硝基呋喃代謝物檢測裝置製造方法

2023-12-08 20:30:36 2

硝基呋喃代謝物檢測裝置製造方法
【專利摘要】本實用新型涉及生物【技術領域】，具體涉及一種硝基呋喃代謝物檢測裝置。本實用新型公開了一種硝基呋喃代謝物檢測裝置，包括反應杯和試紙條兩部分。本實用新型的使用方法是將待檢樣本加入反應杯中，樣本中的硝基呋喃代謝物與標記物-硝基呋喃代謝物抗體發生充分反應。反應結束後，將試紙條的樣品墊一端插入反應杯中，反應杯中的液體通過層析作用到達層析膜，與層析膜上檢測區和質控區中的分子發生反應。反應結束，檢測區信號的強弱提示所檢測樣本中相應硝基呋喃代謝物濃度的高低（濃度越高，信號越弱）。本實用新型具有靈敏性好、操作簡便快捷、成本低、易於推廣等優勢。
【專利說明】硝基呋喃代謝物檢測裝置
【技術領域】
[0001]本實用新型涉及生物【技術領域】，具體涉及一種呋喃唑酮代謝物、呋喃它酮代謝物、呋喃妥因代謝物、呋喃西林代謝物檢測裝置及其使用方法。
【背景技術】
[0002]硝基呋喃類藥物(Nitrofurans)是一類人工合成的具有5_硝基呋喃環母核的廣譜抗菌藥物，主要有呋喃唑酮(Furazolidone)、呋喃它酮(Furaltadone)、呋喃西林(Nitrofurazone)、呋喃妥因(Nitrofurantoin)、硝呋索爾(Nifursol)、呋喃苯烯酸鈉(Nifurstyrenate sodium)、硝呋酹醯肼(Nifuroxazide)等。這類藥物因其具有抑菌性和殺菌性，曾廣泛用於家禽、家畜、水產動物的細菌性疾病的預防與治療，還曾用作飼料添加劑。硝基呋喃類藥物具有抗菌譜廣、抑菌和殺菌作用不受膿液和組織分解產物的影響、不易產生耐藥性、口服吸收迅速、與磺胺類藥和抗生素無交叉耐藥性、使用方便等優點，在獸醫臨床上曾被廣泛使用。
[0003]硝基呋喃類藥物的抗菌作用機理是幹擾細菌體內的氧化還原酶系統，使細菌代謝紊亂。這類藥物在動物體中數小時內可降解，但其代謝產物能與蛋白質緊密結合，形成穩定的殘留物，殘留時間達數周之久，甚至在蒸煮、烘烤、磨碎和微波加熱過程中也無法有效降解。近年來的研究結果表明，硝基呋喃類藥物是一類具有潛在致癌和誘導有機體產生突變的物質，可以引起某種基因突變。
[0004]由於此類藥物具有潛在的致癌性和致突變作用，為了保證動物性食品安全和保護消費者健康，上述幾種硝基呋喃類藥物已在諸多國家和地區被禁止用於食品動物。歐盟(EU)已經將硝基呋喃類藥物列為A類禁用藥，從1997年I月I日起禁止在動物飼料中添加任何硝基呋喃類藥物，規定其在動物源性食品中的殘留檢測限為1.0g/kg。2004年美國FDA公布了禁止在進口動物源性食品中使用的11種藥物名單，其中包括呋喃西林和呋喃唑酮。目前，歐盟、美國及其他國家都對進口蜂蜜中硝基呋喃類藥物殘留做了非常嚴格的限制，要求硝基呋喃代謝物殘留不得超過1.0 μ g/kg。我國出口動物源性食品多次被檢出硝基呋喃等藥物超過限量要求而遭遇退貨，我國也於2002年頒布了禁止使用硝基呋喃類藥物的禁令。然而，由於此類藥物高效廉價，違法使用的現象仍然存在。因此，研製準確、靈敏、特異性高、方便高效穩定的硝基呋喃類藥物檢測方法非常必要。
[0005]硝基呋喃類藥物很不穩定，很容易生成代謝物，由於代謝物比較穩定也有致癌作用，所以在食品安全的檢測中檢測硝基呋喃代謝物。早期硝基呋喃類藥物的分析方法主要是液相色譜、紫外檢測、薄層色譜法、酶聯免疫吸附實驗(ELISA)、免疫層析法等。液相色譜、紫外檢測、薄層色譜、酶聯免疫吸附實驗均存在需要昂貴的儀器設備和專業操作人員、操作繁瑣等缺陷。而免疫層析法以其簡便快速等特點被廣泛採用。但是現有的檢測硝基呋喃類藥物殘留的免疫層析法普遍存在操作繁瑣、檢測靈敏度低等缺陷。

【發明內容】
[0006]本實用新型擬針對現有硝基呋喃類藥物殘留免疫層析檢測技術的不足和缺陷，提供一種快速檢測樣品中呋喃唑酮代謝物(Α0Ζ)、呋喃它酮代謝物(AMOZ)、呋喃妥因代謝物(AHD)、呋喃西林代謝物(SEM)殘留的免疫層析裝置及其使用方法。
[0007]本實用新型的技術方案:一種硝基呋喃代謝物檢測裝置，包括反應杯和試紙條兩部分。其特徵是反應杯中含有標記物-硝基呋喃代謝物抗體偶聯物，試紙條是由底板以及底板上依次搭接粘貼的樣品墊、層析膜、吸水墊組成。
[0008]如上所述的硝基呋喃代謝物檢測裝置，其特徵在於反應杯中含有標記物-AOZ抗體、標記物-AMOZ抗體、標記物-AHD抗體、標記物-SEM抗體中的一到四種。試紙條包括底板以及底板上依次搭接粘貼的樣品墊、層析膜、吸水墊。層析膜上設有相應AOZ、AMOZ、AHD、SEM中的一到四個檢測區和質控區。
[0009]如上所述的檢測區，其特徵是檢測區包被有AOZ-載體蛋白偶聯物、AMOZ-載體蛋白偶聯物、AHD-載體蛋白偶聯物、SEM-載體蛋白偶聯物。
[0010]如上所述的質控區，其特徵是該區域的作用在於提示試紙條的性能指標是否降低，還可以是僅作為判斷檢測區信號強弱的參考區，還以是阻斷易於與同下遊檢測區的包被抗原發生結合的標記物-抗體進入下遊檢測區。
[0011]如上所述的免疫層析檢測裝置，其特徵是其使用方法是將待檢樣本加入反應杯中，樣本中的呋喃唑酮代謝物(Α0Ζ)、呋喃它酮代謝物(AMOZ)、呋喃妥因代謝物(AHD)、呋喃西林代謝物(SEM)與標記物-AOZ抗體、標記物-AMOZ抗體、標記物-AHD抗體、標記物-SEM抗體充分反應，反應結束後，將試紙條的樣品墊一端插入反應杯中，反應杯中的液體通過層析作用到達層析膜，與層析膜上檢測區和質控區中的分子發生反應，檢測區信號的強弱提示所檢測樣本中相應硝基呋喃代謝物濃度的高低(濃度越高，信號越弱)。
[0012]本實用新型具有以下有益效果:
[0013]I)靈敏性好。本實用新型提供了一種含有標記物-硝基呋喃代謝物抗體的反應杯。待檢樣品首先在該反應杯中與標記物-硝基呋喃代謝物抗體發生充分的結合反應。與現有帶有結合墊的的免疫層析試紙條相比，本實用新型反應更為充分，能夠有效提高檢測的靈敏性。
[0014]2)簡便快捷。本實用新型提供的檢測裝置能夠一次檢測四種硝基呋喃代謝物殘留，檢測時間更短，檢測更為方便。整個檢測過程(包含樣品前處理)僅需75min左右。
[0015]3)成本低，易於推廣。本實用新型生產工藝簡單，成本低廉，易於大規模生產，也易於推廣使用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]下面結合附圖對本實用新型做進一步說明。
[0017]圖1是本實用新型反應杯的結構示意圖。
[0018]圖2是本實用新型四聯檢試紙條的結構示意圖。
[0019]圖3是本實用新型三聯檢試紙條的結構示意圖。
[0020]圖4是本實用新型二聯檢試紙條的結構示意圖。
[0021]圖5是本實用新型單檢試紙條的結構示意圖。
[0022]圖1中9:反應杯；10:標記物抗體偶聯物(標記物-AOZ抗體、標記物-ΑΜ0Ζ抗體、標記物-AHD抗體、標記物-SEM抗體)。
[0023]圖2中1:樣品墊;2、3、4、5、6:檢測區及質控區；7:層析膜；8:吸水墊。
[0024]圖2中1:樣品塾;11、12、13、14:檢測區及質控區；7:層析月吳；8:吸水塾。
[0025]圖3中1:樣品墊;15、16、17:檢測區及質控區；7:層析膜；8:吸水墊。
[0026]圖5中1:樣品塾；18:檢測區；19:質控區；7:層析I旲；8:吸水塾。
【具體實施方式】
[0027]從圖1、圖2、圖3、圖4、圖5可以看出，一種硝基呋喃代謝物檢測試紙條，其包反應杯(圖1)和試紙條(圖2/圖3/圖4/圖5)兩部分。反應杯(圖1)中含有標記物-抗體偶聯物10 (標記物-AOZ抗體、標記物-AMOZ抗體、標記物-AHD抗體、標記物-SEM抗體)。試紙條(圖2、圖3、圖4、圖5)包括底板以及底板上依次搭接粘貼的樣品墊1、層析膜7、吸水墊
8。層析膜 7 上設有檢測區和質控區(2、3、4、5、6、11、12、13、14、15、16、17、18、19)。
[0028]實施例1四聯檢反應杯及試紙條的製備
[0029](一)反應杯的製備
[0030]I)往可拆卸96孔微孔板中按照50 μ L/孔的量加入標記物-AOZ抗體、標記物-AMOZ抗體、標記物-AHD抗體、標記物-SEM抗體的混合溶液；
[0031]2)將反應杯進行冷凍乾燥；
[0032]3)於乾燥環境中保存。
[0033](二)試紙條的製備
[0034]樣品墊的製備:將纖維素膜剪成1.5 X 30cm規格的條帶，備用；
[0035]層析膜的製備:將硝酸纖維素膜(NC膜)剪成2.5 X 30cm規格的條帶，在NC膜的不同位置噴塗AOZ-載體蛋白偶聯物、AMOZ-載體蛋白偶聯物、AHD-載體蛋白偶聯物、SEM-載體蛋白偶聯物、質控線(質控線根據實際需要進行噴塗)，室溫晾乾；
[0036]吸水紙的製備:將吸水紙裁成3.5 X 30cm的條帶，備用；
[0037]試紙條的組裝:將層析膜、吸水紙、樣品墊依次貼在底板上，並切成5_寬的試紙條，2_8°C乾燥保存。
[0038]實施例2三聯檢反應杯及試紙條的製備
[0039](一)反應杯的製備
[0040]I)往可拆卸96孔微孔板中按照50 μ L/孔的量加入標記物-AOZ抗體、標記物-AMOZ抗體、標記物-AHD抗體的混合溶液；
[0041]2)將反應杯進行冷凍乾燥；
[0042]3)於乾燥環境中保存。
[0043](二)試紙條的製備
[0044]樣品墊的製備:將纖維素膜剪成1.5 X 30cm規格的條帶，備用；
[0045]層析膜的製備:將硝酸纖維素膜(NC膜)剪成2.5 X 30cm規格的條帶，在NC膜的不同位置噴塗AOZ-載體蛋白偶聯物、AMOZ-載體蛋白偶聯物、AHD-載體蛋白偶聯物質控線(質控線根據實際需要進行噴塗)，室溫晾乾；
[0046]吸水紙的製備:將吸水紙裁成3.5 X 30cm的條帶，備用；
[0047]試紙條的組裝:將層析膜、吸水紙、樣品墊依次貼在底板上，並切成5_寬的試紙條，2-8°C乾燥保存。
[0048]實施例3 二聯檢反應杯及試紙條的製備
[0049](一)反應杯的製備
[0050]I)往可拆卸96孔微孔板中按照50 μ L/孔的量加入標記物-AOZ抗體、標記物-AMOZ抗體的混合溶液；
[0051]2)將反應杯進行冷凍乾燥；
[0052]3)於乾燥環境中保存。
[0053](二)試紙條的製備
[0054]樣品墊的製備:將纖維素膜剪成1.5 X 30cm規格的條帶，備用；
[0055]層析膜的製備:將硝酸纖維素膜(NC膜)剪成2.5 X 30cm規格的條帶，在NC膜的不同位置噴塗AOZ-載體蛋白偶聯物、AMOZ-載體蛋白偶聯物、質控線(質控線根據實際需要進行噴塗)，室溫晾乾；
[0056]吸水紙的製備:將吸水紙裁成3.5 X 30cm的條帶，備用；
[0057]試紙條的組裝:將層析膜、吸水紙、樣品墊依次貼在底板上，並切成5_寬的試紙條，2_8°C乾燥保存。
[0058]實施例4單檢反應杯及試紙條的製備
[0059](一)反應杯的製備
[0060]I)往可拆卸96孔微孔板中按照50 μ L/孔的量加入標記物-AMOZ抗體溶液。
[0061]2)將反應杯進行冷凍乾燥；
[0062]3)於乾燥環境中保存。
[0063](二)試紙條的製備
[0064]樣品墊的製備:將纖維素膜剪成1.5 X 30cm規格的條帶，備用；
[0065]層析膜的製備:將硝酸纖維素膜(NC膜)剪成2.5 X 30cm規格的條帶，在NC膜上依次AMOZ-載體蛋白偶聯物、羊抗鼠二抗，室溫晾乾；
[0066]吸水紙的製備:將吸水紙裁成3.5 X 30cm的條帶，備用；
[0067]試紙條的組裝:將層析膜、吸水紙、樣品墊依次貼在底板上，並切成5_寬的試紙條，2-8°C乾燥保存。
[0068]實施例5檢測樣品中的硝基咲喃代謝物殘留
[0069]I)魚蝦、畜禽肉等去皮、脂肪和結締組織，均質，稱取2_3g均質物於15ml離心管中；
[0070]2)加入4ml蒸餾水，0.5ml試劑A和200 μ I衍生化試劑，充分振蕩，在65°C水浴中孵育30 min ；
[0071]3)分別加入Iml試劑B, 0.4mI試劑C和4mI乙酸乙酯,劇烈振蕩3min ；
[0072]4)室溫下,4000r/min離心5min,取出2ml上層液體,吹乾；
[0073]5)用0.6ml正已烷溶解乾燥物，充分振蕩混合lmin，加入0.5ml試劑D充分振蕩混合Imin ；
[0074]6)在室溫下(20-25°C)靜置5min，取下層溶液用於檢測；
[0075]7)將裝有反應杯的鋁箔袋恢復至室溫，取出所需數量的反應杯及相應數量試紙條;[0076]8)移取200μ I下層樣品溶液(步驟6)於反應微杯中，抽吸5_10次，混合均勻，靜置 5min ；
[0077]9)將硝基呋喃代謝物檢測試紙條的樣品墊一端插入相應的反應杯中，計時3min後，從反應杯中取出試紙條，並去掉試紙條上的樣品墊，立刻進行結果判讀(檢測線信號越弱，樣品中相應硝基呋喃代謝物殘留濃度越高)。
【權利要求】
1.一種硝基呋喃代謝物檢測裝置，包括反應杯和試紙條兩部分，其特徵是反應杯中含有標記物-硝基呋喃代謝物抗體偶聯物，試紙條是由底板以及底板上依次搭接粘貼的樣品墊、層析膜、吸水墊組成。
2.如權利要求1所述的硝基呋喃代謝物檢測裝置，其特徵是所述標記物-硝基呋喃代謝物抗體偶聯物是標記物-AOZ抗體、標記物-AMOZ抗體、標記物-AHD抗體、標記物-SHM抗體中的一種。
3.如權利要求2所述的硝基呋喃代謝物檢測裝置，其特徵是在層析膜上設有與所述硝基呋喃代謝物相對應的檢測區及質控區。
4.如權利要求3所述的硝基呋喃代謝物檢測裝置，其特徵是檢測區包被有與所述硝基呋喃代謝物相對應的硝基呋喃代謝物-載體蛋白偶聯物。
【文檔編號】G01N33/544GK203432971SQ201320011697
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2013年1月10日 優先權日:2013年1月10日
【發明者】朱海, 李金峰, 王西麗, 付輝, 李細清, 林季敏, 石錫蓮, 張美娟, 馬濤, 李穎 申請人:深圳市易瑞生物技術有限公司