人源化的抗-cd40抗體及其使用方法
2023-04-26 11:18:01
專利名稱：：人源化的抗-cd40抗體及其使用方法人源化的抗-CD40抗體及其4吏用方法連續性本申請要求享有2005年5月26日提交的美國臨時申請號60/684,853的優先權，其內容在這裡整體引作參考。背景本發明概括地涉及用於診斷和治療用途的人源化的抗-CD40抗體。症的人源化的抗-CD40抗體和使用方法。也公開了藥物組合物和製品，例如包含人源化的抗-CD40抗體的試劑盒。CD40是I型完整膜糖蛋白和腫瘤壞死因子(TNF)受體超家族的成員。CD40在許多細胞類型上表達，包括正常和胂瘤B細胞，交錯突細胞，基底上皮細胞和癌。它也存在於單核細胞、巨噬細胞、有些內皮細胞、和濾泡樹突狀細胞上。CD40在B細胞個體發育的早期表達，在出現CD10和CD19之後，但是在表達CD21、CD23、CD24和出現表面免疫球蛋白M(slgM)之前，出現在B細胞前體上(Uckun等，1990,15:2449)。儘管以前的報導指出，CD40會在B細胞終末分化成漿細胞後喪失，已經在扁桃體和骨髓-衍生的漿細胞上4全測到CD40(Pellat-Decounynck等，1994，B/ood84:2597)。CD40與它的配體和反受體CD40L(也稱作CD154,gp39,和TRAP)的相互作用，會誘導體液和細胞-介導的免疫應答。CD40L是主要在激活的淋巴細胞、CD4+T細胞上表達的跨膜蛋白。象TNF家族的其它蛋白一樣，CD40L的結構是非共價三聚體的結構。CD40-介導的信號傳遞似乎是T細胞-依賴性抗原引起的B細胞增殖、免疫球蛋白(Ig)同種型轉換、生發中心組成、和記憶B細胞定型所必需的。CD40L與CD40的結合，會導致CD40多聚化、抗原呈遞細胞(例如樹突細胞，單核細胞,和B細胞)的活化信號的產生、和細胞因子-激活的成纖維細胞和上皮細胞的生長和分化信號的發生。儘管還沒有完全闡明CD40分子在細胞分化中起作用的信號傳遞途徑，CD40信號通過招募一系列TNF受體相關因子('TRAFs"),從多聚化的受體轉導(Kehry,1996,/wwwwo/.156:2345-2348)。TRAFs的亞型有差別地與TNF受體家族成員(包括CD40)相互作用，提供對許多種下遊途徑的刺激。TRAF1和TRAF2會參與細胞凋亡的調控(Speiser等，1997，J.五平Mc/.185:1777-1783;Yeh等，1997,/附ww"外7:715-725)。TRAFs2,5,和6會參與增殖和活化事件。在正常的B細胞中，CD40與CD40L的結合，會募集TRAF2和TRAF3到受體複合物，並誘導其它TRAF的向下調節(Kuhne等，1997,乂Ex/.Mt/.186:337-342)。在B細胞發育和分化過程中，細胞凋亡和CD40-介導的信號傳遞密切相關。B細胞中細胞凋亡的主要功能是未成熟的B細胞的克隆排除，認為這源自未成熟的B細胞中表面Ig的廣泛交聯。成熟B細胞的命運也受信號傳遞(通過表面Ig)和源自激活的T細胞的信號(推測是由CD40L分子介導)的組合的調控。來自表面Ig的信號和CD40的組合，可以克月l細胞凋亡途徑，並維持生發中心B細l包存活。生發中心中這樣的從細胞凋亡的復甦，對於生產親和抗體的記憶B細胞的發育是關鍵的。在T和B細胞惡性腫瘤中，當惡性細胞暴露於導致正常淋巴細胞激活的剌激時，經常發生抗腫瘤作用(生長停止，有或沒有細胞凋亡)。通過抗原受體或輔助刺激受體，已經用信號觀察到該活化-誘導的生長停止(Ashwell等，1987,S"ewce237:61;Bridges等，1987,丄/wwwmo/.139:4242;Page和Defranco,1988J./附w麗o/.140:3717;和Beckwith等，1990,丄A^".Owcer82:501)。抗畫CD40抗體或可溶性CD40L的CD40刺激，會直接抑制B細胞淋巴瘤生長(Funakoshi等，1994,說ooJ83:2787-2784)。已經描述了針對CD40的幾種鼠單克隆抗體(mAbs)(Katira等1995,"CD40WorkshopPanelReport";見丄ewAoc,I7,Schlossmanetal.,(eds)1995,1:547-550)。例如，證實了兩種mAbCD40.7(M2)和CD40.8(M3)會抑制CD40向CD40L的結合(Fanslow等，1995,見丄ewAoc,Schlossman等，(eds)1995，1:555-556)。mAbsM2和M3的CD40刺激，會抑制幾種人B-細胞淋巴瘤的生長，並體內誘導建立的胂瘤的消退(Funakoshi等，1994,B/ooJ83:2787-2794;Funakoshi等，1996，丄/mww"o/.19:93-101)。美國專利號5,182,368公開了抗-CD40鼠mAb,G28-5，其可以增進B細胞增殖。基於G28-5的單鏈Fv區的單鏈免疫毒素，會在體外選擇性地殺死表達人CD40的血液學惡性細胞系(Francisco等，1997,J說o/.C/2e肌39:24165-24169)。但是，G28-5在沒有CD40L的情況下不能增強B細胞的激活，也不會實現CD40和CD40L的結合。美國專利號6,838,261(和相關的美國專利號6,946,129和6,843,989)描述了抗-CD40鼠mAb的一類變體形式S2C6,和它在治療多種病症中的應用，包^l舌癌症和免疫性和炎性疾病。除了增強CD40L-介導的刺激以外，在美國專利號6,838，261中描述的抗-CD40抗體表現出CD40和CD40L之間相互作用的增強和體內抗-腫瘤活性。儘管S2C6自身會以類似於G28-5的方式刺激B細胞增殖，S2C6與G28-5的區別在於它的增強CD40L結合的能力和CD40L-介導的活化信號的隨後放大。其它鼠抗-CD40mAbs,例如，在國際公開號WO95/17202中描述的那些，會結合CD40,並表現出在治療和預防特徵在於表達CD40的腫瘤細胞的疾病中的效能。儘管鼠抗-CD40抗體具有作為治療人類CD40相關疾病的治療劑的潛在用途，它們的免疫原性提出了中和抗體應答的可能性，例如,會限制它們的價值的人抗-小鼠抗體(HAMA)應答。因而，需要人源化的抗-CD40抗體，其能特異性地結合定義的CD40表位，並表現出抗原結合特異性、親和力和類似的非人抗-CD40抗體的其它希望的功能特徵。發明簡述本發明包括人源化的抗-CD40抗體和抗原結合片段，以及使用這樣的人源化的抗-CD40抗體和片段治療特徵在於表達CD40表面抗原的細胞的疾病和病症的方法。也包括包含人源化的抗-CD40抗體的試劑盒和製品。在有些實施方案中，提供了特異性結合人CD40的分離的抗體或抗原結合片段。抗體或抗原結合片段包括重鏈可變域和/或輕鏈可變域。重鏈可變域可以包括具有與SEQIDN0:2的人可變域重鏈亞型III共有胺基酸序列至少90%同一的胺基酸序列的構架區、和至少一個具有與SEQIDNO:3的對應重鏈CDR至少90。/。同一的胺基酸序列的CDR。輕鏈可變域可以包括具有與SEQIDNO:13的人可變區輕糹連亞型kI共有胺基酸序列至少90%同一的胺基酸序列的構架區、和至少一個具有與SEQIDNO:14的對應輕鏈CDR至少90%同一的胺基酸序列的CDR。在有些實施方案中，每個重鏈CDR與SEQIDNO:3的對應重鏈CDR具有至少90%同一性。在有些實施方案中，重鏈CDR包括SEQIDNO:3的重鏈CDR1、CDR2和CDR3的胺基酸序列。在有些實施方案中，每個輕鏈CDR與SEQIDNO:14的對應輕鏈CDR具有至少90%同一性。在有些實施方案中，輕鏈CDR包括SEQIDNO:14的CDR1、CDR2和CDR3的胺基酸序列。在有些實施方案中，抗體或抗原結合片段包括具有SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:IO或SEQIDNO:ll的胺基酸序列的重4連可變域。在有些實施方案中，抗體或抗原結合片段包括具有SEQIDNO:14、SEQIDNO:15或SEQIDNO:16的胺基酸序列的輕鏈可變域。在有些實施方案中，抗體或抗原結合片段具有SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:IO或SEQIDNO:ll的重鏈可變域胺基酸序列，和SEQIDNO:14、SEQIDNO:15或SEQIDNO:16的輕鏈可變;成胺基酸序列。在有些實施方案中，重鏈可變域和輕鏈可變域分別包括下述胺基酸序列SEQIDNO:3和SEQIDNO:14;SEQIDNO:4和SEQIDNO:14;SEQIDNO:5和SEQIDNO:14;SEQIDNO:6和SEQIE)NO:14;SEQIDNO:7和SEQIDNO:14;SEQIDNO:8和SEQIDNO:14;SEQIDNO:9和SEQIDNO:14;SEQIDNO:6和SEQIDNO:15;SEQIDNO:6和SEQIDNO:16;SEQIDNO:7和SEQIDNO:16;SEQIDNO:IO和SEQIDNO:14;SEQIDNO:l1和SEQIDNO:14;SEQIDNO:IO和SEQIDNO:16;或SEQIDNO:11和SEQIDNO:16。抗體或抗原結合片段可以包括人IgG恆定區,例如，同種型IgGl、IgG2、IgG3或IgG4的IgG恆定區。抗體或抗原結合片段可以包括輕鏈恆定域,例如，k恆定域。在有些實施方案中，抗體是husgn-0,husgn-1,husgn-2,husgn-4,husgn-14,husgn-15,husgn-16,husgn-17,husgn-18,husgn-19,husgn-22,husgn-23,husgn-26或husgn-27。在有些實施方案中，抗體或抗原結合片段與ATCC保藏號PTA-110雜交瘤分泌的單克隆抗體S2C6竟爭結合。抗體也可以是抗原結合片段,例如Fab，Fab，，F(ab，)2,Fv片段，雙特異抗體(diabody),單鏈抗體，scFv片段或scFv-Fc。抗體或抗原結合片段可以任選地被標記，或綴合到化療劑上，例如auristatm(例如，MMAE或MMAF).也提供了試劑盒，其包含置於容器中的抗-CD40抗體或抗原結合片段。試劑盒可以任選地包含其它組分，例如關於使用所述抗體檢測生物樣品中的CD40蛋白的說明書。也提供了藥物組合物，其包含抗-CD40抗體或其抗原結合片段和藥學可接受的賦形劑。在有些實施方案中，提供了編碼人源化的重鏈可變區和/或人源化的輕鏈可變區的分離的多核苷酸。多核苷酸可以，例如，編碼SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:IO或SEQIDNO:ll的重《連可變域胺基酸序列。多核苷酸也可以，例如，編碼SEQIDNO:14、SEQIDNO:15或SEQIDNO:16的輕鏈可變域胺基酸序列。在有些實施方案中，分離的多核苷酸分別編碼下述重鏈可變域胺基酸序列和輕《連可變域胺基酸序列SEQIDNO:3和SEQIDNO:14;SEQIDNO:4和SEQIDNO:14;SEQIDNO:5和SEQIDNO:14;SEQIDNO:6和SEQIDNO:14;SEQIDNO:7和SEQIDNO:14;SEQIDNO:8和SEQIDNO:14;SEQIDNO:9和SEQIDNO:14;SEQIDNO:6和SEQIDNO:15;SEQIDNO:6和SEQIDNO:16;SEQIDNO:7和SEQIDNO:16;SEQIDNO:IO和SEQIDNO:14;SEQIDNO:ll和SEQIDNO:14;SEQIDNO:IO和SEQIDNO:16;或SEQIDNO:ll和SEQIDNO:16。在有些實施方案中，提供了抑制表達人CD40抗原的細胞的生長的方法。該方法包括，給細胞施用抗-CD40抗體或抗原結合片l爻，且所述抗體或抗原結合片段結合人細胞表面CD40抗原。抗體或抗原結合片段與CD40抗原的結合抑制細胞的生長或分化。在有些實施方案中，提供了治療具有CD40相關病症的受試者的方法。該方法包括，給受試者施用抗-CD40抗體或抗原結合片段，所述抗體或抗原結合片段結合人CD40。抗體或抗原結合片段與CD40的結合抑制CD40相關病症的細胞的生長或分化。CD40相關病症可以是,例如，慢性淋巴細胞白血病，伯基特淋巴瘤，多發性骨髓瘤，T細胞淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，霍奇金病，瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症或卡波西肉瘤。在有些實施方案中，提供了誘導外周B細胞的缺失的方法。該方法包括，給細胞施用抗-CD40抗體或抗原結合片段，所述抗體或抗原結合片段會結合人細胞表面CD40抗原。抗體或抗原結合片段與CD40抗原的結合，會誘導細胞的缺失。外周B細胞可以,例如，在受試者中表現出自身免疫反應性。參考下面的詳述，包括優選實施方案，以及附圖和序列表，可以最好地理解本發明。下面的討論是描述性的、解釋性的和示例性的，不應當用於限制所附權利要求書定義的範圍。附圖簡述圖1A和1B顯示了人源化的抗-CD40抗體重鏈的多肽(SEQIDNO:18)和編碼(SEQIDNO:17)和互補DNA序列。多肽序列的註解指示了先導序列、可變區、和人IgG!恆定區的位置。圖1C顯示了人源化的抗-CD40抗體輕鏈的多肽(SEQIDNO:21)和編碼(SEQIDNO:20)和互補DNA序列。多肽序列的註解指示了先導序列、可變區、和人k恆定區的位置。圖2顯示了在腫瘤移植後13天開始治療，在2周後測量的對照抗體、鼠抗-CD40抗體、和人源化的抗-CD40抗體治療對胂瘤體積的影響。圖3顯示了對照抗體、鼠抗-CD40抗體、和人源化的抗-CD40抗體治療對攜帶腫瘤的小鼠的存活率的影響。發明詳述為了公開清楚，且不作為限制，本發明的詳述分成下面的小節。當在本文中使用商品名稱時，商品名稱也指商品名稱產物製劑、仿製藥物、和商品名稱產物的活性藥物成分，除非上下文另有說明。除非另有定義，本文使用的所有技術和科學術語具有與所述方法和組合物所屬領域的普通技術人員通常理解相同的含義。定乂術語"CD40"和"CD40表面抗原"指在正常和肺瘤B細胞的表面上表達的50kD糖蛋白，其起參與細胞增殖和分化的信號的受體的作用，有時稱作Bp50(Ledbetter等，1987,,/./附w朋/.138:788-785)。已經從伯基特淋巴瘤細胞系Raji分離出編碼CD40的cDNA分子(Stamenkovic等,1989，五MB(9乂8:1403)。表達CD40的細胞是特徵在於CD40的表面表達的任意細胞，包括、但不限於，正常和腫瘤B細胞，交錯突細胞，基底上皮細胞，癌細胞，巨噬細胞，內皮細胞，濾泡樹突狀細胞，扁桃體細胞和骨髓-衍生的漿細胞。在有些實施方案中，CD40分子是人CD40分子。本文使用的術語"CD40抗原表位"和"CD40表位"指，能與抗-CD40抗體發生免疫反應的分子(例如，肽)或分子片段，例如，包括由S2C6單克隆抗體識別的CD40抗原決定子。CD40抗原表位可以包含在蛋白、蛋白片段、肽等內。表位是最常見的蛋白、短寡肽、寡肽模仿物(即，模仿CD40抗原的抗體結合性質的有機化合物)或其組合。如本文所述，"特異性結合"和"特異性地結合"指結合預定抗原的抗體。通常，抗體以至少約lx107M"的親和力結合，並以比對除了預定抗原或密切相關抗原以外的非特異性抗原(例如，BSA,酪蛋白)的結合親和力大至少2倍的親和力結合預定抗原。"天然抗體"和"天然免疫球蛋白"在本文中定義為，由2個相同輕(L)鏈和2個相同重(H)鏈組成的異源四聚體糖蛋白，通常約150,000道爾頓。每個輕鏈通過一個二硫鍵共價連接到重鏈上，形成異源二聚體。通過這樣的異源二聚體的2個相同重鏈之間的共價二硫鍵，形成異源四聚體。儘管輕鏈和重鏈通過一個二硫鍵連接到一起，2個重鏈之間的二硫鍵的數目隨免疫球蛋白同種型而異。每個重鏈和輕鏈也具有規則分布的鏈內二硫鍵。每個重鏈在氨基端具有一個可變域(vh),隨後是3或4個恆定域(ChI,Ch2,Ch3,和Ch4),以及在CH1和CH2之間的鉸鏈區。每個輕鏈具有2個結構域，即1個氨基端可變域(VO和1個羧基端恆定域(cl)。vl結構域與vh結構域非共價地結合，而cl結構域通常通過二硫鍵共價連接到CH1結構域上。認為特定胺基酸殘基會在輕鏈和重鏈可變域之間形成界面(Chothm等，1985,,/.楊/.腸/.186:651-663)。術語"超變的"指下述事實，即可變域內的某些序列與抗體中的序列有很大不同，且含有直接參與每個特定抗體對它的特定抗原決定子的結合和特異性的殘基。輕鏈和重鏈可變域內的超變性，集中在稱作互補性決定區(CDR)或超變環(HVL)的3個區段內。在Kabat等，1991，見.'5"egwewc'e,st)/'/Vo/^/w/附7"wwo/ogzc"//w,eres/1,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.中，通過序列對比定義了CDR,而HVL則才艮據可變域的三維結構在結構上定義，如Chothm和Lesk,1987，《/.A^/.說o/.196:901-917所述。當這2種方法導致田各有不同的CDR鑑別時，結構定義是優選的。如Kabat所定義的，CDR-L1位於輕鏈可變域的殘基24-34附近，CDR-L2位於殘基50-56附近，且CDR-L3位於殘基89-97附近；CDR-H1位於重鏈可變域的殘基31-35附近，CDR-H2位於殘基50-65附近，且CDR-H3位於殘基95-102附近。每個重鏈和輕鏈內的3個CDR由構架區(FR)隔開，該構架區含有傾向於更低可變性的序列。從重鏈和輕鏈可變域的氨基端至羧基端，FR和CDR的排列次序是FR1，CDR1，FR2,CDR2,FR3，CDR3,和FR4。FR的大量P-摺疊構型，使得每個鏈內的CDR彼此接近，也使每個鏈內的CDR接近其它鏈的CDR。得到的構象促成抗原結合位點(參見Kabat等,1991,NIHPub1.No.91-3242,Vol.I,第647-669頁)，儘管並非所有CDR殘基都一定直接參與抗原結合。FR殘基和Ig恆定域不直接參與抗原結合，但是有助於抗原結合和/或介導抗體效應功能。有些FR殘基可以以至少3種方式對抗原結合起顯著作用通過非共價地直接結合表位，通過與一個或多個CDR殘基相互作用，或通過影響重鏈和輕鏈之間的界面。恆定域不直接參與抗原結合，但是介導多種Ig效應功能,例如抗體在抗體依賴性細胞毒性(ADCC)、補體依賴性細胞毒性(CDC)和抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)中的參與。基於恆定域的胺基酸序列，可以將脊推動物免疫球蛋白的輕鏈歸為2種明顯不同的類型之一k(k)和X(X)。根據恆定域的序列，通過對比，可以將哺乳動物免疫球蛋白的重鏈歸為5種主要類型之一IgA、IgD、IgE、IgG,和IgM。IgG和IgA進一步分成亞型(同種型),例如，IgG]、IgG2、IgG3、IgG4、IgA^和IgA2。與不同類型的免疫球蛋白相對應的重鏈恆定域分別稱作a,S，e,y,和P。天然免疫球蛋白的類型的亞基結構和三維構型是眾所周知的。術語"抗體"、"抗-CD40抗體"、"人源化的抗-CD40抗體"、和"變體人源化的抗-CD40抗體"在本文中以最廣義4吏用，具體地包括單克隆抗體(包括全長單克隆抗體)，多克隆抗體，多特異性抗體(例如，雙特異性抗體),和抗體片段，例如可變域和表現出希望的生物活性的(例如，CD40結合)其它抗體部分。術語"單克隆抗體"(mAb)指從基本上同源的抗體的群體得到的抗體;也就是說，構成該群體的單個抗體是相同的，例外是，可能存在微量的天然存在的突變。單克隆抗體是高度特異性的，其針對單個抗原決定子(也稱作表位)。修飾詞"單克隆的"表示針對相同表位的基本上同源的抗體的群體，不應理解為需要通過任何特殊方法生產抗體。單克隆抗體可以通過本領域已知的任意4支術或方法來製備;例如，K6hler等，1975,A^i/"256:495首次描述的雜交瘤方法，或本領域已知的重組DNA方法(參見，例如，美國專利號4,816,567)。在另一個實例中，也可以-使用Clackson等，1991,胸,352:624-628,和Marks等，1991,丄M/.222:581-597所述的技術，從噬菌體抗體文庫分離單克隆抗體。相反地，在多克隆抗體的製備中的抗體通常是免疫球蛋白同種型和/或類型的異質群體，且也表現出許多表位特異性。本文使用的術語"嵌合的"抗體是一種單克隆抗體類型，其中在重鏈和/或輕鏈的一個或多個區域或結構域中的一部分或全部胺基酸序列，與來自另一個物種或屬於另一個免疫球蛋白類型或同種型或來自共有序列的單克隆抗體中的對應序列相同、同源，或是其變體。嵌合的抗體包括這樣的抗體的片段，條件是，抗體片段會表現出它的親本抗體的希望的生物活性，例如結合相同表位(參見，例如，美國專利號4,816,567;和Momson等，1984,TVoc.Ato/.」cac/."&481:6851-6855)。術語"抗體片段"、"抗-CD40抗體片段"、"人源化的抗-CD40抗體片段"、"變體人源化的抗-CD40抗體片段"指全長抗-CD40抗體的一部分，其中保留了可變區或功能能力,例如，特異性的CD40表位結合。抗體片段的實例包括、^f旦不限於，Fab,Fab，，F(ab，)2，Fd,Fv,scFv和scFv-Fc片段，雙特異抗體，線性抗體，單鏈抗體，微抗體(minibody),由抗體片段形成的雙特異抗體,和由抗體片段形成的多特異性抗體。通過全長抗體的酶處理，可以產生某些抗體片段類型。抗體的木瓜蛋白酶消化，會產生2個相同的抗原結合片段(稱作"Fab"片段，各自含有一個抗原結合位點)和1個殘餘"Fc"片段(因為它易於結晶的能力而得名)。Fab片段也含有輕鏈的恆定域和重鏈的CH1結構域。胃蛋白酶處理會產生F(ab，)2片段，其具有2個抗原結合位點，且仍然能交聯抗原。Fab，片段與Fab片段的不同之處在於，在CH1結構域的C-末端存在幾個額外的殘基，包括來自抗體鉸鏈區的一個或多個半胱氨酸Fab-SH在本文中是Fab，的命名，其中恆定域的半胱氨酸殘基攜帶游離的巰基。F(ab，)2抗體片段是通過鉸鏈區中的半胱氨酸殘基相連接的一對Fab，片段。抗體片段的其它化學偶聯也是已知的。"Fv"是最小的抗體片段，其含有由緊密、非共價結合的一個重鏈和一個輕鏈可變域的二聚體組成的完整抗原-識別和結合位點。在該構型中，每個可變域的3個CDR相互作用，定義在Vh-Vl二聚體表面上的抗原-結合位點。6個CDR共同賦予抗體抗原-結合特異性。"單鏈Fv"或"scFv"抗體片段是包含抗體的Vh和VL結構域的單鏈Fv變體，其中所述結構域存在於單個多肽鏈中，且能識別和結合抗原。scFv多肽任選地含有位於Vh和VL結構域之間的多肽連接物，其能使scFv形成希望的用於抗原結合的三維結構(參見，例如，Pluckthun，1994,7Te屍/2a/7w"co/ogyo/Mowoc/ewa/JwhZwc^e^,Vol.113，Rosenburg禾口Moore編，Springer-Verlag,NewYork,pp.269-315)。術語"雙特異抗體"指具有2個抗原結合位點的小抗體片段。每個片段含有連接到一個輕鏈可變域(V。上的一個重鏈可變域(VH)。通過使用短得足以允許同一鏈上的2個結構域之間配對的連接物，迫使連接的VH-VL結構域與另一條鏈的互補結構域配對，建立2個抗原結合位點。雙特異抗體更完整地描述在，例如，EP404,097;WO93/11161;和Hollmger等，1993,屍rac.A^/.v4cadV&490:6444-6448。術語"線性抗體"指包含一對串聯的Fd區段(Vh-ChI-Vh-ChI)的抗體，所述Fd區段形成一對抗原結合區。線性抗體可以是雙特異性的或單特異性的，參見,例如，Zapata等1995，屍ro&w8(10):1057-1062。體或其片段，其能結合預定抗原，且其包含一個或多個基本上具有人免疫球蛋白胺基酸序列的FR、和一個或多個基本上具有非人免疫球蛋白胺基酸序列的CDR。該非人胺基酸序列在本文中稱作"輸入"序列，其通常取自"輸入"抗體結構域，尤其是可變域。一般而言，人源化的抗體至少包括非人抗體的CDR或HVL,其插入在人重鏈或輕鏈可變域的FR之間。在某些方面，人源化的抗-CD40抗體含有源自鼠單克隆抗體S2C6的CDR和/或HVL殘基或序列，其插入在人共有序列重鏈和輕鏈可變域的FR之間。在另一個方面，人源化的抗-CD40抗體包含基本上全部的至少1個、且通常2個可變域(例如，包含在例如Fab、Fab'、F(ab')2、Fabc、和Fv片段中)，其中全部或基本上全部的CDR對應非人免疫球蛋白的CDR，且全部或基本上全部的FR是人免疫球蛋白共有序列的FR。在另一個方面，人源化的抗-CD40抗體也包括免疫球蛋白Fc區域(通常是人免疫球蛋白的)的至少一部分。通常，所述抗體會含有輕鏈以及重鏈的至少可變域。適當時，所述抗體也可以包含一個或多個重鏈CH1、4交鏈、CH2、Ch3、和/或CH4區域。人源化的抗-CD40抗體可以選自任意類型的免疫球蛋白，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE,和任意同種型，包括IgG!、IgG2、IgG3、IgG4、IgA!和IgA2。例如，恆定域可以是固定恆定域的補體，其中希望人源化的抗體表現出細胞毒性活性，且同種型通常是IgGi。當不需要這樣的細胞毒性活性時，恆定域可以是另一種同種型,例如IgG2。替代性的人源化的抗-CD40抗體可以包含來自超過一種免疫球蛋白類型或同種型的序列，且選擇特定恆定域來優化希望的效應功能屬於本領域的普通技術。人源化的抗-CD40抗體的FR和CDR或HVL,不需要與親本序列精確對應。例如，通過取代、插入或缺失，可以改變(例如,誘變)輸入CDR或HVL或共有FR序列中的一個或多個殘基，使得得到的胺基酸殘基不再與任一個親本序列中對應位置處的原始殘基相同。但是，這樣的改變通常不是廣泛的。通常，至少75%人源化的抗體殘基與親本共有FR和輸入CDR序列的抗體殘基相對應，更經常至少90%,最經常大於95%或大於98%或大於99%。影響重鏈和輕鏈可變區之間的界面("VL-VH界面")的免疫球蛋白殘基是影響2條鏈相對彼此的接近或朝向的那些殘基。可能參與鏈間相互作用的某些殘基包括VL殘基34,36,38,44,46,87,89,91,96,和98和VH殘基35,37,39,45,47,91,93，95,100,和103(使用Kabat等，SequencesofProtemsofImmunologicalInterest(NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.,1987)所述的編號系統)。其它殘基包括如這裡整體引作參考的美國專利號6,407,213所公開的VL殘基43和85,和VH殘基43和60。儘管這些殘基僅僅為人IgG而指出，它們跨物種適用。選擇合理地預期會參與鏈間相互作用的輸入抗體殘基，用於取代進共有序列。本文使用的術語"共有序列"和"共有抗體"指，在任意特定類型、同種型或亞基結構(例如，人免疫球蛋白可變域)的所有免疫球蛋白的每個位置處包含最經常出現的胺基酸殘基的胺基酸序列。共有序列可以基於特定物種或許多物種的免疫球蛋白。"共有"序列、結構或抗體理解為包括在某些實施方案中描述的共有人序列，且指在任意特定類型、同種型或亞基結構的所有人免疫球蛋白的每個位置處包含最經常出現的胺基酸殘基的胺基酸序列。提供了共有人結構和考慮了除人以外的其它物種的共有結構。因而，共有序列含有胺基酸序列，後者在每個位置處具有存在於一種或多種已知免疫球蛋白中的胺基酸，但是其可能不精確地複製任意單個免疫球蛋白的整個胺基酸序列。可變區共有序列不是從任意天然產生的抗體或免疫球蛋白獲取。有用的共有序列包括人可變輕鏈kI共有序列(SEQIDNO:13)和人可變重鏈亞型III共有序列(SEQIDNO:2),它們源自在Kabat等，1991,S叫uencesofProteinsofImmunologicalInterest,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.中提供的數據,和其變體。重鏈和輕鏈共有序列的FR、和其變體，會提供對於製備人源化的抗-CD40抗體有用的序列。參見，例如，美國專利號6,037,454和6,054,297。在某些實施方案中，用於製備人源化的抗體的FR源自人可變輕鏈kI共有序列和人可變重鏈亞型III共有序列。本文所述的"變體"、"抗-CD40變體"、"人源化的抗-CD40變體"或"變體人源化的抗-CD40，，各自指，至少具有源自鼠單克隆抗體S2C6的重鏈可變CDR或HVL序列和源自人共有序列的FR序列的人源化的抗-CD40抗體。變體包括在一個或2個輕鏈或重鏈可變域中具有一個或多個胺基酸變化的變體，條件是，所述胺基酸變化基本上不損害抗體與CD40的結合。人源化的抗-CD40變體通常包括，通過實現改良的抗體分子摺疊，提高抗體性能的胺基酸取代。"分離的"抗體是已經從它的天然環境的組分中鑑別和分離和/或回收的抗體。抗體的天然環境的汙染組分是可能分妨礙抗體的診斷或治療用途的那些材料，且可以是酶、激素或其它蛋白性的或非蛋白性的溶質。在一個方面，將抗體純化至a)通過Lowry方法測得，按抗體重量計，大於95%分離，在另一個方面，按重量計，超過99%分離，或b)使用旋轉杯順序分析儀，足以得到N-末端或內部胺基酸序列的至少15個殘基的分離程度，或C)使用考馬斯藍或優選的銀染色劑觀察到，在還原或非還原條件下，通過SDS-PAGE的同質性。分離的抗體包括在重組細胞內的#在抗體，因為抗體的天然環境中的至少一種組分不存在。但是，通常通過至少一個純化步驟，製備分離的抗體。術語"抗體性能"指有助於抗原的抗體識別或抗體體內有效性的因素。抗體胺基酸序列的變化，可以影響抗體性質，例如摺疊，且可以影響物理因素，例如抗體結合抗原的起始速率o。)，抗體與抗原的解離常數(Kd)，抗體對抗原的親和力常數，抗體的構象，蛋白穩定性,和抗體的半衰期。在本文中使用的術語"表位標記的，，指，與"表位標記"融合的抗-CD40抗體。"表位標記"是具有足夠數目的胺基酸來提供抗體生產的表位的多肽，並設計成不會妨礙希望的人源化的抗-CD40抗體的活性。表位標記通常足夠獨特，使得針對表位標記產生的抗體基本上不與其它表位交叉反應。合適的標記多肽通常含有至少6個胺基酸殘基，且通常含有約8-50個胺基酸殘基或約9-30個殘基。表位標記和結合該表位的抗體的實例包括fluHA標記多肽和它的抗體12CA5(Field等，1988Mo/.0〃.腸/.8:2159-2165);c匿myc標記和它的8F9,3C7,6E10,G4，B7和9E10抗體(Evan等，1985，Mo/.Ce〃.Bw/.5(12):3610-3616);和單純皰滲病毒糖蛋白D(gD)標記和它的抗體(Paborsky等1990,/Vo&z力3(6):547-553)。在某些實施方案中，表位標記是"補;救受體結合表位"。本文所述的術語"補救受體結合表位"指IgG分子(例如IgG!、IgG2、IgGs或IgG4)的Fc區的表位，其負責增加IgG分子的體內血清半衰期。術語"細胞毒性劑"指會抑制或阻止細胞的功能和/或造成細胞的破壞的物質。該術語意在包括放射性同位素(例如I131,1125,Y^'和Re186)，化療劑,和毒素(例如細菌、真菌、植物或動物起源的酶活性毒素)，和其片段。使用已知的標準操作，可以將這樣的細胞毒性劑偶聯到抗體(例如，人源化的抗-CD40抗體)上，並用於例如治療指示用該抗體治療的患者。"化療劑"是用於治療癌症的化合物。化療劑的實例包括烷化劑，例如塞替派和環磷醯胺(CYTOXANTM);烷基磺酸酯例如白消安，英丙舒凡，和旅泊舒凡；氮丙咬例^口benzodopa,卡〉皮酉昆，meturedopa,禾口uredopa;氮丙口定和曱基氨基吖t定包4舌六曱蜜胺，三亞胺。秦，tnetylenephosphoramide,triethylenethiophosphoramide，和trimethylolomelamine;acetogenins(尤其bullatacm和bullatacinone);喜樹鹼(包括合成類似物託泊替康)；苔蘚抑素；callystatm;CC-1065(包括它的阿多來新、卡折來新和比折來新合成類似物)；cryptophycines(尤其cryptophycin1和cryptophycin8);多^立司他汀，aunstatins(包括類似物單甲基-aunstatinE和單甲基-auristatinF);duocarmycin(包括合成類似物，KW-2189和CBI-TMI);eleutherobm;pancratistatin;sarcodictyin;spongistatin;氮芥例如苯丁酸氮界，茶氮芥，chol叩hosphamide,雌莫司汀，異環磷醯胺，氮芥，氧氮芥鹽酸鹽，美法侖，新氮芥，苯乙酸氮齊膽甾醇酯，潑尼莫司汀；曲磷胺，烏拉莫司汀；硝基脲例如卡莫司汀，氯脲菌素，福莫司汀，洛莫司汀，尼莫司汀，雷莫司汀；#元生素例3口enediyne^元生素(例戈口，刺孑包黴素，尤其calichemicmyll和刺孢黴素phill,參見例如，C/ze肌/^/.￡d33:183-186;dynemicin,包括dynemicmA;二膦酸鹽，例如氯膦酸鹽；esperamicin;以及新制癌菌素生色團和相關的色蛋白enediyne抗生素生色團)，aclacinomysms,放線菌素，authramycm,偶氮絲氨酸，博來黴素，放線菌素C,carabicin,洋紅黴素，嗜癌黴素，色黴素，更生黴素，柔紅黴素，地託比星，6-重氮基-5-氧-L-正亮氨酸，多柔比星(多柔比星tm)(包括嗎啉代-多柔比星，氰基嗎啉代-多柔比星，2-吡咯啉代-多柔比星,和去氧多柔比星)，epimbucin,依索比星，伊達比星，麻西羅黴素，絲裂黴素例如絲裂黴素C,麥考酚酸，諾拉黴素，橄欖黴素，培洛黴素，potfiromycm,嘌羅黴素，三鐵阿黴素，羅多比星，鏈黑黴素，鏈佐星，殺結核菌素，烏苯美司，淨司他丁，佐柔比星；抗代謝物例如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU);葉酸類似物例如二曱葉酸，曱氨蝶呤，蝶羅呤，三曱曲沙；噤呤類似物例如氟達拉濱，6-巰嘌呤，石危咪。票呤，石危鳥嘌呤；嘧啶類似物例如安西他濱，氮雜胞苷，6-氮尿苷，卡莫氟，阿糖胞苷，二去氧尿苷，去氧氟尿苷，依諾他濱，氮尿苷；雄激素例如卡普睪酮，屈他雄酮丙酸鹽，環硫雄醇，美雄烷，睪內酪；抗腎上腺素類例如氨魯米特，米託坦，曲洛司坦；葉酸補充劑例如亞葉酸；醋葡醛內酯；醛磷醯胺糖苷；氨基乙醯丙酸；恩尿嘧。定；安吖。定；bestrabucil;比生群；依達曲沙；defofsmme;地美可辛；地吖醌；依氟鳥氨酸；依利醋銨；epothilone;依託格魯；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖；氯尼達明；maytansmoids例如美登素和柄型菌素；米託胍腙，米託蒽醌；莫哌達醇；二胺硝吖啶；噴司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙基醯肼；丙卡巴肼;PSK;雷佐生；根黴素；西佐喃；鍺螺胺；細格孢氮雜酸；三亞胺醌;2,2',2"-三氯三乙胺；單端孢黴烯族毒素類(尤其T-2毒素，verracurinA,杆孢菌素A和anguidine);烏拉坦；長春地辛；達卡巴口秦；甘露莫司汀;二溴甘露醇；二溴衛矛醇；哌泊溴烷；gacytosme;阿拉伯糖苷("Ara-C");環磷醯胺；塞替派；紫杉烷,例如，紫杉醇(TAXOL,Bristol-MyersSqmbbOncology,Princeton,NJ)和紫杉闢(TAXOTERE⑧，Rh6ne-PoulencRorer,Antony,France);苯丁酸氮芥；吉西他濱(Gemzar);6-硫烏嘌呤;巰噤呤；曱氨蝶呤；鉑類似物例如順鉑和卡鉑；長春鹼；柏；依託泊苷(VP-16);異環石粦醯胺；米託蒽醌；長春新石鹹；長春瑞濱(Navelbine);諾消靈；替尼泊苷；依達曲沙；柔紅黴素；氨基蝶呤；希羅達；伊班膦酸鹽；CPT-11;拓樸異構酶抑制劑RFS2000;二氟甲基鳥氨酸(DMFO);類視黃醇例如視黃酸；卡培他濱;和上述任一種的藥學可接受的鹽、酸或衍生物。該定義也包括用來調節或抑制激素對腫瘤的作用的抗激素劑，如抗雌激素，和選擇性雌激素受體調控劑(SERMs)，包括例如他莫昔芬(包括Nolvadex),雷洛昔芬，屈洛昔芬，4-羥基他莫昔芬，曲沃昔芬,keoxifene,LY117018,奧那司酮，和託瑞米芬(Fareston);抑制芳香酶的芳香酶抑制劑，其調節腎上腺中的雌激素生產，例如，4(5)-咪唑，氨魯米特，曱地孕酮醋酸鹽(MegaceTM),依西美坦，福美坦，法倔唑，伏氯唑(Rivisor),來曲唑(FemaraTM),和阿那曲唑(ArimidexTM);和抗-雄激素例如氟他胺，尼魯米特，比卡魯胺，亮丙瑞林,和戈舍瑞林;和上述任一種的藥學可接受的鹽、酸或衍生物。本文使用的術語"前藥"指藥學活性物質的前體或衍生形式，與親本藥物相比，它對腫瘤細胞的細胞毒性較低，並且能被酶促激活或者轉化為更有活性的形式。參見，例如，Wilman,1986,"ProdrugsinCancerChemtherapy",見i^/0c/7e脂'c"/Socz,Thms'ac"(ms"，14,pp.375-382,615thMeetingBelfast禾口Stella等，1985,"Prodrugs:AChemicalApproachtoTargetedDrugDelivery,見〃Dz>e"ewgDe/zver_y,Borchardt等，(編)，pp.247-267,HumanaPress。有用的前藥包括、但不限於，含磷酸鹽的前藥、含^L代磷酸鹽的前藥、含v5克酸鹽的前藥、含肽的前藥、D-胺基酸修飾的前藥、糖基化前藥、含p-內醯胺的前藥、任選地取代的含苯氧基乙醯胺的前藥、和任選地取代的含苯基乙醯胺的前藥、5-氟胞嘧啶和其它5-氟尿苷前藥，它們能轉化為更有活性的無細胞毒性的藥物。能衍生為前藥的細胞毒性藥物的實例包括但不限於上述化療劑。術語"標記"指直接或間接綴合到抗體上的可檢測的化合物或組合物。標記可以自身是可一全測的(例如，》文射性同位素標記或螢光標記)，變。可以製備標記的人源化的抗-CD40抗體，並用於多種用途，包括體外和體內診斷。"脂質體"是由多種類型的脂類、磷脂和/或表面活性劑組成的小嚢泡。脂質體可用於向哺乳動物輸送化合物或製劑,例如此處公開的人源化的抗-CD40抗體，其任選地與一種或多種藥學活性試劑相偶聯或組合。脂質體的成分通常以雙層結構排列，類似於生物膜的脂類排列。"分離的"核酸分子是從至少一種在抗體核酸的天然來源中通常伴隨的汙染核酸分子中鑑別和分離出的核酸分子。分離的核酸分子不同於在自然界發現的形式或環境。分離的核酸分子因此與在天然細胞中存在的核酸分子相區分。但是，分離的核酸分子包括細胞中包含的通常表達抗體的核酸分子，例如，其中核酸分子是在不同於天然細胞中的染色體位置。術語"控制序列"指在特定宿主生物體中表達可操作地連接的編碼序列所需的多核苷酸序列。適用於原核細胞中的控制序列包括，例如，啟動子，操縱基因,和核糖體結合位點序列。真核控制序列包括、但不限於，啟動子，多腺普酸化信號,和增強子。這些控制序列可以用於在原核和真核宿主細胞中表達和生產人源化的抗-CD40抗體。當處於與另一個核酸序列的功能關係中時，核酸序列是"可操作地連接的"。例如，如果核酸前序列或分泌先導物表達為參與多肽分泌的前蛋白，則它是可操作地連接到編碼多肽的核酸上；如果啟動子或增強子會影響序列的轉錄，則它是可操作地連接到編碼序列上；或者如果核糖體結合位點的位置有利於翻譯，則它是可操作地連接到編碼序列上。一般而言，"可才喿作地連接地"指，連4妻的DNA序列是鄰接的，在分泌先導物的情況下，是鄰接的且在讀碼框中。但是，增強子任選地是鄰接的。通過在方便的限制位點處的連接，可以實現連接。如果不存在這樣的位點，可以使用合成的寡核苷酸接頭或連接物。如本文所述，表述"細胞"、"細胞系，，和"細胞培養物"可互換地使用，且所有這樣的命名包括其後代。因而，"轉化體"和"轉化的細胞，，包括最初的主題細胞和從其衍生的培養物，無論傳代的次數。也應當理解，由於故意的或天然存在的突變，所有後代的DNA含量可能不精確地相同。包括在原始轉化的細胞中篩選出的具有相同功能或生物活性的突變後代。當使用不同的命名時，從上下文中可以知曉。用於治療目的的術語"哺乳動物"指指被歸類為哺乳動物的任何動物，包括人、家畜和農畜、動物園動物、運動動物或寵物，如狗、馬、貓、牛等。優選地，哺乳動物是人。本文使用的"病症"是能從本文所述人源化的抗-CD40抗體的治療獲益的任意狀況。這包括慢性和急性病症或疾病，包括使哺乳動物易感所討論的病症的那些病理學狀況。本文要治療的非限制性實例或病症包括癌症，血液惡性肺瘤，良性和惡性肺瘤，白血病和淋巴惡性腫瘤，和炎性的、生產血管的和免疫學的病症。術語"癌症"和"癌性的"是指或描述，特徵通常在於失調的細胞生長的哺乳動物生理狀況。癌症的實例包括、但不限於，癌，淋巴瘤，母細月包瘤，肉瘤，和白血病。如本文所述，術語"CD40相關病症"或"CD40相關疾病"指，其中指示表達CD40的細胞的改變或消除的狀況。它們包括，表現出異常增殖的表達CD40的細胞，或與癌性或惡性生長相關的表達CD40的細胞。表現出CD40抗原的異常表達的癌症的更具體的實例包括，B類淋巴母細胞，伯基特淋巴瘤，多發性骨髓瘤，T細胞淋巴瘤，卡波西肉瘤，骨肉瘤，表皮和內皮肺瘤，胰腺、肺、乳腺、卵巢、結腸、前列腺、頭和頸、皮膚(黑素瘤)、膀胱和腎癌。這樣的病症包括、但不限於，白血病，淋巴瘤，包括B細胞淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤，多發性骨髓瘤，瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症；實體瘤，包括肉瘤,例如骨肉瘤，尤因肉瘤，惡性黑素瘤，腺癌，包括卵巢腺癌，卡波西肉瘤/卡波西腫瘤和鱗狀細胞癌。CD40相關病症也包括免疫系統的疾病和病症，例如自身免疫障礙和炎症。這樣的病症包括、但不限於，類風溼性關節炎(RA),系統性紅斑狼瘡(SLE),硬皮病，舍格倫症候群，多發性硬化，炎性腸病(例如，潰瘍性結腸炎和克羅恩病)，肺炎，哮喘，和特發性血小板減少性紫癲(ITP)。短語"阻止......的生長，，或"生長抑制性的"在本文中用於指抑制細胞(尤其表達CD40抗原的腫瘤細胞類型)的生長或增殖。因而，生長抑制，例如，會顯著減少S期的腫瘤細胞的百分比。術語"靜脈內輸注"指經大於約15分鐘的時間段、通常約30-90分鐘，將試劑導入動物或人患者的靜脈。術語"靜脈內推注"或"靜脈內推進"指向動物或人的靜脈中施用藥物，以便身體在約15分鐘或更少的時間內、通常5分鐘或更少的時間內4妻受藥物。術語"皮下給藥"指，通過從藥物容器的相對緩慢的、持續的輸送，將試劑導入動物或人患者的皮膚下，優選地在皮膚和基底組織之間的袋內。擠捏或拉扯在基底組織上面且遠離基底組織的皮膚，可以建立袋。術語"皮下輸注"指，通過從藥物容器的相對緩慢的、持續的輸送，經包括但不限於30分鐘或更少或90分鐘或更少的時間段，將藥物導入動物或人患者的皮膚下，優選地在皮膚和基底組織之間的袋內。任選地，通過植在動物或人患者皮膚下的藥物輸送泵的皮下植入，可以進行輸注，其中所述泵會輸送預定量的藥物預定的時間段，例如30分鐘，90分鐘或跨治療方案長度的時間段。術語"皮下推注，，指在動物或人患者的皮膚下面施用藥物，其中推注藥物輸送小於約15分鐘；在另一個方面，小於5分鐘,在另一個方面，小於60秒。在另一個方面，在皮膚和基底組織之間的袋內給藥，其中通過擠捏或拉扯在基底組織上面且遠離基底組織的皮膚，可以建立袋。術語"治療有效量"用於指具有有益的患者結果(例如，生長停止效應或造成細胞的缺失)的活性試劑的量。在一個方面，治療有效量具有細胞凋亡活性，或能誘導細胞死亡。在另一個方面，治療有效量指已經證實會例如有效地減慢疾病發展的靶血清濃度。根據待治療的病症，可以以常^見方式測量效能。例如，在特徵在於表達CD40的細胞的腫瘤性疾病或病症中，通過評估達到疾病發展的時間(TTP)或確定響應速率(RR),可以測量效能。本文使用的術語"治療"和"療法"等意在包括，導致任何臨床上希望括但不限於一種或多種症狀的緩解或解除，疾病或病症發展的消退、減t曼或4亭止。因而，例如，術語治療包括，在疾病或病症的症狀發生之前或之後施用試劑，從而預防或去除疾病或病症的一種或多種跡象。作為另一個實例，該術語包括，在疾病的臨床顯現之後施用試劑，以戰勝疾病的症狀。此夕卜，在發生臨床症狀後和臨床症狀已經發展之後施用試劑，也包含本文使用的"治療"或"療法"，其中施用會影響疾病或病症的臨床參數，例如組織損傷的程度，或轉移的量或範圍，無論治療是否會導致疾病的改善。術語"包裝插頁"用來指治療產物的商品包裝中通常包含的說明書，其含有關於適應症、用法、施用、禁忌症的信息和/或關於使用這些治療產物的警告。縮寫"AFP"指二甲基纈氨酸-纈氨酸-dolaisoleume-dolaprome-苯丙氨酸-對苯二胺。縮寫"MMAE"指單曱基auristatmE.縮寫"AEB"指通過使auristatmE與對乙醯基苯甲酸反應生成的酯。縮寫"AEVB"指通過使auristatmE與苯曱醯基戊酸反應生成的酯。縮寫"MMAF，指dovaline隱纈氨酸-dolaisoleunine-dolaproine-苯丙氨酸。我#本文描述和公開了人源化的抗-CD40抗體，和包含人源化的抗-CD40抗體的組合物和製品。也描述了結合劑，其包含人源化的抗-CD40抗體的抗原結合片段。人源化的抗-CD40抗體和結合劑可以阻止細胞的生長，造成表達CD40的細胞的缺失，或對靶細胞誘導或造成細胞毒性的或細胞抑制的效應。人源化的抗-CD40抗體和結合劑可以用於治療特徵在於表達CD40表面抗原的細胞的增殖的多種疾病或病症。人源化的抗-CD40抗體和CD40結合劑各自至少包含特異性識別CD40表位的一部分(即，抗原結合片段)。在有些實施方案中，人源化的抗-CD40抗體或CD40結合劑包含與抗體S2C6竟爭結合的抗原結合片段。在有些實施方案中，抗原結合片段可以，例如，阻斷增殖或阻止細胞的生長，或造成它的耗盡、死亡或它的缺失,例如，通過結合CD40表面抗原。例如，在T和B細胞惡性肺瘤中，當惡性細胞暴露於導致正常淋巴細胞的激活的刺激時，經常產生抗-腫瘤作用(例如，生長停止，有或沒有細胞缺失或細胞凋亡)。通過抗原受體或輔助刺激受體的信號，已經觀察了該活化-誘導的生長停止(參見，例如，Ashwell等，1987，Scw"ce237:61;Bridges等，1987,丄/附mw"o/.139:4242;Page和Defranco，1988,丄/附附謝o/.140:3717;和Beckw池等，1990,開內容在本文中引作參考)。在有些實施方案中，人源化的抗-CD40抗體(包括其抗原結合片段，例如重鏈和輕鏈可變域)包含源自S2C6鼠抗體的CDR或HVL的殘基的胺基酸序列(參見，例如，美國專利號6,838，261)和源自人免疫球蛋白構架區的胺基酸殘基。在一個方面，人構架區胺基酸源自如美國專利號6,037,454所述的重鏈亞型III可變域和K輕鏈可變域的人共有序列。人源化的抗-CD40抗體任選地包含在共有構架區內的特異性的胺基酸取代。在這些框架位置中的特異性的胺基酸取代，可以提高不同方面的抗體性能，包括結合親和力和/或穩定性，這優於通過將CDR或HVL"直接交換"進人共有構架區內形成的人源化抗體所證實的，如下面的實施例所述。在有些實施方案中，本文公開的人源化的抗-CD40抗體至少包含具有鼠單克隆抗體S2C6的CDR或HVL的重鏈或輕鏈可變域和具有表5所述特異性取代的人共有重鏈和輕鏈可變域的FR。在表3和4中，分別顯示了具有取代的可變重鏈胺基酸序列和具有取代的可變輕鏈胺基酸序列的比對。這些序列包括具有SEQIDNO:3的胺基酸序列的重鏈可變域和具有SEQIDNO:14的胺基酸序列的輕鏈可變域。在某些實施方案中，人源化的抗-CD40抗體是抗體片段。已經開發了用於生產抗體片段的不同技術。通過完整抗體的蛋白水解消化，可以書t生出片l炎(參見，例如，Morimoto等，1992,Jowt^/o/5wc/zemzc"/awIgGi〉〉IgG3。在另一個實施例中，鼠IgGh介導ADCC,而鼠IgGh和IgM介導CDC。機,人源化的抗-CD40抗體和試劑可以包括人源化的抗-CD40抗體或其抗原結合片段的修飾。例如，可能希望修飾抗體的效應功能，以便例如增強抗體在治療癌症中的有效性。一種這樣的修飾是，將半胱氨酸殘基導入Fc區域，從而在該區域形成鏈間二石危鍵。這樣產生的同型二聚體抗體可以具有提高的內化能力和/或增強的補體-介導的細胞殺傷和/或抗體-依賴性的細胞毒性(ADCC)。參見，例如，Caron等，1992,J.￡孕A/ec/.176:1191-1195;和Shopes,1992,././ww麗o/.148:2918-2922。使用Wolff等，1993,Omcw^^an:/253:2560-2565所述的異雙功能交聯劑，也可以製備具有增強的抗-肺瘤活性的同型二聚體抗體。或者，可以構建含有雙Fc區域的抗體，增強補體裂解和抗體的ADCC能力。參見Stevenson等,1989,爿"fz-C騰erDrwgZ)ewgw3:219-230。通過修飾它們的Fc區域的糖基化模式，已經製備了具有提高的支持ADCC的能力的抗體。這是可行的，因為CH2結構域中天冬醯胺殘基N297處的抗體糖基化會參與ADCC所必需的IgG和Fc受體之間的相互作用。已經構建了宿主細胞系來表達具有改變的糖基化的抗體，例如增加的二等分N-乙醯基葡糖胺或還原的巖藻糖。巖藻糖還原會提供比增加存在的二等分N-乙醯基葡糖胺更大的對ADCC活性的增強。此外，低巖藻糖抗體對ADCC的增強，獨立於FcRIIIaV/F多態性。修飾抗體Fc區域的胺基酸序列，是增強ADCC的糖基化工程的替代方案。通過廣泛的突變分析，已經測定了人IgG!上的Fc受體的結合位點。這導致具有Fc突變的人源化的IgGi抗體的產生，所述Fc突變會增加對FcRIIIa的結合親和力，並體外增強ADCC。另外，用結合性質的許多不同排列，例如，提高的對特定FcR受體的結合、且對其它FcR受體的結合保持不變或減少，已經得到了Fc變體。在有些實施方案中，可以如其公開內容在這裡引作參考的美國專利申請公開號2006-0003412和2006-0008883所述，修飾Fc區域。另一個方面包括免疫綴合物，其包含人源化的抗體或其片段，後者綴合到細胞毒性劑(例如化療劑)、毒素(例如，細菌、真菌、植物或動物起源的酶活性毒素，或其片段)或放射性同位素(即，放射性綴合物)上。上面已經描述了用於製備這樣的免疫綴合物的化療劑。可以用於形成有用的免疫綴合物的酶活性毒素和其片段包括白喉A鏈、白喉毒素的非結合活性片段、外毒素A鏈(來自銅綠假單胞菌)、蓖麻毒素A鏈、相思豆毒素A鏈、蒴蓮根毒素A鏈、a-八疊球菌、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陸(屍/2yto/acaawenca肪)蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜抑制劑、麻瘋樹毒素、巴豆毒素、Sa/Mow^7'ac^9cw"/w抑制劑、白初於毒素、米託潔林、局限曲菌素、酚黴素、依諾黴素和單端孢黴烯(tncothecene)等。許多种放射性核素可用於生產放射性綴合的人源化的抗-CD40抗體。實例包括21^,I31I,131l0186Re。人源化的抗-CD40抗體和細胞毒性劑或化療劑的綴合物，可以通過已知方法，使用下述試劑製備雙功能蛋白偶聯劑例如N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫醇)-丙酸酯(SPDP)、immothiolane(IT)、亞氨酯的雙功能衍生物(如二甲基己二醯二胺HCL)、活性酯(如辛二酸二琥珀醯亞胺酯)、醛類(如戊二醛)、雙疊氮化合物(如雙(對疊氮苯曱醯)己二胺)、雙重氮衍生物(如雙(重氮對苯曱醯)-乙二胺)、二異氰酸酯(如甲苯-2，6-二異氰酸酉旨)和雙活性氟化合物(如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。例如，蓖麻毒素免疫毒素能如Vitetta等，1987,5We"ce238:1098所述製備。碳-14-標記的l-異硫氰酸根合苄基-3-曱基二乙烯三胺五乙酸(MX-DTPA)是用於將放射性核苦酸綴合到抗體上的一種示例性螫合劑。參見，例如，國際公開WO94/11026。也可以用可切割的連接物形成綴合物，例如在7>開的歐洲專利申請0624377中公開的那些；其公開內容在本文中引作參考。在另一個實施方案中，抗體可以綴合到用於腫瘤預導向的"受體"(如抗生物素蛋白鏈菌素)上。在該方法中，對患者施用抗體-受體綴合物，隨後利用清除劑從循環中除去未結合的綴合物，然後施用選擇性地結合受體(例如，抗生物素蛋白)的"配體"，所述配體綴合在細胞毒性劑(如放射性核素)上。本文公開的人源化的抗-CD40抗體也可以配製成免疫脂質體。含有抗體的脂質體可以通過本領域已知的方法製備，例如在Epstein等，1985,iVoc.AAa/7.Jcat/.t/&482:3688;Hwang等，1980,屍roc.A^/.」cadV&477:4030;和美國專利號4,485,045和4，544,545中描述的方法。具有增強的循環時間的脂質體，〃>開在例如美國專利號5,013,556中。特別有用的脂質體可以用反相蒸發法產生，其中使用含有磷脂醯膽鹼、膽固醇和PEG-衍生的磷脂醯乙醇胺(PEG-PE)的脂類組合物。脂質體通過規定孔徑的濾器噴出，產生具有希望的直徑的脂質體。本文公開的抗體的Fab，片l殳可以通過二石危化物交換反應，與如Martin等，1982,丄Ao/.C/zew.257:286-288所述的脂質體綴合。脂質體中任選地含有化療劑(例如多柔比星)。參見，例如，Gabizon等，1989,丄Atow腦/C朋cw81(19):1484。本文描述和7〉開的抗體也可以用於ADEPT(抗體-導向的酶前藥治療)方法中，其中將抗體綴合到前藥-激活酶上，後者可以將前藥(例如，肽基化療劑)轉化成有活性的抗癌藥物。參見，例如，WO81/01145,WO88/07378,和美國專利號4,975,278。用於ADEPT的免疫綴合物的酶組分，是能以將它轉化成更有活性的、細胞毒性形式的方式作用於前藥的酶。用於ADEPT的具體酶包括、但不限於，可用於將含磷酸鹽的前藥轉化為游離藥物的鹼性磷酸酶；可用於將含硫酸鹽的前藥轉化為游離藥物的芳基硫酸酯酶；可用於將無毒5-氟胞嘧啶轉化為抗癌藥5-氟尿嘧啶的胞嘧啶脫氨基酶；可用於將含肽前藥轉化為游離藥物的蛋白酶，如沙雷氏菌蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、羧肽酶和組織蛋白酶(如組織蛋白酶B和L);可用於轉化含D-胺基酸取代基的前藥的D-丙氨醯羧肽酶；可用於將糖基化前藥轉化為游離藥物的碳水化合物裂解酶，如oc-半乳糖苦酶和神經氨酸酶；可用於將a-內醯胺書f生的藥物轉化為游離藥物的cc-內醯胺酶；和可用於將在它們的胺氮處分別用苯氧乙醯基或苯乙醯基衍化的藥物轉化為游離藥物的青黴素醯胺酶，如青黴素V醯胺酶或青黴素G醯胺酶。或者，具有酶活性的抗體("抗體酶")可以用於將前藥轉化為游離活性藥物(參見，例如，Massey,1987，Atowe328:457-458)。抗體-抗體酶綴合物可以通過已知方法製備，用於對肺瘤細胞群輸送抗體酶，例如，通過使酶共〗介結合上面討論的人源4^的抗-CD40抗體/異雙功能交聯劑。或者，也可以使用重組DNA技術構建融合蛋白，其至少包含本文公開的抗體的抗原結合區，後者至少與上述酶的功能活性部分相連接(參見，例如，Neuberger等，1984,Atowe312:604-608)。在某些實施方案中，可能希望使用人源化的抗-CD40抗體片段(而不是完整抗體)來例如增強腫瘤穿透。可能希望修飾抗體片段，以便增加它的血清半衰期。這可以通過例如將補救受體結合表位摻入抗體片段中來實現。在一種方法中，可以改變(例如，突變)抗體片段的適當區域，或者可以將表位摻入肽標記中，然後將後者與抗體片段在任一端或在中間融合，例如，通過DNA或肽合成。參見，例如，WO96/32478。在其它實施方案中，也包括人源化的抗-CD40抗體的共價修飾。在適當時，它們可以通過化學合成或通過抗體的酶或化學切割來製備。通過使抗體的耙向胺基酸殘基與有機衍生劑反應(其能與選擇的側鏈或氨基-或羧基-端殘基反應)，可以將其它類型的抗體共價修飾導入分子中。共價修飾包括下述基團的修飾半胱氨醯殘基，組氨醯殘基，賴氨醯和氨基端殘基，精氨醯殘基，酪氨醯殘基，羧基側基(天冬氨醯基或穀氨醯基)，穀氨醯基和天冬醯胺醯殘基,或絲氨醯基或蘇氨醯基殘基。另一類共價修飾包含糖苷與抗體的化學或酶促偶聯。可以化學地或酶促地實現抗體上存在的任意石友水化合物部分的去除。化學去糖基化描述在Hakimuddin等，1987,Jrc/z.^o;/z，.259:52和Edge等，1981，^憩/.Bzoc/^肌，118:131。通過使用Thotakura等1987,A:fe仇五"zymo/.138:350所述的許多種內-和夕卜糖苷酶，可以實現抗體上碳水化合物部分的酶促切割。另一類有用的共價修飾包含，以美國專利號4,640,835、美國專利號4，496，689、美國專利號4，301，144、美國專利號4，670,417、美國專利號4,791,192和美國專利號4,179,337中的一個或多個所述的方式，將抗體連接到許多種非蛋白聚合物之一上，例如，聚乙二醇，聚丙二醇或聚氧烯烴。人源化和胺基酸序列變體下面的實施例1描述了人源化抗-CD40抗體的方法，實施例2描述了變體。在某些實施方案中，可能希望產生這些人源化的抗體的胺基酸學性質。b;、、、；、^通過將適當核苷酸變化導入抗-CD40抗體DNA,或通過肽合成,可以製備抗-CD40抗體的胺基酸序列變體。這樣的變體包括，例如，本文實施例的抗-CD40抗體的胺基酸序列內殘基的缺失和/或插入和/或取代。進行缺失、插入和取代的任意組合，以獲得最終構建體，只要最終構建體具有希望的特性。胺基酸改變也可改變人源化的或變體抗-CD40抗體的翻譯後加工，例如改變糖基化位點的數量或位置。或區域，它稱作"丙氨酸掃描誘變法"，如Cunningham和Wells(S"e"ce，244:1081-1085(1989))所述。在此確定了一個殘基或一組耙殘基(例如，帶電殘基，如arg、asp、his、lys和glu),並替換為中性或帶負電的胺基酸(通常丙氨酸)，以影響胺基酸與CD40抗原的相互作用。然後通過在取代位點引入其它變異，確定證實對取代功能敏感的胺基酸位置。因此，預先確定用於引入胺基酸序列變異的位點，而不需預先確定突變本身的性質。例如，為了分析特定位點突變的表現，在耙密碼子或區域處進行丙氨酸掃描或隨機誘變，並篩選表達的抗-CD40抗體變體的希望的活性。胺基酸序列插入包括氨基端和/或羧基端融合，其長度從一個殘基到含有一百個或以上殘基的多肽，以及一個或多個胺基酸殘基的序列內插入。末端插入的實例包括，與表位標記融合的抗-CD40抗體。抗-CD40抗體分子的其它插入變體包括與酶的抗-CD40抗體的N端或C端的融合體，或延長抗體的血清半衰期的多肽。另一類變體是胺基酸取代變體。這些變體在抗-CD40抗體分子中的至少一個胺基酸殘基被去除，並在該位置插入不同的殘基。最感興趣的用於取代誘變的位點包括超變區，但是也包括FR改變。表l在"優選取代"標題下列出了保守取代。如果這些取代導致生物活性改變，可引入更多實質改變，在表1中被命名為"示例性取代"，或者如以下關於胺基酸類別所進一步描述，並且篩選產物。表1tableseeoriginaldocumentpage33Lys(K)arg;gin;asnargMet(M)leu;phe;ileleuPhe(F)leu;val;ile;ala;tyrtyrPro(P)alaalaSer(S)thrthrThr(T)ssrserTrp(W)tyr;phetyrTyr(Y)trp;phe;thr;serpheVal(V)ile;leu;met;phe;leuala;正亮氨酸抗體生物學性質的本質改變通過選擇取代實現，這些取代的下述作用顯著不同保持(a)取代區域中多肽主鏈的結構，如片層或螺旋構象，(b)耙部位處分子的電荷或疏水性，或(c)側鏈的大小。自然存在的殘基根據共同的側鏈性質分為以下幾類(1)疏水正亮氨酸，met,ala,val,leu,ile;(2)中性親水cys,set,thr;(3)酸性asp,glu;(4)減性asn，gin,his，lys，arg;(5)影響《連方向的殘基gly,pro;和(6)芳族trp，tyr,phe。非保守性取代需要將這些類別之一的成員換為另一類別。不參與保持人源化的或變體抗-CD40抗體的適當構象的任何半胱氨酸殘基一般也可以取代為絲氨酸，以提高分子的氧化穩定性，並防止異常交聯，或提供與細胞毒性的或細胞抑制的化合物綴合的建立點。反之，也可以向抗體中加入半胱氨酸鍵，以提高其穩定性(特別是在抗體是抗體片段如Fv片段時)。一類取代變體包含，取代親本抗體(例如，人源化的或人抗體)的一個或多個超變區殘基。通常，產生的為進一步發展選擇的變體具有比產生它們的親本抗體提高的生物學性質。生產這些取代變體的一種適宜方法是利用噬菌體展示的親和成熟法。簡言之，突變幾個超變區位點(例如6-7個位點)，以產生每個位點的所有可能的氨基取代。這樣產生的抗體變體由絲狀噬菌體顆粒以單價方式展示，作為與包裝於每個顆粒中的Mi3的基因ni產物的融合體。然後篩選噬菌體展示的變體的生物活性(例如結合親和力)。為了確定用於修飾的候選超變區位點，可以進行丙氨酸掃描誘變，以鑑別明顯有助於抗原結合的超變區殘基。或者或另外，為了鑑別抗體與人CD40之間的接觸點，分析抗原-抗體複合物的晶體結構也是有利的。這些接觸殘基和鄰近殘基是按照此處詳述的技術取代的候選殘基。產生這些變體後，對全部變體進行此處所述的篩選，可以選擇在一次或多次相關試驗中具有優越性質的抗體，用於進一步發展。抗體的另一類胺基酸變體會改變抗體的原始糖基化模式。"改變"是指，刪除抗體中的一個或多個碳水化合物部分，和/或添加一個或多個抗體中沒有的糖基化位點。抗體的糖基化一般是N-連接的或O-連接的。N-連接的是指，碳水化合物部分與天冬醯胺殘基的側鏈連接。三肽序列天冬醯胺-X-絲氨酸和天冬醯胺-X-蘇氨酸(其中X是除脯氨酸之外的任一胺基酸)是碳水化合物部分與天冬醯胺側鏈的酶促連接的識別序列。因此，這些三肽序列中的任一種在多肽中的存在，都會產生可能的糖基化位點。O-連接的糖基化是指N-乙醯半乳糖胺、半乳糖或木糖之一與羥胺基酸(最常見的是絲氨酸或蘇氨酸，儘管也可以使用5-羥脯氨酸或5-羥賴氨酸)的連接。通過改變胺基酸序列，使其含有一種或多種上述三肽序列(用於N-連接的糖基化位點)，可以方便地向抗體中添加糖基化位點。也可以通過向原始抗體序列中添加或取代一個或多個絲氨酸或蘇氨酸殘基，進行這種改變(對於O-連接的糖基化位點)。通過本領域周知的多種方法，可以製備編碼抗-CD40抗體的胺基酸序列變體的核酸分子。這些方法包括但不限於從天然來源分離(對於天然存在的胺基酸序列變體)，或通過以前製備的變體或非變體形式的抗-CD40抗體的寡核苷酸介導的(或定點的)誘變、PCR誘變和盒誘變來製備。人抗體作為人源化的替代方案，可以製備人抗體。例如，可以使用轉基因動物(辨如，小鼠)，其在免疫接種後，能在沒有生成內源免疫球蛋白的情況下，生產人抗體的所有組分。例如，已經描述，嵌合的和種系突變的小鼠中抗體重鏈連接區域(Jh)基因的純合子缺失，會導致內源抗體生產的完全抑制。這樣的種系突變的小鼠中人種系免疫球蛋白基因陣列的轉移，會導致抗原挑戰後人抗體的生產。作為人源化的替代方案，可以製備人抗體。例如，可以使用轉基因動物(辨如，小鼠)，其在免疫接種後，能在沒有生成內源免疫球蛋白的情況下，生產人抗體的所有組分。例如，已經描述，嵌合的和種系突變的小鼠中抗體重鏈連接區域(JH)基因的純合子缺失，會導致內源抗體生產的完全抑制。這樣的種系突變的小鼠中人種系免疫球蛋白基因陣列的轉移，會導致抗原挑戰後人抗體的生產。參見，例如，Jakobovits等，1993,屍roc.Ato/.爿c^/.90:2551;Jakobovits等，1993,A^we362:255-258;Bmggermann等，1993,yearz力/w附朋o.7:33;和美國專利號5,591,669;5,589,369;5,545,807;6,075,181;6,150，584;6,657,103;和6,713,610。或者，噬菌體展示技術(參見，例如，McCafferty等，1990,Atowe348:552-553)可以用於從來自未免疫的供體的免疫球蛋白可變(V)結構域基因庫，體外生產人抗體和抗體片段。根據該技術，將抗體V結構域基因在框架內克隆進絲狀噬菌體例如M13或fd的主要或次要殼蛋白基因中，並作為功能抗體片段顯示在噬菌體顆粒的表面上。因為絲狀顆粒含有噬菌體基因組的單鏈DNA拷貝，基於抗體的功能性質的選擇，也會導致編碼表現出這些性質的抗體的基因的選擇。因而，噬菌體會模仿B-細胞的有些性質。噬菌體展示可以以多種形式進行；它們的綜述參見，例J(口，Johnson牙口Chiswell,1993,Cwrre77/0/z'm'cwz力5Vri/"wra/3:564-571。V-基因區段的幾種來源可以用於噬菌體展示。Clackson等，1991，淑髒352:624-628從源自免疫小鼠的脾的V基因的小隨機組合文庫中，分離了抗-"惡唑酮抗體的不同陣列。可以構建來自未免疫的人供體的V基因的所有組分，且可以基本上3安照Marks等，1991,,/.A/o/.S,o/.222:581-597或Griffith等，1993,￡A^BO,/.12:725-734所述的技術，分離抗原(包括自身抗原)的不同陣列的抗體。也參見美國專利號5,565,332和5,573,905。如上面所討論的，也可以用體外激活的B細胞產生人抗體(參見美國專利號5,567,610和5,229,275)。多核苷酸，載體，宿主細月包,和重組方法多核苷酸，載體,和包含該多核苷酸的宿主細胞,和用於生產人源化的抗體的重組技術。分離的多核苷酸可以編碼任意希望形式的抗-CD40抗體，包括，例如，全長單克隆抗體，Fab,Fab',F(ab')2,和Fv片段，雙特異抗體，線性抗體，單鏈抗體分子,和從抗體片段形成的多特異性抗體。有些實施方案包括分離的多核苷酸，後者包含編碼具有SEQIDN0:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10或SEQIDNO:ll的重鏈可變區胺基酸序列的抗體或抗體片段的序列。有些實施方案包括分離的多核苷酸，後者包含編碼具有SEQIDNO:14、SEQIDNO:15或SEQIDNO:16的輕鏈可變域胺基酸序列的抗體或抗體片段的序列。在一個方面，所述分離的多核苷酸序列編碼具有重鏈可變域和輕鏈可變域的抗體或抗體片段，所述重鏈可變域和輕鏈可變域分別包含下述胺基酸序列SEQIDNO:3和SEQIDNO:14;SEQIDNO:4和SEQIDNO:14;SEQIDNO:5和SEQIDNO:14;SEQIDNO:6和SEQIDNO:14;SEQIDNO:7和SEQIDNO:14;SEQIDNO:8和SEQIDNO:14;SEQIDNO:9和SEQIDNO:14;SEQIDNO:6和SEQIDNO:15;SEQIDNO:6和SEQIDNO:16;SEQIDNO:7和SEQIDNO:16;SEQIDNO:10和SEQIDNO:14;SEQIDNO:ll和SEQIDNO:14;SEQIDNO:10和SEQIDNO:16;或SEQIDNO:ll和SEQIDNO:16。在另一個方面，所述分離的多核苷酸序列編碼具有重鏈可變域和輕鏈可變域的抗體或抗體片段，所述重鏈可變域和輕鏈可變域分別包含下述胺基酸序列SEQIDNO:7和SEQIDNO:14;SEQIDNO:6和SEQIDNO:16;SEQIDNO:7和SEQIDNO:16;SEQIDNO:10和SEQIDNO:14;SEQIDNO:l1和SEQIDNO:14;SEQIDNO:10和SEQIDNO:16;和SEQIDNO:11和SEQIDNO:16。在另一個方面，所述分離的多核苷酸序列編碼具有重鏈可變域和輕鏈可變域的抗體或抗體片段，所述重鏈可變域和輕鏈可變域分別包含下述胺基酸序列SEQIDNO:7和SEQIDNO:14;SEQIDNO:6和SEQIDNO:16;SEQIDNO:10和SEQIDNO:16;和SEQIDNO:11和SEQIDNO:16。在另一個方面，所述分離的多核苷酸序列編碼具有重鏈可變域和輕鏈可變域的抗體或抗體片段，所述重鏈可變域包含SEQIDNO:IO的胺基酸序列，所述輕鏈可變域包含SEQIDNO:16的胺基酸序列。包含人源化的抗-CD40抗體或其一個片段或鏈的編碼序列的多核苷酸可以融合到一個或多個本領域已知的調節或控制序列上，且可以包含在本領域已知的適當表達載體或宿主細胞中。編碼重《連或輕鏈可變域的每一個多核苷酸分子可以獨立地融合到編碼恆定域(例如人恆定域)的多核苷酸序列上，以便生產完整抗體。或者，可以將多核苷酸或其一部分融合到一起，提供生產單鏈抗體的模板。為了重組生產，將編碼抗體的多核苷酸插入用於克隆(DNA的擴增)或表達的複製載體中。可以得到許多適用於表達重組抗體的載體。載體組分通常包括、但不限於，下述的一種或多種信號序列，複製起點，一個或多個標記基因，增強子元件，啟動子，和轉錄終止序列。人源化的抗-CD40抗體也可以生產為融合多肽，其中抗體與異源多肽(例如信號序列或在成熟蛋白或多肽的氨基末端具有特異性切割位點的其它多肽)相融合。選擇的異源信號序列通常是能被宿主細胞識別和加工(即，被信號肽酶切割)的序列。對於不能識別和加工人源化的抗-CD40抗體信號序列的原核宿主細胞，信號序列可以取代為原核信號序列。信號序列可以是，例如，鹼性磷酸酶，青黴素酶，脂蛋白，熱穩定的腸毒素n先導物，等。對於酵母分泌，天然信號序列可以取代為,例如，從酵母轉化酶a-因子(包括酵母和克魯維氏酵母-因子先導物)、酸性磷酸酶、白色卩叚絲酵母葡萄糖澱粉酶得到的先導序列，或WO90/13646所述的信號。在哺乳動物細胞中，可以4吏用哺乳動物信號序列以及病毒分泌先導物，例如，單純皰疹gD信號。將這樣的前體區域的DNA在讀碼框內連接到編碼人源化的抗-CD40抗體的DNA上。表達和克隆載體含有能使該載體在一種或多種選定的宿主細胞中複製的核酸序列。通常，在克隆載體中，該序列是能使載體獨立於宿主染色體DNA複製的序列，且包括複製起點或自主複製序列。對於許多種細菌、酵母和病毒，這樣的序列是眾所周知的。來自質粒pBR322的複製起點適用於大多數革蘭氏陰性細菌，2質粒起點適用於酵母，多種病毒起點(SV40,多瘤，腺病毒，VSV,和BPV)適用於哺乳動物細胞中的克隆載體。通常，哺乳動物表達載體不需要複製起點組分(通常只可以使用SV40起點，因為它含有早期啟動子)。表達和選擇載體可以含有選擇基因，也稱作選擇標記。典型的選擇基因編碼的蛋白會(a)賦予對抗生素或其它毒素(例如，氨千西林，新黴素，甲氨蝶呤或四環素)的抗性，(b)彌補營養缺陷型缺陷，或(c)供應從複合培養基不能得到的關鍵營養素，例如，編碼芽孢桿菌的D-丙氨酸消旋酶的基因。選擇方案的一個實例採用藥物來阻止宿主細胞的生長。用異源基因成功轉化的那些細胞，會生產賦予藥物抗性的蛋白，從而在選擇方案中存活。這樣的顯性選擇的實例使用藥物新黴素，黴酚酸,和潮黴素。適用於哺乳動物細胞的選擇標記的另一個實例是，能鑑別攝入編碼人源化的抗-CD40抗體的核酸的感受態細胞的那些，例如DHFR(二氳葉酸還原酶)、胸苷激酶、金屬硫蛋白-I和-II(例如靈長類動物金屬硫蛋白基因)、腺普脫氨酶、鳥氨酸脫羧酶等。例如，通過在含有甲氨蝶呤(Mtx)(DHFR的一種竟爭拮抗劑)的培養基中培養全部轉化體，首先鑑別出用DHFR選擇基因轉化的細胞。當使用野生型DHFR時，適當的宿主細胞是DHFR活性缺陷的中國倉鼠卵巢(CHO)細胞系(例如，DG44)。或者，通過在含有選擇標記的選擇劑(例如氨基糖苷抗生素，例如,卡那黴素，新黴素，或G418)的培養基中培養細胞，可以選擇用編碼抗-CD40抗體、野生型DHFR蛋白的DNA序列和另一種選擇標記(例如氨基糖苷3'-磷酸轉移酶(APH))轉化或共轉化的宿主細胞(更具體地，含有內源DHFR的野生型宿主)。參見，例如，美國專利號4,965,199。適用於酵母的選擇基因是存在於酵母質粒YRp7中的7TeF/基因(Stmchcomb等，1979,M^wre282:39)。77^/基因會提供缺乏在色氨酸中生長的能力的酵母突變^M々選擇標記，例如，ATCCNo.44076或PEP4-1(Jones,1977,85:12)。損傷在酵母宿主細胞基因組中的存在，又會提供通過在沒有色氨酸的情況下的生長檢測轉化的有效環境。類似地，攜帶丄五L/2基因的已知質粒，會彌補Leu2p-缺陷型酵母抹(例如ATCC20,622和38,626)。另外，源自1.6ym環狀質粒pKDl的載體可以用於轉化^魯攀^,爭屬酵母。或者，為〖/&報導了用於大規模生產重組牛凝乳酶的表達系統(VandenBerg,1990,說o/Tec/wo/ogy8:135)。還已經公開了^^舉《,母的工業菌抹的分泌成熟重組人血清白蛋白的穩定多拷貝表達載體(Fleer等，1991,說o/Tec/z"o/ogy9:968-975)。表達和克隆載體通常含有能被宿主生物體識別、且可操作地連接到編碼抗-CD40抗體或其多肽鏈的核酸分子上的啟動子。適合用於原核宿主的啟動子包括phoA啟動子，oc-內醯胺酶和乳糖啟動子系統，鹼性磷酸酶，色氨酸(trp)啟動子系統，和雜種啟動子例如tac啟動子。其它已知的細菌啟動子也是適用的。用於細菌系統的啟動子也含有可操作地連接到編碼人源化的抗-CD40抗體的DNA上的Shine-Dalgamo(S.D.)序列。許多真核啟動子序列是已知的。實際上，所有真核基因都具有富含AT的區域，其位於轉錄起始位點上遊約25-30個鹼基處。在許多基因的轉錄起點上遊70-80個鹼基處發現的另一個序列是CNCAAT區域，其中N可以是任意核苷酸。在大多數真核基因的3'末端是AATAAA序列，其可以是向編碼序列的3'末端添加聚腺苷酸尾的信號。所有這些序列都適合插入真核表達載體。適合用於酵母宿主的啟動序列的實例包括下述酶的啟動子3-磷酸甘油酸酯激酶或其它糖酵解酶,例如烯醇酶，甘油醛-3」疇酸脫氪酶，己糖激酶，丙酮酸脫羧酶，磷酸果糖激酶，葡萄糖-6-磷酸異構酶，3-磷酸甘油酸酯變位酶，丙酮酸激酶，磷酸丙糖異構酶，磷酸葡萄糖異構酶,和葡萄糖激酶。誘導型啟動子具有生長條件控制的轉錄的其它優點。它們包括下述酶的酵母啟動子區域醇脫氫酶2,異細胞色素C,酸性磷酸酶，與氮代謝有關的衍生酶，金屬硫蛋白，甘油醛-3-磷酸脫氳酶，和負責麥芽糖和半乳糖利用的酶。適用於酵母表達的載體和啟動子進一步描述在EP73,657中。酵母增強子也可以有利地與酵母啟動子一起使用。在哺乳動物宿主細胞中從載體轉錄人源化的抗-CD40抗體，受例如從病毒(例如多瘤病毒，雞痘病毒，腺病毒(例如腺病毒2),牛乳頭狀瘤病毒，鳥類肉瘤病毒，巨細胞病毒，逆轉錄病毒，B型肝炎病毒和猿猴病毒40(SV40))的基因組得到的啟動子、異源哺乳動物啟動子(例如，肌動蛋白啟動子或免疫球蛋白啟動子)或熱休克啟動子的控制，只要這樣的啟動子與宿主細胞系統相容。SV40病毒的早期和晚期啟動子，可以作為也含有SV40病毒複製起點的SV40限制片段方便地得到。人巨細胞病毒的立即早期啟動子可以作為HmdIIIE限制片段方便地得到。使用牛乳頭狀瘤病毒作為載體，在哺乳動物宿主中表達DNA的系統，公開在美國專利號4，419,446中。該系統的改進，描述在美國專利號4,601，978中。也參見Reyes等，1982,Atowre297:598-601,其中公開了在來自單純皰滲病毒的胸苷激酶啟動子的控制下，在小鼠細胞中表達人oc-幹擾素cDNA。或者，勞斯肉瘤病毒長末端重複序列可以用作啟動子。通過在載體中插入增強子序列，經常會增強高級真核生物對編碼本文公開的人源化的抗-CD40抗體的DNA的轉錄。現在已知許多增強子序列來自哺乳動物基因(例如，珠蛋白，彈性蛋白酶，白蛋白，-胎兒球蛋白，和胰島素)。但是，通常使用來自真核細胞病毒的增強子。實例包括在複製起點的晚側上的SV40增強子(bp100-270),巨細胞病毒早期啟動子增強子，在複製起點的晚側上的多瘤增強子，和腺病毒增強子。關於活4匕真核啟動子的增強元件的描述，也參見Yamv,1982，Atowe297:17-18。增強子可以在人源化的抗-CD40抗體-編碼序列的5'或3'位置拼接進載體，但是優選地位於啟動子的5'位點。在真核宿主細胞(酵母，真菌，昆蟲，植物，動物，人類，或來自其它多細胞生物體的有核細胞)中4吏用的表達載體也可以含有轉錄終止和穩定mRNA所需的序列。這樣的序列通常來自真核或病毒DNA或cDNA的5'(和有時3')不翻譯區。這些區域含有轉錄成編碼抗-CD40抗體的mRNA的不翻譯部分中的多腺苦酸化片段的核苷酸區段。一種有用的轉錄終止組分是牛生長激素多腺苷酸化區域。參見WO94/11026和其中公開的表達載體。在有些實施方案中，人源化的抗-CD40抗體可以使用CHEF系統來表達。(參見，例如，美國專利號5,888,809;其公開內容在本文中引作參考)。適用於克隆或表達本文載體中的DNA的宿主細胞是原核生物、酵母或上述的高級真核生物細胞。適用於該目的的原核生物包括真細菌，例如革蘭氏陰性的或革蘭氏陽性的生物體,例如，腸桿菌科例如埃希氏桿菌屬,例如，大腸桿菌，腸桿菌屬，歐文菌屬，克雷伯氏菌屬，變形菌屬，沙門氏菌屬,例如，鼠傷寒沙門氏桿菌，粘質沙雷氏菌屬,例如，粘質沙雷氏桿菌,和志賀氏菌屬，以及芽胞桿菌屬例如枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌(例如，在1989年4月12日/>開的DD266,710中4皮露的地衣芽孢桿菌41P),假單胞菌屬例如銅綠假單胞菌,和鏈黴菌屬。一種優選的大腸桿菌克隆宿主是大腸桿菌294(ATCC31,446)，儘管其它菌抹例如大腸桿菌B,大腸桿菌X1776(ATCC31,537),和大腸桿菌W3110(ATCC27，325)也是適用的。這些實例是解釋性的，而不是限制性的。除了原核生物外，真核微生物(例如絲狀真菌或酵母)是適用於人源化的抗-CD40抗體-編碼載體的克隆或表達宿主。釀酒酵母或常見的麵包酵母，是低級真核宿主微生物中最常用的。但是，通常在本文中可以得到並使用許多其它的屬、種和菌抹，例如^源襲座^#;孝宿主例如，乳克魯維氏酵母，脆壁克魯維氏酵母(ATCC12,424)，保加利亞克魯維氏酵母(ATCC16，045),威克曼氏克魯維氏酵母(ATCC24，178),K.waltii(ATCC56,500),果蠅克魯維氏酵母(ATCC36,906),K.thermotolerans和馬克斯克魯維氏酵母；耶氏酵母(yarrowia)(EP402,226);巴斯德畢赤氏酵母(EP183,070);假絲酵母屬；Tnchodermareesia(EP244,234);粗糙鏈孢黴；許旺氏酵母屬例如Schwanmomycesoccidentalis;和絲狀真菌例如，鏈孢黴屬，青黴屬，ro/_y/7oc/at/mw和麴黴屬宿主例如構巢麴黴和,必#。適用於表達糖基化的人源化抗-CD40抗體的宿主細胞源自多細胞生物體。無脊推動物細胞的實例包括植物和昆蟲細胞，包括，例如，許多杆狀病毒菌抹和變體和對應的許可的來自宿主的昆蟲宿主細胞，例如草地貪夜蛾(Spodopterafmgiperda)(毛蟲)，埃及伊蚊(蚊子)，白鄉丈伊蚊(蚊子)，黑腹果蠅(果蠅),和家蠶(蠶蟲)。許多種用於轉染的病毒抹可以公開得到，例如，苜蓿丫紋夜蛾(Autographacaliformca)NPV的L-l變體和家蠶NPV的Bm-5菌株，這樣的病毒可以用於，尤其是轉染草地貪夜蛾細月包。棉花、玉米、馬鈴薯、大豆、牽牛花、西紅柿和菸草的植物細胞培養物，也可以用作宿主。在另一個方面，在脊推動物細胞中表達人源化的抗-CD40。脊推動物細胞在培養物(組織培養物)中的繁殖，已經成為可廣泛得到的常規操作和技術。有用的哺乳動物宿主細胞系的實例是用SV40轉化的猴腎CV1系(COS-7，ATCCCRL1651),人胚胎腎系(為懸浮培養生長亞克隆的293或293細胞)(Graham等，1977,./.Kzro/.36:59),幼侖鼠腎細胞(BHK，ATCCCCL10),中國倉鼠卵巢細胞ADHFR;(CHO,Urlaub等,1980,屍rac.Ato/.爿cadScz.T7&477:4216;例如，DG44),小鼠Sertoli細胞(TM4,Mather,1980,說o/.Ke/rot/.23:243-251)，浙吳腎細！包(CV1ATCCCCL70),非洲綠猴腎細胞(VERO-76,ATCCCRL-1587),人子宮頸癌細胞(HELA,ATCCCCL2),犬腎細胞(MDCK，ATCCCCL34),布法羅大鼠肝細胞(BRL3A,ATCCCRL1442),人肺細月包(W138,ATCCCCL75),人肝細胞(HepG2，HB8065),小鼠乳腺腫瘤(MMT060562,ATCCCCL51),TRI細胞(Mather等，1982,爿朋"/siV.7:爿c^/.&z.383:44-68),MRC5細胞，FS4細胞,和人肝瘤系(HepG2)。用人源化的抗-CD40抗體生產的上述表達或克隆載體轉化宿主細胞，並在為誘導啟動子、選擇轉化體或擴增編碼目標序列的基因而適當改良的常規營養素培養基中培養。可以在多種培養基中培養用於生產本文所述人源化的抗-CD40抗體的宿主細胞。可商業得到的培養基例如Ham氏F10(Sigma-AldrichCo.,St.Loms,MO)、最低必需培養基((MEM)、(Sigma-AldrichCo.)、RPMI-1640(Sigma-AldrichCo.)、和Dulbecco氏改良的伊才各爾培養基((DMEM),Sigma-AldrichCo.),適用於培養宿主細胞。另外，在下述文獻中的一篇或多篇中描述的任意培養基，可以用作宿主細胞的培養基Ham等，1979,她仇￡虹58:44,Barnes等，1980，^4朋/.Aoc/zew.102:255,美國專利號4,767,704,美國專利號4,657,866,美國專利號4,927,762，美國專利號4,560,655,美國專利號5,122,469,WO90/103430，和WO87/00195。這些培養基可以才艮據需要添加有激素和/或其它生長因子(例如胰島素，轉鐵蛋白，或表皮生長因子)，鹽(例如氯化鈉，釣，鎂,和磷酸鹽)，緩衝劑(例如HEPES),核普酸(例如腺苦和胸苷)，抗生素(例如慶大黴素)，微量元素(定義為通常以微摩爾範圍的終濃度存在的無機化合物),和葡萄糖或等效能源。也可以包含本領域技術人員已知的適當濃度的其它添加劑。培養條件，例如溫度、pH等，是以前為選擇用於表達的宿主細胞使用的條件，且是普通技術人員顯而易見的。當使用重組技術時，抗體可以生產在細胞內、在周質空間中，或直接分泌進培養基中。如果在細胞內生成抗體，那麼作為第一步，破碎細胞來釋放蛋白。通過例如離心或超濾，可以清除宿主細胞或裂解片段的樣t粒碎片。Carter等，1992，Bw/Tec/mo/ogy10:163-167描述了用於分離分泌到大腸桿菌周質空間的抗體的方法。筒單的說，在存在乙酸鈉(pH3.5)、EDTA和苯甲基磺醯氟(PMSF)下，使細胞糊在約30分鐘內融化。可以通過離心除去細胞碎片。如果抗體分泌到培養基中，那麼通常首先使用商品化蛋白濃縮過濾器，例如Amicon或MilliporePellicon超濾單元，濃縮來自這類表達系統的上清液。在任何上述步驟中，可以包括蛋白酶抑制劑例如PMSF來抑制蛋白水解，而且可以包括抗生素來防止外來汙染物的生長。許多方法可以用於從宿主細胞分離抗體。可以使用例如羥磷灰石層析、凝膠電泳、透析和親和層析(親和層析是典型的純化技術)來純化由細胞製備的抗體組合物。蛋白A作為親和配體的適宜性取決於抗體中存在的任何免疫球蛋白Fc結構域的種類和同種型。蛋白A可用於純化基於人yl、y2或Y4重鏈的抗體(參見，例如，Lmdmark等，1983/./附ww朋/.Me仇62:1-13)。蛋白G推薦用於所有小鼠同種型和人(參見，例如，Guss等，1986￡A^wo/.266:383-402所述的CLUSTALW算法，進行蛋白序列比對。本文所述的抗體可以用作親和純化劑。在這種方法中，使用本領域眾所周知的方法，將抗體固定在固相諸如Sephadex樹脂或濾紙上。使固定化的抗體接觸含有待純化的CD40蛋白(其片段)的樣品，並在此後用合適的溶劑洗滌支持物，所述溶劑將基本上去掉樣品中除CD40蛋白(其結合在固定化的抗體上)以外的所有物質。最後，用另一種合適的溶劑洗滌支持物，諸如甘氨酸緩沖液pH5.0,其將使CD40蛋白從抗體中釋放。人源化的抗-CD40抗體還可以用於診斷測定中，以檢測和/或定量CD40蛋白，例如特定細胞、組織或血清中的CD40蛋白表達。就診斷應用而言，一般用可檢測部分標記抗體。可利用的許多標記一般可以分成如下幾類(a)放射性同位素，例如，35S,14C，1251,&,和1311。可以使用例如在Cwre//1屍rc^oco/sz力/wwwo/ogy,Volumes1禾口2,1991,Coligen等，Ed.Wiley-Interscience,NewYork,N.Y.，Pubs中描述的技術，用放射性同位素標記抗體。可以通過例如閃爍計數測定》文射性。(b)螢光標記，例如可以利用稀士元素螯合物(銪螯合物)或螢光素及其衍生物、若丹明及其衍生物、丹醯、麗絲胺、藻紅蛋白和德克薩斯紅。通過例如上面Cw"e"/1屍ratoc。/s/mww"o/ogy中才皮露的已知4支術,可以使螢光標記與抗體偶聯。可以使用螢光計對螢光進行定量。(c)可以利用各種酶-底物標記(參見，例如，美國專利號4,275,149提供了有關它們中的一些的綜述)。所述酶一般催化可以使用各種技術測定的顯色底物的化學改變。例如，酶可以催化可通過分光光度法測定的底物的顏色改變。或者，酶可以改變底物的螢光或化學發光。用於對螢光改變進行定量的技術如上所述。化學發光底物被化學反應電子地激發，然後可以發射可測定(例如使用化學發光計)的或給螢光受體提供能量的光。酶標記的實例包括螢光素酶諸如熒火蟲安光素酶和細菌螢光素酶(美國專利號4,737,456)、螢光素、2,3-二氫酞嗪二酮類、蘋果酸脫氫酶、尿素酶、過氧化物酶諸如辣根過氧化物酶(HRPO)、鹼性磷酸酶、a-半乳糖苷酶、葡糖澱粉酶、溶菌酶、糖氧化酶(例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和6-磷酸葡萄糖脫氳酶)、雜環氧化酶(諸如尿酸酶和黃。票呤氧化酶)、乳酸過氧化物酶、微過氧化物酶等。用於4吏酶與抗體偶聯的技術，描述在例如，O'Sullivan等，1981,MethodsforthePreparationofEnzyme-AntibodyConjugatesforuseinEnzymeImmunoassay,inMef/zotfemi/72y亂(J.Langone&H.VanVunakis,編)，Academicpress,N.Y.,73:147-166。酶-底物組合的實例包括，例如(a)辣根過氧化物酶(HRPO)與作為底物的過氧化氳酶，其中所述過氧化氫酶會氧化染料前體，例如鄰苯二胺(OPD)或3,3',5，5'-四曱基聯苯胺鹽酸鹽(TMB);(b)鹼性磷酸酶(AP)與作為顯色底物的對硝基苯磷酸酯；和(c)cc-D-半乳糖苷酶(a-D-Gal)與顯色底物(例如對硝基苯基-oc-D-半乳糖苷酶)或螢光底物4-曱基傘形基-a-D-半乳糖苷。本領域技術人員可以利用許多其它酶一底物組合。有關它們的一般性綜述，參見美國專利號4,275,149和美國專利號4,318,980。4吏用許多已知的技術，可以將標記與抗體間接偶聯。例如，可以將抗體與生物素偶聯，並且可以將上述三大類標記中的任意種與抗生物素蛋白偶聯，或反之亦然。生物素選擇性地結合抗生物素蛋白，標記由此以這種間接方式與抗體偶聯。或者，為了實現標記與抗體的間接偶聯，將抗體與小半抗原(例如地高辛)偶聯，並將上文所述不同類型的標記之一與抗半抗原抗體(例如抗地高辛抗體)偶耳關。由此，可以實現標記與抗體的間接偶聯。在另一個實施方案中，人源化的抗-CD40抗體不經標記地^吏用，並使用結合人源化的抗-CD40抗體的經標記的抗體一企測它。本文所述的抗體可以用於任何已知的測定方法，諸如竟爭性結合測定、直接和間接夾心測定、和免疫沉澱測定。參見，例如，Zola，A/owoc/o"a/jMw認/q/Tec/w甲es,pp.147-158(CRCPress,Inc.1987)。#資試身盆人源化的抗-CD40抗體可以用於診斷試劑盒中，即預定量的試劑與關於進行診斷測定的說明書的成套組合。如果用酶標記抗體，那麼試劑盒可以包括酶所需的底物和輔因子，例如提供可檢測發色團或螢光團的底物前體。此外，可以包括其它添加劑，諸如穩定劑、緩衝劑(例如封閉緩衝劑或裂解緩衝劑)等。各種試劑的相對量可以廣泛改變，以便提供實質性優化測定靈敏度的試劑在溶液中的濃度。可以將這些試劑作為乾粉提供，通常為凍幹的，它們包括在溶解後會提供具有合適濃度的試劑溶液的賦形劑。在另一個實施方案中，本文公開的人源化的抗-CD40抗體可以用於治療與本文所述的CD40表達有關的多種病症。人源化的抗-CD40抗體或試劑通過任意合適的方式給藥，包括根據需要用於局部免疫抑制性治療的腸胃外的、皮下的、腹膜內的、肺內的、和鼻內的給藥，病灶內給藥(包括在移植前灌注或使移植物接觸抗體)。人源化的抗-CD40抗體或試劑可以作為例如輸注或推注來給藥。腸胃外輸注包括肌肉內的、靜脈內的、動脈內的、腹膜內的或皮下的給藥。另外，人源化的抗-CD40抗體適合通過脈沖輸注給藥，尤其使用遞減劑量的抗體。在一個方面，給藥是通過注射進行，最優選靜脈內的或皮下的注射，這部分地取決於給藥是短暫的還是長期的。為了預防或治療疾病，合適的抗體劑量取決於多種因素，例如如上所述的待治療疾病的類型、疾病的嚴重程度和過程、施用抗體是為了預防還是為了治療的目的、先前的療法、患者的臨床病史和對抗體的反應、以及主治醫師的判斷。合適地對患者一次性或在一系列治療中施用抗體。根據疾病的類型和嚴重程度，約1jug/kgto20mg/kg(例如，0.1-15mg/kg)的抗體是對患者施藥的起始候選劑量，無論例如一次或多次分開的施藥，還是連續輸注。典型的日劑量可以在約ljug/kg—100mg/kg或更高的範圍內，這取決於上述因素。根據狀況，為了在幾天或更長時間內反覆施藥，治療可以持續至發生所希望的疾病症狀抑制。但是，其它給藥方案可能是有用的。通過常規技術和測定，可以容易地監視該治療的進展。一種示例性的給藥方案7>開在WO94/04188中。可以以符合良好醫療實踐的方式，配製、定量和施用抗體組合物。在該背景下，考慮的因素包括包括待治療的具體病症、待治療的具體哺乳動物、個體患者的臨床狀況、病症的原因、輸送試劑的位點、給藥方法、給藥計劃、和醫學從業人員已知的其它因素。要施用的抗體的"治療有效量"由這些考慮因素的決定，且是預防、改善或治療與CD40表達有關的病症所需的最小量。抗體不需要、<旦是<壬選地與目前用於預防或治療目標病症的一種和多種試劑一起配製。這樣的其它試劑的有效量取決於製劑中存在的人源化的抗-CD40抗體的量、病症和治療的類型、和上面討論的其它因素。它們通常以與前文相同的劑量和給藥途徑使用，或是此前使用劑量的約1陽99%。抗-CD40抗體或試劑可以用於治療或預防表達CD40的癌症或特徵在於CD40表達的免疫障礙，例如,特徵在於免疫細胞(例如，淋巴細胞或樹突細胞)的不適當激活。這樣的CD40表達可以是由於，例如，細胞表面上的高CD40蛋白水平和/或表達的CD40的改變的抗原性。根據本文所述方法對免疫障礙的治療或預防，可以通過給需要這樣的治療和預防的對象施用有效量的抗-CD40抗體或試劑來實現，其中所述抗體(i)會結合表達CD40且與疾病狀態有關的激活的免疫細胞，和(ii)對激活的免疫細胞產生細胞毒性的、細胞抑制性的或免疫抑制性的作用。特徵在於免疫細胞的不適當激活且可以通過本文所述方法治療或預防的免疫疾病，可以根據例如作為病症基礎的超敏反應的類型進行分類。這些反應通常分成4類過敏性反應，細胞毒性的(細胞溶解的)反應，免疫複合物反應，或細胞-介導的免疫(CMI)反應(也稱作遲髮型超敏(DTH)反應)。(參見,"f列^r，Fww(iame77fa///wmwwo/ogy(WilliamE.Pauled.,RavenPress,N.Y.,3rded.1993))這樣的免疫疾病的具體實例包括下述的類風溼性關節炎，自身免疫脫髓鞘疾病(例如，多發性硬化，變應性腦脊髓炎)，內分泌眼病，葡萄膜視網膜炎，系統性紅斑狼瘡，重症肌無力，格雷夫斯病，腎小球腎炎,自身免疫性肝病，炎性腸病(例如，克羅恩病或潰瘍性結腸炎)，過敏反應，變應性反應，舍才各倫症候群，I型糖尿病，原發性膽汁性肝硬變，韋格納氏肉芽肺病，纖維肌痛，多肌炎，皮肌炎，炎性肌炎，多內分泌故障:施密特症候群，自身免疫葡萄膜炎，艾迪生病，腎上腺炎，曱狀腺炎，橋本甲狀腺炎，自身免疫甲狀腺疾病，惡性貧血，胃萎縮，慢性肝炎，類狼瘡肝炎，動脈粥樣硬化，亞急性皮膚紅斑狼瘡，曱狀旁腺功能減退，心肌梗死後症候群，自身免疫血小板減少症，原發性血小板減少性紫癜，溶血性貧血，尋常型天皰瘙，天皰瘡，皰滲樣皮炎，斑先(alopeciaareata),類天皰痴，硬皮病，漸進性全身硬化，CREST症候群(釣質沉著症，雷諾現象，食道運動功能障礙，指端硬化,和毛細管擴張)，男性和女性自身免疫性不孕，強直性脊推炎，潰瘍性結腸炎，混合結締組織病,結節性多動脈炎，系統性壞死性血管炎，特應性皮炎，特應性鼻炎,Goodpasture氏症候群，查加斯病，結節病，風溼熱，哮喘，習慣性流產,抗磷脂症候群，農民肺，多形紅斑，心切開術後症候群，柯興症候群，自身免疫慢性活動性肝炎，養烏人肺，中毒性表皮壞死松解症，Alport氏症候群，肺泡炎，變應性肺泡炎，纖維化肺泡炎，間質性肺病，結節性紅斑壞疽性膿皮症，輸血反應，大動脈炎，風溼性多肌痛，顳動脈炎，血吸蟲病，巨細胞動脈炎，蛔蟲病，麴黴病，Sampter氏症候群，溼滲，淋巴瘤樣肉芽腫病，眼-口-生殖器三聯症候群，Caplan氏症候群，川崎病，登革腦脊髓炎，心內膜炎，心肌心內膜纖維化，眼內炎，持久隆起性紅斑(erythemaelevatumetdiutmum),4艮屑病，月臺兒溶血症，嗜酸細i包性筋膜炎，Shulman氏症候群，Felty氏症候群，絲蟲病，睫狀體炎，慢性睫狀體炎，異時性睫狀體炎，Fuch氏睫狀體炎、IgA腎病，亨-舍二氏紫癜，移植物抗宿主病，移植排斥，心肌病，Eaton-Lambert症候群，復發性多軟骨炎，冷球蛋白血症，華氏巨球蛋白血症，Evan氏症候群，急性呼吸窘迫症候群，肺炎，骨質疏鬆症，遲髮型超敏反應和自身免疫性腺生成障礙。因此，本文所述方法包括下述病症的治療B'淋巴細l包(例如，系統性紅斑狼痴，Goodpasture氏症候群，類風溼性關節炎,和I型糖尿病)，Th廣淋巴細胞(例如，類風溼性關節炎，多發性硬化，銀屑病，Sjorgren氏症候群，橋本曱狀腺炎，格雷夫斯病，原發性膽汁性肝硬變，韋格納氏肉芽腫病，結核病，或移植物抗宿主病)，或Th2-淋巴細胞(例如，特應性皮炎，系統性紅斑狼瘡，特應性哮喘，鼻結膜炎，變應性鼻炎,Omenn氏症候群，全身硬化或慢性移植物抗宿主病)。通常涉及樹突細胞的病症包含Th!-淋巴細胞或Th2-淋巴細胞的病症。在有些實施方案中，免疫障礙是T細胞-介導的免疫障礙，例如其中激活的T細胞與表達CD40的障礙有關的T細胞障礙。可以施用抗-CD40抗體或試劑，以排除這樣的表達CD40的激活的T細胞。在一個具體的實施方案中，抗-CD40抗體或試劑的施用，可以排除表達CD40的激活的T細胞，同時抗-CD40或試劑基本上不排除休眠T細胞。在該上下文中，"基本上不排除"是指，小於約60%或小於約70%或小於約80%的休眠T細胞未排除。本文所述的抗-CD40抗體和試劑也可以用於治療或預防表達CD40的癌症。根據本文所述方法對表達CD40的癌症的治療或預防，可以通過給需要這樣的治療或預防的對象施用有效量的抗-CD40抗體或試劑來實現，其中所述抗體或試劑(i)會結合表達CD40的癌細胞，和(ii)對表達CD40的癌細胞產生排除或抑制其增殖的細胞毒性的或細胞抑制性的作用。白血病，例如急性白血病，急性淋巴細胞白血病，急性髓細胞性白血病(例如，成髓細胞性白血病，前髓細胞性白血病，髓單核細胞性白血病，單核細胞性白血病,或紅白血病)，慢性白血病，慢性髓細胞性(粒細胞)白血病，或慢性淋巴細胞白血病；真性紅細胞增多症；淋巴瘤(例如，霍奇金病或非霍奇金病)；多發性骨髓瘤，特發性巨球蛋白血症;重鏈病；實體瘤如肉瘤和癌(例如，纖維肉瘤，粘液肉瘤，脂肪肉瘤，專欠骨肉瘤，骨源性肉瘤，骨肉瘤，脊索瘤，血管肉瘤，內皮肉瘤，淋巴管肉瘤，淋巴管內皮肉瘤，滑膜瘤，間皮瘤，尤因瘤，平滑肌肉瘤，橫紋肌肉瘤，結腸癌，結腸直腸癌，胰腺癌，乳腺癌，卵巢癌，前列腺癌，鱗狀細胞癌，基底細胞癌，腺癌，汗腺癌，皮脂腺癌，乳頭狀癌，乳頭狀腺癌，嚢腺癌，髓樣癌，支氣管癌，腎細胞癌，肝癌，膽管癌，絨毛膜癌，精原細胞瘤，胚胎性癌，維爾姆斯氏腫瘤，子宮頸癌，子宮癌，睪丸腫瘤，肺癌，小細胞肺癌，非小細胞肺癌，膀胱癌，上皮癌，膠質瘤，星形細胞瘤，髓母細胞瘤，顱咽管瘤，室管膜瘤，松果體瘤，成血管細胞瘤，聽神經瘤，少突神經膠質瘤，menangioma,黑素瘤，神經母細月包瘤，視網膜母細胞瘤，鼻咽癌，或食管癌)。秀參邀合參及岸滋^包含CD40結合劑(例如，抗-CD40抗體)的組合物，可以施用給具有免疫障礙或表達CD40的癌症或處於該危險中的受試者。本發明還提供了CD40結合劑(例如，抗-CD40抗體)在藥劑生產中的應用，所述藥劑用於預防或治療表達CD40的癌症或免疫障礙。本文使用的術語"受試者"是指可以施用CD40-結合劑的任意哺乳動物患者，包括，例如，人和非人哺乳動物，例如靈長類動物，嚙齒類動物,和狗。特別適合用本文所述方法治療的受試者包括人。在免疫障礙或表達CD40的癌症的預防或治多種遞送系統是已知的，且可以用於施用CD40結合劑。導入方法包括、但不限於真皮內的、肌肉內的、腹膜內的、靜脈內的、皮下的、鼻內的、硬膜外的和經口的途徑。CD40結合劑可以通過例如輸注、推注或注射施用，且可以與其它生物活性劑例如化療劑一起施用。施用可以是全身的或局部的。在具體實施方案中，CD40結合劑組合物通過注射、藉助於導管、栓劑或植入物來施用，所述植入物是多孔的、無孔的或膠狀的材料，包括膜,例如唾液酸膜或纖維。通常，當施用組合物時，4吏用抗-CD40抗體或試劑不會粘附的材料。在其它實施方案中，在控釋系統中遞送抗-CD40抗體或試劑。在一個實施方案中，可以使用泵(參見，例如，Langer,1990,Scze"ce249:1527-1533;Sefton,1989,CACCr".7e/5wwed14:201;Buchwald等，1980,Swrgery88:507;Saudek等，1989,W丄A/W.321:574)。在另一個實施方案中，可以使用聚合材料。(參見，例如，Me&ca/^4//"ca"'orao/Co欣o〃edi^e/ewe(Langer禾口Wise編，CRCPress,BocaRaton,Florida,1974);Ccw,ra〃em^//"Z^7z'(y'Z>wg屍/Ww"Z)ew'gw屍er/ormawce(SmolenandBalleds.,Wiley,NewYork,1984);RangerandPeppas,1983,Mkt謂o/.Wev.MacTwwc*/.CTz謹.23:61。也參見Levy等，1985,228:190;During等，1989,^肌25:351;Howard等，1989,#，歸化.71:105.)。在例如上面的Langer中，討論了其它控釋系統。CD40結合劑(例如，抗-CD40抗體)可以作為包含治療有效量的結合劑和一種或多種藥學相容成分的藥物組合物施用。例如，藥物組合物通常包括一種或多種藥物載體(例如，無菌液體,例如水和油，包括石油、動物、4直物或合成來源的油，例如花生油，大豆油，礦物油，芝麻油等)。當靜脈內施用藥物組合物時，水是更典型的載體。鹽水溶液和含水右旋糖和甘油溶液也可以用作液體載體，尤其對於注射溶液。合適的藥物賦形劑包括,例如，澱粉，葡萄糖，乳糖，蔗糖，明膠，麥芽，大米，麵粉，白堊，矽膠，硬脂酸鈉，單硬脂酸甘油酯，滑石，氯化鈉，脫脂奶粉，甘油，丙烯，乙二醇，水，乙醇等。其它合適的藥物賦形劑包括胺基酸(例如，精氨酸，組氨酸，甘氨酸)，表面活性劑(例如，聚山梨酯)和糖和糖醇(例如，蔗糖或山梨醇和其它多元醇(例如，海藻糖))。如果需要，組合物也可以含有小量潤溼劑或乳化劑或pH緩衝劑。這些組合物的形式可以是溶液,懸浮液，乳劑，片劑，丸劑，膠嚢，散劑，持續釋放製劑等。組合物可以用常規粘合劑和載體例如甘油三酯配製成栓劑。經口製劑可以包括標準的載體，例如藥用級的甘露醇，乳糖，澱粉，硬脂酸鎂，糖精鈉，纖維素,碳酸鎂，等。合適的藥物載體的實例，由E.W.Martm描述在"Remmgton，sPharmaceuticalSciences"。這樣的組合物含有治療有效量的核酸或蛋白，通常是純化形式，以及適當量的載體，以便提供適合給患者施用的形式。製劑與給藥模式相對應。在典型的實施方案中，根據常規操作，將藥物組合物配製成適合靜脈內施用給人類的藥物組合物。通常，靜脈內給藥的組合物是在無菌等滲含水緩衝液中的溶液。當需要時，藥物也可以包含增溶劑和局部麻醉劑(例如利多卡因)，以緩解注射位點的疼痛。通常，所述成分在單位劑型中分開地或混合在一起地提供，例如，作為在標明活性劑的量的熔封容器(例如安瓿或香嚢)內的乾燥凍乾粉末或無水濃縮物。當通過輸注施用藥物時，可以用含有無菌藥用級水或鹽水的輸注瓶來分散。當通過注射施用藥物時，可以提供一安瓿無菌注射用水或鹽水，以便在給藥前混合成分。此外，藥物組合物可以作為藥物試劑盒來提供，所述藥物試劑盒包含(a)—個容器，其含有凍幹形式的CD40結合劑(例如，抗-CD40抗體)，和(b)第二個容器，其含有藥學可接受的注射用稀釋劑(例如，無菌水)。藥學可接受的稀釋劑可以用於重配或稀釋凍幹的抗-CD40抗體或試劑。任選地，這樣的容器可以伴有管理藥物或生物製品的生產、使用或銷售的政府機構規定形式的通告，該通告反映了人類施用的生產、使用或銷售的機構的批准。通過標準的臨床技術，可以確定能有效地治療或預防免疫障礙或表達CD40的癌症的CD40結合劑(例如，抗-CD40抗體)的量。另外，體外測定可以任選地用於輔助鑑別最佳劑量範圍。要在製劑中使用的精確劑量，也取決於給藥途徑、和免疫障礙或表達CD40的癌症的階段，應當根據從業人員的判斷和每位患者的情況來決定。可以從源自體外或動物模型實驗系統的劑量-響應曲線，外推有效劑量。例如，通過測定LD5G(使50%群體致死的劑量)和ED5q(對50%群體治療上有效的劑量)的標準藥學規程，可以在細胞培養物或實驗動物中測定抗-CD40抗體或試劑的毒性和治療效能。毒性和治療作用之間的劑量比是治療指數，它可以表達為比率LD5o/ED5。。優選會表現出大治療指數的CD40-結合劑(例如，抗-CD鬥0抗體)。當CD40-結合劑表現出毒性副作用時，將CD40-結合劑導向受影響組織的位點的遞送系統，可以用於使對不表達CD40的細胞的潛在損傷最小化，從而減小副作用。從細胞培養測定和動物研究得到的數據，可以用於配製一定範圍的人用劑量。CD40結合劑的劑量通常在循環濃度(包括具有微小毒性或無毒性的ED5Q)的範圍內。根據使用的劑型和使用的給藥途徑，劑量可以在該範圍內變化。對於在該方法中使用的任意CD40結合劑，可以從細胞培養測定中初步估計治療有效劑量。可以在動物才莫型中配製劑量，以達到包含在細胞培養中測定的IC5o(即，達到症狀的半數最大抑制的實驗化合物濃度)的循環血漿濃度範圍。這樣的信息可以用於更精確地測定在人類中有用的劑量。可以測量在血漿中的水平，例如，通過高效液相色譜。通常，施用給具有免疫障礙或表達CD40的癌症的患者的抗-CD40抗體或CD40結合劑的劑量，典型地是約O.lmg/kg至約100mg/kg受試者體重。施用給受試者的劑量是約0.1mg/kg至約50mg/kg,約1mg/kg至約30mg/kg,約1mg/kg至約20mg/kg,約1mg/kg至約15mg/kg或約1mg/kg至約10mg/kg受試者體重。示例性的劑量包括、但不限於，1ng/kg至100mg/kg。在有些實施方案中，劑量是約0.5mg/kg,約1mg/kg,約2mg/kg,約3mg/kg,約4mg/kg,約5mg/kg，約6mg/kg,約7mg/kg,約8mg/kg,約9mg/kg，約10mg/kg,約11mg/kg,約12mg/kg，約13mg/kg,約14mg/kg,約15mg/kg或約16mg/kg。所述劑量可以例如每天、每周1次(每周)、每周2次、每周3次、每周4次、每周5次、每周6次、每2周或每月施用。在具體實施方案中，劑量是約0.5mg/kg/周，約1mg/kg/周，約2mg/kg/周，約3mg/kg/周，約4mg/kg/周，約5mg/kg/周，約6mg/kg/周，約7mg/kg/周，約8mg/kg/周，約9mg/kg/周，約10mg/kg/周，約11mg/kg/周，約12mg/kg/周，約13mg/kg/周，約14mg/kg/周，約15mg/kg/周或約16mg/kg/周。在有些實施方案中，劑量範圍是約1mg/kg/周至約15mg/kg/周。在有些實施方案中，包含CD40結合劑的藥物組合物可以另外包含治療劑，其綴合或未綴合到結合劑上。抗-CD40抗體或CD40結合劑可以與一種或多種治療劑相聯合地共同施用，用於治療或預防免疫障礙或表達CD40的癌症。例如，聯合治療可以包括細胞抑制性的、細胞毒性的或免疫抑制性的試劑。聯合治療也可以包括,例如，施用靶向激活的淋巴細胞、樹突細胞或表達CD40的癌細胞表面上的CD40以外的受體或受體複合物的試劑。這樣的試劑的實例包括第二種非-CD40抗體，後者會結合激活的淋巴細胞、樹突細胞或表達CD40的癌細胞表面上的分子。另一個實例包括輩巴向這樣的受體或受體複合物的配體。通常，這樣的抗體或配體會結合激活的淋巴細胞、樹突細胞或表達CD40的癌細胞上的細胞表面受體，病通過向激活的淋巴細胞、樹突細胞或表達CD40的癌細胞遞送細胞抑制性的或細胞毒性的信號，增強抗-CD40抗體的細胞毒性的或細胞抑制性的作用。這樣的組合施用可以對疾病參數(例如，症狀的嚴重性，症狀的數目，或復發的頻率)具有累加或協同作用。關於組合施用的治療方案，在一個具體的實施方案中，抗-CD40抗體或CD40結合劑與治療劑同時施用。在另一個具體的實施方案中，在施用抗-CD40抗體或CD40結合劑之前或之後至少1小時且最高達幾個月，例如在施用抗-CD40抗體或CD40結合劑之前或之後至少1小時、5小時、12小時、1天、l周、l個月或3個月，施用治療劑。細胞毒性的或免疫抑制性的試劑的有用類型包括，例如，抗微管蛋白劑，aunstatins(例如，MMAE或MMAF),DNA小溝結合劑，DNA複製抑制劑，烷化劑(例如，鉑複合物例如順鉑，單(鈿)，雙(鉑)和三核鉑複合物和卡賴)，蒽環類抗生素，抗生素，抗葉酸劑，抗代謝物，化療敏化劑，duocarmycms,依託泊苷，氟化嘧咬，離子載體，lexitropsms,亞硝基脲，順氯氨鉑，預先形成的化合物，噤呤抗代謝物，。票呤黴素，輻射敏化劑，甾族化合物.，紫杉烷類，拓樸異構酶抑制劑，長春花生物鹼，等。單獨的細胞毒性的或免疫抑制性的試劑包括，例如，雄激素，氨茴黴素(AMC),門冬醯胺酶，5-氮胞苷，硫唑噤呤，博來黴素，白消安，buthionmes函ximme,喜樹鹼，卡鉑,卡莫司汀(BSNU),CC-1065,苯丁酸氮芥，順柏，秋水仙素，環磷醯胺，阿糖胞苷，胞啶阿糖胞苷，細胞鬆弛素B,達卡巴嗪，更生黴素(以前的放線菌素)，柔紅黴素，氨烯咪胺,多西他賽，多柔比星，雌激素，5-氟脫氧尿苷，5-氟尿嘧啶，短桿菌肽D,羥基脲，伊達比星，異環磷醯胺，伊立替康，洛莫司汀(CCNU),氮芥，美法侖，6-巰嘌呤，曱氨蝶呤，光輝黴素，絲裂黴素C,米託蒽醌，硝基咪唑紫杉醇，普卡黴素，丙卡巴肼，鏈唑黴素，替尼泊苷，6-硫鳥嘌呤，塞替派，託泊替康，長春鹼，長春新鹼，長春瑞濱，VP-16和VM-26。在有些典型的實施方案中，治療劑是細胞毒性劑。合適的細胞毒性劑包括，例如，多拉司他汀(例如，aunstatmE,AFP,MMAF,MMAE,AEB或AEVB),DNA小溝結合劑(例如，enediynes和lexitropsins),duocarmycms,紫杉烷類(例如，紫杉醇和多西他賽)，噤呤黴素，長春花生物鹼，CC-1065,SN-38,託泊替康，嗎啉代-多柔比星，根黴素，氰基嗎啉代-多柔比星，棘黴素，考布他汀，紡錘菌素，epothiloneA和B,雌莫司；丁，cryptophysins,西馬多丁，maytansinoids,discodermolide:eleutherobin,或米託蒽醌。在有些實施方案中，細胞毒性劑是常規化療劑，例如，多柔比星，紫杉醇，美法侖，長春花生物鹼，曱氨蝶呤，絲裂黴素C或依託泊苷。另外，有效的試劑例如CC-1065類似物，刺孢黴素，美登素，多拉司他汀10的類似物，根黴素,和海葵毒素，可以連接到抗-CD40抗體或其試劑上。在具體實施方案中，細胞毒性的或細胞抑制性的試劑是auristatmE(在本領域也稱作多拉司他汀-10)或其衍生物。通常，auristatinE衍生物是，例如，在aunstatinE和酮酸之間形成的酯。例如，aunstatmE可以分別與對乙醯基苯甲酸或苯甲醯基戊酸反應，生成AEB和AEVB。其它典型的aunstatm書t生物包括AFP,MMAF,和MMAE。auristatinE和它的衍生物的合成和結構，描述在，例如，美國專利申請公開號2004-0157782Al和2005-0238649;國際專利申請號PCT/US03/24209,國際專利申請號PCT/US02/13435,和美國專利號6,884,869;6,323,315;6,239,104;6,034,065;5,780,588;5,665,860;5，663,149;5,635,483;5,599,902;5,554,725;5,530,097;5,521,284;5,504,191;5,410,024;5，138,036;5,076,973;4,986,988;4,978,744;4,879,278;4,816,444;和4,486,414;其公開內容在這裡引作參考。在具體實施方案中，細胞毒性劑是DNA小溝結合劑(參見，例如，美國專利號6，130,237.)。例如，在有些實施方案中，所述小溝結合劑是CBI化合物。在其它實施方案中，所述小溝結合劑是enediyne(例如，刺孢黴素)。抗微管蛋白劑的實例包括、但不限於，紫杉烷類(例如，Taxol(紫杉醇)，Taxotere(多西他賽))，T67(Tularik),vmcaalkyloids(例如，長春新石成，長春鹼，長春地辛,和長春瑞濱),和多拉司他汀(例如，auristatmE,AFP,MMAF,MMAE,AEB,AEVB)。其它抗微管蛋白劑包括,例如，漿果赤黴素衍生物，紫杉烷類似物(例如，epothiloneA和B),諾考達唑，秋水仙素和colcimid,雌莫司汀，cryptophysins,西馬多丁，maytansinoids,考布他汀，discodermolide,和eleutherobin。在有些實施方案中，細胞毒性劑是maytansmoid,即另一組抗微管蛋白劑。例如，在具體實施方案中，maytansmoid是美登素或DM-1(ImmunoGen,Inc.;也參見Chan等，1992,Omcer52:127-131)。在有些實施方案中，治療劑不是放射性同位素。在有些實施方案中，細胞毒性的或免疫抑制性的試劑是抗代謝物。抗代謝物可以是,例如，噤呤拮抗劑(例如，^i唑嘌呤或麥考酚酸莫酯)，二氬葉酸還原酶抑制劑(例如，甲氨蝶呤)，阿昔洛韋，更昔洛韋，齊多夫定，阿糖腺苷，利巴韋林，疊氮基胸苷，胞啶阿糖胞苷，金剛烷胺，二去氧尿苷，橫苦，poscarnet,或三氟尿苦。在其它實施方案中，細胞毒性的或免疫抑制性的試劑是他克莫司，環孢黴素A或雷帕黴素。在其它實施方案中，細胞毒性劑是阿地白介素，阿侖單抗，阿利維A酸，別嘌醇，六甲蜜胺，氨磷汀，阿那曲唑，三氧化二砷，貝沙羅汀，貝沙羅汀，卡普睪酮，卡培他濱，塞來考昔，克拉屈濱，Darbepoetmalfa,地尼白介素-毒素連接物，右雷佐生，屈他雄酮丙酸鹽，表柔比星，阿法依伯汀，雌莫司汀，依西美坦，非格司亭，氮尿苷,氟達拉濱，氟維司群，吉西他濱，吉姆單抗，奧佐米星，戈舍瑞林，伊達比星，異環磷醯胺，曱磺酸伊馬替尼，幹擾素a-2a,伊立替康，來曲唑,亞葉酸，左旋咪唑，meclorethamme或氮芥，甲地孕酮，美司鈉，甲氨蝶呤，曱氧沙林，絲裂黴素C,米託坦，苯丙酸諾龍，奧普瑞白介素，奧沙利鉑，氨羥二磷酸二鈉，培加酶，培門冬酶，pegfilgrastim,噴司他丁，哌泊溴烷，普卡黴素，卟吩姆鈉，丙卡巴肼，米帕林，拉布立酶，revlimid,沙格司亭，鏈佐星，他莫昔芬，替莫唑胺，替尼泊苷，睪內酪，硫鳥嘌呤,託瑞米芬，託西莫單抗，曲妥單抗，維A酸，尿嘧啶氮芥，戊柔比星，長春鹼，長春新鹼，長春瑞濱和唑來磷酸。在其它實施方案中，藥物是人源化的抗-HER2單克隆抗體；RITUXAN(利妥昔單抗；Genentech,Inc.,SouthSanFrancisco,CA);嵌合的抗-CD20單克隆抗體)；OVAREX(AltaRexCorporation,MA);PANOREX(GlaxoWellcome,NC;鼠IgG2a抗體)；CetuximabErbitux(ImcloneSystemsInc.,NY;抗-EGFRIgG嵌合的抗體)；Vitaxm(Medlmmune,Inc.,MD);CampathI/H(Leukosite,MA;人源4匕的IgGl抗體)；SmartMI95(ProtemDesignLabs,Inc.,CA;人源化的抗-CD33IgG抗體)；LymphoCide(Immunomedics,Inc.,NJ;人源4匕的抗-CD22IgG抗體)；SmartID10(ProteinDesignLabs,Inc.,CA;人源化的抗畫HLA-DR抗體)；Oncolym(Techniclone,Inc.,CA;放射標記的鼠抗-HLA-DrlO抗體)；Allomune(BioTransplant,CA;人源的#元畫CD2mAb);Avastin(Genentech，Inc.,CA;抗-VEGF人源化的抗體)；依帕珠單抗(Immunomedics,Inc.，NJ和Amgen,CA;抗-CD22抗體)；禾口CEAcide(Immunomedics,NJ;人源4b的4元-CEA抗體)。其它合適的抗體包括、但不限於，針對下述抗原的抗體CA125,CA15-3,CA19-9,L6,LewisY,LewisX,a胎兒球蛋白，CA242,胎盤鹼性磷酸酶，前列腺特異性抗原，前列腺酸性磷酸酶，表皮生長因子，MAGE-1,MAGE-2,MAGE-3,MAGE-4,抗轉4失蛋白受體，p97,MUCl-KLH,CEA,gp100，MARTI,前列腺特異性抗原，IL-2受體，CD20,CD52,CD33,CD22,人絨毛膜促性腺激素，CD38,粘蛋白，P21，MPG,和Neu癌基因產物。在有些實施方案中，治療劑是免疫抑制性的試劑。免疫抑制性的試劑可以是，例如，更昔洛韋，依那西普，他克莫司，環孢黴素A,雷帕黴素，環磷醯胺，硫唑噪呤，麥考酚酸莫酯或甲氨蝶呤。或者，免疫抑制性的試劑可以是，例如，糖皮質激素(例如，考的松或醛固酮)或糖皮質激素類似物(例如，潑尼松或地塞米松)。合適的環氧合酶抑制劑包括曱氯芬那酸，曱芬那酸，卡洛芬，雙氯芬酸，二氟尼柳，芬布芬，非諾洛芬，布洛芬，吲哚美辛，酮洛芬，萘丁美酮，萘普生，舒林酸，替諾昔康，託美丁,和乙醯基水楊酸。合適的脂肪氧合酶抑制劑包括氧化還原抑制劑(例如，兒茶酚丁烷衍生物，去曱二氫愈創木酸(NDGA),馬索羅酚，菲尼酮，Ianopalen,吲唑酮，naphazatrom，benzofuranol,烷基輕胺),和非氧化還原抑制劑(例如，羥基噻唑，甲氧基烷基噻唑，苯並吡喃和其衍生物，甲氧基四氳吡喃，乳香酸和乳香酸的乙醯基化衍生物，和被環烷基基團取代的喹啉曱氧基苯基醋酸)，和氧化還原抑制劑的前體。其它合適的脂肪氧合酶抑制劑包括抗氧化劑(例如，苯酚，沒食子酸丙酯，黃酮類化合物和/或天然存在的含有黃酮類化合物的底物，黃酮的羥基化衍生物，黃酮醇，二氬槲皮素,四鞋黃酮，高良薑黃素，奧洛波爾查耳酮衍生物，4,2，，4，-三羥基查耳酮，鄰氨基苯盼，N-羥基脲，benzofuranols,依布硒和增加還原性硒代酶的活性的物質)，鐵螯合劑(例如，異羥肟酸和其衍生物，N-鞋基脲，2-千基-l-萘酚，兒茶酚，羥胺，鼠尾草酚troloxC,兒茶酚，萘酚，柳氮磺p比。定，zyleuton,5-羥基鄰氨基苯曱酸和4-(co-芳基烷基)苯基鏈烷酸)，含有咪唑的化合物(例如，酮康唑和伊曲康哇)，吩噻漆,和苯並吡喃衍生物。其它合適的脂肪氧合酶抑制劑包括類花生酸(例如，十八碳四烯酸,二十石友四烯酸，二十二石友五烯酸，二十石友六烯酸和二十二碳六烯酸和其酉旨)的抑制劑，PGE1(前列地爾)，PGA2(前列腺素A2),維前列醇，15-單羥基二十碳四烯酸，15-單羥基-二十碳三烯酸和15-單羥基二十碳五烯酸，和白細胞三烯B5，C5和D5),幹擾鈣流的化合物，吩噻。秦，二苯基丁基胺，維拉帕米，fuscoside,薑黃，氯原酸，咖啡酸，5,8,11,14-二十碳四烯酸(ETYA),羥基苯基維醯胺，Ionapalen,七葉靈，二乙基乙胺嗪，菲咯啉,黃茶香元，普昔羅米，硫醚，二烯丙基硫化物和二-(l-丙烯基)硫化物。白細胞三烯受體拮抗劑包括骨化三醇，昂唑司特，BayerBay-x-1005,Ciba-GeigyCGS畫25019C,依布硒，LeoDenmarkETH-615,LillyLY-293111,OnoONO-4057,TerumoTMK-688,BoehringerIngleheimBI-RM-270,LillyLY213024,LillyLY264086,LillyLY292728,OnoONOLB457,Pfizer105696,PerdueFrederickPF10042,Rhone-PoulencRorerRP66153,SmithKlmeBeechamSB-201146,SmithKlineBeechamSB-201993,SmithKlmeBeechamSB-209247,SearleSC-53228,SumitamoSM15178,AmericanHomeProductsWAY121006,BayerBay-o-8276,Warner-LambertCI-987,Warner-LambertCI-987BPC-15LY223982,LillyLY233569,LillyLY-255283,MacroNexMNX-160,Merck和Co.MK-591,Merck和Co.MK-886,OnoONO-LB-448,PurdueFrederickPF-5901,Rhone-PoulencRorerRG14893,Rhone-PoulencRorerRP66364,Rhone-PoulencRorerRP69698,Shio畫giS-2474,SearleSC-41930,SearleSC-50505,SearleSC-51146,SearleSC-52798,SmithKlmeBeechamSKandF-104493,LeoDenmarkSR-2566,TanabeT-757和TeijmTEI-1338。翔品在另一個方面，包括含有用於治療上述病症的材料的製品。所述製品包含容器和標記。合適的容器包括，例如，瓶子，管形瓶，注射器,和試管。容器可以由許多種材料(例如玻璃或塑料)製成。容器裝有能有效治療病症的組合物，且可以具有無菌存取口。例如，所述容器可以是靜脈內溶液袋或具有可被皮下注射針穿透塞子的管形瓶。組合物中的活性劑是人源化的抗-CD40抗體。在容器上或容器伴隨的標記表明，組合物可以用於治療選擇的病症。製品還可以包含第二個容器，後者含有藥學可接受的緩衝液，例如磷酸鹽緩衝鹽水，林格溶液,和右旋糖溶液。還可以包含從商業和用戶觀點看需要的其它材料，包括其它緩沖劑，稀釋劑，濾膜，針，注射器,和具有使用說明的包裝說明書。爿rcc^慮根據國際承認的用於專利程序目的的微生物保藏布達佩斯條約的期限，在1999年5月25日進行單克隆抗體S2C6的ATCC保藏。ATCC位於10801UniversityBoulevard,Manassas,Virgma20110-2209,USA。該ATCC保藏物得到登記號PTA-llO。ATCC位於10801UniversityBoulevard,Manassas,Virgina20110-2209,USA。保藏是為了給本領域技術人員提供方便，而不是承認在35U.S.C.112部分規定下需要保藏物。本文所述的範圍不限於保藏的抗體的範圍，因為保藏的實施方案意在作為本發明某些方面的單純解釋，功能上等同的任意抗體是在本發明範圍內。本文材料的保藏不構成對下述內容的承認本文包含的書面描述不足以實現本發明的任意方面、包括其最佳方式，也不應解釋為將權利要求的範圍限制為它代表的具體解釋。實際上，除了本文所示和描述的那且落入所附權利要:書的範圍內。,、；、在下面的實施例中，進一步解釋了本發明，這些實施例無意限制本發明的範圍。根據美國典型培養物中心(ATCC)或德意志微生物保藏中心(DMSZ)指定的條件，維持培養在下面實施例中描述的細胞系。從I脂trogenCorp.(Carlsbad,CA)得到細胞培養試劑。實施例#滋斧//.'乂源必#戎-0^6我^U々iy^通過將鼠抗-CD40供體抗體的CDR輸入受體人抗體，構建人源化的抗-CD40抗體。供體抗體是美國專利號6,838,261中所述的鼠單克隆抗體S2C6,且被證實會為B-淋巴細胞提供強烈的、生長促進信號。參見，例如，Paulie等，2000,丄/mw麗o/.142:590。如Carter等，1992,屍roc.A^/.爿cat/.Scz.V&489:4285;美國專利號6,037，454,和美國專利號6,054,297—般所述，得到人亞型III重鏈可變域(SEQIDNO:2)和人k亞型I輕鏈可變域(SEQIDNO:13)的共有序列，用作人受體重鏈和輕鏈結構域。在Cunningham等(1989,Scw"ce243:1330-1336)中描述的噬菌粒pEMXl,含有編碼人共有K-亞型I輕鏈可變域和共有人亞型III重《連可變域的DNA片段，且是對於誘變以及F(ab)s在義應y^霧中的表達有用的載體。如Carter等，1992,屍roc.腐.爿cad腦89:4285所述，將編碼共有可變域的DNA可操作地連接到源自基於pUC119的質粒pAK2的鹼性磷酸酶啟動子和Shine-dalgarno序列上。在編碼F(ab)輕鏈和重4連可變域的多核苦酸之間，構建獨特的Spel限制位點。構建pEMXl,並用於製備本文公開的人源化的抗體。通過定位誘變，將鼠抗體的CDR輸入人共有序列構架區，構建第一個人源化的mAbS2C6F(ab)，它稱作sgn-0。通常根據Kunkel,1985,屍rac.A^/.82:488所述的方法，進行誘變。在表2中顯示了得到的人源化的F(ab)分子(sgn-0)重鏈和輕鏈可變域的胺基酸序列(分別是SEQIDNO:3和SEQIDNO:14),並與供體抗體、鼠單克隆抗體S2C6(mMAbS2C6,在本文中也稱作SGN-14;分別是SEQIDNO:l和SEQIDNO:12)、和人共有序列受體抗體HuVHIII和HuVLI(分別是SEQIDNO:2和SEQIDNO:13)的序列進行對比。將質粒轉化進義應^f^"4朱XL-1Blue(Strataene,SanDiego，CA),用於製備雙^^和單《連DNA。4吏用雙脫氧核苷酸方法(測序酶，U.S.BiochemicalCorp.),對每個輕鏈和重鏈可變域完全測序。將質粒轉化進義廯Vf麥林16C9，即MM294的一種衍生物，塗布在含有5pg/ml羧千西林的LB平板上，選擇單個菌落的蛋白表達。將5ml培養物加入500mlAP5-100貼/ml羧千西林，在37°C、在4L帶有擋板的搖瓶中生長16小時。APS培養基包含1.5g葡萄糖、ll.OgHycaseSF、0.6g酵母提取物(合格品)、0.19gMgS04(無水)、1.07gNH4Cl、3.73gKCl、1.2gNaCl、120ml1Mtri乙醇胺、pH7.4,水調至1L，然後經0.1pmSealkeen過濾器無菌過濾。通過在3000Xg、在1L離心瓶(Nalgene)中離心，收穫細胞，並去除上清液。冷凍1小時後，將沉澱重新懸浮於25ml冷10mMMES,10mMEDTA,pH5.0(緩沖液A)。加入250p10.1MPMSF(Sigma)來抑制蛋白酶解，並加入3.5ml原液10mg/ml雞蛋清溶菌酶(Sigma)來輔助裂解細菌細胞壁。在水上輕輕搖動1小時後，在40,000Xg離心樣品15分鐘。用緩衝液A,將上清液調至50ml，並裝載上用緩沖液A平tf的2mlDEAE柱。然後流過用緩沖液A平tf的蛋白G-瓊脂糖CL-4B柱(Pharmacia)(0.5ml床體積)。用10ml緩衝液A洗滌柱，並用3ml0.3M甘氨酸、pH3.0洗脫進1.25ml1MTRIS,pHS.O。然後使用Centricon-30過濾器(Amicon),將F(ab)緩沖交換進PBS，並濃縮至終體積0.5ml。進行F(ab)的SDSPAGE凝膠，以確認純度，並通過電霧化質譜法驗證分子量。與親本鼠抗體相比，人源化的抗體sgn-0表現出對固定化在微量滴定板上的CD40顯著減小的結合親和力。表2tableseeoriginaldocumentpage66實施例2,人源化的抗-CD40變體抗體的製備對如實施例1所述製備的模板人源化抗體sgn-0,進行一系列突變。通過定位誘變，對編碼sgn-0的輕鏈和重鏈可變域的DNA進行特異性突變，在下面的表3和4中，列出了從該模板分子生成的變體的序列。分析使用這些變體輕鏈和重鏈可變域構建的抗體的結合活性。將每種抗體稀釋至等同濃度，然後系列稀釋。測定稀釋的抗體對固定化在微量滴定板上的CD40的結合。在下面的表5中，顯示了變體抗體的親和力結合數據。表現出接近親本鼠抗體的結合活性的抗體是sgn-14,sgn-18,sgn-19，sgn-22，sgn-23,sgn-26,和sgn-27,其中變體sgn-14,sgn-18,sgn-26,和sgn-27更接近親本鼠抗體的結合活性，SGN-14和變體sgn-26在這些測定中表現出最佳性能。表3重鏈可變域tableseeoriginaldocumentpage67表4tableseeoriginaldocumentpage68表5tableseeoriginaldocumentpage69用遞增濃度(O-IOOfig/ml)的人源化的S2C6抗體處理CD40+和CD138++人多發性骨髓瘤細胞系MM.1S(它是地塞米+〉每l感的)和MM.1R(它是地塞米松抗性的)以及從2個多發性骨髓瘤患者新分離的肺瘤細胞(CD40+,CD138++)48小時。通過3[司-胸苷攝入，測量DNA合成。結果表明，人源化的S2C6抗體沒有刺激MM.1S、MM.1R或來自2位患者的細胞的增殖(pX).1)。為了進一步確定人源化的S2C6抗體對這些細胞的細胞毒性作用，用人源化的S2C6抗體(10pg/ml)處理MM.1S和MM.1R的培養物6小時，然後與新合成的蛋白合成抑制劑環己醯亞胺(0.2貼/ml)共培養另外48小時。使用還原3-(4,5-二曱基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物(MTT)作為指示劑，測定細胞生存力。人源化的S2C6抗體和環己醯亞胺處理在2種細胞系中觸發了50-60%細胞殺傷，而單獨的同種型對照Ig(有或沒有環己醯亞胺)處理沒有誘發細胞毒性。人源化的S2C6抗體在2種患者腫瘤細胞培養物中觸發了20-30%細胞的細胞毒性，在有無毒劑量(0.2貼/ml)的環己醯亞胺存在下，這會顯著提高。豸應辨(乂源化W在-CZ^0我謬^在身vf話^在SCID小鼠淋巴瘤異種嫁接衝莫型中，測定人源化的抗-CD40抗體的抗腫瘤活性。在開始藥物治療前13天，將500萬Ramos腫瘤細l包皮下注射進SCID小鼠(IO只/組)。每周腹膜內施用鼠抗-CD40抗體或人源化的S2C63次(4mg/kg/次)，施用8或5次。檢查小鼠的腫瘤生長，在14天研究期間，每周測量腫瘤體積。圖2中的結果證實了對照小鼠中腫瘤生長增加了近9-倍，而在相同的時間段內，用鼠抗-CD40抗體或人源化的S2C6處理的小鼠中的胂瘤生長是可忽略的。數據表明，人源化的抗體能與鼠抗-CD40抗體一樣有效地抑制該B淋巴瘤異種嫁接才莫型中的腫瘤生長。,滋#/5,乂源必#我-0^6我##延#存法爭在SCID小鼠淋巴瘤異種嫁接衝莫型中，測定人源化的抗-CD40抗體對攜帶腫瘤的小鼠的存活率的效能。在抗體治療前3天，給SCID小鼠(10隻/組)靜脈內接種100萬Ramos肺瘤細胞。用鼠或人源化的抗-CD40抗體或Ig對照處理小鼠，每周腹膜內施用2次(4mg/kg/次)，共5次。每天檢查小鼠籠的死亡率。圖3所示的結果表明，用對照抗體治療的小鼠都沒有存活至超過肺瘤接種後34天，而用鼠抗-CD40抗體治療的10隻小鼠中的8隻、和用人源化的抗-CD40抗體治療的所有10隻小鼠，在肺瘤植入後甚至90天仍然存活。數據表明，人源化的抗體能與鼠抗-CD40抗體一樣有效地延長SCID小鼠在該B淋巴瘤異種嫁接模型中的存活率。本文引用了各種參考文獻，包括專利申請、專利和科學出版物，它們的公開內容在本文中整體引作參考。本文對任何參考文獻的引用或確認，不應當解釋為承認這些參考文獻可以作為本發明的
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來得到。本文公開的教導的應用範圍，不受本文所述具體實施方案的限制。實際上，本領域普通技術人員考慮本文包含的教導和所附實施例，能夠作出多種改進。這樣的改進應當屬於所附權利要求書的範圍內。權利要求1.特異性地結合人CD40的分離的抗體或抗原結合片段，其包含人源化的重鏈可變域，所述重鏈可變域包含具有與SEQIDNO2的人可變域重鏈亞型III共有胺基酸序列的構架區胺基酸序列至少90％同一的胺基酸序列的構架區，且包含至少一個具有與SEQIDNO3的對應重鏈CDR至少90％同一的胺基酸序列的CDR。2.特異性地結合人CD40的分離的抗體或抗原結合片段，其包含人源化的輕鏈可變域，所述輕鏈可變域包含具有與SEQIDNO:13的人可變域輕鏈亞型kI共有胺基酸序列的構架區胺基酸序列至少90%同一的胺基酸序列的構架區，且包含至少一個具有與SEQIDNO:14的對應輕鏈CDR至少卯％同一的胺基酸序列的CDR。3.權利要求1的抗體或抗原結合片段，還包含人源化的輕鏈可變域，所述輕鏈可變域包含具有與SEQIDNO:13的人可變域輕4連亞型kI共有胺基酸序列的構架區胺基酸序列至少90%同一的胺基酸序列的構架區，且包含至少一個具有與SEQIDNO:14的對應輕鏈CDR至少卯％同一的胺基酸序列的CDR。4.權利要求1的抗體或抗原結合片段，其中每個重鏈CDR與SEQIDNO:3的對應重鏈CDR具有至少90%同一性。5.權利要求4的抗體或抗原結合片段，其中所述重鏈CDR包含SEQIDNO:3的對應重鏈CDR的胺基酸序列。6.權利要求2或3的抗體或抗原結合片段，其中每個輕鏈CDR與SEQIDNO:14的對應輕鏈CDR具有至少90%同一性。7.權利要求6的抗體或抗原結合片段，其中所述輕鏈CDR包含SEQIDNO:14的輕鏈CDR的胺基酸序列。8.權利要求1的抗體或抗原結合片段，其包含SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10或SEQIDNO:ll的重《連可變域胺基酸序列。9.權利要求2的抗體或抗原結合片段，其包含SEQIDNO:14、SEQIDNO:15或SEQIDNO:16的輕鏈可變域胺基酸序列。10.4又利要求3的抗體或抗原結合片段，其包含SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:IO或SEQIDNO:ll的重4連可變域胺基酸序列，和SEQIDNO:14、SEQIDNO:15或SEQIDNO:16的輕鏈可變域胺基酸序列。11.權利要求1或3的抗體或抗原結合片段，還包含人IgG恆定區。12.權利要求11的抗體或抗原結合片段，其中IgG恆定區的同種型是IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。13.權利要求12的抗體或抗原結合片段，其中IgG恆定區的同種型是IgGl。14.權利要求2或3的抗體或抗原結合片段，還包含輕鏈恆定域。15.權利要求14的抗體或抗原結合片段，其中輕鏈恆定域是K恆定域。16.權利要求10的抗體或抗原結合片段，其中所述重鏈可變域和輕鏈可變域分別包含下述胺基酸序列SEQIDNO:3和SEQIDNO:14;SEQIDNO:4和SEQIDNO:14;SEQIDNO:5和SEQIDNO:14;SEQIDNO:6和SEQIDNO:14;SEQIDNO:7和SEQIDNO:14;SEQIDNO:8和SEQIDNO:14;SEQIDNO:9和SEQIDNO:14;SEQIDNO:6和SEQIDNO:15;SEQIDNO:6和SEQIDNO:16;SEQIDNO:7和SEQIDNO:16;SEQIDNO:10和SEQIDNO:14;SEQIDNO:ll和SEQIDNO:14;SEQIDNO:10和SEQIDNO:16;或SEQIDNO:ll和SEQIDNO:16。17.權利要求10的抗體或抗原結合片段，其中所述重鏈可變域和輕鏈可變域分別包含下述胺基酸序列SEQIDNO:7和SEQIDNO:14;SEQIDNO:6和SEQIDNO:16;SEQIDNO:7和SEQIDNO:16;SEQIDNO:10和SEQIDNO:14;SEQIDNO:l1和SEQIDNO:14;SEQIDNO:10和SEQIDNO:16;或SEQIDNO:11和SEQIDNO:16。18.權利要求10的抗體或抗原結合片段，其中所述重鏈可變域和輕鏈可變域分別包含下述胺基酸序列SEQIDNO:7和SEQIDNO:14;SEQIDNO:6和SEQIDNO:16;SEQIDNO:10和SEQIDNO:16;或SEQIDNO:11和SEQIDNO:16。19.權利要求10的抗體或抗原結合片段，其中所述重鏈可變域和輕鏈可變域分別包含SEQIDNO:3和SEQIDNO:14的胺基酸序列。20.權利要求10的抗體或抗原結合片段，其中所述重鏈可變域和輕鏈可變域分別包含SEQIDNO:10和SEQIDNO:16的胺基酸序列。21.權利要求16-20中任一項的抗體，其中所述抗體還包含人免疫J求蛋白恆定區。22.權利要求21的抗體，其包含分別如SEQIDNO:19和SEQIDNO:22所述的重鏈和輕鏈胺基酸序列。23.^又利要求21的抗體，它是husgn-O,husgn-l,husgn-2,husgn-4，husgn-14,husgn-15,husgn-16,husgn-17,husgn-18,husgn-19,husgn-22.husgn-23,husgn-26或husgn-27。24.權利要求1-3中任一項的抗體或抗原結合片段，它是抗原結合抗體片段。25.權利要求24的抗原結合片段，其中所述抗體片段是Fab,Fab，,F(ab，)2，Fv片段，雙特異抗體，單鏈抗體，scFv片段或scFv-Fc。26.權利要求1-3中任一項的抗體或抗原結合片段，還包含可檢測標記。27.權利要求1-3中任一項的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體綴合到化療劑上。28.權利要求27的抗體或抗原結合片段，其中所述化療劑是auristatin。29.權利要求28的抗體或抗原結合片段，其中所述auristatm是MMAE或MMAF。30.試劑盒，其包含置於容器中的權利要求1-3中任一項的抗體或抗原結合片段，任選包含關於使用所述抗體檢測生物樣品中的CD40蛋白的說明書。31.抑制表達人CD40抗原的細胞的生長的方法，其包含，給細胞施用權利要求1-3中任一項的抗體或抗原結合片段，所述抗體或抗原結合片段特異性地結合人細胞表面CD40抗原，其中抗體或抗原結合片段與CD40抗原的結合抑制細胞的生長或分化。32.治療具有CD40相關病症的受試者的方法，其包含，給受試者施用權利要求1-3中任一項的抗體或抗原結合片段，所述抗體或抗原結合片段特異性地結合人CD40,其中抗體或抗原結合片段與CD40的結合抑制CD40相關病症的細胞的生長或分化。33.4又利要求32的方法，其中CD40相關病症的細胞是B類淋巴母細胞，胰腺細胞，肺細胞，乳腺細胞，卵巢細胞，結腸細胞，前列腺細胞，皮膚細胞，頭和頸細胞，膀胱細胞，骨細l包或腎細胞。34.權利要求32的方法，其中所述CD40相關病症是慢性淋巴細胞白血病，伯基特淋巴瘤，多發性骨髓瘤，T細胞淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，霍奇金病，瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症或卡波西肉瘤。35.誘導外周B細胞的缺失的方法，其包含，給細胞施用權利要求l-3中任一項的抗體或抗原結合片段，所述抗體或抗原結合片段特異性地結合人細胞表面CD40抗原，其中抗體或抗原結合片段與CD40抗原的結合，會誘導細胞的缺失。36.權利要求35的方法，其中將所述抗體或抗原結合片段施用給具有免疫病症的受試者。37.權利要求37的方法，其中所述免疫病症是類風溼性關節炎或系統性紅斑3良痴。38.權利要求1-3中任一項的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段與具有ATCC保藏號PTA-110的雜交瘤分泌的單克隆抗體S2C6竟爭結合。39.藥物組合物，其包含(i)權利要求1-3中任一項的抗體或抗原結合片段；和(ii)藥學可接受的賦形劑。40.分離的多核苷酸，其編碼權利要求1的抗體或抗原結合片段的人源化重鏈可變區。41.分離的多核苷酸，其編碼權利要求2的抗體或抗原結合片段的人源4t輕《連可變區。42.權利要求40的分離的多核苷酸，還包含人源化的輕鏈可變域，所述輕鏈可變域包含具有與SEQIDNO:13的人可變區輕鏈亞型kI共有胺基酸序列的構架區胺基酸序列至少90%同一的胺基酸序列的構架區，且包含至少一個具有與SEQIDNO:3的對應重鏈CDR至少90%同一的胺基酸序列的CDR。43.權利要求40或42的分離的多核苷酸，其中所述多核苷酸編碼SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10或SEQIDNO:ll的重鏈可變域胺基酸序列。44.權利要求4J或42的分離的多核苷酸，其中所述多核苷酸編碼SEQIDNO:14、SEQIDNO:15或SEQIDNO:16的輕鏈可變域胺基酸序列。45.權利要求43的分離的多核苷酸，其中所述多核普酸分別編碼下述重鏈可變域胺基酸序列和輕鏈可變域胺基酸序列SEQIDNO:3和SEQIDNO:14;SEQIDNO:4和SEQIDNO:14;SEQIDNO:5和SEQIDNO:14;SEQIDNO:6和SEQIDNO:14;SEQIDNO:7和SEQIDNO:14;SEQIDNO:8和SEQIDNO:14;SEQIDNO:9和SEQIDNO:14;SEQIDNO:6和SEQIDNO:15;SEQIDNO:6和SEQIDNO:16;SEQIDNO:7和SEQIDNO:16;SEQIDNO:10和SEQIDNO:14;SEQIDNO:11和SEQIDNO:14;SEQIDNO:10和SEQIDNO:16;或SEQIDNO:ll和SEQIDNO:16。46.權利要求43的分離的多核苷酸，其中所述多核苷酸分別編碼下述重鏈可變域胺基酸序列和輕鏈可變域胺基酸序列SEQIDNO:7和SEQIDNO:14;SEQIDNO:6和SEQIDNO:16;SEQIDNO:7和SEQIDNO:16;SEQIDNO:10和SEQIDNO:14;SEQIDNO:11和SEQIDNO:14;SEQIDNO:10和SEQIDNO:16;或SEQIDNO:11和SEQIDNO:16。47.權利要求43的分離的多核苷酸，其中所述多核苷酸分別編碼下述重鏈可變域胺基酸序列和輕鏈可變域胺基酸序列SEQIDNO:7和SEQIDNO:14;SEQIDNO:6和SEQIDNO:16;SEQIDNO:10和SEQIDNO:16;或SEQIDNO:11和SEQIDNO:16。48.權利要求43的分離的多核苷酸，其中所述多核苷酸分別編碼SEQIDNO:3和SEQIDNO:14的重《連可變域胺基酸序列和輕鏈可變域胺基酸序列。49.權利要求43的分離的多核苷酸，其中所述多核苷酸分別編碼SEQIDNO:10和SEQIDNO:16的重鏈可變域胺基酸序列和輕鏈可變域胺基酸序列。全文摘要提供了人源化的抗-CD40抗體和抗原結合片段，和用於治療特徵在於CD40抗原表達的疾病的方法。文檔編號A61K39/395GK101237882SQ200680027117公開日2008年8月6日申請日期2006年5月26日優先權日2005年5月26日發明者L·G·普雷斯塔,L·Y·奧康奈爾,S·O·多羅尼娜申請人:西雅圖基因公司;吉寧特有限公司