試劑。53.權利要求51或52的組合物，其中所述第一試劑抑制選自因子B、因子D和備解素的蛋白質的表達或生物活性。54.權利要求51或52的組合物，其中所述第一試劑結合因子B中的第三短同源重複序列(SCR)結構域，並抑制或阻止C3bBb複合物的形成。55.權利要求51至54任一項的組合物，其中所述第一試劑為抗體或其抗原結合片段。56.權利要求55的組合物，其中所述抗體為單克隆抗體1379。57.權利要求51的組合物，其中所述第二試劑為一種用於治療TBI的症狀的化合物，所述TBI症狀選自體格缺陷、i人知障礙和心理社會-行為-情緒障礙。58.權利要求51的組合物，其中所述第二試劑選自滲透性藥物、鎮靜藥、鎮痛藥、肌肉鬆弛藥和巴比妥酸鹽。59.權利要求52的組合物，其中所述第二試劑為類固醇。60.—種選擇性抑制補體旁路的試劑用於治療外傷性腦損傷(TBI)的藥物組合物中的用途。61.—種選擇性抑制補體旁路的試劑在用於治療脊髓損傷(SCL)的藥物組合物中的用途。62.權利要求60或61的用途，其中所述試劑為選擇性結合因子B的抗體或其抗原結合片段。全文摘要所公開的是使用選擇性抑制補體旁路的試劑和組合物來抑制或治療由外傷性腦損傷(TBI)、脊髓損傷(SCI)或相關病症導致的生理損害。優選的用於抑制由TBI或SCI導致的損害的試劑包括那些抑制因子B的試劑，抗因子B抗體代表了一種特別優選的試劑。文檔編號A61K39/395GK101227924SQ200680026992公開日2008年7月23日申請日期2006年5月26日優先權日2005年5月26日發明者J·M·瑟曼,P·F·斯塔赫爾,S·湯姆林森,V·M·霍勒斯申請人:科羅拉多大學評議會;南卡羅來納州醫科大學研究發展基金會