在其中包封有抗結核藥物的聚dl-丙交酯-共-乙交酯納米微粒的製備方法

2023-11-30 21:24:41

專利名稱：：在其中包封有抗結核藥物的聚dl-丙交酯-共-乙交酯納米微粒的製備方法在其中包封有抗結核藥物的聚DL-丙交酯-共-乙交酯納米微粒的製備方法發明領域本發明涉及一種聚DL-丙交酯-共-乙交酯納米微粒(PLG-NP)製品，該納米微粒中包封有一種或多種活性物質(ATD)，並且使得所述包封的物質相對於彼此是穩定的。尤其，本發明涉及一種製品，該製品含有穩定的第一包封活性物質和相對於所述第一物質而言不穩定的第二包封活性物質。提到活性物質旨在包括治療性和/或生物活性物質。因此，例如，該納米微粒可用於包封抗結核藥物(ATD)。
背景技術：
：需要為期6-9個月每天施用多種ATD是造成患者不依從性以及與藥物相關的肝毒性的原因，而所述不依從性和肝毒性導致治療的失敗。不完全/不規則治療的另一個結果是抗藥性的出現。基於納米技術的藥物遞送系統使用生物可降解的聚合物，在過去十年中被廣泛研究。可用於製備納米微粒的若干方法例如雙乳劑溶劑蒸發法、油中溶劑擴散法、微乳液法、氣體抗溶劑沉澱法、陰離子多糖膠凝法等等中，沒有一種在顆粒大小、藥物包封效率和藥物釋放動力學方面是完美的。進一步地，在單一製劑中包封多種藥物還未見報導。最常用的雙乳劑溶劑蒸發法包括2個主要步驟-在初級乳劑中形成小滴以及隨後從次級乳劑小滴中去除溶劑，然後進行聚合物沉澱。顆粒穩定性以及藥物釋放動力學通過使用乳化劑/穩定劑例如聚乙烯醇(PVA)而得到控制。公知INH、PZA和RIF是用於治療結核病的活性物質或藥物。因此，專利申請號765/Del/2003提出了一種將上述藥物中的兩種或多種同時或共同包封的方法，但所述藥物相對於彼此是穩定的。除了上述三種藥物或活性物質之外，還已知EMB是也用於治療結核病的藥物。然而，EMB在INH、PZA或RIF存在時不穩定，尤其是在INH存在時。從而，發現EMB不能與INH同時共同包封，因為任何這樣的共同包封將導致EMB的降解。例如，專利申請號765/Del/95具有共同包封就穩定性而言彼此相容的活性物質或藥物的有用應用。對EMB的包封迄今仍是未知的。發明目的本發明的一個目的是提出一種含有包封的活性物質的製品及其製備方法，所述活性物質相對於彼此不穩定。本發明的另一個目的是提出一種其中包封有ATD並且消除了現有技術相關不足的製品及其製備方法，其中ATD包含利福平(RIF)+異煙肼(INH)+吡溱醯胺(PZA)+乙胺丁醇(EMB)或利福平(RIF)+異煙肼(INH)的組合。本發明的另一個目的是提出一種其中包封有ATD的製品及其製備方法，其提供延長和持續的藥物釋放。本發明還有另一個目的是提出一種其中包封有ATD的製品及其製備方法，其能夠被調節以包封最多藥物。本發明的另一個目的是提出一種其中包封有ATD的製品及其製備方法，其能夠使藥物均勻地分布於結核菌存在的不同器官。本發明還有另一個目的是提出一種其中包封有ATD的製品及其製備方法，其可以被凍幹並且重配以用作口服製劑。而本發明的另一個目的是提出一種其中包封有ATD的製品及其製備方法，其不呈現肝毒性。發明簡述根據本發明，提供了一種其中包封有抗結核藥物的聚DL-丙交酯-共-乙交酯納米微粒的製備方法，其包括(i)在DW/NS/PBS中製備穩定的水溶性藥物的水溶液，(ii)在DW/NS/PBS中製備不穩定藥物，(iii)在有機溶劑中製備聚合物和疏水藥物溶液，(iv)將步驟(i)和(U)的溶液分別與步驟(iii)的溶液混合併且在低溫條件下超聲處理，(v)將上述乳劑加入PVA水溶液並且在低溫條件下再次超聲處理，(vi)攪拌該乳劑並對其進行離心，(vii)洗滌所述微粒，對其進行重配並凍幹。根據本發明，親水藥物的水溶液在DW/NS/PBS中以1:0.1-100的重量/體積比製備。聚合物溶液在有機溶劑優選二氯甲烷(DCM)中以1:0.3-1的重量/體積比製備，還含有重量/體積比為1:0.5-5的疏水藥物。將水溶液按1:5-20的體積/體積比倒入有機溶液並在4°-15°C下超聲處理45-120秒。將初級乳劑倒入0.8-2.5%PVA溶液，保持DCM:PVA的比例在1:0.5-1.5，在4。-15。C下超聲處理2-5分鐘並攪拌18-30小時。將經攪拌的混合物在4。-20。C下以8000-U000rpm離心15-30分鐘以獲得沉澱並用DW/NS/PBS洗滌3-4次，重懸在其中並凍幹。藥物和聚合物之比保持在1:lw/w。用這種方式，製得三種類型的製劑，即PLG-NP包封RIF+INH+PZA,PLG-NP包封RIF+INH，和PLG-NP包封醒。已發現乙胺丁醇在異煙肼存在時非常不穩定。從而，如果需要包5昏一種活性物質時，本來便利的是將乙醇丁胺聯合其它活性物質共同包封，並採用同時待審的專利申請號765/Del/2003中所述的方法。然而，與之相關的不足是乙醇丁胺將會由於其不穩定特性而降解。從而，為了消除這樣的不足，乙醇丁胺被分開單獨包封。如此分開單獨包封乙醇丁胺還改善了乙醇丁胺口服施用時的生物利用度。另一個特性是有關最小抑菌濃度(MIC)。已發現當乙醇丁胺作為其中一種活性物質包封四種活性物質時無法獲得MIC。然而，分開單獨包封乙醇丁胺提供了所需的MIC。包封有ATD的PLG-NP的製備方法通過下列實施例解釋說明。實施例將10mgINH和10mgPZA溶於lmLDW中。將10mgRIF和30mgPLG混懸於10mLDCM中。將水溶液加入DCM溶液中，在4。C下超聲處理lmin並倒入1%PVA溶液(8mL)，隨後在4'C下超聲處理3min。將乳劑攪拌18hr並以10，OOOrpm離心20min。將沉澱用DW洗滌3次並接著重懸於其中以進行凍幹。將10mgEMB溶解在lmLM中。將10mgPLG混懸在10mlDCM中。將水溶液加入DCM溶液，在4。C下超聲處理lmin並倒入1%PVA溶液(8mL),隨後在4。C下超聲處理3min。將乳劑攪拌18hr並以10,Q00rpm離心20min。將沉澱用DW洗滌3次並接著重懸於其中以進行凍幹。將凍幹的微粒混懸在NS中並且口服施用於小鼠，所得結果在表1中給出。表l-藥物治療後小鼠器官中的結核分枝桿菌菌落形成單位(CFU)tableseeoriginaldocumentpage8.數值是平均值士SD,每組11=5.logcfu值在組2a/b/c和組4(a)之間相當(P〉0.05),然而，其顯著低於(P復001)組1。.*是指在接種未稀釋和以1比IO稀釋的組織勻漿後第28天沒有可測得的cfu。單次口服施予小鼠PLG納米微粒，只有當EMB被分開單獨包封並給藥時才在血漿中獲得最小抑菌濃度(乙醇丁胺的MIC=1.5ng/ml)。這從TB治療角度而言是重要的，因為如果藥物水平低於MIC，治療將變得無效。事實上，當將共同包封EMB連同其它3種藥物的PLG-NP施用於小鼠時，血液中的EMB水平在整個研究期間均低於MIC。此外，參照於生物利用度視為-1的游離EMB，PLG-NP-包封的EMB(單獨)的生物利用度是-IO.6，而PLG-NP-包封的EMB(連同其它3種藥物)的生物利用度是5.1。PLG-NP中藥物含量的測定PLG-NP的藥物包封效率如下RIF56.99±2.72%INH66.31±5.83%PZA68.02±5.58%EMB43.11±4.21%如通過血漿膽紅素、丙氨酸轉氨酶和鹼性磷酸酶所評估的，PLG-NP不包含任何肝毒性。權利要求1.其中包封有抗結核藥物的聚DL-丙交酯-共-乙交酯納米微粒的製備方法，包括(i)在DW/NS/PBS中製備穩定的水溶性藥物的水溶液，(ii)在DW/NS/PBS中製備不穩定藥物，(iii)在有機溶劑中製備聚合物和疏水藥物溶液，(iv)將步驟(i)和(ii)的溶液分別與步驟(iii)的溶液混合併且在低溫條件下超聲處理，(v)將上述乳劑加入PVA水溶液並且在低溫條件下再次超聲處理，(vi)攪拌該乳劑並對其進行離心，(vii)洗滌所述微粒，對其進行重配並凍幹。2.如權利要求1所述的方法，其中所述有機溶劑是二氯甲烷。3.如權利要求1和2所述的方法，其中所述聚合物以1:0.3-1w/v的比例溶解在所述溶劑中。4.如權利要求1所述的方法，其中所述藥物以1:l-1000w/v的比例溶解於DW/NS/PBS中和以1:0,5-5w/v的比例溶解於DCM中。5.如權利要求1所述的方法，其中所述水溶液和有機溶液以1:5-20v/v的比例混合。6.如權利要求1所述的方法，其中所述藥物和聚合物的比例是1:lw/w。7.如權利要求1所述的方法，其中第一次超聲處理進行45-120秒並且第二次超聲處理進行2-5分鐘，各自均在4°C-15。C下進行。8.如權利要求1所述的方法，其中所述聚乙烯醇的濃度為0.8-2.5%並且DCM:PVA的比例是1:0.5-1.5。9.如權利要求1所述的方法，其中離心是在4。-20。C下以8000-12000rpm進行15-30分鐘。10.如權利要求1所述的方法，其中所述微粒用DW/NS/PBS(pH7.2-7.4)洗滌3-4次並凍幹。'11.實質上如本文描述和實施例例示說明的其中包封有抗結核藥物的聚DL-丙交酯-共-乙交酯納米微粒的製備方法。全文摘要在其中包封有抗結核藥物的聚DL-丙交酯-共-乙交酯納米微粒的製備方法，包括(i)在DW/NS/PBS中製備穩定的水溶性藥物的水溶液，(ii)在DW/NS/PBS中製備不穩定藥物，(iii)在有機溶劑中製備聚合物和疏水藥物溶液，(iv)將步驟(i)和(ii)的溶液分別與步驟(iii)的溶液混合併且在低溫條件下超聲處理，(v)將上述乳劑加入PVA水溶液並且在低溫條件下再次超聲處理，(vi)攪拌該乳劑並對其進行離心，(vii)洗滌所述微粒，對其進行重配並凍幹。文檔編號A61K9/51GK101160119SQ200580049436公開日2008年4月9日申請日期2005年4月11日優先權日2005年4月11日發明者G·K·庫勒,J·N·沃瑪,R·潘迪,S·沙瑪申請人:萊富凱爾創新私人有限公司