阿曼託雙黃酮及其衍生物在預防及治療輻射損傷中的用途的製作方法

2023-11-03 18:19:52

專利名稱：阿曼託雙黃酮及其衍生物在預防及治療輻射損傷中的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及阿曼託雙黃酮及其衍生物在預防及治療輻射損傷中的用途。
背景技術：
電離輻射是一種嚴重危害人體健康的有害因素，機體受到大劑量電離輻射會引起 骨髓造血功能障礙、胃腸道損傷或腦損傷為基本病變的急性放射綜合症，目前用於臨床的 輻射防護藥物主要為雌激素類、氨巰基類和細胞因子類。這些藥物的綜合療效還未被認可， 或雖被認可但由於副作用太大，不能用於臨床，因此開發高效、低毒或無毒的輻射防護藥物 具有重大的社會和經濟效益。據報導在姜科、銀杏科、卷柏科等植物中普遍存在著阿曼託雙黃酮；對卷柏科卷柏 屬植物進行含量測定，卷柏中阿曼託雙黃酮含量較高，現有技術中對其應用進行了廣泛的 研究。阿曼託雙黃酮連續給藥10天可顯著降低B16F-10黑素瘤細胞尾靜脈注射C57BL/6 小鼠21天後肺腫瘤的數量，減弱腫瘤的侵入、增殖和在血管中的發生；在荷瘤小鼠模型中， 阿曼託雙黃酮可調節免疫應答，通過提高IL-2和IFN- γ的產生來促進淋巴細胞的增值，提 高自然殺傷細胞的活性和增加抗體依賴性細胞毒性，抑制血清中唾液酸和Y-穀氨醯轉肽 酶的產生；另外據報導雙黃酮類化合物(如阿曼託雙黃酮、扁柏雙黃酮、貝殼杉雙黃酮、銀 杏雙黃酮等)具有抗腫瘤、抗病毒、抗真菌等作用。

發明內容
本發明的目的在於提供阿曼託雙黃酮及其衍生物在預防及治療輻射損傷的藥物 中的新用途。本實驗室用聚醯胺柱將卷柏醇提總部位分為水部位、50%乙醇部位、80%乙醇部 位、95%乙醇部位；並採用6tlCtlY射線SGy —次全身照射BALB/c小鼠動物模型篩選卷柏水 提總部位、醇提總部位、水部位、50%乙醇部位、80%乙醇部位、95%乙醇部位抗輻射活性， 其中醇提總部位和80%乙醇部位可顯著提高輻射後BALB/c小鼠平均生存天數；繼而對 80%乙醇部位進行化學成分分析，以阿曼託雙黃酮含量最高；通過細胞、動物水平的反覆驗 證，證明阿曼託雙黃酮可以抑制6tlCtl γ射線照射導致的V79細胞活力喪失，並能提高6tlCtl γ 射線6Gy —次全身照射BALB/c小鼠的活存率，從而完成了本發明。本發明中所述「阿曼託雙黃酮」包括阿曼託雙黃酮及阿曼託雙黃酮衍生物。阿曼 託雙黃酮可以是植物中提取的單體化合物，也可以是化學合成的阿曼託雙黃酮，還可以是 含阿曼託雙黃酮的提取物。阿曼託雙黃酮衍生物主要指以阿曼託雙黃酮為母核，對其進行的化學修飾，包括 將阿曼託雙黃酮母核中酚羥基進行醚化和酯化，醚化選擇甲基；酯化選擇己醯基等。阿曼託雙黃酮可與藥學上可接受的載體按本領域已知方法製備成各種藥物組合 物，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、注射劑等各種固體、液體製劑或貼劑等；或和其他中藥單體組合製成各種不同的劑型，通過不同的給藥途徑用於預防及治療輻射損傷。本發明具有以下優點1、發現了阿曼託雙黃酮的新的醫療用途。2、阿曼託雙黃酮作為常用中藥卷柏的已知提取物，來源廣，原料易得，用藥劑量 小，安全性大，藥用前景廣闊。3、阿曼託雙黃酮可提高6tlCtl γ射線6Gy全身照射BALB/c小鼠的活存率，這特點有 助於將其開發成輻射防護藥物，用於預防和治療輻射損傷，改善患者生存質量。



圖1阿曼託雙黃酮對V79細胞增殖的影響圖2阿曼託雙黃酮對6tlCtl γ射線導致的V79細胞活力喪失的保護作用圖3阿曼託雙黃酮預防給藥對6tlCtl γ射線6Gy —次全身照射BALB/c小鼠活存率 的影響。
具體實施例方式通過以下實施例來闡述本發明所述藥物阿曼託雙黃酮體外及體內抗輻射作用進 行評價，但並不限於以下途徑。這些生物實驗中主要包括1.化合物阿曼託雙黃酮細胞毒 性檢測；2.化合物阿曼託雙黃酮對6tlCtl γ射線導致的V79細胞活力喪失的影響；3.化合物 阿曼託雙黃酮對6tlCtl Y射線6Gy —次全身照射BALB/c小鼠活存率的影響。[實施例一]阿曼託雙黃酮細胞毒性檢測材料與方法1.V79細胞培養V79細胞在含10%胎牛血清(Gibco)及100IU/ml青黴素、100g/ml鏈黴素的DMEM 培養基中，於37°C，5% C02培養箱中培養。觀察細胞生長狀態良好，培養至對數生長期後， 將V79細胞接種96孔板，5X IO3細胞/孔，37°C，5% C02孵育12小時，細胞匯合後進行給 藥實驗，共同孵育24h後，待細胞長至7(T80% 6tlCtl γ射線照射處理。2.阿曼託雙黃酮對V79細胞增值的影響V79細胞在含10%胎牛血清(Gibco)及100IU/ml青黴素、100g/ml的DMEM培養基 中，於37°C，5% C02培養箱中培養。觀察細胞生長狀態良好，培養至對數生長期後，將V79 細胞接種96孔板，5X 103細胞/孔，37°C，5% C02孵育12小時，細胞匯合後，將化合物 阿曼託雙黃酮以終濃度 2. 5ug/ml、5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml、80ug/ml 分別給藥， 每濃度3孔，同時設無藥物細胞對照和空白對照，37°C，5% C02培養，48小時觀察結果。每 孔加入CCK-8工作液10ul，避光，37°C，5%C02培養2小時，在酶標儀(BIO-RAD Model 680) 上測定450nm處吸光值Α。同時在倒置顯微鏡下每日觀察細胞形態。3.阿曼託雙黃酮作用結果的處理與統計阿曼託雙黃酮對V79細胞增值的影響以不同組別吸光度值相對無藥物細胞對照 組的百分比表示
= (A450 給藥 _A450 空白)/ (A450 對照——A450 空白)*100結果用Origin Pro 7. 5進行統計分析，與無藥物對照組相比·.#，P < 0. 05 ·』##，P < 0. 01。結果化合物阿曼託雙黃酮以2倍稀釋為濃度梯度的6個濃度處理V79細胞過程中，每 日在倒置顯微鏡下觀察細胞形態，加藥組細胞形態與對照組細胞形態沒有明顯的變化。實 驗獨立重複三次，CCK-8檢測結果見圖1。阿曼託雙黃酮在2. 5^20ug/ml對細胞均沒有毒性。[實施例二]阿曼託雙黃酮對6tlCtl γ射線導致的V79細胞活力喪失的保護作用材料與方法1.V79細胞培養方法見實施例一2.阿曼託雙黃酮對6tlCtl γ射線導致的V79細胞活力喪失影響的檢測V79細胞在含10%胎牛血清(Gibco)及100IU/ml青黴素、100g/ml的DMEM培養基 中，於37°C，5% C02培養箱中培養。觀察細胞生長狀態良好，培養至對數生長期後，將V79 細胞接種96孔板，5X 103細胞/孔，37°C，5% C02孵育12小時，細胞匯合後，將化合物阿曼 託雙黃酮以終濃度0. 2ug/ml、lug/ml、5ug/ml分別給藥，共同孵育24小時後6tlCtl γ射線4Gy 照射，劑量率為2. 3^2. 5Gy/min,同時設無藥物細胞對照和空白對照，37°C，5% C02培養，分 別在24小時、48小時、72小時三個時間點觀察結果。每孔加入CCK-8工作液10ul，避光， 37°C，5% C02培養2小時，在酶標儀上(BI0-RAD Model 680)測定450nm處吸光值Α。同時 在倒置顯微鏡下每日觀察細胞形態。3.阿曼託雙黃酮作用結果的處理與統計阿曼託雙黃酮對6tlCtl Y射線導致V79細胞活力喪失的影響以不同組別吸光度值相 對無藥物細胞對照組的百分比表示= (A450 給藥-A450 空白)/ (A450 對照-A4S0 空白)*100結果用Origin Pro 7. 5進行統計分析，與無藥物對照組相比·.#，P < 0. 05 ·』##，P < 0. 01 ；與 4Gy 組相比*，P < 0. 05 ；**，P < 0. 01。結果實驗獨立重複三次，CCK-8檢測結果見圖2。阿曼託雙黃酮在0. 2^5ug/ml對6tlCtl γ 射線導致V79細胞活力喪失呈劑量依賴的抑制作用。[實施例三]阿曼託雙黃酮對6tlCtlγ射線6Gy —次全身照射BALB/c小鼠活存率的 影響材料與方法1. BALB/c 小鼠飼養選用18 22g雄性BALB/c小鼠50隻，由軍事醫學科學院動物實驗中心提供。小鼠 飼養環境溫度21°C 士2°C，相對溼度50% 士 10%，12小時燈光12小時黑暗。2.阿曼託雙黃酮對6tlCtl γ射線6Gy —次全身照射BALB/c小鼠活存率的影響藥物製備精密稱取E523粉末1. 5mg,加生理鹽水3ml，配置成0. 5mg/ml溶液；阿 曼託雙黃酮粉末3mg、6mg、12mg，分別加生理鹽水6ml，配置成0. 5mg/ml、lmg/ml、2mg/ml的溶液，超聲2小時助溶，形成混懸液備用。動物分組及處理BALB/c小鼠50隻隨機分為五組，每組10隻，模型組灌胃等體積 生理鹽水，陽性藥E523組按5mg/kg劑量灌胃，阿曼託雙黃酮低劑量組按5mg/kg劑量灌胃， 阿曼託雙黃酮中劑量組按10mg/kg劑量灌胃，阿曼託雙黃酮高劑量組按20mg/kg劑量灌胃。 E523組照射6tlCtl γ射線6Gy前24小時灌胃一次，其餘各組均灌胃兩次，分別在照射前24小 時和照射前1小時。30天活存狀況觀察=6tlCtlY射線6Gy照射後BALB/c小鼠體重減輕，皮毛乾枯，精神 萎靡，行動遲緩，團縮拱背，視力障礙。各給藥組，與模型組相比，小鼠的上述體徵均有所改
口 ο3.阿曼託雙黃酮作用結果的處理與統計阿曼託雙黃酮預防給藥對6tlCtl γ射線6Gy —次全身照射BALB/c小鼠活存率的影 響。結果用Origin Pro 7. 5進行統計分析。結果不同藥物不同劑量處理的6Gy照射的BALB/c小鼠30天活存率的結果見表1。阿 曼託雙黃酮預防性給藥能夠劑量依賴的提高6tlCtl Y射線6Gy —次全身照射BALB/c小鼠的 活存率。表1阿曼託雙黃酮預防性給藥對6tlCtl γ射線6Gy照射的BALB/c小鼠活存率的影 響
-mm-mm-平均存活大數wmm 保護指數
_(mg/kg)_(χ士s)_(%)_
模型組019.00±7.72 30——
陽性藥 E523 組530.00±0100林1.58
阿曼託雙黃酮低劑量組 525.90±6.62 701.36
阿曼託雙黃酮中劑量組 1028.50±4.74 90*1.50
阿曼託雙黃酮高劑量組 2026.80±6.76 801.41與模型組比較*，P< 0. 05 ；**，P < 0. 01。
權利要求
一種抗輻射作用的化合物，其名稱為阿曼託雙黃酮，結構為FSA00000012495000011.tif
2.一種抗輻射作用的藥物組合物，含藥用載體，特徵為其活性成分為阿曼託雙黃酮 及其衍生物。
3.根據權利要求2的藥物組合物，其特徵為阿曼託雙黃酮衍生物中，對阿曼託雙黃酮 母核所做的結構修飾。
4.根據權利要求3的藥物組合物，其特徵為阿曼託雙黃酮衍生物中，將阿曼託雙黃酮 母核中酚羥基進行醚化和酯化。
5.根據權利要求4的藥物組合物，其特徵為阿曼託雙黃酮衍生物中，醚化選擇甲基； 酯化選擇己醯基。
6.權力要求1所述的藥物組合物，其中所述藥物組合物可被配製成片劑、顆粒劑、膠囊 劑等固體製劑；注射劑、口服液等液體製劑或貼劑。
7.阿曼託雙黃酮及其衍生物在製備預防及治療輻射損傷的藥物中的應用。
全文摘要
本發明涉及阿曼託雙黃酮及其衍生物在預防及治療輻射損傷中的新用途。實驗證明阿曼託雙黃酮在小於20ug/ml濃度範圍內對V79細胞無毒性；在0.2-5ug/ml對60Coγ射線導致V79細胞活力喪失呈劑量依賴的抑制作用；在5-20mg/kg可劑量依賴的提高60Coγ射線6Gy照射BALB/c小鼠的活存率，說明阿曼託雙黃酮可用於預防及治療輻射損傷。
文檔編號C07D311/30GK101830877SQ20101010668
公開日2010年9月15日 申請日期2010年2月8日 優先權日2010年2月8日
發明者馮衛生, 周喆, 朱豔慧, 王升啟, 鄭曉珂 申請人:中國人民解放軍軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所