一種從紫花苜蓿中提取苜蓿素的方法
2023-12-08 19:52:31 2
專利名稱：一種從紫花苜蓿中提取苜蓿素的方法
技術領域：
本發明屬於生物技術領域，尤其是涉及一種從紫花苜蓿中提取苜蓿素的方法。
背景技術：
苜蓿素又叫小麥黃素、麥黃酮，化學名5，7- 二羥基-2- (4-羥基-3，5_ 二甲氧基苯基)苯並吡喃-4-酮，CAS號520-32-1，熔點285_286°C，分子式C17H1407，分子量330，分
子結構式
OCH3·
苜蓿素是一種黃酮類物質，具有輕微抗氧化作用，抗平滑肌鬆弛及抗腫瘤作用，還具有染色功能。苜蓿素廣泛存在植物中，但是含量較低，不足於分離純化，在紫花苜蓿中含量較多。製備高純度苜蓿素的方法，多是採用固體填充柱法，如矽膠柱、反相矽膠柱和凝膠柱方法。這種分離方法樣品損失嚴重，操作繁瑣，重現性差。如專利(申請號201010605530)「從竹葉中製備高純度苜蓿素的方法」，該專利公開的方法乾燥竹葉用95%乙醇提取，用石油醚萃取，水相濃縮成浸膏；使浸膏上ΑΒ-8大孔樹脂柱，先用純水洗脫，再用80 %乙醇洗脫，將洗脫液濃縮並乾燥；乾燥產物中加入鹽酸甲醇溶液，加熱進行酸解處理；所得酸解液上C18柱層析洗脫，收集苜蓿素級分，濃縮；所得濃縮物上凝膠分離柱，用純甲醇作流動相洗脫，收集苜蓿素級分，濃縮到乾燥，即得苜蓿素。
發明內容
本發明的目的是克服現有方法的缺陷，提供一種從紫花苜蓿中提取苜蓿素的方法。本發明的目的是通過以下技術方案來實現的一種從紫花苜蓿中提取苜蓿素的方法，其特徵在於以下步驟I)紫花苜蓿粉碎，加5-8倍量60-80 %乙醇回流提取2_3次，提取液濃縮至無醇，加入聚醯胺樹脂中吸附，乙醇溶液梯度洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分濃縮後加乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯得粗品；2)取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水混合，取上相注滿高速逆流色譜柱，轉動主機，泵入下相做流動相，流動相溶解粗品由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監測，收集目標成分，合併流分減壓乾燥得高純度苜蓿素。步驟I)中的乙醇溶液梯度洗脫為4-5BV40-50%乙醇洗脫雜質，再用70 %乙醇洗脫。
步驟2)中的正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水混合比例為4-7 5-8 3-5 4_6。本發明的技術優勢在於工藝採用高速逆流色譜製備，是一種收率高、製備量大、製備周期短的高效方法，解決了矽膠柱效率低而且汙染嚴重的技術缺陷。下面將結合具體實施方式
進一步說明本發明，但本發明要求保護的範圍並不局限於下列實施例。
具體實施例方式實施例I :紫花苜蓿草乾燥粉碎，取Ikg加8倍量80%乙醇回流提取2次，提取液濃縮至無醇，加入200ml聚醯胺樹脂柱吸附，取5BV40%乙醇溶液洗脫雜質，再用70%乙醇溶液洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分濃縮，濃縮液加等體積乙酸乙酯萃取3次，回收乙酸乙酯得粗品 Sg。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按5 7 4 6混合，靜置分層後，取上相注滿高速逆流色譜柱，轉動主機，轉速調節700rpm，泵入下相做流動相，建立動態平衡後，流速調節為3ml/min,同時流動相溶解粗品由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監測，收集目標成分，合併流分減壓乾燥，得910mg黃色粉末，經HPLC檢測，含量98. 7%。實施例2:紫花苜蓿草乾燥粉碎，取Ikg加5倍量60%乙醇回流提取3次，提取液濃縮至無醇，加入250ml聚醯胺樹脂柱吸附，取4BV50%乙醇溶液洗脫雜質，再用70%乙醇溶液洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分濃縮，濃縮液加等體積乙酸乙酯萃取3次，回收乙酸乙酯得粗品IOgo取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按4 5 3 4混合，靜置分層後，取上相注滿高速逆流色譜柱，轉動主機，轉速調節800rpm，泵入下相做流動相，建立動態平衡後，流速調節為2ml/min，同時流動相溶解粗品由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監測，收集目標成分，合併流分減壓乾燥，得840mg黃色粉末，經HPLC檢測，含量98. 2%。實施例3:紫花苜蓿草乾燥粉碎，取Ikg加7倍量70 %乙醇回流提取2次，提取液濃縮至無醇，加入200ml聚醯胺樹脂柱吸附，取4BV50%乙醇溶液洗脫雜質，再用70%乙醇溶液洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分濃縮，濃縮液加等體積乙酸乙酯萃取3次，回收乙酸乙酯得粗品7g。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按7 8 5 6混合，靜置分層後，取上相注滿高速逆流色譜柱，轉動主機，轉速調節700rpm，泵入下相做流動相，建立動態平衡後，流速調節為lml/min,同時流動相溶解粗品由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監測，收集目標成分，合併流分減壓乾燥，得780mg黃色粉末，經HPLC檢測，含量98. I %。
權利要求
1.一種從紫花苜蓿中提取苜蓿素的方法，其特徵在於以下步驟 1)紫花苜蓿粉碎，加5-8倍量60-80%乙醇回流提取2-3次，提取液濃縮至無醇，加入聚醯胺樹脂中吸附，乙醇溶液梯度洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分濃縮後加乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯得粗品； 2)取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水混合，取上相注滿高速逆流色譜柱，轉動主機，泵入下相做流動相，流動相溶解粗品由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監測，收集目標成分，合併流分減壓乾燥得高純度苜蓿素。
2.如權利要求I所述從紫花苜蓿中提取苜蓿素的方法，其特徵在於所述步驟I)中的乙醇溶液梯度洗脫為4-5BV40-50%乙醇洗脫雜質，再用70%乙醇洗脫。
3.如權利要求I所述從紫花苜蓿中提取苜蓿素的方法，其特徵在於所述步驟2)中的正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水混合比例為4-7 5-8 3-5 4-6。
全文摘要
本發明屬於生物技術領域，公開了一種從紫花苜蓿中提取苜蓿素的方法，其特徵在於以下步驟1)紫花苜蓿粉碎，加5-8倍量60-80％乙醇回流提取2-3次，提取液濃縮至無醇，加入聚醯胺樹脂柱中吸附，乙醇溶液梯度洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分濃縮後加乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯得粗品；2)取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水混合，取上相注滿高速逆流色譜柱，轉動主機，泵入下相做流動相，流動相溶解粗品由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監測，收集目標成分，合併流分減壓乾燥得高純度苜蓿素。本方法具有製備周期短、操作簡單、製備量大、收率高等特點，適合高純度的苜蓿素的製備。
文檔編號C07D311/30GK102911146SQ20111021868
公開日2013年2月6日 申請日期2011年8月2日 優先權日2011年8月2日
發明者李法慶, 劉東鋒 申請人:蘇州寶澤堂醫藥科技有限公司