一種延緩衰老、提高免疫力的藥物組合物及其製備方法
2023-12-05 09:07:26
專利名稱：一種延緩衰老、提高免疫力的藥物組合物及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種藥物組合物及其製備工藝，特別涉及一種延緩衰老、提高免疫力的藥物組合物及其製備工藝。
背景技術：
衰老是任何多細胞生物隨著時間的推移而產生的一種自發性的必然過程，一般是指隨著年齡的增長，而產生的一系列生理學和解剖學方面的變化，表現為皺紋、色斑(老年斑)、皮膚鬆弛、眼袋出現、膚色晦暗、脫髮白髮、失眠、疲勞、頭暈心慌、便秘、血脂血糖升高、關節炎、視力退化、性功能下降等等，由於衰老使人體代謝功能和免疫力下降，引發各種疾病的危險性大大增加，如感冒、中風、老年痴呆、心臟病、高血壓、內分泌失調、癌症等。
人體自身有一套免疫系統，當遇到病毒入侵時，就會自發產生抗體(抗病因子)來殺滅病毒，使人體有一定的抗病能力，這就是人體免疫力。每個人的免疫力是不同的，免疫力強的人不易生病，而免疫力弱的人一遇到病毒侵襲，就易誘發各種病症。免疫功能低下極易招致細菌、病毒、真菌等感染，因此免疫力低下最直接的表現就是容易生病。因經常患病，加重了機體的消耗，所以一般有體質虛弱、營養不良、精神萎靡、疲乏無力、食慾降低、睡眠障礙等表現，生病、打針吃藥便成了家常便飯。每次生病都要很長時問才能恢復，而且常常反覆發作。長此以往會導致身體和智力發育不良，還易誘發重大疾病。
人們為實現延緩衰老、延長壽命、提高免疫力的目的，採用了各種方法，除經常運動外，採用最多的方法就是服用各種具有延緩衰老、提高免疫力功能的食品及保健食品。隨著人們對生活質量的不斷提高，市場對具有延緩衰老、免疫調節功能保健食品的需求與日俱增，研製開發一種效果顯著、無任何毒副作用的具有延緩衰老、提高免疫力功能的保健食品已勢在必行。
發明內容
本發明目的在於公開一種藥物組合物及其製備工藝。
本發明目的是通過如下技術方案實現本發明藥物組合物的原料藥組成為羊胎盤凍乾粉1-10重量份，蝙蝠蛾擬青黴菌粉1重量份。
上述兩味原料藥優選重量配比如下羊胎盤凍乾粉2重量份，蝙蝠蛾擬青黴菌粉1重量份；羊胎盤凍乾粉5重量份，蝙蝠蛾擬青黴菌粉1重量份；或羊胎盤凍乾粉9重量份，蝙蝠蛾擬青黴菌粉1重量份。
取上述原料藥，加入常規輔料，按照常規工藝，製成臨床可接受的劑型，如顆粒劑、膠囊劑、滴丸劑、片劑、口服液體製劑等。
本發明的羊胎盤凍乾粉原料可直接從市場購得，或將羊胎盤經超低溫冷凍工藝製成。超低溫冷凍乾燥依照凍幹曲線操作，冷凍溫度低溫在零下20℃以下，高溫在50℃以下。
本發明藥物組合物具有延緩衰老、提高免疫力的作用。實驗結果表明本發明藥物組合物提高足蹠腫脹度、提高PFC數量、提高血清溶血素、提高碳廓清指數、提高血清SOD活力、提高穀胱甘肽過氧化物酶活力、降低心肌脂褐素含量或降低丙二醛含量；延長果蠅最高壽命，且本發明藥物組合物無毒副作用。
下述實驗例和實施例用於進一步說明但不限於本發明。
實驗例1本藥物組合物膠囊的免疫調節作用實驗實驗動物昆明2個齡雌性二級小鼠，體重18-22g，按體重隨機分為4組，組間體重經T檢驗無顯著差異(p＞0.05)。劑量選擇受試物是人體推薦劑量為每日1.98g/60kg.bw的定型產品(本發明實施例1製備)，小鼠的等效劑量相當於人體推薦劑量的10倍。分別以人體推薦5倍、10倍和30倍作為低(0.165g/kg.bw)、中(0.33g/kg.bw)、高(0.990g/kb.bw)劑量。採取灌胃法，每日灌胃一次，對照組灌同等體積的蒸餾水。各組小鼠連續給予受試物4周後，測定以下各項指標。
遲髮型變態反應(DTH)(足蹠增厚法)腹腔注射0.2mL2％(V/V)SRBC免疫每隻小鼠。免疫4d後，用螺旋測微器測量左後足蹠厚度，然後在測量部位皮下注射0.020mL20％(V/V)SRBC，24h後測量左後足蹠厚度。同一部位測量三次，取平均值。以攻擊前後足蹠厚度的差值來表示DTH的程度。
表1對正常小鼠遲髮型變態反應的影響(X±SD)
*與空白對照組比較有顯著性差異(p＜0.05)**與空白對照組比較有非常顯著性差異(p＜0.01)由上表可見，經口給予小鼠不同劑量的受試物4周後，與空白對照組比較，低、中、高劑量組足蹠腫脹度分別提高25％(p＜0.05)、27％(p＜0.01)、25％(p＜0.01)。
抗體生成細胞(PFC)檢測腹腔注射0.2mL20％(V/V)SRBC免疫每隻小鼠。5d後，取小鼠脾臟製成細胞濃度為5×106個/mL的脾細胞液。溶解瓊脂糖製成1％的溶液，於48.0℃水浴保溫，與等量2倍濃度的Hank’s液混合，分裝至小試管中。每管0.50mL，加入0.050mL10％SRBC和0.010mL脾細胞懸液，迅速混勻，傾倒在玻片上，於37.0℃恆溫箱中溫育1h，將補體加在玻片槽中，再溫育1.5h。計數空斑。
表2對正常小鼠PFC的影響(X±SD)單位log10空斑數/全脾
*與空白對照組比較有顯著性差異(p＜0.05)**與空白對照組比較有非常顯著性差異(p＜0.01)由上表可見，經口給予小鼠不同劑量的受試物4周後，與空白對照組比較，低、中、高劑量組的PFC數量分別提高8％(p＜0.01)、6％(p＜0.05)和7％(p＜0.01)。
血清溶血素的測定腹腔注射0.2mL20％(V/V)SRBC免疫每隻小鼠。5d後，摘眼球取血於離心管內，放置1h，2000r/min離心10min，收集血清。小鼠血清SA液稀釋400倍，依次加入稀釋的小鼠血清1.00mL、10％(V/V)的SRBC0.50mL、補體(用SA液1∶10稀釋)1.00mL。另設不加血清的對照管(SA液代替)。置37.0℃水浴20min後冰水浴終止反應。2000r/min。離心10min。取上清液1.00mL，都氏試劑3.00ml於試管內，同時取10％(V/V)的SRBC0.25mL加都試劑4.00mL作為半數溶血管。放置10min後，540nm波長處測定光密度值。試驗結果以半數溶血值(HC50)表示。
表3對正常小鼠血清溶血素的影響(X±SD)
*與空白對照組比較有顯著性差異(p＜0.05)由上表可見，經口給予小鼠不同劑量的受試物4周後，與空白對照組比較，低、高劑量組的HC50分別提高64％(p＜0.05)和61％(p＜0.05)。
小鼠碳廓清實驗對每隻小鼠尾靜脈注射稀釋5倍的印度墨汁，0.1mL/10g體重。待墨汁注入後立即記時。分別於注入墨汁後1、10min取血0.020mL加至2.00mL碳酸鈉溶液中，600nm波長處測定光密度值，以碳酸鈉溶液作對照。另取肝臟脾臟稱重。以吞噬指數來表示巨噬細胞吞噬功能。
表4對正常小鼠的碳廓清的影響(X±SD)
*與空白對照組比較有顯著性差異(p＜0.05)由上表可見，經口給予小鼠不同劑量的受試物4周後，與空白對照組比較，高劑量組的碳廓清指數提高7％(p＜0.05)。
實驗例2本藥物組合物膠囊的延緩衰老作用實驗實驗動物健康二級昆明種10月齡雌性小鼠，隨機分為4組，組間體重經t檢驗無顯著差異。美國野生型黑腹果蠅(Origen K)。劑量選擇受試物是人體推薦劑量為每日1.98g/60kg.bw的定型產品(本發明實施例2製備)。小鼠的等效劑量相當於人體推薦劑量的10倍。分別以人體推薦劑量的5倍、10倍和30倍作為低(0.165g/kg.bw)、中(0.330g/kg.bw)、高劑量(0.990g/kg.bw)。採取灌胃法，每日灌胃一次，對照組灌蒸餾水。各組小鼠連續給予受試物56天後，測定以下各項指標。
受試物對老齡小鼠心肌脂褐素的影響取出心肌，去除結締組織和脂肪後，稱重，在勻漿器中加入氯仿甲醇提取液(2∶1)勻漿，提取指褐質2-3次，將幾次提取液合併起來，定容至7.0mL。將提取液以3000轉分鐘離心10分鐘，取上清液用於測定螢光強度，激發波長360nm，放射波長450nm，以硫酸奎寧(1μg/mL，0.1mol/L硫酸)為標準對照，其螢光強度定為50單位(Is)。在該條件下測定樣品螢光強度(Ix)，氯仿甲醇溶液為空白對照。
表5受試物對老齡小鼠心肌脂褐素的影響(X±SD)
*與空白對照組比較有顯著性差異(p＜0.05)上表表明，經口給予老齡小鼠不同劑量受試物56天後，與空白對照組相比，中劑量組心肌脂褐素含量降低44％(p＜0.05)受試物對老齡小鼠血清丙二醛含量的影響表6血清丙二醛含量的測定
混勻後，95℃水浴(開蓋煮沸)40分鐘，取出後3500-4000r/min離心10min，蒸餾水調零，532nm處比色。
表7受試物對老齡小鼠血清丙二醛含量的影響(X±SD)
**與空白對照組比較有非常顯著差異(p＜0.01)***與空白對照組比較有極顯著性差異(p＜0.001)上表證明，經口給予老齡小鼠不同劑量受試物56天後，與空白對照組相比，低、中和高劑量組血清丙二醛含量分別降低37％(p＜0.01)、46％(p＜0.001)和42％(p＜0.001)。
受試物對老齡小鼠血清SOD活力的影響表8血清超氧化物歧化酶活力測定
每mL反應液中SOD抑制率達50％時所對應的SOD量為一個單位。
表9受試物對老齡小鼠血清SOD活力的影響(X±SD)
*與空白對照組比較有顯著差異(p＜0.05)經口給予老齡小鼠不同劑量受試物56天後，與空白對照組相比，中劑量組血清SOD活力提高10％(p＜0.05)。
受試物對老齡小鼠全血穀胱甘肽過氧化物酶活力的影響取鼠血10μl加入到1mL雙蒸水中，充分振搖，製成血樣稀釋液。
表10全血中穀胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活力測定
全血GSH-Px活力單位規定1mL全血在1min內，扣除非酶反應的1g[GSH]降低後，使1g[GSH]降低1為一個活力單位。
表11受試物對老齡小鼠全血穀胱甘肽過氧化物酶活力的影響(X±SD)
*與空白對照組比較有顯著差異(p＜0.05)**與空白對照組比較有非常顯著差異(p＜0.01)經口給予老齡小鼠不同劑量受試物56天後，與空白對照組相比，中、高劑量組小鼠全血穀胱甘肽過氧化物酶活力分別提高12％(p＜0.01)和9％(p＜0.05)。
實驗例3果蠅壽命實驗實驗材料上海鐵道大學醫學院提供的美國野生型黑腹果蠅(0rigen K)。劑量選擇設一個空白對照組和4個劑量組(本發明實施例6製備)，各劑量組飼料含受試物濃度分別為0％、0.02％、0.06％、0.18％、0.54％。檢測方法卵、幼蟲、蛹及成蟲均培養在25±1℃，相對溼度40-70(％)的生化培養箱中。將常用基礎飼料煮成粥後，分裝於無菌培養試管中，每支培養管用無菌海綿塞封口。成蟲基礎飼料第4天更換一次，將培養管平放在培養箱內飼養。收集6小時內孵出的成蟲進行分組。在此時間範圍內孵化的果蠅均未交配。用乙醚麻醉後稱重分組。選擇個體大小相近的果蠅。每管20隻，雌雄分養。每組雌雄果蠅各200隻。在成蟲期給受試物，受試物摻入到預先溶化的50℃基礎飼料中，並保持各組PH值一致，每天定時統計果蠅存活數和死亡數。直至全部死亡。每組最後死亡的20隻果蠅存活的天數的平均數為該組的最高壽命，實驗結果，計算平均壽命和最高壽命以及半數死亡時間。
表12受試物對果蠅半數死亡時間的影響
表13受試物對果蠅壽命的影響(X±SD)
*與空白對照組比較有顯著差異(p＜0.05)***與空白對照組比較有極顯著差異(p＜0.001)與空白對照組相比(受試物濃度0％)，受試物濃度0.02％的雌性果蠅最高壽命延長2％(p＜0.05)。受試物濃度0.06％的雌性果蠅半數死亡時間延長7天，平均壽命延長12％(p＜0.001)，最高壽命延長了2％(p＜0.001)；雄性果蠅半數死亡時間延長7天，平均壽命延長12％(p＜0.001)，最高壽命延長了2％(p＜0.05)。受試物濃度0.18％的雌性果蠅半數死亡時間延長8天，平均壽命延長15％(p＜0.001)，最高壽命延長4％(p＜0.001)；雄性果蠅半數死亡時間延長10天，平均壽命延長17％(p＜0.001)，最高壽命延長4％(p＜0.001)。受試物濃度0.54％的雌性果蠅半數死亡時間延長3天，平均壽命延長6％(p＜0.001)，最高壽命延長了3％(p＜0.001)；雄性果蠅半數死亡時間延長13天，平均壽命延長23％(p＜0.001)，最高壽命延長了3％(p＜0.001)。
實驗例4本藥物組合物製劑與單味原料藥免疫調節作用對比實驗動物昆明種小鼠由河北省實驗動物中心提供，合格證號冀動字04056號，試驗觀察期間，飼以該中心提供的固體飼料，自由飲水。劑量選擇受試物是人體推薦劑量為每日1.98g/60kg.bw的定型產品，小鼠的等效劑量相當於人體推薦劑量的10倍，以人體推薦5倍(0.165g/kg.bw)，其他對照組均採用此劑量。
對小鼠溶血素鏽生能力的影響取小鼠60隻，體重為30±3g，雌雄各半，隨機分為5組正常組、模型組、羊胎盤凍乾粉組、蝙蝠蛾擬青黴菌粉組、本藥物組(本發明實施例7製備)。正常組、模型組灌胃給與等體積的蒸餾水，其餘3組灌胃給藥量均為0.165g/kg，每天1次，連續11天。除正常組外，其餘4組小鼠按40mg/kg.d腹腔注射環磷醯胺，連續3天。第6天，各組小鼠均腹腔注射5％雞紅細胞懸液(0.2ml/只)。第12天，各組小鼠摘眼球取血，離心取血清，用生理鹽水將血清稀釋100倍，取稀釋血清1ml，與5％雞紅細胞懸液0.5ml，10％豚鼠血清0.5ml混合。在37℃恆溫箱中溫育30min後，置於0℃冰箱中止反應，離心。取上清液於Lambda12型分光光度計於605nm比色，測定吸光度，另設不加小鼠血清測定結果的空白對照品調零。進行t檢驗。
表14對小鼠溶血素水平的影響(n＝12，X±S)
注模型組與正常組比較△△△P＜0.001，△△P＜0.01，△P＜0.05各藥物組與模型組比較▲▲▲P＜0.001，▲▲P＜0.01，▲P＜0.05本藥物組與單味藥物組比較★★★P＜0.001，★★P＜0.01，★P＜0.05與正常組比較，模擬組的血清溶血素水平顯著降低，表示造模成功。受試藥物各組的血清溶血素水平明顯高於模擬組，說明各組受試藥物均有提高免疫力低下小鼠的鏽生溶血素能力，本藥物組較其他單味藥組效果顯著。
小鼠碳粒廓清試驗取小鼠60隻，體重為30±3g，雌雄各半，隨機分為5組正常組、模型組、羊胎盤凍乾粉組、蝙蝠蛾擬青黴菌粉組、本藥物組(本發明實施例1製備)。正常組、模型組灌胃給與等體積的蒸餾水，其餘3組灌胃給藥量均為0.165g/kg，每天1次，連續7天。除正常組外，其餘4組小鼠按40mg/kg.d腹腔注射環磷醯胺，連續3天。第7天，灌胃給藥0.5h後，各組小鼠尾靜脈注射印度墨水(1∶4稀釋，0.1mol/10g)，注射後2min及10min，於眼眶後靜脈叢分別採血20μl(用20μl自控式微量吸管吸取)，溶於2μl的0.1％Na2CO3溶液中，於604nm處比色測定吸光度，以不加血的0.1％Na2CO3溶液調零。取肝腎脾稱重，計算校正炭粒廓清指數α。結果以炭粒廓清指數(K)和校正炭粒廓清指數(α)為指標，進行t檢驗。
表15對小鼠炭粒廓清指數及校正指數的影響(X±SD)
注模型組與正常組比較△△△P＜0.001，△△P＜0.01，△P＜0.05各藥物組與模型組比較▲▲▲P＜0.001，▲▲P＜0.01，▲P＜0.05本藥物組與單味藥物組比較★★★P＜0.001，★★P＜0.01，★P＜0.05與正常組比較，模型組的炭粒廓清指數(K)及校正炭粒廓清指數(α)降低(P＜0.001)。受試藥物各組均能顯著升高炭粒廓清指數(K)及校正炭粒廓清指數(α)，說明均有提高免疫力功能，本藥物組較單味藥物組效果顯著。
實驗例5本藥物組合物製劑與單味原料果蠅壽命實驗對比實驗材料上海鐵道大學醫學院提供的美國野生型黑腹果蠅(Origen K)。劑量選擇隨機分為4組空白對照組、羊胎盤凍乾粉組、蝙蝠蛾擬青黴菌粉組、本藥物組(本發明實施例5製備)。飼料含受試物濃度均為0.06％。檢測方法卵、幼蟲、蛹及成蟲均培養在25±1℃，相對溼度40-70(％)的生化培養箱中。將常用基礎飼料煮成粥後，分裝於無菌培養試管中，每支培養管用無菌海綿塞封口。成蟲基礎飼料第4天更換一次，將培養管平放在培養箱內飼養。收集6小時內孵出的成蟲進行分組。在此時間範圍內孵化的果蠅均未交配。用乙醚麻醉後稱重分組。選擇個體大小相近的果蠅。每管20隻，雌雄分養。每組雌雄果蠅各200隻。在成蟲期給受試物，受試物摻入到預先溶化的50℃基礎飼料中，並保持各組PH值一致，每天定時統計果蠅存活數和死亡數。直至全部死亡。每組最後死亡的20隻果蠅存活的天數的平均數為該組的最高壽命，實驗結果，計算平均壽命和最高壽命。進行t檢驗。
表16受試物對果蠅壽命的影響(X±SD)
注空白組與藥物組比較△△△P＜0.001，△△P＜0.01，△P＜0.05本藥物組與單味藥物組比較★★★P＜0.001，★★P＜0.01，★P＜0.05與空白對照組相比，受試藥物各組均明顯延長果蠅平均壽命、最高壽命。本藥物組較其他單味藥組相比顯著性差異，表明本藥物組延緩衰老作用強於單味藥物組。
具體實施例方式
實施例1片劑的製備羊胎盤凍乾粉2kg，蝙蝠蛾擬青黴菌粉1kg取上述原料藥，加入常規輔料，按照常規工藝，製成片劑。
實施例2膠囊的製備羊胎盤凍乾粉5kg，蝙蝠蛾擬青黴菌粉1kg取上述原料藥，加入常規輔料，按照常規工藝，製成膠囊。
實施例3顆粒劑的製備羊胎盤凍乾粉9kg，蝙蝠蛾擬青黴菌粉1kg取上述原料藥，加入常規輔料，按照常規工藝，製成顆粒劑。
實施例4口服液的製備羊胎盤凍乾粉5kg，蝙蝠蛾擬青黴菌粉1kg取上述原料藥，加入常規輔料，按照常規工藝，製成口服液。
實施例5片劑的製備羊胎盤凍乾粉1kg，蝙蝠蛾擬青黴菌粉1kg取上述原料藥，加入常規輔料，按照常規工藝，製成片劑。
實施例6滴丸的製備羊胎盤凍乾粉3kg，蝙蝠蛾擬青黴菌粉1kg取上述原料藥，加入常規輔料，按照常規工藝，製成滴丸。
實施例7注射劑的製備羊胎盤凍乾粉7kg，蝙蝠蛾擬青黴菌粉1kg取上述原料藥，加入常規輔料，按照常規工藝，製成注射劑。
實施例8口服液的製備羊胎盤凍乾粉9kg，蝙蝠蛾擬青黴菌粉1kg取上述原料藥，加入常規輔料，按照常規工藝，製成口服液。
權利要求
1.一種延緩衰老，提高免疫的藥物組合物，其特徵在於該藥物組合物由如下原料藥組成羊胎盤凍乾粉1-10重量份，蝙蝠蛾擬青黴菌粉1重量份。
2.如權利要求1所述的藥物組合物，其特徵在於該藥物組合物由由如下原料藥組成羊胎盤凍乾粉2重量份，蝙蝠蛾擬青黴菌粉1重量份。
3.如權利要求1所述的藥物組合物，其特徵在於該藥物組合物由由如下原料藥組成羊胎盤凍乾粉5重量份，蝙蝠蛾擬青黴菌粉1重量份。
4.如權利要求1所述的藥物組合物，其特徵在於該藥物組合物由由如下原料藥組成羊胎盤凍乾粉9重量份，蝙蝠蛾擬青黴菌粉1重量份。
5.如權利要求1、2、3或4所述的藥物組合物，其特徵在於該藥物組合物製成片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液體製劑、滴丸或注射劑。
6.如權利要求1、2、3或4所述的藥物組合物在製備具有延緩衰老、提高免疫力作用的藥物中的應用。
7.如權利要求5所述的藥物組合物在製備具有延緩衰老、提高免疫力作用的藥物中的應用。
8.如權利要求6所述的應用，其中延緩衰老、提高免疫力是指藥物組合物提高足蹠腫脹度、提高PFC數量、提高血清溶血素、提高碳廓清指數、提高血清SOD活力、提高穀胱甘肽過氧化物酶活力、降低心肌脂褐素含量或降低丙二醛含量。
9.如權利要求7所述的應用，其中延緩衰老、提高免疫力是指藥物組合物提高足蹠腫脹度、提高PFC數量、提高血清溶血素、提高碳廓清指數、提高血清SOD活力、提高穀胱甘肽過氧化物酶活力、降低心肌脂褐素含量或降低丙二醛含量。
全文摘要
本發明公開一種由羊胎盤凍乾粉和蝙蝠蛾擬青黴菌粉製成的藥物組合物，該藥物組合物具有延緩衰老、提高免疫力的作用。實驗結果表明該藥物組合物提高足蹠腫脹度、提高PFC數量、提高血清溶血素、提高碳廓清指數、提高血清SOD活力、提高穀胱甘肽過氧化物酶活力或降低心肌脂褐素含量或降低丙二醛含量。
文檔編號A61K9/20GK1887297SQ20061010972
公開日2007年1月3日 申請日期2006年8月7日 優先權日2006年8月7日
發明者陳致慜, 李春雷 申請人:邯鄲製藥有限公司