三種苯酚類衍生物的製備方法及其在製備抗HIV藥物中的應用與流程
2023-11-06 20:12:22 1
本發明涉及有機化合物
技術領域：
，具體是三種苯酚類衍生物的製備方法及其在製備抗HIV藥物中的應用。
背景技術：
：HIV病毒在世界各國及地區已經蔓延成世界上最重大的公共衛生挑戰之一，為當今世界的一大醫學難題。據聯合國愛滋病規劃署(UNAIDS)的最新統計，2014年全世界存活HIV攜帶者及AIDS患者共3690萬，新感染200萬，死亡120萬人。截至2015年10月底，我國報告存活的HIV病毒感染者和AIDS病人共計57.5萬例，死亡17.7萬人，AIDS已成為當前我國最嚴重的感染性疾病。天然化合物作為創新藥物研究的重要源泉，據最新的一份統計表明，從1981年到2014年共三十多年的時間裡一共批准的小分子藥物有1211個，其中來自天然產物及其衍生物的佔65％(J.Nat.Prod.,2016,79,629–661)。上世紀五十年代，由於青黴素的發現，導致了對陸地微生物持續50多年的集中研究和開發，時至今日，陸地微生物次級代謝產物發現的重複率已高達95％，因此人們將關注度轉向海洋，尤其是深海。於是，海洋微生物來源的代謝產物迅速成為藥物研發的新源泉。目前已有多種海洋來源的微生物次級代謝產物被開發成用於治療包括腫瘤、病毒等在內多種疾病的藥物。因此，在海洋微生物中篩選發現具有HIV活性的天然產物對於治療HIV藥物研發具有重要意。技術實現要素：本發明的目的在於提供三種苯酚類衍生物的製備方法及其在製備抗HIV藥物中的應用，以解決上述
背景技術：
中提出的問題。為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種通式(Ⅰ)所示的化合物，或其鹽；一種通式(Ⅱ)所示的化合物，或其鹽；一種通式(Ⅲ)所示的化合物，或其鹽；通式(Ⅰ)、通式(Ⅱ)、通式(Ⅲ)所示的化合物或其鹽的製備方法，是對毛殼菌進行固體發酵和發酵提取物提取純化得到。通式(Ⅰ)、通式(Ⅱ)、通式(Ⅲ)所示的化合物或其鹽的用途，用於製備HIV活性藥物。作為本發明再進一步的方案：所述HIV活性藥物為HIV抑制或激活的藥物。一種抗HIV活性藥物，是將通式(Ⅰ)、通式(Ⅱ)、通式(Ⅲ)所示的化合物或其鹽作為有效劑量的活性成分的藥物。與現有技術相比，本發明的有益效果是：本發明中的三種化合物是由一株深海真菌進行發酵後製備而得，具有較強的抗HIV活性，可用於製備和開發HIV治療藥物，本發明為研發HIV治療藥物提供新的化合物來源，對我國海洋藥物開發具有重要的意義，促進深海生物資源的有效應用。具體實施方式下面結合具體實施方式對本專利的技術方案作進一步詳細地說明。一種通式(Ⅰ)所示的化合物，或其鹽；一種通式(Ⅱ)所示的化合物，或其鹽；一種通式(Ⅲ)所示的化合物，或其鹽；通式(Ⅰ)、通式(Ⅱ)、通式(Ⅲ)所示的化合物或其鹽的製備方法，是對毛殼菌進行固體發酵和發酵提取物提取純化得到。通過對深海真菌裡的毛殼菌進行固體發酵和發酵提取物提取純化，從中得到三種化合物，經現代波譜學結構分析確定結構，具體結構如通式(Ⅰ)、通式(Ⅱ)、通式(Ⅲ)所示。對通式(Ⅰ)、通式(Ⅱ)、通式(Ⅲ)所示的化合物進行活性檢測，發現三種化合物對HIV有良好的活性，可以作為HIV藥物開發的先導化合物，為開發新的HIV治療藥物提供了備選化合物，對開發中國海洋藥物資源具有重要的意義。通式(Ⅰ)、通式(Ⅱ)、通式(Ⅲ)所示的化合物或其鹽的用途，是將通式(Ⅰ)、通式(Ⅱ)、通式(Ⅲ)所示的化合物或其鹽用於製備HIV活性藥物；所述HIV活性藥物為HIV抑制或激活的藥物。一種毛殼菌屬sp.XT-20-19(Chaetomiumglobosum)，已於2016年12月20日保藏於國家海洋局第三海洋研究所的中國海洋微生物菌種保藏管理中心MCCC，地址是廈門市思明區大學路178號，郵編：361005，保藏編號為CGMCCNo.8652。實施例1通式(Ⅰ)、通式(Ⅱ)、通式(Ⅲ)所示的化合物的製備：本實施例以深海真菌中的毛殼菌為原料，製備毛殼菌化合物，具體步驟如下：(1)取毛殼菌，加入到培養基中，靜置1個月，加有機溶劑萃取，得到萃取液，將萃取液低壓濃縮，得到20g毛殼菌發酵粗提物；(2)將步驟(1)中毛殼菌發酵粗提物進行100-200目矽膠柱層析吸附，採用氯仿-甲醇溶液進行洗脫；(3)根據TLC檢測結果，合併步驟(2)中的氯仿-甲醇溶液，減壓濃縮蒸乾後得到3個活性部位，分別為50mg、40mg、10mg；(4)將步驟(3)中所得活性部位分別用葡聚糖凝膠-20吸附，然後用氯仿-甲醇溶液洗脫；(5)根據TLC檢測結果，收集和合併步驟(4)中氯仿-甲醇溶液洗脫液，減壓濃縮蒸乾後得到三種化合物分別為A、B、C，重量分別為40mg、30mg、5mg，均為白色固體。將上述所得白色固體分別用1H-NMR和13C-NMR譜分析，結果化合物A有δ8.15、8.15、8.30等三個峰，積分均為1H指示存在於苯環上的3個-OH。積分為4H的δ4.88為單峰，顯示相應所在碳為連有-OH的叔碳，積分為3H的δ1.92為單峰；δ144.4、138.1、133.1、128.9、116.1、108.8等6個季碳表明化合物A中存在苯環，並且苯環上H全部被取代，其中δ144.4、138.1、133.1等3個C上連有-OH；而δ73.0、72.3等2個C表明的碳與-OH相連。綜合以上結果(如表1所示)，確定化合物A為7-methyl-1,3-dihydroisobenzofuran-4,5,6-triol，結構如通式(Ⅰ)所示，HPLC檢測結果表明其純度為95.3％。化合物B有δ9.18、5.08、1.96等三個峰，其中δ9.18積分為3H指示為存在於苯環上的3個-OH。δ5.08積分為2H的為單峰，顯示相應所在碳可能為連有-OH的仲碳，積分為3H的δ1.96為單峰；δ151.3、143.2、138.2、133.0、109.2、102.8等6個季碳表明化合物B中存在苯環，並且苯環上H全部被取代；δ170.0表明該化合物B中可能存在內脂。綜合以上結果(如表1所示)，確定化合物B為5,6,7-trihydroxy-4-methylisobenzofuran-1(3H)-one，結構如通式(Ⅱ)所示，HPLC檢測結果表明其純度為97.2％。化合物C有δ6.96、6.65等3個峰，δ6.96積分為2H，表明為苯環上的3個H；δ4.67、4.57、3.89積分均為1H，其中δ3.89為雙峰，表明所在碳可能為連有-OH的叔碳；δ3.77積分為3H，表明所在碳可能為連有羥甲基所在的碳；δ157.9、141.3、128.0、125.0,119.9、109.4等6個季碳表明化合物C中存在苯環，並且苯環上3H被取代；δ157.9表明化合物C中可能連有羥基。綜合以上結果(如表2所示)，確定化合物C為8-methoxy-1,2,3,4-tetrahydronaphthalene-1,2,4-triol，結構如通式(Ⅲ)所示，HPLC檢測結果表明其純度為93.7％。表1：本發明化合物A、B的1H、13C-NMR數據表2：本發明化合物C的1H、13C-NMR數據No.13Cδ1Hδ[mult,J(Hz)]167.0d4.67(d,4.0)270.1d3.89(tt,8.0,4.0)335.2t2.18(qq,8.0,4.0),1.74(sq,8.0)465.7d4.57(t,4.0)4a141.3s5119.9d6.96(d,8.0)6129.4d6.96(d,8.0)7115.1d6.95(d,8.0)8157.9s8a125.0s955.4q3.77s1-OH4.72(d,4.0)2-OH5.00(d,4.0)3-OH4.98(d,7.4)實施例2：實施例1製備得到的化合物A、B、C的體外抗HIV活性篩選本實施例選擇J-LatA2細胞作為活性測試細胞，從而檢測實施例1中化合物A、B、C對HIV的活性。本實施例分為以下4組：(1)空白對照組；(2)化合物A實驗組：實施例1中步驟(5)所得深海真菌化合物A；(3)化合物B實驗組：實施例1中步驟(5)所得深海真菌化合物B；(4)化合物C實驗組：實施例1中步驟(5)所得深海真菌化合物C；本實施例採用如下操作：在24孔板的每孔中加入1mL濃度為1×105個/mL的J-LatA2細胞懸液，置37℃，5％CO2培養箱內培養24h，而後分別加入樣品(10μL/孔，終濃度10μg/mL)，prostratin作為陽性對照、10μLDMSO對照，留空白對照，24h後分別收集每孔細胞懸液，1500rpm離心5min，棄去上清液，加0.4mL的PBS重懸，空白對照用1mL的PBS重懸。過濾後轉移入篩選專用試管中，通過流式細胞分析/分選系統進行檢測。結果顯示化合物A、B、C對HIV有較明顯的活性，可用於製備相應的治療藥物。結果顯示三種苯酚類衍生物對HIV有較明顯的活性，其中濃度為20ug/mL時抑制率分別為75％、88％和70％，可用於製備相應的治療藥物。本發明中的三種化合物是由一株深海真菌進行發酵後製備而得，具有較強的抗HIV活性，可用於製備和開發HIV治療藥物，本發明為研發HIV治療藥物提供新的化合物來源，對我國海洋藥物開發具有重要的意義，促進深海生物資源的有效應用。上面對本專利的較佳實施方式作了詳細說明，但是本專利並不限於上述實施方式，在本領域的普通技術人員所具備的知識範圍內，還可以在不脫離本專利宗旨的前提下作出各種變化。當前第1頁1 2 3