用胎盤細胞群治療骨缺損的方法和組合物的製作方法

2023-07-24 04:26:41

專利名稱：用胎盤細胞群治療骨缺損的方法和組合物的製作方法
技術領域：
本發明提供了成骨貼壁胎盤細胞(OPAC)的分離群的使用方法，和在例如多發性骨髓瘤的治療中和在降低、停止或反轉與多發性骨髓瘤相關或由其引起的骨量損失的治療中使用OPAC的方法。2.
背景技術：
多發性骨髓瘤(也稱作匪、骨髓瘤、漿細胞骨髓瘤、或Kahler' s疾病)是一類漿細胞癌症，漿細胞是產生抗體的免疫系統細胞。多發性骨髓瘤的症狀包括骨痛、感染、 腎衰竭、貧血和骨損傷。該疾病被認為是不可治癒的，而且僅有幾種治療例如來那度胺 (REVLIMID )可供使用且顯示希望。因而，對多發性骨髓瘤的新治療存在需求。3.發明概述本發明提供了分離的成骨胎盤貼壁細胞(OPAC)、OPAC群和包含OPAC的細胞群，其中OPAC存在於絨毛膜中並從中分離。在某些實施方案中，OPAC不是從絨毛膜裙分離的(無絨毛的)。OPAC顯示一種或多種幹細胞或多能細胞特徵(例如，顯示幹細胞或多能細胞的相關標記，在培養中在未分化狀態複製至少10-20次，分化成代表三個胚層至少之一的成體細胞等)，而且可以附著到組織培養底物上(例如，組織培養塑料製品例如組織培養皿或多孔板表面)。本發明進一步提供了在骨缺損的治療和骨相關癌症例如多發性骨髓瘤的治療中使用OPAC的方法，以及使用OPAC來降低、停止或反轉與多發性骨髓瘤相關或由其引起的骨量損失的方法。在一方面，本發明提供了分離的0PAC，即分離的成骨胎盤貼壁細胞，其附著在組織培養塑料製品上，是成骨的，而且是從不具有絨毛膜裙的絨毛膜分離的(無絨毛的)。OPAC 不是本領域已知和了解的滋養層、細胞滋養層、胚胎幹細胞、或胚胎生殖細胞。在一個實施方案中，OPAC是分離的⑶200_或⑶200dim細胞，例如從絨毛膜但不是從絨毛膜裙分離的那些(無絨毛的)。在一個具體的實施方案中，OPAC是成骨的。在一個具體的實施方案中，OPAC是骨保護素(OPG)分泌陽性的，這通過例如流式細胞術檢測。骨保護素是成骨細胞分泌的誘餌受體，其與破骨細胞分化因子(ODF)特異性結合併抑制破骨細胞成熟。因此，OPAC促進骨形成並降低破骨細胞介導的骨量損失。在另一個具體的實施方案中，OPAC不表達RANKL(核因子κ B配體的受體活化劑；參見例如，GenBank登錄號 ΑΑΒ86811. 1)，這通過例如定量RT-PCR檢測。RANKL是激活破骨細胞的蛋白，破骨細胞參與骨吸收。因此，OPAC不促進骨吸收。在另一個具體的實施方案中，OPAC是⑶200_或⑶200dim， 且⑶105+的。在另一個具體的實施方案中，OPAC是α-平滑肌肌動蛋白(參見例如，GenBank 登錄號ΝΡ_001604)表達陰性、RANKL陰性、或NG2 (神經/神經膠質細胞2硫酸軟骨素蛋白聚糖)表達陽性的，這通過例如抗體染色確定。在某些實施方案中，與CD200+(非dim)組織培養塑料製品貼壁胎盤幹細胞(NG2在其中的染色是集中的)相比，所述NG2在OPAC中的染色是瀰漫的。在另一個具體的實施方案中，OPAC是α-平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL 陰性、NG2的表達陽性且骨保護素分泌陽性的。在另一個具體的實施方案中，OPAC顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性，這通過例如比色測定確定。在一個更加具體的實施方案中，OPAC是 ⑶200_或⑶200dim，⑶105+的，這通過流式細胞術檢測，而且α-平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL陰性、NG2的表達陽性、骨保護素的表達陽性或顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。在另一個更加具體的實施方案中，OPAC是⑶200_或⑶200dim，⑶105+的，而且α -平滑肌肌動蛋白的表達陰性、NG2的表達陽性、骨保護素的表達陽性，並顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。在另一個具體的實施方案中，OPAC是SSEA3+或SSEA4+的。在一個更加具體的實施方案中，OPAC是SSEA3+且SSEA4+的。在另一個更加具體的實施方案中，OPAC是⑶200_、 ⑶105+、SSEA3+的，而且同時α -平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL的表達陰性、NG2的表達陽性、骨保護素的表達陽性或顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。在另一個更加具體的實施方案中，OPAC是⑶200_、⑶105+、SSEA4+的，而且同時α -平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL 陰性、NG2的表達陽性、骨保護素的表達陽性或顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。在一個更加具體的實施方案中，OPAC是⑶200_、⑶105+、SSEA3+、SSEA4+的，而且同時α -平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL陰性、NG2的表達陽性、骨保護素的表達陽性或顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。在某些實施方案中，當胎盤細胞群在允許礦化基質形成的條件下培養時，0PAC、 OPAC群或包含OPAC的細胞群在所述群中促進礦化基質的形成。本發明也提供了包含OPAC的細胞群，其中該細胞群是⑶200_或⑶200dim的。因此，在一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的分離的細胞群，其中所述細胞群不是從絨毛膜裙分離的(無絨毛的)，而且其中所述細胞群是⑶200_或⑶200-的。在一個具體的實施方案中，該細胞群基本由OPAC組成。在一個具體的實施方案中，所述細胞群是成骨的。在另一個具體的實施方案中，所述細胞群是⑶200_且⑶105+的，這通過流式細胞術檢測。在另一個具體的實施方案中，所述細胞群是⑶200dim且⑶105+的，這通過流式細胞術檢測。在另一個具體的實施方案中，所述細胞群是α-平滑肌肌動蛋白的表達陰性、NG2的表達陽性、或骨保護素分泌陽性的。在某些實施方案中，與⑶200+(非dim)組織培養塑料製品貼壁胎盤幹細胞(NG2在其中的染色是集中的)相比，所述NG2在OPAC中的染色是瀰漫的。在另一個實施方案中，所述細胞群是RANKL表達陰性的，這通過例如定量RT-PCR檢測。 在另一個實施方案中，所述細胞群是α-平滑肌肌動蛋白的表達陰性、NG2的表達陽性且骨保護素分泌陽性的。在另一個具體的實施方案中，所述細胞群顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。在一個更加具體的實施方案中，所述群是⑶200—、⑶105+或⑶200dim、⑶105+的，而且滿足α -平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL的表達陰性、NG2的表達陽性、骨保護素的表達陽性或顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性中的一項或多項。在一個更加具體的實施方案中，所述細胞群是⑶200_、⑶105+或⑶200dim、⑶105+的；是α -平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL 陰性、NG2的表達陽性、骨保護素的表達陽性的；並顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。在另一個具體的實施方案中，所述細胞群是SSEA3+或SSEA4+的。在又一個實施方案中，所述群細胞是SSEA3+且SSEA4+的。在又一個實施方案中，所述細胞群是⑶200_、 ⑶105+或⑶200dim、⑶105+的、SSEA3+的，而且同時α -平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL的表達陰性、NG2的表達陽性、骨保護素的表達陽性或顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。在另一個更加具體的實施方案中，所述細胞群是⑶200—或⑶200dim的，是⑶105+且SSEA4+的，而且同時α-平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL的表達陰性、NG2的表達陽性、骨保護素的表達陽性或顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。在另一個更加具體的實施方案中，所述細胞群是 CD20(T或0)200^的；是CD105+、SSEA3+、SSEA4+的，α -平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL 的表達陰性、NG2的表達陽性、骨保護素的表達陽性和/或顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。在另一個具體的實施方案中，包含OPAC的細胞群在成骨培養基中與相等數目的 ⑶200+非dim貼壁胎盤幹細胞相比，以可檢測的較高水平表達基質金屬肽酶9 (MMP9)，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估。在其他具體的實施方案中，當OPAC和所述CD200+胎盤幹細胞在生長培養基中培養時，包含OPAC的細胞群與相等數目的CD200+非dim貼壁胎盤幹細胞相比以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括BMP3(骨形態發生蛋白 3)、0)!111(鈣粘蛋白11型)、0^1(^1(膠原1型，α 1)、C0L14A1 (膠原，XIV 型，α )、 C0L15A1 (膠原，XV型，al)、DMPl (牙本質基質酸性磷蛋白1)、DSPP (牙本質涎磷蛋白)、 ENAM(釉蛋白)、FGFR2(成纖維細胞生長因子受體2、、MMPlO (基質金屬蛋白酶10 (基質分解素2))、TGFB3(轉化生長因子，β 3)、和/或TGFBR1(轉化生長因子β，受體1)中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估。在另一個具體的實施方案中，當OPAC和所述胎盤幹細胞在成骨培養基中培養時， 包含OPAC的細胞群與相等數目的CD200+非dim貼壁胎盤幹細胞相比以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括AMBN(成釉蛋白(釉基質蛋白))、 BMP2(骨形態發生蛋白2)、CALCR(降鈣素受體)、CDH11、C0L11A1(膠原，XI型，α )、 C0L14A1、C0L15A1、C0L2A1(膠原，II型，α 1)、CSF2 (集落刺激因子2 (粒細胞-巨噬細胞))、CSF3(集落刺激因子3(粒細胞))、DMP1、DSPP, ENAM、FGF3 (成纖維細胞生長因子 3)、⑶FlO (生長分化因子10)、IGFl (胰島素樣生長因子1)、ITGAl (整聯蛋白，α 1 (⑶49))、 ITGA2 (整聯蛋白，α 2 (⑶49Β))、ΜΜΡ8 (基質金屬蛋白酶8 (中性粒細胞膠原酶))、ΜΜΡ9 (基質金屬肽酶9 (明膠酶B，92kDa明膠酶，92kDa IV型膠原酶))、MMP10、PDGFA(血小板源生長因子A) ,SMADl (SMAD家族成員1)、TGFB3、TGFBR1和/或TGFBR2 (轉化生長因子β，受體 2)中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估。在另一個具體的實施方案中，不管OPAC和所述胎盤幹細胞是在生長培養基中還是在成骨培養基中培養，包含OPAC的細胞群與相等數目的貼壁CD200+非dim胎盤幹細胞相比以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括CDH11、 C0L14A1、C0L15A1、DMP1、DSPP、ENAM、MMP10、TGFB3 和 / 或 TGFBRl 中的一個或多個，或全部， 這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估。在另一個具體的實施方案中，當所述OPAC和所述胎盤幹細胞在生長培養基中培養時，包含OPAC的細胞群與相等數目的貼壁CD200+非dim胎盤幹細胞相比以可檢測的較低水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括AHSG(a-2-HS-糖蛋白)、 ALPL (鹼性磷酸酶，肝臟/骨/腎臟)、EGF (表皮生長因子)、FLTl (fms相關的酪氨酸激酶 1 (血管內皮生長因子/血管通透性因子受體))、IGF2、ITGA2、ITGAM(整聯蛋白，α M(補體成分3受體3亞基)),SCARBl (清道夫受體B類，成員1)、S0X9 (SRY (性別決定區Y)-盒9)、TNF(腫瘤壞死因子)、TWIST1 (扭曲同系物1 ；以前稱作瞼裂狹小、倒轉型內眥贅皮和上瞼下垂3、尖頭並指趾畸形3)、VCAMl (血管細胞粘附分子1)和/或VDR(維生素D(l，25- 二羥基維生素受體)中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估在另一個具體的實施方案中，當所述OPAC和所述胎盤幹細胞在成骨培養基中培養時，包含OPAC的細胞群與相等數目的貼壁CD200+非dim胎盤幹細胞相比以可檢測的較低水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括BGN(雙糖鏈蛋白多糖)、 COLlIAl、COMP (軟骨寡聚基質蛋白)、FGFl和/或VCAMl中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估。在另一個具體的實施方案中，不管所述OPAC和所述胎盤幹細胞是在生長培養基中還是在成骨培養基中培養，包含OPAC的細胞群與相等數目的貼壁CD200+非dim胎盤幹細胞相比以可檢測的較低水平表達VCAMl，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估在另一個具體的實施方案中，當OPAC和間充質幹細胞在生長培養基中培養時，包含OPAC的細胞群與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括BMP4、CALCR、CD36、CDHlU C0L12A1、C0L14A1、 C0L15A1、C0L3A1、C0L5A1、DMPl、DSPP、FLTl、MSXl、PDGFA、TGFB3、TGFBRl 和 / 或 TUFTl (釉叢蛋白1)中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；在另一個具體的實施方案中，當OPAC和間充質幹細胞在成骨培養基中培養時，包含OPAC的細胞群與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括AMBN、CALCR、COL14A1、COL15A1、CSF3、DMP1、DSPP、 ITGAl、ITGA2、MMP10、MMP9、MSX1、PDGFA、TGFB1、TGFB3、TGFBRl 和 / 或 TGFBR2 中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估。在另一個具體的實施方案中，不管所述OPAC和所述間充質幹細胞是在生長培養基中還是在成骨培養基中培養，包含OPAC的細胞群與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括CALCR、 COL14A1、COL15A1、DMP1、DSPP、MSX1、PDGFA、TGFB3 和 / 或 TGFBRl 中的一個或多個，或全部， 這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；在另一個具體的實施方案中，當OPAC和間充質幹細胞在生長培養基中培養時，包含OPAC的細胞群與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較低水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括ALPL、BGLAP(骨Y -羧基穀氨酸(gla)蛋白)、 IGF2、ITGA2、ITGAM、SCARB1和/或SOXl中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR 的Ct值來評估。在另一個具體的實施方案中，當OPAC和間充質幹細胞在成骨培養基中培養時， 包含OPAC的細胞群與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較低水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括AHSG、ALPL, BGLAP, BGN、BMP3、BMP5、CD36、 COL1OA1、COL1IA1、COL12A1、C0L2A1、C0L4A3、COMP、EGF、FGF1、FGFR2、IGF2、MMP8、PHEX (磷酸鹽調節的肽鏈內切酶同系物，X連鎖)、RUNX2 (runt-相關轉錄因子2)、SCARBl、SOXl、VCAMl 和/或VEGFB中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估。在另一個具體的實施方案中，不管所述OPAC和所述間充質幹細胞是在生長培養基中還是在成骨培養基中培養，包含OPAC的細胞群與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較低水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括ALPL、BGLAP, IGF2,SCARBl和/或S0X9中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估。在以上各個實施方案的一個更加具體的實施方案中，OPAC和所述CD200+胎盤幹細胞或間充質幹細胞經歷了相等數目的傳代或細胞倍增。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，例如OPAC群，其中編碼基質金屬肽酶9 (MMP9)的基因在所述OPAC中在成骨培養基中被誘導時與MMP9在生長培養基中的表達的比值，和所述MMP9在胎盤幹細胞(例如⑶34_、OT10+、⑶105+組織培養貼壁多能胎盤細胞)中在所述成骨培養基中被誘導時與MMP9在所述生長培養基中表達的比值相比，至少大2、3、4或5個數量級，這通過例如來自實時定量PCR的Ct值來評估。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，例如OPAC群，其中編碼基質金屬肽酶9 (MMP9) 的基因在所述OPAC中在成骨培養基中被誘導時與MMP9在生長培養基中的表達的比值，和所述MMP9在骨髓源間充質幹細胞(MSC)中在所述成骨培養基中被誘導時與MMP9在所述生長培養基中表達的比值相比，至少大2、3、4或5個數量級，這通過例如來自實時定量PCR的 Ct值來評估。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，例如OPAC群，其中編碼基質金屬肽酶9 (MMP9)的基因在所述OPAC中在成骨培養基中被誘導時與MMP9在生長培養基中的表達的比值，和所述MMP9在成纖維細胞中在所述成骨培養基中被誘導時與MMP9 在所述生長培養基中表達的比值相比，至少大2、3、4或5個數量級，這通過例如來自實時定量PCR的Ct值來評估。在具體的實施方案中，包含OPAC的細胞群中至少20%、30%、40%、50%、60%、 70 %、80 %、90 %或95 %的細胞是⑶200—和/或⑶200^的。在其他具體的實施方案中，包含 OPAC 的細胞群中至少 20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %、90 % 或 95 % 的 OPAC 是 CD20(T 和 / 或 CD200dim 的。本發明進一步提供了分離的OPAC群，其中，通過如下步驟獲得所述群從胎盤中分離絨毛膜組織，其中所述絨毛膜組織不是絨毛膜裙組織(無絨毛的)；用組織破裂酶消化分離的絨毛膜組織，以獲得包含OPAC的絨毛膜細胞群；和從所述絨毛膜細胞中分離所述 OPAC0在一個具體的實施方案中，組織破裂酶是胰蛋白酶、分散酶或膠原酶。在各種實施方案中，消化絨毛膜組織獲得的細胞群內包含的OPAC佔所述絨毛膜細胞群的至少約10%、 20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少 99. 5%0本發明提供的OPAC和包含OPAC的細胞群包括已被培養例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20 或更多代，或 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、 15、16、17、18、19、20次群倍增的OPAC和包含OPAC的細胞群。OPAC群也包括例如培養中的兩種或多種OPAC的群，以及在容器(例如袋子)中的群。另一方面，本發明提供了生產具有礦化基質能力的成骨細胞的方法，包括在所述 OPAC分化成成骨細胞的條件下，培養大量本發明提供的OPAC或本發明提供的分離的OPAC 群，所述培養持續的時間足以讓所述成骨細胞產生可檢測量的包含鈣和/或磷酸鹽的礦化基質，或促進該基質的產生。在某些實施方案中，OPAC產生骨或促進骨的產生。在另一方面，本發明提供了包含OPAC的組合物，例如可植入的組合物。在一個具體的實施方案中，可植入的組合物包含基質。在一個更加具體的實施方案中，所述基質是三維支架。在另一個更加具體的實施方案中，所述基質包含膠原、明膠、層粘連蛋白、纖連蛋白、果膠、鳥氨酸或玻連蛋白。在另一個更加具體的實施方案中，基質是羊膜或羊膜源生物材料。在另一個更加具體的實施方案中，所述基質包含細胞外膜蛋白。在另一個更加具體的實施方案中，所述基質包含合成的化合物。在另一個更加具體的實施方案中，所述基質包含生物活性化合物。在另一個更加具體的實施方案中，所述生物活性化合物是生長因子、細胞因子、抗體、或小於5，000道爾頓的有機分子。在某些實施方案中，基質是合成的可降解的聚合物，例如聚乳酸或聚乙醇酸。在某些實施方案中，可植入的支架底物是β-磷酸三鈣底物、β -磷酸三鈣-膠原底物、膠原底物、磷酸鈣底物、礦化的人胎盤膠原底物、透明質酸底物、或陶瓷底物。在某些實施方案中，可植入的支架底物是β-磷酸三鈣底物。在某些實施方案中，可植入的支架底物是β-磷酸三鈣-膠原底物。在某些實施方案中，可植入的支架底物是膠原底物。在某些實施方案中，可植入的支架底物是磷酸鈣底物。在某些實施方案中，可植入的支架底物是礦化的人胎盤膠原底物。在另一方面，本發明提供了在個體中治療骨缺損的方法，包括向有此需要的個體施用包含本發明提供的OPAC群的可植入或可注射的組合物，從而在該個體中治療骨缺損。 在某些實施方案中，骨缺損是與癌症、骨折或脊柱例如需要融合的脊柱相關的溶骨性損害。 在某些實施方案中，溶骨性損害與多發性骨髓瘤、骨癌、或轉移性癌相關。在某些實施方案中，骨折是骨不連骨折。在某些實施方案中，可植入的組合物是手術植入的，例如在骨缺損位點手術植入。在某些實施方案中，對骨缺損區域手術施用可注射的組合物。在某些實施方案中，可注射的組合物是全身施用的。在另一方面，本發明提供了生產成骨細胞的方法，包括在所述OPAC分化成成骨細胞的條件下培養大量OPAC或分離的OPAC群，所述培養持續的時間足以讓所述OPAC生產可檢測量的礦化的鈣、骨組織、或骨，或促進該生產。在某些實施方案中，本發明提供了配製可注射的組合物的方法，包括將OPAC群與可注射的透明質酸或膠原組合。在某些實施方案中，組合物包含可注射的透明質酸。在某些實施方案中，組合物包含可注射的膠原。本發明也提供了包含OPAC群和可注射的透明質酸或膠原的組合物。在另一方面，本發明提供了治療患有骨相關癌症的個體的方法，例如，多發性骨髓瘤、骨癌、乳腺癌、肺癌、神經母細胞瘤、骨肉瘤、Ewing' s肉瘤、軟骨肉瘤、脊索瘤、骨的惡性纖維組織細胞瘤、骨的纖維肉瘤、轉移性癌、多發性骨髓瘤、以及特徵是骨轉移的任何形式的轉移性癌。在一個實施方案中，本發明提供了治療患有骨相關癌症的個體的方法，包含對所述個體施用分離的0PAC，例如包含OPAC的分離的細胞群，其中所述OPAC從絨毛膜獲得，並附著到組織培養塑料製品上，而且其中所述OPAC是⑶200陰性的或是⑶200dim的，且 CD105陽性，而且其中所述施用可檢測地降低所述多發性骨髓瘤的一種或多種症狀的進展， 停止其進展或使其改善。在一個具體的實施方案中，所述OPAC是SSEA3+或SSEA4+的。在另一個具體的實施方案中，所述OPAC是SSEA3+且SSEA4+的。在另一個具體的實施方案中， OPAC是⑶200_、⑶105+、SSEA3+的，而且同時α -平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL的表達陰性、NG2的表達陽性、骨保護素的表達陽性或顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。在另一個更加具體的實施方案中，OPAC是⑶200—和/或⑶200dim、⑶105+、SSEA4+的，而且同時α -平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL陰性、NG2的表達陽性、骨保護素的表達陽性或顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。在一個更加具體的實施方案中，OPAC是⑶200—和/或⑶200dim、⑶105+、SSEA3+、SSEA4+的，而且同時α -平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL陰性、NG2的表達陽性、 骨保護素的表達陽性或顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。在其他具體的實施方案中，OPAC包含下面5. 1部分中列舉的任意特徵或特徵組合。在治療方法的另一個具體實施方案中，當所述OPAC和所述CD200+胎盤幹細胞在生長培養基中培養時，所述OPAC與相等數目的CD200+非dim貼壁胎盤幹細胞相比以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括BMP3、⑶Hll、C0L10A1、 C0L14A1、C0L15A1、DMP1、DSPP、ENAM、FGFR2、MMP10、TGFB3、和 / 或 TGFBRl 中的一個或多個， 或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估。在治療方法的另一個具體實施方案中，當所述OPAC和所述胎盤幹細胞在成骨培養基中培養時，所述OPAC與相等數目的貼壁CD200+非dim胎盤幹細胞相比以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括AMBN、BMP2、CALCR、⑶H11、 COLlIAl、C0L14A1、C0L15A1、C0L2A1、CSF2、CSF3、DMPl、DSPP, ENAM、FGF3、GDF10、IGFl、 ITGAl、ITGA2、MMP10、MMP8、MMP9、PDGFA、SMAD1、TGFB3、TGFBRl 和 / 或 TGFBR2 中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估。在治療方法的另一個具體實施方案中，不管所述OPAC和所述胎盤幹細胞是在生長培養基中還是在成骨培養基中培養，所述OPAC與相等數目的貼壁CD200+非dim胎盤幹細胞相比以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括CDH11、 C0L14A1、C0L15A1、DMP1、DSPP、ENAM、MMP10、TGFB3 和 / 或 TGFBRl 中的一個或多個，或全部， 這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估。在治療方法的另一個具體實施方案中，當所述OPAC和所述胎盤幹細胞在生長培養基中培養時，所述OPAC與相等數目的貼壁CD200+非dim胎盤幹細胞相比以可檢測的較低水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括AHSG、ALPL, EGF、FLTl、IGF2、 ITGA2、ITGAM、SCARB1、S0X9、TNF、TWISTl、VCAMl 或 VDR 中的一個或多個，或全部,這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估。在治療方法的另一個具體實施方案中，當所述OPAC和所述胎盤幹細胞在成骨培養基中培養時，所述OPAC與相等數目的貼壁CD200+非dim胎盤幹細胞相比以可檢測的較低水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括BGN、COLlIAl、COMP, FGFl和/ 或VCAMl中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估。在治療方法的另一個具體實施方案中，不管所述OPAC和所述胎盤幹細胞是在生長培養基中還是在成骨培養基中培養，所述OPAC與相等數目的貼壁CD200+非dim胎盤幹細胞相比以可檢測的較低水平表達VCAMl，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估。在治療方法的另一個具體實施方案中，當OPAC和間充質幹細胞在生長培養基中培養時，所述OPAC與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括BMP4、CALCR、CD36、CDHlU C0L12A1、C0L14A1、 C0L15A1、C0L3A1、C0L5A1、DMPU DSPP, FLT1、MSXl、PDGFA、TGFB3、TGFBRl 和 / 或 TUFTl 中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估。在治療方法的另一個具體實施方案中，當OPAC和間充質幹細胞在成骨培養基中培養時，所述OPAC與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括AMBN、CALCR、C0L14A1、C0L15A1、CSF3、DMPUDSPP, ITGAl、ITGA2、MMP10、MMP9、MSXl、PDGFA, TGFBl、TGFB3、TGFBRl 禾口 / 或 TGFBR2 中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估。在治療方法的另一個具體實施方案中，不管所述OPAC和所述間充質幹細胞是在生長培養基中還是在成骨培養基中培養，所述OPAC與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括CALCR、 COL14A1、COL15A1、DMP1、DSPP、MSX1、PDGFA、TGFB3 和 / 或 TGFBRl 中的一個或多個，或全部， 這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估。在治療方法的另一個具體實施方案中，當OPAC和間充質幹細胞在生長培養基中培養時，所述OPAC與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較低水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括ALPL、BGLAP(骨Y -羧基穀氨酸(gla)蛋白)、 IGF2、ITGA2、ITGAM、SCARB1和/或SOXl中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR 的Ct值來評估。在治療方法的另一個具體實施方案中，當OPAC和間充質幹細胞在成骨培養基中培養時，所述OPAC與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較低水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括AHSG、ALPL, BGLAP, BGN、BMP3、BMP5、CD36、 C0L10A1、COLl IAl、C0L12A1、C0L2A1、C0L4A3、COMP、EGF、FGFl、FGFR2、IGF2、MMP8、PHEX、 RUNX2、SCARBl、SOXl、VCAMl和/或VEGFB中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量 PCR的Ct值來評估。在治療方法的另一個具體實施方案中，不管所述OPAC和所述間充質幹細胞是在生長培養基中還是在成骨培養基中培養，所述OPAC與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較低水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括ALPL、BGLAP, IGF2,SCARBl和/或S0X9中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估。在治療多發性骨髓瘤的方法的另一個具體實施方案中，所述OPAC與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括 BMP4、BMP6、CD36、CDHl 1、COL14A1、COL15A1、COL1A1、C0L3A1、C0L5A1、CSF2、CTSK、 FGF2、FGFR1、FLT1、ITGA1、MINPP1、MMP9、MSX1、PDGFA、SERPINH1、TGFB3 和 TGFBRl 中的一個或多個，其中所述OPAC和所述間充質幹細胞經歷了相等數目的傳代或細胞倍增；或與相等數目的成纖維細胞相比以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括 BMP4、BMP6、CDHl 1、C0L14A1、C0L15A1、COLlAl、C0L3A1、C0L5A1、FLTl、IGF1R、ITGAl、 MINPPl、PDGFA,SERPINH1、SMAD3、TGFBl、TGFB2、TGFB3、TGFBRl、TNF、TUFTl、VCAMl和 VEGFA 中的一個或多個，而且其中所述成纖維細胞經歷了相等數目的傳代或細胞倍增。在治療患有多發性骨髓瘤的個體的方法的另一個具體實施方案中，所述OPAC 分泌一種或多種如下蛋白核心蛋白聚糖、表皮調節素、IGFBP-3、IGFBP-6、IL-2 Ra、 IL-17RC、IL-27、潛在的 TGF-β 結合蛋白 1 (LTBP)、NCAM-U Smad4、TFPI、TGF-β R1/ALK5 或TIMP-2。在一個更加具體的實施方案中，所述OPAC分泌如下蛋白核心蛋白聚糖、表皮調節素、IGFBP-3、IGFBP-6、IL-2 Ra、IL-17RC、IL-27、潛在的 TGF-β 結合蛋白 1 (LTBP)、 NCAM—l、Smad4、TFPI, TGF- β R1/ALK5 禾口 ΤΙΜΡ—2。在治療方法的另一個具體實施方案中，所述多發性骨髓瘤的一種或多種症狀是骨痛、骨細胞損害(例如，通過X射線或磁共振成像(MRI)可見)、骨質疏鬆症、貧血、高鈣血症或由高鈣血症引起的症狀、或腎衰竭。在另一個具體的實施方案中，所述施用在所述個體中引起骨礦物質密度或骨礦物質含量的可檢測增加，或減輕其降低。在另一個具體的實施方案中，所述施用包含對所述個體施用至少IX IO8個OPAC/kg。在其他具體的實施方案中，所述個體從未被治療過多發性骨髓瘤；所述個體已被治療過多發性骨髓瘤而且對非OPAC治療應答；所述個體已被治療過多發性骨髓瘤而且對非OPAC治療無應答，但所述個體中多發性骨髓瘤的進程無進展；或所述個體患有進行性多發性骨髓瘤。在又一方面，本發明提供了在個體中治療骨缺損的方法，包括向有此需要的個體施用包含OPAC群的可植入或可注射的組合物，從而在該個體中治療骨缺損。在某些實施方案中，骨缺損是(a)與癌症相關的溶骨性損害、(b)骨折、(c)需要融合的脊柱、(d)骨不連骨折、或(e)骨質疏鬆症。在某些實施方案中，溶骨性損害與多發性骨髓瘤、骨癌、或轉移性癌相關。在某些實施方案中，骨折是骨不連骨折。在某些實施方案中，對個體施用包含OPAC 群的可植入的組合物。在某些實施方案中，可植入的組合物被手術植入。在某些實施方案中，對個體施用包含OPAC群的可注射的組合物。在某些實施方案中，對骨缺損區域手術施用可注射的組合物。在某些實施方案中，可注射的組合物是全身施用的。在又一方面，本發明提供了在個體中治療骨缺損的方法，包括向有此需要的個體施用包含OPAC群的可植入或可注射的組合物，其中所述OPAC在該個體中引起或促進骨或骨組織的形成，從而在該個體中治療骨缺損。在某些實施方案中，骨缺損是(a)與癌症相關的溶骨性損害、(b)骨折、(c)需要融合的脊柱、(d)骨不連骨折、或(e)骨質疏鬆症。在某些實施方案中，溶骨性損害與多發性骨髓瘤、骨癌、或轉移性癌相關。在某些實施方案中，骨折是骨不連骨折。在某些實施方案中，對個體施用包含OPAC群的可植入的組合物。在某些實施方案中，可植入的組合物被手術植入。在某些實施方案中，對個體施用包含OPAC群的可注射的組合物。在某些實施方案中，對骨缺損區域手術施用可注射的組合物。在某些實施方案中，可注射的組合物是全身施用的。3. 1 定義在包含OPAC的細胞群的上下文中，本發明使用的「基本由...組成」指該細胞群含例如至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少95%或至少95. 5%的0PAC。本發明使用的術語「0PAC」指下面5. 1部分中描述的細胞。當提及細胞時，本發明使用的「⑶200dim」，指該細胞在流式細胞術中對⑶200顯示高於同種型對照不超過20-30%的螢光強度。如果群中的至少60%的細胞不表達⑶200或者是CD200dim的，而且細胞群作為一個整體在流式細胞計數測試中顯示高於同種型對照不超過40-60%的⑶200螢光強度，那麼本發明使用的細胞群是⑶200dim的。應注意⑶200dim 群可以包含CD200+(非dim)細胞。本發明使用的術語「SH2」指與標記⑶105上的表位結合的抗體。因此，被稱作SH2+ 的細胞是⑶105+的。本發明使用的術語「SH3」和「SH4」指與標記⑶73上存在的表位結合的抗體。因此，被稱作SH3+和/或SH4+的細胞是⑶73+的。本發明使用的術語「分離的0PAC」指基本與OPAC源自的組織例如絨毛膜中的其它非OPAC分離的0PAC。如果在例如OPAC的收集和/或培養期間，至少約50%、60%、70%、
1680%、90%、95%、或至少99%的與OPAC天然有聯繫的非OPAC從OPAC中被去除，那麼該 OPAC是「分離的」。本發明使用的術語「分離的細胞群」指基本與細胞群源自的組織例如胎盤中的其它細胞分離的細胞群。如果在例如收集和/或培養期間，至少約50^^60^^70^^80%. 90%,95%或至少99%的與OPAC群或OPAC群源自的細胞天然有聯繫的細胞從OPAC群中被去除，那麼該OPAC群是「分離的」。本發明使用的術語「胎盤幹細胞」指源自哺乳動物胎盤的幹細胞或前體細胞，無論其形態學、細胞表面標記、或原代培養後傳代數目如何。但是，本發明使用的術語「胎盤幹細胞」並不指滋養層。如果細胞保持幹細胞的至少一種特性，例如，與一種或多種類型的幹細胞相關的標記或基因表達譜；在培養中複製至少10-40次的能力，分化成全部三個胚層的細胞的能力；缺乏成體(即分化的)細胞特徵等，那麼細胞被認為是「幹細胞」。術語「胎盤幹細胞」和「胎盤源幹細胞」可以交換使用。當特定標記可檢測到時，本發明使用的細胞對該標記是「陽性的」。例如，OPAC對例如CD105是陽性的，因為對胎盤幹細胞，CD105是可檢測到的，其量可檢測地高於背景(與例如同種型對照比較)。當某個標記可以用來將細胞與至少一種其它細胞類型區分開來時， 或當它存在或被細胞表達時可以用來篩選或分離該細胞時，細胞對該標記也是陽性的。類似的，當例如群中的至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%的細胞表達某個標記時，細胞群對該標記是陽性的。本發明使用的「成骨細胞」是能夠沉積羥磷灰石(骨的主要成分)或分化成能夠沉積羥磷灰石的細胞的細胞。「成骨細胞」被特異性預期為包含通常稱作成骨細胞或骨細胞的細胞。成骨胎盤貼壁細胞可以分化成可以沉積羥磷灰石的細胞的示範條件，參見下面 5. 1. 6部分。本發明使用的「基質」指特徵是分散遍布在物質中的孔的三維物質。孔適合例如基質內的細胞生長，例如幹細胞、0PAC、和/或成骨細胞。示範的基質包括但不限於β-磷酸三鈣底物、β -磷酸三鈣-膠原底物、膠原底物、磷酸鈣底物、礦化的人胎盤膠原底物、透明質酸底物、和陶瓷底物。優選地，基質可以被基質的孔中存在的成骨細胞礦化。4.附圖簡要描述

圖1 通過選擇性附著獲得的OPAC的基因表達。X軸=Iogltl相對定量鹼性磷酸酶基因表達。X軸實驗條件。圖2 通過針對⑶34、⑶105和⑶200的選擇性附著，獲得的OPAC的免疫表型。LN 層粘連蛋白。VN:玻連蛋白。FN:纖連蛋白。C0L:膠原。10:10%胎牛血清。20 20%胎牛血清。Ctrl =OPAC在指明的表面塗層上培養6天。圖3 通過選擇性附著獲得的OPAC的成骨標記的免疫表型。LN 層粘連蛋白。VN 玻連蛋白。FN:纖連蛋白。C0L:膠原。10:10%胎牛血清。20:20%胎牛血清。Ctrl =OPAC 在指明的表面塗層上培養6天。星號與⑶10+、⑶34_、⑶105+胎盤幹細胞對照(水平線) 相比的顯著差異。圖4 通過選擇性附著獲得的OPAC的胚胎幹細胞標記的免疫表型。LN 層粘連蛋白。VN 玻連蛋白。FN 纖連蛋白。COL 膠原。10 胎牛血清。20 :20%胎牛血清。Ctrl OPAC在指明的表面塗層上培養6天。上水平線SSEA-3的⑶10+、⑶34_、⑶105+胎盤幹細胞表達；下水平線SSEA-4的⑶10+、⑶;34-、⑶105+胎盤幹細胞表達。圖5 通過選擇性附著獲得的OPAC的鹼性磷酸酶(AP)活性。圖6 培養擴增的OPAC的免疫表型。圖7 培養擴增的OPAC的鹼性磷酸酶活性。基本生長培養基。OS 成骨培養基。 ml 培養基 1-20% FBS (Hyclone)/a -MEM，包含 100 單位 /mL 青黴素、100 μ g/mL 鏈黴素、 2mM L-穀氨醯胺。m2 培養基2-間充質幹細胞生長培養基(MSCGM ；Lonza)。m3 培養基 3-10% FBS (間充質幹細胞限定 FBS，Stem Cell ^Technologies) / α-MEM，包含 100 單位 / mL、100 μ g/mL鏈黴素和2mM L-穀氨醯胺。圖8 磁激活細胞分選後OPAC的免疫表型(⑶200，⑶105)。LN 層粘連蛋白。VN 玻連蛋白。FN:纖連蛋白。ml 培養基1-20% FBS (Hyclone)/a-MEM，包含100單位/mL青黴素、100 μ g/mL鏈黴素、2mM L-穀氨醯胺。m3 培養基3-10% FBS (間充質幹細胞限定FBS， Stem Cell Technologies) / α-MEM，包含 100 單位/mL、100 μ g/mL 鏈黴素和 2mM L-穀氨醯胺。圖9 磁激活細胞分選後⑶200+群和流過部分(包含⑶200_細胞)的鹼性磷酸酶活性。LN:層粘連蛋白。VN:玻連蛋白。FN:纖連蛋白。ml 培養基1-20% FBS(Hyclone)/
0-|^11，包含100單位/1^青黴素、10(^8/1^鏈黴素、21111L-穀氨醯胺。m3 培養基3-10% FBS (間充質幹細胞限定 FBS，StemCell Technologies) / α -MEM,包含 100 單位 /mL、100 μ g/ mL鏈黴素和2mM L-穀氨醯胺。基本在生長培養基中的AP表達。誘導的在成骨培養基中的AP表達。圖10:集落形成單位-磁激活細胞分選後絨毛膜源的幹細胞群的鹼性磷酸酶(CFU-AP)活性。LN:層粘連蛋白。VN:玻連蛋白。FN:纖連蛋白。ml:培養基1-20% FBS (Hyclone)/a-MEM，包含 100 單位/mL 青黴素、100 μ g/mL 鏈黴素、2mM L-穀氨醯胺。m3 培養基 3-10% FBS (間充質幹細胞限定 FBS，Stem Cell ^Technologies) / α -MEM，包含 100 單位/mL、100 μ g/mL鏈黴素和2mM L-穀氨醯胺。⑶200+情況是AP表達基本為零。圖11 磁激活細胞分選後OPAC部分的總克隆形成。FN 纖連蛋白。ml 培養基
1-20%FBS (Hyclone) / α -MEM,包含 100 單位 /mL 青黴素、100 μ g/mL 鏈黴素、2mM L-穀氨醯胺。m3 培養基 3-10% FBS (間充質幹細胞限定 FBS，Stem Cell ^Technologies) / α-MEM，包含 100 單位 /mLUOO μ g/mL 鏈黴素和 2mM L-穀氨醯胺。PDAC :CD10+、CD34\CD105+、CD200+ 的組織培養塑料製品貼壁胎盤多能細胞。圖12 成骨刺激後，OPAC的可誘導的骨保護素分泌。圖13 使用RayBiotech 507蛋白RayBio 生物素標記基抗體陣列在0PAC、 PDAC 、MSC和成纖維細胞中鑑定出的分泌的蛋白的列表。蛋白表達相對於內部陽性對照被分類為+(低)、++(中)、+++(高)。顯示了骨形成蛋白標記(丨)或骨吸收蛋白標記 (「。圖14 治療組的骨組織形成的平均量，計分為0-4，4為最大量。圖15 治療組的頭蓋骨缺陷位點的骨礦物質密度。圖16 在處死時通過用X-射線測量剩餘缺陷得到的具有> 50%缺陷封閉的動物分布。圖17 =OPAC和MSC對破骨細胞分化的影響。OC 破骨細胞。對照沒有OPAC或MSC的 OPAC 禾口 MSC0圖18 =OPAC和MSC對多發性骨髓瘤細胞的增殖的影響。OB 由MSC或PDAC在成骨條件下獲得的成骨細胞或成骨細胞樣細胞。MTT OD :MTT測試中的光學密度；較高的值表明多發性骨髓瘤細胞存活的程度較高。Con MM 來自27位人多發性骨髓瘤患者的多發性骨髓瘤細胞。圖19 :0PAC在原代骨髓瘤SCID_rab小鼠中對骨礦物質密度的影響。對照僅PBS。 Pre-Rx =OPAC施用前的骨礦物質密度(BMD)。最終注射後8_16星期後的骨礦物質密度。 使用 PIXImus DEXA(GE Medical Systems LUNAR, Madison, WI)，測定植入的骨的骨礦物質密度(BMD)變化。圖20 :0PAC在原代骨髓瘤小鼠中對人免疫球蛋白(hlg)水平的影響。Ig 小鼠血清中的人免疫球蛋白。圖21 =OPAC在原代骨髓瘤SCID_rab小鼠中對骨量的影響。BMD 骨礦物質密度。 BMC 骨礦物質含量。5.詳細描述5. 1成骨胎盤貼壁細胞(OPAC)5. 1. 1 特徵5. 1. 1. 1物理和形態學特徵本發明提供的成骨胎盤貼壁細胞(OPAC)，當在原代培養或細胞培養中培養時，附著到組織培養底物上，例如組織培養容器表面(例如組織培養塑料製品)。培養中的OPAC 一般呈現成纖維樣星形外觀，伴有許多胞質突起從中央細胞體延伸出來。但是，OPAC從形態學上可以與相同條件下培養的成纖維細胞區分開來，因為OPAC —般比成纖維細胞顯示更多數量的這樣的突起。形態學上，OPAC也可以與造血幹細胞區分開來，造血幹細胞在培養中一般呈現更圓的或鵝卵石的形態。5. 1. 1. 2細胞表面、分子和遺傳標記在一個實施方案中，本發明提供了分離的OPAC(成骨胎盤貼壁細胞)，即分離的細胞，其是貼壁的、成骨的、和從絨毛膜分離的。在一個實施方案中，OPAC不是從絨毛膜裙分離的(無絨毛的)。本發明提供的OPAC和OPAC群表達了大量細胞和遺傳標記，它們可以被用來識別和/或分離OPAC或包含OPAC的細胞群。本發明提供的OPAC和包含OPAC的細胞群包括直接從絨毛膜獲得的OPAC和含OPAC的細胞群，例如原代培養物。OPAC群也包括例如培養中的兩種或多種OPAC的群、在單細胞懸浮液中的OPAC群、和容器例如袋子中的群。 在一個具體的實施方案中，OPAC群是細胞培養中的大量OPAC。OPAC不是本領域已知和了解的滋養層、細胞滋養層、胚胎幹細胞、或胚胎生殖細胞。本發明提供了分離的0PAC，其中OPAC是⑶200_或⑶200dim的。在一個具體的實施方案中，OPAC是成骨的。在一個具體的實施方案中，OPAC是骨保護素(0PG ；參見例如， GenBank登錄號AAB53709)分泌陽性的。骨保護素是成骨細胞分泌的誘餌受體，其與破骨細胞分化因子特異性結合併抑制破骨細胞成熟。因此，OPAC促進骨形成並降低破骨細胞介導的骨量損失。在另一個具體的實施方案中，OPAC是RANKL(核因子κ B的受體活化劑) 表達陰性的。RANKL是激活破骨細胞的蛋白，破骨細胞參與了骨吸收。因此，OPAC不促進骨吸收。在另一個具體的實施方案中，OPAC是⑶200—或⑶200dim、且⑶105+的。在另一個具體的實施方案中，OPAC是α-平滑肌肌動蛋白表達陰性的，這通過例如免疫螢光染色確定。注意到來自胎盤的其它細胞群，例如，在美國專利申請公開號2005/0058631中描述的細胞，是α-平滑肌肌動蛋白陽性的。在另一個具體的實施方案中，OPAC滿足α-平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL的表達陰性、或NG2 (神經/神經膠質細胞2硫酸軟骨素蛋白聚糖)的表達陽性中的一項或多項。在另一個具體的實施方案中，OPAC是α-平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL的表達陰性、NG2的表達陽性、且骨保護素分泌陽性的。在另一個具體的實施方案中，OPAC顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。在一個更加具體的實施方案中， OPAC是⑶200_或⑶200dim、且⑶105+的，而且滿足α -平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL 的表達陰性、NG2的表達陽性、骨保護素的表達陽性、或顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性中的一項或多項。在另一個更加具體的實施方案中，OPAC是⑶200_或⑶200dim、且⑶105+的，而且同時α-平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL的表達陰性、NG2的表達陽性、骨保護素的表達陽性、並顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。OPAC的⑶200表達缺乏或低表達，把OPAC從其它組織培養塑料製品貼壁的胎盤源多能細胞中區分開來，例如PDAC ，例如，在Edinger等， 美國專利申請公開號2007/0275362中描述的胎盤多能細胞。在另一個具體的實施方案中，OPAC是SSEA3+或SSEA4+的。在一個更加具體的實施方案中，OPAC是SSEA3+且SSEA4+的。在另一個更加具體的實施方案中，OPAC是⑶200—或 ⑶200dim，且⑶105+、SSEA3+的，而且同時α -平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL的表達陰性、NG2的表達陽性、骨保護素的表達陽性，和/或顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。在另一個更加具體的實施方案中，OPAC是⑶200—或⑶200dim、且⑶105+、SSEA4+的，而且同時α-平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL的表達陰性、NG2的表達陽性、骨保護素的表達陽性或顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。在一個更加具體的實施方案中，OPAC是⑶200—或⑶200dim、 ⑶105+、SSEA3+、SSEA4+的，而且同時α -平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL的表達陰性、 NG2的表達陽性、骨保護素的表達陽性或顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。OPAC的SSEA3和 SSEA4表達提供了 OPAC與其它胎盤源細胞的區別，例如，在Hariri，美國專利號7，468，276 中描述的組織培養塑料製品貼壁胎盤幹細胞。在某些實施方案中，當胎盤細胞群在允許礦化基質形成的條件下培養時，OPAC在所述群中促進礦化基質的形成。本發明也提供了包含OPAC的細胞群，其中該細胞群是⑶200_或⑶200dim的。因此，在一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的分離的細胞群，其中所述細胞群不是從絨毛膜裙分離的(無絨毛的)，而且其中所述細胞群是⑶200_或⑶200-的。在一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。在一個具體的實施方案中，所述細胞群是成骨的。 在另一個具體的實施方案中，所述細胞群是⑶200_且⑶105+的，這通過流式細胞術檢測。 在另一個具體的實施方案中，所述細胞群是⑶200dim且⑶105+的，這通過流式細胞術檢測。 在另一個具體的實施方案中，所述細胞群是α -平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL的表達陰性、NG2的表達陽性、和/或骨保護素分泌陽性的。在另一個實施方案中，所述細胞群是 α -平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL的表達陰性、NG2的表達陽性、且骨保護素分泌陽性的。在另一個具體的實施方案中，所述細胞群顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。在一個更加具體的實施方案中，所述群是⑶200_、⑶105+的或⑶200dim、⑶105+的，而且滿足α -平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL的表達陰性、NG2的表達陽性、骨保護素的表達陽性或顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性中的一項或多項。在一個更加具體的實施方案中，所述細胞群是 ⑶200_、⑶105+的或⑶200dim、⑶105+的；是α -平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL的表達陰性、NG2的表達陽性、骨保護素的表達陽性的；並顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。在另一個具體的實施方案中，所述細胞群是SSEA3+或SSEA4+的。在又一個實施方案中，所述群細胞是SSEA3+且SSEA4+的。在又一個實施方案中，所述細胞群是⑶200_和/ 或⑶200dim、⑶105+、⑶105+、SSEA3+的，而且同時α -平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL的表達陰性、NG2的表達陽性、骨保護素的表達陽性或顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。在另一個更加具體的實施方案中，所述細胞群是⑶200—或⑶200dim的，是⑶105+且SSEA4+的，而且同時α -平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL的表達陰性、NG2的表達陽性、骨保護素的表達陽性或顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。在另一個更加具體的實施方案中，所述細胞群是 CD20(T或0)200^的；是CD105+、SSEA3+、SSEA4+的，α -平滑肌肌動蛋白的表達陰性、RANKL 的表達陰性、NG2的表達陽性、骨保護素的表達陽性，和/或顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。在具體的實施方案中，所述群中的至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、 90%或95%的細胞是CD20(T的。本發明進一步提供了分離的OPAC群，其中通過如下步驟來生產所述群從胎盤中分離絨毛膜組織，其中所述絨毛膜組織不是絨毛膜裙組織(無絨毛的)；用組織破裂酶消化分離的絨毛膜組織，以獲得包含OPAC的絨毛膜細胞群；和從所述絨毛膜細胞中分離所述 OPAC0在一個具體的實施方案中，組織破裂酶是胰蛋白酶、分散酶或膠原酶。在各種實施方案中，消化絨毛膜組織獲得的細胞群內包含的絨毛膜幹細胞佔所述絨毛膜細胞群的至少約 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少 99. 5%0 包含OPAC的分離的細胞群，例如OPAC群，可以與其它細胞區分開來，例如，⑶200+ 非dim胎盤源貼壁細胞(本發明稱作PDAC )，如在例如美國專利號7，468，276和7，255，879 以及美國專利公開號2007/02753621中描述的，其公開內容全文在此通過引用併入本發明，這通過例如基因譜顯示。PDAC 被識別為例如來自胎盤或臍帶的⑶10+、⑶34_、⑶105+、 ⑶200+非dim細胞，其附著到組織培養表面上，例如組織培養塑料製品上。PDAC 可以進一步表徵為來自胎盤或臍帶的⑶10+、⑶34_、⑶45_、⑶90+、⑶105+且⑶200+的細胞，其附著到組織培養表面上，例如組織培養塑料製品上。在一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC 組成。 本發明描述的OPAC可以基於一個或多個基因的表達與PDAC 區分開來，這些基因的表達或表達程度相對於PDAC 對OPAC是特異性的。在一個實施方案中，例如，本發明提供了包含OPAC的細胞群，其中當OPAC和所述胎盤幹細胞在相等條件下生長時，所述細胞群與不是滋養層或細胞滋養層的相等數目的貼壁CD200+非dim胎盤幹細胞(PDAC )相比以可檢測的較高水平(例如至少高兩倍的水平)表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括BMP6(骨形態發生蛋白6 ；參見例如，GenBank登錄號NM_001718)、⑶Hll (鈣粘蛋白11，2型，成骨細胞鈣粘蛋白；參見例如，GenBank登錄號NM_001797)、C0L10A1 (膠原，X型，α 1 ；參見例如，GenBank登錄號NM_000493)、C0L14A1 (膠原，XIV型，α 1 ；參見例如，GenBank登錄號NM_021110)、C0L15A1 (膠原，XV型，α ；參見例如，GenBank登錄號 NM_001855)、COLlAl (膠原，I 型，α 1 ；參見例如，GenBank 登錄號 NM_000088)、C0L1A2 (膠原，I型，α2 ；參見例如，GenBank登錄號NM_000089)、C0L3A1(膠原，III型，α 1 ；參見例如，GenBank登錄號NM_000090)、C0L4A3 (膠原，IV型，α 3 ；參見例如，GenBank登錄號 NM_000091)、C0L5A1 (膠原，V 型，α 1 ；參見例如，GenBank 登錄號 NM_000093)、CSF3 (集落刺激因子3 (粒細胞)；參見例如，GenBank登錄號NM_000759)、CTSK(組織蛋白酶K ；參見例如，GenBank登錄號NM_000396)、IGFlR(胰島素樣生長因子1受體；參見例如，GenBank 登錄號匪_00087幻、MINPPl (多重肌醇多磷酸組氨酸磷酸酶1 ；參見例如，GenBank登錄號 NM_004897)、MMP2 (基質金屬蛋白酶2 (也稱作明膠酶A，72kDa明膠酶，72kDaIV型膠原酶)； 參見例如，GenBank登錄號NM_004530)、MMP9 (基質金屬肽酶9 (也稱作明膠酶B，92kDa明膠酶，92kDa IV型膠原酶)；參見例如，GenBank登錄號NM_004994) ,MSXl (msh同源框1 ；參見例如，GenBank登錄號NM_002448)、SMADl (SMAD家族成員1 ；參見例如，GenBank登錄號 ΝΜ_001003688)、SMAD3 (SMAD 家族成員 3 ；參見例如，GenBank 登錄號 NM_005902)、TGFB3 (轉化生長因子，β 3 ；參見例如，GenBank登錄號NM_003239)、TGFBRl (轉化生長因子，β受體1;參見例如，GenBank登錄號ΝΜ_004612)和VEGFB (血管內皮生長因子B ；參見例如， GenBank登錄號ΧΜ_001128909)中的一個或多個，或全部，這通過例如來自實時定量PCR的 Ct值來評估。在一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。在一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，其中當所述OPAC和所述胎盤幹細胞在生長培養基中培養時，所述細胞群與不是滋養層或細胞滋養層的相等數目的貼壁⑶200+非dim胎盤幹細胞相比以可檢測的較高水平(例如至少高兩倍的水平)表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括BMP3(骨形態發生蛋白3 ；參見例如，GenBank 登錄號 NM_001201)、CDHl 1、C0L10A1、C0L14A1、C0L15A1、DMPl (牙本質基質酸性磷蛋白 1 ； 參見例如，GenBank登錄號NG_008988)、DSPP (牙本質涎磷蛋白；參見例如，GenBank登錄號 ΝΜ_014208)、ENAM (釉蛋白；參見例如，GenBank登錄號NM_031889)、FGFR2 (成纖維細胞生長因子受體2 ；參見例如，GenBank登錄號NM_000141) ,MMPlO (基質金屬蛋白酶10 (基質分解素2)；參見例如，GenBank登錄號NM_002425)、TGFB3、和/或TGFBRl中的一個或多個，或全部，這通過例如來自實時定量PCR的Ct值來評估。在一個具體的實施方案中，所述生長培養基是α MEM/20%胎牛血清，包含100單位/mL青黴素、100 μ g/mL鏈黴素和2mM L-穀氨醯胺。在一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，其中當所述OPAC和所述胎盤幹細胞在成骨培養基中培養時，所述細胞群例如OPAC與不是滋養層或細胞滋養層的相等數目的貼壁CD200+非dim胎盤幹細胞相比以可檢測的較高水平(例如至少高兩倍的水平)表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括AMBN(成釉蛋白(釉基質蛋白)；參見例如，GenBank登錄號NM_031889)、BMP2 (骨形態發生蛋白2 ；參見例如，GenBank 登錄號NM_001200)、CALCR(降鈣素受體；參見例如，GenBank登錄號NM_001742)、CDH11、 COLl IAl (膠原 XI 型，α ； NM_001854)、C0L14A1、C0L15A1、C0L2A1 (膠原 II 型，α 1 ；參見例如，GenBank 登錄號 NM_001844)、CSF2 (集落刺激因子 2 ；NM_000758)、CSF3、DMPU DSPP, ENAM、FGF3、GDFlO (生長分化因子10 ；參見例如，GenBank登錄號NM_004962)、IGFl (胰島素樣生長因子1 ；參見例如，GenBank登錄號NM_000618)、ITGAl (整聯蛋白，α 1 (CD49)；參見例如，GenBank 登錄號 NM_181501)、ITGA2(整聯蛋白，α 2 (CD49B)；參見例如，GenBank 登錄號ΝΜ_002203)、ΜΜΡ10、ΜΜΡ8 (基質金屬蛋白酶8 (中性粒細胞膠原酶)；參見例如，GenBank登錄號NM_002424)、MMP9、PDGFA(血小板源生長因子A ；參見例如，GenBank登錄號 XM_001126441)、SMAD1、TGFB3、TGFBR1 和 / 或 TGFBR2 (轉化生長因子 β，受體 2 ；參見例如，GenBank登錄號ΝΜ_0010Μ847)中的一個或多個，或全部，這通過例如來自實時定量PCR 的Ct值來評估。在一個具體的實施方案中，所述成骨培養基是α MEM/20%胎牛血清，包含 100單位/mL青黴素、100μ g/mL鏈黴素、2mM L-穀氨醯胺、50 μ g/mL抗壞血酸、和IOOnM地塞米松。在一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，其中不管所述OPAC和所述胎盤幹細胞是在生長培養基中還是在成骨培養基中培養，所述細胞群例如OPAC與不是滋養層或細胞滋養層的相等數目的貼壁CD200+非dim胎盤幹細胞相比以可檢測的較高水平(例如至少高兩倍的水平)表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括CDH11、 C0L14A1、C0L15A1、DMPl、DSPP, ENAM、MMP10、TGFB3 和 / 或 TGFBRl 中的一個或多個，或全部，這通過例如來自實時定量PCR的Ct值來評估。在一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，其中當所述OPAC和所述胎盤幹細胞在生長培養基中培養時，所述細胞群例如OPAC與不是滋養層或細胞滋養層的相等數目的貼壁CD200+非dim胎盤幹細胞相比以可檢測的較低水平(例如至少低兩倍的水平)表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括AHSG(a-2-HS-糖蛋白；參見例如，GenBank登錄號匪_00162幻、ALPL (鹼性磷酸酶，肝臟/骨/腎臟；參見例如，GenBank 登錄號NM_000478)、EGF(表皮生長因子；參見例如，GenBank登錄號NM_001963) ,FLTl (fms 相關的酪氨酸激酶1 (血管內皮生長因子/血管通透性因子受體)；參見例如，GenBank登錄號NM_002019)、IGF2、ITGA2、ITGAM(整聯蛋白，α M(補體成分3受體3亞基)；參見例如， GenBank登錄號匪_00063幻、SCARBl (清道夫受體B類，成員1 ；參見例如，GenBank登錄號 NM_005505)、S0X9(SRY(性別決定區 Y)-盒 9 ；參見例如，GenBank 登錄號匪_000；346)、TNF、 TWISTl (扭曲同系物1 ；以前稱作瞼裂狹小、倒轉型內眥贅皮和上瞼下垂3，尖頭並指趾畸形 3 ；參見例如，GenBank登錄號NM_000474) ,VCAMl (血管細胞粘附分子1 ；參見例如，GenBank 登錄號NM_001078)和/或VDR中的一個或多個，或全部，這通過例如來自實時定量PCR的 Ct值來評估。在一個具體的實施方案中，所述生長培養基是成骨培養基，是αΜΕΜ/20%胎牛血清，包含100單位/mL青黴素、100 μ g/mL鏈黴素和2mM L-穀氨醯胺。在一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，其中當所述OPAC和所述胎盤幹細胞在成骨培養基中培養時，所述細胞群例如OPAC與不是滋養層或細胞滋養層的相等數目的貼壁CD200+非dim胎盤幹細胞相比以可檢測的較低水平(例如至少低兩倍的水平)表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括BGN、COLl IAl、COMP (軟骨寡聚基質蛋白)、FGF1和/或VCAMl中的一個或多個，或全部，這通過例如來自實時定量PCR的Ct 值來評估。在一個具體的實施方案中，所述成骨培養基是成骨培養基，是α MEM/20%胎牛血清，包含100單位/mL青黴素、100 μ g/mL鏈黴素、2mM L-穀氨醯胺、50 μ g/mL抗壞血酸、和 IOOnM地塞米松。在一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，其中不管所述OPAC和所述胎盤幹細胞是在生長培養基中還是在成骨培養基中培養，所述細胞群例如OPAC與不是滋養層或細胞滋養層的相等數目的貼壁CD200+非dim胎盤幹細胞相比以可檢測的較低水平(例如至少低兩倍的水平)表達VCAM1，這通過例如來自實時定量PCR的Ct值來評估。 在一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。基因譜也顯示，包含OPAC的分離細胞群例如OPAC群，可以與間充質幹細胞例如骨髓源間充質幹細胞區分開來。在一個實施方案中，例如，本發明提供了包含OPAC的細胞群，其中當OPAC和所述幹細胞在相等條件下生長時，所述細胞群例如OPAC與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較高水平(例如至少高兩倍的水平)表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括BMP4、BMP6、CD36、CDHlU C0L14A1、C0L15A1、 COLlAl、C0L3A1、C0L5A1、CSF2、CTSK、FGF2、FGFRl、FLTl、ITGAl、MINPPl、MMP9、MSXl、PDGFA、 SERPINH1、TGFB3和TGFBRl中的一個或多個，或全部，這通過例如來自實時定量PCR的Ct值來評估。在一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，其中當OPAC和所述間充質幹細胞在生長培養基中培養時，所述細胞群例如OPAC與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較高水平(例如至少高兩倍的水平)表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括 BMP4、CALCR、CD36、CDHl 1、C0L12A1、C0L14A1、C0L15A1、C0L3A1、C0L5A1、 DMPl、DSPP, FLTl、MSXl、PDGFA, TGFB3、TGFBRl 和 / 或 TUFTl 中的一個或多個，或全部，這通過例如來自實時定量PCR的Ct值來評估。在一個具體的實施方案中，所述生長培養基是成骨培養基，是α MEM/20%胎牛血清，包含100單位/mL青黴素、100 μ g/mL鏈黴素和2mM L-穀氨醯胺。在一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，其中當OPAC和所述間充質幹細胞在成骨培養基中培養時，所述細胞群例如OPAC與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較高水平(例如至少高兩倍的水平)表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括 AMBN、CALCR、COL14A1、COL15A1、CSF3、DMP1、DSPP、ITGA1、ITGA2、MMP10、 MMP9、MSXl、PDGFA, TGFBl、TGFB3、TGFBRl 和 / 或 TGFBR2 中的一個或多個，或全部，這通過例如來自實時定量PCR的Ct值來評估。在一個具體的實施方案中，所述成骨培養基是成骨培養基，是α MEM/20%胎牛血清，包含100單位/mL青黴素、100 μ g/mL鏈黴素、2mM L-穀氨醯胺、50 μ g/mL抗壞血酸、和IOOnM地塞米松。在一個具體的實施方案中，細胞群基本由 OPAC組成。在一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，其中不管所述OPAC和所述間充質幹細胞是在生長培養基中還是在成骨培養基中培養，所述細胞群例如OPAC與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較高水平(例如至少高兩倍的水平)表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括CALCR、C0L14A1、C0L15A1、DMPl、DSPP、MSXl、 PDGFA, TGFB3和/或TGFBRl中的一個或多個，或全部，這通過例如來自實時定量PCR的Ct 值來評估。在另一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，其中當OPAC和所述間充質幹細胞在生長培養基中培養時，所述細胞群例如OPAC與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較低水平(例如至少低兩倍的水平)表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括ALPL、BGLAP、IGF2、ITGA2、ITGAM、SCARBl和/或SOXl中的一個或多個， 或全部，這通過例如來自實時定量PCR的Ct值來評估。在一個具體的實施方案中，所述生
24長培養基是成骨培養基，是α MEM/20%胎牛血清，包含100單位/mL青黴素、100 μ g/mL鏈黴素和2mM L-穀氨醯胺。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，其中當OPAC和所述間充質幹細胞在成骨培養基中培養時，所述細胞群與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較低水平(例如至少低兩倍的水平)表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括 AHSG、ALPL, BGLAP, BGN、BMP3、BMP5、CD36、C0L10A1、COLl IAl、 C0L12A1、C0L2A1、C0L4A3、COMP, EGF、FGF1、FGFR2、IGF2、MMP8、PHEX, RUNX2 (runt-相關轉錄因子 2 ；參見例如，GenBank 登錄號 NM_001015051)、SCARBl、SOXl、VCAMl 和 / 或 VEGFB 中的一個或多個，或全部，這通過例如來自實時定量PCR的Ct值來評估。在一個具體的實施方案中，所述成骨培養基是成骨培養基，是α MEM/20%胎牛血清，包含100單位/mL青黴素、 100 μ g/mL鏈黴素、2mM L-穀氨醯胺、50 μ g/mL抗壞血酸、和IOOnM地塞米松。在一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，其中不管所述OPAC和所述間充質幹細胞是在生長培養基中還是在成骨培養基中培養，所述細胞群例如OPAC與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較低水平(例如至少低兩倍的水平)表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括ALPL、BGLAP、IGF2、SCARBl和/或S0X9中的一個或多個，或全部，這通過例如來自實時定量PCR的Ct值來評估。在另一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，其中不管所述0PAC、所述胎盤幹細胞、和所述骨髓源間充質幹細胞是在生長培養基中還是在成骨培養基中培養， 所述細胞群例如OPAC與相等數目的貼壁CD200+非dim胎盤幹細胞和相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較高水平(例如至少高兩倍的水平)表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括C0L14A1、C0L14A2、DMP、DSPP, TGFB3和/或TGFBRl中的一個或多個，或全部，這通過例如來自實時定量PCR的Ct值來評估。在另一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。基因譜也確認，包含OPAC的分離的細胞群例如OPAC群可以與人真皮成纖維細胞區分開來。在一個實施方案中，例如，本發明提供了包含OPAC的細胞群，其中當OPAC和所述成纖維細胞在相等條件下生長時，所述細胞群與相等數目的真皮成纖維細胞相比以可檢測的較高水平(例如至少高兩倍的水平)表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括 BMP4、BMP6、CDHl 1、C0L14A1、C0L15A1、COLlAl、C0L3A1、C0L5A1、FLT1、IGF1R、ITGAl、 MINPPl、PDGFA,SERPINH1、SMAD3、TGFBl、TGFB2、TGFB3、TGFBRl、TNF、TUFTl、VCAMl 和 VEGFA 中的一個或多個，或全部，其中這些基因在OPAC中的表達比在成纖維細胞中要高，這通過例如來自實時定量PCR的Ct值來評估。在一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，其中在所述細胞群中， 例如在OPAC中，一個或多個基因在成骨培養基中的表達相對於在生長培養基的表達的增加，比在相等數目的貼壁CD200+非dim胎盤幹細胞中所述一個或多個所述基因在成骨培養基中的表達相對於在生長培養基中的表達的增加，至少高十倍，其中所述貼壁CD200+胎盤幹細胞不是滋養層或細胞滋養層，而且其中所述一個或多個基因包括BMP2、CSF3、ITGA2、 MMP9、MMP10、和/或TGFB2中的一個或多個，或全部。在一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，其中在所述細胞群中， 例如在OPAC中，一個或多個基因在成骨培養基中的表達相對於在生長培養基中的表達的增加，比在相等數目的貼壁CD200+非dim胎盤幹細胞中所述一個或多個所述基因在成骨培養基中的表達相對於在生長培養基中的表達的增加，至少低十倍，其中所述貼壁 ⑶200+非dim胎盤幹細胞不是滋養層或細胞滋養層，而且其中所述一個或多個基因包括 COLlAU COLlIAU C0L4A3、C0L5A1、COMP(軟骨寡聚基質蛋白；參見例如，GenBank登錄號 NM_000095)、CTSK、FGFl (成纖維細胞生長因子1 ；參見例如，GenBank登錄號NM_000800)、 和/或FGFR2中的一個或多個，或全部。在一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，其中在所述細胞群中， 例如在OPAC中，一個或多個基因在成骨培養基中的表達相對於在生長培養基中的表達的增加，比在相等數目的骨髓源間充質幹細胞中所述一個或多個所述基因在成骨培養基中的表達相對於在生長培養基中的表達的增加，至少高十倍，而且其中所述一個或多個基因包括〇5 3、16 2、叮642、叮6々3、匪 9、匪 10、和/或16 82中的一個或多個，或全部。在一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，其中在所述細胞群中， 例如在OPAC中，一個或多個基因在成骨培養基中的表達相對於在生長培養基中的表達的增加，比在相等數目的骨髓源間充質幹細胞中所述一個或多個所述基因在成骨培養基中的表達相對於在生長培養基中的表達的增加，至少低十倍，而且其中所述一個或多個基因包括ALPL(鹼性磷酸酶，肝臟/骨 / 腎臟)、CD36、C0L10A1、C0L11A1、C0L12A1、C0L1A1、C0L4A3、 0)10\0^106 1、和/或？6 1 2中的一個或多個，或全部。在一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，其中在所述細胞群中， 例如在OPAC中，一個或多個基因在成骨培養基中的表達相對於在生長培養基中的表達的增加，比在相等數目的成纖維細胞中所述一個或多個所述基因在成骨培養基中的表達相對於在生長培養基中的表達的增加，至少高十倍，而且其中所述一個或多個基因包括BMP2、 CSF2、CSF3、IGFU ITGA2、MMP9和/或MMPlO中的一個或多個，或全部。在一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，其中在所述細胞群中， 例如在OPAC中，一個或多個基因在成骨培養基中的表達相對於在生長培養基中的表達的增加，比在相等數目的成纖維細胞中所述一個或多個所述基因在成骨培養基中的表達相對於在生長培養基中的表達的增加，至少低十倍，而且其中所述一個或多個基因包括BMP4、 0^12々1、0)1^、？6 1、和/或匪 8中的一個或多個，或全部。在一個具體的實施方案中，細胞群基本由OPAC組成。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，例如OPAC群，其中編碼基質金屬肽酶9 (MMP9)的基因在所述OPAC中在成骨培養基中被誘導時與MMP9在生長培養基中的表達的比值，和所述MMP9在所述成骨培養基中被誘導時與MMP9在所述生長培養基中的表達的比值相比，至少大2、3、4或5個數量級，這通過例如來自實時定量PCR的Ct值來評估。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，例如OPAC群，其中所述群與相等數目的貼壁CD200+非dim胎盤幹細胞相比至少高十倍地表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因是CHRD (腱蛋白；參見例如，GenBank登錄號NM_003741)、⑶F7 (生長分化因子7 ；參見例如，GenBank登錄號NM_182828)、IGFBP3 (胰島素樣生長因子結合蛋白 3 ；參見例如，GenBank登錄號NM_000598)、和/或INHA(抑制素α ；參見例如，GenBank登錄號ΝΜ_002191)。在另一個實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，例如OPAC群， 其中所述群與相等數目的貼壁CD200+(非dim)胎盤幹細胞相比以至少低十倍的水平表達 TGFB2。在其他實施方案中，本發明提供了包含OPAC的細胞群，例如OPAC群，其中OPAC表達α -平滑肌肌動蛋白，這通過免疫螢光染色可檢測到，而且其中所述細胞與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以大約相同水平或增加的水平表達纖連蛋白-1基因(FNl)和/ 或 TGF- β 2 基因(TGFB2)。這些基因的表達水平可以用來確認OPAC群的身份，以識別包含至少大量OPAC的細胞群等。OPAC群可以是無性系的，例如由單一 OPAC擴增的OPAC群，或混合的OPAC群，例如僅包含由多個OPAC擴增的OPAC的細胞群，或包含OPAC和至少一種其它細胞類型的細胞群。這些基因的表達水平可以用來篩選OPAC的群。例如，如果在來自細胞群的樣本中這些基因中的一個或多個的表達比在相等間充質幹細胞群中的表達顯著升高，那麼可以篩選細胞例如克隆擴增的細胞的群。這樣的篩選可以對來自大量胎盤幹細胞或絨毛膜幹細胞群的群，來自大量其身份未知的細胞群的群等。OPAC和包含OPAC的細胞群，可以根據一個或多個這樣的基因的表達水平與所述一個或多個基因在間充質幹細胞對照中的表達水平相比較來篩選。在一個實施方案中，所述一個或多個基因在包含相等數目間充質幹細胞的樣本中的表達水平被用作對照。在另一個實施方案中，對在某些條件下測試的0PAC，對照是代表所述條件下所述一個或多個基因在間充質幹細胞中的表達水平的數值。OPAC和包含OPAC的細胞群也可以根據一種或多種分泌的蛋白的表達與對照(例如胎盤幹細胞、間充質幹細胞或成纖維細胞)中的表達水平相比較來篩選。在一個實施方案中，根據核心蛋白聚糖、表皮調節素、IGFBP-3、IGFBP-6、IL-2 Ra、IL-17RC、IL-27、潛在的 TGF-β 結合蛋白 1 (LTBP)、NCAM-I、Smad4、TFPI、TGF-β R1/ALK5 和 ΤΙΜΡ-2 中的一種或多種的分泌，OPAC可以與胎盤幹細胞、間充質幹細胞或成纖維細胞區分開來，與貼壁 CD200+(非dim)胎盤幹細胞、間充質幹細胞或成纖維細胞相比，它們是OPAC所獨有的。在另一個實施方案中，由OPAC但不由PDAC 分泌的蛋白包括一種或多種組織因子、卵泡抑素樣 1、IGF-IIR,sFRP-4 和 TSG-6。上面描述的OPAC的分離的群和OPAC群一般可以包含大約、至少、或不超過 IX IO5,5 X IO5UX IO6,5 X IO6UX IO7,5 X IO7UX IO8,5 X IO8UX 10\5 X 10\1X IO10, 5 X ΙΟ10、IX IO11 或更多的 OPAC05. 1. 1.3在培養中生長OPAC的生長，和任意哺乳動物細胞一樣，部分取決於選擇供生長的特定培養基。在
27最適條件下，OPAC典型地在1-3天中數目倍增。在培養期間，本發明提供的OPAC在培養中附著到底物上，例如組織培養容器表面(例如，組織培養皿塑料製品、纖連蛋白塗層的塑料製品等)上，並形成單層。5. 1. 2獲得OPAC的方法5. 1. 2. 1細胞收集組合物本發明進一步提供了收集和分離OPAC的方法。一般地，OPAC是使用生理學可接受的溶液例如細胞收集組合物從絨毛膜獲得的。細胞收集組合物在美國申請公開號 2007-0190042中詳細描述，其公開內容全文通過引用併入本發明。細胞收集組合物可以包含任何適合收集和/或培養細胞例如OPAC的生理學可接受的溶液，例如鹽水溶液(例如，磷酸鹽緩衝鹽水、Kreb' s溶液、改良的Kreb' s溶液、 Eagle' s 溶液、0. 9% NaCl 等)、培養基(例如 DMEM、H. DMEM 等)等。細胞收集組合物可以包含一種或多種成分，其有利於貯存0PAC，即從收集的時間到培養的時間防止OPAC死亡、或延遲OPAC的死亡、降低細胞群中死亡的OPAC數目等。這樣的成分可以是例如凋亡抑制劑(例如，半胱天冬酶抑制劑或JNK抑制劑)；血管擴張劑(例如，硫酸鎂、抗高血壓藥物、心房鈉尿肽(ANP)、促腎上腺皮質激素、促腎上腺皮質激素釋放激素、硝普鈉、胼苯噠嗪、三磷酸腺苷、腺苷、吲哚美辛或硫酸鎂、磷酸二酯酶抑制劑等)；壞死抑制劑(例如，2-(1Η-吲哚-3-基)-3-戊基氨基-馬來醯亞胺、吡咯烷二硫代氨基甲酸酯、或氯硝西泮)；TNF-α抑制劑；和/或載氧全氟化碳(例如，全氟辛基溴、全氟癸基溴
寸J ο細胞收集組合物可以包含一種或多種組織降解酶，例如，金屬蛋白酶、絲氨酸蛋白酶、中性蛋白酶、核糖核酸酶、或脫氧核糖核酸酶等。這樣的酶包括但不限於膠原酶(例如， 膠原酶I、II、III或IV，來自溶組織梭菌(Clostridium histolyticum)的膠原酶等)；分散酶、嗜熱菌蛋白酶、彈性蛋白酶、胰蛋白酶、LIBERASE、透明質酸酶等。細胞收集組合物可以包含殺菌或抑菌有效量的抗生素。在某些非限制性實施方案中，抗生素是大環內酯類(例如妥布黴素)、頭孢菌素(例如，頭孢氨苄、頭孢拉定、頭孢呋辛、頭孢丙烯、頭孢克洛、頭孢克肟或頭孢羥氨苄)、克拉黴素、紅黴素、青黴素(例如青黴素 V)或喹諾酮(例如，氧氟沙星、環丙沙星或諾氟沙星)、四環素、鏈黴素等。在一個特定的實施方案中，抗生素對革蘭氏⑴和/或革蘭氏㈠細菌，例如，銅綠假單胞菌O^eudomonas aeruginosa) ^^^^ ! (Staphylococcus aureus)生。細胞收集組合物也可以包含一種或多種以下化合物腺苷(約ImM到約50mM)； D-葡萄糖(約20mM到約IOOmM)；鎂離子(約ImM到約50mM)；分子量大於20，000道爾頓的大分子，在一個實施方案中，以足以保持內皮完整和細胞生存能力的量存在(例如，合成的或天然存在的膠體，多糖例如葡聚糖或聚乙二醇，以約25g/l到約100g/l、或約40g/l到約60g/l存在)；抗氧化劑(例如，丁基羥基苯甲醚、丁基羥基甲苯、穀胱甘肽、維生素C或維生素E，以約25 μ M到約100 μ M存在)；還原劑(例如，N-乙醯半胱氨酸，以約0. ImM到約5mM存在)；防止鈣進入細胞的藥劑(例如，異搏定，以約2μΜ到約25μΜ存在)；硝酸甘油(例如，約0.05g/L到約0.2g/L)；抗凝劑，在一個實施方案中，以足以幫助防止殘留血凝結的量存在(例如，肝素或水蛭素，以濃度約1000單位/1到約100，000單位/1存在)；或包含氨氯吡咪的化合物(例如，氨氯吡咪、乙基異丙基氨氯吡咪、六亞甲基氨氯吡咪、二甲基氨氯吡咪或異丁基氨氯吡咪，以約1. 0 μ M到約5 μ M存在)。5. 1. 2. 2胎盤的收集和處理一般地，人類胎盤在產後排出不久後回收。在一個優選的實施方案中，胎盤在患者知情同意後，且在取得患者的完整病史並與胎盤相關聯後，從患者處回收。優選地，病史延續到分娩以後。這樣的病史可以用來協調由其分離的絨毛膜或OPAC的後續應用。例如， 根據病史，OPAC可以作為個體化藥物，用於與獲得絨毛膜的胎盤相關聯的嬰兒，或嬰兒的雙親、兄弟姐妹或其它親屬。在某些實施方案中，在回收OPAC前，從將要去除絨毛膜的胎盤中去除臍帶血和胎盤血。在某些實施方案中，分娩後，回收胎盤中的臍帶血。胎盤可以提交給常規臍帶血回收程序。典型地使用針或插管，在重力的幫助下將胎盤放血(參見例如，Anderson，美國專利號5，372，581 ；Hessel等，美國專利號5，415，665)。針或插管通常放置在臍靜脈中，而且胎盤可以被輕揉以幫助從胎盤中排出臍帶血。這樣的臍帶血回收可以被商業執行，例如， LifeBank USA，Cedar Knolls, N. J. , ViaCord, Cord Blood Registry and Cryocell。優選地，胎盤被重力排空，不需要進一步操作，使得臍帶血回收期間，組織破壞最小化。典型地，將胎盤從分娩或生育室運輸到另一場所，例如實驗室，以回收臍帶血和收集細胞。胎盤優選在無菌隔熱的運輸設備中運輸(將胎盤溫度保持在20-28°C之間)，例如，將夾緊了近端臍帶的胎盤放置在無菌的帶拉鏈鎖的塑膠袋中，然後將其放置在隔熱容器中。在另一個實施方案中，在臍帶血收集試劑盒中運輸胎盤，基本如2005年9月19日提交的未決的美國專利申請號11/230,760中所述。優選地，在分娩四到二十四小時後，將胎盤送達實驗室。在某些實施方案中，在臍帶血回收前將近端臍帶夾緊，優選地，將插入到胎盤面內4-5cm(釐米)處夾緊。在其它實施方案中，在臍帶血回收後、胎盤的進一步處理前， 夾緊近端臍帶。在OPAC收集前，胎盤可以在室溫或5°C到25°C (攝氏度)溫度下，在無菌條件下貯存。在灌注胎盤以去除任何殘留的臍帶血前，胎盤可以貯存比四十八小時更長的時間，而且優選地貯存四到二十四小時的時間。胎盤優選地在抗凝溶液中貯存，溫度5°C到25°C (攝氏度)。適合的抗凝溶液是本領域熟知的。例如，肝素或華法林鈉溶液可以被使用。在一個優選的實施方案中，抗凝溶液包含肝素溶液(例如，w/V，l 1000溶液中)。放過血的胎盤優選地在OPAC收集前貯存不超過36小時。5. 1. 2. 3絨毛膜組織的物理破壞和酶消化在一個實施方案中，通過器官的物理破壞，例如酶消化，從哺乳動物胎盤收集 OPAC0例如，當與本發明提供的細胞收集組合物接觸時，絨毛膜或其一部分可以被例如壓碎、剪切、剁碎、切丁、切塊、浸漬等，並將得到的組織隨後用一種或多種酶消化。絨毛膜或其一部分也可以被物理破壞並用一種或多種酶消化，並然後將得到的材料浸入細胞收集組合物中，或與其混合。可以使用任何物理破壞方法，只要該破壞方法讓所述器官中留下大量、更加優選地大多數、而且更加優選地至少約60%、70%、80%、90%、95%、98%、或99% 的存活細胞，這通過例如臺盼藍排除法確定。典型地，OPAC可以通過破壞小塊絨毛膜獲得， 例如，體積約 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、 600、700、800、900或約1000立方毫米的胎盤組織塊。優選的細胞收集組合物包含一種或多種組織破裂酶。絨毛膜的酶消化優選地使用酶的組合，例如基質金屬蛋白酶和中性蛋白酶的組合，例如膠原酶和分散酶的組合。在其他實施方案中，絨毛膜組織的酶消化使用基質金屬蛋白酶、中性蛋白酶和供消化透明質酸的粘液分解酶的組合，例如膠原酶、分散酶、和透明質酸酶的組合，或LIBERASE (Boehringer Mannheim Corp. , Indianapolis, Ind.)和透明質酸酶的組合。可以用來破壞絨毛膜組織的其它酶包括木瓜蛋白酶、脫氧核糖核酸酶、絲氨酸蛋白酶，例如胰蛋白酶、糜蛋白酶、或彈性蛋白酶。絲氨酸蛋白酶可以被血清中的α 2微球蛋白抑制，因此消化使用的介質通常不含血清。EDTA和脫氧核糖核酸酶一般在酶消化程序中被使用，以增加細胞回收的效率。消化物(由酶消化得到的組織和細胞)優選地被稀釋，以避免OPAC被捕獲在粘性消化內。組織消化酶的典型濃度包括例如，膠原酶I和膠原酶IV :50-200U/mL,分散酶 1-lOU/mL，彈性蛋白酶10-100U/mL。蛋白酶可以組合使用，即兩種或多種蛋白酶在同一個消化反應中使用，或者可以相繼使用，以釋放0PAC。例如，在一個實施方案中，絨毛膜組織首先用適量的2mg/ml膠原酶I消化30分鐘，接著用0. 25%胰蛋白酶消化，37°C，10分鐘。絲氨酸蛋白酶優選地在其它酶使用後連續地使用。在一個具體的實施方案中，OPAC如下獲得從絨毛膜組織中分離羊膜；剁碎絨毛膜組織，例如剁碎成大約Imm3的塊；在分散酶II中，例如約1、2、3、4或5U/mL，例如2. 4U/ mL，消化組織足夠時間，例如約1小時；用約100、200、300、400或500U/mL膠原酶II，例如約270U/ml，消化足夠時間，例如約1小時，接著是酶中和，收集單一細胞，並在合適的培養基中培養絨毛膜細胞，例如20% FBS/ α MEM。在另一個實施方案中，在用細胞收集組合物分離幹細胞之前，可以通過向包含幹細胞的細胞收集組合物中、或向破壞和/或消化組織的溶液中添加螯合劑，例如，乙二醇雙 (2-氨基乙基醚)-N，N，N' N'-四乙酸(EGTA)或乙二胺四乙酸(EDTA)進一步破壞組織。應該理解，當完整絨毛膜或絨毛膜的一部分包含胎兒和母體雙方的細胞時，收集到的OPAC可以包含源自胎兒和母體雙方來源的OPAC的混合。當絨毛膜的一部分不包含或包含可以忽略數目的母體細胞(例如羊膜)時，收集到的OPAC將包含幾乎專屬於胎兒的胎盤細胞。在一個實施方案中，OPAC如下從絨毛膜組織分離。獲得並剁碎絨毛膜組織，例如剁碎成大約l_2mm3的塊。剁碎的組織用分散酶II消化，濃度例如約lU/mL到約10U/mL，例如 2. 4U/mL，直到消化完成，例如，在37°C消化1小時。消化的組織然後用膠原酶II消化，例如約100U/mL到約1000U/mL，例如約27U/mL，直到消化完成，例如，在37°C消化約1小時。通過離心收集細胞，洗滌，在玻連蛋白塗層或層粘連蛋白塗層的組織培養容器上培養，在10% FBS/DMEM或20% FBS/ α MEM中培養大約6天。在6天的培養中，去除未貼壁的細胞，讓貼壁細胞增殖。當細胞達到約80%到90%的融合時，使用例如胰蛋白酶，移走細胞並轉移到玻連蛋白塗層或層粘連蛋白塗層的組織培養容器中。當細胞在層粘連蛋白塗層的容器上初代培養時，轉移到層粘連蛋白塗層的培養容器中是優選的；類似地，當細胞在玻連蛋白塗層的容器上初代培養時，轉移到玻連蛋白塗層的培養容器中是優選的。細胞在轉移到第二塊板前任選地冷凍貯存。細胞通過例如流式細胞術分析，並確定為例如⑶34_、OT105+、⑶200_和 /或⑶200-的，鹼性磷酸酶(AP)、α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)和骨保護素(OP)陽性的。因此，一方面，本發明提供了分離成骨胎盤貼壁細胞(OPAC)的方法，包括連續地用分散酶II然後用膠原酶II消化絨毛膜組織，以產生細胞群；在第一個玻連蛋白塗層的表
30面或層粘連蛋白塗層的表面培養所述細胞群約六天，其中所述細胞群包含貼壁細胞和未貼壁細胞；和去除未貼壁細胞；將貼壁細胞轉移到第二個玻連蛋白塗層的表面或層粘連蛋白塗層的表面，其中所述貼壁細胞是0PAC。在具體的實施方案中，所述OPAC是CD34_、CD105+、 ⑶200dim、AP+、α -SMA+和OP+中的一項或多項的。在其他實施方案中，OPAC具有任意本發明別處描述的細胞或遺傳特徵。5. 1.3 OPAC 的培養5.1.3.1 培養基分離的OPAC或OPAC群可以用來起始或接種細胞培養。細胞一般被轉移到無菌組織培養容器中。容器優選地用玻連蛋白、纖連蛋白或兩者同時塗層。在某些其它的實施方案中，組織培養容器是未塗層的，或塗層了細胞外基質或配體例如層粘連蛋白、膠原(例如天然的或變性的)、明膠、鳥氨酸、和/或細胞外膜蛋白(例如，MATRIGEL(BD Discovery Labware, Bedford，Mass. )) 0優選地，OPAC如下獲得。通過消化絨毛膜組織，例如用分散酶II和膠原酶II如上文所述消化，獲得的包含OPAC的絨毛膜細胞在用膠原、玻連蛋白、或層粘連蛋白塗層的組織培養表面上初代培養，例如在20% FBS/ α MEM中約1_6天，接著或同時去除未貼壁的細胞；未貼壁的細胞可以去除數次，例如培養3小時、1天和6天後，或去除一次，例如培養6 天后。選擇性附著後，篩選0PAC，通過例如使用對⑶200的抗體去除⑶200+(非dim)細胞， 留下CD200di7CD200_細胞的群。OPAC可以在本領域公認的幹細胞培養可接受的任何培養基中和任何條件下培養。優選地，培養基包含血清。OPAC可以在例如DMEM-LG(Dulbecco' s改良的必需培養基，低葡萄糖)/MCDB 201 (雞成纖維細胞基本培養基)，包含ITS (胰島素-鐵傳遞蛋白-硒)、LA+BSA(亞油酸-牛血清白蛋白)、右旋糖、L-抗壞血酸、PDGF, EGF、IGF-I、和青黴素/鏈黴素；DMEM-HG (高葡萄糖)，包含10%胎牛血清(FBS) ；DMEM-HG，包含15% FBS ； IMDM(Iscove' s改良的Dulbecco 『 s培養基)，包含10% FBS、10%馬血清、和氫化可的松； M199，包含10% FBS、EGF、和肝素；α -MEM (最低必需培養基)，包含10% FBS、GLUTAMAX 和慶大黴素；DMEM，包含10% FBS、GLUTAMAX 和慶大黴素；等培養基中培養。優選的培養基是 DMEM-LG/MCDB-201，包含 2% FBS、ITS、LA+BSA、右旋糖、L-抗壞血酸、PDGF、EGF、和青黴素 / 鏈霄素。可以用來培養OPAC的其它培養基包括DMEM (高或低葡萄糖)、fegle' s基本培養基、Ham' s FlO 培養基(FlO)、Ham' s F-12 培養基(F12)、Iscove 『 s 改良的 Dulbecco 『 s 培養基、間充質幹細胞生長培養基(MSCGM)、Liebovitz 『 s L-15培養基、MCDB, DMEM/F12、 RPMI 1640、高級 DMEM(Gibco)、DMEM/MCDB201 (Sigma)、和 CELL-GRO FREE。培養基可以補充一種或多種成分，包括例如血清(例如，胎牛血清(FBS)，優選地約2-15% (ν/ν)；馬(馬)血清(ES)；人血清(HS)) ； β-巰基乙醇(BME)，優選地約0.001% (ν/ν)；一種或多種生長因子，例如血小板源生長因子(PDGF)、表皮生長因子(EGF)、鹼性成纖維細胞生長因子(bFGF)、胰島素樣生長因子-I(IGF-I)、白血病抑制因子(LIF)、血管內皮生長因子(VEGF)、和促紅細胞生成素(EPO)；胺基酸，包括L-纈氨酸；和一種或多種抗生素和/或抗真菌劑，以控制微生物汙染，例如青黴素G、硫酸鏈黴素、兩性黴素B、慶大黴素、 和制黴菌素，單獨或組合添加。
OPAC可以在標準組織培養條件下培養，例如，在組織培養皿或多孔板中。OPAC也可以使用懸滴法培養。在這一方法中，OPAC在約5mL培養基中懸浮，濃度約IXlO4個細胞 /mL，而且一滴或數滴培養基被放置到組織培養容器例如IOOmL培養皿的蓋子內部。液滴可以是例如單滴或來自例如多通道移液管的多滴。蓋子被小心地翻轉，放置到包含一體積液體例如無菌PBS的皿底頂部，並培養細胞，該液體足以保持皿環境中的水分含量。5. 1. 3. 2 OPAC的擴增和增殖一旦獲得了分離的0PAC，或分離的OPAC群(例如，OPAC或OPAC群與至少約50 % 的在體內OPAC或OPAC群通常與其關聯的絨毛膜細胞分離)，該OPAC或OPAC群可以在體外增殖和擴增。例如，OPAC群可以在組織培養容器例如培養皿、燒瓶、多孔板等中培養足夠的時間，讓細胞增殖到70-90%融合，S卩，直到細胞及其後代佔據了組織培養容器的70-90% 的培養表面面積。OPAC可以在允許細胞生長的密度接種到培養容器中。例如，細胞可以在低密度 (例如，約1，000到約5，000個細胞/cm2)到高密度(例如，約50，000個或更多細胞/cm2) 接種。在一個優選的實施方案中，細胞在約0到約5%體積比CO2的空氣中培養。在一些優選的實施方案中，細胞在約2%到約25% O2的空氣中，優選地在約5%到約20% O2的空氣中培養。細胞優選地在約25°C到約40°C培養，優選地在37°C。細胞優選地在培養箱中培養。培養基可以是靜止或攪拌的，例如使用生物反應器。OPAC優選地在低氧化應激下(例如，添加穀胱甘肽、抗壞血酸、過氧化氫酶、生育酚、N-乙醯半胱氨酸等)生長。一旦獲得70% -90%融合，細胞可以傳代。例如，細胞可以使用本領域熟知的技術被酶處理，例如胰蛋白酶處理，將它們從組織培養表面分離。通過移液移走細胞並計數細胞後，將約20，000-100, 000個細胞，優選地約50，000個細胞，傳代到包含新鮮培養基的新培養容器中。典型地，新培養基和細胞轉移前的培養基是同一類型的。本文提供的是已傳代至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18、或20次或更多的胎盤細胞群。5.1.3.3 OPAC 群本發明進一步提供了 OPAC群。OPAC可以直接從來自一個或多個胎盤的絨毛膜分離。本發明提供的分離的OPAC也可以被培養和擴增，以產生OPAC群。包含OPAC的絨毛膜細胞群也可以被培養和擴增，以產生OPAC群。本發明提供的OPAC群包含0PAC，例如本發明描述的0PAC。在各種實施方案中，分離的細胞群中至少約 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、或 99%的細胞是0PAC。即OPAC群可以包含例如差不多1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、 70%、80%、90% 的非 OPAC 細胞。本發明提供了通過例如從絨毛膜篩選表達特定標記和/或特定培養或形態學特徵的細胞以生產OPAC的分離群的方法。在一個實施方案中，例如，本發明提供了生產細胞群的方法，包括篩選附著到底物上並表達CD105但不表達CD200的絨毛膜細胞；和將所述細胞與其它絨毛膜細胞分離，以形成細胞群，例如OPAC群。在一個具體實施方案中，將同時是 NG2+、骨保護素+、α平滑肌肌動蛋白陰性、和/或顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性的CD105+、 CD200—絨毛膜細胞與其它絨毛膜細胞分離。 在以上實施方案中，底物可以是任何可以在其上實現細胞例如OPAC的培養和/或篩選的表面。典型地，底物是塑料製品，例如組織培養皿或多孔板塑料製品。組織培養塑料製品可以用生物分子塗層，例如層粘連蛋白、玻連蛋白、膠原或纖連蛋白塗層。OPAC和OPAC群可以通過任何本領域已知的細胞篩選手段來篩選。例如，可以使用針對一個或多個細胞表面標記的抗體或抗體組合來篩選細胞，例如，在流式細胞術或FACS 中篩選。可以使用抗體與磁珠結合來實現篩選。特異性針對某些幹細胞相關標記的抗體是本領域己知的。例如，CD200 (Abeam)或 CD105(Abeam ；BioDesign International, Saco,ME) 等可以用來篩選OPAC或OPAC群。OPAC群可以包含並非OPAC的絨毛膜細胞，或並非絨毛膜細胞或OPAC的細胞。分離的OPAC群可以與一個或多個非OPAC細胞或非絨毛膜細胞群組合。例如， 分離的OPAC群可以與血(例如胎盤血或臍帶血)、血液源幹細胞(例如，源自胎盤血或臍帶血的幹細胞)、血液源有核細胞群、骨髓源間充質細胞、骨來源幹細胞群、未處理的骨髓、成體(身體的)幹細胞、組織內包含的幹細胞群、培養的幹細胞、完全分化的細胞(例如、軟骨細胞、成纖維細胞、羊膜細胞、成骨細胞、肌肉細胞、心臟細胞等)的群等組合。分離的OPAC群中的細胞可以與另一類型的多種細胞組合，與各個群中的總有核細胞數目相比比率為約 100，000，000 1,50, 000, 000 1,20, 000, 000 1、10，000，000 1、 5，000，000 1,2, 000, 000 1,1, 000, 000 1,500, 000 1,200, 000 1,100, 000 1、 50，000 1,20,000 1,10,000 1,5,000 1,2,000 1,1,000 1,500 1、 200 UlOO 1、50 1、20 UlO 1、5 1、2 1、1 1 ;1 2 ;1 5 ;1 10 ； 1 100 ； 1 200 ； 1 500 ； 1 1, 000 ； 1 2, 000 ； 1 5, 000 ； 1 10, 000 ； 1 20,000; 1 50, 000 ； 1 100, 000 ； 1 500, 000 ； 1 1,000，000 ;1 2, 000, 000 ； 1 5, 000, 000 ； 1 10，000，000 ;1 20，000，000 ;1 50，000，000 ；或約 1 100, 000, OOOo 分離的 OPAC 群中的細胞也可以與多種細胞類型的多種細胞組合。在一個實施方案中，分離的OPAC群與多種造血幹細胞組合。這樣的造血幹細胞可以包含在例如未處理的胎盤血、臍帶血或外周血內；來自胎盤血、臍帶血或外周血的總有核細胞中；來自胎盤血、臍帶血或外周血的分離的CD34+細胞群中；未處理的骨髓中；來自骨髓的總有核細胞中；來自骨髓的分離的CD34+細胞群中，等等。5. 1. 4 OPAC和胎盤灌注液或胎盤灌注液細胞的組合本發明提供了胎盤灌注液與分離的胎盤灌注液細胞和/或本發明提供的OPAC的組合。在一個實施方案中，例如，本發明提供了一定體積的補充了大量胎盤灌注液細胞和 /或大量OPAC的胎盤灌注液。在具體的實施方案中，例如，每毫升胎盤灌注液補充了約 IX 104、5X 104、1X 105、5X 105、1X 106、5X IO6或更多的胎盤灌注液細胞或0PAC。在另一個實施方案中，多種胎盤灌注液細胞補充了胎盤灌注液和/或0PAC。在另一個實施方案中，多種OPAC補充了胎盤灌注液和/或大量胎盤灌注液細胞。在某些實施方案中，當灌注液用來補充時，灌注液的體積是細胞(在溶液中)+灌注液總體積的約、大於約、或小於約 50%,45%,40%,35%,30%,25%,20%,15%,10%,8%,6%,4%,2%^； 當胎盤灌注液細胞用來補充多種OPAC時，胎盤灌注液細胞一般包含胎盤灌注液細胞+OPAC總數目的約、大於約、或小於約 50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%、8%、6%、4%、 2%或1%。類似地，當OPAC用來補充大量胎盤灌注液細胞時，OPAC—般包含胎盤灌注液細胞+OPAC總數目的約、大於約、或小於約50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、 10% .8^^6% .4^^2%或1%。當OPAC或胎盤灌注液細胞用來補充胎盤灌注液時，懸浮細胞在的溶液(例如，鹽水溶液、培養基等)的體積，包含灌注液+細胞總體積的約、大於約、 或小於約 50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%、8%、6%、4%、2%或 1%，其中在補充前OPAC被懸浮為約 1 X 104、5X 104、1 X 105、5X 105、1 X 106、5X 106、1 X IO7,5X IO7, 1 X 108、5X IO8或更多個細胞每毫升。本發明進一步提供了由兩個或多個來源獲得的合併胎盤灌注液，例如，來自兩個或多個胎盤並組合例如合併。這樣的合併灌注液可以包含來自每個來源的大約等體積的灌注液，或可以包含來自每個來源的不同體積。來自每個來源的相對體積可以被隨機選擇，或可以基於例如一種或多種細胞因子例如細胞因子、生長因子、激素等的濃度或量；來自每個來源的灌注液中胎盤細胞的數目；或來自每個來源的灌注液的其它特徵來選擇。來自同一胎盤的多次灌注的灌注液可以類似地被合併。類似地，本發明提供了從兩個或多個來源，例如兩個或多個胎盤和/或絨毛膜獲得並合併的胎盤灌注液細胞和0PAC。這樣的合併細胞可以包含來自兩個或多個來源的大約相等數目的細胞，或來自一個或多個合併來源的不同數目的細胞。來自每個來源的細胞的相對數目可以基於例如將要合併的細胞中一個或多個特定細胞類型的數目來選擇，例如 ⑶；34_幹細胞數目等。合併物可以包含，例如，補充了胎盤灌注液細胞的胎盤灌注液；補充了 OPAC的胎盤灌注液；補充了胎盤灌注液細胞和OPAC的胎盤灌注液；補充了胎盤灌注液的胎盤灌注液細胞；補充了 OPAC的胎盤灌注液細胞；補充了胎盤灌注液和OPAC的胎盤灌注液細胞；補充了胎盤灌注液的OPAC ；補充了胎盤灌注液細胞的OPAC ；或補充了胎盤灌注液細胞和胎盤灌注液的OPAC。在某些實施方案中，胎盤灌注液、胎盤灌注液細胞、和OPAC作為藥物級可施用單位提供。這樣的單位可以以離散體積,例如100mL、150mL、200mL、250mL、300mL、350mL、 400mL、450mL、500mL等提供。這樣的單位可以被提供成使得其包含指定數目的例如胎盤灌注液細胞、胎盤灌注液源中間體自然殺傷細胞、或兩者，例如，IX 104、5X 104、1X 105、 5 X IO5UX IO6,5 X IO6UX IO7,5 X IO7UX IO8,5 X IO8 或更多細胞每毫升，或 1X104、 5 X IO4UX IO5,5 X IO5UX IO6,5 X IO6UX IO7,5 X IO7UX IO8,5 X IO8UX 10\5 X 10\ 1 X 101(l、5 X IO10,1 X IO11或更多細胞每單位。這樣的單位可以被提供為包含指定數目的胎盤灌注液、胎盤灌注液細胞、和/或OPAC中的任意兩種或全部三種。在胎盤灌注液、胎盤灌注液細胞和/或OPAC的以上組合中，胎盤灌注液、胎盤灌注液細胞和/或OPAC中的任意一種、任意兩種或全部三種，可以對受體是自體的(即，從受體獲得)、或對受體是同源的(即，從所述受體以外的至少一個其它個體獲得)。本發明也提供了包含OPAC與胎盤灌注液細胞和/或胎盤灌注液的組合的組合物。 因此，另一方面，本發明提供了包含分離的OPAC的組合物，其中所述胎盤幹細胞是從胎盤灌注液分離的，而且其中所述OPAC包含組合物中的至少50%的細胞。在一個具體的實施方案中，所述OPAC包含組合物中的至少80%的細胞。在另一個具體的實施方案中，組合物包含分離的胎盤灌注液。在一個更加具體的實施方案中，所述胎盤灌注液與所述OPAC來自相同個體。在另一個更加具體的實施方案中，所述胎盤灌注液包含與所述OPAC來自不同個體的胎盤灌注液。在另一個具體的實施方案中，組合物包含胎盤灌注液細胞。在一個更加具體的實施方案中，所述胎盤灌注液細胞與所述OPAC來自相同個體。在另一個更加具體的實施方案中，所述胎盤灌注液細胞與所述OPAC來自不同個體。在另一個具體的實施方案中， 組合物額外包含分離的胎盤灌注液和分離的胎盤灌注液細胞，其中所述分離的灌注液和所述分離的胎盤灌注液細胞來自不同個體。在任何以上包含胎盤灌注液的實施方案的另一個更加具體的實施方案中，所述胎盤灌注液包含來自至少兩個個體的胎盤灌注液。在任何以上包含胎盤灌注液細胞的實施方案的另一個更加具體的實施方案中，所述分離的胎盤灌注液細胞來自至少兩個個體。5. 1. 5 OPAC細胞庫的生產來自產後絨毛膜的OPAC可以用許多不同的方法培養，以生產一組批次，例如，一組可個體施用的劑量。從多種絨毛膜獲得的多組OPAC批次可以排列在OPAC庫中，供例如長期貯存。一般地，從絨毛膜材料的初代培養獲得0PAC，以形成種子培養物，其在可控條件下擴增，由大約相等數目的倍增形成細胞群。批次優選地源自單一胎盤的絨毛膜組織，但可以源自大量胎盤的組織。在一個實施方案中，OPAC批次如下獲得。首先破壞絨毛膜組織，例如通過剁碎，用合適的酶消化，例如分散酶、或者分散酶和膠原酶(參見上面5. 2. 3部分)。絨毛膜組織優選地包含例如來自單一胎盤的完整絨毛膜，但可以包含絨毛膜的僅一部分。消化的組織培養例如約1-3星期，優選地約2星期。去除未貼壁細胞後，收集形成的高密度克隆，例如通過胰蛋白酶處理收集。收集這些細胞並在方便體積的培養基中重懸，並定義為0代細胞。然後使用0代細胞來接種擴增培養。擴增培養可以是分開的細胞培養裝置的任意排列，例如NUNC 的細胞工廠。0代培養中的細胞可以再分到任意程度，使得用例如1 X 103、 2X 103、3X 103、4X 103、5X 103、6X 103、7X 103、8X 103、9X 103、1X 104、1X 104、2X 104、 3X 104、4X 104、5X 104、6X 104、7X 104、8X 104、9X 104、或 IOXlO4 個細胞來接種擴增培養。 優選地，使用約2X IO4到約3X IO4個O代細胞來接種每個擴增培養。擴增培養的數目可以取決於O代細胞的數目，而且數目可以多一些或少一些，取決於由其獲得OPAC的特定絨毛膜。擴增培養生長，直到培養中的細胞密度達到某個值，例如，約1 X IO5個細胞/cm2。 這時細胞可以被收集並冷凍貯存，或如上面描述的傳代到新的擴增培養中。在使用前，細胞可以傳代例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20次。在擴增培養期間，優選地保持群倍增累積次數的記錄。來自O代培養的細胞可以擴增到2、3、4、5、6、7、8、 9、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38 或 40 次倍增，或直到 60 次倍增。但是，優選地，在將細胞群分成個體劑量前，群倍增次數在約15到約30之間，優選地約20次倍增。在擴增過程中，細胞可以連續地培養，或可以在擴增期間的一個或多個點冷凍。用於個體劑量的細胞可以被冷凍，例如冷凍貯存，供以後使用。個體劑量可以包含例如約一百萬到約一億個細胞每ml，而且可以包含總計約IO6到約IO9個之間的細胞。在方法的一個具體實施方案中，O代細胞被培養到大約4次倍增，然後冷凍在第一細胞庫中。來自第一細胞庫的細胞被冷凍並用來接種第二細胞庫，其中的細胞被擴增約另外八次倍增。這個階段的細胞被收集並冷凍和用來接種新的擴增培養，讓其進行約八次另外的倍增，從而使細胞倍增的累積次數達到約20次。在傳代的中間點的細胞可以被冷凍， 單位為約100,000到約一千萬個細胞每ml，優選地約一百萬個細胞每ml，供以後的擴增培養使用。約20次倍增的細胞可以被冷凍為約一百萬到約一億個細胞每ml的個體劑量供施
35用，或用來製造包含OPAC的組合物。在一個優選的實施方案中，對由其獲得胎盤的供體(例如母親)測試至少一種病原體。如果母親對測試病原體的測試為陽性，來自該胎盤的整個批次被丟棄。這樣的測試可以在OPAC細胞批次生產期間的任何時間執行，包括在0代細胞建立之前或之後，或在擴增培養期間。要測試是否存在的病原體，可以包括且不限於A肝、B肝、C肝、丁肝、戊肝、人免疫缺陷病毒(I型和II型)、巨細胞病毒、皰疹病毒等。5. 1.6 OPAC 的分化OPAC可以被誘導分化，例如沿成骨途徑。OPAC的成骨分化可以被誘導，例如， 通過將OPAC放置在誘導分化為成骨細胞的細胞培養條件下。優選的骨細胞培養基包含 MSCGM(Cambrex)或DMEM，其補充了 15%臍帶血血清；接著是成骨誘導培養基(Cambrex)， 包含0. IyM地塞米松、0.05mM抗壞血酸-2-磷酸鹽、IOmM β甘油磷酸。在另一個實施方案中，OPAC在包含約10_7到約10_9Μ地塞米松、約10-50 μ M抗壞血酸磷酸鹽(例如，抗壞血酸-2-磷酸鹽)和約IOnM到約IOmM β -甘油磷酸的培養基(例如，DMEM-低葡萄糖)中培養。成骨培養基也可以包含血清、一種或多種抗生素/抗真菌劑、轉化生長因子(例如，TGF-β 1)和/或骨形態發生蛋白(例如，ΒΜΡ-2、ΒΜΡ-4、或其組合)。可以使用鈣特異性染色例如von Kossa染色，和例如鹼性磷酸酶、骨鈣蛋白、骨涎蛋白和/或骨橋蛋白基因表達的RT/PCR檢測，來測試分化。5. 1. 7 OPAC 的C存OPAC可以被貯存，即放置在允許長期貯存的條件下，或抑制細胞死亡(例如凋亡或壞死)的條件下。OPAC可以使用例如包含凋亡抑制劑、壞死抑制劑和/或載氧全氟化碳的組合物貯存，如在 2005 年 12 月 25 日提交的題為 「Improved Medium for Collecting Placental Stem Cells and Preserving Organs (收集胎盤幹細胞和保存器官的改進的培養基)」的相關的美國臨時申請號60/7M，969中所述。在一個實施方案中，本發明提供了保存OPAC 群的方法，包括將所述OPAC群與包含凋亡抑制劑和載氧全氟化碳的細胞收集組合物接觸， 其中所述凋亡抑制劑，與未與凋亡抑制劑接觸的OPAC群相比，以足以降低或防止OPAC群中的凋亡的量和時間存在。在一個具體的實施方案中，所述凋亡抑制劑是半胱天冬酶抑制劑。 在另一個具體的實施方案中，所述凋亡抑制劑是JNK抑制劑。在一個更加具體的實施方案中，所述JNK抑制劑不調節所述OPAC的分化或增殖。在另一個實施方案中，所述細胞收集組合物包含分離相的所述凋亡抑制劑和所述載氧全氟化碳。在另一個實施方案中，所述細胞收集組合物以乳液形式包含所述凋亡抑制劑和所述載氧全氟化碳。在另一個實施方案中， 細胞收集組合物額外包含乳化劑，例如卵磷脂。在另一個實施方案中，所述凋亡抑制劑和所述全氟化碳在接觸OPAC時溫度在約0°C到約25°C之間。在另一個更加具體的實施方案中， 所述凋亡抑制劑和所述全氟化碳在接觸OPAC時溫度在約2°C到10°C之間，或在約2°C到約 5°C之間。在另一個更加具體的實施方案中，所述接觸在所述OPAC群的運輸期間執行。在另一個更加具體的實施方案中，所述接觸在所述OPAC群的冷凍和解凍期間執行。在另一個實施方案中，本發明提供了保存OPAC群的方法，包括將所述OPAC群與凋亡抑制劑和器官保存化合物接觸，其中所述凋亡抑制劑，和未與凋亡抑制劑接觸的OPAC 群相比，以足以降低或防止OPAC群中的凋亡的量和時間存在。在一個具體的實施方案中，
36器官保存化合物是UW溶液(在美國專利號4，798，824中描述；也稱作ViaSpan ；也可參見 Southard 等，Transplantation 49(2) :251-257(1990))或在 Mern 等的美國專利號 5, 552, 267中描述的溶液。在另一個實施方案中，所述器官保存化合物是羥乙基澱粉、乳糖酸、棉子糖、或其組合。在另一個實施方案中，細胞收集組合物額外包含載氧全氟化碳，不管是處於兩相還是作為乳液。在方法的另一個實施方案中，在灌注期間，OPAC與包含凋亡抑制劑和載氧全氟化碳的細胞收集組合物、器官保存化合物、或其組合接觸。在另一個實施方案中，所述OPAC在組織破壞(例如酶消化)過程期間接觸。在另一個實施方案中，OPAC在通過灌注收集後， 或通過組織破壞(例如酶消化)收集後，與所述細胞收集化合物接觸。典型地，在細胞的收集、富集和分離期間，最小化或消除由缺氧和機械應力引起的細胞應激是優選的。因此，在方法的另一個實施方案中，在所述貯存期間，OPAC在收集、富集或分離期間暴露於缺氧條件少於六小時，其中缺氧條件是低於正常的血氧濃度的氧氣濃度。在一個更加具體的實施方案中，在所述貯存期間，所述OPAC暴露於所述缺氧條件少於兩小時。在另一個更加具體的實施方案中，OPAC在收集、富集或分離期間暴露於所述缺氧條件少於一小時、或少於三十分鐘，或沒有暴露於缺氧條件。在另一個具體的實施方案中， 所述OPAC在收集、富集或分離期間沒有暴露於剪切應力。本發明提供的OPAC可以被冷凍貯存，例如，在冷凍貯存培養基中，在小的容器例如安瓿中。合適的冷凍貯存培養基包括但不限於培養基包括例如生長培養基或細胞冷凍培養基，例如可商業得到的細胞冷凍培養基，例如C2695、C2639或C6039 (Sigma)。冷凍貯存培養基優選地包含DMSO (二甲基亞碸)，濃度例如約10% (ν/ν)。冷凍貯存培養基可以包含額外試劑，例如甲基纖維素和/或甘油。OPAC優選地在冷凍貯存期間以約1°C /min冷卻。 優選的冷凍貯存溫度是約_80°C到約_180°C，優選地約-125°C到約_140°C。冷凍貯存的細胞在解凍使用前可以被轉移到液氮中。在一些實施方案中，例如，一旦安瓿達到約-90°C，它們被轉移到液氮貯存區域。冷凍貯存的細胞優選地在溫度約25°C到約40°C解凍，優選地在溫度約37 °C。5. 1. 8包含OPAC的組合物本發明提供了包含OPAC或由其得到的生物分子的組合物。本發明提供的OPAC可以與任何生理學可接受的或醫學可接受的化合物、組合物或裝置進行組合，供例如研究或治療用途。5. 1. 8. 1 冷凍貯存的 OPAC本發明提供的OPAC群可以被貯存，例如冷凍貯存供以後使用。冷凍貯存細胞例如 OPAC的方法是本領域熟知的。OPAC群可以被製備成可容易對個體施用的形式。例如，本發明提供了 OPAC群，其被包含在適合醫學用途的容器內。這樣的容器可以是例如無菌的塑膠袋、燒瓶、罐或其它容器，OPAC群可以從中容易地分配。例如，容器可以是血袋或其它塑料的醫學可接受的袋子，適合向受體靜脈內施用液體。容器優選地是允許組合的細胞群冷凍貯存的容器。冷凍貯存的OPAC群可以包含源自單一供體或多個供體的OPAC。OPAC群可以與預期的受體完全HLA匹配，或者部分或完全HLA不匹配。因此，在一個實施方案中，本發明提供了容器中的包含OPAC群的組合物。在一個具體的實施方案中，所述群被冷凍貯存。在另一個具體的實施方案中，容器是袋、燒瓶、或罐。在更加具體的實施方案中，所述袋是無菌塑膠袋。在一個更加具體的實施方案中，所述袋適合、允許或促進OPAC群的靜脈內施用。袋可以包含多個連通的腔或分隔，以在施用前或期間讓OPAC與一種或多種其它溶液例如藥物混合。在另一個具體的實施方案中，組合物包含一種或多種促進細胞群冷凍貯存的化合物。在另一個具體的實施方案中，所述OPAC群被包含在生理學可接受的水溶液內。在一個更加具體的實施方案中，所述生理學可接受的水溶液是0.9% NaCl溶液。在另一個具體的實施方案中，所述OPAC群包含與所述群的受體 HLA匹配的胎盤細胞。在另一個具體的實施方案中，所述OPAC群包含與所述群的受體至少部分HLA不匹配的細胞。在另一個具體的實施方案中，所述OPAC源自多種供體。 5. 1.8.2藥物組合物OPAC群或包含OPAC的細胞群可以被配製成藥物組合物供體內使用。這樣的藥物組合物包含OPAC群、或包含OPAC的細胞群，在藥學可接受的載體中，例如，鹽水溶液或其它公認的生理學可接受的供體內施用的溶液。本發明提供的藥物組合物可以包含本發明別處描述的任意OPAC群。藥物組合物可以包含胎兒的、母體的、或胎兒和母體雙方的0PAC。本發明提供的藥物組合物可以進一步包含從單一個體或絨毛膜、或從大量個體或絨毛膜獲得的 OPAC。本發明提供的藥物組合物可以包含任意治療有用數目的0PAC。例如，單一單位劑量的OPAC可以包含，在各種實施方案中，約、至少、或不超過1 X 105、5xl05、l X 106、5X 106、 1 X 107、5 X ΙΟ7、1 X 108、5 X ΙΟ8、1 X 109、5 X ΙΟ9、1 X 1010、5 X ΙΟ10、1 X IO11 或更多的 OPAC0本發明提供的藥物組合物可以包含細胞群，其包含50%或更多的存活細胞(即， 群中的至少約50%的細胞是有功能的或活的)。優選地，群中的至少約60%的細胞是存活的。更加優選地，藥物組合物中，群中的至少約70 %、80 %、90 %、95 %、或99 %的細胞是存活的。本發明提供的藥物組合物可以包含一種或多種例如促進植入的化合物(例如， 抗-T-細胞受體抗體、免疫抑制劑等)，穩定劑例如白蛋白、葡聚糖40、明膠、羥乙基澱粉等。5. 1. 8. 3 OPAC 條件培養基本發明提供的OPAC可以用來生產條件培養基，即包含一種或多種由細胞分泌或排出的生物分子的培養基。在各種實施方案中，條件培養基包含OPAC在其中生長了至少1、 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或更多天的培養基。在其他實施方案中，條件培養基包含OPAC在其中生長到至少約30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %、90 %融合或直到100 %融合的培養基。這樣的條件培養基可以用來支持OPAC或另一種類型的幹細胞的分離群的培養。在另一個實施方案中，條件培養基包含OPAC在其中已分化成終末分化細胞類型、或具有終末分化細胞的一個或多個特徵的細胞的培養基。在另一個實施方案中，本發明提供的條件培養基包含在其中培養了 OPAC和非OPAC的培養基。5. 1. 8. 4 包含 OPAC 的基質本發明進一步提供了包含OPAC或OPAC群的基質、水凝膠、支架等。在某些實施方案中，基質可以是本領域技術人員已知對治療骨缺損有用的任何底物。例如，基質可以是 β-磷酸三鈣底物、β-磷酸三鈣-膠原底物、膠原底物、磷酸鈣底物、礦化的膠原底物、和透明質酸底物。在一些實施方案中，基質中的膠原可以是胎盤膠原。分離和製備胎盤膠原的方法和組合物被廣泛描述，例如在美國專利申請公開號2007/0020225中，其公開內容全文通過引用併入本發明。OPAC可以在分化步驟之前或之後被接種到基質上供治療骨。例如，OPAC可以在例如成骨培養基中培養例如約1-20天，然後接種到基質上。或者，OPAC可以被分離並接種到基質上，然後如本發明描述的在成骨培養基中培養例如約1-20天。在另一個實施方案中， OPAC在例如成骨培養基中培養例如約1-20天，然後接種到基質上，然後如本發明描述的在成骨培養基中培養例如約1-20天。OPAC可以被接種到天然基質上，例如，胎盤生物材料例如羊膜材料。這樣的羊膜材料可以是例如直接從哺乳動物胎盤分割的羊膜；固定的或熱處理的羊膜、基本乾燥的(即， END0B0N (Merck Biomaterial France, France) >CEROS (Mathys, AG, Bettlach, Switzerland)、和礦化膠原骨移植產品例如 HEALOS (DePuy，Inc.，Raynham，MA)和 VITOSS 、RHAK0SS 、以及CORTOSS (Orthovita，Malvern，Pa.)。框架可以是天然和/或合成材料的混合物、摻合物或複合物。在另一個 實施方案中，OPAC可以接種到氈上，或與其接觸，氈可以例如由用可生物吸收的材料例如PGA、PLA、PCL共聚物或摻合物，或透明質酸製造成的復絲組成。在另一個實施方案中，本發明提供的OPAC可以接種到泡沫支架上，該支架可以是複合結構。這樣的泡沫支架可以被模製成有用的形狀，例如身體中待修復、替換或擴增的特定結構的一部分。在一些實施方案中，為了增強細胞附著，在接種OPAC前，框架用例如 0. IM醋酸處理，接著在聚賴氨酸、PBSdn /或膠原中培養。基質的外表面可以被改性，以改善細胞的附著或生長以及組織的分化，例如通過基質的等離子塗層，或添加一種或多種蛋白(例如，膠原、彈性纖維、網狀纖維)、糖蛋白、葡糖氨基葡聚糖(例如，硫酸肝素、軟骨素-4-硫酸、軟骨素-6-硫酸、硫酸皮膚素、硫酸角蛋白等)、細胞基質、和/或其他材料，例如但不限於明膠、藻酸鹽、瓊脂、瓊脂糖、和植物膠等來改性。在一些實施方案中，支架包含令它不形成血栓的材料，或用該材料處理。這些處理和材料也可以促進和維持內皮生長、遷移、和細胞外基質的沉積。這些材料和處理的例子包括但不限於天然材料例如基底膜蛋白例如層粘連蛋白和IV型膠原，合成材料例如EPTFE 和嵌段聚氨酯脲矽酮，例如 PURSPAN (The Polymer Technology Group, Inc. , Berkeley, Calif)。支架也可以包含抗血栓形成劑，例如肝素；支架也可以在接種OPAC前被處理以改變表面電荷(例如，等離子塗層)。支架可以進一步包含刺激骨生長和/或抑制骨吸收的試齊U。例如，支架可以包含骨形態發生蛋白，例如BMP-2和/或BMP-7，WNT抑制劑等。5. 1. 9永生化的OPAC細胞系通過用任意包含促生長基因的合適載體轉染，OPAC可以條件永生化，即編碼蛋白的基因在適當條件下促進被轉染的細胞的生長，從而使促生長蛋白的生產和/或活性可通過外部因素調控。在一個優選的實施方案中，促生長基因是原癌基因，例如但不限於v-myc、 N-myC、C-myC、p53、SV40大T抗原、多瘤病毒大T抗原、Ela腺病毒或人乳頭瘤病毒的E7蛋白。促生長蛋白的外部調控可以通過將促生長基因放置在外部可調控的啟動子控制下來達到，例如，啟動子的活性可以通過例如修改轉染的細胞的溫度或與細胞接觸的培養基的組份來控制。在一個實施方案中，可以使用四環素(tet)控制基因表達系統(參 B Gossen 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 5547-5551,1992 ；Hoshimaru 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93 1518-1523,1996) tet缺乏時，這一載體內tet控制的轉錄激活因子 (tTA)強烈激活融合到tet操縱子序列的來自人巨細胞病毒的最小啟動子ph·"的轉錄。 tTA是大腸桿菌(Escherichia coli)的轉座子_10_源tet抗性操縱子的阻遏物(tetR)和單純皰疹病毒的VP16酸性域的融合蛋白。低的無毒濃度的tet (例如，0. 01-1.0yg/mL)幾乎完全取消了 tTA的轉錄激活。在一個實施方案中，載體進一步包含編碼可篩選標記的基因，例如賦予藥物抗性的蛋白。細菌新黴素抗性基因(neoK)是一個這樣的標記，可以如本發明描述般使用。攜帶neoK的細胞可以通過本領域普通技術人員已知的手段篩選，例如向生長培養基添加例如 100-200 μ g/mL G418。 轉染可以通過各種本領域普通技術人員已知的手段中的任一種來實現，包括但不限於逆轉錄病毒感染。一般來說，通過用從載體的生產者細胞系收集的條件培養基和包含 N2補充物的DMEM/F12的混合物培養，細胞培養可以被轉染。例如，如上面描述般製備的胎盤細胞培養，通過在一體積條件培養基和兩體積包含N2補充物的DMEM/F12中培養約20小時，可以在例如五天後體外感染。攜帶可篩選標記的轉染的細胞然後可以如上面描述般篩選。轉染後，培養物被傳代到允許增殖的表面上，例如，在24小時時期中讓至少約 30%的細胞倍增。優選地，底物是聚鳥氨酸/層粘連蛋白底物，由用聚鳥氨酸(10yg/mL) 和/或層粘連蛋白(10yg/mL)塗層的組織培養塑料製品組成，聚賴氨酸/層粘連蛋白底物或用纖連蛋白處理過的表面。然後培養每3-4天用生長培養基飼養，其可以補充或可以未補充一種或多種增殖增強因子。當培養低於50%融合時，增殖增強因子可以添加到生長培養基中。當80-95%融合時，條件永生化的OPAC細胞系可以使用標準技術傳代，例如通過胰蛋白酶處理。在一些實施方案中，直到大約第二十次傳代，保持篩選(通過例如向包含新黴素抗性基因的細胞添加G418)仍是有益的。細胞也可以在液氮中冷凍供長期貯存。克隆細胞系可以從如上面描述般製備的條件永生化的人OPAC細胞系中分離。一般來說，這樣的克隆細胞系可以使用標準技術分離和擴增，例如通過有限稀釋或使用克隆環分離。克隆細胞系一般可以如上面描述般飼養和傳代。條件永生化的人OPAC細胞系，其可以但不必是克隆的，一般可以通過在促進分化的培養條件下抑制促生長蛋白的生產和/或活性來誘導分化。例如，如果編碼促生長蛋白的基因在外部可調控的啟動子控制下，那麼可以通過改變條件例如溫度或培養基組份來抑制促生長基因的轉錄。對於上面討論的四環素控制的基因表達系統，可以通過添加四環素來抑制促生長基因的轉錄來實現分化。一般來說，4-5天的1 μ g/mL四環素足以啟動分化。 為促進進一步分化，生長培養基中可以包含額外試劑。5. 1. 10 測試本發明提供的OPAC可以在測試中使用，以與未暴露於這樣的條件的OPAC比較，確定培養條件、環境因素、分子(例如生物分子、小的無機分子等)等對OPAC增殖、擴增、和/ 或分化的影響。在一個優選的實施方案中，本發明提供的OPAC測試了與一種分子接觸後增殖、擴增或分化上的改變。例如，成骨分化可以通過監測鹼性磷酸酶活性和/或鈣礦化來測試。在一個實施方案中，例如，本發明提供了識別調節多種OPAC增殖的化合物的方法，包括將所述多種OPAC在允許增殖的條件下與所述化合物接觸，其中如果與未與所述化合物接觸的多種OPAC相比，所述化合物在所述多種OPAC的增殖中引起可檢測的變化，那麼所述化合物被識別為調節OPAC增殖的化合物。在一個具體的實施方案中，所述化合物被識別為增殖抑制劑。在另一個具體的實施方案中，所述化合物被識別為增殖增強劑。在另一個實施方案中，本發明提供了識別調節多種OPAC擴增的化合物的方法，包括將所述多種OPAC在允許擴增的條件下與所述化合物接觸，其中如果與未與所述化合物接觸的多種OPAC相比，所述化合物在所述多種OPAC的擴增中引起可檢測的變化，那麼所述化合物被識別為調節OPAC擴增的化合物。在一個具體的實施方案中，所述化合物被識別為擴增抑制劑。在另一個具體的實施方案中，所述化合物被識別為擴增增強劑。在另一個實施方案中，本發明提供了識別調節OPAC分化的化合物的方法，包括將所述OPAC在允許分化的條件下與所述化合物接觸，其中如果與未與所述化合物接觸的 OPAC相比，所述化合物在所述OPAC的分化中引起可檢測的變化，那麼所述化合物被識別為調節OPAC增殖的化合物。在一個具體的實施方案中，所述化合物被識別為增殖抑制劑。在另一個具體的實施方案中，所述化合物被識別為增殖增強劑。5. 2 OPAC 的用途 5. 2. 1使用OPAC治療骨相關癌症本發明提供了治療患有骨相關癌症的個體的方法，包括對個體施用治療有效量的 0PAC。骨相關癌症包括且不限於多發性骨髓瘤、骨癌、乳腺癌、肺癌、神經母細胞瘤、骨肉瘤、 Ewing' s肉瘤、軟骨肉瘤、脊索瘤、骨的惡性纖維組織細胞瘤、骨的纖維肉瘤、轉移性癌、多發性骨髓瘤、以及特徵是骨轉移的任何形式的轉移性癌。在某些實施方案中，OPAC的施用治療性地有效降低、改善或反轉了與骨相關癌症相關的一種或多種症狀，例如，由癌症對個體中一根或多根骨頭的影響引起或與其相關的症狀。本領域技術人員將意識到，癌症導致的骨缺損的治療可能不一定減輕癌症本身。本發明提供的癌症相關的骨缺損的治療可以在另外的癌症治療之前、之後或同時進行，這如下所討論。因此，在一個實施方案中，骨缺損在用抗癌治療來治療癌症之前治療。在另一個實施方案中，骨缺損在用抗癌治療來治療癌症的同一時間或接近同一時間治療。在另一個實施方案中，骨缺損在用抗癌治療來治療癌症之後治療。在某些實施方案中，骨相關癌症例如多發性骨髓瘤的治療包括對含有骨相關癌症細胞例如多發性骨髓瘤細胞的個體施用治療有效量的0PAC，其中至少一些所述OPAC直接接觸了至少一些多發性骨髓瘤細胞，例如，在至少一些所述OPAC和一些所述骨相關癌症細胞之間存在直接的細胞間接觸。在某些其它的實施方案中，骨相關癌症例如多發性骨髓瘤的治療包括對含有骨相關癌症細胞例如多發性骨髓瘤細胞的個體施用治療有效量的0PAC， 其中沒有或基本沒有任何所述OPAC直接接觸了多發性骨髓瘤細胞，例如，在至少一些所述 OPAC和骨相關癌症細胞之間沒有或基本沒有直接的細胞間接觸。在某些實施方案中，OPAC是損害內施用的，例如直接進入或鄰近(例如，在其 l-5cm內)一處或多處癌症導致的骨損害。在某些實施方案中，OPAC與基質聯合施用，例如可注射的基質。在某些其它的實施方案中，OPAC與固體基質，例如骨替代物、下文5. 2. 2部分中描述的基質或骨替代物聯合向患有骨相關癌症的個體施用。在某些其它的實施方案中，OPAC對個體靜脈內施用。OPAC可以從任何容器和通過任何醫學上適合遞送流體例如包含細胞的流體的遞送系統對個體施用。這樣的容器可以是例如無菌的塑膠袋、燒瓶、罐或其它容器，OPAC群可以從中容易地分配。例如，容器可以是血袋或其它塑料的醫學可接受的袋子，適合向受體靜脈內施用液體。損害內或靜脈內施用在單一劑量中可以包含例如約、至少、或不超過IX 105、 5X105、1X106、5X106、1X107、5X107、1X108、5X108、1X109、5X109、1X1010、5X1010、丄父川「或更多的。 々。OPAC在治療進程期間可以施用一次，或超過一次。優選地，施用的OPAC包含50%或更多的存活細胞(S卩，群中的至少約50%的細胞是有功能的或活的)。 優選地，群中的至少約60%的細胞是存活的。更加優選地，藥物組合物中，群中的至少約 70%、80%、90%、95%、或99%的細胞是存活的。5. 2. 1. 1多發性骨髓瘤的治療本發明提供了治療患有多發性骨髓瘤的個體的方法，包括對所述個體施用多種 0PAC，其中所述OPAC具有上文5. 1部分中描述的特徵的任意組合或全部特徵。在一個具體的實施方案中，所述多種OPAC是⑶105+且⑶200dim的或⑶105+且⑶200—的。本發明提供的治療方法包含使用任意上文5. 1部分中描述的OPAC、OPAC群或包含OPAC的細胞群。多發性骨髓瘤是漿細胞癌症，漿細胞是產生抗體的免疫系統細胞。疾病典型地存在四個主要特徵鈣升高、腎衰竭、貧血、和骨損害。這些症狀和其它症狀在下文討論。骨痛-骨髓瘤細胞分泌IL-6，也稱作破骨細胞活化因子(OAF)，它是激活破骨細胞分解骨頭的細胞因子，造成疼痛的骨損害。這些骨損害實際上是溶解性的而且在射線照片中可見，其可能顯示「穿孔」再吸收損害。骨髓瘤骨痛通常涉及脊柱和肋骨，而且隨活性惡化。持久的局部疼痛可能存在，而且可以指明病理骨折。椎骨損害可能導致脊髓壓迫。骨分解還導致鈣向血液中釋放，引起高鈣血症及其相關症狀。骨分解區域，如在骨骼調查中觀察到的，典型地呈現為骨頭上的一處或多處溶解性損害，即其中骨頭呈現為不存在或「穿孔」的區域。感染-因為免疫系統被破壞，多發性骨髓瘤的另一種常見症狀是感染。感染風險增加的原因是擴散性低丙球蛋白血症導致的免疫缺陷，這是因為正常抗體的生產下降和破壞增加。最常見的感染是肺炎和腎盂腎炎。在多發性骨髓瘤患者中導致疾病的常見肺炎病原體包括月市炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和肺炎克氏桿菌(Klebsiella pneumoniae)，而導致腎盂腎炎的常見病原體包括大腸桿菌(Escherichia coli)。典型地，感染發生在化療開始後的最初幾個月。腎衰竭-多發性骨髓瘤還傾向於導致腎衰竭，其可能急性和慢性發展。多發性骨髓瘤中的腎衰竭很大程度上歸因於高鈣血症，其因破骨細胞拆卸現存的骨頭而發展。腎衰竭也由輕鏈分泌引起的小管損傷而導致，其也稱本周蛋白，可以表明Fanconi綜合症(II型腎小管性酸中毒)。其它起因包括澱粉樣蛋白的小球沉積、高尿酸血症、復發性感染(例如腎盂腎炎)、和腫瘤細胞的局部浸潤。腎衰竭可以與血清肌酐水平的升高有關。貧血-骨髓瘤中發現的貧血通常是紅血球和血色素都正常的，而且是由浸潤的腫瘤細胞替代了正常骨髓和正常的血紅細胞生產(造血作用)被細胞因子抑制而導致的。神經學症狀-多發性骨髓瘤的症狀包括一系列神經學狀況，包括虛弱、由高鈣血症性頭痛引起的意識錯亂和疲勞、視力變化和視網膜病變，這可以是血液高粘滯的結果，取決於病變蛋白(參見下文)的性質。其它神經學症狀包括根性疼痛、腸或膀胱控制喪失(例如，由於脊髓損害導致脊髓壓迫)、以及腕管綜合症和其它神經疾病(例如，由於澱粉樣蛋白對外周神經的浸潤)。在最近出現的情況中，多發性骨髓瘤可能導致截癱。病變蛋白的存在_多發性骨髓瘤的一個診斷症狀是血和/或尿中存在病變蛋白， 其是單克隆蛋白(M蛋白)，例如，由漿細胞的克隆增殖產生的免疫球蛋白輕鏈，或免疫球蛋白片段。
當以下症狀或信號存在時，典型地診斷為症狀性多發性骨髓瘤克隆漿細胞在骨髓活檢時組成了超過10%的細胞，或者在其它組織(例如漿細胞瘤)的活檢中以任何量存在；血清或尿中的病變蛋白；終末器官損傷證據(相關器官或組織損傷)，例如高鈣血症(例如，血液中校正的鈣> 2. 75mmol/L)、骨髓瘤引起的腎功能不全、限定為血紅蛋白 2次)、其它器官的澱粉樣變性(澱粉樣蛋白沉積)、和高粘滯綜合症(血液粘度增加)。患有多發性骨髓瘤的個體分成下列各組。在一個實施方案中，患有多發性骨髓瘤的個體從未被治療過該疾病。在另一個實施方案中，個體患有應答型骨髓瘤；即，對治療應答的多發性骨髓瘤。在一個具體的實施方案中，作為治療結果，這樣的個體顯示了 M蛋白 (病變蛋白)的至少50%的下降。在另一個具體的實施方案中，作為治療結果，個體顯示了 M蛋白在25%到50%之間的下降。在另一個實施方案中，個體患有穩固型多發性骨髓瘤，其指骨髓瘤對治療無應答(例如，M蛋白的下降未達到50%)，但沒有進展或轉壞。在另一個實施方案中，個體患有進行性多發性骨髓瘤，其指惡化中的活性骨髓瘤(例如，增加的M蛋白和惡化中的器官或組織損傷或終末器官損傷)。在另一個實施方案中，個體患有復發的多發性骨髓瘤，其指起初對治療應答但然後開始再次進展的骨髓瘤疾病。在具體的實施方案中，個體在初始治療後復發或在後來的治療後復發。在另一個實施方案中，個體患有難治性多發性骨髓瘤。在一個具體的實施方案中，難治性多發性骨髓瘤是對初始治療無應答的多發性骨髓瘤。在另一個具體的實施方案中，難治性多發性骨髓瘤是對後來的治療無應答的復發的多發性骨髓瘤。在另一個具體的實施方案中，難治性多發性骨髓瘤是無應答的進展中的難治性疾病，其指難治性疾病在不斷進展。在另一個具體的實施方案中，難治性多發性骨髓瘤是無應答的非進展中的難治性疾病，其指難治性疾病未惡化。因此，在一個實施方案中，本發明提供了治療患有多發性骨髓瘤的個體的方法，包括對個體施用0PAC、0PAC群或包含OPAC的細胞群，其中所述施用引起多發性骨髓瘤的一種或多種症狀的進展的可檢測降低、惡化的可檢測停止、和/或可檢測的改善。在具體的實施方案中，所述一種或多種症狀包括與正常值相比升高的血或尿鈣、存在骨損害、貧血、或腎衰竭。在一個更加具體的實施方案中，所述一種或多種症狀包括克隆漿細胞在骨髓活檢時組成了超過10%的細胞，或者在其它組織(例如漿細胞瘤)的活檢中以任何量存在；血清或尿中的病變蛋白；和/或終末器官損傷證據。在一個更加具體的實施方案中，所述一種或多種症狀是血鈣濃度超過2. 75mmol/L、腎功能不全、每升血液血紅蛋白低於100g、存在骨損害、或者骨髓外一個或多個器官的澱粉樣變性。在另一個具體的實施方案中，所述症狀是神經學症狀。在更加具體的實施方案中， 所述神經學症狀是虛弱、意識錯亂、疲勞、頭痛、視力變化、視網膜病變、根性疼痛、腸或膀胱控制喪失、腕管綜合症、和/或截癱。在一個具體的實施方案中，本發明提供了治療患有多發性骨髓瘤的個體的方法， 包含對個體施用OPAC、OPAC群或包含OPAC的細胞群，其中所述施用在個體的一個或多個器官中引起多發性骨髓瘤細胞數目的可檢測降低，例如，克隆的多發性骨髓瘤細胞。在一個具體的實施方案中，本發明提供了治療患有多發性骨髓瘤的個體的方法， 包含對個體施用OPAC、OPAC群或包含OPAC的細胞群，其中所述施用引起個體血液中血紅蛋
44白的可檢測增加，例如，在正常限度內增加。正常的血紅蛋白水平隨個體的年齡和性別而變化，如下面表1中顯示的表權利要求
1.治療患有多發性骨髓瘤的個體的方法，其包括對所述個體施用分離的成骨胎盤貼壁細胞(OPAC)，其中所述OPAC是從絨毛膜獲得的，而且附著到組織培養塑料製品上，而且其中所述OPAC是⑶200陰性的或是⑶200^的，且⑶105陽性的，而且其中所述施用可檢測地降低、停止所述多發性骨髓瘤的一種或多種症狀的進展或改善所述多發性骨髓瘤的一種或多種症狀。
2.如權利要求1所述的方法，其中所述OPAC是SSEA3+或SSEA4+的。
3.如權利要求1所述的方法，其中所述OPAC是SSEA3+且SSEA4+的。
4.如權利要求1所述的方法，其中當所述OPAC和所述⑶200+胎盤幹細胞在生長培養基中培養時，與相等數目的⑶200+ 貼壁胎盤幹細胞相比，所述OPAC以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括BMP3 (骨形態發生蛋白3)、CDHl 1、COLIOAl、C0L14A1、C0L15A1 ,DMPl (牙本質基質酸性磷蛋白1)、DSPP (牙本質涎磷蛋白)、ENAM(釉蛋白)、FGFR2 (成纖維細胞生長因子受體2) ,MMPlO (基質金屬蛋白酶10 (基質分解素2))、TGFB3、和/或TGFBRl中的一個或多個，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；當所述OPAC和所述胎盤幹細胞在成骨培養基中培養時，與相等數目的CD200+貼壁胎盤幹細胞相比，所述OPAC以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括AMBN(成釉蛋白(釉基質蛋白))、BMP2 (骨形態發生蛋白2、、CALCR(降鈣素受體)、 CDH11、COL11A1、COL14A1、COL15A1、C0L2A1、CSF2、CSF3、DMP1、DSPP、ENAM、FGF3、GDF10 (生長分化因子10)、IGFl (胰島素樣生長因子1)、ITGAl (整聯蛋白，α 1 (CD49))、ITGA2 (整聯蛋白，0 2(0>498))、匪 10、匪 8(基質金屬蛋白酶8(中性粒細胞膠原酶))、匪 9、06 六(血小板源生長因子A)、SMADl、TGFB3、TGFBRl和/或TGFBR2 (轉化生長因子β，受體2)中的一個或多個，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；不管所述OPAC和所述胎盤幹細胞是在生長培養基中還是在成骨培養基中培養，與不是滋養層或細胞滋養層的相等數目的貼壁CD200+胎盤幹細胞相比，所述OPAC在可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括⑶Hll、C0L14A1、C0L15A1、 DMP1、DSPP、ENAM、MMP10、TGFB3和/或TGFBRl中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；當所述OPAC和所述胎盤幹細胞在生長培養基中培養時，與不是滋養層或細胞滋養層的相等數目的貼壁CD200+胎盤幹細胞相比，所述OPAC在可檢測的較低水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括AHSG(a-2-HS-糖蛋白)、ALPL(鹼性磷酸酶，肝臟 /骨/腎臟)、EGF (表皮生長因子)、FLTl (fins相關的酪氨酸激酶1 (血管內皮生長因子/ 血管通透性因子受體))、IGF2、ITGA2、ITGAM(整聯蛋白，α M(補體成分3受體3亞基))、 SCARBl (清道夫受體B類，成員1)、S0X9 (SRY (性別決定區Y)-盒9)、TNF、TffISTl (扭曲同系物1 ；以前稱作瞼裂狹小、倒轉型內眥贅皮和上瞼下垂3，尖頭並指趾畸形3)、VCAM1 (血管細胞粘附分子1)和/或VDR(維生素D(l，25-二羥基維生素受體)中的一個或多個， 或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；當所述OPAC和所述胎盤幹細胞在成骨培養基中培養時，與不是滋養層或細胞滋養層的相等數目的貼壁CD200+胎盤幹細胞相比，所述OPAC在可檢測的較低水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括BGN(雙糖鏈蛋白多糖)、C0L11A1、C0MP (軟骨寡聚基質蛋白)、FGF1和/或VCAMl中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；不管所述OPAC和所述胎盤幹細胞是在生長培養基中還是在成骨培養基中培養，與不是滋養層或細胞滋養層的相等數目的貼壁CD200+胎盤幹細胞相比，所述OPAC在可檢測的較低水平表達VCAMl，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；當OPAC和所述幹細胞在生長培養基中培養時，與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比，所述OPAC在可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括 BMP4、CALCR、CD36、CDHl 1、COL12A1、COL14A1、COL15A1、C0L3A1、C0L5A1、DMP1、DSPP、FLT1、 MSX1、PDGFA、TGFB3、TGFBR1和/或TUFTl (釉叢蛋白1)中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；當OPAC和幹細胞在成骨培養基中培養時，與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比，所述OPAC在可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括AMBN、 CALCR、COL14A1、COL15A1、CSF3、DMP1、DSPP、ITGA1、ITGA2、MMP10、MMP9、MSX1、PDGFA、TGFB1、 TGFB3、TGFBRl和/或TGFBR2中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；不管所述OPAC和所述胎盤幹細胞是在生長培養基中還是在成骨培養基中培養，與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比，所述OPAC在可檢測的較高水平表達一個或多個基因， 其中所述一個或多個基因包括 CALCR、COL14A1、COL15A1、DMP1、DSPP、MSX1、PDGFA、TGFB3 和 /或TGFBRl中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；當OPAC和間充質幹細胞在生長培養基中培養時，與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比，所述OPAC在可檢測的較低水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括 ALPL, BGLAP (骨 Y -羧基穀氨酸(gla)蛋白)、IGF2、ITGA2、ITGAM、SCARBl 和 / 或 SOXl 中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；當OPAC和所述幹細胞在成骨培養基中培養時，與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比，所述OPAC在可檢測的較低水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括 AHSG, ALPL, BGLAP, BGN、BMP3、BMP5、CD36、C0L10A1、COLlIAl、C0L12A1、C0L2A1、C0L4A3、 COMP, EGF、FGFU FGFR2、IGF2、MMP8、PHEX(磷酸鹽調節的肽鏈內切酶同系物，X連鎖)、 RUNX2 (runt-相關轉錄因子2)、SCARB 1、SOXl、VCAMl和/或VEGFB中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；或不管所述OPAC和所述胎盤幹細胞是在生長培養基中還是在成骨培養基中培養，與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比，所述OPAC在可檢測的較低水平表達一個或多個基因， 其中所述一個或多個基因包括ALPL、BGLAP、IGF2、SCARBl和/或S0X9中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估。
5.如權利要求1所述的方法，其中所述OPAC 與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括 BMP4、BMP6、CD36、CDHl 1、C0L14A1、C0L15A1、COLlAl、C0L3A1、 C0L5A1、CSF2、CTSK、FGF2、FGFRl、FLTl、ITGAl、MINPPl、MMP9、MSXl、PDGFA,SERPINH1、TGFB3 和TGFBRl中的一個或多個，其中所述OPAC和所述間充質幹細胞經歷了相等數目的傳代；或與相等數目的成纖維細胞相比以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一3個或多個基因包括 BMP4、BMP6、CDHl 1、C0L14A1、C0L15A1、COLlAl、C0L3A1、C0L5A1、FLTl、 IGF1R、ITGAl、MINPPl、PDGFA、SERPINH1、SMAD3、TGFBl、TGFB2、TGFB3、TGFBRl、TNF、TUFTl、 VCAMl和VEGFA中的一個或多個，而且其中所述成纖維細胞經歷了相等數目的傳代。
6.如權利要求1所述的方法，其中所述OPAC分泌一種或多種蛋白核心蛋白聚糖、表皮調節素、IGFBP-3、IGFBP-6、IL_2Ra、IL-17RC、IL-27、潛在的 TGF-β 結合蛋白 1 (LTBP)、 NCAM-I、Smad4、TFPI、TGF- β R1/ALK5 或 ΤΙΜΡ-2。
7.如權利要求1所述的方法，其中所述OPAC分泌蛋白核心蛋白聚糖、表皮調節素、 IGFBP-3、IGFBP-6、IL_2Ra、IL-17RC、IL-27、潛在的 TGF-β 結合蛋白 1 (LTBP)、NCAM-U Smad4、TFPI, TGF- β R1/ALK5 禾口 ΤΙΜΡ—2。
8.如權利要求1所述的方法，其中所述一種或多種症狀是骨痛、骨細胞損害、貧血、或腎衰竭。
9.如權利要求1所述的方法，包括對所述個體施用至少lX1080PAC/kg。
10.分離的成骨胎盤貼壁細胞(OPAC)，其中所述細胞是從絨毛膜獲得的，而且附著到組織培養塑料製品上，而且其中所述細胞是⑶200陰性的或是⑶200dim的，且是⑶105陽性的。
11.如權利要求9所述的分離的細胞，其是SSEA3+或SSEA4+的。
12.如權利要求9所述的分離的細胞，其是SSEA3+且SSEA4+的。
13.如權利要求9所述的分離的細胞，其中所述細胞生產骨保護素。
14.如權利要求9所述的分離的細胞，其中所述細胞額外地是α-平滑肌肌動蛋白表達陰性、RANKL表達陰性、NG2表達陽性、骨保護素表達陽性的，或顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。
15.如權利要求13所述的分離的細胞，其中所述細胞額外地是α-平滑肌肌動蛋白表達陰性、RANKL表達陰性、NG2表達陽性、骨保護素表達陽性的，並顯示可誘導的鹼性磷酸酶活性。
16.如權利要求9所述的分離的細胞，其中所述細胞與CD200+貼壁胎盤幹細胞相比以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括 ΒΜΡ6、CDHl 1、C0L10A1、C0L14A1、C0L15A1、COLlAl、C0L1A2、C0L3A1、 C0L4A3、C0L5A1、CSF3、CTSK、IGF1R、MINPP1、ΜΜΡ2、ΜΜΡ9、MSX1、SMAD1、SMAD3、TGFB3、TGFBRl 和VEGFB中的一個或多個，其中所述OPAC和所述CD200+貼壁胎盤幹細胞經歷了相等數目的傳代；與骨髓源間充質幹細胞相比以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括81^4、81^6丄036丄0!111、0^14六1、0^15六1、0^認1、0^3六1、0^5六1丄5卩2、 CTSK、FGF2、FGFRl、FLTl、ITGAl、MINPPl、MMP9、MSXl、PDGFA、SERPINH1、TGFB3 和 TGFBRl 中的一個或多個，其中所述OPAC和所述間充質幹細胞經歷了相等數目的傳代；和/或與成纖維細胞相比以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括 BMP4、BMP6、CDHl 1、C0L14A1、C0L15A1、COLlAl、C0L3A1、C0L5A1、FLTl、IGF1R、ITGAl、 MINPPl、PDGFA,SERPINH1、SMAD3、TGFBl、TGFB2、TGFB3、TGFBRl、TNF、TUFTl、VCAMl 和 VEGFA 中的一個或多個，其中所述成纖維細胞在培養中經歷的傳代數目與所述成纖維細胞經歷的傳代數目相等。
17.如權利要求9所述的分離的細胞，其中所述細胞分泌一種或多種蛋白核心蛋白聚糖、表皮調節素、IGFBP-3、IGFBP-6、IL-2Ra、IL-17RC、IL-27、潛在的 TGF-β 結合蛋白 1 (LTBP)、NCAM-I、Smad4、TFPI、TGF- β R1/ALK5 或 ΤΙΜΡ-2。
18.如權利要求16所述的分離的細胞，其中所述細胞分泌蛋白核心蛋白聚糖、表皮調節素、IGFBP-3、IGFBP-6、IL_2Ra、IL-17RC、IL-27、潛在的 TGF-β 結合蛋白 1 (LTBP)、 NCAM—l、Smad4、TFPI, TGF- β R1/ALK5 禾口 ΤΙΜΡ—2。
19.分離的細胞群，包含如權利要求9所述的細胞。
20.如權利要求9所述的細胞的分離的群，其中當所述OPAC和所述CD200+胎盤幹細胞在生長培養基中培養時，與相等數目的CD200+ 貼壁胎盤幹細胞相比，所述細胞以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括ΒΜΡ3 (骨形態發生蛋白3)、CDHl 1、C0L10A1、C0L14A1、C0L15A1、DMPl (牙本質基質酸性磷蛋白1)、DSPP (牙本質涎磷蛋白)、ENAM(釉蛋白)、FGFR2 (成纖維細胞生長因子受體2) ,MMPlO (基質金屬蛋白酶10 (基質分解素2))、TGFB3、和/或TGFBRl中的一個或多個，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；當所述OPAC和所述胎盤幹細胞在成骨培養基中培養時，與相等數目的CD200+貼壁胎盤幹細胞相比，所述細胞以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括AMBN(成釉蛋白(釉基質蛋白))、BMP2 (骨形態發生蛋白2、、CALCR(降鈣素受體)、 CDH11、COL11A1、COL14A1、COL15A1、C0L2A1、CSF2、CSF3、DMP1、DSPP、ENAM、FGF3、GDF10 (生長分化因子10)、IGFl (胰島素樣生長因子1)、ITGAl (整聯蛋白，α 1 (CD49))、ITGA2 (整聯蛋白，0 2(0>498))、匪 10、匪 8(基質金屬蛋白酶8(中性粒細胞膠原酶))、匪 9、？06 六(血小板源生長因子A)、SMADl、TGFB3、TGFBRl和/或TGFBR2 (轉化生長因子β，受體2)中的一個或多個，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；不管所述OPAC和所述胎盤幹細胞是在生長培養基中還是在成骨培養基中培養，與不是滋養層或細胞滋養層的相等數目的貼壁CD200+胎盤幹細胞相比，所述細胞以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括⑶Hll、C0L14A1、C0L15A1、 DMP1、DSPP、ENAM、MMP10、TGFB3和/或TGFBRl中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；當所述OPAC和所述胎盤幹細胞在生長培養基中培養時，與不是滋養層或細胞滋養層的相等數目的貼壁CD200+胎盤幹細胞相比，所述細胞以可檢測的較低水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括AHSG(a-2-HS-糖蛋白)、ALPL(鹼性磷酸酶，肝臟 /骨/腎臟)、EGF(表皮生長因子)、FLTl (fms相關的酪氨酸激酶1 (血管內皮生長因子/ 血管通透性因子受體))、IGF2、ITGA2、ITGAM(整聯蛋白，α M(補體成分3受體3亞基))、 SCARBl (清道夫受體B類，成員1)、S0X9(SRY(性別決定區Y)-盒9)、TNF、TffISTl (扭曲同系物1 ；以前稱作瞼裂狹小、倒轉型內眥贅皮和上瞼下垂3，尖頭並指趾畸形3)、VCAM1 (血管細胞粘附分子1)和/或VDR(維生素D(l，25-二羥基維生素受體)中的一個或多個， 或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；當所述OPAC和所述胎盤幹細胞在成骨培養基中培養時，與不是滋養層或細胞滋養層的相等數目的貼壁CD200+胎盤幹細胞相比，所述細胞以可檢測的較低水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括BGN(雙糖鏈蛋白多糖)、C0L11A1、C0MP (軟骨寡聚基質蛋白)、FGF1和/或VCAMl中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；不管所述OPAC和所述胎盤幹細胞是在生長培養基中還是在成骨培養基中培養，與不是滋養層或細胞滋養層的相等數目的貼壁CD200+胎盤幹細胞相比，所述細胞以可檢測的較低水平表達VCAMl，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；當OPAC和所述幹細胞在生長培養基中培養時，與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比，所述細胞以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括 BMP4、CALCR、CD36、CDHl 1、COL12A1、COL14A1、COL15A1、C0L3A1、C0L5A1、DMP1、DSPP、FLT1、 MSX1、PDGFA、TGFB3、TGFBR1和/或TUFTl (釉叢蛋白1)中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；當OPAC和所述幹細胞在成骨培養基中培養時，與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比，所述細胞以可檢測的較高水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括 AMBN、CALCR、COL14A1、COL15A1、CSF3、DMP1、DSPP、ITGA1、ITGA2、MMP10、MMP9、MSX1、PDGFA、 TGFBl、TGFB3、TGFBRl和/或TGFBR2中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的 Ct值來評估；不管所述OPAC和所述胎盤幹細胞是在生長培養基中還是在成骨培養基中培養，與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比，所述細胞在可檢測的較高水平表達一個或多個基因， 其中所述一個或多個基因包括 CALCR、C0L14A1、⑶L15A1、DMPl、DSPP、MSXl、PDGFA、TGFB3 和 /或TGFBRl中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；當OPAC和所述間充質幹細胞在生長培養基中培養時，與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比，所述細胞在可檢測的較低水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括 ALPL、BGLAP (骨 Y-羧基穀氨酸(gla)蛋白)、IGF2、ITGA2、ITGAM、SCARB1 和 / 或 SOXl 中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；當OPAC和所述幹細胞在成骨培養基中培養時，與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比，所述細胞在可檢測的較低水平表達一個或多個基因，其中所述一個或多個基因包括 AHSG, ALPL, BGLAP, BGN、BMP3、BMP5、CD36、C0L10A1、COLl IAl、C0L12A1、C0L2A1、C0L4A3、 COMP, EGF、FGFU FGFR2、IGF2、MMP8、PHEX(磷酸鹽調節的肽鏈內切酶同系物，X連鎖)、 RUNX2 (runt-相關轉錄因子2)、SCARBl、SOXl、VCAMl和/或VEGFB中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估；或不管所述OPAC和所述胎盤幹細胞是在生長培養基中還是在成骨培養基中培養，與相等數目的骨髓源間充質幹細胞相比，所述細胞在可檢測的較低水平表達一個或多個基因， 其中所述一個或多個基因包括ALPL、BGLAP、IGF2、SCARBl和/或S0X9中的一個或多個，或全部，這通過來自實時定量PCR的Ct值來評估。
21.如權利要求18所述的分離的細胞群，其中所述細胞群中的細胞表達一種或多種蛋白核心蛋白聚糖、表皮調節素、IGFBP-3、IGFBP-6、IL_2Ra、IL-17RC、IL-27、潛在的 TGF- β 結合蛋白 1 (LTBP)、NCAM-I、Smad4、TFPI、TGF- β R1/ALK5 或 ΤΙΜΡ-2。
22.如權利要求18所述的分離的細胞群，其中所述細胞群中的細胞表達蛋白核心蛋白聚糖、表皮調節素、IGFBP-3、IGFBP-6、IL-2Ra、IL-17RC、IL-27、潛在的TGF-β結合蛋白 1 (LTBP)、NCAM-I、Smad4、TFPI、TGF- β R1/ALK5 禾口 ΤΙΜΡ-2。
23.如權利要求18所述的分離的細胞群，其中所述群的至少50%的細胞是如權利要求 9所述的細胞。
24.如權利要求18所述的分離的細胞群，其中所述群的至少80%的細胞是如權利要求 9所述的細胞。
25.如權利要求18所述的分離的細胞群，其中所述群的至少95%的細胞是如權利要求 9所述的細胞。
26.如權利要求18所述的分離的細胞群，基本由如權利要求9所述的細胞組成。
全文摘要
本發明提供了成骨胎盤貼壁細胞(OPAC)，使用OPAC和OPAC群的方法，以及培養、增殖、擴增或分化OPAC的方法。本發明進一步提供了使用OPAC配製適合對個體施用的可植入或可注射的組合物的方法。本發明更進一步提供的是，提供了用OPAC和包含OPAC的組合物治療骨缺損的方法。本發明也提供了在多發性骨髓瘤的治療和控制中使用OPAC的方法，例如，在患有多發性骨髓瘤的個體中對多發性骨髓瘤的一種或多種症狀降低其進展、停止其進展、或改善其，該方法包含對個體施用大量OPAC。
文檔編號A61P35/00GK102176919SQ200980140287
公開日2011年9月7日 申請日期2009年8月24日 優先權日2008年8月22日
發明者克利斯登·拉巴左, 施繆爾·雅科比, 穆罕默德·A·黑德蘭, 薩沙·道恩·阿布拉門遜, 馬裡安·古拉基斯 申請人:人類起源公司