含有抗結核藥物的抗分支桿菌藥物組合物的製作方法

2023-11-30 21:24:51

專利名稱：含有抗結核藥物的抗分支桿菌藥物組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種包含有效量的通式(I)的N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺或者其藥學可接受的鹽和一種或者多種一線抗結核藥物的組合，用於治療結核，包括耐多藥變體和潛伏性結核。
本發明還涉及一種包含與一種或者多種藥學可接受的賦形劑混合的有效量的通式(I)的N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺或者其藥學可接受的鹽和一種或者多種一線抗結核藥物的組合的藥物組合物。該組合物可以用於治療結核，包括耐多藥變體和潛伏性結核。
本發明還涉及一種用於治療結核、包括耐多藥變體和潛伏性結核的方法。
背景技術：
在世界範圍內，結核仍是死亡的主要原因。每年有約8百萬活動性結核病個案，其中每年有3百萬死亡。據估計，大約17億人口(世界人口的三分之一)存在潛伏性結核分支桿菌感染[Kochi，A.Tubercle.1991，72，1-6]。患有潛伏性結核的個體具有2-23％的在後半生中該疾病再活化的壽命風險[Parrish，NM.，Dick，JD.，and Bishai，WR.，Trends.Microbial.1980，6，107-112]。此外，免疫抑制性疾病包括人類免疫缺陷性病毒(HIV)感染顯著提高了結核再活化的風險。
耐藥病原體的出現使得目前的治療模式非常困難，並且在很多情況下是完全無效的。結核的耐多藥變體的治療是困難的，並且該疾病通常具有高的死亡率，尤其是在發展中國家。據估計，在接下來的20年中，超過十億的人口將再度感染結核病，其中接近3500萬人口將死於該病[WHO Fact Sheet No.104，Global Alliance For TBDrug DevelopmentExecutive Summary of the Scientific Blueprint for TBDevelopment；http//www.who.int/inf-fs/en/fact104.html]。隨著HIV相關性結核的出現，如今該疾病作為致死性疾病之一在世界上達到令人震驚的程度。世界衛生組織(WHO)已經在先宣布需要立即控制結核感染，以防止耐藥性菌株的傳播。
目前的結核治療的一個問題是結核分支桿菌轉變成潛在的或潛伏的狀態。因此，在用現有的作為處方的組合藥物方案治療活動性結核大量地減少細菌量的同時，部分細菌轉變成休眠狀態，並在宿主中存活數月或數年而不明顯發病。但是，以後這些細菌會再次活化而再一次引發活動性結核。近來結核的復發被認為是存活於宿主中的潛伏有機體再活化的結果[Stead，WW.，Am.Rev.Respir.Dis.，1982，95，729-745；Stead，WW.，Kerby，GR.，Schleuter，and Jordahl，CW.，Ann.Intern.Med.，1968，68，731-745]。
用於對抗結核分支桿菌的第一藥物是1994年的鏈黴素，其被發現抑制結核分支桿菌的生長。在近30年裡，有幾類化合物已被引入到臨床實踐中，比如a)長效利福黴素，例如利福噴丁、利福布丁、利福拉齊[Javis，B.，Lamb，HM.，Drugs，1998，56，607-616；McGregor，MM.，Olliaro，P.，Wolmarans，L.，Am.J.Respir.Crit.Care Med.，1996，154，1462-1467；Shoen，CM.，Destefano，MS.，Cynamon，MH.，Clin.Infect.Dis.，2000，30(Suppl.3)，S288-S29]；b)氟代喹諾酮化合物，例如左氟沙星、莫西沙星、加替沙星[Ji，B.，Lounis，N.，Truffot-Pernot，C.，Grosset.，Antimicrob.Agents Chemother.，1995，39，1341-1344；Miyazaki，E.，Miyazaki，M.，Chen，JM.，Chaisson，RE.，Bishai，WR.，Antimicrob.Agents Chemother.，1999，43，85-89；Fung-Tomc，J.，Minassian，B.，Kolek，B.，Washo，T.，Huczko，E.，Boner，D.，Antimircrob.Agents Chemother.，2000，45，437-446]；c)唑烷酮化合物[Cynamon，MH.，Klemens，SP.，Sharpe，CA.，Chase，SC.，Antimicrob.Agents Chemother.，1999，43，1189-1191]；和d)硝基咪唑吡喃類(Niroimidazopyrans)[Strover，CK.，Warrener，P.，Vandevabter，D.，Nature，2000，405，962-966]。
然而，這些化合物都沒有顯示出所期望的有效治療耐多藥和/或潛伏性結核的潛力。
利福噴丁和利福拉齊已經顯示出通過施用較少(間歇治療)劑量的藥物而在治療結核方面的有效性，並且還報導了兩種藥物的組合在預防潛伏性結核方面比利福平更有效。然而，由於這些藥物具有與利福平相同的藥效基團，因此它們對於耐藥菌株的活性譜沒有顯著提高。這些分子對於結核分支桿菌的耐多藥菌株是相當沒有效果的。此外，這些化合物中有許多已經證明是毒性的。
有些藥物如對氨基水楊酸(p-aminosaliscyclic acid)、異煙肼、吡嗪醯胺、乙胺丁醇、乙硫異煙胺、利福平等已經單獨或者組合使用來治療結核。發現這些藥物在治療被耐鏈黴素菌株感染的患者方面比鏈黴素更有效，因此開創了有效治療結核的時代。
目前，結核的治療由施用四種一線藥物即異煙肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪醯胺的組合組成，其中四種藥物作為單一藥物製劑單獨施用，或者作為固定劑量組合來施用。為了進行有效治療，在初始或誘導階段給患者提供上述四種一線藥物，在該階段所述藥物組合使用以殺滅快速繁殖的結核分支桿菌種群，以及防止出現耐藥性。隨後是繼續階段，在該階段提供殺菌藥物即異煙肼、利福平和吡嗪醯胺以殺滅間歇分裂的結核分支桿菌種群[Jindani，A.，Aber，VR.，Edwards，EA.，Mitchison，DA.，Am.Rev.Respir.Dis.，1980，121，39-49；Grosset，J.，Tubercule.，1978，59，287-297；EastAfrican/British Medical Research Council Study in Am.Rev.Respir.Dis.，1977，115，3-8；Singapore Tuberculosis Service/British Medical Research Council in Am.Rev.Respir.Dis.，1979，119，579-585；British Thoracic Society and Tuberculosis Associationin Am.Rev.Respir.Dis.，1982，126，460-462；Snider，DE.，Rogowski，J.，Zierski，M.，Bek，E.，Long，MW.，Am.Rev.Respir.Dis.，1982，125，265-267]。
雖然上述一線藥物共同的組合在4-6個月的時間內提供針對敏感結核分支桿菌感染的治療，但是這種組合治療並不總是成功的，尤其是對於體內存在耐多藥菌株的患者而言。而且，6個月的長時間治療時常導致不舒適的副作用。此外，對於相對長時間的治療的依從性通常是差的。這種不依從性時常導致治療失敗，從而引起耐藥性。
另一方面，用於治療的二線藥物，如環絲氨酸、氯法齊明、捲曲黴素等，是更加昂貴的，會引起嚴重的副作用，並且不如一線藥物。
取代的吡咯衍生物構成另一類化合物，其具有作為抗分支桿菌劑的前景。許多吡咯衍生物已經被合成出來，並測試了抗結核活性[Deidda，D.，et. al.，Antimicrob.Agents Chemother.，1998，3035-3037；Biava，M.，et. al.，J. Med. Chem Res.，1999，19-34；Biava，M.，et.al.，Bioorg.Med.Chem.Lett.，1999，9，2983-2988；Cerreto，F.，et.al.，Eur.J.Med.Chem.，1992，27，701-708；Gillet，C.，et.al.，Eur.J.Med.Chem.-Chimica Therapeutica.，1976，11(2)，173-181；Raagno.R.，et.al.，Bioorg.Med.Chem.，2000，8，1423-1432]。其中所公開的化合物充其量是候選藥物而不是藥物，因為這些報導沒有提及其中所公開的化合物針對動物模型體內的試驗性結核的體內活性和毒性。因此，這些化合物更具有學術價值而不是商業價值。
因此，迫切需要開發更新的用於預防、治療和/或減少結核和/或消除耐多藥結核和/或潛伏性結核的威脅的方案。
替代方案應該優於現有的方案，以便a)縮短總的治療時間和/或顯著減少總劑量；b)提供耐多藥變體的有效治療；c)提供潛伏性結核的更有效治療；和d)最小化或者防止副作用。
在我們的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO 04/026828 A1)中，我們描述了幾種取代的吡咯衍生物和其藥學可接受的鹽，其證明了對於結核分支桿菌的敏感和耐藥菌株的良好至優異的抑制活性。對於結核分支桿菌的敏感和耐多藥菌株的最大活性化合物中一些的MIC值在0.12-0.5μg/ml範圍內。此外，這些化合物中有一些也證明了具有重要治療意義的對於結核分支桿菌感染動物的，還發現是安全的，其對小鼠的LD50值為約700mg/kg，而異煙肼為133mg/kg。而且，這些化合物的藥物動力學特徵是優異的。PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO 04/026828 A)的主題通過參考引入本文。
本發明人發現，PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO 04/026828 A1)中公開的多種吡咯衍生物在與一些一線藥物組合使用時具有協同作用，由此提供一種新型的結核治療，所述結核包括耐多藥變體和潛伏性結核。本文所述的治療優於現有技術中已知的藥物方案。
發明目的本發明的目的是提供一種包含一種或者多種PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO04/026828 A1)中公開的吡咯衍生物和一種或者多種其它抗結核藥物的組合，用於有效治療結核，包括耐多藥變體和潛伏性結核。
本發明的另一目的是提供一種新型組合，其包含協同有效量的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO 04/026828 A1)中公開的吡咯衍生物和有效量的一種或多種一線抗結核藥物。
本發明的另一目的在於提供一種包含我們的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO04/026828 A1)中公開的一種或者多種吡咯衍生物和一種或者多種其它抗結核藥物的組合，其有效抑制和/或處理分支桿菌疾病/細胞，包括但不限於一種或多種敏感的和耐多藥的菌株，所述菌株選自結核分支桿菌(Mycobacterium tuberculosis)、鳥分支桿菌-胞內複合物(Mycobacterium avium-intracellular complex)、偶發分支桿菌(M.fortutium)、堪薩斯分支桿菌(M.kansasaii)或其它相關分支桿菌物種。
本發明的又一目的在於提供結核的有效治療。
又一目的在於縮短6個月的治療時間。
另一個目的在於提供結核的治療，包括向需要這種治療的患者施用包含我們的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO 04/026828 A1)中公開的吡咯衍生物和一種或多種一線抗結核藥物的組合。
本發明的又一目的在於提供一種結核的治療，其導致徹底根除敏感的和耐藥的菌株，所述治療包括向需要這種治療的患者施用一種包含我們的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO 04/026828 A1)中公開的吡咯衍生物和一種或者多種一線抗結核藥物的組合。
本發明的又一目的在於提供一種結核的有效治療，其導致徹底根除敏感的和耐藥的結核分支桿菌，所述治療包括向需要這種治療的患者施用一種我們的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO 04/026828 A1)中公開的吡咯衍生物和一種或者多種一線抗結核藥物的組合。
本發明的又一目的在於提供一種結核的有效治療，其導致徹底根除一種或者多種敏感的和耐藥的菌株如結核分支桿菌、鳥分支桿菌-胞內複合物、偶發分支桿菌、堪薩斯分支桿菌或其它相關分支桿菌物種，所述治療包括向需要這種治療的患者施用一種包含我們的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO 04/026828 A1)中公開的吡咯衍生物和一種或者多種一線抗結核藥物的組合。
本發明的又一目的在於提供一種處理和/或抑制一種或多種耐多藥菌株包括但不限於結核分支桿菌、鳥分支桿菌-胞內複合物、偶發分支桿菌、堪薩斯分支桿菌及其它相關分支桿菌物種的方法，包括向需要這種治療的患者施用一種藥物組合物，所述藥物組合物包含我們的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO 04/026828 A1)中公開的吡咯衍生物和一種或者多種一線抗結核藥物的組合。
本發明的又一目的在於提供一種停止治療後防止結核復發的方法，包括向需要這種治療的患者施用一種包含我們的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO 04/026828A1)中公開的吡咯衍生物和一種或者多種一線抗結核藥物的組合。
本發明的又一目的在於提供一種停止治療後防止結核分支桿菌感染復發的方法，包括向需要這種治療的患者施用一種包含一種或者多種我們的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO 04/026828 A1)中公開的吡咯衍生物和一種或者多種一線抗結核藥物的組合。
本發明的又一目的在於提供一種包含我們的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO04/026828 A1)中公開的吡咯衍生物和一種或者多種一線抗結核藥物的組合的藥物組合物，用於有效治療結核，包括耐多藥變體及潛伏性結核。
本發明的又一目的在於提供一種包含協同有效量的我們的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO 04/026828 A1)中公開的吡咯衍生物與有效量的一種或者多種一線抗結核藥物組合的藥物組合物。
本發明的再一目的在於提供一種包含我們的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO04/026828 A1)中公開的吡咯衍生物和一種或者多種一線抗結核藥物的組合的藥物組合物，其有效抑制和/或處理分支桿菌疾病/細胞，包括但不限於一種或多種敏感的和耐多藥的菌株，所述菌株選自結核分支桿菌、鳥分支桿菌-胞內複合物、偶發分支桿菌、堪薩斯分支桿菌和其它相關分支桿菌物種。
本發明的又一目的在於提供一種結核的有效治療，包括向需要這種治療的患者施用一種包含我們的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO 04/026828 A1)中公開的吡咯衍生物和一種或者多種一線抗結核藥物的組合的藥物組合物。
本發明的再一目的在於提供一種結核的治療，其導致徹底根除敏感的和耐藥的菌株，所述治療包括向需要這種治療的患者施用一種包含我們的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO 04/026828 A1)中公開的吡咯衍生物和一種或者多種一線抗結核藥物的藥物組合物。
本發明的另一目的在於提供一種結核的有效治療，其導致徹底根除敏感的和耐藥的結核分支桿菌，所述治療包括向需要這種治療的患者施用一種包含我們的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO 04/026828 A1)中公開的吡咯衍生物和一種或者多種一線抗結核藥物的組合的藥物組合物。
本發明的又一目的在於提供一種結核的有效治療，其導致徹底根除一種或者多種敏感的和耐藥的菌株如結核分支桿菌、鳥分支桿菌-胞內複合物、偶發分支桿菌、堪薩斯分支桿菌或其它相關分支桿菌物種，所述治療包括向需要這種治療的患者施用一種包含含有我們的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO 04/026828 A1)中公開的吡咯衍生物和一種或者多種一線抗結核藥物的組合的藥物組合物。
本發明的又一目的在於提供一種停止治療後防止結核復發的方法，包括向需要這種治療的患者施用一種包含含有我們的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO04/026828 A1)中公開的吡咯衍生物和一種或者多種一線抗結核藥物的組合的藥物組合物。
本發明的又一目的在於提供一種停止治療後防止結核分支桿菌感染復發的方法，包括向需要這種治療的患者施用一種包含我們的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO04/026828 A1)中公開的吡咯衍生物和一種或者多種一線抗結核藥物的組合的藥物組合物。
本發明的再一目的在於提供一種處理和/或抑制一種或多種耐多藥菌株包括但不限於結核分支桿菌、鳥分支桿菌-胞內複合物、偶發分支桿菌、堪薩斯分支桿菌及其它相關分支桿菌物種的方法，包括向需要這種治療的患者施用一種藥物組合物，所述藥物組合物包含我們的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO 04/026828 A1)中公開的吡咯衍生物和一種或者多種一線抗結核藥物的組合。
本發明的另一目的在於提供一種製備組合物的方法，所述組合物包含有效量的我們的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO 04/026828 A1)中公開的吡咯衍生物和有效量的一種或者多種一線抗結核藥物的組合。

發明內容
因此，本發明涉及一種抗分支桿菌組合，其包含治療有效量的通式(I)的N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺或者其藥學可接受的無毒鹽 和治療有效量的一種或者多種選自異煙肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪醯胺的一線抗結核藥物。
根據本發明，還提供一種製備抗分支桿菌藥物組合物的方法，包括使用幹法制粒、溼法制粒或直接壓製法使通式I化合物或者其藥學可接受的鹽
和一種或者多種一線抗結核藥物組合。
本發明還提供一種抗分支桿菌組合，其包含治療有效量的通式I的N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺或者其藥學可接受的無毒鹽 和治療有效量的一種或者多種選自異煙肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪醯胺的一線抗結核藥物，用於治療耐多藥結核，包括潛伏性結核。
本發明提供一種抗結核分支桿菌組合，其包含治療有效量的通式I的N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺或者其藥學可接受的無毒鹽 和治療有效量的一種或者多種選自異煙肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪醯胺的一線抗結核藥物，用於處理和/或抑制一種或多種分支桿菌疾病/細胞，包括但不限於結核分支桿菌、鳥分支桿菌-胞內複合物、偶發分支桿菌、堪薩斯分支桿菌及其它相關分支桿菌物種的敏感和耐多藥菌株。
具體實施例方式
除非另外指明，此處所用的技術和科學術語具有跟本發明所屬技術領域的普通技術人員所通常理解的相同的意義。與此處所描述的方法和材料相似或相當的任意方法和材料可用於本發明的實施或試驗。
除非有相反陳述，諸如「包括」、「包含」、「含有」、「具有」等的詞語是指「包括但不限於」，而不應理解為將其前面的任何一般性陳述局限於緊隨其後的具體或者類似的項目或者內容。
本發明的實施方案不是互相排斥的，而是可以以多種組合實施。本發明所述的實施方案和公開的實施例是為了描述目的給出的，而不是限制如所附權利要求所述的本為了本發明的目的，下列術語定義如下術語「施用」化合物、組合或組合物應理解為是指為需要治療的患者提供化合物、組合或組合物或者化合物前藥。
此處所用的術語「聯合施用」意於包括一起或分別施用所述組合中存在的各種化合物。聯合施用還可以包括施用所述組合中的兩種或多種化合物，連同所述組合中的其它化合物分別或一起施用或者其變化方式的組合。每種化合物在不同時間，以不同途徑分別施用，也可以視為聯合施用。聯合施用還可以包括所述組合中兩種或多種化合物的組合施用，如果各種化合物的施用途徑相同的話。例如，如果所有單個化合物的施用途徑相同，比如口服，那麼所述組合中一種或者多種單個化合物都可以配製成適合於相同施用途徑的劑型。術語「聯合施用」還可以理解為包括一起施用所述組合中的一種或者多種化合物(比如，以單一劑型)，或者分別施用每種化合物中的一個或多個。
此處所用的術語「組合物」意於包括包含有特定成分的產品，以及直接或者間接來源於特定成分的組合的任何產品。「組合物」可以包含單一化合物或者不止一種化合物。「組合物」可以包含一種或者多種活性成分。
術語「徹底根除」是指經過指定的保溫培養期後，在根據本發明進行治療的被感染的動物或者人的目標器官即肺或脾臟內，沒有可培養的分支桿菌。
術語「賦形劑」是指一種藥用產品或者組合物成分，其不是活性成分，比如填充劑、稀釋劑、載體等等。用來製備藥物組合物的賦形劑優選是藥學可接受的。
此處所用的術語「藥學可接受的」是指載體、填充劑、稀釋劑或賦形劑必須與製劑中的其它成分相容並且對其接受者無害。
術語「藥物組合物」意於包括包含活性成分、藥學可接受賦形劑以及直接或者間接來源於任意兩種或者更多種成分的組合、絡合或者聚集、或者來源於一種或者更多種成分和/或賦形劑的裂解、或者來源於一種或者更多種成分和/或賦形劑之間的其它類型的反應或相互作用的任何產物的產品。因此，本發明的藥物組合物包括通過混合所述活性成分、另外的活性成分以及藥學可接受賦形劑而得到的任何組合物。
術語「協同作用」或者「協同的」包括但不限於(i)數量或者量，由此當特定的化合物、活性成分或藥物與一種或多種其它活性成分、化合物或藥物組合存在時，可以以與其單獨施用時所需要的劑量相比較少的劑量施用。
(ii)性質/時間，由此當特定的活性成分、化合物或藥物組合存在時，與單獨施用時相比，表現出提高的效果或者導致治療時間縮短。
我們的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO 04/026828 A1)公開了一種具有抗分支桿菌活性的吡咯衍生物。發現這種衍生物優於先前已知的化合物，就其體內療效和低毒性而言尤為明顯。在其中所公開的90多種化合物中，發現化合物12即本申請中命名為通式(I)化合物的N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺或者其藥學可接受的無毒鹽，相對於敏感的和耐多藥的結核分支桿菌具有優異的抗分支桿菌活性。

應該注意的是，提及通式(I)化合物包括其藥學可接受的無毒的酸加成鹽。合適的鹽由有機酸和無機酸形成，包括由馬來酸、延胡索酸、苯甲酸、抗壞血酸、雙羥萘酸、琥珀酸、水楊酸、甲磺酸、乙基二磺酸、乙酸、丙酸、酒石酸、檸檬酸、葡萄糖酸、硬脂酸、棕櫚酸、衣康酸、羥基乙酸、對氨基苯甲酸、穀氨酸、苯氨基磺酸(bensulfamic)、苯磺酸、對甲苯磺酸、磷酸、硫酸、硝酸、鹽酸、氫溴酸等。
發現治療有效量的通式(I)化合物具有所希望的抗結核的特性。但是，當通式(I)化合物與某些一線抗結核藥物如異煙肼、利福平、乙胺丁醇及吡嗪醯胺聯合施用時，觀察到協同作用。協同作用是指當通式(I)化合物與上述一線抗結核藥物中的一種或多種聯合施用時的治療效果大於有效量的通式(I)化合物、或者治療有效量的任一種一線抗結核藥物單獨施用時所獲得的治療效果。此外，通式(I)化合物與上述一線抗結核藥物中的一種或多種聯合施用時的治療效果大於一線抗結核藥物之間相互組合施用的治療效果。
這種協同作用是有益的，因為它允許組合中的每種成分以單獨施用時所需要的劑量小的量來施用。因此，可以用於治療對於使用單一藥物最大濃度劑量也沒有療效的對象。
因此，通式(I)的吡咯化合物與異煙肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪醯胺中的一種或多種聯合施用時，治療效果大於通式(I)化合物或者一線抗結核藥物單獨施用或者一線抗結核藥物之間相互組合施用的結核治療效果。
通式(I)化合物與異煙肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪醯胺中的一種或多種聯合施用時，能徹底根除結核，但是通式(I)化合物或者一線抗結核藥物單獨施用，或者一線抗結核藥物之間相互組合施用均不能徹底根除結核。
術語「徹底根除」是指被感染的動物使用本發明的組合治療方案後，其目標器官即肺或脾內，觀察不到可培養的分支桿菌。注意的是，使用現有的藥物方案，即一線抗結核藥物即異煙肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪醯胺中的一種或多種的組合對被感染的動物進行治療的最後，從目標器官即肺和脾內發現顯著量的可培養的結核桿菌。試驗數據見表X，表XI，表XII。
一種量化任何可培養的分支桿菌的方法，包括在治療方案結束時處死經過治療的動物，其中目標器官即肺和脾在無菌條件下(asceptically)除去，在無菌介質中均化，然後將均化物的系列十倍稀釋液置於培養基平板(medium plate)上。初始管中的剩餘均化物也置於含有培養基的平板上，用於計算總量。因此將培養期後沒有分支桿菌生長視為結核分支桿菌的平均徹底清除。本領域的技術人員可以用其它已知方法量化可培養的分支桿菌。
用於處理結核的現有治療包括提供用量分別為25.0、20.0、150.0和100.0mg/kg體重的異煙肼、利福平、吡嗪醯胺及乙胺丁醇，總施用量合計為295mg/kg的藥物[Enquire，JAF.，Jann，LC.，and Cynamon，MH.，Antimicrob Agents Chemother.2002，46，1022-1025；Anne，Mj.，Lenerts，A.，Sharon，EC.，Chemielewski AJ.，and CynamonMH.，Antimicrob.Agents Chemother.m 1999，43，2356-2360；Cynamon MH.，andKlemens，SP.，Antimicrob.Agents Chemother.，1996，40，298-301]。相比之下，本發明的一個實施方案中，通式(I)化合物與一線抗結核藥物聯用的治療可以實現異煙肼、利福平、吡嗪醯胺和乙胺丁醇的總量小於295mg/kg。例如，在一個實施方案中，異煙肼、利福平、吡嗪醯胺和乙胺丁醇的總施用量可以為約200mg/kg，小於目前治療中所使用的量。
此外，通過以較低量使用各組分，在很多情況下，可以最小化或避免副作用。
總之，通式(I)化合物與一種或者多種已知的一線抗結核藥物聯合施用的組合為結核的治療增加了迄今未報導的新範圍。
進一步發現，上述組合調節了對於結核分支桿菌的耐藥菌株的響應，並且是「迅速作用的」。因此，與目前實踐中利用已知藥物單獨或者相互組合所使用的時間相比，徹底和有效地根除對象的分支桿菌所使用的時間顯著減少。在一個實施方案中，發現使用本發明的組合治療僅花費包括目前作為處方的一線抗結核藥物的組合方案的治療所花費時間的1/3。
更重要的是，我們的研究示出當通式(I)化合物與已知的抗結核藥物如利福平和吡嗪醯胺組合施用時，血液中通式(I)化合物的Cmax值提高約12倍，對於T1/2和AUC值也觀察到類似的提高。
重要的是，在本發明的一個實施方案中，發現通式(I)化合物或者其藥學可接受的鹽和一種或者多種一線抗結核藥物的組合防止治療中斷後分支桿菌感染的復發。
一些情況下，在不同時間以不同途徑分開施用每種化合物將是有利的。因此，所述組合中的成分即通式(I)的吡咯衍生物和一種或者多種一線抗結核藥物可以不需要在基本相同的時間或以任意順序施用。可以安排施用時間，使得一種化合物的峰值藥物動力學效果與另一種的峰值藥物動力學效果相符。
所有的活性成分都可以配製成分離的或單獨的劑型，其可以相繼地聯合施用。另一種選擇是，如果施用途徑相同(例如口服)，那麼兩種或者多種活性化合物可以配製成聯合施用的單一劑型，然而，兩種聯合施用方法均為相同的治療方法或方案的一部分。
在本發明的一個實施方案中，通式(I)的吡咯化合物和一線抗結核藥物通過合適的劑型口服並且分別施用。
使用合適的藥學可接受賦形劑實現本發明的製劑、組合和組合物。
結核的治療包括向需要這種治療的患者聯合施用一種抗分支桿菌組合，所述組合包含治療有效量的通式I的N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺或者其藥學可接受的無毒鹽 和治療有效量的一種或者多種選自異煙肼、利福平、乙胺丁醇的一線抗結核藥物，。
在另一方面，本發明提供在縮短的治療時間內對結核的有效治療。
在本發明的一個實施例中，治療時間縮短為2-3個月。在本發明的另一實施例中，徹底根除導致結核的敏感和耐藥菌株。敏感和耐藥菌株的實例是結核分支桿菌、鳥分支桿菌-胞內複合物、偶發分支桿菌、堪薩斯分支桿菌及其它相關分支桿菌物種。
在另一方面，本發明提供一種停止治療後防止結核復發的方法。所述方法包括向需要這種治療的患者聯合施用一種抗分支桿菌組合，所述組合包含治療有效量的通式I的N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺或者其藥學可接受的無毒鹽 和治療有效量的一種或者多種選自異煙肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪醯胺的一線抗結核藥物。
復發可能是潛伏的或潛在的結核分支桿菌、鳥分支桿菌-胞內複合物、偶發分支桿菌、堪薩斯分支桿菌及其它相關分支桿菌物種的敏感和耐多藥菌株再活化的結果。
另一方面，本發明提供一種具有協同作用的抗結核組合，所述組合包含協同有效量的通式I的化合物N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺或者其藥學可接受的無毒鹽 和治療有效量的一種或者多種選自異煙肼、利福平、乙胺丁醇及吡嗪醯胺的一線抗結核藥物，用於治療結核，包括耐多藥變體和潛伏性結核。
本發明的另一方面是實現治療學上結核的協同有效治療，包括向需要這種治療的患者聯合施用一定量的(i)通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽；(ii)一種或者多種選自異煙肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪醯胺的一線抗結核藥物。
其中，只有該量的(i)和只有該量的異煙肼、利福平、乙胺丁醇或吡嗪醯胺不足以達到治療學上協同有效水平的結核治療，但是其中該量的(i)和異煙肼、利福平、乙胺丁醇或吡嗪醯胺中的一種或多種的組合效果大於使用各自量的(i)和異煙肼、利福平、乙胺丁醇或吡嗪醯胺所獲得的結核治療的治療效果水平之和。
在另一方面，本發明提供一種抗結核的藥物組合物，其包含治療有效量的通式(I)的N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺或者其藥學可接受的無毒鹽 和治療有效量的一種或者多種選自異煙肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪醯胺的一線抗結核藥物，並與藥學可接受的賦形劑混合，用於治療結核。
這種組合物還可以用於治療耐多藥變體及潛伏性結核。
在另一方面，本發明提供一種包含治療有效量的通式I的N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺或者其藥學可接受的無毒鹽
和治療有效量的一種或者多種選自異煙肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪醯胺的一線抗結核藥物的組合，並與藥學可接受的賦形劑混合，用於治療和/或一直一種或多種分支桿菌疾病/細胞，包括但不限於敏感的和耐多藥的菌株，所述菌株選自結核分支桿菌、鳥分支桿菌-胞內複合物、偶發分支桿菌、堪薩斯分支桿菌及其它相關分支桿菌物種。
在另一方面，本發明提供一種用於在停止治療後防止結核感染復發的方法，包括向需要這種治療的患者聯合施用一種抗分支桿菌藥物組合物，所述組合物包含治療有效量的通式(I)的N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺或者其藥學可接受的無毒鹽 和治療有效量的一種或者多種選自異煙肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪醯胺的一線抗結核藥物的組合，並與藥學可接受的賦形劑混合。
復發可能是潛伏的或者潛在的結核分支桿菌、鳥分支桿菌-胞內複合物、偶發分支桿菌、堪薩斯分支桿菌及其它相關分支桿菌物種的敏感和耐多藥菌再活化的結果。
又一個方面，本發明提供一種結核的有效治療，其不僅將治療時間縮短到2-3個月，而且導致敏感和耐藥的結核分支桿菌的徹底根除，所述治療包括向需要這種治療的患者聯合施用一種抗分支桿菌藥物組合物，所述組合物包含治療有效量的通式(I)的N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺或者其藥學可接受的無毒鹽 和治療有效量的一種或者多種選自異煙肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪醯胺的一線抗結核藥物的組合，並與一種或者多種藥學可接受的賦形劑混合。
另一方面，本發明提供一種協同抗分支桿菌的藥物組合物，其包含協同有效量的通式(I)的N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺或者其藥學可接受的無毒鹽 和治療有效量的一種或者多種選自異煙肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪醯胺的一線抗結核藥物的組合，並與一種或者多種藥學可接受的賦形劑混合，用於治療結核，包括耐多藥變體及潛伏性結核。
又一方面，本發明提供一種處理和/或抑制一種或者多種選自但不限於結核分支桿菌、鳥分支桿菌-胞內複合物、偶發分支桿菌、堪薩斯分支桿菌及其它相關分支桿菌物種的耐多藥菌株的方法，包括施用一種治療有效量的通式(I)的N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺或者其藥學可接受的無毒鹽 和治療有效量的一種或者多種選自異煙肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪醯胺的一線抗結核藥物的組合，並與藥學可接受的賦形劑混合。
又一方面，本發明提供一種製備抗分支桿菌藥物組合物的方法，所述組合物包含治療有效量的通式(I)的N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺或者其藥學可接受的無毒鹽 和治療有效量的一種或者多種選自異煙肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪醯胺的一線抗結核藥物的組合，並與一種或者多種藥學可接受的賦形劑混合，用於治療結核，包括耐多藥變體及潛伏性結核。包含通式I的N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺或者其藥學可接受的無毒鹽和一種或者多種一線抗結核藥物的組合的藥物組合物可以優選地進行口服。口服可以通過包含與一種或多種藥學可接受的賦形劑混合的上述成分的片劑實現。口服製劑可用於提供準確劑量、快速分配以及重要的是促進患者的依從性。
可用於所述製劑或者組合物中的藥學可接受賦形劑包括抗氧化劑、填充劑、惰性稀釋劑、表面活性劑以及常規添加劑如潤滑劑和不透明劑中的一種或者多種。
可以使用的抗氧化劑包括但不限於抗壞血酸、丁羥茴醚、丁羥甲苯、延胡索酸、蘋果酸、沒食子酸丙酯、抗壞血酸鈉、焦亞硫酸鈉等等。
可以使用的惰性稀釋劑包括但不限於碳酸鈣、硫酸鈣、葡萄糖結合劑、磷酸氫鈣、氫化植物油、碳酸鎂、氧化鎂、甘露醇、微晶纖維素、聚甲基丙烯酸酯、粉狀纖維素、預糊化澱粉、山梨醇、澱粉、磷酸三鈣等。
可以使用的表面活性劑包括但不限於離子型表面活性劑如多庫酯鈉(琥珀酸二辛酯磺酸鈉)、十二烷基硫酸鈉等或者非離子型表面活性劑如單油酸甘油酯、聚氧乙烯等或山梨聚糖脂肪酸酯如聚山梨醇酯80、聚乙烯醇等。
可用於藥物組合物中的適當潤滑劑包括但不限於硬脂酸鎂、硬脂基延胡索酸鈉、氫化植物油、氫化蓖麻油、氫化棉籽油、硬脂酸和硬脂酸鈣、膠態二氧化矽等。
選擇潤滑劑，使得它提供有效的潤滑作用。例如，典型的製劑可以含有0-10％重量百分數的潤滑劑。實施方案中，所述製劑含有0.2-2％重量百分數的潤滑劑。
可用於藥物組合物中的適當不透明劑包括但不限於二氧化鈦、滑石、膠態二氧化矽等。
包含通式(I)化合物和一種或者多種抗結核化合物及藥學可接受的載體的固定劑量組合的藥物組合物，可以通過本領域中的傳統方法進行製備。例如，所述組合的片劑可以通過以下非限制性技術中的任一種製備，所述技術即i)幹法制粒該方法包括篩選各活性成分和藥物賦形劑，隨後在不存在加熱和溶劑的情況下將所得粉末混合物通過壓縮而造粒[Pharmaceutical Dosage FormsTablets，Vol.I，Page 173，ed.H.A.Lieberman，Marcel Dekker Inc.，1980]。
ii)溼法制粒該方法包括篩選各活性成分和藥物賦形劑，和在壓力下利用粘合劑將所得顆粒粘在一起，以產生顆粒狀產物，所述產物具有改善的流動性和提高的粘結能力。
iii)直接壓製法該方法包括直接壓制各活性成分和藥物賦形劑而不進行任何預處理[The Pharmaceutical Codex，Principle and Practice of Pharmaceutics；page 10，ed.W.Lund，The Council of the Royal Pharmaceutical Society of Great Britain]。
本發明的一些實例是包括以下非限制性混合物的組合和藥物組合物，即a)通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽和利福平。
b)通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽和異煙肼。
c)通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽、異煙肼及利福平。
d)通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽、異煙肼、利福平及吡嗪醯胺。
e)通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽、吡嗪醯胺及乙胺丁醇。
f)通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽、利福平及吡嗪醯胺。
本發明的其它實例是包括以下非限制性混合物的組合和藥物組合物，即a)12.5或者25.0mg/kg的通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽和20.0mg/kg的利福平。
b)12.5或者25.0mg/kg的通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽和25.0mg/kg的異煙肼。
c)12.5或者25.0mg/kg的通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽和25.0mg/kg的異煙肼及20.0mg/kg的利福平。
d)12.5或者25.0mg/kg的通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽、25.0mg/kg的異煙肼、20.0mg/kg的利福平及150.0mg/kg的吡嗪醯胺。
e)12.5或者25.0mg/kg的通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽、150.0mg/kg的吡嗪醯胺及100.0mg/kg的乙胺丁醇。
f)3.12、6.25或者12.5mg/kg的通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽、250.0mg/kg的異煙肼、20.0mg/kg的利福平及150.0mg/kg的吡嗪醯胺。
g)3.12、6.25或者12.5mg/kg的通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽、20.0mg/kg的利福平及150.0mg/kg的吡嗪醯胺。
通式(I)化合物的合成通式(I)化合物及其藥學可接受的鹽可以通過任何已知的方法合成，所述方法包括但不限於我們的PCT申請No.PCT/IN02/00189(WO 04/026828 A1)中公開的方法，所述申請通過引用併入本文。
N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺的製備實施例如下製備N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺步驟11-(4-氯苯基)戊烷-1，4-二酮在室溫下(25-30EC)，用30-35分鐘的時間，向無水氯化鋁(27.0gm，205.9mmol)在126ml氯苯中的充分攪拌的懸浮液中，逐滴加入氧化戊醯氯(oxopentanoylchloride)(23.0gm，171.6mmol)。在相同的溫度下攪拌反應混合物1小時。通過加入固體冰和鹽酸(10ml)使反應混合物分解後，過濾沉澱的固體並將濾出物置於旋轉蒸發儀中蒸發以去除全部溶劑。將剩餘物溶解在乙酸乙酯(400ml.)中，用水(2×100ml.)、鹽水(100ml.)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥並將溶劑蒸發除去。利用氯仿作為洗脫劑，對所得粗產物經矽膠(100-200目)層析，得到8.6gm(24.07％)的標題化合物。
步驟2N-(5-甲基-2-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺將1-(氯苯基)戊-1，4-二酮(6.0g，28.50mmol，如步驟1中所得)和異煙肼(4.30gm，31.35mmol)在苯(6.0ml)中的混合物，置於分子篩上回流。兩小時後，減壓除去苯，剩餘物溶於乙酸乙酯中，用水(2×100ml.)和鹽水(1×50ml.)洗滌。乙酸乙酯層經無水硫酸鈉乾燥，並將溶劑蒸發除去。利用0.2％的氯仿中的甲醇作為洗脫劑，對所得粗產物通過矽膠(100-200目)柱色譜進行純化，得到3.50gm(39.42％)的標題化合物。
步驟3N-(3-{[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基}-2-甲基-5-苯基吡咯基]-4-吡啶醯胺向N-(5-甲基-2-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺(0.300gm，1.083mmol，如步驟2中所得)在乙腈(5.0ml.)中的攪拌溶液中，逐滴加入1-(3-三氟甲基苯基)哌嗪鹽酸鹽(0.288gm，1.083mmol)、40％甲醛(0.032gm，1.083mmol)和乙酸(0.9ml)的混合物。完全加入後，在室溫下攪拌反應混合物4h。所述反應混合物用氫氧化鈉(20％的水溶液)中和，並用乙酸乙酯(2×50ml.)提取。
將合併的乙酸乙酯提取物用水(2×25ml)、鹽水(1×20ml)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥並將溶劑蒸發除去。對粗產物進行TLC分析顯示兩種成分，其通過矽膠(100-200目)柱色譜分離。
利用80％的乙酸乙酯-已烷混合物洗脫出來的較大極性化合物佔24.34％(0.130gm)，經鑑定為N-(3-{[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基}-2-甲基-5-苯基吡咯基]-4-吡啶醯胺。
熔點80-82℃，MSm/z 520(M+1)1HNMR(CDCl3，*)213(s，3H，CH3)，2.60(bs，4H，2xN-CH2)，3.18(bs，4H，2xN-CH2)，3.41(s，2H，N-CH2)，6.24(s，1H，H-4)，6.97-7.03(4H，m，ArH)，7.22-7.29(m，5H，ArH)，7.53(d，2H，J＝6Hz，吡啶環)，8.50(bs，1H，NHD2O可替換)，8.70(d，2H，J＝6Hz，吡啶環)。
藥理學試驗在我們共同未決的PCT申請No.PCT/IN02/00189中已經報導了通式(I)化合物的初步抗分支桿菌活性。我們進行了更多的微生物學、毒理學及藥物動力學研究，並在下文中進行詳細描述。用於下述試驗中的通式(I)化合物是通式(I)化合物的鹽酸鹽(N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺的鹽酸鹽)。
體外研究瓊脂稀釋分析以測定最小抑制濃度(MIC)按照NCCLS-M24-T2的推薦，通過基準瓊脂稀釋法測定各種化合物對分支桿菌菌株的MIC。將化合物溶解於DMSO中並稀釋兩倍，得到每種化合物的10個系列的稀釋液。將合適體積的化合物引入到補充有10％Middle brook補充物的Middlebrook 7H10瓊脂培養基的完全相同的平板中，其中所述Middle brook補充物為濃度為0.03-16μg/ml的油酸-白蛋白-葡萄糖(OADC)濃縮物。使試驗有機體(分支桿菌菌株)在含有0.05％吐溫80及10％ADC補充物的Middle brook 7H9培養液中生長。在37EC培養7天後，將培養液調節至1.0 McFarland標準的濁度；將所述有機體進一步在含有0.10％吐溫80的無菌水中稀釋10倍。將所得分支桿菌懸浮液抽取試樣(3-5μl/試樣)至藥物補充的7H10培養基平板上。將所述平板密封，並在37EC下垂直放置培養3-4周。該MIC記錄為完全抑制試驗有機體生長的化合物最低稀釋度。試驗分離物包括臨床分離物，所述臨床分離物通常對於一種或多種標準抗結核藥物是敏感的/具有抵抗性的。合適的基準菌株和對照藥物包括在每批試驗中。
通式(I)化合物的抗分支桿菌活性表I中總結了通式(I)化合物的鹽酸鹽(N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺的鹽酸鹽)所表現出的對於約200種結核分支桿菌的敏感和耐藥臨床分離物的體外活性。
表I通式(I)化合物對於結核分支桿菌臨床分離物的體外抗分支桿菌活性

通式(I)化合物的抗分支桿菌活性

圖1是通式(I)化合物對結核分支桿菌H37Rv的殺滅曲線。
圖2是通式(I)化合物和已知的抗結核藥物合用時的殺滅曲線。
圖3是通式(I)化合物和已知的抗結核藥物合用時的殺滅曲線。
為了確定通式(I)化合物的抑制活性是殺滅性的還是抑制性的，將結核分支桿菌培養物在不同濃度(1X、2X、4X、8X、16MIC)的通式(I)化合物的存在下進行培養。每天從所有燒瓶中取出固定體積(0.1ml)的培養物，持續21天。然後將樣品稀釋10倍並抽取試樣到Middle brook 7H10培養基上以計算結核桿菌數目。
與未處理的對照組比較，示出3log結核分支桿菌計數減少的濃度和時間視為殺滅濃度。發現通式(I)化合物表現出殺滅結核分支桿菌是依賴於劑量的，並因此將8X和16X MIC濃度確定為殺滅性的(3log可存活數目的減少)。通過可變計數估值法(variable count estimation method)測定的通式(I)化合物對結核分支桿菌H37Rv菌株的殺滅曲線描述於圖1中。
協同作用研究所述組合中通式(I)化合物的協同作用利用微量培養液棋盤式試驗(micro brothcheckerboard assay)與已知的抗結核藥物組合進行測定。為了測試協同作用，將通式(I)化合物系列稀釋物在另一種抗結核藥物即異煙肼、利福平、乙胺丁醇和莫西沙星的存在下加入到分支桿菌培養物中。28天後，查看所有平板，以確定完全不存在含有不同藥物組合的壁中的生長。未示出可見生長的所述組合最高程度稀釋物視為該組合的MIC值。如果單種化合物的MIC提高4倍或更多，那麼認為該化合物與另一種藥物具有協同作用。
發現通式(I)化合物在體外培養液微量稀釋試驗中表現出與利福平的協同活性，與乙胺丁醇的加性效應，但是發現在異煙肼的存在下不受影響，如表II中所總結。
表II通過微量培養液稀釋法測定的通式(I)化合物與已知抗結核藥物的體外協同作用

單獨或者組合的體內研究還以肺結核鼠模型評價了通式(I)化合物的有效性。使結核分支桿菌培養物在37EC下在含有0.05％的吐溫-80及10％的ADC補充物的Middle Brook 7H9培養液中生長7天。通過短暫的超聲處理和沉積，使動物接種液體培養物解團聚，並在7H9培養液中適當稀釋，得到1×107CFU′s/0.2ml的濃度。
在本研究期間使用容納在微型隔離籠內的無病原體、生物研究安全等級3的環境中的四周齡雌性非近親繁殖的Swiss白化小鼠。通過將0.2ml解團聚的結核分支桿菌懸浮液靜脈接種至尾部末端血管中來產生感染。感染後，將小鼠隨機分配在不同的組中，每組6隻。感染之後14天開始治療。通式(I)化合物和異煙肼溶解在無菌水中，利福平溶解在10％的DMSO中並在水中稀釋，用於治療。每天早晨臨用前配製藥物。每周5/7天給予治療，持續一個月。所有的試劑都通過管飼法給藥，劑量為50、25或12.5mg/kg體重。將感染但未處理的小鼠的對照組在治療開始時(早期對照)或在治療期結束時(後期對照)處死。在最後一次給藥後5天，通過頸椎脫臼法處死小鼠。在無菌條件下移除脾臟和右肺，並在組織勻漿器中均化。將至少4-6系列的均化物稀釋液塗覆到選擇性Middle brook 7H11瓊脂平板上，每種兩份(induplicate)。在37EC下培養4周後，記錄菌落數。將可存活細胞數轉換成Log10數值。與對照組相比，示出2Log可存活數目的減少的化合物被認為是有顯著意義的。
進行長期體內試驗，以評價通式(I)化合物在單一治療和與一線抗結核藥物如異煙肼、利福平、乙胺丁醇及吡嗪醯胺合用中的活性。在這些研究中，在不同的時間點，即治療1、2、3個月時，評價不同組合的有效性。
體內有效性研究結果已經觀察到，與表III中給出的對照動物相比，使用通式(I)化合物單一治療導致目標器官中可存活細菌的顯著(＞2log)減少。
通式(I)化合物證明了在被結核分支桿菌的敏感/耐藥菌株感染的動物體內用12.5mg/kg體重的劑量治療的動物器官內的2log減少，而異煙肼在濃度為25mg/kg或更多時對於敏感菌株提供相似的細菌量減少，但是對於耐藥菌株在至多50mg/kg時沒有效果。
此外，發現測定使用通式(I)化合物的長期治療效果(兩到三個月)的研究導致目標器官中分支桿菌量的減少。經過3個月治療的動物中有33％的體內發現完全不存在分支桿菌。結果分別總結於表IV及表V中。
表III在被結核分支桿菌的敏感和耐藥菌株感染的小鼠模型體內治療一個月後通式(I)化合物的體內有效性

表IV通式(I)化合物對經兩個月治療的小鼠模型的體內有效性

表V通式(I)化合物對經三個月治療的小鼠模型的體內有效性

藥物動力學研究以小鼠和狗進行通式(I)化合物的初級藥物動力學研究，以測定生物利用度及通過該化合物所達到和保持的血清水平。
表VI中總結的研究結果證明通式(I)化合物是生物可利用的(56.40％)，並具有優於異煙肼的半衰期和Cmax，並且以＞MIC值的濃度在血清中保留更長時間。
表VI通式(I)化合物在小鼠和狗體內的藥物動力學數據

毒性研究通過口服途徑以齧齒動物來測定通式(I)化合物的急性毒性。發現小鼠的LD50為700mg/kg，大鼠為793mg/kg，這優於異煙肼的LD50。結果總結於表VII中。
表VII對通式(I)化合物的初步急性毒性(口服途徑)研究

此外，發現通式(I)化合物對於艾姆斯突變試驗中所用的所有細菌菌株而言都是非致突變物質。
論證通式(I)化合物與一種或多種抗結核藥物組合時抗分支桿菌活性的試驗組合的體外活性根據劑量及治療所花費時間來確定通式(I)化合物和一種或者多種一線抗結核藥物的組合的殺滅效果。
發現通式(I)化合物和異煙肼、利福平及吡嗪醯胺的組合(LIRZ)在8和16倍MIC下在第10天發揮殺分支桿菌效果(圖2)，而不含通式(I)化合物的異煙肼、利福平及吡嗪醯胺的組合[IRZ]僅在第20天出現殺菌效果。
通過可存活計數估值法(Viable Count Estimation Method)測定的與已知抗結核藥物[異煙肼(I)、利福平(R)及吡嗪醯胺(Z)]組合的通式(I)化合物對結核分支桿菌的殺滅曲線描述於圖2中。
此外，在沒有異煙肼的情況下，在包含化合物′A′的通式(I)化合物與利福平和吡嗪醯胺的組合中，觀察到對於分支桿菌活性的相似效果。該組合證明了在8和16倍MIC下在第14天的殺分支桿菌活性。
通過可存活計數估值法測定的在沒有異煙肼的情況下與已知抗結核藥物[利福平(R)及吡嗪醯胺(Z)]組合的通式(I)化合物對結核分支桿菌的殺滅曲線描述於圖3中。
組合的體內活性在用通式(I)化合物與一種或多種一線抗結核藥物的組合治療的小鼠體內，用所有的受試組合均觀察到結核桿菌量的顯著減少。在用通式(I)化合物與兩種或三種抗結核藥物的組合例如與異煙肼和利福平組合以及與異煙肼、利福平和吡嗪醯胺組合的化合物(I)治療一個月後的動物體內觀察到最大程度的減少。
在用通式(I)化合物與已知抗結核藥物的組合在小鼠模型體內治療一個月後所觀察到的體內有效性總結於表VIII中。
此外，用通式(I)化合物和兩種或三種已知抗結核化合物如異煙肼、利福平及吡嗪醯胺的組合治療時，被結核分支桿菌的敏感/耐藥菌株感染的動物在治療2個月的結果是66％動物的器官內不存在生長。
在用通式(I)化合物與已知抗結核藥物的組合在小鼠模型體內治療兩個月後所觀察到的體內有效性總結於表IX中。
此外，用通式(I)化合物和兩種或三種已知抗結核化合物如異煙肼、利福平及吡嗪醯胺的組合治療時，被結核分支桿菌的敏感/耐藥菌株感染的動物在治療3個月後顯示出完全不存在生長。
在用通式(I)化合物與已知抗結核藥物的組合在小鼠模型體內治療三個月後所觀察到的體內有效性總結於表X中。
重要的是，發現較低劑量即12.5、6.25和3.12mg/kg的通式(I)化合物與已知抗結核藥物即異煙肼、利福平及吡嗪醯胺組合時，表現出優異的體內有效性，並在治療兩個月後徹底清除被結核分支桿菌的敏感/耐藥菌株感染的動物器官內的細菌。結果總結於表XI中。
表VIII與已知抗結核藥物組合的通式(I)化合物對小鼠模型治療一個月後的體內有效性

(I)＝通式(I)化合物；INH＝異煙肼；RIF＝利福平；PYR＝吡嗪醯胺；ETH＝乙醇丁胺表IX與已知抗結核藥物組合的通式(I)化合物對小鼠模型治療兩個月後的體內有效性

(I)＝通式(I)化合物；INH＝異煙肼；RIF＝利福平；PYR＝吡嗪醯胺；ETH＝乙醇丁胺表X與已知抗結核藥物組合的通式(I)化合物對小鼠模型治療三個月後的體內有效性

(I)＝通式(I)化合物；INH＝異煙肼；RIF＝利福平；PYR＝吡嗪醯胺；ETH＝乙醇丁胺表XI與已知抗結核藥物(異煙肼、利福平和吡嗪醯胺)組合的通式(I)化合物對小鼠模型治療兩個月後對抗結核分支桿菌(敏感和耐藥菌株)的體內有效性

(I)＝通式(I)化合物；INH＝異煙肼；RIF＝利福平；PYR＝吡嗪醯胺此外，用通式(I)化合物與異煙肼、利福平和吡嗪醯胺的組合連續治療被感染動物的體內有效性的結果總結於表XII中。
還發現用包含通式(I)化合物和兩種已知抗結核化合物即利福平和吡嗪醯胺的另一種組合治療小鼠兩個月的體內有效性的結果在降低目標器官中的分支桿菌量的方面是有效的，如表XIII中所示。
表XII與已知抗結核藥物(異煙肼、利福平和吡嗪醯胺)組合的通式(I)化合物對小鼠模型治療三個月後對抗結核分支桿菌(敏感和耐藥菌株)的體內有效性

(I)＝通式(I)化合物；INH＝異煙肼；RIF＝利福平；PYR＝吡嗪醯胺表XIII與已知抗結核藥物(利福平和吡嗪醯胺)組合的通式(I)化合物對小鼠模型治療兩個月後對抗結核分支桿菌(敏感和耐藥菌株)的體內有效性

(I)＝通式(I)化合物；RIF＝利福平；PYR＝吡嗪醯胺組合的藥物動力學研究以小鼠和狗進行通式(I)化合物與利福平和吡嗪醯胺的組合的初級藥物動力學研究，以測定生物利用度和通過化合物組合所達到和保持的血清水平。
表XIV中總結的研究結果示出，在使用通式(I)化合物與利福平和吡嗪醯胺的組合時，血液中通式(I)化合物的Cmax值增加約12倍。對於T1/2和AUC值也觀察到纖絲的提高。
表XIV通式(I)化合物與利福平和吡嗪醯胺的組合在小鼠體內的藥物動力學活性

(I)＝通式(I)化合物；RIF＝利福平；PYR＝吡嗪醯胺組合的急性毒性研究以單一口服劑量對Swiss白化小鼠施用通式(I)化合物與異煙肼、利福平和吡嗪醯胺的組合。對小鼠觀察14天。沒有觀察到臨床症狀和致命性。第15天將小鼠處死，但是各器官中都沒有發現病態變化。所得初步結果總結於表XV中。
表XV通式(I)化合物與異煙肼、利福平和吡嗪醯胺的組合的初步急性毒性研究

(I)＝通式(I)化合物；INH＝異煙肼；RIF＝利福平；PYR＝吡嗪醯胺此外，通式(I)化合物與已知的一線抗結核藥物的組合是非基因毒性的，因為發現它在體內微核試驗中呈陰性。
從前面的討論中，充分證明了包含通式(I)的N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺或者其藥學可接受的無毒鹽與目前作為處方的一線抗結核藥物如異煙肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪醯胺的組合的本發明組合和藥物組合物，a)提供結核包括潛伏性結核和耐多藥變體的高效治療，這優於使用目前的處方藥所獲得的效果；b)不同於目前的處方藥，該組合和組合物能高效抑制和/或處理分支桿菌疾病/細胞，包括但不限於結核分支桿菌、鳥分支桿菌-胞內複合物、偶發分支桿菌、堪薩斯分支桿菌及其它相關分支桿菌物種的敏感和耐多藥菌株；c)不同於目前的處方藥，該組合和組合物能高效預防在停止治療後結核分支桿菌感染的復發；d)是「迅速作用的」，由此與目前實踐中的已知藥物所花費的時間相比，顯著縮短提供徹底和有效根除對象的分支桿菌所花費的時間，不管是單獨使用還是相互組合使用。當徹底根除敏感和耐多藥結核分支桿菌時，用該組合或藥物組合物治療所花費的時間僅僅是目前的處方藥所花費時間的三分之一；e)發現治療有效量的通式(I)化合物在與目前作為處方的一線抗結核藥物如異煙肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪醯胺聯合施用時，提供協同效應。該協同效應大於在單獨施用有效量的化合物(I)或者治療有效量的任何一線抗結核藥物時所獲得的治療效果。此外，如上所述，聯合施用通式(I)化合物和一線抗結核藥物的治療效果大於一線抗結核藥物之間相互組合施用時所獲得的治療效果；f)協同作用是有利的，因為它允許以小於單獨施用時所需要的量的量施用該組合中的每種組分，由此使得可以有效治療例如以最大濃度劑量使用一種組分時不能充分響應的對象；和/或g)允許以相對於組合效應是加性的情況而言較少的量施用各組分，因此與目前實際治療相關的副作用被最小化。
權利要求
1.一種抗分支桿菌組合，其包含治療有效量的通式(I)的N-(3-[[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]-2-甲基-5-苯基吡咯基)-4-吡啶醯胺或者其藥學可接受的無毒鹽 和治療有效量的一種或者多種選自異煙肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪醯胺的一線抗結核藥物。
2.一種抗分支桿菌藥物組合物，其包含與藥學可接受的賦形劑混合的權利要求1的抗分支桿菌組合。
3.根據權利要求2的抗分支桿菌藥物組合物，其中藥學可接受的賦形劑選自抗氧化劑、惰性稀釋劑、表面活性劑、潤滑劑及不透明劑。
4.根據權利要求1的抗分支桿菌組合，用於有效治療結核。
5.根據權利要求1的抗分支桿菌組合，用於處理選自結核分支桿菌、鳥分支桿菌-胞內複合物、偶發分支桿菌、堪薩斯分支桿菌及其它相關分支桿菌物種的敏感和耐多藥菌株的分支桿菌疾病/細胞。
6.根據權利要求2的抗分支桿菌藥物組合物，用於有效治療結核。
7.根據權利要求2的抗分支桿菌組合物，用於處理選自結核分支桿菌、鳥分支桿菌-胞內複合物、偶發分支桿菌、堪薩斯分支桿菌及其它相關分支桿菌物種的敏感和耐多藥菌株的分支桿菌疾病/細胞。
8.根據權利要求1的抗分支桿菌組合，其在處理完成時徹底根除敏感的和耐藥的結核分支桿菌。
9.根據權利要求2的抗分支桿菌藥物組合物，其在處理完成時徹底根除敏感的和耐藥的結核分支桿菌。
10.一種製備抗分支桿菌藥物組合物的方法，包括使用幹法制粒、溼法制粒或直接壓製法使通式I化合物或者其藥學可接受的鹽 和一種或者多種一線抗結核藥物組合。
11.根據權利要求1的組合，包含通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽和利福平。
12.根據權利要求1的組合，包含通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽和異煙肼。
13.根據權利要求1的組合，包含通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽、異煙肼和利福平。
14.根據權利要求1的組合，包含通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽、異煙肼、利福平和吡嗪醯胺。
15.根據權利要求1的組合，包含通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽、吡嗪醯胺和乙胺丁醇。
16.根據權利要求1的組合，包含通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽、利福平和吡嗪醯胺。
17.根據權利要求1的組合，包含12.5或者25.0mg/kg通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽以及20.0mg/kg利福平。
18.根據權利要求1的組合，包含12.5或者25.0mg/kg通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽以及25.0mg/kg異煙肼。
19.根據權利要求1的組合，包含12.5或者25.0mg/kg通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽和25.0mg/kg異煙肼和20.0mg/kg利福平。
20.根據權利要求1的組合，包含12.5或者25.0mg/kg通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽、25.0mg/kg異煙肼、20.0mg/kg利福平和150.0mg/kg吡嗪醯胺。
21.根據權利要求1的組合，包含12.5或者25.0mg/kg通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽、150.0mg/kg吡嗪醯胺和100.0mg/kg乙胺丁醇。
22.根據權利要求1的組合，包含3.12、6.25或者12.5mg/kg通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽、250.0mg/kg異煙肼、20.0mg/kg利福平和150.0mg/kg吡嗪醯胺。
23.根據權利要求1的組合，包含3.12、6.25或者12.5mg/kg通式(I)化合物或者其藥學可接受的無毒鹽、20.0mg/kg利福平和150.0mg/kg吡嗪醯胺。
全文摘要
本發明描述一種治療結核的抗分支桿菌組合和組合物。所用化合物是通式(I)的N－(3－[[4－(3－三氟甲基苯基)哌嗪基]甲基]－2－甲基－5－苯基吡咯基)－4－吡啶醯胺或者其藥學可接受的無毒鹽和一定量的一種或者多種一線抗結核藥 物。
文檔編號A61K31/4965GK1956732SQ200480043131
公開日2007年5月2日 申請日期2004年8月27日 優先權日2004年5月12日
發明者蘇德尚·庫馬爾·阿羅拉, 內利馬·辛哈, 拉凱什·辛哈, 拉姆·尚卡爾·烏帕德亞雅 申請人:魯賓有限公司