末端連接氨基苯丙酸的聚乙二醇的酸或活性酯的製法和應用的製作方法
2023-08-11 11:59:26
專利名稱：末端連接氨基苯丙酸的聚乙二醇的酸或活性酯的製法和應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及聚乙二醇水溶性聚合物及其製備方法和應用，尤其涉及聚乙二醇活性酯及其製備方法和應用。
背景技術：
使用化學方法將水溶性聚合物聚乙二醇(Polyethylene Glycol, PEG)結合到分子和表面在生物技術中具有重大的應用意義。PEG在生物技術領域有著廣泛的應用一些 PEG的活性衍生物結合到蛋白質、酶的分子上，即對酶進行修飾，由於PEG可以溶於有機溶齊[J，PEG結合到酶分子可以使PEG與酶的結合物溶於有機溶劑；與未修飾的蛋白質相比，將PEG連接到蛋白質上可減小蛋白的免疫原性、降低腎臟排除速率，並可從中促使結合物在血液循環中的半衰期的增加；PEG結合到表面可減小蛋白質和細胞的吸附並改變表面的帶電性質，PEG結合到脂質體上可以使其半衰期有極大增加，並能夠增加其作為藥物緩釋的介質的能力。PEG只有經過活化才能夠結合到分子或表面上。因此，一系列的活化衍生物被製備出來。目前應用較廣的修飾劑活化類型為羧酸的活化酯類。該類修飾劑是通過活化酯對蛋白的自由氨基進行醯化，從而將PEG鏈結合到蛋白質分子上實現修飾的。目前，許多用於修飾的活化的羧基PEG具有較差的反應活性。例如，羧甲基化PEG(CM-PEG)的NHS酯的反應活性太強，以至溶解在水中立刻水解(在pH8、25° C下的水解半衰期為O. 75 min)，這種高反應活性是羧甲基化PEG活性酯的嚴重缺陷。而第一代修飾劑中活化的SC-PEG雖然有較好的反應活性(在pH8、25° C下的半衰期為20. 4 min)，但由於在分子內含有不穩定的酯鍵，現已較少使用。又如丁二酸酐丁二醯亞胺酯活化的PEG(succinimidyl succinate, SS-PEG)。SS-PEG 的製備是通過 mPEG 與丁二酸酐發生酯化反應，使丁二酸酐開環，從而在PEG的鏈端造成一個羧基，然後又將羧基活化成丁二醯亞胺酯。該試劑在與蛋白質結合後還存在一個酯鍵，而酯鍵由於其固有的不穩定性在PEG高分子結合到蛋白質上時非常容易被水解。這種水解不僅會使PEG鏈從蛋白上脫落，喪失PEG修飾帶來的益處，而且留在蛋白質上的丁二酸尾部還可作為半抗原導致蛋白質的免疫原性。Harris等人在mPEG的末端引入丙酸單位，使得這種丙酸PEG活性酯的水解半衰期增加到16. 5分鐘，但該方法涉及了在PEG —端引入氰基，需要再進行強酸和強鹼的水解才能得到產物，極有可能破壞PEG主鏈。目前，許多用於修飾的活化的羧基PEG具有很差的反應活性不是反應太快就是反應太慢。例如，羧甲基化PEG (CM-PEG)的NHS酯的反應活性太強，以至溶解在水中立刻水解，這種高反應活性是羧甲基化PEG活性酯的嚴重缺陷。
發明內容
本發明需要解決的技術問題是公開一種末端連接氨基苯丙酸的聚乙二醇的酸或活性酯的製法和應用，以克服現有技術存在的缺陷，滿足醫藥領域和生物工程領域發展的需要。本發明的末端連接氨基苯丙酸的聚乙二醇的活性酸或酯的結構式如下
R1 — (CH2CH2O)n — CH2 — CO — NH — R2 — CO — OR3
其中η = 43 680 ；
R1 可以是 CH3O ―，也可以是一O — CH2 — CO — NH — R2 — CO — OR3 ；
R2是氨基苯丙酸除氨基與羧基以外的殘基，其中的氨基苯丙酸可以是2 —氨基一 3 —苯基丙酸(即α-苯丙氨酸)，也可以是3 —氨基一 3—苯基丙酸(S卩苯丙氨酸)； R3可以是H —，也可以是一 N —丁二酸亞胺基。本發明提供的連接氨基苯丙酸的聚乙二醇的活性酯具有合適的反應活性，活性酯在水中的水解半衰期約10分鐘，且不含有其它的酯鍵連接。本發明的連接氨基苯丙酸的聚乙二醇的活性酯的製備方法包括如下步驟
(1)CM-PEG (羧甲基化聚乙二醇)的製備
將聚乙二醇溶於甲苯中，加入叔丁醇鉀回流反應廣2小時，加入溴乙酸乙酯回流反應2^4小時，然後室溫反應If 24小時，濃縮後用乙醚沉澱，沉澱物鹼水解然後酸化，採用常規的方法收集產物；
(2)氨基苯丙酸乙酯鹽酸鹽的製備
將氯化氫氣體通入含有氨基苯丙氨酸的乙醇直到飽和，然後收集氨基苯丙酸乙酯鹽酸
鹽；
(3)末端連接氨基苯丙酸的聚乙二醇酸衍生物的製備
取步驟(I)中製備的CM-PEG溶於二氯甲烷，然後依次加入二環己基碳二亞胺、氨基苯丙酸乙酯鹽酸鹽，然後用三乙胺將溶液的pH值調節到8 9，反應8 12小時，過濾，濾液加入乙醚，收集沉澱產物，將產物乾燥後溶於水，加入氫氧化鈉溶液調節PH至1(Γ12，反應廣3小時，然後用草酸將溶液PH調節到2 4，收集產物，獲得末端連接氨基苯丙酸的聚乙二醇酸衍生物。(4)取步驟(3)的產物溶於二氯甲烷，加入I. 5 3倍摩爾量的二環己基碳二亞胺和I. 5^3倍摩爾量的N-羥基丁二醯亞胺，1(T30°C攪拌反應2(Γ28小時，收集產物，獲得末端連接氨基苯丙酸的聚乙二醇活性酯。所說的氨基苯丙酸為D型、L型或外消旋體；
聚乙二醇優選的分子量為200(T30000 Da。本發明的末端連接氨基苯丙酸的聚乙二醇的活性酯，在水中擁有約10分鐘的水解半衰期，具有理想的與生物活性物質氨基的反應活性，可用於與生物活性物質相連接，製備PEG修飾的生物活性物質，用於製備緩釋藥物的介質等。本發明還涉及一種所說的末端連接氨基苯丙酸的聚乙二醇活性酸或酯與生物活性物質的結合物，結構通式如下
R1 — (CH2CH2O)n — CH2 — CO — NH — R2 — CO — NH-Pro
其中=R1 可以是 CH3O ―，也可以是一CH2 — CO — NH — R2 — CO — NH-Pro ；
NH-Pro部分代表生物活性物質的氨基位點； η = 43^680 ；R2是氨基苯丙酸除氨基與羧基以外的殘基，其中的氨基苯丙酸可以是2 —氨基一 3 —苯基丙酸(即α-苯丙氨酸)，也可以是3 —氨基一 3—苯基丙酸(S卩β-苯丙氨酸)。生物活性物質可以是蛋白質、酶、多肽、藥物、染料、核苷、酯類或脂質體。採用上述方法製備的末端連接氨基苯丙酸的聚乙二醇活性酯，具有良好的反應活性，可用於與蛋白質或酶的分子相連接，以及用於製備緩釋藥物的介質。
具體實施例方式實施例I
分子量為 5000 Da 的 CH3O-(CH2CH2O)n-CH2CO-NH-CH(C6H5)CH2-COONHS 的合成 步驟I =CM-PEG (羧甲基化聚乙二醇)的製備
將分子量為5000 Da的單甲氧基聚乙二醇15 g (3 mmol)溶於甲苯中，蒸餾出一部分甲苯以共沸除水，然後加入4 mmol的叔丁醇鉀回流反應I. 5小時,而後緩慢加入4 mmol的溴乙酸乙酯回流反應3小時，然後室溫反應21小時，過濾除去沉澱後減壓蒸去溶劑，殘留物加少量二氯甲烷溶解，用乾燥乙醚沉澱出產物，將該產物溶於去離子水中，加入O. I mol/L的氫氧化鈉溶液直到溶液的PH值穩定在pHIO，然後用0. I mol/L的鹽酸調節溶液的pH到3，用等量的氯仿萃取溶液三次，合併有機相併用無水硫酸鈉乾燥，濃縮後用乙醚沉澱乾燥得到分子量為 5000 Da 的 CM-PEG，化學式為 CH3O-(CH2CH2O) n_CH2C00H。步驟2 : β -苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽的製備
將20 g β-苯丙氨酸加入到300 mL無水乙醇中，在攪拌下通入乾燥的氯化氫氣體直到飽和，然後加入無水乙醇進行減壓蒸餾，將多餘的氯化氫除去，接著將溶液濃縮至合適的體積，用乾燥無水的乙醚沉澱得到β -苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽。步驟3 :合成 CH3O- (CH2CH2O) n-CH2C0_NH-CH (C6H5) CH2-COOH
取7. 5 g(l. 5 mmol)步驟(I)中製備的CM-PEG溶於40 mL乾燥的二氯甲烷中，然後依次加入2 mmol的二環己基碳二亞胺、2 mmol的β -苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽,然後用三乙胺將溶液的PH值調節到8，攪拌反應12小時，過濾除去沉澱後，加入無水乙醚沉澱產物，將產物乾燥後溶於去離子水，加入0. I mol/L氫氧化鈉溶液調節pH至11，反應2小時，然後用草酸將溶液PH調節到3，用氯仿萃取溶液三次，合併萃取液用無水硫酸鈉乾燥，溶液濃縮後再用無水乙醚沉澱得到以醯胺鍵與PEG連接的PEG- β -苯丙氨酸衍生物，化學式為CH3O- (CH2CH2O)n-CH2C0-NH-CH (C6H5) CH2-COOH。步驟4:
取步驟3製備的分子量為5000 Da的PEG- β -苯丙氨酸，溶於乾燥精製的無水二氯甲烷中，加入I. 2倍摩爾量的二環己基碳二亞胺(DCC)和I. 2倍摩爾量的N-羥基丁二醯亞胺，室溫攪拌反應24小時，停止反應濾除沉澱二環己基脲(D⑶)，溶液用無水乙醚沉澱得到產物分子量為5000 Da的PEG-β-苯丙氨酸的N-羥基丁二醯亞胺酯。化學式為CH3O-(CH2CH2O)n-CH2C0-NH-CH (C6H5) CH2-C00NHS。實施例2
分子量為 12000 Da 的 CH3O-(CH2CH2O)n-CH2CO-NH-CH(CH2C6H5)-COONHS 的合成步驟I :CM-PEG的製備
將分子量為12000 Da的單甲氧基聚乙二醇18 g (1.5 mmol)溶於適量的甲苯中，蒸餾出一部分甲苯以共沸除水，然後加入2 mmol的叔丁醇鉀回流反應2小時，而後緩慢加入2 mmol的溴乙酸乙酯回流反應4小時，然後室溫反應18小時，過濾除去沉澱後減壓蒸去溶齊U，殘留物加入二氯甲烷溶解，用乾燥乙醚沉澱出產物，將該產物溶於去離子水中，逐漸加Λ O. I mol/L的氫氧化鈉溶液直到溶液的pH值穩定在pHIO，然後用O. I mol/L的鹽酸調節溶液的PH到3，用等量的氯仿萃取溶液三次，合併有機相併用無水硫酸鈉乾燥，濃縮後用乙醚沉澱乾燥得到分子量為12000 Da的CM-PEG，分子式如下CH30_ (CH2CH2O) n_CH2C00H。步驟2 : α -苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽的製備
將20 g α-苯丙氨酸加入到300 mL無水乙醇中，在攪拌下通入乾燥的氯化氫氣體直到飽和，然後加入無水乙醇進行減壓蒸餾，將多餘的氯化氫除去，接著將溶液濃縮至合適的體積，用乾燥無水的乙醚沉澱得到α -苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽。步驟3 :合成 CH3O- (CH2CH2O) n-CH2C0_NH-CH (CH2C6H5) -C00H
取12 g (I mmol)步驟(I)中製備的CM-PEG溶於40 mL乾燥的二氯甲烷中，然後依 次加入2 mmol的二環己基碳二亞胺(DCC)、2 mmol的α -苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽，然後用三乙胺將溶液的PH值調節到8，攪拌反應過夜，過濾除去沉澱後，加入無水乙醚沉澱產物，將產物乾燥後溶於去離子水，加入0. I mol/L氫氧化鈉溶液調節pH至11,然後用草酸將溶液PH調節到3，用氯仿萃取溶液三次，合併萃取液用無水硫酸鈉乾燥，溶液濃縮後再用無水乙醚沉澱得到以醯胺鍵與PEG連接的PEG- α -苯丙氨酸衍生物，化學式為CH3O- (CH2CH2O)n-CH2C0-NH-CH (CH2C6H5) -C00H。步驟4
取步驟(3)製備的分子量為12000 Da的PEG-α-苯丙氨酸，溶於乾燥精製的無水二氯甲烷中，加入I. 2倍摩爾量的二環己基碳二亞胺(DCC)和I. 2倍摩爾量的N-羥基丁二醯亞胺，室溫攪拌反應24小時，停止反應濾除沉澱二環己基脲(D⑶)，溶液用無水乙醚沉澱得到產物分子量為12000 Da的PEG-α-苯丙氨酸的N-羥基丁二醯亞胺酯。化學式為CH3O- (CH2CH2O) n-CH2C0-NH-CH (CH2C6H5) -C00NHS。實施例3
分子量為10000 Da的PEG-雙-β -苯丙氨酸-N-羥基丁二醯亞胺酯的合成 步驟I :CM-PEG 二酸(二羧甲基化聚乙二醇)的製備
將分子量為10000 Da的雙羥基聚乙二醇10 g (I mmol)溶於甲苯中，蒸餾出一部分甲苯以共沸除水，然後加入3 mmol的叔丁醇鉀回流反應I. 5小時，而後緩慢加入3 mmol的溴乙酸乙酯回流反應3小時，然後室溫反應21小時，過濾除去沉澱後減壓蒸去溶劑，殘留物加少量二氯甲烷溶解，用乾燥乙醚沉澱出產物，將該產物溶於去離子水中，加入0. I mol/L的氫氧化鈉溶液直到溶液的PH值穩定在pHIO，然後用0. I mol/L的鹽酸調節溶液的pH到3，用等量的氯仿萃取溶液三次，合併有機相併用無水硫酸鈉乾燥，濃縮後用乙醚沉澱乾燥得到分子量為 10000 Da 的 CM-PEG 二酸，化學式為 HOOCCH2O-(CH2CH2O) n_CH2C00H。步驟2 : β -苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽的製備
將20 g β-苯丙氨酸加入到300 mL無水乙醇中，在攪拌下通入乾燥的氯化氫氣體直到飽和，然後加入無水乙醇進行減壓蒸餾，將多餘的氯化氫除去，接著將溶液濃縮至合適的體積，用乾燥無水的乙醚沉澱得到β -苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽。步驟3:合成 HOOC-CH2-CH(C6H5)-NH-CO-CH2O-(CH2CH2O)n-CH2CO-NH-CH(C6H5)CH2-COOH
取5 g (O. 5 mmol)步驟(I)中製備的CM-PEG溶於20 mL乾燥的二氯甲烷中，然後依次加入2 mmol的二環己基碳二亞胺、2 mmol的β -苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽,然後用三乙胺將溶液的PH值調節到8，攪拌反應12小時，過濾除去沉澱後，加入無水乙醚沉澱產物，將產物乾燥後溶於去離子水，加入O. I mol/L氫氧化鈉溶液調節pH至11，反應2小時，然後用草酸將溶液PH調節到3，用氯仿萃取溶液三次，合併萃取液用無水硫酸鈉乾燥，溶液濃縮後再用無水乙醚沉澱得到以醯胺鍵與PEG連接的PEG-雙-β -苯丙氨酸衍生物，化學式為HOOC-CH2-CH (C6H5) -NH-CO-CH2O- (CH2CH2O) n-CH2C0_NH-CH (C6H5) CH2-COOH。步驟4
取步驟3製備的分子量為10000 Da的PEG-雙-β-苯丙氨酸，溶於乾燥精製的無水 二氯甲烷中，加入3倍摩爾量的二環己基碳二亞胺(DCC)和3倍摩爾量的N-羥基丁二醯亞胺，室溫攪拌反應24小時，停止反應濾除沉澱二環己基脲(D⑶)，溶液用無水乙醚沉澱得到產物分子量為10000 Da的PEG-雙-β -苯丙氨酸的N-羥基丁二醯亞胺酯，化學式為NHS-00C-CH2-CH (C6H5) -NH-CO-CH2O- (CH2CH2O) n-CH2C0-NH-CH (C6H5) CH2-C00NHS。實施例4
分子量為20000 Da的PEG-雙-α -苯丙氨酸-N-羥基丁二醯亞胺酯的合成 步驟I :CM-PEG 二酸的製備
將分子量為20000 Da的雙羥基聚乙二醇20 g (I mmol)溶於適量的甲苯中，蒸餾出一部分甲苯以共沸除水，然後加入3 mmol的叔丁醇鉀回流反應2小時，而後緩慢加入3 mmol的溴乙酸乙酯回流反應4小時，然後室溫反應18小時，過濾除去沉澱後減壓蒸去溶劑，殘留物加入二氯甲烷溶解，用乾燥乙醚沉澱出產物，將該產物溶於去離子水中，逐漸加入0. Imol/L的氫氧化鈉溶液直到溶液的pH值穩定在pHIO，然後用0. I mol/L的鹽酸調節溶液的PH到3，用等量的氯仿萃取溶液三次，合併有機相併用無水硫酸鈉乾燥，濃縮後用乙醚沉澱乾燥得到分子量為20000 Da的雙羧基CM-PEG，分子式如下H00CCH20-(CH2CH2O) n_CH2C00H。步驟2 : α -苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽的製備
將20 g α-苯丙氨酸加入到300 mL無水乙醇中，在攪拌下通入乾燥的氯化氫氣體直到飽和，然後加入無水乙醇進行減壓蒸餾，將多餘的氯化氫除去，接著將溶液濃縮至合適的體積，用乾燥無水的乙醚沉澱得到α -苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽。步驟3:合成 H00C-CH (CH2C6H5) - NH-CO-CH2O -(CH2CH2O)n-CH2C0-NH-CH (CH2C6H5) -C00H
取10 g (0.5 mmol)步驟(I)中製備的CM-PEG溶於40 mL乾燥的二氯甲烷中，然後依次加入2 mmol的二環己基碳二亞胺(DCC)、2 mmol的α -苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽，然後用三乙胺將溶液的PH值調節到8，攪拌反應過夜，過濾除去沉澱後，加入無水乙醚沉澱產物，將產物乾燥後溶於去離子水，加入0. I mol/L氫氧化鈉溶液調節pH至11,然後用草酸將溶液PH調節到3，用氯仿萃取溶液三次，合併萃取液用無水硫酸鈉乾燥，溶液濃縮後再用無水乙醚沉澱得到分子量為20000 Da的PEG-雙-α -苯丙氨酸衍生物，化學式為H00C-CH (CH2C6H5) -NH-CO-CH2O- (CH2CH2O) n-CH2C0_NH-CH (CH2C6H5) -C00H。步驟4:
取步驟(3)製備的分子量為20000 Da的PEG-雙-α -苯丙氨酸，溶於乾燥精製的無水二氯甲烷中，加入3倍摩爾量的二環己基碳二亞胺(DCC)和3倍摩爾量的N-羥基丁二醯亞胺，室溫攪拌反應24小時，停止反應濾除沉澱二環己基脲(D⑶)，溶液用無水乙醚沉澱得到 產物分子量為20000 Da的PEG-雙-α -苯丙氨酸的N-羥基丁二醯亞胺酯。化學式為NHS-OOC-CH (CH2C6H5) -NH-CO-CH2O- (CH2CH2O) n-CH2C0_NH-CH (CH2C6H5) -COONHS。
權利要求
1.一種末端連接氨基苯丙酸的聚乙二醇的酸或活性酯，其特徵在於，結構如下R1 — (CH2CH2O)n — CH2 — CO — NH — R2 — CO — OR3 其中η = 43 680 ； R1 可以是 CH3O ―，也可以是一O — CH2 — CO — NH — R2 — CO — OR3 ； R2是氨基苯丙酸除氨基與羧基以外的殘基，其中的氨基苯丙酸可以是2 —氨基一 3 —苯基丙酸(即α-苯丙氨酸)，也可以是3 —氨基一 3—苯基丙酸(S卩苯丙氨酸)； R3可以是H —，也可以是一 N —丁二酸亞胺基。
2.根據權利要求I所述的末端連接氨基苯丙酸的聚乙二醇的活性酸或酯，其特徵在於，所說的酸或酯為CH3O- (CH2CH2O) n-CH2C0-NH-CH (CH2C6H5) -COOHCH3O- (CH2CH2O) n-CH2C0-NH-CH (C6H5) CH2-COOHHOOC-CH (CH2C6H5) -NH-CO-CH2O- (CH2CH2O) n-CH2C0_NH-CH (CH2C6H5) -COOHHOOC-CH2-CH (C6H5) -NH-CO-CH2O- (CH2CH2O) n-CH2C0_NH-CH (C6H5) CH2-COOHCH3O- (CH2CH2O) n-CH2C0-NH-CH (CH2C6H5) -COONHSCH3O- (CH2CH2O) n-CH2C0-NH-CH (C6H5) CH2-C00NHSNHS-OOC-CH (CH2C6H5) -NH-CO-CH2O- (CH2CH2O) n-CH2C0_NH-CH (CH2C6H5) -COONHS 或NHS-00C-CH2-CH (C6H5) -NH-CO-CH2O- (CH2CH2O) n-CH2C0-NH-CH (C6H5) CH2-C00NHS此處NHS代表N-羥基丁二醯亞胺。
3.根據權利要求I或2所述的末端連接氨基苯丙酸的聚乙二醇的活性酸或酯的製備方法包括如下步驟 (1)將聚乙二醇溶於甲苯中，加入叔丁醇鉀回流反應f2小時，加入溴乙酸乙酯回流反應2 4小時，然後室溫反應18 24小時，濃縮後用乙醚沉澱，沉澱物鹼水解然後酸化，獲得CM-PEG ； (2)將氯化氫氣體通入含有氨基苯丙酸的乙醇直到飽和，然後收集氨基苯丙酸乙酯鹽酸鹽； (3)取步驟(I)中製備的CM-PEG溶於二氯甲烷，然後依次加入二環己基碳二亞胺、氨基苯丙酸乙酯鹽酸鹽，然後用三乙胺將溶液的PH值調節到8 9，反應8 12小時，過濾，濾液加入乙醚，收集沉澱產物，將產物乾燥後溶於水，加入氫氧化鈉溶液調節PH至1(Γ12，反應廣3小時，然後用草酸將溶液PH調節到2 4，收集產物，獲得末端連接氨基苯丙酸的聚乙二醇衍生物； (4)取步驟(3)的產物溶於二氯甲烷，加入I.5 3倍摩爾量的二環己基碳二亞胺和I.5 3倍摩爾量的N-羥基丁二醯亞胺，1(T30°C攪拌反應2(Γ28小時，收集產物，獲得末端連接氨基苯丙酸的聚乙二醇活性酯。
4.根據權利要求3所述的方法，其特徵在於，氨基苯丙酸可以是2-氨基-3-苯基丙酸(即β-苯丙氨酸)，也可以是3-氨基-3-苯基丙酸(B卩α-苯丙氨酸)。
5.根據權利要求4所述，其特徵在於，所說的β-苯丙氨酸可以是D型、L型或外消旋體；所說的α-苯丙氨酸可以是D型、L型或外消旋體。
6.根據權利要求3或4所述的方法，其特徵在於，所述的聚乙二醇可以為單甲氧基聚乙二醇，也可以為雙羥基聚乙二醇，所述聚乙二醇的分子量為200(T30000 Da。
7.根據權利要求I或2所述的末端連接氨基苯丙酸的聚乙二醇活性酸或酯的應用，其特徵在於，用於與蛋白質或酶相連接，製備具有PEG修飾的蛋白質或酶。
8.—種權利要求I或2所述的末端連接氨基苯丙酸的聚乙二醇活性酸或酯與生物活性物質的結合物，其特徵在於，結構通式如下R1 — (CH2CH2O)n — CH2 — CO — NH — R2 — CO — NH-Pro 其中=R1 可以是 CH3O ―，也可以是一O — CH2 — CO — NH — R2 — CO — NH-Pro ； NH-Pro部分代表生物活性物質的氨基位點； η = 43 680 ； R2是氨基苯丙酸除氨基與羧基以外的殘基，其中的氨基苯丙酸可以是2 —氨基一 3 —苯基丙酸(即α-苯丙氨酸)，也可以是3 —氨基一 3—苯基丙酸(S卩β-苯丙氨酸)。
9.根據權利要求7所述的修飾物，其特徵在於生物活性物質可以是蛋白質、酶、多肽、藥物、染料、核苷、酯類或脂質體。
全文摘要
本發明公開了一種末端連接氨基苯丙酸的聚乙二醇的酸或活性酯的製法和應用，該發明應用於醫藥領域。此聚合物活性酯在水中具有適當的與生物活性物質的氨基反應的活性。其結構式如下R1－(CH2CH2O)n－CH2－CO－NH－R2－CO－OR3其中n＝43~680；R1可以是CH3O－，也可以是－O－CH2－CO－NH－R2－CO－OR3；R2是氨基苯丙酸除氨基與羧基以外的殘基，其中的氨基苯丙酸可以是2－氨基－3－苯基丙酸(即α-苯丙氨酸)，也可以是3－氨基－3－苯基丙酸(即β-苯丙氨酸)；R3可以是H－，也可以是－N－丁二醯亞胺基。
文檔編號C12N9/96GK102964588SQ20121044626
公開日2013年3月13日 申請日期2012年11月9日 優先權日2012年11月9日
發明者熊玉春, 羅宇, 李志成 申請人:河南工業大學