一種同時測定食用植物油中三種毒性醛類的雙波長檢測方法與流程

2023-12-05 20:40:01 3

本發明屬於食品檢測領域，是一種同時測定食用植物油中三種毒性醛類的雙波長檢測方法。技術背景食用植物油具有重要的營養價值，不僅為人體提供熱量，還可以提供不飽和脂肪酸，如油酸、亞油酸(ω-6)、亞麻酸(ω-3)，同時也可提供脂溶性維生素、多酚類等物質。食用油的安全與人們的健康息息相關，關乎經濟發展和社會穩定，受到大眾和媒體的高度關注。食用油脂的氧化穩定性直接關係到食用油的保質期和銷售儲存。油脂在生產、儲藏和加工過程中受空氣、溫度等的影響，發生氧化，氧化過程主要分為三個階段：首先是鏈引發階段，受空氣、金屬離子等的作用，產生烷基自由基(R·)；其次是鏈傳遞階段，烷基自由基(R·)在氧氣作用下形成過氧化物自由基(ROO·)及氫過氧化物(ROOH)，同時又形成新的烷基自由基(R·)，產生的氫過氧化物可以繼續分解成醛、酮、酸、烴等小分子物質；最後階段是鏈終止階段，烷基自由基(R·)、過氧化物自由基(ROO·)發生聚合，形成二聚物以及多聚物。氧化的油脂色澤加深，並且伴有異味，品質大大降低，同時氧化生成了一些對人體健康有潛在危害的物質，醛類物質就是其中的一類物質。油脂氧化產生的醛類物質有很多種，其中一些與油脂及油炸食品的風味息息相關(查祁珍.油脂的風味及其評價[J].中國油脂，1998，23(1):52-54)，還有一些醛(羥基醛和氫過氧基烯醛等)具有較高的反應活性，攝入體內後能與組織蛋白和核酸等結合，導致諸多疾病的發生(ChoSY,MiyashitaK,MiyazawaT,etal.Autoxidationofethyleicosapentaenoateanddocosahexaenoate[J].JournaloftheAmericanOilChemistsSociety,1987,64(6):876-879.SchaurRJ,ZollnerH,EsterbauerH.Biologicaleffectsofaldehydeswithparticularattentionto4-hydroxynonenalandmalonaldehyde[J].Membranelipidoxidation,1991,3:141-163.Morales-BarreraJE,Gonzalez-AlcortaMJ,Castillo-DominguezRM,etal.Fattyaciddepositiononbroilermeatinchickenssupplementedwithtunaoil[J].FoodandNutritionSciences,2013,4(09):16.VandemoorteleA,DeMeulenaerB.Behaviorofmalondialdehydeinoil-in-wateremulsions[J].Journalofagriculturalandfoodchemistry,2015,63(23):5694-5701.)。通過對大量的食物油、油基食品的調查發現，MDA、4-HNE、4-HHE三種醛類廣泛分布在多種樣品中，含量較多且不揮發(SeppanenCM,CsallanyAS.Simultaneousdeterminationoflipophilicaldehydesbyhigh-performanceliquidchromatographyinvegetableoil[J].JournaloftheAmericanOilChemists'Society,2001,78(12):1253-1260.PapastergiadisA,FatouhA,JacxsensL,etal.ExposureassessmentofMalondialdehyde,4-Hydroxy-2-(E)-Nonenaland4-Hydroxy-2-(E)-HexenalthroughspecificfoodsavailableinBelgium[J].FoodandChemicalToxicology,2014,73:51-58.)，已有大量的研究發現，丙二醛(MDA)、4-羥基己烯醛(4-HHE)和4-羥基壬烯醛(4-HNE)中所含有的活性醛基在生物體系中可以和蛋白質、DNA等發生交聯，破壞其正常的結構，導致生理功能降低乃至喪失，有一定的致病、致癌及生殖遺傳毒性(GuillénGoicoecheaE.Toxicoxygenatedα,β-unsaturatedaldehydesandtheirstudyinfoods:areview[J].Criticalreviewsinfoodscienceandnutrition,2008,48(2):119-136.GoicoecheaE,GuillenMD.Analysisofhydroperoxides,aldehydesandepoxidesby1Hnuclearmagneticresonanceinsunfloweroiloxidizedat70and100℃[J].Journalofagriculturalandfoodchemistry,2010,58(10):6234-6245.；B,GoicoecheaE,ManzanosMJ,etal.Amethodbasedon1HNMRspectraldatausefultoevaluatethehydrolysislevelincomplexlipidmixtures[J].FoodResearchInternational,2014,66:379-387.LorenteL,RodriguezST,SanzP,etal.AssociationbetweenPre-TransplantSerumMalondialdehydeLevelsandSurvivalOneYearafterLiverTransplantationforHepatocellularCarcinoma[J].Internationaljournalofmolecularsciences,2016,17(4):500.)。針對MDA、4-HHE和4-HNE的研究多是單獨進行的，自2008年，在嬰幼兒奶粉中檢測到較高含量的MDA、4-HNE、4-HHE後，近兩年對這三種醛類物質的研究逐步引起人們的重視。MDA來源於含有兩個雙鍵以上不飽和脂肪酸的氧化，4-HNE和4-HHE分別由ω-6系脂肪酸和ω-3系脂肪酸的氧化產生，隨著人們生活水平的提高，對於健康飲食的呼聲也越來越高，富含亞油酸、亞麻酸的植物油消費量逐年上升，而多不飽和脂肪酸的加工和消費的增加，將顯著增加人體接觸和攝入這三種有毒醛類的機率，給人們的健康帶來了一定的風險。目前，針對醛類物質的測定，主要是與衍生劑衍生化反應後，通過HPLC-UV、GC-MC、LC-MS(/MS)等手段單獨檢測。對於多種醛類物質的研究有報導針對水中(極性環境)12種極性醛類(甲醛、乙醛、丙醛、丁烯醛、丁醛、戊二醛、戊醛、己醛、庚醛、辛醛、壬醛、癸醛)的研究，二極體陣列檢測器(PDA)360nm單波長檢測(丁昌明,林少彬.水中12種醛類化合物的高效液相色譜測定法[J].環境與健康雜誌,2009,26(4):351-353.)。但該研究的色譜條件對於食用植物油體系(非極性環境)並沒有指導性及適用性，其洗脫模式並不能同時將弱極性醛類MDA、4-HHE和4-HNE分離，此外單一波長也不能實現對MDA、4-HHE和4-HNE的同時檢測。針對MDA、4-HHE和4-HNE三種醛同時測定的方法目前僅有一篇報導，採用的是與2,4-二硝基苯肼衍生化後，LC-MS/MS測定(DounyC,TihonA,BayonnetP,etal.ValidationoftheanalyticalprocedureforthedeterminationofmalondialdehydeandthreeotheraldehydesinvegetableoilusingLiquidChromatographycoupledtotandemmassspectrometry(LC-MS/MS)andapplicationtolinseedoil[J].FoodAnalyticalMethods,2015,8(6):1425-1435.)。然而該方法操作較繁瑣，成本較高，亟需一種快速、高效、低廉同時測定三種毒性醛類的方法，為研究食用植物油中三種毒性醛類物質的產生機制及影響因素奠定一定的基礎。技術實現要素：本發明針對目前富含多不飽和脂肪酸植物油的大量消費，增加了人體接觸和攝入有毒物質MDA、4-HNE、4-HHE的風險的現象，提出一種快速、低廉、高效、準確地同時測定MDA、4-HNE、4-HHE的檢測方法。為實現上述目的，本發明採用如下的技術方案。一種同時測定食用植物油中三種毒性醛類的雙波長檢測方法，為一次進樣，雙波長同時檢測食用植物油中三種毒性醛類丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛。進一步地，所述雙波長分別是波長為310nm和378nm。進一步地，所述丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的檢測限分別為0.012μg/g、0.020μg/g和0.014μg/g。進一步地，所述丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的加標回收率分別為98.13-102.94％、97.73-101.73％和97.66-102.83％。進一步地，所述丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的線型範圍分別為0.02-10.0μg/g、0.02-4.00μg/g和0.03-4.00μg/g。進一步地，包括如下檢測步驟：(1)衍生劑的配製：配製0.05mol/L2,4-二硝基苯肼的酸性乙醇溶液，內含為10-15v/v％的濃鹽酸；(2)標準溶液的配製：準確稱取1,1,3,3-四乙氧基丙烷，定容後稀釋為10μg/mLMDA標準品溶液，再依次配製MDA標準溶液濃度為0.02、0.05、0.1、0.5、1、2、5、10μg/mL；分別取4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的標準品溶液，依次配製4-HNE標準溶液濃度為0.02、0.05、0.1、0.5、1、2、3、4μg/mL，4-HHE標準溶液濃度為0.03、0.05、0.1、0.5、1、2、3、4μg/mL，備用；(3)樣品衍生溶液的製備：取油樣，加入30v/v％-70v/v％乙醇的水溶液，得到濃度為0.1～1.0g/mL的樣品溶液，渦旋震蕩3-10min，3000-5000×g離心5-10min後收集下層清液，再對油層重複上述步驟各一次，合併兩次收集的下層清液；加入體積比為0.1～1.0配製的衍生劑，渦旋1-5min充分混勻，40-80℃避光水浴加熱1.5-3.5h，冰浴快速冷卻，加入二氯甲烷溶液溶解，渦旋震蕩1-5min，3000-5000×g離心5-10min，收集下層溶液，氮吹濃縮，最後加入甲醇或乙腈或初始流動相復溶，得到樣品衍生溶液；丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的標準溶液以及樣品同步衍生化，過0.45μm或0.22μm濾膜，上機進樣分析；(4)色譜條件色譜柱：C18色譜柱(4.6×250mm，內徑5μm)；檢測器：二極體陣列檢測器(PDA)；檢測波長：雙通道檢測，通道一：310nm，通道二：378nm；流動相：乙腈和水梯度洗脫(v/v)，洗脫條件為：0-18min，乙腈：水＝45:55；18-23min，乙腈：水＝(45→70)：(55→30)；23-30min，乙腈：水＝70:30；流速：0.6-1.2mL/min；柱溫：25-35℃；進樣量：10-40μL；(5)將樣品溶液的保留時間與標準溶液的保留時間進行對比，獲得峰面積代入標準曲線，實現對丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的定量。與現有技術相比，本發明具有以下優點和技術效果：(1)本發明檢測方法的檢出限和線性範圍均要比現有同時測定三種醛類物質的方法要好，具有更廣的使用範圍和更大的實際意義；(2)本發明檢測方法採用高效液相色譜二極體陣列檢測器，且通過多通道多波長實現對三種醛類物質的同時檢測，簡化操作過程，降低成本，符合定性、定量的要求，更適合高校研究人員、工業化應用；(3)本發明方法使用乙腈和水作為流動相進行梯度洗脫，實現了同時對三種待測組分的分離測定，綠色經濟，具有環境友好性；(4)本發明方法還可用於食用植物油熱加工及儲藏過程中三種醛類物質含量的檢測，對於後續研究三種醛類物質的生成機制以及影響因素，為植物油的健康食用、煎炸食品的安全生產、煎炸油的重複利用乃至油脂行業的健康發展提供理論依據；(5)本發明檢測方法的精密度和重複穩定性高。附圖說明圖1為丙二醛標準曲線圖；圖2為4-羥基壬烯醛標準曲線圖；圖3為4-羥基己烯醛標準曲線圖；圖4為4-羥基己烯醛標準溶液和4-羥基壬烯醛標準溶液的液相色譜圖；圖5為丙二醛標準溶液的液相色譜圖；圖6為實施例3中的亞麻油中4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的液相色譜圖；圖7為實施例3中的亞麻油中丙二醛的液相色譜圖。具體實施方式本發明將結合以下實施例作進一步詳述，但本發明不限於以下實施例。本發明實施例檢測方法的步驟及相關試劑、溶液的配製如下：(1)衍生劑的配製：配製0.05mol/L2,4-二硝基苯肼的酸性乙醇溶液，內含10-15v/v％的濃鹽酸；(2)標準溶液的配製：準確稱取0.315g1,1,3,3-四乙氧基丙烷，用50％乙醇的水溶液(v/v)定容至1000mL，精確移取上述溶液10mL進一步稀釋至100mL，即為10μg/mLMDA標準品溶液，依次配製MDA標準溶液濃度為0.02、0.05、0.1、0.5、1、2、5、10μg/mL；分別取4-HNE、4-HHE的標準品溶液(美國Cayman公司)，用30％-70％乙醇的水溶液(v/v)稀釋到10μg/mL，依次配製4-HNE標準溶液濃度為0.02、0.05、0.1、0.5、1、2、3、4μg/mL，4-HHE標準溶液濃度為0.03、0.05、0.1、0.5、1、2、3、4μg/mL，待用；(3)樣品衍生溶液的製備：取1.0-3.0g油樣，加入3-10mL30％-70％乙醇的水溶液(v/v)，渦旋震蕩3-10min，3000-5000×g離心5-10min後收集下層清液，再對油層重複上述步驟各一次，合併兩次收集的下層清液；加入300-1000μL配製的衍生劑，渦旋1-5min充分混勻，40-80℃避光水浴加熱1.5-3.5h，冰浴快速冷卻，加入3-10mL二氯甲烷溶液溶解，渦旋震蕩1-5min，3000-5000×g離心5-10min，收集下層溶液，氮吹濃縮，最後加入3-10mL的甲醇(或乙腈或初始流動相)復溶，得到樣品衍生溶液；丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的標準溶液以及樣品同步衍生化，過0.45或0.22μm濾膜，上機進樣分析；(4)色譜條件色譜柱：C18色譜柱(4.6×250mm，內徑5μm)；檢測器：二極體陣列檢測器(PDA)；檢測波長：雙通道檢測，通道一：310nm，通道二：378nm；流動相：乙腈和水梯度洗脫(v/v)，洗脫條件為：0-18min，乙腈：水＝45:55；18-23min，乙腈：水＝(45→70)：(55→30)；23-30min，乙腈：水＝70:30；流速：0.6-1.2mL/min；柱溫：25-35℃；進樣量：10-40μL；(5)將樣品溶液的保留時間與標準溶液的保留時間進行對比，獲得峰面積代入標準曲線，實現對丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的定量。得到丙二醛標準曲線如圖1所示，為：y＝0.5265x-0.0391，R2＝0.9987；4-羥基己烯醛標準曲線如圖2所示，為：y＝0.3269x+0.013，R2＝0.9976；4-羥基壬烯醛標準曲線如圖3所示，為：y＝0.0926x+0.0038，R2＝0.9986；4-羥基己烯醛標準溶液和4-羥基-2-壬烯醛標準溶液的液相色譜圖如圖4所示，丙二醛的液相色譜圖如圖5所示。(6)精密度、重複性和穩定性實驗：取丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛濃度分別為1μg/mL、2μg/mL和2μg/mL標準品溶液，分別連續進樣6次進行精密度實驗，分別平行進樣6次進行重複性實驗，分別在0h，2h，4h，6h，8h，10h，12h對三種醛類物質的標準品上機測試進行穩定性實驗。得到的方法學參數：丙二醛、4-羥基己烯醛、4-羥基壬烯醛的檢出限分別為0.012μg/g、0.020μg/g和0.014μg/g，線性範圍分別為0.02-10.0μg/g、0.02-4.00μg/g和0.03-4.00μg/g；精密度RSD％(n＝6)分別為2.54、2.27、1.76；重複性RSD％(n＝6)分別為2.01、2.43、1.76；穩定性RSD％(n＝6)分別為1.34、1.79、1.33。方法學評價列表如表1所示。由表1可知，丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的檢測限分別為0.012μg/g、0.020μg/g和0.014μg/g，線性範圍分別為0.02-10.0μg/g，0.02-4.00μg/g和0.03-4.00μg/g，精密度高(RSD％<2.6)、重複性好(RSD％<2.5)、穩定性高(RSD％<1.8)。表1方法學評價結果本發明檢測方法與現有文獻報導使用LC-MS/MS同時檢測方法的比較，結果如表2所示。表2與現有檢測方法的參數比較結果由表2可知，檢出限和線性範圍，均要比現有同時測定三種醛類物質的方法要好，說明本方法具有更廣的使用範圍和更大的實際意義。實施例1一種同時測定食用植物油中三種毒性醛類的雙波長檢測方法測定棕櫚油中MDA、4-HNE、4-HHE的含量：(1)樣品的製備：稱取1.0g的25℃避光貯藏20個月的棕櫚油於15mL離心管中，加入3mL70％乙醇的水溶液(v/v)提取液，渦旋震蕩3min，3000×g離心5min，取下層清液，重複上述步驟各一次，合併兩次收集到的清液，待用。(2)衍生化反應：收集的清液中加入300μL的2,4-二硝基苯肼溶液(0.05mol/L，內含10％的濃鹽酸(v/v)，渦旋1min充分混勻，40℃避光水浴加熱3.5h，冰浴快速冷卻，加入3mL二氯甲烷溶液溶解，渦旋震蕩1min，3000×g離心5min，收集下層溶液，氮吹濃縮，最後加入3mL的甲醇復溶，得到樣品衍生溶液；三種醛的標準溶液和樣品同步衍生化，過0.22μm濾膜於液相進樣瓶，上機分析。(3)高效液相色譜測定：色譜柱：反相C18柱(AgilentZOTBAXEclipseXDB-C18，250mm×4.6mm，5μm，)；流動相：乙腈和超純水為流動相A和流動相B，採用梯度洗脫模式，比例為：0-18min，乙腈：水＝45:55；18-23min，乙腈：水＝(45→70):(55→30)；23-30min，乙腈：水＝70:30；流速為1.2mL/min；檢測器為二極體陣列檢測器，檢測波長：雙通道檢測，通道一：310nm；通道二：378nm；柱溫為35℃；進樣量為40μL。根據圖1、圖2、圖3的標準曲線，計算檢測結果如表3所示：表3棕櫚油中MDA、4-HHE、4-HNE的含量加入0.8μg的標準品，丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的加標回收率分別為101.14％、97.73％和100.31％；加入1.0μg的標準品，丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的加標回收率分別為98.42％、101.21％和98.89％；加入1.2μg的標準品，丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的加標回收率分別為101.77％、101.15％和98.18％。實施例2一種同時測定食用植物油中三種毒性醛類的雙波長檢測方法測定玉米油中MDA、4-HNE、4-HHE的含量：(1)樣品的製備：稱取1.5g的60℃避光儲藏40天的玉米油於15mL離心管中，加入5mL60％乙醇的水溶液(v/v)提取液，渦旋震蕩5min，3500×g離心6min，取下層清液，重複上述步驟各一次，合併兩次收集到的清液，待用。(2)衍生化反應：收集的清液中加入500μL的2,4-二硝基苯肼溶液(0.05mol/L，內含12％的濃鹽酸(v/v)，渦旋2min充分混勻，50℃避光水浴加熱3.0h，冰浴快速冷卻，加入5mL二氯甲烷溶液溶解，渦旋震蕩2min，3500×g離心6min，收集下層溶液，氮吹濃縮，最後加入5mL的乙腈復溶，得到樣品衍生溶液；三種醛的標準溶液和樣品同步衍生化，過0.45μm濾膜於液相進樣瓶，上機分析。(3)高效液相色譜測定：色譜柱：反相C18柱(AgilentZOTBAXEclipseXDB-C18，250mm×4.6mm，5μm，)；流動相：乙腈和超純水為流動相A和流動相B，採用梯度洗脫模式，比例為：0-18min，乙腈：水＝45:55；18-23min，乙腈：水＝(45→70):(55→30)；23-30min，乙腈：水＝70:30；流速為0.6mL/min；檢測器為二極體陣列檢測器，檢測波長：雙通道檢測，通道一：310nm；通道二：378nm；柱溫為30℃；進樣量為30μL。根據圖1、圖2、圖3的標準曲線，計算檢測結果如表4所示：表4玉米油中MDA、4-HHE、4-HNE的含量加入0.8μg的標準品，丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的加標回收率分別為98.65％、100.57％和101.77％；加入1.0μg的標準品，丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的加標回收率分別為101.08％、98.49％和102.83％；加入1.2μg的標準品，丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的加標回收率分別為99.79％、98.18％和101.15％。實施例3一種同時測定食用植物油中三種毒性醛類的雙波長檢測方法測定亞麻油中MDA、4-HNE、4-HHE的含量：(1)樣品的製備：稱取2.0g的80℃避光儲藏10天的亞麻油於15mL離心管中，加入6mL50％乙醇的水溶液(v/v)提取液，渦旋震蕩6min，4000×g離心6min，取下層清液，重複上述步驟各一次，合併兩次收集到的清液，待用。(2)衍生化反應：收集的清液中加入600μL的2,4-二硝基苯肼溶液(0.05mol/L，內含12％的濃鹽酸(v/v)，渦旋3min充分混勻，60℃避光水浴加熱2.0h，冰浴快速冷卻，加入6mL二氯甲烷溶液溶解，渦旋震蕩3min，4000×g離心6min，收集下層溶液，氮吹濃縮，最後加入6mL的乙腈和水(45:55，v/v)混合液復溶，得到樣品衍生溶液；三種醛的標準溶液和樣品同步衍生化，過0.45μm濾膜於液相進樣瓶，上機分析。(3)高效液相色譜測定：色譜柱：反相C18柱(AgilentZOTBAXEclipseXDB-C18，250mm×4.6mm，5μm，)；流動相：乙腈和超純水為流動相A和流動相B，採用梯度洗脫模式，比例為：0-18min，乙腈：水＝45:55；18-23min，乙腈：水＝(45→70):(55→30)；23-30min，乙腈：水＝70:30；流速為1.0mL/min；檢測器為二極體陣列檢測器，檢測波長：雙通道檢測，通道一：310nm；通道二：378nm；柱溫為25℃；進樣量為20μL。根據圖1、圖2、圖3的標準曲線，計算檢測結果如表5所示：表5亞麻油中MDA、4-HHE、4-HNE的含量加入0.8μg的標準品，丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的加標回收率分別為99.13％、100.21％和97.77％；加入1.0μg的標準品，丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的加標回收率分別為99.93％、101.73％和101.25％；加入1.2μg的標準品，丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的加標回收率分別為98.13％、101.00％和101.15％。亞麻油樣品中，4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的液相色譜圖如圖6所示，丙二醛的液相色譜圖如圖7所示，由圖6和圖7可知，亞麻油中三種醛類物質的色譜圖出峰時間和標準圖譜時間相吻合，說明本發明方法能準確測定食物油中MDA、4-HHE和4-HNE的含量。實施例4一種同時測定食用植物油中三種毒性醛類的雙波長檢測方法測定茶籽油中MDA、4-HNE、4-HHE的含量：(1)樣品的製備：稱取2.5g的185℃加熱2h的茶籽油於15mL離心管中，加入8mL40％乙醇的水溶液(v/v)提取液，渦旋震蕩8min，4500×g離心8min，取下層清液，重複上述步驟各一次，合併兩次收集到的清液，待用。(2)衍生化反應：收集的清液中加入800μL的2,4-二硝基苯肼溶液(0.05mol/L，內含14％的濃鹽酸(v/v)，渦旋4min充分混勻，70℃避光水浴加熱2.0h，冰浴快速冷卻，加入8mL二氯甲烷溶液溶解，渦旋震蕩8min，4500×g離心8min，收集下層溶液，氮吹濃縮，最後加入8mL的乙腈復溶，得到樣品衍生溶液；三種醛的標準溶液和樣品同步衍生化，過0.22μm濾膜於液相進樣瓶，上機分析。(3)高效液相色譜測定：色譜柱：反相C18柱(AgilentZOTBAXEclipseXDB-C18，250mm×4.6mm，5μm，)；流動相：乙腈和超純水為流動相A和流動相B，採用梯度洗脫模式，比例為：0-18min，乙腈：水＝45:55；18-23min，乙腈：水＝(45→70):(55→30)；23-30min，乙腈：水＝70:30；流速為1.0mL/min；檢測器為二極體陣列檢測器，檢測波長：雙通道檢測，通道一：310nm；通道二：378nm；柱溫為30℃；進樣量為15μL。根據圖1、圖2、圖3的標準曲線，計算檢測結果如表6所示：表6茶籽油中MDA、4-HHE、4-HNE的含量加入0.8μg的標準品，丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的加標回收率分別為102.94％、100.42％和99.53％；加入1.0μg的標準品，丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的加標回收率分別為99.76％、100.69％和101.01％；加入1.2μg的標準品，丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的加標回收率分別為101.38％、100.85％和100.53％。實施例5一種同時測定食用植物油中三種毒性醛類的雙波長檢測方法測定菜籽油中MDA、4-HNE、4-HHE的含量：(1)樣品的製備：稱取3.0g的60℃避光儲藏50天的茶籽油於15mL離心管中，加入10mL30％乙醇的水溶液(v/v)提取液，渦旋震蕩10min，5000×g離心10min，取下層清液，重複上述步驟各一次，合併兩次收集到的清液，待用。(2)衍生化反應：收集的清液中加入1000μL的2,4-二硝基苯肼溶液(0.05mol/L，內含15％的濃鹽酸(v/v)，渦旋5min充分混勻，80℃避光水浴加熱1.5h，冰浴快速冷卻，加入10mL二氯甲烷溶液溶解，渦旋震蕩5min，5000×g離心10min，收集下層溶液，氮吹濃縮，最後加入10mL的甲醇復溶，得到樣品衍生溶液；三種醛的標準溶液和樣品同步衍生化，過0.22μm濾膜於液相進樣瓶，上機分析。(3)高效液相色譜測定：色譜柱：反相C18柱(AgilentZOTBAXEclipseXDB-C18，250mm×4.6mm，5μm，)；流動相：乙腈和超純水為流動相A和流動相B，採用梯度洗脫模式，比例為：0-18min，乙腈：水＝45:55；18-23min，乙腈：水＝(45→70):(55→30)；23-30min，乙腈：水＝70:30；流速為1.0mL/min；檢測器為二極體陣列檢測器，檢測波長：雙通道檢測，通道一：310nm；通道二：378nm；柱溫為30℃；進樣量為10μL。根據圖1、圖2、圖3的標準曲線，計算檢測結果如表7所示：表7菜籽油中MDA、4-HHE、4-HNE的含量加入0.8μg的標準品，丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的加標回收率分別為99.11％、100.30％和99.41％；加入1.0μg的標準品，丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的加標回收率分別為99.79％、98.76％和99.23％；加入1.2μg的標準品，丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛的加標回收率分別為102.35％、100.77％和99.59％。綜上，本發明實施例檢測方法的加標回收率評價如表8所示。表8加標回收率結果由表8可知，丙二醛、4-羥基己烯醛和4-羥基壬烯醛在低(0.8μg)、中(1.0μg)、高(1.2μg)三種添加水平下，回收率分別為98.13-102.94％、97.73-101.73％和97.66-102.83％，回收率的RSD％小於1.7。結合實施例，本發明可以用於探究新鮮食用植物油以及食用植物油在儲藏和加工中三種毒性醛類的分布規律上述對實施例的描述是為便於該
技術領域：
：的普通技術人員能理解和使用本發明。熟悉本領域技術的人員顯然可以容易地對這些實施例做出各種修改，並把在此說明的一般原理應用到其他實施例中而不必經過創造性的勞動，如使用高效液相色譜紫外檢測器對MDA、4-HNE、4-HHE任一種或者任兩種測定。因此，本發明不限於上述實施例，本領域技術人員根據本發明的揭示，不脫離本發明範疇所做出的改進和修改都應該在本發明的保護範圍之內。當前第1頁1&nbsp2&nbsp3&nbsp當前第1頁1&nbsp2&nbsp3&nbsp