月桂醯脯氨醯胺基酸甲酯作為新型促透劑的合成方法及其應用的製作方法

2023-12-08 19:02:21 1

專利名稱：：月桂醯脯氨醯胺基酸甲酯作為新型促透劑的合成方法及其應用的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種新型經皮給藥滲透促進劑的製備方法，以及其對親脂性藥物尼莫地平和親水性藥物水楊酸的促進滲透應用。屬生物醫藥領域。
背景技術：
：近十年來，經皮吸收系統一直是醫藥領域重要的研究和開發對象。該類製劑為一些長期性疾病及慢性疾病的治療及預防創造了一種簡單方便，是一類行之有效的給藥方式。其有避免首過效應，改善病人的順應性，減少給藥次數，提高安全性等優點。由於經皮給藥有諸多優點，經皮給藥滲透促進劑的研究成為藥學工作者研究的熱點，早在1970年，有研究者成功地應用二甲基亞礬和二甲基己酞胺促進甾體藥物局部給藥並且獲得了專利；1976年美國Nelson公司從一系列N-烴基氮雜環酮類化合物中開發出氮酮(Azone)，並在美國獲得專利，專利號為US3989816，US4301481和US4316893;我國在1987年將其列入中國藥典。有研究發現用脂肪酸和胺基酸這兩種人體內源性物質構成的N-十二醯基-L-胺基酸甲酯具有較好的促透性能，其中，含有脯氨酸的化合物作為促透劑時藥物的積累濃度最高，本專利作者分析由於脯氨酸其剛性五元環與疏水的脂肪酸結合，結構與氮酮類似，所以效果優於其他化合物。還有研究者合成了兩個系列的化合物，這兩個系列的化合物都含有一個內醯胺五元環和一個內醯胺七元環，並結合有疏水的尾部，疏水尾部分別通過酯鍵和醯胺鍵結合，其內醯胺結構與疏水尾部結構均與氮酮類似，試驗結果證實，以酯鍵連接的疏水尾部的系列化合物促透性能良好。目前，常用的透皮促進劑種類越來越多，如亞碸及其類似物、氮酮、脂肪酸、醇類、表面活性劑、尿素、萜類等。
發明內容本發明的目的之一是提供一種含剛性五元環的皮膚促透劑及其製備方法；本發明的目的之二是提供一種含有脂溶性藥物尼莫地平和水溶性藥物水楊酸的油膏劑的製備方法；本發明的目的之三是提供一種以人工合成膜代替皮膚進行促透劑性能評價的方法。本發明上述目的是通過以下技術方案來實現的一種結構如下式的具有兩親性且含有脯氨酸的新型皮膚促透化合物，其中，AA代表十二種不同的胺基酸，選自Ala，Phe，Gly，Ile，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Val，Trp或Tyr。將月桂酸與脯氨酸用活潑酯的方法縮合得到中間體C12-Pro-OH，此中間體再與十二種不同胺基酸甲酯進行縮合即製備得到上述系列化合物。本發明化合物的製備方法，包括以下步驟(1)月桂酸與脯氨酸以活潑酯的方法合成中間體C12-Pro-OH;(2)將中間體d2-Pro-OH分別與Ala-0Me，Phe-0Me,Gly-0Me，11e-0Me，Leu-0Me，Met-0Me，Pro-0Me，Ser-0Me，Thr-0Me，Val-0Me，Trp-0Me或Tyr-OMe縮合，即得相應化合物。本發明包括含有上述化合物的藥物組合物。其中含有藥物，上述化合物以及藥物可接受的載體。本發明的藥物組合物，其中含有上述的化合物0.01%-99.99%，藥物重量百分含量為0.1%-5%，其餘為藥物可接受的載體。本發明的藥物組合物，選自軟膏劑、眼膏劑、凝膠劑或栓劑。其中藥物選自外用藥物。所述外用藥物選自脂溶性藥物或水溶性藥物。其中脂溶性藥物選自尼莫地平，水溶性藥物選自水楊酸。本發明還包括本發明的化合物在製備藥物、保健品、農藥及化妝品中的應用。目前透皮吸收的研究中主要應用動物皮和人工合成皮作為模擬皮膚的介質，動物皮雖然應用比較廣泛，但由於動物個體差異的原因，對於促透劑的促透性能的評價標準不能很好的統一，且動物皮的通透性與人皮相比有一定差距；目前，人工合成皮已經越來越多地得到了研究人員的關注，本專利所使用的人工合成膜——聚碸膜(Pall，66221)已經在Hanson公司和美國FDA的合作項目上對含氫化可的松的軟膏劑進行了研究使用。本發明的化合物和現有技術相比具有以下優點所有化合物均由內源性物質(胺基酸和脂肪酸)構成，幾乎無毒，無刺激性，適合於經皮給藥製劑和化妝品中長期使用。:圖l為尼莫地平組Q-t圖圖2為水楊酸組Q-t圖具體實施例方式為了進一步闡述本發明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，它們僅用來對本發明進行具體描述，不應當理解為對本發明的限制。實施例1C12-Pro-OH的製備冰浴條件下，1.49g(lOmmol)N-羥基琥珀醯亞胺(HOSu)及2.0g(10mmo1)月桂酸在20ml無水四氫呋喃(THF)中攪拌；2.67g(13mmol)二環己基碳二亞胺(DCC)的溶於無水四氫呋喃中，滴加入反應液中。反應6小時後減壓過濾去除二環己基脲(DCU)後用乙酸乙酯(EA)溶解，減壓過濾DCU後用飽和NaHC03溶液洗3次，飽和NaCl溶液洗3次後加入無水Na2S04乾燥，過夜。過濾去除Na2S04後減壓濃縮至幹。此產物用無水THF溶解，加入Pro，用N-甲基嗎啉(NMM)調節pH值到8-9，反應6小時。將反應液減壓濃縮後，用飽和KHS04溶液溶解，並用EA萃取兩次，合併EA層後，用飽和NaCl溶液萃取l次。EA層用無水Na2S04乾燥過夜，過濾去除NaS04，溶液減壓濃縮至幹，得到中間體Cu-Pro-OH，放入乾燥器備用。實施例2d2-Pro-Gly-OMe的製備冰浴條件下，將2.97g中間體月桂醯脯氨酸(C12-Pro-OH)用無水THF溶解，力口入1.35gt(10mmo1)l-羥基苯並三唑(HOBt),2,67g(13mmol)DCC，反應6小時後，過濾DCU，加入1.25g(10mmol)Gly-OMe，用NMM調節pH值到9，反應10小時，減壓濃縮至幹。用EA溶解，過濾去除DCU，得到的溶液依次用飽和NaHC03水溶液、飽和NaCl溶液、飽和KHS04溶液和飽和NaCl溶液各洗3次。EA層用無水5Na2S04乾燥、過濾、濾液減壓濃縮得目標化合物C12-Pro-Gly-OMe粗品。用石油醚溶解後靜置析晶，得到白色粉末固體。ESI-MS(m/z)369[M+H]+,737[2M+H]十,759[2M+Na]+["]『=-49.8333mp.45.4-45,6。C實施例3Cu-Pro-Phe-OMe的製備冰浴條件下，將2.97g中間體月桂醯脯氨酸(C12-Pro-OH)用無水THF溶解，加入1.35g(10mmol)HOBt，2.67g(13mmol)DCC，反應6小時後，過濾DCU,加入2.15(10mmol)Phe-OMe，用NMM調節pH值到9，反應10小時，減壓濃縮至幹。用EA溶解，過濾去除DCU，得到的溶液依次用飽和NaHC03水溶液、飽和NaCl溶液、飽和KHS04溶液和飽和NaCl溶液各洗3次。EA層用無水Na2S04乾燥、過濾、濾液減壓濃縮得目標化合物d2-Pro-Phe-OMe粗品。柱層析分離得到白色粉末狀標題化合物。ESI墨MS(m/z)459[M+H]+,481[M+Na]+，940[2M+Na]+L"Jd=-34,1667mp.44.4-45-0。C實施例4C12-Pro-Ile-OMe的製備冰浴條件下，將2.97g中間體月桂醯脯氨酸(C12-Pro-OH)用無水THF溶解，加入1.35g(10mmol)HOBt，2.67g(13mmol)DCC，反應6小時後，過濾DCU,加入1.81g(10mmol)Ile-OMe，用NMM調節pH值到9，反應10小時，減壓濃縮至幹。用EA溶解，過濾去除DCU，得到的溶液依次用飽和NaHC03水溶液、飽和NaCl溶液、飽和KHS04溶液和飽和NaCl溶液各洗3次。EA層用無水Na2S04乾燥、過濾、濾液減壓濃縮得目標化合物d2-Pro-Ile-OMe粗品。柱層析分離得到無色透明油狀標題化合物。ESI-MS(m/z)425[M+H]+,447[M+Na]+[°^°=-50.7333實施例5C12-Pro-Leu-OMe的製備冰浴條件下，將2.97g中間體月桂醯脯氨酸(C12-Pro-OH)用無水THF溶解，加入1.35g(10mmol)HOBt，2.67g(13mmol)DCC,反應6小時後，過濾DCU，加入1.81g(10mmol)Leu-OMe，用NMM調節pH值到9，反應10小時，減壓濃縮至幹。用EA溶解，過濾去除DCU，得到的溶液依次用飽和NaHC03水溶液、飽和NaCl溶液、飽和KHS04溶液和飽和NaCl溶液各洗3次。EA層用無水Na2S04乾燥、過濾、濾液減壓濃縮得目標化合物C!2-Pro-Leu-OMe粗品。柱層析分離得到白色蠟狀標題化合物。ESI-MS(m/z)425[M+H]+，849[2M+H]+,869[2M+Na]+6L"」d=-57.8788mp.41.8-42.2。C實施例6d2-Pro-Pro-OMe的製備冰浴條件下，將2.97g中間體月桂醯脯氨酸(C12-Pro-OH)用無水THF溶解，加入1.35g(10mmol)HOBt，2.67g(13mmol)DCC，反應6小時後，過濾DCU，加入1.61g(10mmol)Pro-OMe，用NMM調節pH值到9，反應10小時，減壓濃縮至幹。用EA溶解，過濾去除DCU，得到的溶液依次用飽和NaHC03水溶液、飽和NaCl溶液、飽和KHS04溶液和飽和NaCl溶液各洗3次。EA層用無水Na2S04乾燥、過濾、濾液減壓濃縮得目標化合物d2-Pro-Pro-OMe粗品。柱層析分離得到白色蠟狀標題化合物。ESI-MS(m/z)409[M+H]+,431[M+Na]+[°^°=71,1111mp.26.1-26.6.。C實施例7C12-Pro-Met-OMe的製備冰浴條件下，將2.97g中間體月桂醯脯氨酸(C12-Pro-OH)用無水THF溶解，加入1.35g(10mmol)HOBt，2.67g(13mmol)DCC，反應6小時後，過濾DCU，加入1.99g(10mmol)Met-OMe，用NMM調節pH值到9，反應10小時，減壓濃縮至幹。用EA溶解，過濾去除DCU，得到的溶液依次用飽和NaHC03水溶液、飽和NaCl溶液、飽和KHS04溶液和飽和NaCl溶液各洗3次。EA層用無水Na2S04乾燥、過濾、濾液減壓濃縮得目標化合物d2-Pro-Met-OMe粗品。柱層析分離得到白色蠟狀標題化合物。ESI-MS(m/z)443[M+H]+,465[M+Na]+,907[2M+Na]++,421[M+Na]r，20十,820[2M+Na]剩d=-20.7576mp.30-31°C實施例9C12-Pro-Thr-OMe的製備冰浴條件下，將2.97g(10mmol)中間體月桂醯脯氨酸(C12-Pro-OH)用無水THF溶解，加入U5g(10mmol)HOB,t，2.67g(13mmol)DCC，反應6小時後，過濾DCU，加入1.69g(10mmol)Thr-OMe，用NMM調節pH值到9，反應10小時，減壓濃縮至幹。用EA溶解，過濾去除DCU，得到的溶液依次用飽和NaHC03水溶液、飽和NaCl溶液、飽和KHS04溶液和飽和NaCl溶液各洗3次。EA層用無水Na2SCU乾燥、過濾、濾液減壓濃縮得目標化合物d2-Pro-Thr-OMe粗品。柱層析分離得到白色粉末狀標題化合物。ESI-MS(m/z)413[M+H]+,435[M+Na]+,848[2M+Na]=-52.5926mp.83.4-84.3。C實施例10Cl2-Pro-Tyr-OMe的製備冰浴條件下，將2.97g(10mmol)中間體月桂醯脯氨酸(C12-Pro-OH)用無水THF溶解，加入1.35g(10mmol)HOBt，2,67g(13mmol)DCC，反應6小時後，過濾DCU，加入2.31g(10mmol)Tyr-OMe，用NMM調節pH值到9，反應10小時，減壓濃縮至幹。用EA溶解，過濾去除DCU，得到的溶液依次用飽和NaHC03水溶液、飽和NaCl溶液、飽和KHS04溶液和飽和NaCl溶液各洗3次。EA層用無水Na2S04乾燥、過濾、濾液減壓濃縮得目標化合物C12-Pro-Tyr-OMe粗品。柱層析分離得到白色粉末狀標題化合物。ESI-MS(m/z)475[M+H]+,497[M+Na]+,972[2M+Na]+L"Jd=-40.4016mp.131.3-132.2°C實施例11C12-Pro-Trp-OMe的製備冰浴條件下，將2.97g(10mmol)中間體月桂醯脯氨酸(C12-Pro-OH)用無水THF溶角牟，加入1.35g(10mmol)HOBt，2.67g(13纖ol)DCC，反應6小時後，過濾DCU，加入2.54g(10mmol)Trp-OMe，用NMM調節pH值到9，反應10小時，減壓濃縮至幹。用EA溶解，過濾去除DCU，得到的溶液依次用飽和NaHC03水溶液、飽和NaCl溶液、飽和KHS04溶液和飽和NaCl溶液各洗3次。EA層用無水Na2S04乾燥、過濾、濾液減壓濃縮得目標化合物d2-Pro-Trp-OMe粗品。粗品用丙酮溶解後靜置，析出的白色針狀晶體，為標題化合物。ESI-MS(m/z)520+L"JD=7.2727mp.44.6-45.4。C實施例12C12-Pro-Val-OMe的製備8冰浴條件下，將2.97g(10mmol)中間體月桂醯脯氨酸(C12-Pro-OH)用無水THF溶解，加入1.35g(10mmol)HOBt，2.67g(13mmol)DCC，反應6小時後，過濾DCU，加入1.67g(10mmol)Val-OMe，用NMM調節pH值到9，反應10小時，減壓濃縮至幹。用EA溶解，過濾去除DCU，得到的溶液依次用飽和NaHC03水溶液、飽和NaCl溶液、飽和KHS04溶液和飽和NaCl溶液各洗3次。EA層用無水Na2S04乾燥、過濾、濾液減壓濃縮得目標化合物d2-Pro-Va1-OMe粗品。柱層析分離得到白色標題化合物。ESI-MS(m/z)410[M+Na]+,797[2M+Na]+[《=—28.3951mp.47.3-47.7。C實施例14含尼莫地平油膏劑的的製備精確稱取尼莫地平粉末200mg，加入白凡士林10g,加熱至60。C,凡士林溶解，攪拌均勻，得到尼莫地平空白油膏。稱取尼莫地平空白油膏3g，加入0.1067mmo1本專利公開的透皮促進劑，攪拌均勻，得到含有促透劑的尼莫地平油膏。實施例15含水楊酸油膏劑的製備精確稱取水楊酸粉末200mg，加入白凡士林10g，加熱至60。C，凡士林溶解，攪拌均勻，得到水楊酸空白油膏。稱取水楊酸空白油膏3g，加入0.1067mmo1本專利公開的透皮促進劑，攪拌均勻，得到含有促透劑的水楊酸油膏。實施例16含不同促透劑的尼莫地平油膏劑促透性能評價透皮促進劑效果的應用選擇經典的Franz擴散池實驗。首先，將聚碸膜(Pall公司，66221)，浸泡在無水乙醇中15小時，進行預處理。將此聚碸膜至於Franz擴散池的接收池和供給池之間，接收液為30%乙醇，供給池為含有促透劑的尼莫地平油膏或空白尼莫地平油膏。水浴溫度為32±0.5°C，攪拌速度為600rpm，取樣間隔為lh，2h,3h，4h，5h，6h，10h，16h，24h。取樣時衝洗管路1.5ml,取樣體積lml。將所得到的樣品溶液用HPLC檢測定量，用公式算出得到累計滲透濃度及Q-T曲線。如表1，圖1。實施例17含不同促透劑的水楊酸油膏劑的促透性能評價透皮促進劑效果的應用選擇經典的Franz擴散池實驗。首先，將聚碸膜(Pall公司，66221)，浸泡在無水乙醇中15小時，進行預處理。將此聚碸膜至於Franz擴散池的接收池和供給池之間，接收液為蒸餾水，供給池為含有促透劑的水楊酸油膏或空白水楊酸油膏。水浴溫度為32±0.5°C，攪拌速度為600rpm,取樣間隔為lh，2h，3h，4h，5h，6h，10h，16h，24h。取樣時衝洗管路1.5ml，取樣體積lml。將所得到的樣品溶液用HPLC檢測定量，用公式算出得到累計滲透濃度及Q-T曲線。如表2，圖2。表1尼莫地平組累計滲透濃度及與空白組比率tableseeoriginaldocumentpage1011C12-Pro-Trp-Ome17.98±5.760.612C12-Pro-Tyr-OMe14.34±4.570.48*表示對比空白組(0組)有顯著性差異PO.05**表示對比空白組(0組)有極顯著性差異P<0.0權利要求1、一種結構如下式的具有兩親性且含有脯氨酸的新型皮膚促透化合物，其中，AA代表十二種不同的胺基酸，選自Ala，Phe，Gly，Ile，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Val，Trp或Tyr。2、權利要求1所述的化合物的製備方法，包括以下步驟(1)月桂酸與脯氨酸以活潑酯的方法合成中間體C12-Pro-OH;(2)將中間體Ci2-Pro-OH分別與Ala-0Me，Phe-0Me，Gly-0Me，lie-0Me，Leu-0Me，Met-0Me，Pro-0Me，Ser-0Me，Thr-0Me，Val-0Me，Trp-OMe或Tyr-OMe縮合，即得相應化合物。3、含有權利要求l化合物的藥物組合物。4、權利要求3的藥物組合物，其中含有藥物，權利要求l所述的化合物以及藥物可接受的載體。5、權利要求3的藥物組合物，其中含有權利要求1所述的化合物重量百分含量為1%-10%，藥物重量百分含量為0.1%-5%，其餘為藥物可接受的載體。6、權利要求5的藥物組合物，選自軟膏劑、眼膏劑、凝膠劑或栓劑。7、權利要求3的藥物組合物，其中藥物選自外用藥物。8、權利要求6的藥物組合物，其中外用藥物選自脂溶性藥物或水溶性藥物。9、權利要求7的藥物組合物，其中脂溶性藥物選自尼莫地平，水溶性藥物選自水楊酸。10、權利要求1的化合物在製備藥物、保健品、農藥及化妝品中的應用。全文摘要本發明涉及月桂醯脯氨醯胺基酸甲酯作為新型促透劑的合成方法及其應用，所述新型皮膚促透化合物如右式。文檔編號A61K47/22GK101538236SQ200910136620公開日2009年9月23日申請日期2009年5月8日優先權日2009年5月8日發明者崔國輝,崔純瑩,盈範申請人:首都醫科大學