防治禽類呼吸道病毒與細菌感染藥物組合物及其製備方法
2023-11-01 15:34:37
專利名稱：防治禽類呼吸道病毒與細菌感染藥物組合物及其製備方法
技術領域：
本發明屬於畜禽藥，尤其是一種防治禽類呼吸道病毒與細菌感染藥物組合物及其製備方法。
背景技術：
禽類的呼吸道感染性疾病在整個禽病中佔有十分重要的地位，其中病毒和細菌性疾病佔80％以上。目前發病的禽種和病種都在不斷增加，不僅嚴重影響著禽產業的發展，而且禽類病毒感染人體和人禽共患病症嚴重威脅人類健康已引起國際社會的高度重視。由於免疫程序複雜、弱毒疫苗的潛在危險性、滅活苗抗原性弱、一些疫苗的保護率降低以及缺少有效的預防用疫苗等因素，尤其在病毒性疾病的防治方面還存在很多缺陷。用中藥防治病毒和細菌引起的感染性疾病在我國具有悠久歷史，在臨床應用中顯示出了獨特的療效。由於中草藥保持了各種物質的自然形態和生物活性，極少有毒副作用，近年來許多國家都非常重視從中草藥或植物藥中研究新藥。國內的動物用藥也正向療效高、耐藥性低、效果持久、低毒、低殘留等方向發展，中草藥在某些領域有逐漸取代抗生素類藥物的趨勢。但由於中藥在動物體內作用機理的複雜性和複方成分難以定量化，研製和篩選一種非常有效的並能夠在臨床大規模應用的有效藥物仍十分困難，目前市場上仍以中西結合藥物為主，而且功能單一。
發明內容
基於現有技術的不足和國內外對抗病毒、抗菌中藥產品開發的需求，本發明以祖國傳統醫學理論為指導，研製了新組方純中藥防治禽類呼吸道病毒與細菌感染藥物組合物——「菌毒康」，將其製成口服製劑型，用於治療和預防禽類頑固性呼吸道感染類疾病。
本發明的另一目的是提供防治禽類呼吸道病毒與細菌感染藥物組合物——「菌毒康」的製備方法。
本發明的目的是通過以下技術方案來實現
一種防治禽類呼吸道病毒與細菌感染藥物組合物，以1500ml藥液計算，含各味中藥以生藥材計算的量以及敷料量配比為板蘭根350～450g，黃連150～250g，金銀花225～275g，黃芩270～330g，山豆根180～220g，甘草135～165g，95％乙醇225-250ml，亞硫酸氫鈉3g，其餘為蒸餾水。
本發明的製備方法是①水提按照配方組成，分別稱取板蘭根350～450g，黃連150～250g，金銀花225～275g，黃芩270～330g，山豆根180～220g，甘草135～165g，第一次加4倍蒸餾水，加熱至沸騰，提取0.5小時；過濾取濾液；第二次加入7倍水量，加熱至沸騰提取1小時，過濾收集濾液；第三次同第二次，然後合併三次提取液，加熱濃縮至1200ml；②醇沉加入乙醇，使藥液的乙醇濃度含量為50％，搖勻後在低溫下靜置過夜，離心驅除沉澱物，回收上清夜，回收乙醇使藥液體積至1200ml，以上述方法分別經過65％、80％的乙醇提取2次，最後濃縮藥液1200ml；③藥液配製藥液中加入3g亞硫酸氫鈉攪拌溶解。然後加入乙醇225～250ml充分攪拌。最後加入蒸餾水並定容至1500ml。
劑型口服液理化參數pH值5.0±1.0；比重1.02±0.15；性狀棕紅色液體，久置可有微量沉澱，味微苦。
鑑別取藥液作為供試品溶液另取鹽酸小檗鹼對照品，加水配成0.5mg/ml試驗，吸取上述兩溶液各1μl，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，以苯-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇(6∶3∶1.5∶1.5)為展開劑展開，置於蒸氣飽和的層析缸內展開，取出晾乾後置紫外檢測儀(365nm)下檢視。供試品與對照品在色譜板相應的位置上顯相同的黃色螢光斑點。
含量測定取藥液1ml，加入2M的NaOH溶液4滴，使其pH值調整為9.0-10.0。以2ml的乙酸乙酯提取5次，合併乙酸乙酯並揮幹，殘渣以0.05M的硫酸溶解並定容至25ml，搖勻，按分光光度法，在345nm波長測定吸收度，按C20H18ClNO4的吸收係數(El％，1cm)為728計算，即得。「菌毒康」含鹽酸小檗鹼(C20H18ClNO4)計，其值應為0.45μg/ml以上。
本發明的優點和產生的有益效果是本發明屬於清熱解毒類藥物，與活血化淤藥、補益藥配伍，並且通過大量的臨床使用，證明該藥物對多種病毒和細菌引起的禽類呼吸道感染甚至十分頑固、久治不愈的病症具有十分良好的治療效果，其應用對於推動我國家禽業的發展將產生積極作用；本產品主要治療和預防禽類頑固性呼吸道感染類疾病，可取代現有的抗生素類藥物，臨床使用具有高效、安全、低毒、使用方便的優點。
下面，結合病毒試驗、藥理藥效試驗、臨床試驗、治療雞呼吸道綜合症療效試驗對本發明再作進一步的說明實施例1①按照配方組成，分別稱取板蘭根400g，黃連200g，金銀花250g，黃芩300g，山豆根200g，甘草150g，第一次加4倍蒸餾水，加熱至沸騰，提取0.5小時，過濾取濾液；第二次加入7倍水量，加熱至沸騰提取1小時，過濾收集濾液；第三次同第二次，然後合併三次提取液，加熱濃縮至1200ml。
②加入乙醇，使藥液的乙醇濃度含量為50％，搖勻後在低溫下靜置過夜，離心驅除沉澱物，回收上清夜，減壓加熱回收乙醇，使藥液體積至1200ml。以上述方法分別經過65％、80％的乙醇醇沉2次，最後濃縮藥液至1200ml。
③藥液中加入3g亞硫酸氫鈉攪拌溶解。然後加入乙醇225ml充分攪拌。最後加入蒸餾水並定容至1500ml。
實施例2①按照配方組成，分別稱取板蘭根400g，黃連200g，金銀花250g，黃芩300g，山豆根200g，甘草150g，第一次加4倍蒸餾水，加熱至沸騰，提取1小時，過濾取濾液；第二次加入6倍水量，加熱至沸騰提取1小時，過濾收集濾液；第三次同第二次，然後合併三次提取液，加熱濃縮至1200ml。
②加入乙醇，使藥液的乙醇濃度含量為50％，搖勻後在低溫下靜置過夜，離心驅除沉澱物，回收上清夜，減壓加熱回收乙醇，使藥液體積至1200ml，以上述方法分別經過65％、80％的乙醇醇沉2次，最後濃縮藥液至1200ml。
③藥液中加入3g亞硫酸氫鈉攪拌溶解。然後加入乙醇225ml充分攪拌，最後加入蒸餾水並定容至1500ml。
試驗例1藥理藥效試驗「菌毒康」對雞傳染性法氏囊病毒(IBDV)感染細胞能力的影響取9日齡SPF雞胚，去頭、爪和內臟，用D-Hanks液衝洗3次後置於小燒杯中，剪成1mm3左右大小的碎塊，再用D-Hanks液衝洗3次，然後加入4倍量的0.25％胰蛋白酶液，輕輕搖勻後置於37℃水浴中消化至組織塊變得疏鬆、表面發毛棄上層胰液，用D-Hanks液衝洗，吹散，紗布過濾，以MEM細胞生長液調整細胞數至×106個/ml，分裝100ml細胞瓶(10ml/瓶)，置5％CO2培養箱中37℃培養24h，待細胞長成緻密單層，再用0.025％的胰酶消化，洗去胰酶，每瓶用細胞生長液稀釋成10ml，轉入96孔細胞板，每孔0.2ml，繼續培養，待細胞長成完整單層時，小心吸去細胞生長液，按以下三種順序加入中藥和病毒①先加中藥後加病毒取各稀釋度中藥分別加入到CEF單層中，每個濃度重複4孔，每孔0.1ml，置於5％CO2培養箱中37℃培養24h，各孔再加入0.1ml的病毒液，每個稀釋度同時設設中藥對照(只加中藥0.2ml)、病毒對照(只加0.2ml病毒)和細胞對照(只加0.2ml細胞維持液)繼續培養，每隔24h在倒置顯微鏡下觀察，直至病毒對照組完全死亡時。
②先加病毒後加中藥先將病毒液加入CEF單層中，每孔0.1ml，培養24h，加入各稀釋度中藥，每孔0.1ml，每個稀釋度重複4孔；同時設中藥對照、病毒對照和細胞對照。觀察同①。
③病毒和中藥同時加入將各稀釋度中藥加入CEF單層中，每個濃度重複6孔，每孔0.1ml；同時加入病毒液，每孔0.1ml。並設中藥對照、病毒對照和細胞對照。觀察同①。
按以下標準判定和列表記錄從表1可以看出「菌毒康」先於病毒加入時，在0.0488mg/ml濃度出抑制高峰(強抑制)，0.0977mg/ml呈中抑制，0.1953～0.7813mg/ml和0.0244mg/ml以下濃度呈弱抑制，後加時未出現抑制效應，與病毒同時加入時，在0.0122mg/ml以上呈強抑制，0.0061mg/ml以下呈中抑制。本結果表明，」菌毒康」的抗病毒機理應是通過抑制細胞的生長而抑制病毒的，並且存在量效關係。
表1菌毒清對IBDV感染細胞能力的影響(濃度mg·ml1)
*注中藥對照和細胞對照細胞組成層好，無游離細胞、死細胞，細胞折光好，病毒對照細胞全部死亡。
-細胞全部死亡或僅有少數活細胞，表示中藥不能抑制病毒；+活細胞較多，細胞單層出現嚴重拉網狀，表示弱抑制；
++細胞單層完好，折光性差，表示中抑制；+++細胞單層完好，折光性好，表示強抑制。
試驗例2對小鼠的口服急性毒性試驗對體重18～22g的昆明系小白鼠50隻，分5組灌服」菌毒康」，各組劑量依次為6451、7021、8295和8930mg/kg，觀察小鼠的死亡情況並進行記錄，實驗期限為7天，試驗中死亡小鼠及試驗結束時存活小鼠進行剖檢，觀察病理變化。試驗數據見表2。
表2小鼠口服急性中毒試驗數據統計
結果計算表明，」菌毒康」對小鼠的口服LD50為7624mg/kg，LD50的95％的可信限為6917～9793mg/kg，根據毒理學毒物分級標準，應為低毒。與臨床推薦使用量相比，換算的單位體重用量非常小，由此可見，菌毒清安全範圍大，毒性小很，臨床使用安全可靠。
試驗例3臨床藥效試驗1、「菌毒康」防治雞傳染性支氣管炎(IBV)的試驗結果1日齡京白939雛雞，經臨床檢查均為健康，IBV-T株原液接種於9日齡雞胚尿囊腔，每胚0.2ml，共接種8隻雞胚並做2隻空白對照，接種後恆溫箱37℃下培養24h，拋棄死胚，72h後，無菌收穫尿囊液加入青黴素後放4℃冰箱保存備用。將120隻1日齡京白939雛雞隨機分成四組，每組30隻。各組具體飼養與管理見表3。病料組織採集於攻毒後1天，3天，5天，分別採集氣管、肺、腎等組織，石蠟切片，普通H·E染色。
表3飼養管理情況 從表4可以看出，攻毒後第III組症狀明顯嚴重，人工感染IB-T株前後用」菌毒康」預防及治療的第I、II組症狀幾乎沒有或只有輕微臨床症狀，攻毒後未給予治療的第III組臨床症狀明顯嚴重。說明」菌毒康」能拮抗或輕微減輕IBV-T株侵害後的症狀。證明了該藥對IBV-T株有預防和治療的作用。
表4攻毒後臨床症狀
表5攻毒後的肉眼病變
表6光鏡下病理組織變化
以上結果表明各用藥組病雞在藥物的作用下，大部分得到保護，少數發病的雛雞病變比較輕微，器官受損輕而易恢復，而攻毒致病的第III組組織嚴重，病變明顯。
從表6可見IBV-T株侵害的主要組織是氣管和腎，致病的第III組組織病變最嚴重最明顯。而第I組預防和第二組治療組組織幾乎沒有病變或輕微。說明」菌毒康」能抑制IBV-T株侵害組織，對組織有保護作用。
試驗例4治療雞呼吸道綜合症療效試驗2500隻伊沙褐蛋雞(90日齡-183日齡)，均為臨床病例，三個月病程，雞產蛋率只有30％。臨床症狀為雞冠及肉髯深紅，嗜飲水；營養不良羽毛凌亂無光澤，削度；咳嗽甩頭流鼻液，大便稀或水樣、色灰白；頭、頸腫脹。診斷結果為雞傳染性喉氣管炎，及大腸桿菌、葡萄球菌等細菌混合感染。治療試驗，2000隻病雞採用」菌毒康」飲水治療，方法為按1∶100稀釋」菌毒康」給病雞自由飲用，連續用藥5天；每天觀察記錄雞的症狀變化。500隻雞採用對照藥物病毒唑治療，飲水藥物濃度為0.1％給藥方法同上。
試驗結果用藥前後雞產蛋率變化「菌毒康」治療組用藥後95％雞隻臨床治癒，至第七天平均產蛋率達最高峰80％，接近正常產蛋的水平。臨床治癒雞實驗室檢查結果，玻片凝集試驗雞喉氣管炎呈陰性，鏡檢埃希氏大腸桿菌和葡萄球菌感染率在正常範圍之內。臨床治癒病雞飲食正常，甩頭、咳嗽、拉稀、頭頸腫等症狀消失。
對照藥物病毒唑治療組用藥後10％雞隻臨床治癒，用藥後第七天產蛋率為40％。病雞實驗室檢查結果，玻片凝集試驗檢查雞喉氣管炎病毒呈陽性，鏡檢埃希氏大腸桿菌和葡萄球菌感染率高於正常範圍。所有病雞甩頭、咳嗽、拉稀、頭頸腫等症狀未消失。
使用方法說明功能抗病毒，抗菌，清熱解毒，消炎，增強免疫力。
主治禽呼吸道病毒與細菌感染性疾病。
用量方法禽飲水，按1％稀釋於水中，每日1-2次，連續使用3-5天。預防量減半。
規格100ml/瓶，32瓶/箱。
貯藏密閉，避光，置陰涼處。
有效期二年。
權利要求
1.一種防治禽類呼吸道病毒與細菌感染藥物組合物，其特徵是以1500ml藥液計算，含各味中藥以生藥材計算的量以及敷料量配比為板蘭根350～450g，黃連150～250g，金銀花225～275g，黃芩270～330g，山豆根180～220g，甘草135～165g，95％乙醇225-250ml，亞硫酸氫鈉3g，其餘為蒸餾水。
2.如權利要求1所述的一種防治禽類呼吸道病毒與細菌感染藥物組合物的製備方法是①水提按照配方組成，分別稱取板蘭根350～450g，黃連150～250g，金銀花225～275g，黃芩270～330g，山豆根180～220g，甘草135～165g，第一次加4倍蒸餾水，加熱至沸騰，提取0.5小時；過濾取濾液；第二次加入7倍水量，加熱至沸騰提取1小時，過濾收集濾液；第三次同第二次，然後合併三次提取液，加熱濃縮至1200ml；②醇沉加入乙醇，使藥液的乙醇濃度含量為50％，搖勻後在低溫下靜置過夜，離心驅除沉澱物，回收上清夜，回收乙醇使藥液體積至1200ml，以上述方法分別經過65％、80％的乙醇提取2次，最後濃縮藥液1200ml；③藥液配製 藥液中加入3g亞硫酸氫鈉攪拌溶解。然後加入乙醇225～250ml充分攪拌。最後加入蒸餾水並定容至1500ml。
全文摘要
本發明公開一種防治禽類呼吸道病毒與細菌感染藥物組合物及其製備方法，以1500ml藥液計算，含各味中藥以生藥材計算的量以及敷料量配比為板蘭根350～450g，黃連150～250g，金銀花225～275g，黃芩270～330g，山豆根180～220g，甘草135～165g，95％乙醇225－250ml，亞硫酸氫鈉3g，其餘為蒸餾水。並採用水提、醇沉、藥液配製三步驟製成口服劑。本發明通過大量的臨床使用，證明該藥物具有抗病毒，抗菌，清熱解毒，消炎，增強免疫力功能，對多種病毒和細菌引起的禽類呼吸道感染，甚至頑固性、久治不愈的病症治療效果十分明顯，其應用對於推動我國家禽業的發展將起到積極作用。
文檔編號A61K33/04GK1813956SQ20051004170
公開日2006年8月9日 申請日期2005年2月3日 優先權日2005年2月3日
發明者張繼瑜, 李劍勇, 周緒正, 李金善, 李宏勝, 蒲小霞, 魏小娟, 徐忠贊 申請人:中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所