一種人參皂苷Rh2提取物及製備方法
2023-12-05 22:38:01
專利名稱：一種人參皂苷Rh2提取物及製備方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥提取物及其製備，特別涉及人參皂苷他2提取物及其製備。
背景技術：
人參在治療心腦血管疾病方面，有許多報導。人參次苷類成分，可治療冠心病和缺血性中風。人參皂苷他2為人參皂苷類成分經水解產生的次級皂苷，藥效學研究表明人參 皂苷他2對肝癌、黑色素瘤B16、宮頸癌及肉瘤S180等癌細胞的增殖有顯著的特異性的抑制 作用。其作用機理為在癌細胞增殖過程中，經人參皂苷他2作用，使癌細胞停止在一定的 增殖期，並促使其逆轉為正常細胞。現有技術分離人參皂苷Μι2的效果不佳，本發明人在對人參皂苷Μι2提取物進行 研究過程中，採用新的分離技術，試驗出一組新的人參皂苷他2提取物及其製備方法，製備 的人參皂苷他2提取物具有療效高，純度高，吸收好，質量穩定，同時製備方法分離效果佳， 含量高，工藝簡單，操作方便，成本低廉，適合工業化生產。
發明內容
本發明提供一種人參皂苷他2提取物。本發明的人參皂苷他2提取物，製備方法如下步驟1、含有人參皂苷類成分的藥材用水提取，提取液醇沉，收集上清液，濃縮至 幹，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶於ΡΗ5左右的緩衝液，加β -葡萄糖苷酶，反應，反 應完成後稀釋反應液，收集沉澱物；步驟3、沉澱物用乙醇溶解，拌入矽膠中，進行矽膠柱層析，用乙醇和乙酸乙酯混合 液進行洗脫，收集富含人參皂苷他2的流份，濃縮即得；其中步驟3所述乙醇和乙酸乙酯混合液為含5-15%乙醇的乙酸乙酯。優選的製備方法如下步驟1、選自西洋參葉、西洋參、三七、三七葉、人參或人參葉等含有人參皂苷類成 分的藥材用水提取，提取液濃縮至相對密度為1. 05-1. 20，加乙醇進行醇沉，放置，上清液濃 縮至幹，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶於ΡΗ5左右的醋酸緩衝液，加β -葡萄糖苷酶，反 應，反應完成後稀釋反應液，收集沉澱物；步驟3、沉澱物用乙醇溶解，拌入矽膠中，進行矽膠柱層析，用含5-10%乙醇的乙 酸乙酯進行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結果，收集富含人參皂苷Μι2的流份，濃縮即得。更優選的製備方法如下步驟1、選自西洋參葉、西洋參、三七、三七葉、人參或人參葉等含有人參皂苷類成 分的藥材用水提取2-3次，每次1-2小時，每次加8-12倍水量，混合提取液，濃縮至相對密度為1. 05-1. 20，加95%乙醇進行醇沉，使含醇量達到75%，放置12h以上，過濾，醇沉液濃 縮至幹或經過脫色後濃縮至幹，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶於PH5左右的醋酸緩衝液，加β -葡萄糖苷酶，在 40°C反應，反應完成後加水稀釋反應液並攪拌均勻，析出沉澱，收集沉澱物，得人參總次苷 粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的矽膠中，進行矽膠柱層 析，用含5-10%乙醇的乙酸乙酯進行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結果，收集富含人參皂苷Μι2 的流份，濃縮。本發明還包括人參皂苷他2提取物在製備抗腫瘤藥物中的應用。
本發明最優選的製備方法在本發明實施例中。本發明還包括用本發明的人參皂苷他2提取物製備的藥物組合物，所述藥物組合 物是用上述人參皂苷他2提取物作為藥物活性成分製備成的藥物製劑。本發明的藥物組合物，根據需要可以含有藥物可接受的載體，其中人參皂苷他2 提取物作為藥物活性成分，其在製劑中所佔重量百分比可以是0. 1-99.9%，其餘為藥物可 接受的載體。本發明的藥物製劑組合物，以單位劑量形式存在，所述單位劑量形式是指製劑 的單位，如片劑的每片，膠囊的每粒膠囊，口服液的每瓶，顆粒劑每袋，注射劑的每支等。本發明的藥物組合物可以是任何可藥用的劑型，這些劑型包括片劑、糖衣片劑、 薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、衝劑、丸 劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、滴 劑、貼劑。本發明的藥物組合物，其口服給藥的製劑可含有常用的賦形劑，諸如粘合劑、填充 劑、稀釋劑、壓片劑、潤滑劑、崩解劑、著色劑、調味劑和溼潤劑，必要時可對片劑進行包衣。適用的填充劑包括纖維素、甘露糖醇、乳糖和其它類似的填充劑。適宜的崩解劑包 括澱粉、聚乙烯吡咯烷酮和澱粉衍生物，例如羥基乙酸澱粉鈉。適宜的潤滑劑包括，例如硬 脂酸鎂。適宜的藥物可接受的溼潤劑包括十二烷基硫酸鈉。可通過混合，填充，壓片等常用 的方法製備固體口服組合物。進行反覆混合可使活性物質分布在整個使用大量填充劑的那 些組合物中。口服液體製劑的形式例如可以是水性或油性懸浮液、溶液、乳劑、糖漿劑或酏劑， 或者可以是一種在使用前可用水或其它適宜的載體復配的乾燥產品。這種液體製劑可含 有常規的添加劑，諸如懸浮劑，例如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基 纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化食用脂肪，乳化劑，例如卵磷脂、脫水山梨醇一油酸酯或阿拉 伯膠；非水性載體(它們可以包括食用油)，例如杏仁油、分餾椰子油、諸如甘油的酯的油性 酯、丙二醇或乙醇；防腐劑，例如對羥基苯甲酯或對羥基苯甲酸丙酯或山梨酸，並且如果需 要，可含有常規的香味劑或著色劑。對於注射劑，製備的液體單位劑型含有本發明的活性物質和無菌載體。根據載體 和濃度，可以將此化合物懸浮或者溶解。溶液的製備通常是通過將活性物質溶解在一種載 體中，在將其裝入一種適宜的小瓶或安瓿前過濾消毒，然後密封。輔料例如一種局部麻醉 齊U、防腐劑和緩衝劑也可以溶解在這種載體中。為了提高其穩定性，可在裝入小瓶以後將這 種組合物冰凍，並在真空下將水除去。
本發明的藥物組合物，在製備成藥劑時可選擇性的加入適合的藥物可接受的載 體，所述藥物可接受的載體選自甘露醇、山梨醇、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、鹽 酸半胱氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素C、EDTA 二鈉、EDTA鈣鈉，一價鹼金屬的碳酸鹽、醋 酸鹽、磷酸鹽或其水溶液、鹽酸、醋酸、硫酸、磷酸、胺基酸、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉、木糖醇、 麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、澱粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、矽衍生物、纖維素及 其衍生物、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土溫80、瓊脂、碳酸鈣、碳酸氫鈣、表面活性 劑、聚乙二醇、環糊精、β -環糊精、磷脂類材料、高嶺土、滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。本發明的藥物組合物在使用時根據病人的情況確定用法用量，可每日服三次，每 次1-20劑，如1-20袋或粒或片，每劑Img-IOOOmgo 以下通過實驗數據說明本發明的有益效果。人參皂苷他2注射液經藥效學實驗證明對小鼠多種移植實驗性腫瘤有明顯的抑 製作用，50、25、12. 5mg/kg人參皂苷Rh2注射液對小鼠肉瘤(S180)、肝癌A22 (Hep · A22)、 艾氏腹水癌(ESC)、肺癌(Lewis)均有明顯的抑制作用；人參皂苷Μι2注射液對荷瘤小鼠 腹腔巨噬細胞吞噬功能和體液免疫功能均有明顯的增強作用，並可顯著提高NK細胞活性， 40mg/kg人參皂苷他2注射液既可促進脾細胞淋轉，又可明顯提高白細胞介素-2(IL-2)活 性。有關試驗表明，本發明的人參皂苷他2提取物比現有技術療效高，純度高，產率 高，吸收好，質量穩定，用途新穎，同時製備方法工藝簡單，操作方便，成本低廉，適合工業化生產。
具體實施例方式下面以具體來說明本發明，實施例是為了便於理解本發明，而不以任何方式限制 本發明的權利要求和核心內容。實施例1人參皂苷他2提取物的製備步驟1、西洋參葉用水提取2次，每次2小時，每次加10倍水量，混合提取液，濃縮 至相對密度為1. 05-1. 20，加95%乙醇進行醇沉，使含醇量達到75%，放置12h以上，過濾， 醇沉液濃縮至幹或經過脫色後濃縮至幹，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶於PH5左右的醋酸緩衝液，加β -葡萄糖苷酶，在 40°C反應，反應完成後加水稀釋反應液並攪拌均勻，析出沉澱，收集沉澱物，得人參總次苷 粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的矽膠中，進行矽膠柱層 析，用含10%乙醇的乙酸乙酯進行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結果，收集富含人參皂苷Μι2的 流份，濃縮。實施例2人參皂苷他2提取物的製備步驟1、西洋參用水提取3次，每次1小時，每次加8倍水量，混合提取液，濃縮至相 對密度為1. 05-1. 20，加95%乙醇進行醇沉，使含醇量達到75%，放置12h以上，過濾，醇沉 液濃縮至幹或經過脫色後濃縮至幹，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶於PH5左右的醋酸緩衝液，加β -葡萄糖苷酶，在 40°C反應，反應完成後加水稀釋反應液並攪拌均勻，析出沉澱，收集沉澱物，得人參總次苷粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的矽膠中，進行矽膠柱層 析，用含5%乙醇的乙酸乙酯進行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結果，收集富含人參皂苷他2的流 份，濃縮。實施例3人參皂苷他2提取物的製備步驟1、三七用水提取2次，每次3小時，每次加10倍水量，混合提取液，濃縮至相 對密度為1. 05-1. 20，加95%乙醇進行醇沉，使含醇量達到75%，放置12h以上，過濾，醇沉 液濃縮至幹或經過脫色後濃縮至幹，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶於PH5左右的醋酸緩衝液，加β -葡萄糖苷酶，在 40°C反應，反應完成後加水稀釋反應液並攪拌均勻，析出沉澱，收集沉澱物，得人參總次苷 粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的矽膠中，進行矽膠柱層 析，用含10%乙醇的乙酸乙酯進行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結果，收集富含人參皂苷Μι2的 流份，濃縮。實施例4人參皂苷他2提取物的製備步驟1、三七葉用水提取2次，每次2小時，每次加12倍水量，混合提取液，濃縮至 相對密度為1. 05-1. 20，加95%乙醇進行醇沉，使含醇量達到75%，放置12h以上，過濾，醇 沉液濃縮至幹或經過脫色後濃縮至幹，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶於PH5左右的醋酸緩衝液，加β -葡萄糖苷酶，在 40°C反應，反應完成後加水稀釋反應液並攪拌均勻，析出沉澱，收集沉澱物，得人參總次苷 粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的矽膠中，進行矽膠柱層 析，用含7. 5%乙醇的乙酸乙酯進行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結果，收集富含人參皂苷他2的 流份，濃縮。實施例5人參皂苷他2提取物的製備步驟1、人參用水提取2次，每次2小時，加10倍水量，混合提取液，濃縮至相對密 度為1. 05-1. 20，加95%乙醇進行醇沉，使含醇量達到75%，放置12h以上，過濾，醇沉液濃 縮至幹或經過脫色後濃縮至幹，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶於PH5左右的醋酸緩衝液，加β -葡萄糖苷酶，在 40°C反應，反應完成後加水稀釋反應液並攪拌均勻，析出沉澱，收集沉澱物，得人參總次苷 粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的矽膠中，進行矽膠柱層 析，用含15%乙醇的乙酸乙酯進行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結果，收集富含人參皂苷Μι2的 流份，濃縮。實施例6人參皂苷他2提取物的製備步驟1、人參葉用水提取2次，每次2小時，每次加10倍水量，混合提取液，濃縮至 相對密度為1. 05-1. 20，加95%乙醇進行醇沉，使含醇量達到75%，放置12h以上，過濾，醇 沉液濃縮至幹或經過脫色後濃縮至幹，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶於PH5左右的醋酸緩衝液，加β -葡萄糖苷酶，在40°C反應，反應完成後加水稀釋反應液並攪拌均勻，析出沉澱，收集沉澱物，得人參總次苷 粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的矽膠中，進行矽膠柱層 析，用含10%乙醇的乙酸乙酯進行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結果，收集富含人參皂苷Μι2的 流份，濃縮。實施例7人參皂苷他2提取物的組合物以本發明的人參皂苷他2提取物為藥物活性成分，根據製劑學常規技術，製備成 人參皂苷他2提取物的藥物製劑組合物，如片劑，膠囊，注射劑等。實施例8本發明人參皂苷Μι2提取物的含量測定本發明的實施例1的人參皂苷Μι2提取物，人參皂苷Mi2含量為40%。實施例9本發明人參皂苷Μι2提取物的抗腫瘤活性比較試驗分兩組，用現有技術中的提取方法得到的人參皂苷他2提取物和本發明最優 選的人參皂苷他2提取物進行抗腫瘤活性對比，證明本發明的人參皂苷Μι2提取物在小鼠 肉瘤(S180)、肝癌Α22(Η印·Α22)、艾氏腹水癌(ESC)、肺癌(Lewis)等何瘤小鼠上抗腫瘤活 性更高。
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權利要求
1.一種人參皂苷他2提取物，其特徵在於，製備方法如下步驟1、含有人參皂苷類成分的藥材用水提取，提取液醇沉，收集上清液，濃縮至幹，得 總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶於ΡΗ5左右的緩衝液，加β -葡萄糖苷酶，反應，反應完 成後稀釋反應液，收集沉澱物；步驟3、沉澱物用乙醇溶解，拌入矽膠中，進行矽膠柱層析，用乙醇和乙酸乙酯混合液進 行洗脫，收集富含人參皂苷他2的流份，濃縮即得；其中步驟3所述乙醇和乙酸乙酯混合液為含5-15%乙醇的乙酸乙酯。
2.權利要求1的人參皂苷Μι2提取物，其特徵在於，製備方法如下步驟1、選自西洋參葉、西洋參、三七、三七葉、人參或人參葉等含有人參皂苷類成分的 藥材用水提取，提取液濃縮至相對密度為1. 05-1. 20，加乙醇進行醇沉，放置，上清液濃縮至 幹，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶於ΡΗ5左右的醋酸緩衝液，加β -葡萄糖苷酶，反應，反 應完成後稀釋反應液，收集沉澱物；步驟3、沉澱物用乙醇溶解，拌入矽膠中，進行矽膠柱層析，用含5-10%乙醇的乙酸乙 酯進行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結果，收集富含人參皂苷Μι2的流份，濃縮即得。
3.權利要求1的人參皂苷Μι2提取物，其特徵在於，製備方法如下步驟1、選自西洋參葉、西洋參、三七、三七葉、人參或人參葉等含有人參皂苷類成分的 藥材用水提取2-3次，每次1-2小時，每次加8-12倍水量，混合提取液，濃縮至相對密度為 1. 05-1. 20，加95%乙醇進行醇沉，使含醇量達到75%，放置12h以上，過濾，醇沉液濃縮至 幹或經過脫色後濃縮至幹，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶於PH5左右的醋酸緩衝液，加β -葡萄糖苷酶，在40°C反 應，反應完成後加水稀釋反應液並攪拌均勻，析出沉澱，收集沉澱物，得人參總次苷粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的矽膠中，進行矽膠柱層析，用 含5-10%乙醇的乙酸乙酯進行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結果，收集富含人參皂苷他2的流 份，濃縮。
4.含權利要求1的人參皂苷Μι2提取物的藥物組合物。
5.權利要求1的人參皂苷Μι2提取物在製備抗腫瘤藥物中的應用。
6.權利要求1的人參皂苷Μι2提取物的製備方法，其特徵在於，步驟如下步驟1、含有人參皂苷類成分的藥材用水提取，提取液醇沉，收集上清液，濃縮至幹； 步驟2、步驟1得到的總皂苷溶於PH5左右的緩衝液，加β -葡萄糖苷酶，反應，反應完 成後稀釋反應液，收集沉澱物；步驟3、沉澱物用乙醇溶解，拌入矽膠中，進行矽膠柱層析，用乙醇和乙酸乙酯混合液進 行洗脫，收集富含人參皂苷他2的流份，濃縮即得；其中步驟3所述乙醇和乙酸乙酯混合液為含5-15%乙醇的乙酸乙酯。
7.權利要求6的製備方法，其特徵在於，步驟如下步驟1、選自西洋參葉、西洋參、三七、三七葉、人參或人參葉等含有人參皂苷類成分的 藥材用水提取，提取液濃縮至相對密度為1. 05-1. 20，加乙醇進行醇沉，放置，上清液濃縮至 幹，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶於PH5左右的醋酸緩衝液，加β -葡萄糖苷酶，反應，反 應完成後稀釋反應液，收集沉澱物；步驟3、沉澱物用乙醇溶解，拌入矽膠中，進行矽膠柱層析，用含5-10 %乙醇的乙酸乙 酯進行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結果，收集富含人參皂苷Μι2的流份，濃縮即得。
8.權利要求6的製備方法，其特徵在於，步驟如下步驟1、選自西洋參葉、西洋參、三七、三七葉、人參或人參葉等含有人參皂苷類成分的 藥材用水提取2-3次，每次1-2小時，每次加8-12倍水量，混合提取液，濃縮至相對密度為 1. 05-1. 20，加95%乙醇進行醇沉，使含醇量達到75%，放置12h以上，過濾，醇沉液濃縮至 幹或經過脫色後濃縮至幹，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶於PH5左右的醋酸緩衝液，加β-葡萄糖苷酶，在40°C反 應，反應完成後加水稀釋反應液並攪拌均勻，析出沉澱，收集沉澱物，得人參總次苷粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的矽膠中，進行矽膠柱層析，用 含5-10%乙醇的乙酸乙酯進行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結果，收集富含人參皂苷他2的流 份，濃縮。
9.權利要求6的製備方法，其特徵在於，步驟如下步驟1、選自西洋參葉、西洋參、三七、三七葉、人參或人參葉等含有人參皂苷類成分 的藥材用水提取2次，每次2小時，每次加10倍水量，混合提取液，濃縮至相對密度為 1. 05-1. 20，加95%乙醇進行醇沉，使含醇量達到75%，放置12h以上，過濾，醇沉液濃縮至 幹或經過脫色後濃縮至幹，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶於PH5左右的醋酸緩衝液，加β -葡萄糖苷酶，在40°C反 應，反應完成後加水稀釋反應液並攪拌均勻，析出沉澱，收集沉澱物，得人參總次苷粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的矽膠中，進行矽膠柱層析，用 含5-10%乙醇的乙酸乙酯進行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結果，收集富含人參皂苷他2的流 份，濃縮。
10.權利要求6的製備方法，其特徵在於，步驟如下步驟1、選自西洋參葉、西洋參、三七、三七葉、人參或人參葉等含有人參皂苷類成 分的藥材用水提取3次，每次1小時，每次加8倍水量，混合提取液，濃縮至相對密度為 1. 05-1. 20，加95%乙醇進行醇沉，使含醇量達到75%，放置12h以上，過濾，醇沉液濃縮至 幹或經過脫色後濃縮至幹，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶於PH5左右的醋酸緩衝液，加β-葡萄糖苷酶，在40°C反 應，反應完成後加水稀釋反應液並攪拌均勻，析出沉澱，收集沉澱物，得人參總次苷粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的矽膠中，進行矽膠柱層析，用 含5-10 %乙醇的乙酸乙酯進行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結果，收集富含人參皂苷他2的流 份，濃縮。
全文摘要
本發明涉及一種中藥提取物及其製備，特別涉及人參皂苷Rh2提取物及其製備。本發明的提取物的製備方法包括如下步驟步驟1、含有人參皂苷類成分的藥材用水提取，提取液醇沉，收集上清液，濃縮至幹，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶於PH5左右的緩衝液，加β-葡萄糖苷酶，反應，反應完成後稀釋反應液，收集沉澱物；步驟3、沉澱物用乙醇溶解，拌入矽膠中，進行矽膠柱層析，用乙醇和乙酸乙酯混合液進行洗脫，收集富含人參皂苷Rh2的流份，濃縮即得。
文檔編號C07J17/00GK102060903SQ20091022846
公開日2011年5月18日 申請日期2009年11月17日 優先權日2009年11月17日
發明者周水平, 宋兆輝, 張蘭蘭, 朱永宏, 林萬裡, 蔡楠, 黃芝娟 申請人:天津天士力製藥股份有限公司