用作抗癌藥的來自駱駝尿液的生物活性餾分和細分餾分的分離與製劑的製作方法

2023-04-24 22:34:36 4

專利名稱：用作抗癌藥的來自駱駝尿液的生物活性餾分和細分餾分的分離與製劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及駱駝尿液在醫療目的中的絕對新用途，也涉及其製備過程，該過程包 括將其凍幹成稱為PM701的藥物，或將其分餾成編號為PMF和ΡΜΠ(的活性餾分。更具體說， 本發明涉及從成年單峰阿拉伯駱駝(單峰駱駝(Camelus dromedarius))的凍幹PM701分 離生物活性餾分PMF和最有效的細分餾分PMFK，以及這些生物活性分餾作為選擇性抗癌藥 的絕對新用途。分餾包括降低全部凍幹尿液的劑量並提高其功效。本發明還涉及製備新型 藥物組合物(膠囊、糖漿劑、軟膏劑、凍膠等)，該組合物包含有效量的生物活性餾分PMF或 生物活性細分餾分，每個膠囊或一茶匙的量為435毫克，每天分別7個膠囊或5茶匙，靶向 人體癌組織實現抗增殖和凋亡活性，而不損傷其他正常組織。2.相關領域的描述癌症是被賦予增殖能力的細胞中基因改變蓄積導致的不受控細胞增殖。在臨床上 保持沉默的不同潛伏期後，惡性細胞發展成強力侵入性和轉移性階段，腫瘤形成並在體內 廣泛傳播。雖然在治療上取得了重要進展，西方國家中28%的死亡是癌症導致的，而在其他 國家甚至超過這一比率。癌症治療主要依賴外科手術、化療、放療以及最近的免疫治療。然 而，對於最頻發類型的癌症(肺癌、乳腺癌、結腸_直腸癌和白血病)，尚未實現完全消退和 治癒。因此，非常需要開發治療癌症患者的新方法，特別是那些疾病已進展到轉移性階段且 標準化療方法難以治癒的患者來說臨床上尤其需要。世界衛生組織公布，癌症是全世界死亡的最主要原因。2005年全球共5800萬例 死亡中，癌症佔760萬或13%，2005年在沙烏地阿拉伯約12，000人死於癌症，如圖所示，其中 8，000人不到70歲。在先知穆罕默德醫學(Prophet Mohamed Medicine)(禱告語願寧靜與安詳伴他 左右Mpeace be upon him))中，提及飲用駱駝尿液來改善在體內主要與腫瘤形成有關的 一些症狀。因此，駱駝尿液已在伊斯蘭國家和阿拉伯世界使用，並以不同規格的瓶子銷售和 分銷。但是，這從未得到科學驗證。申請人認為值得對此進行科學研究，通過體外和體內分 析研究確定其價值。申請人對此好奇，並提出一系列問題駱駝尿液可能具有什麼主要的價 值？駱駝尿液組分本身或其一部分是否對腫瘤形成具有任何活性？新鮮尿液對人體癌症 組織是否具有任何作用？是否能夠將尿液配製成便於人體使用的形式？尿液製劑是提高 其活性還是降低其活性？駱駝尿液是否包含微生物？是否能夠作為藥物安全使用還是對 人體各個器官具有毒性作用？此外，是否能夠分餾凍幹的駱駝尿液以分離生物活性餾分？駱駝尿液對細胞的哪 一部分起作用？什麼是其功效的生物化學、生物物理和生物學證據？駱駝尿液被視作有效的動物來源的物質/分泌物，能夠改善在體內主要與腫瘤形 成有關的一些症狀但確實需要通過科學實驗進行證明。因此，申請人認為值得對此進行科 學研究並通過體外和體內分析確定其價值。申請人首先檢測其是否含有抗癌劑，因為這樣的特性將使其成為非常有用的天然物質。在相關領域，美國專利5616593和5972382已揭 示，使用「胡椒鹼」作為生物利用度促進劑。並且，如後來的美國專利6896907中所述，使用 牛尿液餾出物或乾燥餾分來提高抗生素的活性和生物利用度。發明概述本文解決了上述問題中的一些。為了回答第一組問題，申請人將在一天的任意時 間從吉達(Jeddah)、麥加(Makah)、麥地那(Madinah)和利雅德(Riyadh)地區(沙特阿拉 伯)內各個地方的天然牧場收集的駱駝尿液(PM701)裝入不同規格的瓶子中。尿液在無菌 條件下在CLED培養基和血瓊脂上測試，未發現任何微生物生長。使用人體癌組織和正常組 織的組織培養物研究駱駝尿液PM701對癌細胞和正常細胞特性的作用。PM701似乎能靶向 癌細胞，對其產生抗增殖、凋亡功能。意外的是，相同的PM701對正常健康細胞具有滋養作用；提示PM701具有針對癌細 胞的選擇性殺傷作用和針對正常分裂細胞的修補作用，這些結果導致了本發明。本發明的 新穎性在於，通過精密實驗揭示，只有在精確的納克到微克水平的濃度範圍內可實現PM701 的作用及其有效性。這應該是檢測PM701靶向癌細胞的有價值潛力的原因。利用新鮮PM701 仍然不可接受並且人體使用不便，申請人也進一步凍幹液體PM701以得到0. 2g/ml的粉末。 我們在細胞培養物和動物模型中重新檢測凍幹PM701對正常細胞和各種癌細胞的作用，表 明相同的抗癌功效並且是通過凋亡介導的，如MTT試驗和電鏡檢查所確定。申請人:考慮採用PM701作用癌症治療的替代藥物，因為它具有針對癌細胞的靶向 作用並且對正常組織沒有副作用，但是凍幹PM701的日劑量對身體是一種負擔(每天46個 膠囊)，最終導致利用以下方式之一，即可能顯著降低抗癌劑PM701的日劑量並同時提高劑 量活性效率，還具有高度商業價值。因此，對凍幹的PM701採用生物導向的分餾方法，導致 生物活性餾分的分離和鑑別，這些活性餾分是全尿產生抗癌功能的原因。在本發明的內容 中，以下術語的定義如下。術語「抗癌治療」表示原發性腫瘤的生長抑制/根除、腫瘤生長的穩定化、轉移形 成的抑制、或腫瘤形成的預防。而且，抗癌活性也覆蓋本文所述物質與其他已知或研究的抗 癌劑之間的任意組合，以提高藥物的治療效果。本發明的主要目的是提供除放療或化療外的癌症治療的最佳替代藥物。主流方法是用除化療和放療外的新方法治療癌，但對正常組織具有非常嚴重的副 作用。本發明的另一個目的是提供PM701作為選擇性抗癌劑的新用途。本發明的另一個目的是通過其生物活性餾分提高PM701的活性的方法。本發明的另一個目的是提供從PM701或駱駝尿分離活性餾分的方法。本發明的另一個目的是提供有效量的凍幹PM701的生物活性餾分作為新型藥物 組合物(膠囊、糖漿劑、軟膏劑和凍膠等)。本發明的重要目的是在癌症治療期間防止正常組織的損傷，從而獲得以可用物質 及低成本治療癌症患者的方案。本發明涉及已知大量可用的駱駝尿液作為抗癌劑的新用 途，提供可用於癌症治療的生物活性餾分。根據本發明的一方面，提供了新的抗癌藥物組合 物，其包含PM701的可接受的有效抗癌量的生物活性餾分。本發明的生物活性餾分靶向癌 組織而對正常組織沒有任何副作用。
附圖簡要說明

圖1是沙烏地阿拉伯死亡原因的分布圖。圖2顯示了有機可溶性餾分PMF(G)的色譜細分分餾，分離得到7種細分餾分，稱 為 G1-G7。圖3A示出與未處理癌細胞相比，在不同孵育時間採用人肺癌細胞系A549，凍幹 PM701的體外細胞毒作用的曲線。圖3B示出與未處理正常細胞相比，在不同孵育時間採用vero細胞系，凍幹PM701 的體外細胞毒作用的曲線。圖3C示出PM701 (a)中，凍幹PM701對人肺癌細胞系A549的細胞形態的體外細胞 毒作用。注意與在MEM培養液(b)中培養的對照細胞相比的細胞損傷(40X)。圖4A示出與未處理癌細胞相比，在不同孵育時間採用肺癌細胞系A549，PMF餾分 的體外細胞毒作用的曲線。圖4B示出與未處理正常細胞相比，在不同孵育時間採用正常人包皮細胞系HFS， PMF餾分的體外非細胞毒作用的曲線。圖4C示出PMF餾分對人肺癌細胞系A549的細胞形態的體外細胞毒作用；其中a 是處理細胞；b是未處理細胞(40X)。圖5A示出與未處理癌細胞相比，在不同孵育時間採用人肺癌細胞系A549，PMFK細 分餾分的體外細胞毒作用的曲線。圖5B示出與未處理正常細胞相比，在不同孵育時間採用正常人包皮細胞系HFS， ΡΜΠ(細分餾分的體外非細胞毒作用的曲線。圖5C示出ΡΜΠ(細分餾分對人肺癌細胞系A549的細胞形態的體外細胞毒作用；其 中a是處理細胞；b是未處理細胞(20X)。圖6示出在用PM701處理的癌細胞中表徵凋亡的超微結構形態學標誌性特徵，表 現為染色質凝聚和膜起泡。圖7A示出採用小鼠白血病細胞L1210，-2、_3和-4濃度的PM701的體外細胞毒作用。圖7B示出PM701對小鼠白血病細胞L1210的細胞形態的影響；其中a是處理細 胞，b是未處理細胞。注意正常細胞大小(箭頭)(40X)。圖8A示出MTT試驗結果，兩種不同濃度的PM701 :_2或高以及_3或低對四種不同 的細胞密度1、3、6和IOX IO3細胞/孔的影響。圖8B示出MTT試驗結果，PM701對細胞密度為3 X IO3細胞/孔的兩種類型的癌細 胞A549和L1210的影響。圖9示意性地示出PM701的分餾和細分分餾過程。發明詳述如圖2-9所示，本發明解決了從駱駝尿液尋找和獲得大量、易得、廉價的天然物質 (PM701)作為抗癌劑的問題，它們對癌細胞具有較高的選擇性效力。此外，分離PM701的生 物活性餾分，由於其針對癌細胞的高度選擇性和高度細胞毒性質而編號為PMF，其產生完整 的PM701作用。而且，PMF經細分分餾而純化了七種細分餾分，稱為PMFK的第七種對癌細 胞的細胞毒性質與PMF的細胞毒性質類似。
PMF和PMFK在體外對人肺癌細胞系(A549)、小鼠白血病細胞系(L1210)、人結腸 癌細胞(HCT116)、人膠質瘤細胞(U251)，人乳腺癌細胞(MCF7)和人肝癌癌細胞0fepG2)具 有細胞毒和殺傷活性，但對正常細胞如vero細胞和人包皮細胞HFS無影響。更重要的是採 用MTT試驗，通過表徵凋亡的形態學標誌和生物化學特徵顯示對癌細胞分裂活性有顯著抑 製作用，，如細胞活力損失、染色質凝聚和代謝活性降低所示。在另一個實施方式中，體內使用PM701治療接種癌細胞的動物模型；體內試驗的 結果和組織培養水平的體外作用一樣令人滿意。在本發明的一個實施方式中，提供了一種藥物組合物，其包含有效量的PMF或 PMFK作為生物活性抗癌化合物和藥學上可接受的選自抗癌化合物的添加劑。在另一個實施方式中，直接使用PMF和ΡΜΠ(或與其他抗癌分子聯用作為生物利用 性抗癌療法。在又一實施方式中，PMF和PMFK誘導癌細胞凋亡。在又一實施方式中，PM701分餾有助於分離生物活性分子，通過降低其增殖而更好 地作用於靶癌細胞。在又一實施方式中，癌細胞可以是肺癌、白血病或任何癌細胞。在又一實施方式中，PMF體外用量為80-800 μ g/ml, PMFK用量為0. 2-2 μ g/ml。在另一個實施方式中，生物活性餾分(PMF和PMFK)提高抗癌劑(PM701)的抗增殖 和凋亡活性2. 8倍。我們進行篩選所遵循的方法學包括如下所述的特別設計的體外和體內生物試 驗。本發明中使用的細胞系從法赫德國王醫學研究中心(King FahdMedical Research Center, KFMRC))的組織培養機構的細胞銀行獲得。粉末劑型的開發為了提高PM701的效用和使用方便性，將液體PM701凍幹獲得固體劑型。申請人 還對固體劑型進行分餾以獲得生物活性餾分，該餾分沒有駱駝尿液的典型味道，人體更容 易接受。為此，按照以下過程對凍幹PM701進行分餾步驟1 在不鏽鋼容器中收集直接來自駱駝的PM701，維持在衛生環境中。步驟2 將90克液體PM701加入到微晶纖維素(10克)中，得到100克混合物，在 Pyrex設備中_80°C冷凍20-24小時。步驟3 將100克混合物在凍幹機中室溫下凍幹5天，得到20克固體PM701。步驟4 混合物留在氯化鈣乾燥器中，室溫，真空壓力下保持1天。步驟5:另一種方法採用噴霧乾燥機。該機器使液體材料形成微粉。步驟6 將粉末PM701包裝到無菌玻璃容器中，置於冰箱備用。凍幹PM701的分餾活性成分的分離進行以下步驟i.分餾的溶劑提取方法步驟1 將5毫克凍幹PM701樣品用甲醇超聲處理3次，每次30毫升，得到約750 克甲醇餾分，稱為(G)。ii.細分分餾的分子篩方法
步驟1 使用具有不同篩分能力的不同類型凝膠柱對PMF進行細分分餾(例如， Sephadex LH-20，Sephadex-25，-50,…)。步驟2 將1.5毫克甲醇餾分(G)的樣品加載到矽膠柱色譜上，用以下溶劑體系 洗脫，每次250毫升氯仿，10%甲醇的氯仿溶液，20%甲醇的氯仿溶液，30%甲醇的氯仿溶 液，40%甲醇的氯仿溶液，60%甲醇的氯仿溶液，然後是甲醇。步驟3 純化七種細分餾分，通過高效液相色譜分離各個細分餾分。步驟4:對所有從柱子流出的細分餾分進行測試，在組織培養物水平具有類似於 PM701的活性。在源自肺癌、乳腺癌、結腸癌、腦癌、肝癌和白血病的一系列人癌細胞系中，發現有 機溶劑可溶性餾分和細分餾分具有強效抗增殖活性。在組織培養物實驗中，餾分和細分餾 分顯示體外抗增殖和抗凋亡活性。體外劑量測定試驗a.通過體外組織培養實驗評估和測定PM701對抗各種癌細胞、人肺癌細胞 (A549)、小鼠白血病細胞(L1012)、人結腸癌細胞(HCT116)、人膠質瘤細胞(U251)、人乳腺 癌細胞(MCF7)和人肝癌細胞0fepG2)的最佳抑制濃度。b.PM701的最佳抑制濃度顯示對癌細胞的細胞毒作用，而對正常細胞沒有任何細 胞毒作用，表明PM701可選擇性作用於癌細胞同時滋養正常細胞。將1毫升PM701或PMF或PMFK溶解在10毫升標準介質中，稱為(高)。將1毫升PM701或PMF或PMFK溶解在100毫升標準介質中，稱為_2將1毫升PM701或PMF或PMFK溶解在1，000毫升標準介質中，稱為_3 (中)。將1毫升PM701或PMF或PMFK溶解在10，000毫升標準介質中，稱為_4。將1毫升PM701或PMF或PMFK溶解在100，000毫升標準介質中，稱為_5 (低)。體外實驗表明採用中濃度(_2和-3)得到最佳效果，因此我們採用這些中等濃度 確定體外和體內劑量。體外抗增殖活性試驗(細胞培養)細胞系與細胞培養1.將肺癌細胞(A549)、人結腸癌細胞(HCT116)、人膠質瘤細胞(U251)、人乳腺癌 細胞(MCF7)和人肝癌細胞0fepG2)等從法赫德國王醫學研究中心(King Fahd Medical Research Center, KFMRC))購得的細胞系以約0. 5 X IO5細胞的密度接種到含MEM培養液的 24孔板的各孔中。在補充有10%熱滅活胎牛血清的RPMI (1640)中以相同方式製備L1210 細胞。2. 24小時用新鮮培養液對各孔進行換液。3.換液後在不同的孔中加入所需濃度的試驗組分。4. 0、24、48和72小時後記錄觀察結果並進行細胞計數，該過程包括以下步驟a.除去各孔中的培養液。b.用1毫升PBS (磷酸鹽緩衝鹽水)衝洗各孔。c.在各個孔中加入500微升新鮮製備的胰蛋白酶(0. 的PBS溶液)溶液。d. 30秒後吸去胰蛋白酶溶液，輕扣培養板直到細胞從板表面脫落。e.用滴管加入1毫升新鮮的生長培養液，攪動後獲得細胞懸液。
f.製備細胞懸液(1 1) 20毫升細胞與20毫升(0. 4% )臺盼藍，將10微升細 胞懸液滴加到血球計上並在計數區域覆蓋上蓋玻片。g.計數5個大方塊中的活細胞數量，取5個顯微鏡視野的數值以確定平均值。h.然後計算原樣品中的細胞計數(每毫升的滴度)，以平均計數X IO4表示。極限必需培養基(MEM)的組成MEM 粉(ICN) = 9. 95g，NaHCO3 (粉末)=2. 2g，谷胺醯胺(粉末)=0. 3g L，非必 需胺基酸(100X) = 10ml,Hepes (100X)溶液=10ml，抗生素混合物(青黴素+鏈黴素)= 10ml，去離子蒸餾水=1升。室溫下攪拌1小時，PH (6. 8-7. 4)。經0. 22 μ m濾器無菌過濾並在+4°C儲存。細胞毒試驗採用MTT試驗測定PM701對兩類癌細胞A549和L1210的細胞毒性或抗癌作用。該 試驗檢測細胞活力，以對照未處理細胞的百分比表示。進行MTT試驗以評價PM701對生長的影響。MTT試驗是基於能檢測細胞活力的四 唑鹽MTT的比色試驗。活細胞中的脫氫酶切斷四唑環從而使溶解的MTT轉化為可溶性紫色 甲臘，而死細胞不能。 將MTT以5mg/ml的濃度溶解在磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中，經0. 22 μ m濾器過濾以 滅菌並除去少量不溶性殘留物，然後儲存在2-8°C備用。在所檢測的各培養物中加入MTT的 儲備液，相當於原培養液體積的十分之一。採用異丙醇，分光光度法測定吸光度，而吸光度 與轉化染料的濃度呈函數關係。將指數級生長的細胞(3X103細胞/100μ 1)接種到96孔培養板中，培養24小時。 然後連續用各種餾分和細分餾分處理細胞。在選定的時間，將10微升MTT儲備液加入所有 孔中進行分析。經過一段時間的孵育(4小時)後，儘可能完全吸出各孔中的培養液而不破 壞甲臘結晶。然後，向各孔中加入100微升異丙醇溶解所得沉澱物。然後用培養板讀數儀 (微板讀數儀，型號450 ；Bio-Rad)在570nm處測定染料濃度。所得光密度與細胞活力直接 相關。MTT試驗基於只有在活細胞中生理活性線粒體能代謝MTT來區別活細胞與死細 胞。計算IC50，即與僅用溶劑處理的細胞相比，導致吸光度50%抑制的藥物濃度。結果發現在A549、L1210和其他癌症細胞系中，可溶於甲醇的餾分(PMF)而非水溶性餾 分具有強效抗增殖活性。這些有機可溶性提取物經進一步色譜細分分餾，分離得到7種餾 分，稱為G1-G7，如圖2所示。圖2示出了有機可溶性餾分PMF經色譜細分分餾而分離得到 稱為G1-G7的七種細分餾分。溶劑體系CHCl3-MeOH-水65 35 6。噴射試劑P-茴香 醛反應試劑，在110°C加熱5分鐘。PM 701，PMF和PMFK對癌細胞具有強效細胞毒作用，而對正常細胞沒有細胞毒作用。圖3A示出與未處理癌細胞相比，在不同孵育時間採用人肺癌細胞系A549，凍幹 PM701的體外細胞毒作用的曲線。圖3B示出與未處理正常細胞相比，在不同孵育時間採用vero細胞系，凍幹PM701的體外細胞毒作用的曲線。圖3C示出凍幹PM701對人肺癌細胞系A549的細胞形態的影響。對於PM701 (a)， 孵育24小時後，固定並用考馬斯藍染色，使癌細胞A549成像(40X)。注意與在MEM培養液 (b)中培養的對照細胞相比的細胞損傷。圖4A示出與未處理癌細胞相比，在不同孵育時間採用人肺癌細胞系A549，PMF餾 分的體外細胞毒作用的曲線。圖4B示出與未處理正常細胞相比，在不同孵育時間採用人包皮細胞系HFS，PMF餾 分的體外非細胞毒作用的曲線。圖4C示出PMF餾分對人肺癌細胞系A549的細胞形態的影響；其中a是處理細胞； b是未處理細胞(40X)。圖5A示出與未處理癌細胞相比，在不同孵育時間採用人肺癌細胞系A549，PMFK細 分餾分的體外細胞毒作用的曲線。圖5B示出與未處理正常細胞相比，在不同孵育時間採用人包皮細胞系HFS，PMFK 細分餾分的體外非細胞毒作用的曲線。圖5C示出ΡΜΠ(細分餾分對人肺癌細胞系A549的細胞形態的影響；其中a是處理 細胞；b是未處理細胞(20X)。用凍幹PM701處理細胞的形態學改變的特徵是凋亡，表現為細胞活力損失，膜起 泡和染色質凝聚，如圖6所示。圖6示出用PM701處理的細胞中，表徵凋亡的超結構形態學標誌性特徵，其表現為 染色質凝聚和膜起泡。圖7A示出採用小鼠白血病細胞L1210，PM701的_2和_3濃度的體外細胞毒作用。圖7B示出PM701對小鼠白血病細胞L1210的細胞形態的影響；其中a是處理細 胞，b是未處理細胞。注意正常細胞大小(箭頭)(40X)。根據MTT試驗，PM 701能夠降低癌細胞的代謝活性，如圖8A和8B所示。圖8A示出MTT試驗，其顯示兩種不同濃度的PM701 :_2或高以及_3或低對四種不 同的細胞密度1、3、6和IOX IO3細胞/孔的影響。圖8B示出MTT試驗，其顯示PM701對細胞密度為3 X IO3細胞/孔的兩類癌細胞 的影響。發現甲醇可溶性餾分PMF對癌細胞系具有優良的抗癌活性。也觀察到劑量關係， 如圖4A所示。可選實施方式可從駱駝尿液獲取具有抗癌活性的藥物組合物。雖然結合具體的實施方式描述了本發明，但應理解一般來說，根據本發明的原則， 能進行進一步的改進並且本申請覆蓋本發明的任何變化、應用或改良，包括這些內容而不 背離本發明的範圍，如同本發明所屬領域的技術人員已知或常規實踐能力範圍內，可應用 於本文前面所述的必要特徵，並且遵循所附權利要求書的範圍。更感興趣的是在動物模型中的體內試驗，表明處理動物中PM701能夠抑制癌症進 程至少3倍，表示其具有有益的抗有絲分裂作用。該方向的進一步專利處於研究當中。
權利要求
1.一種編號為PM701的駱駝尿作為抗癌劑的新用途。
2.一種藥物組合物，其包含至少一種抗癌劑，以及凍幹的駱駝尿或從凍幹的駱駝尿 獲取的乾燥餾分(PMF和PMFK)。
3.如權利要求2所述的組合物，其特徵在於，所述駱駝尿是成年單峰阿拉伯駱駝的尿液。
4.如權利要求2所述的組合物，其特徵在於，通過凍幹PM701獲得粉末形式的所述組合 物，其中每100毫升新鮮液態PM701得到20克PM701。
5.如權利要求4所述的組合物，其特徵在於，具有以下物理特性微黃色，固體結晶形 式，強烈的(刺鼻的)氣味，PH為8. 3，不溶於水，比重1.045。
6.如權利要求4所述的組合物，其特徵在於，所述組合物具有靶向選擇性抗癌作用， 在體外對代表兩種不同類型癌症的各種癌組織(人肺癌細胞(A549)和小鼠白血病細胞 (L1210))具有抗增殖和凋亡活性，而對人包皮細胞和vero細胞的人正常組織具有滋養作 用。
7.如權利要求4所述的組合物，其特徵在於，該組合物經一系列試驗進行分餾從而通 過生物導向的分餾分離得到最有效的生物活性餾分(PMF)。
8.如權利要求7所述的組合物，其特徵在於，每克凍幹PM701經分餾得到150毫克餾分。
9.如權利要求7所述的組合物，其特徵在於，從凍幹PM701分離的所述餾分在基本上由 氯仿和甲醇組成的各250毫升溶劑體系中進一步細分分餾，得到七種細分餾分，最有效的 細分餾分被稱為ΡΜΠ(。
10.如權利要求9所述的組合物，其特徵在於，每克PMF經細分分餾得到108.7毫克細 分餾分。
11.如權利要求10所述的組合物，每克凍幹ΡΜ701得到150毫克餾分，每克所述組合物 包含108. 7毫克細分餾分。
12.如權利要求7所述的組合物，其特徵在於，影響癌細胞的細胞活力和增殖的濃度範 圍是80微克到800微克。
13.如權利要求9所述的組合物，其特徵在於，影響癌細胞的細胞活力和增殖的濃度範 圍是0.2微克到20微克。
14.如權利要求7所述的組合物，其特徵在於，組合物的有效量為435毫克/膠囊，每天 7個膠囊。
15.如權利要求9所述的組合物，其特徵在於，組合物的有效量為435毫克/膠囊，每天 5個膠囊。
16.如權利要求2所述的組合物，其特徵在於，所述凍幹駱駝尿的乾燥ΡΜ701可通過蒸餾獲得。
17.如權利要求7所述的組合物，其特徵在於，從所述凍幹駱駝尿獲取的乾燥餾分 (PMF)沒有駱駝尿味。
18.如權利要求9所述的組合物，其特徵在於，從所述凍幹駱駝尿獲取的乾燥細分餾分 (PMFK)沒有駱駝尿味。
19.如權利要求4所述的組合物，其特徵在於，所述組合物已證明其在動物模型中的使用安全性，對器官沒有醫學或毒理學影響，對動物模型的關鍵器官無不良影響。
20.如權利要求7所述的組合物，其特徵在於，所述組合物PMF顯示靶向選擇性抗癌作 用，在體外對人肺癌細胞(A549)和小鼠白血病細胞(L1210)具有抗增殖和凋亡活性，而對 人正常組織具有滋養作用。
21.如權利要求9所述的組合物，其特徵在於，所述組合物ΡΜΠ(顯示靶向選擇性抗癌作 用，在體外對人肺癌細胞(A549)和小鼠白血病細胞(L1210)具有抗增殖和凋亡活性，而對 人正常組織具有滋養作用。
22.如權利要求4所述的組合物，其特徵在於，所述組合物顯示靶向選擇性抗癌作用， 在體外對代表其他癌症類型的人結腸癌細胞(HCT116)、人膠質瘤細胞(U251)、人乳腺癌細 胞(MCF7)和人肝癌細胞0fepG2)具有凋亡活性。
23.如權利要求7所述的組合物，其特徵在於，所述組合物顯示靶向選擇性抗癌作用， 在體外對代表其他癌症類型的人結腸癌細胞(HCT116)、人膠質瘤細胞(U251)、人乳腺癌細 胞(MCF7)和人肝癌細胞0fepG2)具有凋亡活性。
24.如權利要求9所述的組合物，其特徵在於，所述組合物具有靶向選擇性抗癌作用， 在體外對代表其他癌症類型的人結腸癌細胞(HCT116)、人膠質瘤細胞(U251)、人乳腺癌細 胞(MCF7)和人肝癌細胞0fepG2)具有凋亡活性。
25.如權利要求2所述的組合物，其特徵在於，可利用噴霧乾燥器獲得凍幹駱駝尿的幹 燥PM701。
26.如權利要求7所述的組合物，其特徵在於，有效量的組合物包含在許多製劑中，所 述製劑包括所有藥物劑型，例如膠囊、糖漿劑、注射劑、軟膏劑、凝膠劑、香波等。
27.如權利要求9所述的組合物，其特徵在於，有效量的組合物包含在許多製劑中，所 述製劑包括所有藥物劑型，例如膠囊、糖漿劑、注射劑、軟膏劑、凝膠劑、香波等。
28.如權利要求7所述的組合物，其特徵在於，所述組合物的外用製劑用於治療皮膚癌 和皮膚疾病如溼疹、白癜風和牛皮癬。
29.如權利要求9所述的組合物，其特徵在於，所述組合物的外用製劑用於治療皮膚癌 和皮膚疾病如溼疹、白癜風和牛皮癬。
30.如權利要求7所述的組合物，其特徵在於，所述組合物的外用製劑用於治療燒傷和 毛髮稀疏。
31.如權利要求9所述的組合物，其特徵在於，所述組合物的外用製劑用於治療燒傷和 毛髮稀疏。
全文摘要
提供了一種藥物組合物，其包含從文獻編號為PM701的乾燥駱駝尿獲取的有效量生物活性餾分PMF或細分餾分PMFK，其用作抗癌劑，選自抗癌化合物PM701，選擇性靶向癌細胞而不影響正常細胞。外用藥物組合物用於皮膚疾病，燒傷和毛髮稀疏。
文檔編號A61P17/06GK102000112SQ20091016879
公開日2011年4月6日 申請日期2009年9月3日 優先權日2009年9月3日
發明者法廷·阿卜杜勒拉門·F·霍什德 申請人:法廷·阿卜杜勒拉門·F·霍什德