一種烏拉爾甘草皂苷a的製備方法
2023-04-26 11:58:51
一種烏拉爾甘草皂苷a的製備方法
【專利摘要】本發明公開了一種烏拉爾甘草皂苷A的製備方法，經過提取、結晶、分離、結晶、重結晶最終得到烏拉爾甘草皂苷A。本發明提供的烏拉爾甘草皂苷A的提取方法採用中藥現代化分離純化技術，工藝新穎，適合工業化生產，且本發明所述的方法重複性好，可適用於生產放大，易於推廣，具有很強的實用性。其製備得到的烏拉爾甘草皂苷A結構明確、含量範圍為75%～99.5%。
【專利說明】一種烏拉爾甘草皂苷A的製備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種提取方法，尤其是涉及一種烏拉爾甘草皂苷A的提取方法，屬於成分提取【技術領域】。
【背景技術】
[0002]甘草為豆科植物甘草Glycyrrhizauralensis Fisch.、脹果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.、或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的根和根莖，主產於內蒙古、新疆、甘肅等地。甘草入藥已有悠久歷史，《神農本草經》就將其列為藥之上乘，古代醫學家尊稱其為「國老」。由於其資源珍貴，被國家列入國家二級保護野生藥材。
[0003]甘草中含有包括黃酮類、皂苷類、多糖100多種有效成分，藥理作用主要集中在甘草皂苷、總黃酮、單黃酮等化學物質。目前文獻和專利沒有報導烏拉爾甘草皂苷A製備方法，主要是一些檢測和結構鑑定的研究如瀋陽藥科大學藥學院的木其爾、劉有平、李萌等在中國醫藥工業雜誌ChinesejournalPharmaceuticals 2009, 40 (11)發表的《甘草酸單銨鹽中有關物質的LC-MSn研究》採用LC-MSn法分析了甘草酸單銨鹽原藥中的主成分及其有關物質，通過液相色譜、多級質譜和紫外光譜信息確證主成分甘草酸單銨鹽的結構，推測3個主要有關物質的可能結構為甘草皂苷G2、烏拉爾甘草皂苷A的單銨鹽、烏拉爾甘草皂苷B的單銨鹽或18 α -甘草酸單銨鹽。
[0004]所述的烏拉爾甘草皂苷A的結構式為:
【發明內容】
[0005]本發明所要解決的技術問題是，提供一種重複性好，可適用於生產放大，易於推廣的烏拉爾甘草皂苷A的製備方法。
[0006]為解決上述技術問題，本發明採用的技術方案為:
一種烏拉爾甘草皂苷A的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟:
(I)取烏拉爾甘草藥材，加提取溶劑溶解後，後過濾，濾液在4(T60°C (優選為50°C)的溫度條件下滴加氨水至pH為4?6，優選為5,冷卻,放置,結晶12?36h (優選為24h)後過濾，得到第一濾液；
(3)將步驟(2)所述的第一濾液在55?75°C(優選60°C)的溫度條件下減壓回收提取溶齊U，然後第一濾液濃縮成稠膏，所述的稠膏體積與烏拉爾甘草藥材質量的比值為(0.2^0.5):1，優選0.3:1，向稠膏中加入水，水的加入體積為稠膏體積的2?4倍，優選3倍，然後加熱回流提取廣3次，優選為2次，收集提取液，向提取液中滴加氨水至pH為5?7，優選為6，最後過濾，棄去殘渣並冷卻，得到第二濾液；
(4)將第二濾液上大孔樹脂柱，上柱完成後，加水洗脫去除大極性雜質後，再用濃度為60?95% (最佳濃度為70%)的乙醇洗脫液洗脫，至洗脫液中無烏拉爾甘草皂苷A，乙醇洗脫液的洗脫速度為1000?1500ml/min，且乙醇洗脫液的使用體積與烏拉爾甘草藥材質量的比值為(2?6):1，優選3:1，收集洗脫液； (5)將洗脫液在55?75°C(優選60°C)的溫度條件下減壓濃縮成稠膏，然後在65?750C (優選為70°C)的溫度條件下減壓乾燥，粉碎過40?100目篩，優選為80目，得到烏拉爾甘草皂苷A粗品；
(6)將烏拉爾甘草皂苷A粗品，加入濃度為O?30%(最佳濃度為20%)的醇水提取液加熱回流提取I?3次，優選為2次，且醇水提取液的加入質量為烏拉爾甘草皂苷A粗品質量的2?4倍，優選為3倍，冷卻，過濾，殘渣棄去，提取液上矽膠C18反相柱，上柱完成後，先用濃度為O?30% (最佳濃度為20%)的第一醇水洗脫液洗脫去除大極性雜質後，其中，所述的第一醇水洗脫液的加入體積與烏拉爾甘草皂苷A粗品質量比為(60?100):1，優選80:1，再用濃度為30?50% (最佳濃度為45%)的第二醇水洗脫液洗脫至洗脫液中無烏拉爾甘草皂苷A，所述的第二醇水洗脫液的加入體積與烏拉爾甘草皂苷A粗品質量比為(50?80):1，優選60:1，收集洗脫液，於50?65°C (優選60°C )的溫度條件下將洗脫液濃縮至稠膏質量為烏拉爾甘草阜苷A粗品質量的5?20%,優選為10% ；
(7)向步驟(6)中製備得到的稠膏中加入有機溶解溶劑加熱回流溶解，所述的有機溶解溶劑的加入質量為稠膏質量的2?4倍，優選3倍，然後過濾，將濾液冷卻，加入純度大於98% (優選純度高於99.5%)的烏拉爾甘草皂苷A結晶作為晶種，靜置結晶12?36h，優選24h，過濾，乾燥，利用有機溶劑重結晶，重結晶步驟重複2?4次，得含量為60?99.8%的烏拉爾甘草皂苷A。
[0007]進一步，所述的提取溶劑為甲醇或乙醇，優選乙醇。
[0008]而所述的提取溶劑的濃度為50?95%，優選80%。
[0009]步驟(4 )中所述的大孔樹脂柱中的大孔樹脂為HPD-100、HPD-400、HPD-500、HPD-600、DlOl、LS-300中的任一種。通過正交試驗優選，綜合上樣量、吸附率、解吸速度等各方面因素，優選樹脂型號為LS-300的大孔樹脂。
[0010]且步驟(4)中所述的大孔樹脂柱中大孔樹脂的裝柱量大於柱高的2/3，且所述的大孔樹脂柱的直徑與柱高比為1:5?1:6。
[0011]此外，步驟(6)中的所述的醇水提取液為甲醇水提取液或乙醇水提取液，優選為甲醇水提取液。
[0012]而步驟(7)中所述的有機溶解溶劑為水、甲醇、乙醇中的至少兩種，優選為甲醇?水組合，更優選的比例為70%甲醇。
[0013]更進一步，步驟(7)中所述的重結晶所用的溶劑為水、甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、冰醋酸中國的至少一種，優選為甲醇與水組合，更優選的比例為甲醇:水=80:20。
[0014]本發明的有益效果為:本發明以烏拉爾甘草為原料，經提取、結晶、分離、結晶、重結晶等一系列步驟，製備得到高含量的烏拉爾甘草皂苷A，採用高效液相色譜法測定，其結構明確、含量範圍為75%?99.5% ;本發明提供的烏拉爾甘草皂苷A的提取方法採用中藥現代化分離純化技術，工藝新穎，適合工業化生產，且本發明所述的方法重複性好，可適用於生產放大，易於推廣，具有很強的實用性。
【具體實施方式】
[0015]下面結合具體實施例為本發明進行詳細的說明。
[0016]實施例1 取烏拉爾甘草50kg，分別加80%乙醇600L加熱回流提取2次，每次2小時，合併提取液；提取液濃縮至50L，過濾，濾液加熱至50°C後滴加氨水至pH為5，冷卻，靜置24h結晶，過濾；收集第一濾液，將第一濾液於60°C減壓濃縮至15L ;分別加入45L水加熱回流提取2次，收集提取液，滴加氨水至PH為6，過濾，殘渣棄去，冷卻，得到第二濾液，上LS-300大孔吸附樹脂柱，上柱完成後，加水洗脫去除大極性雜質後，改用150L70%乙醇洗脫，至洗脫液中無烏拉爾甘草皂苷A，收集洗脫液，於60°C減壓濃縮，稠膏於70°C減壓乾燥，粉碎成60目粉末，得烏拉爾甘草皂苷A粗品2.8kg ；
取烏拉爾甘草皂苷A粗品，加入9L20%甲醇加熱回流提取2次，冷卻，過濾，殘渣棄去，濾液上矽膠C18反相柱，上柱完成後，先用220L20%甲醇洗脫，再用180L45%甲醇洗脫，收集洗脫液，洗脫液在50?65°C下減壓濃縮至0.3L ；
將上述稠膏,加入9L70%甲醇加熱回流溶解，過濾，濾液冷卻,加入微量純度為98.3%的烏拉爾甘草皂苷A作為晶種，靜置結晶24小時，過濾，並按上述操作步驟重結晶2次，得白色晶體0.15 kg，採用高效液相色譜法測定，確定產品為烏拉爾甘草皂苷A，且含量為99.4%。
[0017]實施例2
取烏拉爾甘草50kg，分別加80%甲醇250L加熱回流提取2次，每次I小時，合併提取液；提取液濃縮至50L，過濾，濾液加熱至60°C後滴加氨水至pH6，冷卻，靜置12小時結晶，過濾；收集濾液，70°C減壓濃縮至1L ;分別加入30L水加熱回流提取I次，收集提取液，滴加氨水至PH6，過濾，殘渣棄去，冷卻，上LS-300大孔吸附樹脂柱，上柱完成後,加水洗脫去除大極性雜質後，改用100L95%乙醇洗脫，至洗脫液中無烏拉爾甘草皂苷A，收集洗脫液，於70°C減壓濃縮，稠膏於70°C減壓乾燥，粉碎成40目粉末，得烏拉爾甘草皂苷A粗品3.0kg ；取烏拉爾甘草皂苷A粗品，加入9L20%乙醇加熱回流提取I次，冷卻，過濾，殘渣棄去，濾液上矽膠C18反相柱，上柱完成後，先用300L10%乙醇洗脫，再用200L50%乙醇洗脫，收集洗脫液，洗脫液在60°C下減壓濃縮至0.4L ；
將上述稠膏,加入9L60%乙醇加熱回流溶解，過濾，濾液冷卻,加入微量純度為98.3%的烏拉爾甘草皂苷A作為晶種，靜置結晶12小時，過濾，並按上述操作步驟重結晶2次，得白色晶體0.12 kg，採用高效液相色譜法測定，確定產品為烏拉爾甘草皂苷A，含量為81.3%。
[0018]實施例3
取烏拉爾甘草50kg，分別加95%乙醇600L加熱回流提取I次，每次2小時，合併提取液；提取液濃縮至50L，過濾，濾液加熱至50°C後滴加氨水至pH5，冷卻，靜置36小時結晶，過濾；收集濾液，60°C減壓濃縮至20L ;分別加入40L水加熱回流提取3次，收集提取液，滴加氨水至PH5，過濾，殘渣棄去，冷卻，上LS-300大孔吸附樹脂柱，上柱完成後,加水洗脫去除大極性雜質後，改用150L60%乙醇洗脫，至洗脫液中無烏拉爾甘草皂苷A，收集洗脫液，於60°C減壓濃縮，稠膏於70°C減壓乾燥，粉碎成60目粉末，得烏拉爾甘草皂苷A粗品2.7kg ；取烏拉爾甘草皂苷A粗品，加入9L20%甲醇加熱回流提取3次，冷卻，過濾，殘渣棄去，濾液上矽膠C18反相柱，上柱完成後，先用220L20%甲醇洗脫，再用180L40%甲醇洗脫，收集洗脫液，洗脫液在50?65°C下減壓濃縮至0.28L ；
將上述稠膏,加入9L70%甲醇加熱回流溶解，過濾，濾液冷卻,加入微量純度為98.3%的烏拉爾甘草皂苷A作為晶種，靜置結晶24小時，過濾，並按上述操作步驟重結晶2次，得白色晶體0.13 kg，採用高效液相色譜法測定，確定產品為烏拉爾甘草皂苷A，含量為93.5%。
[0019]以上所述僅是本發明專利的優選實施方式，應當指出，對於本【技術領域】的普通技術人員來說，在不脫離本發明專利原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明專利的保護範圍。
【權利要求】
1.一種烏拉爾甘草皂苷A的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟: (1)取烏拉爾甘草藥材，加提取溶劑溶解後，加熱回流提取I?3次，合併提取液，所述的提取溶劑的加入體積與烏拉爾甘草藥材質量的比值為(5?12):1 ； (2)將步驟(I)所述的提取液濃縮至提取溶劑的體積與烏拉爾甘草藥材質量的比值為(0.5?2):1,然後過濾,濾液在4(T60°C的溫度條件下滴加氨水至pH為4飛，冷卻,放置,結晶12?36小h後過濾，得到第一濾液； (3)將步驟(2)所述的第一濾液在55?75°C的溫度條件下減壓回收提取溶劑，然後第一濾液濃縮成稠膏，所述的稠膏體積與烏拉爾甘草藥材質量的比值為(0.2^0.5):1，向稠膏中加入水，水的加入體積為稠膏體積的2?4倍，然後加熱回流提取Γ3次，收集提取液，向提取液中滴加氨水至PH為5?7，最後過濾，棄去殘渣並冷卻，得到第二濾液； (4)將第二濾液上大孔樹脂柱，上柱完成後，加水洗脫去除大極性雜質後，再用濃度為60?95%的乙醇洗脫液洗脫，至洗脫液中無烏拉爾甘草皂苷A，乙醇洗脫液的洗脫速度為1000?1500ml/min，且乙醇洗脫液的使用體積與烏拉爾甘草藥材質量的比值為(2?6):1，收集洗脫液； (5)將洗脫液在55?75°C的溫度條件下減壓濃縮成稠膏，然後在65?75°C的溫度條件下減壓乾燥，粉碎過40?100目篩，得到烏拉爾甘草皂苷A粗品； (6)將烏拉爾甘草皂苷A粗品，加入濃度為O?30%的醇水提取液加熱回流提取I?3次，且醇水提取液的加入質量為烏拉爾甘草皂苷A粗品質量的2?4倍，冷卻，過濾，殘渣棄去，提取液上矽膠C18反相柱，上柱完成後，先用濃度為O?30%的第一醇水洗脫液洗脫去除大極性雜質後，其中，所述的第一醇水洗脫液的加入體積與烏拉爾甘草皂苷A粗品質量比為(60?100):1，再用濃度為30?50%的第二醇水洗脫液洗脫至洗脫液中無烏拉爾甘草皂苷A，所述的第二醇水洗脫液的加入體積與烏拉爾甘草皂苷A粗品質量比為(50?80):1，收集洗脫液，於50?65°C的溫度條件下將洗脫液濃縮至稠膏質量為烏拉爾甘草皂苷A粗品質量的5?20% ； (7)向步驟(6)中製備得到的稠膏中加入有機溶解溶劑加熱回流溶解，所述的有機溶解溶劑的加入質量為稠膏質量的2?4倍，然後過濾，將濾液冷卻，加入純度大於98%的烏拉爾甘草皂苷A結晶作為晶種，靜置結晶12?36h，過濾，乾燥，利用有機溶劑重結晶，重結晶步驟重複2?4次，得含量為60?99.8%的烏拉爾甘草皂苷A。
2.根據權利要求1所述的一種烏拉爾甘草皂苷A的製備方法，其特徵在於，所述的提取溶劑為甲醇或乙醇。
3.根據權利要求1所述的一種烏拉爾甘草皂苷A的製備方法，其特徵在於，所述的提取溶劑為乙醇。
4.根據權利要求2或3所述的一種烏拉爾甘草皂苷A的製備方法，其特徵在於，所述的提取溶劑的濃度為50?95%。
5.根據權利要求2或3所述的一種烏拉爾甘草阜苷A的製備方法,其特徵在於，所述的提取溶劑的濃度為80%。
6.根據權利要求1所述的一種烏拉爾甘草皂苷A的製備方法，其特徵在於，步驟(4)中所述的大孔樹脂柱中的大孔樹脂為HPD-100、HPD-400、HPD-500、HPD-600、DlOl、LS-300中的任一種。
7.根據權利要求1所述的一種烏拉爾甘草皂苷A的製備方法，其特徵在於，步驟(4)中所述的大孔樹脂柱中大孔樹脂的裝柱量大於柱高的2/3，且所述的大孔樹脂柱的直徑與柱聞比為1:5?1:6。
8.根據權利要求1所述的一種烏拉爾甘草皂苷A的製備方法，其特徵在於，步驟(6)中的所述的醇水提取液為甲醇水提取液或乙醇水提取液。
9.根據權利要求1所述的一種烏拉爾甘草皂苷A的製備方法，其特徵在於，步驟(7)中所述的有機溶解溶劑為水、甲醇、乙醇中的至少兩種。
10.根據權利要求1所述的一種烏拉爾甘草皂苷A的製備方法，其特徵在於，步驟(7)中所述的重結晶所用的溶劑為水、甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、冰醋酸中國的至少一種。
【文檔編號】C07J9/00GK104292286SQ201410473796
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年9月17日 優先權日:2014年9月17日
【發明者】金顯友, 楊永安, 張宇, 易銘, 湯文建 申請人:江蘇天晟藥業有限公司