粘性沙雷氏菌及其生物轉化dl-乳酸生產丙酮酸的製作方法

2023-11-08 04:33:17 1

專利名稱：：粘性沙雷氏菌及其生物轉化dl-乳酸生產丙酮酸的製作方法
技術領域：
：本發明涉及生物轉化DL-乳酸生產丙酮酸，特別是以粘性沙雷氏菌生物轉化DL—乳酸生產丙酮酸。(二)
背景技術：
：丙酮酸，是重要的(x-氧代羧酸之一，為無色至淡黃色液體，呈醋酸香氣，易吸潮、聚合、分解，能與水、乙醇、乙醚等混溶。丙酮酸(鹽)及其衍生物廣泛應用於製藥、日化、食品和農用化學品等行業。丙酮酸是酶法合成多種胺基酸和維生素的前體物質製藥工業上可用於酶法合成L-色氨酸、合成L-半胱氨酸、L-多巴、L-亮氨酸，合成系列酶蛋白抑制劑、鎮靜劑、2-苯基喹啉-4-羧酸、磷酸烯醇丙酮酸、4-甲唑甲酸等，特別是丙酮酸鈣作為一種減肥藥品被開發後，目前丙酮酸的市場需求量很大；食品工業上可用作防腐保鮮劑；日化工業上，丙酮酸乙酯可抑制表皮中酪氨酸酶的形成美白皮膚，可用作化妝品的防腐劑和抗氧劑，用作空氣清新劑；農用化學方面,丙酮酸乙酯是合成乙烯聚合物、氫化阿託酸、穀物保護劑、成熟劑等多種農藥的起始原料；生化試劑和生物傳感器方面丙酮酸也有較廣泛的應用。因此，微生物轉化乳酸生產丙酮酸的研究有著重要意義。國內外用微生物法轉化乳酸生產丙酮酸已有一些文獻報導，用於生產丙酮酸的微生物主要是遲鈍愛德華氏菌(五^var^/e〃atoWa)(J.Ferment.Bioeng.81(1996)357-359)、普通變形桿菌(/VofeMvw/g"r/力(J.Biotechnol.31(1993)191-203)、奇異變形桿菌CPratewsw/raM"(J.Biotechno1.31(1993)191-203)、腐生葡萄iE求菌(6"ito//^/ococcMSsqprop/2j^'cM》(Chin.J.Appl.Environ.Biol.7(2001)617-620)、不動桿菌屬"c/"etok7cte》(Biotechnol.Prog.19(2003)1672-1676)、惡臭假單胞菌(i^eMfifoww2ospM^fcz)(Biochem.Eng.J.22(2005)89-96)和斯氏假單胞菌(屍wM必mo"osWwfeenO(Biotechnol.Lett.29(2007)105-110)。微生物轉化乳酸生產丙酮酸具有轉化率高、產物易分離、環境汙染小等優點，符合綠色化學的發展方向；DL-乳酸和丙酮酸也有較大的差價，因此，微生物轉化DL-乳酸生產丙酮酸的研究有著重要的社會效益和經濟效益。
發明內容本發明的目的在於提供能轉化乳酸生產丙酮酸的粘性沙雷氏菌(&rra^mwcMcms)ZJB-07166及其在製備丙酮酸中的應用。本發明提供的粘性沙雷氏菌(&rra甴marc"cms)ZJB-07166保藏於中國典型培養物保藏中心，其簡稱為CCTCC，保藏地址中國武漢武漢大學生命科學學院，保藏編號CCTCCNo:M207140，保藏日期為2007年9月7日。本發明所述粘性沙雷氏菌ZJB-07166由以下途徑篩選得到(1)富集培養基及條件DL-乳酸鈉10g/L，磷酸二氫鉀lg/L，磷酸氫二鉀lg/L，氯化銨3g/L,用蒸餾水配製，pH7.0。培養條件30°C，搖床轉速150r/min。5g土樣加入lOOmL富集培養基培養，培養48小時後，轉接lmL富集培養液至新的富集培養基培養。(2)第二次富集培養液稀釋後塗布到平板培養基上，30。C培養箱恆溫培養24小時，挑取單菌落至斜面培養後保藏，斜面培養條件為3(TC培養箱恆溫培養24小時。平板培養基及斜面培養基組分DL-乳酸鈉10g/L，酵母粉5g/L，蛋白腖5g/L，瓊脂15g/L-20g/L，pH7.0。(3)挑取的單菌落接種到菌體培養基，培養36小時，離心收集菌體，用pH7.0，0.05M磷酸鈉緩衝液洗滌兩次後，離心收集菌體，所得菌體與底物DL—乳酸均勻分散於蒸餾水中，底物濃度50mM，30°C，150r/min水浴下反應12小時。轉化液通過液相檢測，能轉化DL-乳酸生成丙酮酸的菌株為目的菌株。所述菌體培養基組分DL-乳酸鈉10g/L，磷酸二氫鉀lg/L，磷酸氫二鉀lg/L，氯化銨3g/L,用蒸餾水配製，pH7.0。本發明中丙酮酸採用液相色譜的方法進行檢測，檢測條件為<:18反相色譜柱，流動相為0.005M硫酸溶液，流速為lmL/min，檢測波長215nm，進樣量20jaL，柱溫30°C。粘性沙雷氏菌(6^ra^mcwre^^w)ZJB-07166具有如下特徵菌落形態在牛肉膏蛋白腖培養基上3(TC培養箱恆溫培養24小時後，菌落呈圓形，四周光滑，表面溼潤，中央微凸起，深紅色。細胞形態短杆狀，個體細胞大小為(0.5-0.8)x(o.9-1.4)pm，無芽孢生成，能運動。生理生化特徵詳見表1表1:粘性沙雷氏菌ZJB-07166生理生化特tableseeoriginaldocumentpage8tableseeoriginaldocumentpage9注表中"+"表示陽性，"一"表示陰性。以提取到的粘性沙雷氏菌(Swra"amwcescera)ZJB-07166細胞總DNA為模板，利用引物P16s8(5'to3')AgAgTTTgATCCTggCTCAg和P16s-1492(5，to3，)ggCTACCTTgTTACgACTT擴增菌株的16SrDNA，將擴增產物進行1%的瓊脂糖凝膠電泳，經PCR成功擴增獲得一長約1.5kb的片斷，經測序該片斷長度為1461kb，將該序列(已提交GenBank，GenBank登記號為NaEU031439)與GenBank中相關數據進行相似性分析發現，該菌與粘性沙雷氏菌(Serra^腿rcescmsO同源性最高(homology,99%/1461bps,basedon16SrDNA)。生理生化鑑定結合分子生物學鑑定，可確認該菌株為粘性沙雷氏本發明粘性沙雷氏菌"wra/"w"rc"cm)ZJB-07166在微生物轉化DL-乳酸製備生成丙酮酸中的應用。反應式如下催化劑CH3CHOHCOOH~_CH3COCOOHDL-乳酸丙酮酸本發明所述的應用，以DL-乳酸為底物，以粘性沙雷氏菌ZJB-07166溼菌體為生物催化劑，在轉化體系溶液中，在20-50。C下轉化反應6-10小時，得含有丙酮酸的轉化液，分離純化得到丙酮酸，所述轉化體系溶液為蒸餾水、自來水、磷酸鹽緩衝液或檸檬酸鹽緩衝液。推薦所述底物DL-乳酸的濃度為10mM-140mM，所述的溼菌體添加量為2-40g/L。進一步，本發明所述的應用以粘性沙雷氏菌ZJB-07166進行種子培養和菌體培養，從培養液中離心得到的溼菌體作為生物催化劑，在EDTA溶液存在，以蒸餾水溶液為轉化液，所述溼菌體添加量為2-40g/L，EDTA濃度為5-20mM，控制轉化溫度為20-50°C，進行微生物轉化反應6-10小時，反應完全得含酸丙酮酸的轉化液，經分離製得丙酮酸。EDTA在這裡可以阻止生成的丙酮酸進一步代謝。本發明所述的溼菌體的含水量為8090%。所述溼菌體按如下步驟製備得到(1)種子培養將粘性沙雷氏菌ZJB-07166接種於斜面培養基在20-3(TC的條件下培養24-36小時，獲得斜面活化菌種，所述斜面培養基組份為DL-乳酸鈉2-15g/L，酵母粉1-8g/L，蛋白腖l-8g/L，瓊脂15g/L-20g/L，溶劑為水，初始pH為6.0-7.5;再將斜面活化菌種接種於種子培養基，在20-35°C，100-200r/min條件下培養24-36小時得種子液，所述種子培養基組份為DL-乳酸鈉2-15g/L，磷酸二氫鉀0.2-2g/L，磷酸氫二鉀0.2-2g/L，氯化銨1-6g/L，200710156905.8說明書第7/15頁溶劑為水，初始PH為6.0-7.5;(2)菌體培養菌體培養基中按照體積比接入1_5%的種子液，在20-35°C，搖床轉速100-200r/min條件下培養24-56小時，將培養液離心、洗滌，收集溼菌體，冷藏備用；所述的菌體培養基組份為DL-乳酸鈉2-15g/L，磷酸二氫鉀0.2-2g/L，磷酸氫二鉀0.2-2g/L，氯化銨1-6g/L，0.0001-0.005g/LMgS04*7H20，溶劑為蒸餾水，初始PH為6.0-7.5。本發明所述的粘性沙雷氏菌ZJB-07166轉化DL-乳酸製備生成丙酮酸中的應用，優選轉化體系初始pH為6.5-9.0，在20-4(TC搖床150r/min水浴中進行轉化。推薦較好的方案是以粘性沙雷氏菌ZJB-07166的溼菌體為生物催化劑，在初始pH為6.5-9.0，底物濃度為10mM-140mM，溼菌體濃度為2-40g/L，EDTA濃度為6-14mM條件下，在28-32°C，搖床轉速50-250r/min震蕩，轉化6-10小時，得含有丙酮酸的轉化液，再以用SD-4型弱鹼性離子交換樹脂分離純化得到丙酮酸。具體的，本發明所述的粘性沙雷氏菌ZJB-07166轉化DL-乳酸生成丙酮酸，其流程如下(1)種子的培養粘性沙雷氏菌ZJB-07166接種於斜面培養基培養，斜面培養基配方為DL-乳酸鈉2-15g/L，酵母粉l-8g/L，蛋白腖l-8g/L，瓊脂15g/L-20g/L，用鹽酸或氫氧化鈉調節至pH6.0-7.5，在20-3(TC的條件下培養24-36小時。將斜面培養的菌體接種於種子培養基進行培養。種子培養基配方為DL-乳酸鈉2-15g/L，磷酸二氫鉀0.2-2g/L，磷酸氫二鉀0.2-2g/L，氯化銨l-6g/L,用蒸餾水配製，用鹽酸或氫氧化鈉調節至pH6.0-7.5。種子培養基在20-35。C，100-200r/min條件下培養24-36小時。(2)菌體培養將培養好的種子接種於菌體培養基以獲得菌體。其菌體培養基配方為DL-乳酸鈉2-15g/L，磷酸二氫鉀0.2-2g/L，磷酸氫二鉀0.2-2g/L，氯化銨l-6g/L,0.0001-0.005g/LMgS04'7H20，用蒸餾水配製，用鹽酸或氫氧化鈉調節至pH6.0-7.5，進行培養。培養條件為在20-35'C，100-200r/min條件下培養24-56小時，培養液離心收集菌體，用pH7.0，0.05M磷酸鈉緩衝液洗滌兩次後，離心收集菌體，冷藏備用。(3)生物轉化以DL-乳酸為底物，以粘性沙雷氏菌ZJB-07166溼菌體為生物催化劑，轉化體系溶液中，在20-40°C(其中以28-32i:較好)條件下，轉化6-10小時，得含有丙酮酸的轉化液，分離純化得到丙酮酸。所述轉化體系溶液為蒸餾水、自來水、磷酸鹽緩衝液或檸檬酸鹽緩衝液，初始pH6.5-9.0。所述的轉化體系溶液中，DL-乳酸的濃度為10mM-140mM(其中以30-60mM較好)，所述的溼菌體添加量為2-40g/L(其中以10g/L-20g/L較好)，EDTA濃度為5-20mM(其中以6-14mM較好)。(4)產物分離用SD-4型弱鹼性離子交換樹脂分離轉化液中的乳酸和丙酮酸，離子交換固定床工藝為上柱pH為2.0，上柱流速為0.5BV/h，用去離子水淋洗即可除去乳酸，l.OM鹽酸逆流洗脫，流速保持0.5BV/h。收集洗脫液，濃縮得到丙酮酸，該工藝可使丙酮酸收率達到78%以上。本發明有益效果在於提供了一種粘性沙雷氏菌ZJB-07166及這種粘性沙雷氏菌ZJB-07166在生物轉化合成丙酮酸的應用，該合成反應條件溫和，流程簡單，環境友好，轉化率較高。具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明進行進一步描述，但本發明的保護範圍並不僅限於此實施例1:(1)溼菌體的製備種子培養斜面培養基DL-乳酸鈉10g/L，酵母粉6g/L，蛋白腖7g/L，瓊脂13g/L，溶劑為水，初始pH為7.0;將粘性沙雷氏菌ZJB-07166接種於斜面培養基在25"C的條件下培養30小時，獲得斜面活化菌種。種子培養基DL-乳酸鈉7g/L，磷酸二氫鉀0.8g/L，磷酸氫二鉀0.9g/L，氯化銨4g/L，溶劑為水，初始PH為6.5;再將斜面活化菌種接種於種子培養基，在25"C，150r/min條件下培養30小時得種子液，菌體培養菌體培養基DL-乳酸鈉10g/L，磷酸二氫鉀lg/L，磷酸氫二鉀lg/L，氯化銨3g/L,0.003g/LMgS(V7H20，用蒸餾水配製，初始pH7.0，12rC滅菌20min，用粘性沙雷氏菌ZJB-07166的種子液按接種量為1_5%接種於菌體培養基，在30°C，150r/min下培養36小時。將培養液離心(12000r/min)收集菌體，用pH7.0，0.05M磷酸鈉緩衝液洗滌兩次後，離心收集溼菌體，冷藏備用。(2)丙酮酸製備在磨口三角瓶中加入50mL水溶液(pH7.0)，其中含底物DL-乳酸的濃度40mM，溼菌體濃度12.5g/L，EDTA濃度10mM，在30。C，轉速為150r/min的水浴搖床中進行轉化，每隔1小時取樣一次，取樣後立即離心、上清液進行HPLC檢測丙酮酸濃度，觀察轉化終點。轉化進行到8小時，乳酸接近全部轉化，8小時後丙酮酸濃度不再變化。觀察結果見表l.表l.不同轉化時間後轉化體系液中丙酮酸濃度tableseeoriginaldocumentpage14收集上述轉化液100mL，用SD-4型弱鹼性離子交換樹脂分離轉化液中的乳酸和丙酮酸，離子交換固定床工藝為上柱pH為2.0，上柱流速為0.5BV/h，用去離子水淋洗即可除去乳酸，1.0M鹽酸逆流洗脫，流速保持0.5BV/h。收集洗脫液，濃縮得到26.8mg丙酮酸，丙酮酸收率達到80%。實施例2:(1)溼菌體的製備製備粘性沙雷氏菌ZJB-07166溼菌體與實施例1同。(2)丙酮酸製備在8個磨口三角瓶中，分別加入10mL水溶液(pH7.0)，其中含底物DL-乳酸的濃度40mM，溼菌體濃度12.5g/L，EDTA濃度10m，分別在20°C,25°C,30°C,35°C,40°C,45°C，50°C，60°C，轉速為150r/min的水浴搖床中進行轉化，8小時取樣，立即離心、上清液進行HPLC檢測。表2.不同溫度條件下得到的丙酮酸的量tableseeoriginaldocumentpage14表2結果表明相同底物濃度、菌體濃度情況下，3(TC條件下轉化率最高，接近95%，轉化溫度高於45。C時，轉化率明顯下降，低於10%。實施例3:(1)溼菌體的製備製備粘性沙雷氏菌ZJB-07166菌體與實施例1同。(2)丙酮酸製備在ll個磨口三角瓶中，分別加入10mL水溶液(pH7.0)，其中含溼菌體濃度12.5g/L，EDTA濃度6mM，底物DL-乳酸濃度分別為10mM，20mM，30mM，40mM，50mM，60mM，70mM，80mM，100mM，120mM，140mM。在30°C，轉速為150r/min水浴搖床中進行轉化，轉化8小時取樣，取樣後立即離心、上清液進行HPLC檢測。表3.不同底物濃度轉化率tableseeoriginaldocumentpage15表3結果表明底物濃度小於60mM時，轉化率均在90%，高於60mM時，轉化率隨底物濃度的提高明顯下降，底物濃度在140mM時，轉化率只有10%。轉化最佳底物為60mM以下。實施例4:(1)溼菌體的製備製備粘性沙雷氏菌ZJB-07166菌體與實施例1同。(2)丙酮酸製備在12個磨口三角瓶中，分別加入10mLpH4.0，pH4.5，pH5.0，pH5.5，pH6.0，pH6.5，pH7.0，pH7.5，pH8.0，pH9.0，pH10.0，pH10.9的緩衝、液，每個三角瓶中含有溼菌體12.5g/L，底物DL-乳酸濃度40mM，EDTA濃度14mM，在30。C，轉速為150r/min水浴搖床中進行轉化、轉化8小時取樣，取樣後立即離心、上清液進行HPLC檢測。表4.不同pH值下濃度轉化率tableseeoriginaldocumentpage16表5結果表明菌體在pH6.0-7.0的溶液中其轉化能力基本保持不變，放當pH值高於10.0和低於5.0的溶液中，菌體轉化能力明顯下降。實施例5:(1)溼菌體的製備種子培養同實施例l;菌體培養菌體培養基DL-乳酸鈉10g/L，磷酸二氫鉀lg/L，磷酸氫二鉀lg/L，氯化銨6g/L，0.003g/LMgS04'7H20，用蒸餾水配製，pH7.0;12rC滅菌20min，用粘性沙雷氏菌ZJB-07166的斜面或種子液接種，在3(TC，150r/min下培養36小時。將培養液離心(12000r/min)收集菌體，用pH7.0，0.05M磷酸鈉緩衝液洗滌兩次後，離心收集菌體，冷藏備用。(2)丙酮酸製備在磨口三角瓶中加入10mL水溶液(pH7.0)，其中含底物DL-乳酸濃度40mM，溼菌體濃度12.5g/L的水溶液，EDTA濃度6mM，在30°C，轉速為150r/min水浴搖床中進行轉化，8小時取樣，取樣後立即離心、HPLC檢測，轉化率為83%。實施例6:(1)溼菌體的製備種子培養同實施例1;菌體培養菌體培養基DL-乳酸鈉5g/L，磷酸二氫鉀lg/L，磷酸氫二鉀lg/L，氯化銨3g/L,0.003g/LMgS04'7H20，用蒸餾水配製，pH7.0;12rC滅菌20min，用粘性沙雷氏菌ZJB-07166的斜面或種子液接種，在3(TC，150r/min下培養36小時。將培養液離心(12000r/min)收集菌體，用pH7.0，0.05M磷酸鈉緩衝液洗滌兩次後，離心收集菌體，冷藏備用。(2)丙酮酸製備在磨口三角瓶中加入10mL水溶液(pH7.0)，其中含底物DL-乳酸濃度40mM，溼菌體濃度12.5g/L的水溶液，EDTA濃度14mM，30°C，150r/min水浴中進行轉化，8小時取樣，取樣後立即離心、HPLC檢測，轉化率為89%。(1)溼菌體的製備種子培養同實施例1;菌體培養-菌體培養基DL-乳酸鈉10g/L，磷酸二氫鉀lg/L，磷酸氫二鉀lg/L，氯化銨3g/L,0.005g/LMgSO4'7H20，用蒸餾水配製，PH=7.0;12rC滅菌20min，用粘性沙雷氏菌ZJB-07166的斜面或種子液接種，在30。C，150r/min下培養36小時。將培養液離心(12000r/min)收集菌體，用pH7.0，0.05M磷酸鈉緩衝液洗滌兩次後，離心收集菌體，冷藏備用。(2)丙酮酸製備在磨口三角瓶中加入1OmL水溶液(pH7.0)，其中含底物DL-乳酸濃度40mM，溼菌體濃度12.5g/L，EDTA濃度5mM，在28。C，轉速為150r/min水浴搖床中進行轉化，8小時取樣，取樣後立即離心、HPLC檢測，轉化率為82%。實施例8:種子培養同實施例1;菌體培養菌體培養基DL-乳酸鈉5g/L，磷酸二氫鉀lg/L，磷酸氫二鉀lg/L，硝酸銨6g/L，0.01g/LMgS04'7H20，用蒸餾水配製，pH7.0;12rC滅菌20min，用粘性沙雷氏菌ZJB-07166的斜面或種子液接種，在32°C，150r/min下培養36小時。將培養液離心(12000r/min)收集菌體，用pH7.0，0.05M磷酸鈉緩衝液洗滌兩次後，離心收集菌體，冷藏備用。(2)丙酮酸製備在磨口三角瓶中加入10mL水溶液(pH7.0)，其中含底物DL-乳酸濃度40mM，溼菌體濃度12.5g/L，EDTA濃度20mM，在3(TC，轉速為150r/min水浴搖床中進行轉化，8小時取樣，取樣後立即離心、HPLC檢測，轉化率為87%。權利要求1.粘性沙雷氏菌ZJB-07166(SerratiamarcescensZJB-07166)，保藏於中國典型培養物保藏中心，保藏日期2007年9月7日，保藏編號CCTCCNoM207140。2.如權利要求1所述的粘性沙雷氏菌ZJB-07166,其特徵在於所述粘性沙雷氏菌ZJB-07166具有如下特徵菌落形態在牛肉膏蛋白腖培養基上菌落呈圓形，四周光滑，表面溼潤，中央微凸起，深紅色；細胞形態短杆狀，個體細胞大小為(0.5-0.8)x(0.9-1.4)(xm，無芽孢生成，能運動；生理生化特徵革蘭氏染色呈陰性、氧化酶呈陰性、過氧化氫酶呈陽性、鳥氨酸脫羧酶呈陽性、精氨酸雙水解酶呈陰性、賴氨酸脫羧酶呈陽性、脲酶呈陰性、L-阿拉伯糖呈陰性、5-酮基-葡萄糖酸鈉呈陽性、脂肪酶呈陽性、酚紅反應呈陰性、P-葡萄糖苷酶呈陽性、D-甘露醇呈陽性、D-麥芽糖呈陽性、側金盞花醇呈陽性、帕拉金糖呈陰性、P-葡萄糖酸酶呈陰性、丙二酸鹽呈陰性、N-乙醯-(3-葡萄糖苷酶呈陰性、(3-半乳糖苷酶呈陽性、D-葡萄糖呈陽性、D-蔗糖呈陽性、L-樹膠醛糖呈陰性、D-阿拉伯糖呈陰性、a-半乳糖苷酶呈陰性、D-海藻糖呈陽性、L-鼠李糖呈陰性、肌醇呈陽性、D-纖維二糖呈陰性、D-山梨醇呈陽性、(X-麥芽糖甙酶呈陰性。3.如權利要求1所述的粘性沙雷氏菌ZJB-07166在微生物轉化DL-乳酸製備丙酮酸中的應用。4.如權利要求3所述的應用，其特徵在於所述的應用為，以DL-乳酸為底物，以粘性沙雷氏菌ZJB-07166溼菌體為生物催化劑，在轉化體系溶液中，在20-50"下轉化反應6-10小時，得含有丙酮酸的轉化液，分離純化得到丙酮酸，所述轉化體系溶液為蒸餾水、自來水、磷酸鹽緩衝液或檸檬酸鹽緩衝液。5.如權利要求4所述的應用，其特徵在於所述底物DL-乳酸的濃度為10mM扁140mM。6.如權利要求4所述的應用，其特徵在於所述的溼菌體添加量為2-40g/L。7.如權利要求5所述的應用，其特徵在於所述的應用以粘性沙雷氏菌ZJB-07166進行種子培養和菌體培養，從培養液中離心得到的溼菌體作為生物催化劑，在EDTA溶液存在下，以蒸餾水溶液為轉化液，所述溼菌體添加量為2-40g/L，EDTA濃度為5-20mM，控制轉化溫度為20-50°C，進行微生物轉化反應6-IO小時，反應完全得含酸丙酮酸的轉化液，經分離製得丙酮酸。8.如權利要求4所述的應用，其特徵在於所述溼菌體按如下步驟製備得到(1)種子培養將粘性沙雷氏菌ZJB-07166接種於斜面培養基在20-3(TC的條件下培養24-36小時，獲得斜面活化菌種，所述斜面培養基組份為DL-乳酸鈉2-15g/L，酵母粉1-8g/L，蛋白腖1-8g/L，瓊月旨15g/L-20g/L，溶劑為水，初始pH為6.0-7.5;再將斜面活化菌種接種於種子培養基，在20-35°C，100-200r/min條件下培養24-36小時得種子液，所述種子培養基組份為DL-乳酸鈉2-15g/L，磷酸二氫鉀0.2-2g/L，磷酸氫二鉀0.2-2g/L，氯化銨1-6g/L，溶劑為水，初始PH為6.0-7.5;(2)菌體培養菌體培養基中按照體積比接入1-5%的種子液，在20-35。C，搖床轉速100_200r/min條件下培養24-56小時，將培養液離心、洗漆，收集溼菌體，冷藏備用；所述的菌體培養基組份為DL-乳酸鈉2-15g/L，磷酸二氫鉀0.2-2g/L，磷酸氫二鉀0.2-2g/L，氯化銨卜6g/L，0.0001-O.005g/LMgS047H20，溶劑為蒸餾水，初始PH為6.0-7.5。9.如權利要求4所述的應用，其特徵在於所述的轉化體系初始pH為6.59.0，在20-40。C搖床150r/min水浴中進行轉化。10.如權利要求4所述的應用，其特徵在於所述的應用為以粘性沙雷氏菌ZJB-07166的溼菌體為生物催化劑，在初始pH為6.5-9.0，底物DL-乳酸濃度為10mM-140mM，溼菌體濃度為2-40g/L，EDTA濃度為6-14mM條件下，在28-32。C，搖床轉速50-250r/min震蕩，轉化6-10小時，得含有丙酮酸的轉化液，再用SD-4型弱鹼性離子交換樹脂分離純化得到丙酮酸。全文摘要本發明涉及一種粘性沙雷氏菌及其生物轉化DL-乳酸生產丙酮酸，本發明粘性沙雷氏菌(Serratiamarcescens)ZJB-071662007年9月7日保藏於中國典型培養物保藏中心，保藏編號CCTCCNoM207140；本發明所述的生物轉化DL-乳酸生產丙酮酸，以DL-乳酸為底物，以粘性沙雷氏菌ZJB-07166溼菌體為生物催化劑，在轉化體系溶液中，在20-50℃下轉化反應6-10小時，得含有丙酮酸的轉化液，分離純化得到丙酮酸，所述轉化體系溶液為蒸餾水、自來水、磷酸鹽緩衝液或檸檬酸鹽緩衝液；本發明反應條件溫和，流程簡單，環境友好，轉化率較高。文檔編號C12N1/20GK101182484SQ20071015690公開日2008年5月21日申請日期2007年11月20日優先權日2007年11月20日發明者沈寅初,賈立壯,鄭裕國申請人:浙江工業大學