2,2'-聯氮-二(3-乙基-苯並噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法

2023-11-12 03:44:52 2

專利名稱：2,2'-聯氮-二(3-乙基-苯並噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法
技術領域：
本發明涉及一種合成方法，尤其涉及一種2，2』-聯氮-二(3-乙基-苯並噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法。
背景技術：
自從Engvall和Perlman( 1971)首次報導建立酶聯免疫吸附試驗(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssays, ELISA)以來，由於ELISA具有快速、敏感、簡便、易於標準化等優點，使其得到迅速的發展和廣泛應用。儘管早期的ELISA由於特異性不夠高而妨礙了其在實際中應用的步伐，但隨著方法的不斷改進、材料的不斷更新，尤其是採用基因工程方法製備包被抗原，採用針對某一抗原表位的單克隆抗體進行阻斷ELISA試驗，都大大提高了 ELISA的特異性，加之電腦化程度極高的ELISA檢測儀的使用，使ELISA更為簡便實用和標準化，從而使其成為最廣泛應用的檢測方法之一。ABTS (2, 2』-azinobis[3-ethylbenzothiazoline-6_sulfonicacid]-diammonium salt)是一種水溶性HRP底物，在過氧化物酶的作用下產生綠色終產物。該綠色產物在410nm及650nm具有兩個主要吸收峰。在ELISA應用中，ABTS的靈敏度比OPD和TMB稍差，它會被緩慢氧化並顯色(大約20分鐘)。相對於OPD或TMB底物高靈敏度造成的不可接受的高背景，該性質是ABTS底物的優勢，廣泛用於總抗氧化能力檢測試劑盒(ABTS法)，即TotalAntioxidant Capacity Assay Kit with ABTS method,簡稱T-AOC Assay Kit,是一種米用
2,2』 -azino-bis (3-ethylbenzthiazoIine-6-sulfonic acid (ABTS)作為顯色劑，可以對血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液、或各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力進行檢測的試劑盒。然而該物質長期依賴進口，而且價高昂貴。因此，低成本合成該物質具有一定的市場前景。
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在現有的合成方法中，文獻報導的關鍵中間體的合成有兩種方法:1.2-巰基苯並噻唑為原料`
權利要求
1.一種2，2』 -聯氮-二(3-乙基-苯並噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法，即ABTS的合成方法，其特徵在於:本方法包括如下步驟: (1)N-乙基苯胺與濃鹽酸的混合物在攪拌下加入硫氰酸鹽，在50-120°C下攪拌反應15-20小時，冷卻結晶，過濾，重結晶，得到N-乙基-N-苯胺硫脲； (2)攪拌下把溴素的有機溶液滴加到N-乙基-N-苯胺硫脲的有機溶液中，滴加完後，加熱回流10-20小時，冷卻後過濾乾燥，得到N-乙基-2亞胺基苯並噻唑氫溴酸鹽； (3)攪拌下把質量分數為80%的水合肼滴加到N-乙基-2亞胺基苯並噻唑氫溴酸鹽的乙醇溶液中，升溫回流反應5-20小時，冷卻、抽濾得到產品2，2』_聯氮-二(3-乙基-苯並噻唑)； (4)攪拌下把2，2』-聯氮-二(3-乙基-苯並噻唑)加到質量分數30-99%濃硫酸溶液中，冷卻後抽濾乾燥，得到2，2-聯氮-二(3-乙基-苯並噻唑-6-磺酸)Π;所述的2，2』 -聯氮-二(3-乙基-苯並噻唑)與濃硫酸溶液質量比為1:1到10:1 ; (5)攪拌下往2，2』-聯氮-二(3-乙基-苯並噻唑-6-磺酸)的水溶液體系中不斷充入氨氣，冷卻後抽濾乾燥，得到目標化合物2，2』_聯氮-二(3-乙基-苯並噻唑-6-磺酸)二銨鹽ΠΙ。
2.根據權利要求1所述的2，2』-聯氮-二(3-乙基-苯並噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法，其特徵在於，步驟(I)中所述的硫氰酸鹽為硫氰酸鉀、硫氰酸鈉、硫氰酸氨中的一種。
3.根據權利要求1所述的2，2』-聯氮-二(3-乙基-苯並噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法，其特徵在於，步驟(I)中所述的濃鹽酸的質量分數為25%到38%。
4.根據權利要求1所述的2，2』-聯氮-二(3-乙基-苯並噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法，其特徵在於，步驟(I)中N-乙基苯胺與硫氰酸的摩爾比為1:1到1: 5。
5.根據權利要求1所述的2，2』-聯氮-二(3-乙基-苯並噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法，其特徵在於，步驟(2)中所述的有機溶液為二氯甲烷、三氯甲烷中的一種。
6.根據權利要求1所述的2，2』-聯氮-二(3-乙基-苯並噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法，其特徵在於，步驟(2)中溴素與N-乙基-N-苯胺硫脲的摩爾比為1:2到1:5。
7.根據權利要求1所述的2，2』-聯氮-二(3-乙基-苯並噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法，其特徵在於，步驟(3)中所述的質量分數為80%的水合肼與N-乙基-2亞胺基苯並噻唑氫溴酸鹽質量比為1:1到1:2。
8.根據權利要求1所述的2，2』-聯氮-二(3-乙基-苯並噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法，其特徵在於，步驟(3)中也可實施分步反應，先利用水合肼與N-乙基-2亞胺基苯並噻唑氫溴酸鹽反應得到3-乙基-苯並噻唑酮腙，再與N-乙基-2亞胺基苯並噻唑氫溴酸鹽反應。
9.根據權利要求1所述的2，2』-聯氮-二(3-乙基-苯並噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法，其特徵在於，步驟(4)中反應溫度為0-80°C。
10.根據權利要求1所述的2，2』-聯氮-二(3-乙基-苯並噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法，其特徵在於，步驟(5)中反應溫度為20-80°C ；
全文摘要
本發明是2,2'-聯氮-二(3-乙基-苯並噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法，即ABTS的合成方法。包括如下步驟以N-乙基苯胺為原料，與硫氰酸鹽反應合成N-乙基-N-苯胺硫脲，經分離後與單質溴反應得到N-乙基-2亞胺基苯並噻唑氫溴酸鹽，接著與水合肼反應獲得關鍵中間體2,2'-聯氮-二(3-乙基-苯並噻唑)，再利用濃硫酸磺化，最後用氨水中和反應得到目標化合物ABTS。本方法具有操作簡便、收率高、純度高等優點。適合工業化生產。
文檔編號C07D277/82GK103073522SQ20131001244
公開日2013年5月1日 申請日期2013年1月14日 優先權日2013年1月14日
發明者陳軍民, 原唐軍, 張禕敏 申請人:江西師範大學