生物體組織染色方法
2023-11-01 04:22:02
專利名稱：生物體組織染色方法
技術領域：
本發明涉及一種生物體組織染色方法，尤其涉及一種利用稀土螢光絡合物作為染色劑進行生物體組織染色的方法。
本發明的生物體組織染色方法，其步驟包括1)在生物體組織試樣上滴加、塗抹、噴塗或注射染色劑溶液，或將生物體組織試樣浸泡於染色劑溶液中0.5-3分鐘；所述染色劑溶液為濃度1-50毫克/升的稀土螢光絡合物溶液，該溶液溶劑選自水、乙醇、四氫呋喃、氯仿、苯或庚烷或者它們的混合物；所述稀土螢光絡合物中的稀土元素選自銪或鋱，其配體選自①二元配體，其中一種配體選自β-二酮類，包括乙醯丙酮、噻吩甲醯基三氟丙酮，另一種配體選自三苯基氧化膦、鄰菲咯呤、吡啶、聯吡啶或其取代基為C2-C5的烷基或苯基的取代物；或②吡啶，或聯吡啶，或者其取代基為C2-C5的烷基或苯基的取代物；或③有機羧酸類及其取代物，取代基包括C2-C5的烷基、苯基或醯氧基；或④取代的喹啉酮類，包括氧氟沙星，環丙沙星，或氟哌酸；或⑤膦氧化物類，包括烷基膦氧化物、苯基膦氧化物或其一元或者多元取代的膦氧化物。
2)清洗生物體組織試樣；3)在紫外光激發下觀察生物體組織試樣。
本發明的生物體試樣可以為人體的活體組織或離體組織，核酸、蛋白質、磷脂等大分子。
下列染色劑與生物體組織試樣的搭配效果更好染色劑為銪-噻吩甲醯基-三苯基氧化膦，生物體組織試樣為磷脂。
染色劑為鋱-環丙沙星，生物體組織試樣為粘蛋白核苷酸鈉。
染色劑為銪-氧氟沙星，或鋱-乙醯水楊酸，生物體組織試樣為核苷酸鈉。
染色劑為鋱-乙醯水楊酸，或銪-氧氟沙星，生物體組織試樣為乳腺組織。
染色劑為銪-氧氟沙星，或鋱-環丙沙星，生物體組織試樣為肺癌組織。
染色劑為鋱-環丙沙星，生物體組織試樣為乳腺癌組織。
染色劑為鋱-環丙沙星，生物體組織試樣為涎腺上皮組織切片。
染色劑為銪-氟哌酸，生物體組織試樣為口腔內腺泡結構組織切片。
本發明的稀土螢光絡合物具有特異染色性能的螢光絡合物，其可以與核酸、蛋白質或磷脂等生物大分子作用，而產生很好的特徵性的染色效果，在紫外光激發下，用螢光顯微鏡，可以看到組織分子的形態和結構細節(如
圖1、2、3所示)，並對不同的細胞和組織顯示不同的著色效果。採用這類絡合物進行生物組織染色，觀察所得的結果與用傳統的HE染色法觀察到的結果較為一致。從而可以對細胞、組織的生理和病理狀態及其結構正常或異常做出判斷。
本發明通過在組織試樣上滴加、塗抹、噴塗或注射染色劑溶液，或將之在上述溶液中浸泡0.5-3分鐘，然後用蒸餾水衝洗試樣，樣品已著色。在紫外光的激發下，即可呈現出綠色、紅色、橙色或藍色的多種顏色。在雙染色時，按照上述步驟分別依次進行。染色後的樣品在紫外光激發下，用螢光顯微鏡、內窺鏡或肉眼觀察染色的組織結構，可確定組織的正常與否。
本發明方法的優異特點(1)本發明方法操作簡單方便，樣品不需要預處理，省時間，色彩鮮豔，輪廓清晰，為儘快得出生物組織是否發生病變的結論，創造了可靠的依據。
(2)實施本發明方法，所用的生物樣品不受種類、起源的限制，從細菌、病毒到高等生物的細胞組織，都能發生染色作用。
(3)染色過程試劑無毒性或毒性極微弱，對細胞或組織的原有結構無任何影響。
(4)染色過程不受離體組織或在體組織的限制。
除了前述的通過對細胞、生物大分子或生物組織的染色確定其是否正常外，還可以通過本發明染色方法研究細胞或組織的生理功能、形態結構和微觀狀態的特徵，同時，也能用於觀察或研究亞細胞水平和生物大分子水平的生理和病理過程。由於本發明方法中所用試劑的螢光特性，它能作用於細胞或組織的光敏部位或相關的物質，從而產生中斷病理過程的作用。總之，本發明方法可應用於分子生物學、組織切片病理研究、醫學鑑定、衛生防疫等領域。
圖2粘蛋白染色後在紫外光下出現亮綠色。
圖3核甘酸納染色後在紫外光下出現城紅色。
圖4乳腺組織的血管壁染色後在紫外光下出現亮綠色。
圖5肺癌組織的細胞核染色後在紫外光下出現亮綠色。
圖6乳腺癌周圍組織腺上皮染色後在紫外光下出現綠色螢光。
圖7(A)涎腺上皮組織切片經HE染色，用普通光學顯微鏡觀察，看到的圖形。
(B)涎腺上皮組織切片經絡合物鋱-環沙星染色，在紫外光的激發下，用螢光顯微鏡觀察到的圖形。
圖8(A)口腔內腺泡結構組織切片經嗜伊紅染色，用普通光學顯微鏡觀察，所見到的圖形。
(B)口腔內腺泡結構組織切片經絡合物銪-氟哌酸染色，在紫外光的激發下，用螢光顯微鏡觀察，所看到的圖形。
將口腔內腺泡結構組織切片用嗜伊紅染色，用普通光學顯微鏡觀察，所獲得的圖形，如圖8(A)所示；將上述組織切片用類似實施例1的方法，以濃度為5毫克/升的絡合物銪-氟哌酸溶液染色3分鐘，在紫外光激發下，用螢光顯微鏡觀察，觀察到的圖形如圖8(B)所示。其中箭頭所示的部分為腺泡結構，比較兩種染色法，其所顯示的組織中的管狀結構是一致的，只是顏色深淺不同。
權利要求
1.一種生物體組織染色方法，其步驟包括1)在生物體組織試樣上滴加、塗抹、噴塗或注射染色劑溶液，或將生物體組織試樣浸泡於染色劑溶液中0.5-3分鐘；2)清洗生物體組織試樣；3)在紫外光激發下觀察生物體組織試樣；其特徵在於所述染色劑溶液為濃度1-50毫克/升的稀土螢光絡合物溶液，該溶液溶劑選自水、乙醇、四氫呋喃、氯仿、苯或庚烷或者它們的混合物；所述稀土螢光絡合物中的稀土元素選自銪或鋱，其配體選自①二元配體，其中一種配體選自β-二酮類，包括乙醯丙酮、噻吩甲醯基三氟丙酮，另一種配體選自三苯基氧化膦、鄰菲咯呤、吡啶、聯吡啶或其取代基為C2-C5的烷基或苯基的取代物；或②吡啶，或聯吡啶，或者其取代基為C2-C5的烷基或苯基的取代物；或③有機羧酸類及其取代物，取代基包括C2-C5的烷基、苯基或醯氧基；或④取代的喹啉酮類，包括氧氟沙星，環丙沙星，或氟哌酸；或⑤膦氧化物類，包括烷基膦氧化物、苯基膦氧化物或其一元或者多元取代的膦氧化物。
2.如權利要求1所述的生物體組織染色方法，其特徵在於所述生物體組織試樣選自人體的活體組織或離體組織，核酸、蛋白質、磷脂等大分子。
3.如權利要求2所述的生物體組織染色方法，其特徵在於所述染色劑為銪-噻吩甲醯基-三苯基氧化膦，生物體組織試樣為磷脂。
4.如權利要求2所述的生物體組織染色方法，其特徵在於所述染色劑為鋱-環丙沙星，生物體組織試樣為粘蛋白核苷酸鈉。
5.如權利要求2所述的生物體組織染色方法，其特徵在於所述染色劑為銪-氧氟沙星，或鋱-乙醯水楊酸，生物體組織試樣為核苷酸鈉。
6.如權利要求2所述的生物體組織染色方法，其特徵所述的染色劑為鋱-乙醯水楊酸，銪-氧氟沙星，生物體組織試樣為乳腺組織。
7.如權利要求2所述的生物體組織染色方法，其特徵在於所述的染色劑為銪-氧氟沙星，鋱-環丙沙星，生物體組織試樣為肺癌組織。
8.如權利要求2所述的生物體組織染色方法，其特徵在於所述的染色劑為鋱-環丙沙星，生物體組織試樣為乳腺癌組織。
9.如權利要求2所述的生物體組織染色方法，其特徵在於所述的染色劑為鋱-環丙沙星，生物體組織試樣為涎腺上皮組織切片。
10.如權利要求2所述的生物體組織染色方法，其特徵在於所述的染色劑為銪-氟哌酸，生物體組織試樣為口腔內腺泡結構組織切片。
全文摘要
本發明涉及一種使用稀土螢光絡合物使生物組織染色的方法。本發明所用染色試劑為一類稀土螢光絡合物溶液，將之滴到生物組織上或將試樣浸泡在染色劑稀土螢光絡合物溶液中0.5－3分鐘，然後用蒸餾水衝洗，在紫外光激發下，用螢光顯微鏡可以觀察到已著色的組織試樣的形態和結構細節。本發明方法操作簡單方便，樣品不需要預處理，省時間，用此方法整個過程不超過5分鐘；色彩鮮豔，輪廓清晰；所用的生物樣品不受種類、起源的限制；試劑無毒性或毒性極微弱，染色過程對細胞或組織的原有結構無任何影響；染色過程不受離體組織或在體組織的限制。可廣泛應用於分子生物學、組織切片病理研究、醫學鑑定、衛生防疫等領域。
文檔編號G01N1/30GK1441239SQ0215859
公開日2003年9月10日 申請日期2002年12月26日 優先權日2002年12月26日
發明者吳瑾光, 徐怡莊, 翁詩甫, 吳奇光, 王晶, 楊軍, 楊麗敏, 周風山, 楊展瀾, 李維紅, 蘇允蘭, 王凡, 張莉, 任宇, 劉智 申請人:北京大學