一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法與應用的製作方法
2023-12-08 23:49:46 1
一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法與應用的製作方法
【專利摘要】本發明提供了一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，通過將鱷嘴花葯材用熱水回流提取，再經醇沉和離心分離，得鱷嘴花多糖；離心後的上清液用大孔吸附樹脂，用80%～95%（v/v）乙醇洗脫得到水溶性部位。此外，將鱷嘴花葯材用50%～80%（v/v）乙醇回流提取，將乙醇提取物的含水懸浮液依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯分級萃取，得到乙酸乙酯活性部位，將剩餘水相提取液用正丁醇萃取，蒸除溶劑後得正丁醇部位。本發明的鱷嘴花抗癌活性部位為鱷嘴花多糖、水溶性部位、乙酸乙酯部位以及正丁醇部位中的至少一種，可以用於製備抗腫瘤藥物，並且具有生命延長率高，毒副作用小的特點。
【專利說明】一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法與應用
【技術領域】
[0001]本發明屬於抗癌活性部位提取領域，尤其涉及一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法與應用。
【背景技術】
[0002]鱷嘴花(Clinacanthusnutans (Burm.f.) Lindau),俗稱優(憂)遁草、竹枝黃、扭序花等，屬於爵床科鱷嘴花屬，是東南亞傳統藥物中廣泛應用的藥用植物，分布在中南半島、馬來半島以及中國大陸的廣西、廣東、雲南、海南等地(中華本草(7)，上海科學技術出版社，1999,456-457)。在馬來西亞，泰國等地，鱷嘴花作為一種傳統的藥材用於治療精神緊張、糖尿病、類風溼性關節炎、蛇叮咬、肝炎以及抗病毒等(Wanikiat P, et al.，J.Ethnopharmacol., 2008, 116(2): 234-244; Yoosook, C.et al., J.Ethnopharmacol.,1999，67(2):179-187;)，其中，鱷嘴花葉子的提取物可以作為消炎藥治療蚊蟲叮咬，作為補救措施治療皮膚皰疹和病毒病變的水痘帶狀皰疹。此外，鱷嘴花中的葉綠素a和葉綠素b衍生物有抗皰疫病毒的活性(Sakdarat S，et al., Bioorg.Med.Chem., 2009,17(5):1857-1860)。
[0003]隨著現代醫學的發展，研究者發現鱷嘴花還具有抗腫瘤作用並因此倍受醫藥研究人員的重視(Yong YK, et al., Evid-Based Compl.Alt., 2013，ID 462751)，但是，目前鱷嘴花抗癌成分及作用機理尚不明確，鱷嘴花的抗癌研究有待深入進行。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在於提供一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法與應用，旨在解決鱷嘴花抗癌活性部位不明確導致抗癌效果不甚理想的問題。
[0005]本發明中涉及的一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，包括以下步驟:
(1)取鱷嘴花葯材粉末I回流提取後，將水提取物減壓濃縮，再加無水乙醇，過夜沉澱，且經離心後得到沉澱和上清液兩部分，冷凍乾燥沉澱部分得鱷嘴花多糖；上清液濃縮後過大孔吸附樹脂，先水洗至無色，再用乙醇以洗脫，收集洗脫液，濃縮、冷凍乾燥得水溶性部位；
(2)取鱷嘴花葯材粉末2加入乙醇回流提取，將乙醇提取物的含水懸浮液，再依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯分級萃取，減壓濃縮回收溶劑，得到乙酸乙酯部位；剩餘水相提取液經正丁醇萃取，濃縮得正丁醇部位。
[0006]將所述 鱷嘴花多糖、水溶性部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位中任意一個部位或任意幾個部位按實際生藥提取量合併混勻，即為鱷嘴花抗癌活性部位。
[0007]其中，步驟(I衝所述回流提取為在100°C下用水回流提取兩次，每次3小時；所述乙醇洗脫為80%~95%乙醇以5~20 mL/min流速洗脫；所述鱷嘴花葯材粉末1、水1、無水乙醇和洗脫所用乙醇的質量體積比為60~80g:480~800mL:600~1000mL:2~10 BV ；所述上清液濃縮至原體積的1/30~1/5。[0008]其中，步驟(2)中所述回流提取所用乙醇濃度為50%~80% ;所述鱷嘴花葯材粉末2和乙醇的質量體積比為70~90g:560~1080mL。
[0009]優選地，在步驟(1)中，洗脫所用乙醇的量優選2~6 BV ;所述上清液濃縮至原體積的1/20~1/5 ;所述洗脫流速為5~10 mL/min。
[0010]優選地，在步驟(2)中，所述鱷嘴花葯材粉末2和乙醇的質量體積比為Ig:8~10
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[0011 ] 優選地，所述大孔吸附樹脂為HP-20大孔吸附樹脂或XAD16N大孔吸附樹脂。
[0012]本發明進一步提供了上述鱷嘴花抗癌活性部位的應用，用於製備抗腫瘤藥物。
[0013]優選地，所述的鱷嘴花抗癌活性部位的應用，用於製備抗腫瘤的片劑、膠囊、口服液、注射液、顆粒劑等常見劑型。
[0014]優選地，所述腫瘤包括肝、前列腺、肺、胃、淋巴瘤等癌症。[0015]有益效果:本發明克服現有技術的不足，提供一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，通過將鱷嘴花葯材粉末用熱水回流提出再用無水乙醇分層離心後，得到的沉澱部分為鱷嘴花多糖活性部位，將得到的上清液用大孔吸附樹脂吸附並通過80%~95% (v/v)乙醇洗脫得到水溶性部位，此外，還通過將鱷嘴花葯材粉用50%~80% (v/v)乙醇回流提取，將乙醇提取物用水分散，再依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯分級萃取，得到乙酸乙酯活性部位，將溶劑中的水相提取液經正丁醇萃取，得到正丁醇部位。本發明的鱷嘴花抗癌活性部位為多糖部位、水溶性部位、乙酸乙酯部位以及正丁醇部位中的至少一種，可以用於製備抗腫瘤藥物，並且具有生命延長率高，毒副作用小的特點。
[0016]【專利附圖】
【附圖說明】:
圖1為鱷嘴花正丁醇部位(CN-N)對H印S小鼠腫瘤生長的抑制作用結果；其中圖1A為CN-N對腫瘤增長的抑制圖；圖1B為CN-N對小鼠體重增長抑制圖；圖1C為Ifeps腫瘤細胞凋亡電鏡觀察圖。
[0017]圖2為鱷嘴花水溶性部位(CN-H)對PC-3小鼠腫瘤生長的抑制作用結果；其中圖2A為CN-H對腫瘤增長的抑制圖；圖2B為CN-H對小鼠體重增長抑制圖；圖2C為PC-3腫瘤細胞凋亡電鏡觀察圖。
【具體實施方式】
[0018]為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合實施例，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，並不用於限定本發明。
[0019]實施例1:
一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，包括以下步驟:
(1)取20目60g鱷嘴花葯材粉末在100°C下用480 mL水回流提取兩次，每次3小時，將提取液減壓濃縮後加600 mL無水乙醇，過夜沉澱，且經3000 r/min離心20 min,冷凍乾燥(<-50°C，0.7 mbar, 14 h)沉澱部分得鱷嘴花多糖(CNPS);上清液濃縮至原體積的1/30後過HP-20大孔吸附樹脂，水洗至無色，再用2 BV 95% (v/v)乙醇以20 mL/min流速洗脫，收集洗脫液，濃縮、冷凍乾燥得水溶性部位(CN-H)；
(2)取20目90g鱷嘴花葯材粉末加入1080 mL 80% (v/v)乙醇回流提取，蒸除溶劑。將鱷嘴花乙醇提取物用水分散，再依次用80 mLX 2石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯分級萃取，減壓濃縮回收溶劑，得到乙酸乙酯部位(CNAE);剩餘水相提取液用80 mLX 2，正丁醇萃取，蒸除正丁醇，得正丁醇部位(CN-N)；
(3)將鱷嘴花多糖(CNPS)、水溶性部位(CN-H)、乙酸乙酯部位(CNAE)以及正丁醇部位(CN-N)中至少一種按實際生藥提取量合併混勻，即為鱷嘴花抗癌活性部位。更具體的，將鱷嘴花多糖(CNPS)、水溶性部位(CN-H)、乙酸乙酯部位(CNAE)以及水溶性部位(CN-N)中至少一種配比後得到各鱷嘴花抗癌活性部位如下表1所示:
【權利要求】
1.一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特徵在於，包括以下步驟: (1)取鱷嘴花葯材粉末I回流提取後，將水提取物減壓濃縮，再加無水乙醇，過夜沉澱，且經離心後得到沉澱和上清液兩部分，冷凍乾燥沉澱部分得鱷嘴花多糖；上清液濃縮後過大孔吸附樹脂，先水洗至無色，再用乙醇以洗脫，收集洗脫液，濃縮、冷凍乾燥得水溶性部位； (2)取鱷嘴花葯材粉末2加入乙醇回流提取，將乙醇提取物的含水懸浮液，再依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯分級萃取，減壓濃縮回收溶劑，得到乙酸乙酯部位；剩餘水相提取液經正丁醇萃取，濃縮得正丁醇部位。
2.根據權利要求1所述的一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特徵在於，將所得鱷嘴花多糖、水溶性部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位中任意一個部位或任意幾個部位按實際生藥提取量合併混勻，即為鱷嘴花抗癌活性部位。
3.根據權利要求1所述的一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特徵在於，步驟(I)中所述回流提取為在100°c下用水回流提取兩次，每次3小時；所述乙醇洗脫為用80%~95%乙醇以5~20 mL/min流速洗脫；所述鱷嘴花葯材粉末1、水1、無水乙醇和洗脫所用乙醇的質量體積比為60~80g:480~800mL:600~1000mL:2~10 BV ;所述上清液濃縮至原體積的1/30~1/5。
4.根據權利要求1所述的一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特徵在於，步驟(2)中所述回流提取所用乙醇濃度為50%~80% ;所述鱷嘴花葯材粉末2和乙醇的質量體積比為 70 ~90g:560 ~1080mL。
5.根據權利要求3所述的一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特徵在於，步驟(1)中，洗脫所用乙醇的量為2~6BV ;所述上清液濃縮至原體積的1/20~1/5 ;所述洗脫流速為5~10 mL/min。`
6.根據權利要求4所述的一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特徵在於，步驟(2)中，所述鱷嘴花葯材粉末2和乙醇的質量體積比為Ig:8~10 mL。
7.根據權利要求1所述的一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特徵在於，所述大孔吸附樹脂為HP-20大孔吸附樹脂或XAD16N大孔吸附樹脂。
8.根據權利要求2所述的一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特徵在於，所述鱷嘴花抗癌活性部位用於製備抗腫瘤藥物。
9.根據權利要求8所述的一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特徵在於，所述的鱷嘴花抗癌活性部位用於製備抗腫瘤的片劑、膠囊、口服液、注射液、顆粒劑常見劑型。
10.根據權利要求8所述的一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特徵在於，所述腫瘤包括肝、前列腺、肺、胃、淋巴瘤癌症。
【文檔編號】A61K36/19GK103877133SQ201410100939
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年3月19日 優先權日:2014年3月19日
【發明者】黃丹民, 陳鈞, 劉旭, 高靜, 湯建 申請人:江蘇大學