一種以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑及其製備方法和應用的製作方法

2023-12-03 04:53:36 1

一種以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑及其製備方法和應用的製作方法
【專利摘要】本發明涉及藥學領域，具體涉及一種以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑及其製備方法和應用，可以有效解決現有造影劑技術靶向性差、半衰期短、弛豫效能低和毒副作用大的問題。本發明的技術方案是，由天然多糖分子透明質酸通過亞烷基二胺為連接臂和羧基化短單壁碳納米管共價相連，然後將三氯化釓通過物理吸附於修飾後的碳納米管上，與水形成納米混懸液，即成以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑。這種以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑物理及化學穩定性良好，生物相容性好，有效用於腫瘤診斷中的磁共振造影劑，是腫瘤造影劑上的創新。
【專利說明】一種以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑及其製備方法和應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及藥物領域，特別是一種以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑的製備方法。
【背景技術】
[0002]惡性腫瘤是一類嚴重危害人類健康的多發疾病，據世界衛生組織統計，目前其已經超過心血管疾病成為人類致死的首要病因。近年來雖然治療手段有所進步，生存率有所提高，但死亡率仍然居高不下，因此需要更為有效安全的手段以實現腫瘤的早期診斷以及治療。自1973年Lauterbur首次實現磁共振成像技術以來,其較強的軟組織分辨能力、能任一方位成像等優點而迅速發展為協助臨床診斷必不可少的參考依據。然而到目前為止，臨床上常用的磁共振造影劑多缺乏靶向性、半衰期較短、弛豫效能低且大量使用時可導致毒副作用等缺點，因此發明一種靶向性、半衰期長、弛豫效能高且毒性低的磁共振造影劑迫在眉睫。
[0003]碳納米管自1991年發現以來，以其獨特的結構以及優異的熱電學性質引起廣泛關注，近年來，其應用在生物醫學特別是藥物載體上的研究更是逐漸成為熱點。根據組成碳納米管層數的不同，可以分為單壁碳納米管和多壁碳納米管，單壁碳納米管直徑為I-2nm，長度為50nm-1cm，其化學結構特點是所有的原子都暴露在表面而具有較大的比表面積。單壁碳納米管可以在側壁不同部位通過不同的方式結合不同的效應分子，其中空結構可以裝載一定大小的分子，形成一個「容器」狀的載體，來完成藥物分子或者效應分子的轉運，這樣的結構特點使得在一個單壁碳納米管上實現多位點結合，可以結合不同的靶向配體和效應分子而起到所期望的作用，從而為其在生物醫學中的應用提供更多機遇和挑戰。而短單壁碳納米管不僅具有以上單壁碳納米管的優勢，其長度僅為I-3μπι，更利於細胞吸收，提高生物相容性以及最終實現在生物體內的消除。
[0004]順磁性造影劑以釓的螯合物為主，由於具有未成對電子使Gd3+具有順磁性，從而縮短周圍水中質子的縱向弛豫時間。Hashimoto等報導了一種把Gd3+選擇性地沉積在超短單壁碳納米管上，其弛豫度為商用造影劑的40-90倍，其成像性能極大提高。
[0005]然而，儘管短單壁碳納米管具有以上種種優勢，但其本身生物相容性較差，且不具有腫瘤靶向性，因此將其作為藥物載體仍需要進一步處理修飾。目前，針對短單壁碳納米管水溶性差的問題，主要採用表面羧基化或者氨基化處理；而針對其靶向性缺陷仍需通過進一步引入葉酸等靶基團。但是，此類合成步驟較為繁瑣，且不能藉助單一分子同時滿足其穩定性、相容性及靶向性要求，導致載體結構複雜。
[0006]針對以上問題，本發明選用一種天然多糖一透明質酸為靶向基團來作為解決生物相性差、腫瘤靶向性差的方法。透明質酸是一種生物相容性好、可生物降解的天然線性多糖，近年來發現腫瘤細胞表面存在HA特異性受體。因此利用HA及其衍生物的可降解性及細胞表面HA受體專一性等特性，將HA及其衍生物製成藥物載體可達到藥物緩釋和靶向運輸的目的。該載體合成工藝簡單方便，並將單壁碳納米管獨特的藥物負載特性及透明質酸良好的生物相容性、緩釋性和靶向性整合為一體，克服了目前臨床常用造影劑載體靶向性差、半衰期短等問題，具有極大的臨床應用前景。

【發明內容】

[0007]針對上述情況，克服現有技術之缺陷，本發明之目的就是提供一種以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓造影劑的製備方法，可有效解決傳統磁共振造影劑靶向性差、半衰期短、弛豫效能低、毒副作用大等問題。
[0008]本發明解決的技術方案是，由以下步驟實現:
[0009](I)羧基化短單壁碳納米管的合成:將78-102mg短單壁碳納米管投入40-50mL混酸中，在功率為180-200W超聲條件下反應3-4h，真空抽濾得到固體產物，用超純水反覆洗滌產物至中性，得短單壁碳納米管羧基化產物；所述混酸為硫酸與硝酸以體積比3: I所組成的混合酸；
[0010](2)胺化透明質酸 的合成:將93-107mg透明質酸、252-266mgl-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和148-162mg N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)，溶解在8-12ml有機溶劑中，室溫攪拌30min，得反應液，在冰浴條件下Ih內，將反應液滴入0.4-
0.6ml的乙二胺甲醯胺溶液中，升至室溫反應6-48h,反應結束後,加入50ml丙酮,真空抽濾得沉澱物，沉澱物加超純水復溶，透析48h，冷凍乾燥，得胺化透明質酸；所述有機溶劑為甲醯胺、N，N-二甲基甲醯胺、二甲基亞碸的一種；所述的乙二胺甲醯胺溶液是由體積比的乙二胺3.6%和甲醯胺96.4%混勻組成；
[0011](3)透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管的合成:稱取26-34mg羧基化短單壁碳納米管溶於28-32mL反應溶劑中，室溫攪拌反應12h後，冰浴超聲30min得到反應液；取100-118mg EDC和60-72mg NHS分別溶於3-4ml反應溶劑後加入反應液中，室溫攪拌反應14-16min，在反應期間內，將56-64mg胺化透明質酸溶於7-9mL反應溶劑中，然後滴加至反應液中，室溫條件下，攪拌反應12-48h，反應結束後，加入3-4倍反應液量的預冷丙酮，離心分離取沉澱物，用丙酮洗滌後再次離心取沉澱，超純水復溶，透析48h，冷凍乾燥，得透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管；所述反應溶劑為甲醯胺、N，N-二甲基甲醯胺的一種或兩種的混合物；
[0012](4)以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑的製備:稱取26-34mg透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管,加入7-8mL水,冰浴超聲30min-Ih使其溶解，室溫條件下，邊攪拌邊緩慢滴入含有194-226mg三氯化釓的水溶液，滴加完畢後，攪拌反應30min，離心分離取沉澱，在沉澱中加入含有表面活性劑的水溶液，超聲使沉澱分散，採用透析法除去游離三氯化釓，凍幹，得以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑；所述表面活性劑為大豆卵磷脂，或大豆卵磷脂與泊洛沙姆的混合物；所述的表面活性劑的水溶液是由每IOmg的表面活性劑加入Iml的水組成。
[0013]所述以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑，可以用於靜脈注射、肌肉注射、腹腔注射給藥，優選注射劑、注射粉針。
[0014]本發明合成工藝簡單方便，具有良好的生物相容性、高靶向性、高弛豫率、低毒性等優點，是腫瘤診斷用磁共振造影劑上的創新。【具體實施方式】
[0015]以下結合實施例對本發明的【具體實施方式】作進一步詳細說明。
[0016]實施例1
[0017]本發明製備方法在具體實施中，可由以下步驟實現:
[0018](I)羧基化短單壁碳納米管的合成:將SOmg短單壁碳納米管投入40mL混酸中，在功率為180W超聲條件下反應3h，真空抽濾得到固體產物，用超純水反覆洗滌產物至中性，得短單壁碳納米管羧基化產物；
[0019](2)胺化透明質酸的合成:將95mg透明質酸、254mg 1-乙基_(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和150mg N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)，溶解在8mL甲醯胺中，室溫攪拌30min，得反應液，在冰浴條件下Ih內，將反應液滴入0.4mL的乙二胺甲醯胺溶液中，升至室溫反應6h,反應結束後,加入50ml丙酮,真空抽濾得沉澱物,沉澱物加超純水復溶,透析48h，冷凍乾燥，得胺化透明質酸；
[0020](3)透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管的合成:稱取28mg羧基化短單壁碳納米管溶於28mL甲醯胺中，室溫攪拌反應12h後，冰浴探頭超聲30min得到反應液；取102mgEDC和62mg NHS分別溶於3mL甲醯胺後加入反應液中，室溫攪拌反應14min，在反應期間內，將58mg胺化透明質酸溶於7mL甲醯胺中，然後滴加至反應液中，室溫條件下，攪拌反應12h，反應結束後，加入3倍反應液量的預冷丙酮，4°C低溫離心機離心IOmin後取沉澱物，用丙酮洗滌後再次離心取沉澱，超純水復溶，透析48h，冷凍乾燥，得透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管；
[0021](4)以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑的製備:稱取28mg透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管,加入7mL水,冰浴探頭超聲30min使其溶解，室溫條件下，邊攪拌邊緩慢滴入含有196mg三氯化釓的水溶液，滴加完畢後，攪拌反應30min後，4°C低溫離心機離心取沉澱，在沉澱中加入由IOmg大豆卵磷脂和Iml水形成的水溶液，探頭超聲使沉澱分散，採用透析法除去游離三氯化釓，凍幹，得以透明質酸修飾的羧基化單壁碳納米管為載體的釓類造影劑。
[0022]實施例2
[0023]本發明製備方法在具體實施中，可由以下步驟實現:
[0024](I)羧基化短單壁碳納米管的合成:將90mg短單壁碳納米管投入45mL混酸中，在功率為190W超聲條件下反應3.5h，真空抽濾得到固體產物，用超純水反覆洗滌產物至中性，得短單壁碳納米管羧基化產物；
[0025](2)胺化透明質酸的合成:將IOOmg透明質酸、259mg EDC和155mg NHS,溶解在IOmLN, N-二甲基甲醯胺中，室溫攪拌30min，得反應液，在冰浴條件下Ih內，將反應液滴入
0.5mL的乙二胺甲醯胺溶液中，升至室溫反應24h，反應結束後，加入50ml丙酮，真空抽濾得沉澱物，沉澱物加超純水復溶，透析48h，冷凍乾燥，得胺化透明質酸；
[0026](3)透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管的合成:稱取30mg羧基化短單壁碳納米管溶於30mL N，N- 二甲基甲醯胺中，室溫攪拌反應12h後，冰浴探頭超聲30min得到反應液；取109mg EDC和66mg NHS分別溶於3.5mL N，N- 二甲基甲醯胺後加入反應液中，室溫攪拌反應15min，在反應期間內，將60mg胺化透明質酸溶於8mL N，N-二甲基甲醯胺中，然後滴加至反應液中，室溫條件下，攪拌反應24h，反應結束後，加入3.5倍反應液量的預冷丙酮，4°C低溫離心機離心IOmin後取沉澱物，用丙酮洗滌後再次離心取沉澱，超純水復溶，透析48h，冷凍乾燥，得透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管；
[0027](4)以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑的製備:稱取30mg透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管,加入7.5mL水,冰浴探頭超聲45min使其溶解，室溫條件下，邊攪拌邊緩慢滴入含有210mg三氯化釓的水溶液，滴加完畢後，攪拌反應30min,4°C低溫離心機離心取沉澱,在沉澱中加入由IOmg重量比1:1的大豆卵磷脂與泊洛沙姆的混合物和Iml水形成的水溶液，探頭超聲使沉澱分散，採用透析法除去游離三氯化釓，凍幹，得以透明質酸修飾的羧基化單壁碳納米管為載體的釓類造影劑。
[0028]實施例3
[0029]本發明製備方法在具體實施中，可由以下步驟實現:
[0030](I)羧基化短單壁碳納米管的合成:將IOOmg短單壁碳納米管投入50mL混酸中，在功率為200W超聲條件下反應4h後，真空抽濾得到固體產物，用超純水反覆洗滌產物至中性，即得短單壁碳納米管羧基化產物；
[0031](2)胺化透明質酸的合成:將105mg透明質酸、264mg EDC和160mg NHS,溶解在12ml 二甲基亞碸中，室溫攪拌30min，得反應液，在冰浴條件下Ih內，將反應液滴入0.6ml的乙二胺甲醯胺溶液中，升至室溫反應48h，反應結束後，加入50ml丙酮，真空抽濾得沉澱物，沉澱物加超純水復溶，透析48h，冷凍乾燥，得胺化透明質酸；
[0032](3)透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管的合成:稱取32mg羧基化短單壁碳納米管溶於32mL甲醯胺與N，N- 二甲基甲醯胺的混合物中，室溫攪拌反應12h後，冰浴探頭超聲30min得到反應液；取116mg EDC和70mg NHS分別溶於4ml甲醯胺與N，N- 二甲基甲醯胺的混合物後加入反應液中，室溫攪拌反應16min，在反應期間內，將62mg胺化透明質酸溶於9mL甲醯胺與N，N- 二甲基甲醯胺的混合物中，然後滴加至反應液中，室溫條件下，攪拌反應48h,反應結束後,加入4倍反應液量的預冷丙酮，4°C低溫離心機離心IOmin後取沉澱物，用丙酮洗滌後再次離心取沉澱，超純水復溶，透析48h，冷凍乾燥，得透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管；
[0033](4)以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑的製備:稱取32mg透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管，加入SmL水，冰浴探頭超聲Ih使其溶解，室溫條件下，邊攪拌邊緩慢滴入含有224mg三氯化釓的水溶液，滴加完畢後，攪拌反應30min，4°C低溫離心機離心取沉澱，在沉澱中加入由IOmg大豆卵磷脂和Iml水形成的水溶液，探頭超聲使沉澱分散，採用透析法除去游離三氯化釓，凍幹，即成以透明質酸修飾的羧基化單壁碳納米管為載體的釓類造影劑。
[0034]相關試驗資料如下:
[0035]一.透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管的掃譜分析
[0036]對本發明透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管進行紫外分光光度法掃譜分析可知:透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管既保留了羧基化短單壁碳納米管在264nm的特徵吸收峰，又保留了透明質酸的末端吸收，初步斷定羧基化短單壁碳納米管和透明質酸偶聯成功；對本發明透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管進行傅立葉紅外圖譜分析可知:當透明質酸與羧基化短單壁碳納米管通過乙二胺共價偶聯後，1653CHT1處出現了醯胺鍵的伸縮振動峰，進一步證明了透明質酸有效地連接到羧基化短單壁碳納米管上。
[0037]二.以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑的表徵
[0038]1.實驗物:稱取2mg透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管，探頭超聲使其溶解於2mL水中，冰浴條件下探頭超聲30min，14mg三氯化釓用水溶解，然後二者混合，室溫攪拌30min後，離心(IOOOOrmp)取沉澱用含有表面活性劑的水溶液在探頭超聲條件下使其分散，重蒸水透析ld，離心(4000rpm) 15min，冷凍乾燥；所述表面活性劑為大豆卵磷脂或大豆卵磷脂和泊洛沙姆的混合物。
[0039]2.以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑中釓元素含量的測定
[0040]採用ICP-OES分析法測定釓元素的含量。以公式(I)計算樣品的載藥量。載藥量達到22.8%。
[0041]
【權利要求】
1.一種以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑，其特徵在於，由透明質酸通過亞烷基二胺為連接臂和羧基化短單壁碳納米管共價相連，然後將三氯化釓通過物理吸附於以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管上，與水形成納米混懸液，即成以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑；所述短單壁碳納米管為長度1-3 Ii m、直徑1-2nm的單壁碳納米管；所述透明質酸分子量為不高於400kd ;所述連接臂為碳原子數2-12的亞烷基二胺。
2.根據權利要求1所述的以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑的製備制方法，其特徵在於，由以下步驟實現: (1)羧基化短單壁碳納米管的合成:將78-102mg短單壁碳納米管投入40-50mL混酸中，在功率為18(T200W超聲條件下反應3-4h，真空抽濾得到固體產物，用超純水反覆洗滌產物至中性，得短單壁碳納米管羧基化產物；所述混酸為硫酸與硝酸以體積比3: I所組成的混合酸； (2)胺化透明質酸的合成:將93-107mg透明質酸、252-266mg1-乙基_(3_ 二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和148-162mg N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)，溶解在8-12ml有機溶劑中，室溫攪拌30 min，得反應液，在冰浴條件下Ih內，將反應液滴入0.4-.0.6ml的乙二胺甲醯胺溶液中，升至室溫反應6-48h,反應結束後,加入50ml丙酮,真空抽濾得沉澱物，沉澱物加超純水復溶，透析48h，冷凍乾燥，得胺化透明質酸；所述有機溶劑為甲醯胺、N，N- 二甲基甲醯胺、二甲基亞碸的一種；所述的乙二胺甲醯胺溶液是由體積比的乙二胺3.6%和甲醯胺96.4%混勻組成； (3)透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管的合成:稱取26-34mg羧基化短單壁碳納米管溶於28-32mL反應溶劑中，室溫攪拌反應12h後，冰浴超聲30min得到反應液；取100-118mg EDC和60-72mg NHS分別溶於3-4ml反應溶劑後加入反應液中，室溫攪拌反應14-16min，在反應期間內，將56-64mg胺化透明質酸溶於7-9mL反應溶劑中，然後滴加至反應液中，室溫條件下，攪拌反應12-48h，反應結束後，加入3-4倍反應液量的預冷丙酮，離心分離取沉澱物，用丙酮洗滌後再次離心取沉澱，超純水復溶，透析48 h，冷凍乾燥，得透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管；所述反應溶劑為甲醯胺、N，N-二甲基甲醯胺的一種或兩種的混合物； (4)以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑的製備:稱取26-34mg透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管,加入7-8mL水,冰浴超聲30min-Ih使其溶解，室溫條件下，邊攪拌邊緩慢滴入含有194-226mg三氯化釓的水溶液，滴加完畢後，攪拌反應30min，離心分離取沉澱，在沉澱中加入含有表面活性劑的水溶液，超聲使沉澱分散，採用透析法除去游離三氯化釓，凍幹，得以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑；所述表面活性劑為大豆卵磷脂，或大豆卵磷脂與泊洛沙姆的混合物；所述的表面活性劑的水溶液是由每IOmg的表面活性劑加入Iml的水組成。
3.根據權利要求2所述的以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟: (I)羧基化短單壁碳納米管的合成:將80mg短單壁碳納米管投入40mL混酸中，在功率為180 W超聲條件下反應3h，真空抽濾得到固體產物，用超純水反覆洗滌產物至中性，得短單壁碳納米管羧基化產物；(2)胺化透明質酸的合成:將95mg透明質酸、254mg1_乙基_(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和150mg N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)，溶解在8mL甲醯胺中，室溫攪拌30min,得反應液，在冰浴條件下Ih內，將反應液滴入0.4mL的乙二胺甲醯胺溶液中，升至室溫反應6h,反應結束後,加入50ml丙酮,真空抽濾得沉澱物,沉澱物加超純水復溶,透析48h,冷凍乾燥，得胺化透明質酸； (3)透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管的合成:稱取28mg羧基化短單壁碳納米管溶於28mL甲醯胺中，室溫攪拌反應12h後，冰浴探頭超聲30min得到反應液；取102 mg EDC和62mg NHS分別溶於3mL甲醯胺後加入反應液中，室溫攪拌反應14min，在反應期間內，將58mg胺化透明質酸溶於7mL甲醯胺中，然後滴加至反應液中，室溫條件下，攪拌反應12h，反應結束後，加入3倍反應液量的預冷丙酮，4°C低溫離心機離心10 min後取沉澱物，用丙酮洗滌後再次離心取沉澱，超純水復溶，透析48 h，冷凍乾燥，得透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管； (4)以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑的製備:稱取28mg透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管，加入7mL水，冰浴探頭超聲30min使其溶解，室溫條件下，邊攪拌邊緩慢滴入含有196mg三氯化釓的水溶液，滴加完畢後，攪拌反應30min後，.4°C低溫離心機離心取沉澱，在沉澱中加入由IOmg大豆卵磷脂和Iml水形成的水溶液，探頭超聲使沉澱分散，採用透析法除去游離三氯化釓，凍幹，得以透明質酸修飾的羧基化單壁碳納米管為載體的釓類造影劑。
4.根據權利要求2所述的以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟: (1)羧基化短單壁碳納米管的合成:將90mg短單壁碳納米管投入45mL混酸中，在功率為190W超聲條件下反應3.5h，真空抽濾得到固體產物，用超純水反覆洗滌產物至中性，得短單壁碳納米管羧基化產物； (2)胺化透明質酸的合成:將IOOmg透明質酸、259mgEDC和155mg NHS，溶解在IOmLN, N- 二甲基甲醯胺中，室溫攪拌30 min,得反應液，在冰浴條件下Ih內，將反應液滴入.0.5mL的乙二胺甲醯胺溶液中，升至室溫反應24h，反應結束後，加入50ml丙酮，真空抽濾得沉澱物，沉澱物加超純水復溶，透析48h，冷凍乾燥，得胺化透明質酸； (3)透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管的合成:稱取30mg羧基化短單壁碳納米管溶於30mL N, N- 二甲基甲醯胺中，室溫攪拌反應12h後，冰浴探頭超聲30min得到反應液；取109 mg EDC和66mg NHS分別溶於3.5mL N，N-二甲基甲醯胺後加入反應液中，室溫攪拌反應15min，在反應期間內，將60mg胺化透明質酸溶於8mL N，N-二甲基甲醯胺中，然後滴加至反應液中，室溫條件下，攪拌反應24h，反應結束後，加入3.5倍反應液量的預冷丙酮，.4°C低溫離心機離心IOmin後取沉澱物，用丙酮洗滌後再次離心取沉澱，超純水復溶，透析.48 h，冷凍乾燥，得透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管； (4)以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑的製備:稱取30mg透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管，加入7.5mL水，冰浴探頭超聲45 min使其溶解，室溫條件下，邊攪拌邊緩慢滴入含有210mg三氯化釓的水溶液，滴加完畢後，攪拌反應30min，.4°C低溫離心機離心取沉澱，在沉澱中加入由IOmg重量比1:1的大豆卵磷脂與泊洛沙姆的混合物和Iml水形成的水溶液，探頭超聲使沉澱分散，採用透析法除去游離三氯化釓，凍幹，得以透明質酸修飾的羧基化單壁碳納米管為載體的釓類造影劑。
5.根據權利要求2所述的以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟: (1)羧基化短單壁碳納米管的合成:將IOOmg短單壁碳納米管投入50mL混酸中，在功率為200W超聲條件下反應4h後，真空抽濾得到固體產物，用超純水反覆洗滌產物至中性，即得短單壁碳納米管羧基化產物； (2)胺化透明質酸的合成:將105mg透明質酸、264mgEDC和160mg NHS，溶解在12ml二甲基亞碸中，室溫攪拌30 min，得反應液，在冰浴條件下Ih內，將反應液滴入0.6ml的乙二胺甲醯胺溶液中，升至室溫反應48 h，反應結束後，加入50ml丙酮，真空抽濾得沉澱物，沉澱物加超純水復溶，透析48h，冷凍乾燥，得胺化透明質酸； (3)透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管的合成:稱取32mg羧基化短單壁碳納米管溶於32mL甲醯胺與N，N- 二甲基甲醯胺的混合物中，室溫攪拌反應12h後，冰浴探頭超聲30min得到反應液；取116 mg EDC和70mg NHS分別溶於4ml甲醯胺與N，N- 二甲基甲醯胺的混合物後加入反應液中，室溫攪拌反應16min，在反應期間內，將62mg胺化透明質酸溶於9mL甲醯胺與N，N-二甲基甲醯胺的混合物中，然後滴加至反應液中，室溫條件下，攪拌反應48h，反應結束後，加入4倍反應液量的預冷丙酮，4°C低溫離心機離心IOmin後取沉澱物，用丙酮洗滌後再次離心取沉澱，超純水復 溶，透析48 h，冷凍乾燥，得透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管； (4)以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑的製備:稱取32mg透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管，加入SmL水，冰浴探頭超聲Ih使其溶解，室溫條件下，邊攪拌邊緩慢滴入含有224mg三氯化釓的水溶液，滴加完畢後，攪拌反應30min，4°C低溫離心機離心取沉澱，在沉澱中加入由IOmg大豆卵磷脂和Iml水形成的水溶液，探頭超聲使沉澱分散，採用透析法除去游離三氯化釓，凍幹，即成以透明質酸修飾的羧基化單壁碳納米管為載體的釓類造影劑。
6.權利要求1所述的一種以透明質酸修飾的羧基化短單壁碳納米管為載體的釓類造影劑在腫瘤診斷中磁共振造影劑的應用。
【文檔編號】A61K49/18GK103446596SQ201310397793
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年9月4日 優先權日:2013年9月4日
【發明者】侯琳, 張振中, 王麗麗, 王亞婷, 張慧娟, 張紅嶺 申請人:鄭州大學