一種具有抗腫瘤功效的植物提取物及製劑的製作方法

2023-12-08 22:40:41

專利名稱：：一種具有抗腫瘤功效的植物提取物及製劑的製作方法一種具有抗腫瘤功效的植物提取物及製劑本發明關於用於治療腫痏的龍葵全草與/或果實或者黃果茄或者澳洲茄鮮果的澳洲茄鹼提取物及製劑，屬於中藥領域。背舉抹術現代社會痛症已成為威脅人類生命健康的主要問題之一，世界衛生組織(WHO)報告表明，根據目前痛症的發病趨勢，2020年全世界癌症發病率將比現在增加50%,全球每年新增痛症患者人數將達到1500萬人。醫療界迫切霈求安全有效的癌症治療藥物。澳洲茄減在很多茄科茄屬的植物裡都有發現，傳統上這一個屬裡的很多植物都被用來治療癌症，如龍葵、白英，後來人們根據活性追蹤的方法，發現該類植物中的甾族糖苷化合物具有很好的抗痛效果，而進一步的試驗證明，其中澳洲茄鹼(solasonine)具有十分顯著的細胞毒性。本發明所述的澳洲茄鹼(Solasoiiine)是從茄科植物龍葵全草與/果實或者茄科植物黃果茄或者渙洲茄鮮果中提取分離純化而獲得。目前，尚未見澳洲茄鹼應用於在抗腫瘤藥物方面的報導，國內尚沒有澳洲茄鹼的製劑在SFDA註冊，國內外專利(中國專利、日本專利、韓國專利、歐洲專利、美國專利等)均未出現與本發明相近的專利保護內容。澳洲茄璩(Solasonine),結構式如下
發明內容本發明的一個目的是提供一種抗腫瘤療效顯著、使用安全、副作用低的龍葵全草與/果實或者茄科植物黃果茄或者澳洲茄鮮果提取物及其製劑。本發明是通過如下技術方案實現的本發明中澳洲茄鹼提取物中，澳洲茄鹼含量為90.0%以上。澳洲茄鹼提取物提取步驟如下取龍葵全草與/或果實或者茄科植物黃果茄或者澳洲茄鮮果,加入50%90%乙醇溶液提取23次，每次68倍量，回收乙醇，濃縮至相對密度1.25,濃縮液中加入24倍量的0.lmol/1酸性溶液，充分挽拌，冷藏，過濾，濾渣用鹽酸溶液洗滌13次，合併濾液和洗滌液，以弱極性或中等極性樹脂吸附。樹脂吸附後先用水衝洗樹脂柱/床至流出液近中性；再以O.lmol/l鹼性溶液衝洗樹脂柱/床至流出液近無色，再以含醇量30%40%乙酵液衝洗樹脂柱/床至流出液近無色。棄去。再以鄰80%乙醇進行洗脫，至洗脫液顯無色，收集洗脫液，回收乙醇至無醇味，以0.51.511101/1的鹼性溶液調？狂值至810,靜置，冷藏，收集沉澱。自然晾乾，即可得龍葵總鹼提取物。再通過下述兩種方法均可得到澳洲茄鹼含量在90%以上的澳洲茄鹼提取物方法h取沉澱乾燥後，以2025倍量無水乙醇溶解，加入層析矽膠，拌勻，蒸乾，取拌樣後的矽膠，柱層析分離。層析柱用有機溶劑溼法裝柱，有機溶劑洗脫，分次收集洗脫液，薄層層析檢測，合併薄層層析檢瀾樣品斑點位置一致的洗脫液，回收有機溶劑，蒸乾，即得。方法2:取沉澱乾燥後，以加25倍量無水乙酵溶解，離心，將上清液加入約36倍量弱極性有機溶劑，放置片刻後，離心，將上清液回收至幹，重結晶23次，即得。以上所述的鹼性溶液選自氫氧化鈉、氫氧化鈣、氫氧化鉀、氫氧化鎂和氨水溶液；所述的酸性溶液選自醋酸、鹽酸、琉酸和檸橡酸溶液；所述的方法1洗脫用有機溶劑為甲醇、無水乙醇、正丁醇、氯仿、苯的一項或者兩項或者三項以任意比例形成的混合相；所述的方法2用有機溶劑為甲醇、無水乙酵、乙酸乙酯、正丁醇、氣仿、苯的一項或者兩項或者三項以任意比例形成的混合相。本發明的藥物製劑含有1%99%的澳洲茄鹼含量為90%99%的澳洲茄械提取物和99%1%的藥用賦形劑(包括其它配伍用的藥物)，優選含有25%85%的澳洲茄鹼含量為90%99%的澳洲茄,取物和75%15%的藥用賦形劑(包括其它配伍用的藥物)，最好含有50%65%的澳洲茄鹼含量為90%99%的澳洲茄鹼提取物和35%鄰％的藥用賦形劑(包括其它配伍用的藥物)。本發明的人臨床口服、直腸及胃腸道給藥安全有效劑量澳洲茄鹼含量為90%99%的澳洲茄鹼提取物0.450mg/kg體彭天。本發明的人臨床注射安全有效劑量澳洲茄鹼含量為90%99%的澳洲茄鹼提取物0.045mg/kg體窗天。按藥劑學方法，可以將本發明的澳洲茄鹼提取物製備成多種臨床藥物劑型作為抗腫瘤藥物，包括口服製劑或非腸道給藥的劑型。所述口服製劑為片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、丸劑、混懸劑、口服液體製劑等；所述非腸道給藥劑型為注射液、輸液劑、凍幹注射劑、注射乳劑、氣霧劑、栓劑等。本發明的抗腫瘤藥物中的輔料是指常規的賦形劑，如溶劑、崩解劑、矯味劑、粘合劑、著色劑、防腐劑等。本發明抗腫瘤藥物中的其它配伍用的藥物，指的是以有效劑量的澳洲茄鹼提取物為一定的藥物原料，再配伍其它已允許合用的中藥或化學藥品。本發明的澳洲茄鹼提取物藥物製劑具有抗腫癍作用且使用安全，是通過以下的藥理藥效學試驗得到證實的。實驗例l澳洲茄鹼對S180肉瘤移植性腫癯抑瘤率的影響實驗方法無菌條件下抽取KM小鼠腹腔內生長8天的腹水痛細胞懸液，癌細胞懸液和滅菌生理鹽水按1:3稀釋，取KM小鼠鄰只，接種稀釋後的癌細胞懸液0.2ml於腋部皮下。24h後隨機分為7組，即模型組、5-Fu組(25mg/kg)和澳洲茄鹼l、2、3組(lmg/kg、4mg/kg、16mg/kg)，每組10隻，分別灌胃給予相應藥物(模型組灌胃給予等容積蒸餾水)，8天後處死小鼠，剝取腫痏，稱重，按下面公式計算抑瘤率。—血對照組平均瘤重一實驗組平均痛重抑瘤率(％)=-X100%對照組平均瘤重實驗結果小鼠接種Swe腫瘤後，3天皮下即可觸到腫瘤，8天後解剖腫瘤平均重量均大於lg,澳洲恭鹼5個劑量組小鼠腫瘤浸潤範圍均小於模型組，瘤體易剝離，腫癍重量明顯減輕(P〈(M)5，P〈0.01)。結果見表l。表l澳洲茄鹼對s^移植性實體瘤抑瘤率的影響d±s,n=10)tableseeoriginaldocumentpage7注和模型組相比較，**P<0.01。實驗例2澳洲茄鹼對Hep肝痛移植性腫癍抑癍率的影響實驗方法無菌^fr下抽取KM小鼠腹腔內生長8天的腹水痛細胞懸液，痛細胞懸液和滅菌生理鹽水按1:3稀釋，取KM小鼠鄰只，接種稀釋後的痛細胞懸液0.2m，於腋部皮下。24h後隨機分為5組，即模型組、5^Fu組(25mg/kg)和澳洲茄鹼低、中、髙劑量組(2mg/kg、4mg/kg、8mg/kg),分別灌胃給予相應藥物(模型組灌胃給予等容積蒸餾水)，8天後處死小鼠，剝取腫瘤，稱重，按下面公式計算抑痏率。—+對照組平均癍重一實驗組平均瘤重抑瘤率(％)=-X100%對照組平均癍重實驗結果小鼠接種H印肝痛腫痛後，四天時皮下即可觸到腫癍，8天後解剖腫痏平均重量均大於lg，澳洲茄鹼三個劑量組小鼠腫痏浸潤範圍均小於模型組，瘤體易剝離，腫瘤重量明顯減輕(P〈0.05,0.01)。抑癍率均大於30%。結果見表2。表2澳洲恭鹼對H鄰移植性實體瘤抑癍率的影響(f土S)組別劑量動物數(n)瘤重(g)抑癍率(mg/kg)(%)模型組一101.27±0.25—5-Fu組25100.58±0.25**澳洲茄鹼低劑量組2100.84±0.32"澳洲茄鹼中劑量組4100.73±0.29"澳洲茄鹼高劑量組8100.56±0.24"注和模型組相比較，'P<0.05,"P<0.01。實驗例3澳洲茄鹼急性毒性實驗經急性毒性試驗澳洲茄鹼一次灌胃給藥的小鼠LDso為1.500g/kg,該劑量為臨床成人一日口服劑量的3750倍(臨床成人一日口服劑量為0.4mg/kg/曰)。其LDt劑量為1.03g/kg,折合到人為103mg/kg。實驗例4注射液澳洲茄鹼對S180肉癍移植性腫痛抑痏率的影響實驗方法無菌條件下抽取KM小鼠腹腔內生長8天的腹水痛細胞懸液，癌細胞懸液和滅菌生理鹽水按b3稀釋，取KM小鼠50隻，接種稀釋後的癌細胞懸液0.2ml於腋部皮下。24h後隨機分為7組，即模型組、5-Fu組(25mg/kg)和澳洲茄鹼l、2、3組(0.05mg/kg、0.2mg/kg、0.8mg/kg),每組10隻，分別靜脈注射給予相應藥物(模型組注射給予等容積生理鹽水)，8天後處死小鼠，剝取腫瘤，稱重，按下面公式計算抑痛率。對照組平均痏重一實驗組平均瘤重抑瘤率(o/o"-X100%對照組平均瘤重實驗結果小鼠接種Siso腫瘤後，3天皮下即可觸到腫瘤，8天後解剖腫瘤平均重量均大於lg，澳洲茄滅5個劑量組小鼠腫痏浸潤範圍均小於模型組，瘤體易剝離，腫癍重量明顯減輕(P〈0.01)。結果見表l。表l注射用澳洲茄鹼對Swo移植性實體瘤抑瘤率的影響(f±S,n-lO)tableseeoriginaldocumentpage9注和模型組相比較,*P<0.05,"P<0.01。實驗例5注射用澳洲茄械對Hep肝癌移植性腫瘤抑瘤率的影響實驗方法無菌條件下抽取KM小鼠腹腔內生長8天的腹水痛細胞懸液，癌細胞懸液和滅菌生理鹽水按1:3稀釋，取KM小鼠50隻，接種稀釋後的癌細胞懸液0.2ml於腋部皮下。24h後隨機分為5組，即模型組、5-Fu組(25mg/kg)和澳洲茄械低、中、髙劑量組(0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.4mg/kg),分別靜脈注射給予相應藥物(模型組注射給予等容積生理鹽水)，8天後處死小鼠，剝取腫癍,稱重，按下面公式計算抑瘤率。對照組平均瘤重一實驗組平均瘤重抑瘤率(％)=--X100%對照組平均瘤重實驗結果小鼠接種H印肝癌腫癍後，四天時皮下即可觸到腫痏，8天後解剖腫瘤平均重量均大於lg,澳洲茄鹼三個劑量組小鼠腫癍浸潤範圍均小於模型組，瘤體易剝離，腫痏重量明顯減輕(P〈0.05,0.01)。抑瘤率均大於30%。結果見表2。表2注射用澳洲茄鹼對Hep移植性實體癍抑瘤率的影響(f±S)tableseeoriginaldocumentpage95-Fu組25100.72±0.38"澳洲茄鹼低劑量組0.1100.94±0.28"澳洲茄鹼中劑量組0.2100.84±0.23"澳洲茄鹼高劑量組0.4_100.69±0.25"_注和模型組相比較，'P<0.05,"P<0.01。實驗例6注射用澳洲茄鹼急性毒性試驗經急性毒性試驗注射用澳洲茄璩一次靜脈注射給藥的小鼠LDso為142.5mg/kg,該劑量為臨床成人一日劑量的7125倍(臨床成人一日靜脈注射劑量為0.04mg/kg/日)。其LDi劑量為90mg/kg,折合到人為9mg/kg。昇伴實施方式實施例l澳洲茄鹼提取物製備方法取龍葵全草與/或果實或者茄科植物黃果茄或者澳洲茄鮮果,加入50%90%乙醇溶液提取23次，每次68倍量，回收乙醇，濃縮至相對密度1.25,濃縮液中加入24倍量的0.lmo1/1酸性溶液，充分撥拌，冷藏，過濾，濾渣用鹽酸溶液洗滌13次，合併濾液和洗滌液，以弱極性或中等極性樹脂吸附。樹脂吸附後先用水衝洗樹脂柱/床至流出液近中性；再以0.1mol/皿鹼性溶液衝洗樹脂柱/床至流出液近無色，再以含醇量30%40%乙醇液衝洗樹脂柱/床至流出液近無色。棄去。再以鄰柳％乙醇進行洗脫，至洗脫液顯無色，收集洗脫液，回收乙醇至無醇味，以0.51.5咖1/1的鹼性溶液調？11值至810,靜置，冷藏，收集沉澱。自然晾乾，即可得龍葵總鹼提取物。再通過下述兩種方法均可得到澳洲茄鹼含量在90%以上的澳洲菊鹼提取物方法l:取沉澱乾燥後，以2025倍量無水乙醇溶解，加入層析矽膠，拌勻，蒸乾，取拌樣後的矽膠，柱層析分離。層析柱用有機溶劑溼法裝柱，有機溶劑洗脫，分次收集洗脫液，薄層層析檢瀕，合併薄層層析檢測樣品斑點位置一致的洗脫液，回收有機溶劑，蒸乾，即得。方法2:取沉澱乾燥後，以2025倍量無水乙醇溶解，離心，將上清液加入約36倍量弱極性有機溶劑，放置片刻後，離心，將上淸液回收至幹，重結晶23次，即得。以上所述的鹼性溶液選自氫氧化鈉、氫氧化鈣、氫氧化鉀、氫氧化鎂和氨水溶液；所述的酸性溶液選自醱酸、鹽酸、琉酸和檸棣酸溶液；所述的柱層析洗脫用有機溶劑為甲醇、無水乙醇、正丁醇、氣仿、苯的一項或者兩項或者三項以任意比例形成的混合相。實施例2片劑的製備稱取澳洲恭鹼含量在90%以上的澳洲茄鹼提取物1000g，藥用澱粉1000g,混合均勻，用澱粉漿制粒，乾燥、整粒後，壓片，每片含澳洲茄槭100mg。實施例3膠囊劑的製備稱取澳洲茄鹼含量在90%以上的澳洲茄鹼提取物1000g,藥用澱粉1000g,混合均勻，裝入2號膠囊，每粒含澳洲茄鹼100mg。實施例4顆粒劑的製備稱取澳洲茄鹼含量在90%以上的澳洲茄鹼提取物1000g，澱粉K)Og,,500g,混合均勻，用適量乙醇制粒，乾燥，整粒，分裝，即得。實施例5散劑的製備稱取澳洲茄鹼含量在90%以上的澳洲茄鹼提取物1000g,澱粉1000g,混合均勻，分裝，即得。實施例6丸劑的製備稱取400g聚乙二醇4000,溶化，加入澳洲茄械含量在90%以上的澳洲茄鹼提取物100g,攪拌均勻，傾入保溫管中，恆溫，使藥液在抑901C下滴入冷卻過的液體石蝤中，滴完後，將藥丸倒在濾紙上吸乾石蟮油，即得。實施例7注射劑的製備稱取澳洲茄搣含量在鄰％以上的澳洲茄鹼提取物10g,加入至10000ml注射用水中用O.lmol/l的鹽酸調節PH值至67,撹拌30分鐘，加入一定活性炭,繼續攜拌半個小時，過濾，過0.221*111濾膜後，灌裝即可。實施例8輸液劑的製備稱取澳洲茄鹼含量在90%以上的澳洲茄鹼提取物10g,用適量生理鹽水溶解後，以0.11001/1的鹽酸調節？8[值至67，撥拌30分鐘，加入一定活性炭，繼續撹拌半個小時，過濾，過0.2211111濾膜後，加入適量生理鹽水至鄰L,挽拌灌裝即得每鄰ml含澳洲恭鹼提取物lOmg得輸液劑。實施例9凍幹注射劑的製備稱取澳洲茄鹼含量在90%以上的澳洲茄鹼提取物10g,加1000ml注射用水,柳1C90"C保溫撹拌，完全溶解後，加入100g的甘露酵，攪拌使溶解；調節pH值至67,無菌精濾，定量分裝於管制玻璃瓶中，冷凍乾燥，即得。權利要求1、一種澳洲茄鹼提取物，其特徵在於由龍葵全草與/或果實或者黃果茄或者澳洲茄鮮果中提取、分離、純化而得，其步驟如下取龍葵全草與/或果實或者茄科植物黃果茄或者澳洲茄鮮果，加入50％～90％乙醇溶液提取2～3次，每次6～8倍量，回收乙醇，濃縮至相對密度1.25，濃縮液中加入2～4倍量的0.1mol/l酸性溶液，充分攪拌，冷藏，過濾，濾渣用鹽酸溶液洗滌1～3次，合併濾液和洗滌液，以弱極性或中等極性樹脂吸附。樹脂吸附後先用水衝洗樹脂柱/床至流出液近中性；再以0.1mol/l鹼性溶液衝洗樹脂柱/床至流出液近無色，再以含醇量30％～40％乙醇液衝洗樹脂柱/床至流出液近無色。棄去。再以50～80％乙醇進行洗脫，至洗脫液顯無色，收集洗脫液，回收乙醇至無醇味，以0.5～1.5mol/l的鹼性溶液調PH值至8～10，靜置，冷藏，收集沉澱。自然晾乾，即可得龍葵總鹼提取物。再通過下述兩種方法均可得到澳洲茄鹼含量在90％以上的澳洲茄鹼提取物方法1取沉澱乾燥後，以20～25倍量無水乙醇溶解，加入層析矽膠，拌勻，蒸乾，取拌樣後的矽膠，柱層析分離。層析柱用有機溶劑溼法裝柱，有機溶劑洗脫，分次收集洗脫液，薄層層析檢測，合併薄層層析檢測樣品斑點位置一致的洗脫液，回收有機溶劑，蒸乾，即得。方法2取沉澱乾燥後，以20～25倍量無水乙醇溶解，離心，將上清液加入約3～6倍量弱極性有機溶劑，放置片刻後，離心，將上清液回收至幹，重結晶2～3次，即得。以上所述的鹼性溶液選自氫氧化鈉、氫氧化鈣、氫氧化鉀、氫氧化鎂和氨水溶液；所述的酸性溶液選自醋酸、鹽酸、硫酸和檸檬酸溶液；所述的柱層析洗脫用有機溶劑為甲醇、無水乙醇、正丁醇、氯仿、苯的一項或者兩項或者三項以任意比例形成的混合相。2、根據權利要求1所述的一種澳洲茄鹼提取物，其特徵在於該提取物中澳洲茄鹼含量為90.0%以上。3、根據權利要求1和2所述的一種澳洲茄鹼提取物，其特徵在於該提取物和一種或幾種藥用賦形劑，或可與澳洲茄鹼提取物組方的其他藥物製備成抗腫瘤的口服藥物製劑或非腸道藥物製劑。4、根據權利要求3所述的藥物製劑，其特徵在於含有1%99%的澳洲菊鹼含量為卯％99%的澳洲茄鹼提取物和99%1%的藥用賦形劑(包括其它配伍用的藥物)。5、根據權利要求4所述的藥物製劑，其特徵在於含有25%85%的澳洲茄鹼含量為90%99%的澳洲燕鹼提取物和75%15%的藥用賦形劑(包括其它配伍用的藥物)。6、根據權利要求5所述的藥物製劑，其特徵在於含有50%65%的澳洲茄鹼含量為90%99%的澳洲恭鹼提取物和35%50%的藥用賦形劑(包括其它配伍用的藥物)。7、根據權利要求3所述的藥物組合物，其特徵在於所述口服藥物製劑為片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、丸劑、混懸劑、口服液體製劑等；所述非腸道給藥劑型為注射液、輸液劑、凍幹注射劑、注射乳劑、氣霧劑、栓劑等；所述藥用賦形劑為溶劑、崩解劑、矯味劑、粘合劑、著色劑、防腐劑等；所述的其它配伍用的藥物，指的是以有效劑量的澳洲茄鹼提取物為一定的藥物原料，再配伍其它已允許合用的中藥或化學藥品。8、本發明用於抗腫癯藥物的製備。9、根據權利要求8的用途，其特徵在於澳洲茄鹼含量為90%99%的澳洲茄鹼提取物對人臨床口服、直腸及胃腸外給藥安全有效劑量為0.4鄰mg/kg體重/天；根據權利要求8的用途，其特徵在於澳洲茄械含量為90%99%的澳洲茄鹼提取物對人臨床注射給藥安全有效劑量為0.045mg/kg體重/天。10、根據權利要求8的用途，其特徵在於所述的腫瘤細胞是指人小細胞肺癌、人乳腺痛細胞、人胃癌細胞、人肝癌細胞、人結腸癌細胞、人直腸癌細胞、人宮頸癌細胞、人黑色素瘤細胞、早幼粒白血病細胞、肉瘤l抑、肝痛腹水型、小鼠宮頸痛一14或艾氏腹水癌。全文摘要本發明公開了一種抗腫瘤療效顯著、使用安全、副作用低的龍葵全草與/或果實或者茄科植物黃果茄或者澳洲茄鮮果提取物及其製劑及其製備方法。該澳洲茄鹼提取物中，澳洲茄鹼含量為90％以上。本發明的澳洲茄鹼提取物藥物製劑含有1％～99％的澳洲茄鹼含量為90％～99％的澳洲茄鹼提取物和99％～1％的藥用賦形劑(包括其它配伍用的藥物)，優選含有25％～85％的澳洲茄鹼含量為90％～99％的澳洲茄鹼提取物和75％～15％的藥用賦形劑(包括其它配伍用的藥物)，最好含有50％～65％的澳洲茄鹼含量為90％～99％的澳洲茄鹼提取物和35％～50％的藥用賦形劑(包括其它配伍用的藥物)。藥理實驗結果表明，該提取物具有較好的抑瘤作用，使用安全。本發明工藝先進，有效成分含量高，工業實用性強，成本相對較低。文檔編號C07G5/00GK101125163SQ20061001711公開日2008年2月20日申請日期2006年8月18日優先權日2006年8月18日發明者石楊申請人:石楊