核酸複合體及核酸轉運用組合物的製作方法

2023-07-27 13:58:06

專利名稱：核酸複合體及核酸轉運用組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種可持續地滯留在細胞內、低毒性且高安全性的核酸複合體，及核 酸轉運用組合物。
背景技術：
近年，隨著生物技術的發展，已經發現了多種在細胞內發揮生理活性功能的核酸。 例如已知siRNA(small interfering RNA 小幹涉RNA)可引起存在於細胞內的靶基因的 mRNA分解，阻礙靶基因表達(RNAinterference :RNA幹涉)。由此RNA幹涉產生的阻礙靶基 因表達的功能，在緩解或治療由特定的基因或基因組的異常表達而引起的疾病症狀方面是 有用的，故人們期待將siRNA開發用作治療藥。但是，在包括siRNA治療的基因治療中，由 於核酸是具有負電荷的水溶性高分子，所以其具有非常低的向細胞內的基因轉運效率，導 致無法得到有效的治療效果。目前，為了有效地將基因轉運至細胞內，已知有利用載體(運載體)的技術。運載 體分為病毒性運載體及非病毒性運載體。病毒性運載體顯示出高核酸導入效率，但是在病 原性、免疫原性及細胞毒性等安全性方面存在許多不明之處。因此，在臨床應用中期待使用 非病毒性運載體。非病毒性運載體的例子包括已經市售的Lipofectamine 2000。進而，報導了一 種具有特定結構的陽離子性脂質(參見專利文獻1)；一種含有兩親性化合物及聚陽離子的 組合物(參見專利文獻2)。利用非病毒性運載體將核酸轉運至細胞內如下進行首先將應 轉運的核酸與非病毒性運載體混合形成複合體，然後使該複合體與靶細胞接觸。非病毒性 運載體可以形成脂質體時，核酸在被封入脂質體內的狀態下參入到細胞內，從而使核酸轉 運至細胞內。但是，siRNA等核酸具有穩定性低、電荷強的特有的性質。因此，核酸與非病毒性 運載體混合時，導致穩定性降低、持續的核酸向細胞內的導入被抑制。雖然已知通過形成 siRNA與陽離子性聚合物的複合體將核酸封入脂質體內的例子(參見非專利文獻1)，但從 陽離子性聚合物的細胞毒性的觀點考慮，一般認為在實用性上並不可用。進而，即使利用核 酸與現有的非病毒性運載體形成穩定的複合體時，該複合體也可能具有低的向細胞內的轉 運能力或者可能迅速地被轉運到細胞內。因此，上述現有的非病毒性運載體無法將核酸持 續地保持在細胞內，無法發揮基於核酸的所期望的效果。鑑於上述現有技術，迫切期望開發出一種低毒性且高安全性、能有效地將核酸 (例如siRNA)轉運至細胞內、並且持續地保持核酸的技術。專利文獻1 日本特表2002-529439號公報專利文獻2 日本特表2005-508394號公報非專利文獻 1 :Kentaro Kogure et al. ， Development of a non-viral-multi functional-envelope-type nano device by a novel lipid filmhydration method, J. Control. Release，98(2004) 317—32
發明內容
本發明的目的在於解決上述現有技術課題。具體而言，本發明的目的在於提供一 種低毒性且高安全性的、可以將siRNA等核酸持續地保持在細胞內的核酸複合體，以及能 夠有效地將核酸複合體轉運至細胞內的核酸轉運用組合物。本發明的另一個目的在於提供 一種含有核酸轉運用組合物的藥物組合物，以及通過使核酸轉運用組合物與細胞接觸，將 核酸轉運至細胞內的方法。本發明人等為了解決上述問題，經過反覆研究，結果發現通過使用導入細胞內的 核酸與高支化環糊精形成複合體，可以得到低毒性且高安全性的、能夠將核酸持續地保持 在細胞內的核酸複合體。本發明人等還發現通過使用含有下述物質的載體作為用於將該核 酸複合體導入細胞內的核酸轉運用載體，可以進一步提高安全性、細胞內轉運的有效性及 細胞內核酸的持續性，所述物質包括(A) 二醯基磷脂醯膽鹼、(B)膽固醇及/或其衍生物、 以及(C)脂肪族伯胺。本發明是基於上述發現通過進一步深入研究而完成的。本發明提供下述項項1、一種核酸複合體，其特徵在於，含有核酸及高支化環糊精。項2、如項1所述的核酸複合體，其中，相對於1重量份核酸，高支化環糊精的量為 1 4000重量份。項3、如項1或2所述的核酸複合體，其中，核酸為siRNA。項4、如項1 3中任一項所述的核酸複合體，其中，高支化環糊精是具有內支環結 構部分和外支化結構部分的、聚合度為50 5000的葡聚糖，所述內支環結構部分由a -1， 4-糖苷鍵及至少一個a-1，6_糖苷鍵形成，所述外支化結構部分與所述內支環結構部分連接。項5、如項1 4中任一項所述的核酸複合體，上述核酸複合體是通過將核酸與高 支化環糊精在水溶液中混合而得到的聚集體。項6、一種核酸轉運用組合物，含有項1 5中任一項所述的核酸複合體及核酸轉 運用載體。項7、如項6所述的核酸轉運用組合物，其中，核酸轉運用載體為含有下述物質的 組合物(A) 二醯基磷脂醯膽鹼；(B)選自膽固醇及其衍生物中的至少一種；及(C)脂肪族伯胺。項8、如項7所述的核酸轉運用組合物，其中，核酸轉運用載體中的成分(A)為醯基 部分的碳原子數為4 23的二醯基磷脂醯膽鹼。項9、如項7所述的核酸轉運用組合物，其中，核酸轉運用載體中的成分(B)為膽固醇。項10、如項7所述的核酸轉運用組合物，其中，核酸轉運用載體中的成分(C)為碳 原子數為10 20的烷基胺。項11、如項7所述的核酸轉運用組合物，其中，成分(A)成分(B)成分(C)的 摩爾比為5 9 1 5 1。
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項12、如項7所述的核酸轉運用組合物，其中，所述核酸轉運用載體是由成分 (A) (C)形成脂質體膜的脂質體製劑。項13、一種藥物組合物，含有項6 12中任一項所述的核酸轉運用組合物。項14、如項13所述的藥物組合物，其中，核酸為siRNA。項15、項6 12中任一項所述的核酸轉運用組合物在製備用於將核酸轉運至細胞 內的藥物中的應用。項16、如項15所述的應用，其中，核酸為siRNA。項17、一種將核酸轉運至細胞內的方法，包括使項6 12中任一項所述的核酸轉 運用組合物與細胞接觸的步驟。項18、如項17所述的方法，其中，核酸為siRNA。通過使用高支化環糊精將核酸形成複合體可以得到本發明的核酸複合體，由此可 以高安全性、且長時間地將核酸複合體穩定地保持在細胞內，持續地發揮基於該核酸的有 用效果。另外，本發明的核酸複合體易於與核酸轉運用載體形成複合體，即使為脂質體形態 的核酸轉運用載體，也易於被封入其中。因此從核酸轉運用組合物製備的容易性方面考慮， 本發明的複合體也優異。進而，本發明的核酸轉運用組合物可以將上述核酸複合體導入細 胞內。為了將本發明的核酸複合體轉運至細胞內，通過使用含有下述物質的載體作為細 胞轉運用載體，可以提高核酸複合體向細胞內的轉運效率，並且可以進一步提高向細胞內 轉運的持續性及安全性，所述物質包括(A) 二醯基磷脂醯膽鹼、(B)膽固醇及/或其衍生 物、以及(C)脂肪族伯胺。如上所述，本發明的核酸複合體及核酸轉運用組合物可以有效且持續地發揮基於 該核酸的有用效果，並且具有高安全性，因此該複合體及組合物作為基因治療中使用的藥 物特別有用。因此，本發明中的藥物組合物或將核酸轉運至細胞內的方法可以更有效地將 核酸轉運至細胞內。
具體實施例方式以下詳細地說明本發明。(1)核酸複合體本發明的核酸複合體的特徵在於含有核酸及高支化環糊精。本發明的核酸複合體中使用的核酸只要是需要轉運至細胞內的核酸即可，對類型 或結構沒有特別限定。上述核酸的具體例包括siRNA、mRNA、tRNA、rRNA、cDNA、miRNA (微 RNA)、核酶、反義寡核苷酸、誘餌寡核苷酸(decoy oligonucleotide)、質粒DNA、肽核酸、三 鏈形成性寡核苷酸(triplex-forming oligonucleotides (TFOs))、適體(aptamer)、基因 等，其中優選為siRNA。雖然siRNA在與現有的非病毒性運載體的共存的條件下具有穩定性 低的缺點，但將siRNA形成為本發明的核酸複合體時，兼有優異的穩定性和持續地向細胞 內轉運的能力。本發明的核酸複合體中使用的核酸可以是來自人、動物、植物、細菌、病毒等 的核酸，或者也可以是通過化學合成製備得到的核酸。上述核酸可以是單鏈、雙鏈或三鏈中 的任一種，並且對其分子量也沒有特別限定。另外，在本發明中，核酸也可以是被化學物質、 酶或肽修飾的核酸。進而，在本發明中，核酸可以單獨使用，或者也可以組合兩種以上進行使用。本發明的核酸複合體中使用的高支化環糊精是使分支酶作用於例如支鏈澱粉等 具有a-1，4_糖苷鍵及至少一個a-1，6_糖苷鍵的糖類而生產得到的，是具有內支環結構 (inner branched cyclic structure)部分及夕卜支化結構(outer branched structure) 部分的、聚合度為50 5000的葡聚糖。內支環結構部分是由a-1，4_糖苷鍵及至少一個 a-1，6_糖苷鍵形成的環狀結構部分，外支化結構部分是與內支環結構部分連接的非環狀 結構部分。外支化結構部分通過至少一個a-1，6_糖苷鍵與內支環結構部分連接。高支化 環糊精的優選方案包括上述葡聚糖的內支環結構部分的聚合度為10 100，上述葡聚糖 的外支化結構部分的聚合度為40以上，上述葡聚糖的外支化結構部分的單元鏈的聚合度 的平均值為10 20。上述高支化環糊精例如如圖1所示，圖1中(i)表示內支環結構部 分，(ii)表示外支化結構部分。可以從已知聚合度的原料的洗脫部位使用差示折光儀採用凝膠過濾測定聚合度。 在該測定中，差示折光儀的輸出與葡聚糖的濃度成比例，小角雷射散射光度計的輸出與聚 合度的產生及葡聚糖的濃度成比例。因此，葡聚糖的聚合度可以通過測定如差示折光儀及 小角雷射散射光度計兩種檢測器的輸出比率來確定。具體條件如US6248566B1(日本專利 第3107358號)所示。上述高支化環糊精及其製備方法如US6248566B1 (日本專利第3107358號)所示， 高支化環糊精由Ezaki Glico株式會社以「ClusterDextrin」為註冊商標銷售。本發明的核酸複合體中，上述高支化環糊精與上述核酸的比率沒有特別限定，但 相對於1重量份核酸，高支化環糊精通常為1 4000重量份，優選為10 1000重量份，更 優選為100 400重量份。從摩爾比的觀點考慮，作為該比率例如可以舉出相對於1摩爾 核酸，高支化環糊精為0. 1 1000摩爾、優選為1 100摩爾、更優選為10 20摩爾。通 過滿足上述比率，可以使通過核酸轉運用載體獲得的向細胞內轉運核酸的持續性、及安全 性越發顯著。本發明的核酸複合體的平均粒徑通常為6 60nm，優選為8 30nm，更優選為 10 20nm。核酸複合體的平均粒徑使用雷射動態光散射法作為體積平均粒徑進行測定。本發明的核酸複合體是由上述核酸與上述高支化環糊精聚集而形成的複合體。本 發明的核酸複合體，通過在可以穩定地分散上述核酸與上述高支化環糊精的溶液中將兩者 混合進行製備。作為可以穩定地分散上述核酸與上述高支化環糊精的溶液，具體而言可以 舉出Tris等緩衝液。上述緩衝液可以含有乙二胺四乙酸(EDTA)等螯合劑。作為上述核酸 與上述高支化環糊精混合的條件，可以舉出在上述溶液中，將例如0. liiM lOOiiM左右、 優選liiM 10iiM左右的核酸與liiM 1000iiM左右、優選10iiM lOOyM左右的高支 化環糊精，在室溫下混合1 100分鐘左右、優選5 10分鐘左右。如上所述製備的本發 明的核酸複合體以分散於溶液中的狀態存在。可以將該分散體直接與核酸轉運用載體混合 進行使用，或者根據需要稀釋後或濃縮後與核酸轉運用載體混合進行使用。(2)核酸轉運用組合物上述核酸複合體通過與核酸轉運用載體混合，參入核酸轉運用載體中，該核酸可 以被轉運至細胞內。即，本發明還提供一種含有上述核酸複合體及核酸轉運用載體的核酸 轉運用組合物。
核酸轉運用載體是指為了將核酸轉運(導入)至細胞內而作為核酸載體使用的非 病毒性運載體。核酸轉運用組合物是指為了將該組合物中含有的核酸導入細胞內而與成為 導入對象的細胞接觸的組合物。核酸轉運用載體的組成本發明的核酸轉運用組合物中使用的核酸轉運用載體，只要可以將核酸參入細胞 內即可，沒有特別限定。作為上述核酸轉運用載體，例如可以使用LipOfectamineTM2000等 公知的載體。從進一步提高上述核酸複合體中所含核酸的細胞內持續性、以及進一步提高細胞 內轉運效率及安全性的觀點考慮，例如優選使用含有下述物質的載體(A) 二醯基磷脂醯 膽鹼、(B)膽固醇及/或其衍生物、及(C)脂肪族伯胺(以下稱作「載體1，，)。載體1中使用的二醯基磷脂醯膽鹼(以下有時記作「成分(A) 」)，只要藥理學上允 許即可，沒有特別限定，例如可以舉出醯基部分的碳原子數為4 23的二醯基磷脂醯膽鹼。 構成該二醯基磷脂醯膽鹼的兩個醯基的碳原子數可以相同或不同。二醯基磷脂醯膽鹼的具體例包括二月桂醯磷脂醯膽鹼、二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼、 二棕櫚醯磷脂醯膽鹼、二硬脂醯磷脂醯膽鹼、二油醯磷脂醯膽鹼、二亞油醯磷脂醯膽鹼、肉 豆蔻醯棕櫚醯磷脂醯膽鹼、肉豆蔻醯硬脂醯磷脂醯膽鹼、棕櫚醯硬脂醯磷脂醯膽鹼、二丁 醯磷脂醯膽鹼、二己醯磷脂醯膽鹼、二庚醯磷脂醯膽鹼、二癸醯磷脂醯膽鹼、二苯二甲醯磷 脂醯膽鹼、二月桂基磷脂醯膽鹼、二花生醯磷脂醯膽鹼、二(二十一烷醯基)磷脂醯膽鹼、 二芥酸醯磷脂醯膽鹼、二花生四烯酸醯磷脂醯膽鹼、雙(二十三烷二醯基)磷脂醯膽鹼 (bis (tricosadinoyl)phosphatidylcholine)等。其中，優選例包括醯基部分的碳原子數 為12 18的二醯基磷脂醯膽鹼；更優選例包括二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼、二棕櫚醯磷脂醯膽 鹼、二硬脂醯磷脂醯膽鹼、肉豆蔻醯棕櫚醯磷脂醯膽鹼、肉豆蔻醯硬脂醯磷脂醯膽鹼、棕櫚 醯硬脂醯磷脂醯膽鹼等醯基部分的碳原子數為13 17的二醯基磷脂醯膽鹼；特別優選例 包括二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼及二硬脂醯磷脂醯膽鹼；最優選例包括 二硬脂醯磷脂醯膽鹼。上述二醯基磷脂醯膽鹼可以單獨使用或者組合兩種以上進行使用。載體1中使用的膽固醇及/或其衍生物(以下有時記作「成分⑶」)只要藥理學 上允許即可，沒有特別限定。膽固醇的衍生物為具有膽固醇骨架的陽離子性脂質，具體而言 包括33-[N-(N，，N，- 二甲基氨基乙烷)-氨基甲醯基]膽固醇(DC-Chol)，3 3-[N，，N，， N，-三甲基氨基乙烷]碘化膽固醇(TC-Chol)，(N，，N-雙胍乙基氨基乙烷)氨基甲醯-膽 固醇(bis(guanidinium)-tren-cholesterol) (BGTC)，N-膽甾烯基氧基羰基-3，7-二氮雜 壬烷-1，9-二胺、丙氨酸-二乙醇胺-膽固醇、N4-精胺膽固醇氨基甲酸酯(GL-67)， N[N4-3-氨基丙基亞精胺]膽固醇氨基甲酸酯(GL-78)，N4-精胺膽固醇甲醯胺(GL-gO^N1， N8-雙(精氨酸甲醯胺)-N4-亞精胺膽固醇氨基甲酸酯出1^-95)、及^況，#，#-三(3-氨 基丙基)亞精胺]膽固醇氨基甲酸酯(GL-96)。成分(B)的優選例包括膽固醇。載體1中， 作為成分(B)可以單獨使用膽固醇及其衍生物、或者也可以組合兩種以上進行使用。載體1中使用的脂肪族伯胺(以下有時也記作「成分(C) 」)只要藥理學上允許即 可，沒有特別限定，例如可以舉出烷基部分的碳原子數為10 20的烷基胺。脂肪族伯胺的具體例包括月桂胺、肉豆蔻胺、棕櫚胺、硬脂胺、油胺、癸醯胺、苯二 甲醯胺(phthanoylamine)等。其中，優選烷基部分的碳原子數為12 18的烷基胺；更優
7選硬脂胺、油胺和棕櫚醯胺；特別優選硬脂胺。上述脂肪族伯胺可以單獨使用或者組合兩種 以上進行使用。載體1含有上述成分(A) (C)的組合。為了進一步提高核酸向細胞內的轉運效 率、及進一步降低毒性，優選下述組合(A)醯基部分的碳原子數為4 23的二醯基磷脂醯 膽鹼、(B)膽固醇及/或其衍生物以及(C)碳原子數為10 20的烷基胺的組合；更優選
(A)二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼及/或二硬脂醯磷脂醯膽鹼、(B)膽固醇、 以及(C)硬脂胺的組合。載體1中，成分(A) (C)的比率沒有特別限定，例如可以舉出成分(A)成分
(B)成分(C)的摩爾比為5 9 1 5 1，優選為6 9 1 4 1，更優選為7 8 2 3 1。通過滿足上述比率，可以進一步提高核酸向細胞內的轉運效率及進一步降 低毒性。相對於載體1的總量，成分(A) (C)的總量例如可以舉出1 100重量％，優選 為20 90重量％，更優選為30 70重量％。載體1中除成分(A) (C)之外還可以含有其他陽離子性脂質。可用的陽離 子性脂質的具體例包括角鯊胺(Squalamine),3a,7a,12a-H (3_氨基丙氧基)_5 0 -膽 燒-24-(N，N-雙(3-氨基丙基)胺(3a，7a，12a-Tris(3-aminopropoxy)-53-chol an-24- (N, N-bis (3-aminopropyl) amine) >3a,7a, 12a-三(3- M ^ M ft ■月旦 烷-24- (N- (N- (3-氨基丙基))-3-氨基丙基)-胺(3a，7a, 12a_Tris (3-aminopropoxy) -5 b-cholan-24-(N_(N_(3-aminopropyl))-3-aminopropyl)-amine)、3a，7a，12a_ 三(3-疊 氮基丙氧基)-5 0-膽烷-24-(N，N-雙(2-氰基乙基)胺)(3a，7a，12a-Tris(3-azidopr opoxy) -5b-cholan-24- (N, N_bis (2-cyanoethyl) amine))、3a,7a, 12a-三(3~ 疊氮基丙氧 基)-5 3 -膽烷-24-(N-(苄氧基羰基)-N-(羥基丙基)-胺)(3a, 7a, 12a-Tris (3-azidop ropoxy)-5b-cholan-24-(N-(benzyloxycarbonyl)_N_(3-hydroxypropyl)-amine))等留 族化合物結合的陽離子性脂質；傘狀精胺複合體(Umbrella-spermineconjugates)等膽酸 結合的陽離子性脂質；留醇糖苷結合的陽離子性脂質；留類皂苷結合的陽離子性脂質；二 甲基二(十八烷基)溴化銨鹽(DDAB)、1，2-二肉豆蔻醯基-3-三甲基銨丙烷、1，2_ 二油 醯基-3-三甲基銨丙烷(D0TAP)、1，2_ 二油醯基-3-三甲基銨丙烷甲基硫酸鹽、1，2- 二棕 櫚醯基-3-三甲基銨丙烷、1，2- 二硬脂醯基-3-三甲基銨丙烷、N-(l-(2, 3-雙(油醯基氧 基)丙基)_N，N，N-三甲基銨鹽酸鹽(D0TMA)、二肉豆蔻醯基氧基丙基二甲基羥基乙基溴化 銨鹽(DMRIE)、二油醯基氧基丙基二甲基羥基乙基溴化銨(D0RIE)、二甲基(二)十二烷基 溴化銨、N- (a-三甲基銨基乙醯基)_ ( 二)十二烷基-D-穀氨醯胺鹽酸鹽、N- (a-三甲基銨 基乙醯基)_0，0，-雙-(1禮111，211，211-全氟癸基)-1^穀氨醯胺鹽酸鹽、0，0，- 二(十二 烷醯基)-N-(a-三甲基銨基乙醯基)二乙醇胺鹽酸鹽、甲基烯丙基二(十二烷基)溴化 銨、N-{p-(w-三甲基銨基丁基氧基)_苯甲醯基} _ 二(十二烷基)-L-穀氨醯胺鹽酸鹽、 9-(w-三甲基銨基丁基)-3，6_雙(十二烷醯基)咔唑溴化物、二甲基二(十八烷基)銨鹽 酸鹽、N-w-三甲基銨基十二烷醯基-二(十六烷基)-D-穀氨醯胺溴化物、N- {p- (w-三甲基 銨基己基氧基)_苯甲醯基}-二(十四烷基)-L-穀氨醯胺溴化物、p-(w_三甲基銨基癸基 氧基)_P』 -辛氧基偶氮苯溴化物鹽(MC-l-0810)、p-{w-(b-羥基乙基)二甲基-銨基-癸 基氧基}-p，-辛氧基偶氮苯溴化物鹽(MC-3-0810)、0，0，，0」_三(十二烷醯基)-N-(w-三甲基-銨基癸醯基)_三(羥基甲基)氨基甲烷溴化物鹽(TC-1_12)、1，2-二月桂基-甘 油-3-乙基磷酸膽鹼、1，2- 二肉豆蔻醯基-甘油-3-乙基磷酸膽鹼、1，2- 二棕櫚醯基-甘 油-3-乙基磷酸膽鹼、1，2_ 二硬脂醯基-甘油-3-乙基磷酸膽鹼、1，2_ 二油醯基-甘 油-3-乙基磷酸膽鹼、1-棕櫚醯-2-油醯基-甘油-3-乙基磷酸膽鹼等季銨鹽型陽離子性 脂質等。載體1含有除成分(A) (C)之外的其他陽離子性脂質時，該陽離子性脂質的比 例只要不妨礙本發明的效果即可，沒有特別限定，例如可以舉出下述比例，即相對於100重 量份上述成分㈧ (C)的總量，該陽離子性脂質為1 10重量份，優選為2 8重量份， 更優選為4 6重量份。根據需要，載體1也可以含有油性基劑。配合油性基劑，利用其特性，由此能控制 載體1的核酸導入效率。例如通過配合油性基劑調節載體1的比重，可以控制細胞與載體 1的接觸性，改善體外的導入效率。另外，例如通過配合具有溫度感受性功能的基劑作為油 性基劑，能夠在規定的溫度條件下使核酸載體組合物的芯破碎，從而誘發細胞表面的波動， 提高核酸的導入效率。進而，例如通過配合具有外部刺激破碎性的基劑作為油性基劑，可以 通過外部刺激使載體1的芯破碎，從而誘發細胞表面的波動，提高核酸的導入效率。可以在載體1中配合的油性基劑的例子包括全氟化碳、全氟戊烷、溴代全氟辛 烷、全氟己烷、全氟三丁基胺、大豆油、精製大豆油、氫化大豆油、大豆油非皂化物、角鯊烯、 蓖麻油、丁香油、失水山梨醇三油酸酯、松節油、紅花油、紅花油脂肪酸、油酸、棕櫚油、菜子 油、雜醇油、橄欖油、亞麻仁油、芝麻油、葉綠素油、巴豆油、佛手油、雪松油、橙油、茴香油、桉 樹油、玉米油、燻衣草油、香馬鬱蘭油、檸檬油、棉籽油、椰子油、蛋黃油、玫瑰花油、松油、杏 仁油、花生油、山茶油、白樟油、春黃菊油、桂皮油、薄荷油、酯化玉米油、生薑油、羅馬春黃菊 油、蛇油、留蘭香油、向日葵油、可可脂、小麥胚芽油、氧化鋅油、氫化油、氫化植物油、輕質液 體石蠟、液體石蠟、中鏈脂肪酸三甘油酯、貂油、苦橙油、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氫化蓖 麻油、聚氧乙烯氫化蓖麻油10、聚氧乙烯氫化蓖麻油100、聚氧乙烯氫化蓖麻油20、聚氧乙 烯氫化蓖麻油40、聚氧乙烯氫化蓖麻油5、聚氧乙烯氫化蓖麻油50、聚氧乙烯氫化蓖麻油 60、蓖麻油聚烴氧酯35、操作油等。在上述油性基劑中，全氟戊烷具有溫度感受性、具有在 29. 5°C下通過沸騰氣化的特性。另外，全氟己烷、溴代全氟辛烷及全氟三丁基胺具有下述特 性，即具有外部刺激破碎性，在由超聲波照射產生的刺激等來自外部的刺激作用下，使載體 1的芯產生空腔，使其破碎。當含有油性基劑時，該油性基劑的比例只要不妨礙本發明的效果即可，沒有特別 限定，例如可以為下述比例，即相對於100重量份上述成分(A) (C)的總量，該油性基劑 為0. 1 50重量份、優選為1 30重量份、更優選為5 20重量份。根據需要載體1也可以含有膜融合性脂質(輔助脂質)。通過含有上述膜融合性 脂質，載體1可以進一步提高核酸向細胞內的轉運效率。上述膜融合性脂質的例子包括二 油醯基磷脂醯乙醇胺、二油醯基磷脂醯膽鹼、反式磷脂醯基磷脂醯基乙醇胺、1，2_雙(10， 12-二十三烷二醯基)_磷酸乙醇胺、1，2_二反油醯基磷酸乙醇胺、1，2_二(十六烷基)磷酸 乙醇胺、1，2_ 二己醯基磷酸乙醇胺、1，2_ 二月桂醯基磷酸乙醇胺、1，2_ 二亞油醯基磷酸乙 醇胺、1，2-二肉豆蔻醯基磷酸乙醇胺、1，2-二油醯基磷酸乙醇胺、1，2-二棕櫚油醯基磷酸 乙醇胺、1，2- 二棕櫚醯基磷酸乙醇胺、1，2- 二植烷醯磷酸乙醇胺、1，2- 二硬脂醯基磷酸乙
9醇胺、1-棕櫚醯基-2-油醯基磷酸乙醇胺、1-棕櫚醯基-2- (10，12- 二十三烷二醯基)磷酸 乙醇胺、1，2- 二油醯基磷酸乙醇胺-N-己醯胺、1，2- 二棕櫚醯基磷酸乙醇胺-N-己醯胺、N， N- 二甲基-1，2- 二油醯基磷酸乙醇胺、N，N- 二甲基-1，2- 二棕櫚醯基磷酸乙醇胺、N-十二 烷醯基-1，2- 二棕櫚醯基磷酸乙醇胺、N-十二烷醯基-1，2- 二油醯基磷酸乙醇胺、1，2- 二 油醯基磷酸乙醇胺-N-十二烷基胺、1，2_ 二棕櫚醯基磷酸乙醇胺-N-十二烷基胺、1，2_ 二 油醯基磷酸乙醇胺-N-戊二醯、1，2_ 二棕櫚醯基磷酸乙醇胺-N-戊二醯、1，2_ 二油醯基磷 酸乙醇胺-N-乳糖、1，2_ 二油醯基磷酸乙醇胺-N-[4(p-馬來醯亞胺甲基)環己烷-羧酸 鹽、二棕櫚醯基磷酸乙醇胺-N-[4(p-馬來醯亞胺甲基)環己烷-羧酸鹽、1，2_ 二棕櫚醯基 磷酸乙醇胺-N-[4(p-馬來醯亞胺苯基)丁醯胺、1，2_ 二油醯基磷酸乙醇胺-N-[4(p-馬來 醯亞胺苯基)丁酸鹽]、N-甲基-1，2-二油醯基磷酸乙醇胺、N-甲基-二棕櫚醯基磷酸乙 醇胺、1，2_ 二油醯基磷酸乙醇胺-N-[3-(2-吡啶二硫)丙酸鹽、1，2_ 二棕櫚醯基磷酸乙醇 胺-N-[3-(2-吡啶二硫)丙酸鹽、N-(琥珀醯)-1，2_ 二油醯基磷酸乙醇胺、N-(琥珀醯)-1， 2_ 二棕櫚醯基磷酸乙醇胺等。其中，在載體1中優選使用二油醯基磷脂醯乙醇胺。當含有該膜融合性脂質時，該膜融合性脂質的比例只要不妨礙本發明的效果即 可，沒有特別限定，可以舉出下述比例，即相對於100重量份上述成分(A) (C)的總量，該 膜融合性脂質為1 500重量份、優選為10 250重量份、更優選為25 100重量份。根據使用形態，載體1可以含有等滲劑、賦形劑、稀釋劑、增稠劑、穩定劑、緩衝劑、 保存劑等各種添加劑；及/或精製水、糖水溶液、緩衝液、生理鹽水、高分子水溶液、不含 RNase的水等水性載體。上述添加劑和水性載體的配合量可以根據核酸轉運用載體的使用 形態適當地設定。核酸轉運用載體的形態核酸轉運用載體的形態沒有特別限定，只要能夠封入轉運至細胞內的核酸即可， 但優選為脂質體形態。例如將載體1製成脂質體形態時，上述成分(A) (C)及根據需要 選擇使用的其他脂質形成脂質體膜。將核酸轉運用載體製成脂質體形態時，可以為小單層脂質體(smallimilamellar. vesicles :SUV)、大單層脂質體(large unilamellar vesicles :LUV)、及多層脂質體 (multilamellar vesicles :MLV)中的任一種。核酸轉運用載體的粒徑可以根據轉運對象的 細胞種類適當設定，例如可以舉出為SUV時粒徑為20 lOOnm左右、為LUV時粒徑為200 lOOOnm左右、為MLV時粒徑為400 3500nm左右。脂質體的粒徑是根據動態光散射法而測 定得到的。脂質體的製備及其粒徑的調節按照本領域公知的方法實施。例如為載體1時，可 以使用含有上述成分(A) (C)的油相和水相(水性載體)，通過薄膜法、逆向蒸發法、醚注 入法、表面活性劑法、加熱法等形成脂質體。另外，可以通過擠壓法、French press法、均質 化法等調節粒徑。核酸轉運用組合物的形態、組成、使用方法核酸轉運用載體為脂質體形態時，在本發明的核酸轉運用組合物中，核酸複合體 可以以被封入在脂質體內水相中的狀態存在，或也可以以通過離子鍵或疏水鍵鍵合在脂質 體膜的內側或外側的狀態存在。核酸轉運用載體為脂質體以外的形態時，在本發明的核酸 轉運用組合物中，只要核酸複合體與核酸轉運用載體的成分通過離子鍵或疏水鍵形成複合
10體即可。本發明的核酸轉運用組合物通過混合核酸複合體與核酸轉運用載體製成所期望 的形態，或以任意順序混合核酸複合體及核酸轉運用載體的配合成分製成所期望的形態而 進行製備。在本發明的核酸轉運用組合物中，核酸複合體與核酸轉運用載體的比率根據核酸 複合體的種類、核酸轉運用載體的種類、成為核酸轉運對象的細胞的種類等而不同。可以舉 出下述比率，即相對於核酸轉運用載體的總量100重量份，核酸複合體為1 100重量份、 優選為10 100重量份、更優選為20 100重量份。更具體而言，使用載體1作為核酸轉 運用載體時，例如可以舉出下述比率，即相對於載體1中的成分㈧ (C)的總量100重量 份，核酸複合體為1 100重量份、優選為10 100重量份、更優選為20 100重量份。進而，使用載體1作為核酸轉運用載體時，載體1中含有的成分(A) (C)的總量 相對於核酸轉運用組合物的總量，例如可以舉出10 90重量％、優選為30 80重量％、 更優選為40 60重量％。根據其使用形態，本發明的核酸轉運用組合物可以含有等滲劑、賦形劑、稀釋劑、 增稠劑、穩定劑、緩衝劑、保存劑等各種添加劑；及/或精製水、葡萄糖水溶液、緩衝液、生理 鹽水等水性載體。上述添加劑和水性載體的配合量可以根據核酸轉運用組合物的使用形態 而適當地設定。本發明的核酸轉運用組合物可以單獨用作基因治療藥物等藥物組合物。使用本發 明的核酸轉運用組合物作為藥物組合物時，選擇藥理學上允許的核酸轉運用載體、基質、運 載體等。本發明的藥物組合物可以製成各種藥物形態。本發明的藥物組合物的形態的例子 包括液體製劑，如溶液劑(包括糖漿劑等)、滴劑、注射劑等；固體製劑，如片劑、丸劑、散劑、 顆粒劑、膠囊劑(包括軟膠囊劑)等。本發明的藥物組合物為液體製劑時，其可以通過冷凍 或凍乾等方法除去水分進行保存。凍幹製劑、幹糖漿劑等可以在使用時再次溶解於注射用 蒸餾水、滅菌水等中。本發明的藥物組合物為固體製劑時，可以在使用時再次溶解於注射用 蒸餾水、滅菌水等中。在本發明中，成為核酸轉運對象的細胞、即應用本發明的藥物組合物的細胞，沒有 特別限定，可以為培養細胞、從生物體中分離的細胞(包括株化的細胞)、體內細胞等，可以 來自於人或非人的動物。本發明的藥物組合物可以用於體外或體內。在本發明中，可以通過使本發明的藥物組合物與細胞接觸的步驟將核酸轉運至細 胞內。使藥物組合物與細胞接觸的方法沒有特別限定，只要使適當量的核酸轉運用組合物 與成為核酸導入對象的細胞接觸即可。例如，該方法可以與基因治療中迄今為止公知的方 法相同，與細胞接觸的量也同樣適用，可以適當選擇方法及量。將本發明的藥物組合物用於 細胞可以使核酸的細胞內轉運變得容易，持續且穩定地將被轉運的核酸保持在細胞內。例如，為了使本發明的藥物組合物在體外與細胞接觸，可以在適當量的藥物組合 物存在下培養細胞。為了使本發明的藥物組合物在體外與培養的細胞或從生物體分離得到 的細胞接觸，可以在血清存在下進行上述接觸。使本發明的藥物組合物在體內與細胞接觸 時，本發明的藥物組合物可以通過下述方法與細胞接觸，例如向組織內直接注入；向靜脈、 皮下、肌肉、腹腔、眼內、消化器官內、牙內等注射；從鼻腔、口腔、肺等吸入給與；口服給與； 經皮膚給與；通過口腔黏膜、陰道黏膜、眼黏膜、直腸黏膜、子宮黏膜的經黏膜給與等。
根據需要，本發明的藥物組合物可以進一步含有藥理學上允許的載體或基質。載 體及基質只要不妨礙本發明的效果即可，沒有特別限定，根據使用形態適當選擇。例子如上 所述。在上述情況下，藥物組合物、載體及基質的配合比例只要不妨礙本發明的效果即可， 沒有限定，根據使用形態適當選擇。使用本發明的藥物組合物時，使用其有效量。例如藥物組合物的使用量如下，即相 對於每一個細胞，含有的核酸複合體的量為0. 001 10pM、優選為0. 001 lpM、更優選為 0. 01 0. lpM。本發明的藥物組合物可以將特定的核酸轉運至細胞內。即，本發明的藥物組合物 通過使藥物組合物與細胞接觸，可以有效地將存在於藥物組合物中的、及形成核酸複合體 的特定核酸轉運至細胞內。本發明還提供一種將核酸轉運至細胞內的方法。根據本發明，將核酸轉運至細胞 內的方法包括使上述核酸複合體或核酸轉運用組合物與細胞接觸的步驟。核酸複合體或核 酸轉運用組合物與細胞之間的接觸，只要將適當量的核酸複合體或核酸轉運用組合物與成 為核酸導入對象的細胞接觸即可，沒有特別限定。例如，接觸方法、與細胞接觸的量可以與 迄今為止在基因治療中公知的方法、與細胞接觸的量相同，可以適當選擇方法及量通過按照上述方法使核酸複合體或核酸轉運用組合物與細胞接觸，可以將核酸持 續且穩定地保持在細胞內。為了與細胞接觸，核酸複合體可以直接使用，或者與上述載體或 基質組合進行使用。核酸轉運用組合物也可以直接使用，或者與上述載體或基質組合進行 使用。為了更有效地進行細胞內核酸的轉運，優選使核酸轉運用組合物與細胞接觸。本發明中，如上所述，成為核酸轉運對象的細胞沒有限定，可以為培養細胞、從生 物體中分離的細胞(包括株化的細胞)、體內細胞等，可以來自於人或非人的動物。上述接 觸可以在體外或體內進行。例如，為了使核酸複合體或核酸轉運用組合物與細胞在體外接觸，可以在適當量 的核酸複合體或核酸轉運用組合物的存在下培養細胞。為了使核酸複合體或核酸轉運用 組合物與培養的細胞或從生物體中分離的細胞在體外接觸，可以在血清存在下進行上述接 觸。使核酸複合體或核酸轉運用組合物與細胞在體內接觸時，核酸複合體或核酸轉運用組 合物可以通過下述方法與細胞接觸，例如向組織內直接注入；向靜脈、皮下、肌肉、腹腔、眼 內、消化器官內、牙內等注射；從鼻腔、口腔、肺等吸入給與；口服給與；經皮膚給與；通過口 腔黏膜、陰道黏膜、眼黏膜、直腸黏膜、子宮黏膜的經黏膜給與等。根據本發明，將核酸轉運至細胞內的方法中，使有效量的核酸複合體或核酸轉運 用組合物與細胞接觸，將核酸導入細胞內。例如可以選擇核酸複合體或核酸轉運用組合物 的給與量，使向每個細胞給與0. 001 10pM，優選0. 001 lpM，更優選0. 01 0. lpM的核
酸複合體。本發明的將核酸轉運至細胞內的方法可以通過使藥物組合物與細胞接觸來進行。 使用藥物組合物時，本發明的方法可以採用與上述同樣的方法。實施例以下基於實施例等詳細地說明本發明，但本發明並不限定於此。在以下實施例及 試驗例中，使用GL3-siRNA(相對於螢火蟲螢光素酶的siRNA ；Dharmacon公司(Boulder， CO), USA ；有意5，-CUUACGCUGAGUACUUCGAdTdT，反義5，-UCGAAGUACUCAGCGUAAGdTdT)作為siRNA。使用Cluster dextrin(Ezaki Glico株式會社制)作為高支化環糊精。實施例1含有siRNA與高支化環糊精的複合體的製備使用Tris-EDTA(TE)緩衝液(Fluka公司制)，製備以2 y M的濃度含有siRNA的溶 液(siRNA溶液)。另外，使用Tris-EDTA(TE)緩衝液(Fluka公司制)製備以25 y M的濃 度含有高支化環糊精的溶液(高支化環糊精溶液)。將等量的上述溶液混合1分鐘，形成 siRNA複合體。得到的siRNA複合體的物性示於表1。表 1
粒徑(nm)Zeta 電位( mV)複合體 31.1-42.9# 粒徑表示使用 ZETASIZER 3000HSA (MALVERN INSTRUMENT)(利用雷射衍射法測定體積平均粒徑)測定得到的平均粒徑(nm)。Zeta 電位利用 ZETASIZER 3000HSA (MALVERN INSTRUMENT)測定。實施例2含有siRNA複合體的核酸轉運用組合物的製備稱量二硬脂醯磷脂醯膽鹼(DSPC)、膽固醇及硬脂胺使其摩爾比為二硬脂醯磷脂 醯膽鹼膽固醇硬脂胺=7:3: 1，用茄型瓶(回收瓶)使之溶解於氯仿。用旋轉蒸 發儀使溶液減壓乾燥，形成脂質薄膜。將實施例1中得到的含有0.028mg/ml siRNA複合 體的溶液添加到所得脂質薄膜中，使溶液的DSPC的濃度為30mg/mL，然後將其混合。用 擠出機通過孔徑為800nm及200nm的膜來調節溶液的粒徑，製備陽離子性脂質體形態 的siRNA轉運用組合物。得到的siRNA轉運用組合物的粒徑約為200nm，為粒度均勻的 粒子的脂質體形態。上述組合物的Zeta電位約為50mV。粒徑表示為使用ZETASIZER 3000HSA (MALVERNINSTRUMENT)(利用雷射衍射法測定體積平均粒徑)測定得到的平均粒徑 (nm)。Zeta 電位為利用 ZETASIZER 3000HSA(MALVERNINSTRUMENT)測定得到的。實施例3含有siRNA複合體的核酸轉運用組合物的製備除DSPC 膽固醇硬脂胺=7:3: 2之外，與實施例2同樣地製備陽離子性脂 質體形態的核酸轉運用組合物。與實施例2同樣地，得到的siRNA轉運用組合物的粒徑約 為200nm，為粒度均勻的粒子的脂質體形態。上述組合物的Zeta電位約為50mV。試驗例1siRNA 的封入率(inclusion efficiency)的評價使用預先用FITC標記的siRNA，與上述實施例1同樣地製備FITC標記的siRNA復 合體。使用FITC標記的siRNA複合體，在與實施例2及3同樣的條件下製備陽離子性脂質 體形態的核酸轉運用組合物。將剛製備好的siRNA轉運用組合物通過離心(75，000rpm、l 小時)使之沉澱，測定存在於上清中的FITC標記的siRNA的螢光強度，算出siRNA的封入 率(相對於全部的siRNA，被封入脂質體內的siRNA的比例(％ ))。結果，在與實施例2、實施例3同樣的條件下製備時，siRNA的封入率顯示出高水 平，分別為97. 2%、99. 8%。這表明本發明的核酸複合體具有有效地以脂質體形態導入核酸轉運用載體的特性。雖然限定性解釋並不理想，但推測這是由於高支化環糊精與siRNA形 成緊密的複合體。試驗例2細胞安全性評價試驗利用MTS試驗法進行評價。MTS試驗利用Promega公司制的「CellTiter96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay」 進行。具體而言，在 96 孔板上將 A594 細 胞(ATCC，USA)以3. 16X104細胞/孔接種在200iiL含有10容量％胎牛血清(FBS)的 Dulbecco's Modification ofEagle，s 培養基(DMEM)中，在 37°C下培養 24 小時。用 Hank，s 緩衝鹽溶液(HBSS)洗滌3次後，將培養基更換為不含FBS的DMEM。向每1孔中分別加入 20uL上述每種核酸轉運用組合物，在37°C、5% C02條件下培養4小時。然後，將孔中的培 養上清液更換為含有10容量％ FBS的DMEM，進一步在37°C、5% C02條件下培養20小時。 向各孔中加入20 ii L MTS(四唑鐺鹽)試劑及100 ii L含有10容量％ FBS的DMEM培養基， 培養2小時。測定在492nm處的吸光度，計算細胞存活率(cellviability)。細胞存活率是 以不添加核酸轉運用組合物在上述條件下培養時測定的492nm處的吸光度為100%計算得 到的。結果示於圖2。圖2表明實施例2及3的核酸轉運用組合物均顯示出低細胞毒性、 高安全性。特別是確認了實施例2及3的核酸轉運用組合物顯示出明顯高的安全性。試驗例3siRNA向細胞內的轉運效率的評價試驗通過使用流式細胞儀測定FITC標記的siRNA的螢光強度來評價siRNA的細胞內 導入效率。在本試驗中，使用的核酸轉運用組合物是利用預先在siRNA上進行FITC標記的 siRNA製備得到的。具體而言，在24孔板上將A594細胞(ATCC，USA)以5X105細胞/孔接 種至500ii L含有10容量％ FBS的DMEM中，在37°C、5% C02條件下培養24小時。用HBSS 洗滌3次後，向其中加入0. 95ml不含FBS的DMEM。再向各孔中分別加入0. 05ml實施例1 及2的核酸轉運用組合物，在37°C、5% C02條件下培養4小時。然後，將孔中的培養上清液 更換為含有10容量％ FBS的DMEM，進一步在37°C、5% C02條件下培養20小時。將各孔用 HBSS洗滌 1 次後，加入 0. 2mL CellScrubBuffer (Gene TherapySystems, Inc.制)，在 37°C、 5% C02條件下培養15分鐘。再用HBSS洗滌2次後，使用胰蛋白酶剝取附著於孔底部的細 胞，通過離心分離回收細胞，使所得細胞懸浮於HBSS中。使上述懸浮液通過41 iim孔徑的 膜。用流式細胞儀測定加入核酸轉運用組合物2小時後、12小時後及24小時後的細胞的 螢光強度。作為對照，使用下述對照用核酸轉運用組合物，與上述相同地測定細胞的螢光強 度，所述對照用核酸轉運用組合物如下製備以容量比1 1混合用OptiMEM培養基將市售 的常用作基因運載體的Lipofectamine 2000 (Invitrogen公司制)稀釋至0. lmg/mL的溶 液、和用TE緩衝液以2 u M的濃度稀釋siRNA的siRNA溶液。結果示於圖3。由上述結果確認，為實施例1及2的核酸轉運用組合物的任一種情 況下，siRNA均持續地保持在細胞內且其濃度保持恆定。相對於此，對照用核酸轉運用組合 物不僅初期的向細胞內的siRNA轉運率低，而且細胞內的siRNA還經時減少，加入12小時 後及24小時後，細胞內的siRNA量不充分。


圖1表示高支化環糊精的例子。圖2表示試驗例2的試驗結果，即核酸轉運用組合物的細胞內安全性的評價結果。圖3表示試驗例3中由各核酸轉運用組合物介導的將siRNA導入至細胞內的評價 結果。圖3中的縱坐標表示每一個細胞的平均螢光強度。
權利要求
一種核酸複合體，其特徵在於，含有核酸及高支化環糊精。
2.如權利要求1所述的核酸複合體，其中，相對於1重量份核酸，高支化環糊精的量為 1 4000重量份。
3.如權利要求1或2所述的核酸複合體，其中，核酸為siRNA。
4.如權利要求1 3中任一項所述的核酸複合體，其中，高支化環糊精是具有內支環結 構部分和外支化結構部分的、聚合度為50 5000的葡聚糖，所述內支環結構部分由α -1， 4-糖苷鍵及至少一個α-1，6-糖苷鍵形成，所述外支化結構部分與所述內支環結構部分連 接。
5.如權利要求1 4中任一項所述的核酸複合體，所述核酸複合體是通過將核酸與高 支化環糊精在水溶液中混合而得到的聚集體。
6.一種核酸轉運用組合物，含有權利要求1 5中任一項所述的核酸複合體及核酸轉 運用載體。
7.如權利要求6所述的核酸轉運用組合物，其中，核酸轉運用載體為含有下述物質的 組合物(A)二醯基磷脂醯膽鹼；(B)選自膽固醇及其衍生物中的至少一種；及(C)脂肪族伯胺。
8.如權利要求7所述的核酸轉運用組合物，其中，核酸轉運用載體中的成分(A)為醯基 部分的碳原子數為4 23的二醯基磷脂醯膽鹼。
9.如權利要求7所述的核酸轉運用組合物，其中，核酸轉運用載體中的成分(B)為膽固醇。
10.如權利要求7所述的核酸轉運用組合物，其中，核酸轉運用載體中的成分(C)為碳 原子數為10 20的烷基胺。
11.如權利要求7所述的核酸轉運用組合物，其中，成分(A)成分(B)成分(C)的 摩爾比為5 9 1 5 1。
12.如權利要求7所述的核酸轉運用組合物，其中，所述核酸轉運用載體是由成分 (A) (C)形成脂質體膜的脂質體製劑。
13.一種藥物組合物，含有權利要求6 12中任一項所述的核酸轉運用組合物。
14.權利要求6 12中任一項所述的核酸轉運用組合物在製備用於將核酸轉運至細胞 內的藥物中的應用。
15.一種將核酸轉運至細胞內的方法，包括使權利要求6 12中任一項所述的核酸轉 運用組合物與細胞接觸的步驟。
全文摘要
本發明提供一種低毒性且高安全性的、可以將siRNA等核酸持續地保持在細胞內的核酸複合體；以及能夠有效地將核酸複合體轉運至細胞內的核酸轉運用組合物。通過使用導入細胞內的核酸與高支化環糊精形成複合體，可以得到低毒性且高安全性的、可以將核酸持續地保持在細胞內的核酸複合體。進而，通過使用含有下述物質的載體作為用於將該核酸複合體導入細胞內的核酸轉運用載體，可以進一步提高安全性、細胞內轉運的有效性、及細胞內核酸的持續性，所述物質包括(A)二醯基磷脂醯膽鹼、(B)膽固醇及/或其衍生物、及(C)脂肪族伯胺。
文檔編號A61K47/40GK101854918SQ20088011516
公開日2010年10月6日 申請日期2008年11月6日 優先權日2007年11月8日
發明者豐福秀一, 平安幸, 戶塚裕一, 竹內洋文 申請人:大塚製藥株式會社;竹內洋文