抗紫外光毒性的肽保護的製作方法

2023-12-08 19:38:26

專利名稱：抗紫外光毒性的肽保護的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種具有生物學及治療活性的肽。特別地，本發明涉及一種防護誘變物(mutagen)誘發的細胞/組織毒性的短肽。例如，本發明的肽可防護在暴露UV光之後發生的皮膚中毒性。本發明肽的一種功能為阻斷磷酸化作用，及因此活化某些細胞周期調節蛋白質。本發明進一步涉及一種使用本發明肽降低在暴露誘變物(例如UV光)後的細胞/組織毒性程度的方法。
背景技術：
當將角質細胞暴露至諸如紫外線(UV)照射的DNA損傷元素(誘變物)時，會使細 胞周期檢查點活化，從而阻礙細胞分裂。在誘變物誘發損傷之後，細胞周期會停滯在G2階段，讓DNA有時間修復。然而，若檢查點過程被中斷或抑制，則發生癌症(例如DNA突變)的頻率會降低。此點已經在活體外及活體內通過在UV照射之前及之後將咖啡因施用至皮膚上而證實(LU 等人，2008，CANCER RES. 68 :2523-2529 ;HEFFERNAN 等人，2009，J. INVEST.DERMATOL. 129 :1805-1815)。此現象系根據咖啡因可抑制有絲分裂檢查點途徑，從而使DNA受損的細胞進行有絲分裂並經由細胞凋亡死亡，這是因為其DNA不能進行符合要求的複製過程。儘管有DNA突變/受損，但仍可進行細胞周期進程，及由此出現的凋亡細胞死亡可防止經誘變物誘發的突變在受影響的組織中固著。此過程從而減少否則可能發展成癌病變(諸如癌)的遺傳上改變的細胞數量。在皮膚護理治療及美容皮膚護理應用中使用此試劑，已經提升咖啡因減少UV光對皮膚的癌變影響的能力。然而，由於缺乏特異性，在皮膚護理產品中使用咖啡因遭到質疑。除了其有益作用外，咖啡因可誘發皮膚中的非所欲作用(例如血管舒張、乾燥等)。基於這些缺點，已尋求其它方法用於預防誘變物在皮膚及相關組織中的損傷作用。使用短肽發展皮膚護理產品的用途已由於其以天然胺基酸為主的結構、特異性、無毒性及無副作用，而非常受歡迎。這些質量可使肽作為發展用於補充皮膚護理組合物的新穎化學預防試劑的適宜起始點。本文中闡述具有化學預防及化學治療特性且可施用於保護皮膚不受太陽光的損傷作用的肽。發明概述本發明的實施方案涉及一種減少細胞周期檢查點激酶的活性的方法。該方法可包括使檢查點激酶暴露至長度為五至九個胺基酸殘基且包括SEQ ID N0:13的肽。在此實施方案及其它實施方案中的細胞周期檢查點激酶可呈活化狀態。可應用於文中所述的此方法及其它方法中的肽的實例包括SEQ ID NO :2、3、5、6、8、或10或由其組成。可用於文中所述方法的肽的其它實例為具有與SEQ ID NO :13序列直接鄰接的組氨酸殘基的那些。其它肽可在其羧基末端醯胺化。該醯胺化肽的特定實例為包括SEQ IDNO :2、3、5、6、8、或10或由其組成的那些。
本公開方法靶向的檢查點激酶可包括檢查點激酶-I(ChkI)或檢查點激酶-2 (Chk2)或由其組成。該檢查點激酶可因細胞中的DNA受損而活化。該DNA受損可由誘變劑引起。誘變劑的實例為能夠在皮膚中誘發DNA受損的那些(例如紫外線照射)。所公開的方法亦可包括使cdc25(細胞分裂周期25)磷酸酶暴露至文中所描述的肽；cdc25c為可在本發明中被靶向的cdc25c的實例。本發明的另一實施方案涉及一種處理哺乳動物的皮膚的方法。該方法包括通過使檢查點激酶暴露至所公開的肽，而減少皮膚中細胞周期檢查點激酶(例如Chk2)的活性。本發明的另一實施方案涉及一種通過將所公開的肽施用至皮膚而處理哺乳動物皮膚的方法。本發明的另一實施方案涉及一種長度為五至九個胺基酸殘基及包括SEQ ID NO13的肽。該肽的實例包括SEQ ID N0:2、3、5、6、8、或10或由其組成。本發明的肽的其它實例具有與SEQ ID NO :13序列直接鄰接的組氨酸殘基。其它的肽可在其羧基末端醯胺化。該醯胺化肽的特定實例為包括SEQ ID NO :2、3、5、6、8、或10或由其組成的那些。本發明的另一實施方案涉及一種包括本發明的肽及藥學上可接受載體的組合物。 該組合物可呈噴霧劑、乳液(emulsion)、液體、洗液(lotion)、乳膏、糊劑(paste)、軟膏、粉末或泡沫的形式。附圖
簡述圖I顯示某些通常彼此比對的本發明肽(SEQ ID NOS : 1-10)及SEQ ID NO :11(人酪氨酸酶)的胺基酸序列。在某些肽(SEQ ID NOS :1-7)中，下面劃線的殘基構成SEQ IDNO 11的保守性胺基酸取代物。圖2顯示星形孢菌素(staurosporine)或某些本發明肽對檢查點激酶2 (Chk2)活性的抑制。對照組Chk2活性用第一個長條表示。圖中所示肽(SEQ ID NOS :2-6及8-10)在羧基末端醯胺化(-CONH2)。圖3顯示人Chk2 (SEQ ID NO :17)的胺基酸序列。此序列與美國國家生物技術信息中心(NCBI)網站(或GENBANK)中以登錄號AAH04207所公開的相同。圖4顯示人Chkl (SEQ ID NO 18)的胺基酸序列。此序列與NCBI網站(或GENBANK)以登錄號AAC51736所公開的相同。圖5顯示人cdc25c(SEQ ID NO :19)的胺基酸序列。此序列與NCBI網站(或GENBANK)以登錄號AAR32098所公開的相同。發明詳述本發明肽(例如表I及圖I中列出的那些)可包括L-或D-胺基酸對映異構體，其包含具有一種對應異構形式或兩種形式的組合的殘基。所述肽可如以下非限制性實例中所述而進一步強化或修飾，只要未改變其一級胺基酸序列即可；如此，所述肽由某些胺基酸序列組成，但可包括某些修飾。所述肽的羧基末端可為酸性(-C00H)或經醯胺化(例如-CONH2、-C0NHR、或-CONR2)。與其游離酸形式相比，羧基末端的醯胺化作用可使本發明肽較不易受蛋白酶降解的影響及可增加其溶解性，因而提供增強的治療效力。所述肽亦可經脂質化，從而可增強皮膚滲透。連接各肽的胺基酸的一或多個分子鍵可為非肽鍵。該非肽鍵包括(但不限於)亞氨基、酯肼、氨基脲(semicarbazoide)及偶氮鍵。表I
權利要求
1.一種降低活化的細胞周期檢查點激酶活性的方法，其中所述方法包括使所述檢查點激酶暴露於肽，其中所述肽為五至九個胺基酸殘基長度且包含SEQ ID N0:13。
2.權利要求I的方法，其中所述肽包含SEQID NO :10。
3.權利要求I的方法，其中所述肽為SEQID NO :10。
4.權利要求I的方法，其中所述肽為SEQID NO :2、3、5、6、或8。
5.權利要求I的方法，其中組氨酸殘基與SEQID NO :13序列直接鄰接。
6.權利要求I的方法，其中所述肽在羧基端醯胺化。
7.權利要求I的方法，其中所述檢查點激酶為檢查點激酶-2(Chk2)。
8.權利要求I的方法，其中所述檢查點激酶由於紫外線照射引起DNA受損而活化。
9.權利要求I的方法，其中所述檢查點激酶存在於人皮膚中。
10.一種處理哺乳動物皮膚的方法，其中所述方法包括將肽施用於所述皮膚，其中所述肽為五至九個胺基酸殘基長度且包含SEQ ID NO:13。
11.一種肽，其中所述肽為五至九個胺基酸殘基長度且包含SEQ ID NO:13。
12.權利要求11的肽，其中所述肽包含SEQID NO :10。
13.權利要求11的肽，其中所述肽為SEQID NO :10。
14.權利要求11的肽，其中所述肽為SEQID NO :2、3、5、6、或8。
15.權利要求11的肽，其中組氨酸殘基與SEQID NO :13序列直接鄰接。
16.權利要求11的肽，其中所述肽在羧基端醯胺化。
17.權利要求16的肽，其中所述肽為SEQID NO :10。
18.權利要求16的肽，其中所述肽為SEQID NO :2、3、5、6、或8。
19.一種組合物，其包含權利要求11的肽及藥學上可接受載體。
20.權利要求19的組合物，其中所述組合物呈噴霧劑、乳液、液體、洗液、乳膏、糊劑、軟膏、粉末或泡沫的形式。
全文摘要
公開了具有生物學及治療活性的短肽。特別地，所公開肽的活性涉及減少或防護誘變物誘導的細胞/組織毒性(即化學預防)。例如，所公開的肽防護紫外(UV)光暴露所發生的皮膚毒性及/或突變發生。所公開的肽亦阻斷某些細胞周期調節蛋白質(諸如Chk2)的活化。該肽的一個實例為Ser-Leu-Tyr-Gln-Ser(SEQ ID NO10)。所公開的肽亦可用於減少或防護暴露誘變物後另外所發生的細胞毒性及突變累積的方法。一種該方法涉及將肽施用至皮膚以預防或減少UV光(例如太陽光)暴露所引起的突變損傷。
文檔編號A61K38/08GK102791281SQ201080052918
公開日2012年11月21日 申請日期2010年11月18日 優先權日2009年11月19日
發明者L·張, T·J·法拉 申請人:赫裡克斯生物醫療公司