給予哺乳動物或人的組合物的製作方法

2023-11-11 07:12:37 1

專利名稱：給予哺乳動物或人的組合物的製作方法
給予哺乳動物或人的組合物發明領域給予哺乳動物或人的組合物涉及治療劑應用領域，作為能夠與變異細胞或 致病性微生物相互作用的效應試劑，目的在於擾亂滲透平衡和實現胞內成分釋 放到胞外介質中。在癌症治療中用作抗腫瘤劑，也可應用於治療細胞、細菌、病毒、單細胞 或多細胞生物體導致的疾病，所述生物體的最外層由脂質膜組成，例如真核細胞的細胞膜，或愛滋病毒(HIV)的外膜。
技術背景對於細胞來說，凋亡是指伴有形態學改變的主動過程，細胞註定在設定的 時間內死亡；術語壞死是指劇烈且災難性的過程，常發生在接觸毒素或細胞膜 創傷性損傷後，細胞功能與調控很快喪失，導致滲透過程過度，最終細胞死亡 或細胞膜裂解，胞內成分釋放到胞外介質中。細胞中累積突變演變為腫瘤並在連續的細胞分裂中傳遞。突變率取決於各 腫瘤的遺傳不穩定性，當腫瘤大到足以臨床檢測時，突變量高到細胞將自發抵 抗一些化療藥物的作用。腫瘤診斷時，耐藥細胞的數量與腫瘤大小及其固有突 變率成正比。通過腫瘤生長動力學及自發突變的出現來確定腫瘤細胞耐藥性。雖然大多 數化學治療劑在增殖性腫瘤細胞中有效，但在無活性腫瘤細胞中的作用幾乎為 零，而且由於塊狀腫瘤被診斷為晚期，且生長部分少，因此它們對化療藥物的 作用不十分敏感。化學治療的目的是破壞癌細胞，首要是DNA，並誘導凋亡。為此，需要確 保儘可能多的活性藥物到達變異細胞內的分子靶點。妨礙或阻礙該目的的任何 外環境或內環境可導致細胞耐藥。實際上，體外受到一些耐藥機制影響的所有基於細胞生長抑制劑的化學治 療通過被動擴散透入細胞。因此，藥物細胞外濃度越高，透入細胞的量越多， 藥物越有效。細胞內耐藥機制是化學治療失敗的最大影響因素。因此，靶部位藥物濃度 的降低是諸如以下因素等導致的結果轉運蛋白將其排出細胞膜；化療藥物分 子被包入細胞質囊泡中，核與細胞質之間運輸的改變；以及氧化滅活和/或與谷 胱甘肽(GSH)偶聯導致的藥物細胞內代謝改變，然後通過化學泵從細胞中排出。用作抗腫瘤藥的大多數細胞毒性藥物可導致DNA結構變化，誘導細胞凋 亡，但DNA修復能力的提高由抵消了藥物作用。基因p53啟動細胞凋亡，但 在許多癌細胞中該基因發生突變，或者甚至消失，導致以下結果雖然變異細 胞被細胞毒性藥物破壞，但仍不發生凋亡且細胞繼續分裂。細胞生長抑制劑是目前化療中最常用的抗腫瘤藥，它通過導致癌細胞DNA 破裂和/或改變發揮作用，除上述例外之外，誘導凋亡和細胞死亡。其相對低的 特異性導致副作用，因為除了攻擊癌細胞，它們也會破壞胃黏膜細胞和攻擊免 疫系統的細胞，在患者中導致嚴重的嗜中性粒細胞減少症，使他們對任何的機 會感染或可能導致死亡的疾病無防禦能力。開發了基於單克隆抗體和脂質體的新型藥物，以最大程度地減少患者副作 用。抗腫瘤藥中的單克隆抗體只會與需要消除的癌細胞中經鑑定的特定抗原相 結合，因此結合於抗體的活性成分只會影響具有該抗原的癌細胞。這樣，上文 所述的副作用基本消失。更佳地，聯合使用聚乙二醇化的脂質體與其上結合有抗腫瘤藥物的活性成 分的腫瘤特異性單克隆抗體。脂質體是由磷脂組成的非囊泡，其組成與細胞膜 的組成非常相似，使得脂質體能夠與細胞膜融合併確保脂質體內包含的活性成 分能夠透入細胞內部。使用通過脂質體遞送的藥物，血液中抗腫瘤劑的活性能 維持較長時間，其給藥是持續的，並且患者副作用較少。然而，雖然生命質量 和存活率得到改善，但是化療方法昂貴並且對抗癌細胞耐藥機制的作用不大， 因此公共衛生系統很少使用化療方法，雖然在一些情況下目前的化療是有效的 (例如在兒童白血病中)，但大多數轉移瘤和實體瘤患者最終死亡。因此，希望 開發一種能避免目前抗腫瘤藥的耐藥機制的新型化療藥物，這種開發將拯救全 世界數以百萬計的患者。發明目的本發明的一個目的是提供一種給予哺乳動物或人的組合物，從而對抗變異 細胞、細菌、病毒或其它外層是脂質膜的生物體導致的疾病。本發明的另一個目的是無毒性以及顯著不同於常規治療的作用機制的癌 症治療。發明概述在許多活性中(抗高血壓、抗炎症等)，脂質體也可用作無經典活性成分的 結構，雖然尚不了解不含活性成分的空脂質體對抗變異細胞，尤其是癌細胞的 機制。本發明之前，從未考慮過在沒有抗腫瘤藥的情況下聯合使用聚乙二醇化 脂質體和單克隆抗體用於治療癌症以及病毒、細菌等因素導致的疾病，尤其是為了導致變異細胞或微生物的細胞內成分流出進入細胞外介質，導致細胞裂解 和死亡。一般來說，本發明涉及用於治療變異細胞的組合物和方法。更具體地說， 本發明涉及不含化學治療成分的由脂質體、單克隆抗體和結構蛋白構成的組合 物，給予伴有細胞損傷的人體或動物後能使細胞開放，受損細胞的細胞內成分 流出進入細胞外介質，同時細胞裂解。這樣，避免了細胞耐藥機制。本發明還提供了給予患有細胞疾病的人或動物所述組合物的方法，細胞 疾病包括癌症，例如癌、白血病、骨髓瘤、神經母細胞瘤、肉瘤以及肺、腦、 卵巢、結腸或乳腺癌，當然並不限於這些。通常，所述方法包括給予個體一定量 的組合物，其量代表能夠在變異細胞或(恰當時)致病性微生物的質膜中啟動裂 解過程的有效量。有效量可根據醫學診斷方法確定。誘導細胞開放的組合物的例子包括結合於脂質體或囊泡的對待治療疾病 特異的單克隆抗體，脂質體或囊泡包括排列在其外表面上的限定有相當尺寸的 開孔的結構蛋白，開孔在脂質體與受損細胞的相互作用中保持開放以誘導原生 質流出進入細胞外介質中，受損細胞裂解和死亡。根據本發明，可用對待破壞的細胞或微生物同樣具有特異性的醇或糖蛋白 來代替單克隆抗體。因此，提供了一種用於給予哺乳動物或人的組合物，從而對抗變異細胞、 細菌、病毒或外層是脂質膜的其它微生物導致的疾病。還提供了無毒性疾病治療方法以及顯著不同於受損細胞常規治療方法的 作用機制。所述不含化學治療劑療法的作用機制與常規抗腫瘤劑不同，避免了 靶細胞(例如癌細胞)的耐藥機制。採用脂質體、結構蛋白和特異性結合成分通過已知方法製備了給予哺乳動 物或人的組合物。給予患有疾病的哺乳動物或人組合物能在待破壞的靶細胞或微生物中引 發裂解過程，細胞內成分通過最初在脂質體的脂質膜中由結構蛋白形成的大開 孔釋放進入胞外介質中，所述開孔基本上保持開放，在脂質膜與其針對的靶細胞或微生物原生質膜相互作用後作為排出口(drainage outlet)。更具體地說，本發明提供了用於治療癌症的組合物，所述組合物包括脂質 體，優選單層脂質體，其上具有與結構蛋白整合形成的大開孔，脂質膜上結合 有對待治療受損細胞特異的抗體，因此，當脂質體與腫瘤上對應的細胞受體結 合時，脂質膜與特定細胞發生融合。 一旦脂質體與靶細胞結合併且發生膜融合， 脂質體上存在的開孔將形成連接細胞質與細胞外介質的排出口；因此改變滲透 壓並引發了導致細胞死亡的裂解過程。根據本發明，提供了一種組合物，它被設計成給予哺乳動物或人後可破壞 變異或受損細胞或致病性微生物，所述組合物包括空單層脂質體，其結構上存 在由結構蛋白成分限定的開孔，其膜上結合有特異性結合成分，例如選定的單 克隆抗體(需要的話，根據待破壞的細胞)。這樣，給予患者後，所述組合物是 能與靶細胞膜或微生物膜相互作用的有效效應劑， 一旦與膜融合，維持脂質體 中開孔開放程度，從而擾亂細胞滲透平衡，同時確保開孔用作細胞內成分釋放 進入細胞外介質的排出口。實際上，組合物中的空單層脂質體具有適應待破壞的靶細胞或微生物的特 定脂質組成。根據本發明，在所述組合物的使用中，優選踝蛋白作為脂質體結構蛋白修 飾成分。雖然和常規治療一樣，基於所述組合物的治療採用單克隆抗體或其它特異 性結合成分與脂質體，但沒有常規治療中與包含活性成分的脂質體有關的缺 點，由於其僅含有磷脂和蛋白質而對生物體無害。在腫瘤性疾病中，組合物對 腫瘤細胞的致命效果由細胞膜中排出口的開放與維持來實現，排出口能夠在結 合有結構蛋白(優選踝蛋白)的脂質體相互作用之後，在脂質體中形成大開孔，從而排空細胞內成分。開孔大小如預先選定的那樣，並且在脂質體中是永久性 的；因此，在脂質體與受損細胞膜的融合過程中，細胞膜中形成和維持大小基 本上相同的開孔。同樣地，多個脂質體與腫瘤細胞膜的結合形成對應的開孔， 導致快速細胞裂解和死亡。根據上述內容，與目前使用的抗腫瘤治療相比，本發明給予哺乳動物或人 的組合物在變異細胞治療中的主要優點變得明顯。這些優點包括高度特異性， 目的在於降低或消除治療副作用；與迄今使用的化療組合物相比，變異細胞膜 或微生物膜對所述脂質體的作用沒有耐藥性；完全無害，因為它缺乏毒性或放 射活性成分；癌症治療中，使用特異性結合成分的高度選擇性，尤其是使用單 克隆抗體；以及脂質體與致病性微生物膜或靶細胞膜結合時的高度殺傷能力。必須選擇性地選擇足夠多的特異性結合成分以使副作用最小，特異性結合 成分包括單克隆抗體、糖蛋白或醇，它們可插入脂質體膜中，其作用是引導脂 質體到達微生物或靶細胞膜。
權利要求
1.一種被設計成給予哺乳動物或人的組合物，所述組合物包括至少一種空脂質體和特異性結合成分，其中，至少一種結構蛋白成分結合於脂質體，在脂質體膜中形成相當尺寸的開孔，所述特異性結合成分被設計成確保組合物是能夠與靶細胞膜或微生物膜相互作用的效應試劑，大致維持開孔，目的在於擾亂滲透平衡和確保開孔成為細胞內成分釋放進入細胞外介質的排出口。
2. 如權利要求l所述的旨在給予哺乳動物或人的組合物，其特徵在於，所 述脂質體是單層脂質體並具有適合待對抗的細胞或微生物的特定脂質組成。
3. 如權利要求l所述的旨在給予哺乳動物或人的組合物，其特徵在於，所 述結構蛋白成分是踝蛋白。
4. 如權利要求1-3中任一項所述的旨在給予哺乳動物或人的組合物，其特 徵在於，所述組合物可用於對抗變異細胞和致病性微生物的治療性製劑中。
5. 如權利要求l-4中任一項所述的旨在給予哺乳動物或人的組合物，其特 徵在於，所述組合物可用於癌症治療製劑中。
6. 如權利要求l-4中任一項所述的旨在給予哺乳動物或人的組合物，其特 徵在於，所述組合物可用於病毒疾病的治療中。
全文摘要
本發明涉及一種給予哺乳動物或人體，可用於破壞受損的、致病性細胞的組合物，組合物包括空脂質體、結構蛋白成分和特異性結合成分，根據待破壞的致病性微生物或細胞來選擇特異性結合成分。給予患者後，組合物以有效效應劑的方式起作用，與靶細胞膜或微生物膜相互作用，形成細胞內成分釋放到細胞外介質中的排出口。
文檔編號A61P35/00GK101272766SQ200680034018
公開日2008年9月24日 申請日期2006年9月15日 優先權日2005年9月19日
發明者丹尼爾·塞拉諾·希爾 申請人:丹尼爾·塞拉諾·希爾