以人體毛髮檢測體內多肽(蛋白)類生殖激素含量的方法
2023-12-09 04:18:21
專利名稱：以人體毛髮檢測體內多肽(蛋白)類生殖激素含量的方法
技術領域：
本發明涉及的是一種對人體內多肽(蛋白)類生殖激素含量的檢測方法，具體講是一種由以人的毛髮為樣品測定人體內多肽(蛋白)類生殖激素含量的檢測方法。
在人體的生殖內分泌激素中，除甾體類激素外，泌乳素(PRL)、黃體生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)等多肽(蛋白)類生殖激素是另一類重要組成。其不僅對正常的新陳代謝和生理功能有重要的影響，而且體內不同的多肽(蛋白)類激素含量水平的變化也常可預示和反映身體的不同生理狀況，因而對其在體內含量水平的檢測常用於醫學診斷和其它有關領域，特別是在與生殖生理和病理以及計劃生育等有關的領域的研究和應用中的分析判斷。
目前在生殖內分泌研究及臨床工作中進行生殖激素檢測時，都是採集人體的血液、唾液、尿液、精液或組織作為檢測樣品，其中大多又都是依賴血樣樣品進行的。這些方法，特別是抽取血樣的方法，許多缺點是十分明顯的。首先，被採樣者必須到醫院或有相應條件的地點才能取血，血液的抽取量不能太大，並還容易因此傳播或被傳染上疾病，因而許多人不易接受。其次，血液樣品的處理過程麻煩，易被汙染，且必須在冰箱中保存，又不宜長途運輸。
本發明的目的是針對上述情況，提供一種測定人體內多肽(蛋白)類生殖激素含量的檢測方法，具體講是以人體毛髮檢測體內多肽(蛋白)類生殖激素含量的方法，以克服和避免目前以體液，特別是以血液為樣品進行檢測所存在的缺點和問題。
本發明的以人體毛髮檢測體內多肽(蛋白)類生殖激素含量的方法，是以人體的頭髮、鬍鬚等毛髮為採樣樣品，其中特別是以人的頭髮為採樣樣品最方便和有實際應用價值。測定方法按下述步驟操作1)將人體毛髮樣品置於pH 7.2-7.4的磷酸緩衝液中，於室溫下混旋至少1分鐘後，於0℃-8℃放置24小時，其間至少每小時混旋1次；
2)將上步混合物離心沉澱，取上清液備用；3)用常規的放射免疫法測定上步備用清液中的多肽(蛋白)類激素含量。
在上述的檢測方法中，一般來說，第1)步中的毛髮樣品以剪碎、粉碎或磨碎後再與磷酸緩衝液相混旋為好，有利於待測成分的溶解浸出。毛髮樣品的重量與磷酸緩衝液體積間的用量比例一般可以為150毫克∶600微升。混旋後一般可在溫度為4℃的普通冰箱中放置。
本專利申請的發明以採集人頭髮樣品為例，按下述方法進行處理，提取不同的多肽激素，進行了檢測和有關的分析研究。
將人的頭髮剪碎後，按150毫克毛髮加pH 7.2-7.4的磷酸緩衝液600微升的比例混合，並置於加蓋的離心管中，於室溫下混旋至少1分鐘後，至少於4℃左右的溫度下放置24小時，其間至少每小時應再混旋1次。然後將上步混合物於離心機在8000轉/分鐘轉速下離心處理5分鐘，取上清液備用。取此上清液100微升於試管中，按常規測血清多肽(蛋白)激素的放射免疫法(RIA)測定其中的多肽(蛋白)類激素含量。並以採用125碘標記的RIA檢測方法為例，對上述人發樣品中所含的多肽類生殖激素的含量變化情況及影響因素進行了檢測和進一步的深入研究。
將樣本數n＝20例從髮根部剪下的在24小時內未用任何洗髮劑洗過的女性頭髮樣品分為三份，一份不經洗滌直接檢測；一份用市售的「詩芬牌」洗髮劑洗兩次後，再用清水漂洗三次；再一份用市售的「奧尼牌」洗髮劑洗兩次後，再用清水漂洗三次。待洗過的頭髮樣品自然晾乾後，將三份樣品分別剪碎，按上述方法處理，並對黃體生成素(LH)和泌乳素(PRL)進行檢測。結果如表1所示。
表1 洗滌與否對毛髮樣品激素含量檢測的影響
由表1所示的數據可知，其中激素含量的最大差異組為19.40和17.96，採用統計學對兩樣本均數比較方法的t檢驗，t＝0.2102，t＜0.681，則P＞0.50，無顯著差異。
另又取10～50釐米長的女性頭髮樣品(n＝28)，按發尖部、發中段和髮根部分為三段，按上述方法進行處理後，對三部分樣品分別檢測，以考察頭髮不同部位中的多肽(蛋白)類生殖激素含量及其分布的差異。檢測結果如表2所示。
表2 頭髮不同部位中激素含量的檢測結果
在表2所示的檢測結果中，其中的最大差異未超過表1所示的結果，經統計學處理，其同樣無顯著性差異。
上述實驗結果清楚表明，人體內的多肽(蛋白)類激素在人的頭髮中是普遍存在的，且其在頭髮中的存在和分布可不受頭髮的根、中、梢等採樣部位差異的影響，也表明了其含量不會因是否用洗髮劑洗滌等外部處理因素的影響而改變，具有相對的穩定性，因而使本發明的方法具有了可實際應用的基礎和價值。同時，上述實驗所表明的另一方面的重要的意義和價值還在於如果某一洗髮劑或化裝品對頭髮或其它使用部位的毛髮的多肽(蛋白)類激素檢測產生較大或是嚴重的影響，則至少可以作為表明該洗髮劑或化裝品很可能是不適合於人體使用的重要依據。
分別將不同樣本數的女性頭髮樣品與血液樣品中的同種激素的含量進行檢測，並進行統計學處理，作其相關性研究。檢測結果如表3所示。
表3 人發與血液中同種多肽激素間的相關性
由表3所示的結果可以看出，人發與血液中的同種多肽(蛋白)類激素間是存在著密切的相關性的。對黃體生成素(LH)和泌乳素(PRL)分別作的統計學處理結果分別為P＜0.001和P＜0.005充分表明其間都高度顯著性相關。
由於迄今為止，人們並未認識到在人發中含有多肽(蛋白)類生殖激素，並有著與人體生理、病理狀況的變化相適應的自身變化規律及其重要的應用價值，因此本發明的方法在科學上的重要意義是顯而易見的。上述實驗結果不僅已表明對人體內其它的多肽(蛋白)類生殖激素的檢測同樣可以實現，而且所表明的更重要的實際應用意義和價值同樣也是顯而易見的，它可以徹底改變對人體多肽(蛋白)類生殖激素的檢測必須到醫院或有相應條件的地點抽取血樣的傳統方式，以人體體表的毛髮，特別是以量大易得而目前通常被視為廢棄物的人頭髮為檢測樣品，可以具有同等的意義和作用，且更為簡便易行，沒有任何痛苦，不會感染和傳播疾病，因而易於為人們廣泛接受，避免了隨對血液的採樣和檢測而帶來的諸多弊端和不便，又大大降低了檢測的費用成本，在疾病的醫學檢驗和診斷上有重大的現實意義和使用價值，在科學研究上也有重要意義，可成為內分泌研究上的一個重要手段。
權利要求
1.一種以人體毛髮檢測體內多肽(蛋白)類生殖激素含量的方法，其特徵在於按下述步驟操作1)將人體毛髮樣品置於pH 7.2-7.4的磷酸緩衝液中，於室溫下混旋至少1分鐘後，於0℃-8℃放置24小時，其間至少每小時再混旋1次；2)將上步混合物離心沉澱，取上清液備用；3)用常規的放射免疫法測定上步備用清液中的多肽(蛋白)類激素含量。
2.如權利要求1所述的方法，其特徵在於所說的人體毛髮樣品剪碎或粉碎後與磷酸緩衝液混旋。
3.如權利要求1所述的方法，其特徵在於所說的第1)步中毛髮重量與磷酸緩衝液體積間的用量比例為150毫克∶600微升。
4.如權利要求1所述的方法，其特徵在於所說的混旋後的放置溫度為4℃。
全文摘要
本發明涉及的是以人體毛髮檢測體內多肽(蛋白)類生殖激素含量的方法,按下述步驟操作:1)將人體毛髮樣品置於pH7.2—7.4的磷酸緩衝液中,於室溫下混旋至少1分鐘後,於0℃—8℃放置24小時,其間至少每小時混旋1次;2)將上步混合物離心沉澱,取上清液備用;3)用常規的放射免疫法測定上步備用清液中的多肽(蛋白)類激素含量。
文檔編號G01N33/534GK1242521SQ99114889
公開日2000年1月26日 申請日期1999年5月25日 優先權日1999年5月25日
發明者楊惠鍾, 蘭君, 孟衍健, 萬學俊 申請人:四川省計劃生育科學研究所