葛根素的胺基酸酯衍生物及其醫藥用途的製作方法

2023-12-03 11:39:41

專利名稱：：葛根素的胺基酸酯衍生物及其醫藥用途的製作方法
技術領域：
：本發明涉及新的葛根素的胺基酸酯的衍生物，及其非毒性藥學上可接受的鹽，這些衍生物具有較好的水溶性和較高的口服生物利用度。葛根素(Puerarin,商品名普樂林、普樂寧)是從豆科植物野葛中提取的黃酮類物質，化學名為4',7-二羥基-8-(3-D-葡萄吡喃糖-異黃酮。結構式J(口下戶斤示formulaseeoriginaldocumentpage3葛根素具有較為廣泛的藥理作用，實驗證明葛根素對冠狀動脈有擴張作用，能保護全心缺血心肌和心肌缺血再灌注損傷，減少急性心梗面積，降低心肌耗氧量，防止血小板黏附、聚集和血栓形成，葛根素對急性腦缺血有明顯的保護作用，對P-腎上腺素能受體有阻斷作用。在臨床上，葛根素主要用於冠心病、心絞痛、心肌梗塞、心律失常、缺血性腦血管病、高血壓、突發性耳聾、視網膜動、靜脈阻塞等症的治療。但是，葛根素脂溶性和水溶性均較差，口服生物利用度低。靜注注射用葛根素的製劑中需添加助溶劑如聚乙烯吡咯烷酮PVP等，易引起發熱、皮疹、過敏性哞喘、過敏性休克等不良反應。
背景技術：
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發明內容本發明的目的是提供式I所代表的葛根素的胺基酸酯的衍生物:其中，R為氫、曱基、異丙基、異丁基、2-曱基丙基或苯曱基等L-胺基酸的側《連。本發明還提供式I所示的葛根素的胺基酸酯的衍生物的非毒性藥學上可接受的鹽。本發明還提供含有式I所示的葛根素的胺基酸酯衍生物及其非毒性藥學上可接受的鹽作為活性成分的藥物組合物。本發明還提供式I所示的葛根素的胺基酸酯衍生物及其非毒性藥學上可接受的鹽，以及包含式I所示的葛根素的胺基酸酯衍生物及其非毒性藥學上可接受的鹽作為活性成分的藥物組合物用於治療心腦血管疾病的用途。具體實施例方式本發明的化合物可以按照如下合成路線製備formulaseeoriginaldocumentpage4葛根素與N-千氧羰基胺基酸在二環己基碳二亞胺作用下縮合，得到2"-O-(N-千氧羰基氨基醯)-葛根素，催化氬化脫保護，得到目標化合物。結構式中R為氫、曱基、異丙基、異丁基、2-甲基丙基或苯甲基等胺基酸側鏈。下面的實施例可以對本發明進行進一步的描述，然而，這些實施例不應作為對本發明的範圍的限制。實施例12"-0-(甘氨醯)-葛根素(U的製備將4.16g(10.0mmol)葛根素、2.09g(lO.Ommol)N-千氧羰基甘氨酸用25ml二曱基曱醯胺溶解，然後加入O.lml二曱氨基吡咬，2.5g(12mmol)二環己基碳二亞胺，室溫攪拌反應過夜，過濾，將濾液減壓蒸乾。將殘留物用矽膠柱層析分離，用二氯曱烷/甲醇/乙酸(9:1:O.Ol)混合溶劑洗脫，收集所需組分，減壓蒸乾，得2"-0-(N-千氧羰基甘氨醯)-葛根素2.8克。將2"-0-(N-苄氧羰基甘氨醯)-葛根素用25ml毫升二氧六環溶解，加入0.1克5%的鈀炭，在1個大氣壓的氫氣下攪拌4小時後，濾去催化劑。將濾液減壓濃縮，然後以矽膠柱層析分離，用二氯曱烷/甲醇(5:l)混合溶劑洗脫，收集所需組分，減壓蒸乾，得I!1.7克。核磁共振氫譜5(卯m，腿SO-dJ:5(ppm,DMSO-d6):9.475(s，1H);8.320(s，1H);8.274(brs，2H);7.929(d，1H，J=8.9Hz),7.416(d,2H，J=8.4Hz);7.077(d，1H,J=8.7Hz);6.842(d，2H，J=8.2Hz);5.702(t,1H);5.049(d,1H);3.758(m,1H);3.671(m,1H);3.624(t,1H);3.517(dd,1H);3.425(m,1H);3.346(m,1H);3.325(m，1H)。實施例22"-O-(L-丙氨醯)-葛根素(12)的製備按照實施例1的方法，用N-節氧羰基-L-丙氨酸代替N-千氧羰基甘氨酸，在二環己基碳二亞胺與葛根素縮合，得到2"-0-(N-千氧羰基一L-丙氨醯)-葛根素。用2"-0-(N-千氧羰基一L-丙氨醯)-葛根素代替2"-O-(N-千氧羰基甘氨醯)-葛根素，催化氫化脫保護，得到12。核磁共振氫譜5(ppm，DMSO-d6):5(ppm,DMSO-d6):9.470(s,1H);8.327(s，1H);8.271(brs，2H);7.922(d,1H，J=8.9Hz),7.419(d,2H,J=8.4Hz);7.074(d,IH,J=8.7Hz);6.846(d，2H,J=8.2Hz);5.707(t，IH);5.043(d,IH);3.755(m，IH);3.627(t,IH);3.540(q,lH);3.518(dd,IH);3.422(m，IH);3.344(m,IH);1.261(d,3H)。實施例32"-0-(L-纈氨醯)-葛根素(I3)的製備按照實施例1的方法，用N-節氧羰基-L-纈氨酸代替N-千氧羰基甘氨酸，在二環己基碳二亞胺與葛根素縮合，得到2"-O-(N-節氧羰基一L-纈氨醯)-葛根素。用2"-0-(N-卡氧羰基一L-纈氨醯)-葛根素代替2"-0-(N-苄氧羰基甘氨醯)-葛根素，催化氫化脫保護，得到13。核磁共振氫譜S(卯m,DMSO-d6):S(ppm,DMSO-d6):9.472(s,IH);8.324(s，IH);8.276(brs，2H);7.930(d,1H，J=8.9Hz),7.415(d，2H,J=8.4Hz);7.074(d,IH,J=8.7Hz);6.841(d,2H，J=8.2Hz);5.705(t,IH);5.053(d,IH);3.761(m，IH);3.683(m，lH);3.625(t，IH);3.516(dd，IH);3.422(m，IH);3,347(m,IH);1.610(m，1H);0.621(d，3H);0.569(d，3H)。實施例42"-O-(L-亮氨醯)-葛根素(I4)的製備按照實施例1的方法，用N-千氧羰基-L-亮氨酸代替N-節氧羰基甘氨酸，在二環己基碳二亞胺與葛根素縮合，得到2"-O-(N-千氧羰基一L-亮氨醯)-葛根素。用2"-0-(N-千氧羰基一L-亮氨醯)-葛根素代替2"-O-(N-苄氧羰基甘氨醯)-葛根素，催化氫化脫保護，得到I"核磁共振氫譜5(卯m,DMSO-d6):S(ppm,DMSO-d6):9.474(s,IH);8.321(s,IH);8.276(brs,2H);7.925(d,IH,J=8.9Hz),7.415(d,2H,J=8.4Hz);7.073(d，IH,J=8.7Hz);6駕(d,2H，J=8.2Hz);5.709(t,IH);5.043(d，IH);3.752(m,IH);3.624(t,IH);3.537(q，lH);3.516(dd,IH);3.425(m，IH);3.340(m,IH);1.426(m，IH);1.312(m,1H);0.562(d，3H);0.526(d，3H)。實施例52"-0-(L-異亮丙氨醯)-葛根素(I5)的製備按照實施例1的方法，用N-千氧羰基-L-異亮氨酸代替N-節氧羰基甘氨酸，在二環己基碳二亞胺與葛根素縮合，得到2"-0-(N-苄氧羰基一L-異亮氨醯)-葛根素。用2"-0-(1^苄氧羰基一1^異亮氨醯)-葛根素代替2"-0-(N-苄氧羰基甘氨醯)-葛根素，催化氫化脫保護，得到15。核磁共振氫譜5(卯m,DMSO-d6):S(ppm,DMSO-d6):9.477(s，IH);8.320(s,IH);8.275(brs,2H);7.924(d，1H，J=8.9Hz),7.416(d，2H,J=8.4Hz);7'073(d,1H，J=8.7Hz);6.848(d，2H,J=8.2Hz);5.702(t,IH);5.047(d,IH);3.751(m,IH);3.629(t，IH);3.543(q，lH);3.518(dd，IH);3.425(m，IH);3.340(m，IH);1.364(m,lH);0.662(m，2H);0.517(t，3H)。實施例62"-0-(L-脯氨醯)-葛根素(I6)的製備按照實施例1的方法，用N-爺氧羰基-L-脯氨酸代替N-千氧羰基甘氨酸，在二環己基碳二亞胺與葛根素縮合，得到2"-0-(N-千氧羰基一L-脯氨醯)-葛根素。用2"-0-(]^-,氧羰基一卜脯氨醯)-葛根素代替2，，-O-(N-千氧羰基甘氨醯)-葛根素，催化氫化脫保護，得到13。核磁共振氫譜S(卯m,DMSO-d6):5(ppm，DMSO-d6):9.791(brs，IH);9.473(s,IH);8.326(s，IH);7.930(d,IH,J=8.9Hz),7.415(d,2H，J=8.4Hz);7.074(d，IH,J=8.7Hz);6.842(d,2H,J=8.2Hz);5.707(t，IH);5.041(d,IH);4.072(brs,lH);3.758(m,IH);3.624(t,IH);3.521(dd，IH);3.417(m,IH);3.124(m,2H);2.129(m，IH);1.760(m，IH);1.647(m，2H)。實施例72"-O-(L-苯丙氨醯)-葛根素(I7)的製備按照實施例1的方法，用N-千氧羰基-L-苯丙氨酸代替N-千氧羰基甘氨酸，在二環己基碳二亞胺與葛根素縮合，得到2"-O-(N-節氧羰基一L-苯丙氨醯)-葛根素。用2"-O-(N-苄氧羰基一L-苯丙氨醯)-葛根素代替2"-0-(N-苄氧羰基甘氨醯)-葛根素，催化氫化脫保護，得到I7。核磁共振氫譜5(卯m，DMSO-d6):5(ppm,DMSO-d6):9.478(s,1H);8'326(s，1H);8.270(brs，2H);7.94(d,lH);7.923(d,1H，J=8.9Hz),7.419(d,2H,J=8.4Hz);7.23(m，5H);7.071(d，1H,J=8.7Hz);6.846(d,2H,J=8.2Hz);5.708(t,1H);5.043(d，1H);3.755(m,1H);3'627(t，1H);3.540(q，lH);3.518(dd，1H);3.422(m,1H);3,359(m,1H);3.15(dd,lH);3.01(dd,lH)。實施例8抗缺氧活性試—驗將質量18-20g的昆明小鼠，隨機分組，每組10隻，禁食過夜。將葛根素及待測目標化合物懸浮或溶解於1%的羧曱基纖維素鈉的水溶液中，配成5mg/ml的濃度，按100mg/kg的劑量口服給予的葛根素注射液及目標化合物。的不同的待測化合物；給藥2h後，將動物置於磨口廣口瓶中，立即用真空脂封口，記錄小鼠存活時間，計算平均值。結果見表l。tableseeoriginaldocumentpage8實施例9擴血管活性試驗將Wistar大鼠斷頭處死，取主動脈製成動脈條，置於血液營養液中，37。C恆溫，固定並與生物傳感器相連。穩定lhr後，於浴槽中加入去曱腎上腺素至lxl(Tmol/L的濃度，待血管張力達到穩定的強弱一致的收縮畔值後，加入待測化合物，在不同濃度測定相應的張力值，以去曱腎上腺素引起的收縮碎值為100%,計算收縮抑制率。結果見表2。表2擴血管活性試驗結果化合物收縮抑制率(％)5ug/ml10ug/ml20ug/ml生理鹽水2.50.21.1葛根素5.411.619.7II3.66.911.3l26.48.318.2139.819.426.0l43.98.812.9153.713.921.6工60.73.25.1176.810.513.3實施例IO口服生物利用度的測定參考文獻(吳燕紅，蘇子仁，賴小平，林吉。愈風寧心片中葛根素在Beagle犬體內藥代動力學研究。中成藥。2006;28(2):215-218.)的方法，測定目標化合物口服給藥後的不同時間點葛根素的血藥濃度，與靜脈注射的葛根素比較，計算生物利用度。採用自身對照設計試驗法，單劑量一次靜脈注射葛根素注射液或口服相同劑量的目標化合物。採用HPLC法測定狗血漿中葛根素的濃度，應用PKsolutions2.0程序計算藥動學參數和生物利用度。將3隻Beagle犬稱重(空腹重量)、編號；實驗前禁食12h,但不禁水。按單劑量IOmg/kg於左前肢靜脈注射葛根素藥液，並在靜脈注射前和注射後5min,10min,20min,30min,40min，60min,80min，2hr,3hr,4hr，5hr，8hr、12hr和24hr於對側的右前月支採血0.5mL置於肝素鈉和氟化鈉處理過的離心管中。動物在300min前可以適當餵々大水，狗在300min釆血後方可進食。每間隔二周，按單劑量IOmg/kg分別餵服葛根素及目標化合物的膠嚢，並在服藥前和服藥後15min,35min，60min,90min,120min,150min,3hr,4hr，5hr,8hr,12hr和24hr採血O.5mL置於肝素鈉和氟化鈉處理過的離心管中，動物在300min前可以適當餵飲水，狗在300min採血後方可進食。將血樣離心IOmm(8000r/min)，取上清200juL置離心管中，再加入200liL的6。/。高氯酸溶液沉澱蛋白質，混合2min後，離心(10000r/min)5min，放入水箱中靜置2h，耳又出再離心(10000r/min)5min，取上清液用O.45jum微孔濾膜過濾，取濾液2GiuL進樣。色譜條件K腦osilODSKR則一5色譜柱(250mmx4.6mm);Phenoie腦0DS保護柱(4mmx3.0mm);流動相曱醇-O.2%醋酸(30:70);流速1.0mL/min;;f主溫30°C;4企測波長250nm。實驗結果見表3:表3Beagle犬口服生物利用度tableseeoriginaldocumentpage10權利要求1、式I所代表的葛根素的胺基酸酯的衍生物其中，R為氫、甲基、異丙基、異丁基、2-甲基丙基或苯甲基等L-胺基酸的側鏈。。2、權利要求1所述的葛根素的胺基酸酯衍生物的非毒性藥學上可接受的鹽。3、權利要求1所述的葛根素的胺基酸酯衍生物的非毒性藥學上可接受的鹽作為活性成分的藥物組合物。4、權利要求1、2和3所述的葛根素的胺基酸酯衍生物及其非毒性藥學上可接受的鹽，以及包含式I所示的葛根素的胺基酸酯衍生物及其非毒性藥學上可接受的鹽作為活性成分的藥物組合物用於治療心腦血管疾病的用途。全文摘要本發明的目的是提供式I所代表的葛根素的胺基酸酯的衍生物，其中，R為氫、甲基、異丙基、異丁基、2-甲基丙基或苯甲基等L-胺基酸的側鏈。文檔編號C07D407/00GK101353346SQ200710130138公開日2009年1月28日申請日期2007年7月23日優先權日2007年7月23日發明者楊振華,王建民申請人:北京美倍他藥物研究有限公司