一種用於檢測vkh症候群的試劑盒的製作方法
2023-07-20 03:42:21 2
一種用於檢測vkh症候群的試劑盒的製作方法
【專利摘要】本發明涉及一種用於檢測VKH症候群的試劑盒，該試劑盒包含用於擴增位點rs78377598、rs77258390、rs78597810、rs12568393、rs12561798、rs76436269、rs3021304、rs442309和rs224058的基因片段的試劑的引物對，以及特異性檢測個體基因型的Sequenom?MassARRAY單鹼基延伸引物。該試劑盒通過檢測受試者所述的SNP位點是否有變異，預測受試者對VKH症候群的遺傳易感性，可用於早期篩查漢族人群VKH症候群的發生，為臨床診斷和治療提供依據。
【專利說明】—種用於檢測VKH症候群的試劑盒
【技術領域】
[0001]本發明屬於生物【技術領域】，特別涉及一種用於檢測VKH症候群的試劑盒。
【背景技術】
[0002]Vogt一Koyanagi一Harada (VKH)症候群又名伏格特-小柳-原田症候群,是一種累及全身多系統的炎症性疾病。該症候群的其特徵為:①突發性色素膜炎；②眉毛及毛髮變白、禿髮及白癜風等皮膚損害；③頭痛、頭暈、噁心等神經系統表現；④耳鳴、耳聾及眩暈等內耳症狀。
[0003]VKH症候群以急性發作開始，病程遷延反覆。分兩個臨床類型，即以滲出性虹膜睫狀體炎為主的Vogt-小柳型(VK型)和滲出性脈絡膜炎為主的原田型(H型)。VKH症候群多發生於有色人種，中國、日本、巴西及美國印第安人為高危人群，並且其好發於青壯年，以20-40歲為多，男女無明顯差別。雙眼同時受累是VKH症候群的重要臨床表現，據統計約佔患者總數的94% _100*%，雙眼先後受累者間隔多小於10天。
[0004]VKH症候群是我國葡萄膜炎中常見的一種類型，約佔所有葡萄膜炎患者的14%。其確切病因目前尚不清楚，所致的葡萄膜炎具有發作頻繁、受累組織廣泛，病程長及併發症多等特點。VKH症候群如未得到及時有效的治療，可引起許多併發症，如帶狀角膜變性、角膜水腫、並發性白內障、繼發性青光眼、黃斑部及視盤水腫、黃斑表面褶紋樣改變以及視網膜脫離等，造成嚴重後果。預後與炎症的控制程度相關，反覆多次的炎症可致眼部病情遷延及併發症，使眼組織的進一步破壞和視力的逐漸下降，最後嚴重影響患者視功能，降低患者的勞動力，並對其生理、心理造成不同程度的妨礙。
[0005]VKH症候群是一種多因素複雜疾病，現被普遍認為是一種免疫遺傳基因病，在遺傳和環境等因素共同作用下，由T細胞介導的自身免疫反應以黑色素相關抗原、視網膜S抗原或光感受器維生素A類結合蛋白為靶點，引起眼部抗原-抗體反應而表現出免疫源性葡萄膜炎。虹膜睫狀體的病理改變在本質上與脈絡膜改變相同，系由上皮樣細胞、淋巴細胞和漿細胞等構成的病灶，有時可見有淋巴細胞的有絲分裂徵象，但在虹膜內上皮樣細胞形成不及脈絡膜內明顯。既往流行病學研究發現VKH症候群有明顯的家族聚集傾向，呈現地域性聚集，特定種群發病率高等現象，這些現象揭示了遺傳因素在其致病機理中發揮重要作用。VKH症候群屬於多基因遺傳複雜疾病，並不遵循經典孟德爾遺傳定律，在這類遺傳病中，每個基因對表型的貢獻相差不大，其遺傳性狀表達受多對等效、微效和累加的多基因控制，環境因素在其中所起的作用也不可忽視。
[0006]近年來，遺傳學理論、研究手段和認識水平的不斷進步和發展給疾病遺傳學研究帶來了新的思路和突破。應用候選基因篩查、連鎖分析等技術進行VKH症候群的基因定位和候選基因的克隆篩查工作，已經發現了多個VKH症候群的候選基因位點。在日本人群中，HLA-DR4/DR53與VKH症候群有強相關性早被證實，隨後在中國，北美，西班牙人群中，此遺傳區域與VKH症候群的易感性得到進一步驗證。其他候選基因包括TRAF5 (rsl 14065494)、JAKl(rs4916004)、PTPN22(rs974404)、CTLA4(rsl87762111)、STAT4(rs34946552)、0PN(rsl42608941)、TNIPl (rs2287721)、TNFAIP3 (rs3799491)、MIF (rs2012133)等。目前，對VKH症候群遺傳易感性研究成果多集中於人類白細胞抗原(HLA-DR4/DR53，HLA-DRl,HLADRBI * 0405等)與此病的相關性，非HLA抗原與此病的相關性報導並不多見，而且大部分報導結果很難在其他人群中重複。
[0007]未來針對VKH症候群治療的發展趨勢是切實有效、療效持久、降低復發的綜合治療手段，以長久地保存患者有用的視功能，提高患者的生活質量。為此，需要尋求更加有效和精準的遺傳標記物和檢測方法，以利於早期篩查VKH症候群高危人群，並實施早期的檢測和預防，減少其視力損害。
【發明內容】
[0008]本發明的目的是提供一種用於檢測VKH症候群的試劑盒，該試劑盒通過檢測位於染色體區域 1ρ31.2 的 SNP 位點 rs78377598、rs77258390、rs78597810、rsl2568393、rsl2561798、rs76436269，[以及位於1ρ31.2且與上述位點連鎖遺傳的rsll7633859、rsl2564219、 rsl2563505、 rs3401735 2、 rsll4661385、 rsll7301158、 rsll500927Urs76091599、rs78865162、rs78917656、rs6693659、rsl2566159、rsll7282985];位於染色體區域6p21.3的SNP位點rs3021304[以及連鎖遺傳位點rsl 14800139];和位於染色體區域10q21.3的SNP位點rs442309和rs224058[以及位於10q21.3且與上述位點連鎖遺傳的rs224048、rs224052、rs224057、rsl0995307、rsl0995281、rs7088592、rs224071、rs224031、rs224032、rs224033]的變異，用於早期篩查漢族人群VKH症候群，為臨床診斷和治療提供依據。
[0009]本發明的技術方案是:
[0010]用於檢測VKH綜合症的試劑盒，包含用於擴增位點rs78377598、rs77258390、rs78597810、rsl2568393、rsl2561798、rs76436269、rs3021304、rs442309 和 rs224058 的基因片段的試劑的引物對，以及特異性檢測個體基因型的Sequenom MassARRAY單鹼基延伸引物。
[0011]所述基因片段的試劑的引物rs78377598基因片段的試劑的PCR引物對序列如SEQID N0.1~2所示；rs77258390基因片段的的PCR引物對序列如SEQ IDN0.3~4所示；rs78597810基因片段的的PCR引物對序列如SEQ ID N0.5~6所示；rsl2568393基因片段的的PCR引物對序列如SEQ ID N0.7~8所示；rsl2561798基因片段的的PCR引物對序列如SEQ ID N0.9~10所示；rs76436269基因片段的的PCR引物對序列如SEQ ID N0.11~12所示；rs3021304基因片段的的PCR引物對序列如SEQ ID N0.13~14所示；rs442309基因片段的的PCR引物對序列如SEQ ID N0.15~16所示；rs224058基因片段的的PCR引物對序列如SEQ ID N0.17~18所示。
[0012]所述特異性檢測個體基因型的Sequenom MassARRAY單鹼基延伸引物的序列如SEQID N0.19 ~27 所示。
[0013]所述試劑盒還包括Taq酶，SAP，SAP Buffer,無酶水，以及位點rs78377598、rs77258390、rs78597810、rsl2568393、rsl2561798、rs76436269、rs3021304、rs442309 和rs224058的標準DNA樣本。
[0014]本發明的試劑盒中含有特異性擴增目的片段的PCR引物對、特異性檢測個體基因型的Sequenom MassARRAY單喊基延伸引物，以及用於PCR擴增和進行Sequenom MassARRAY分型檢測試劑盒的常規組件、試劑、操作步驟等。
[0015] 申請人:在研究中發現，在漢族人中當位點rs78377598C — T變異、rs77258390G — A 變異、rs78597810T — C 變異、rsl2568393G — A 變異、rsl2561798T — C變異、rs76436269G — A變異、[以及連鎖遺傳位點rsll7633859A — G變異、rsl2564219G — A 變異、rsl2563505C — T 變異、rs34017352A — C 變異、rsll4661385G — A變異、rsll7301158T — A 變異、rsll5009271C — A 變異、rs76091599C — G 變異、rs78865162C — T 變異、rs78917656T — G 變異、rs6693659C — A 變異、rsl2566159C — T 變異、rsll7282985G — C 變異]、rs3021304C — G 變異[連鎖遺傳位點 rsll4800139G — A 變異]、rs442309C — T變異和/或rs224058G — A變異[以及連鎖遺傳位點rs224048G — A變異、rs224052G — T 變異、rs224057C — T 變異、rsl0995307T — C 變異、rsl0995281T — C變異、rs7088592A — G 變異、rs224071G — A 變異、rs224031T — G 變異、rs224032G — A 變異、rs224033C — G變異]，即上述33個位點之一發生變異，均不同程度地增加了 VKH症候群的患病風險。
[0016]本發明的測定方法用於測定來源於人的基因組DNA，臨床取材樣本來源廣泛，如體液(如血液、腹水和房水)、組織細胞(如皮膚組織、虹膜組織)等，通過提取和純化這些樣本均可製備基因組DNA。
[0017]本發明首次公開了上述多態性位點與VKH症候群的相關性，提供了一種預測VKH症候群易感性的試劑盒，該試劑盒可用於I)此疾病的輔助診斷:通過所述試劑盒明確受試者的這33個位點的基因型，預測受試者對VKH症候群的易感性。2)指導個體化治療，新藥開發:在臨床實踐和科研中，rs78377598、rs77258390、rs78597810、rsl2568393、rsl2561798、rs76436269, [rsll7633859、 rsl2564219、 rsl2563505、 rs34017352、 rsll4661385、rsll7301158、rsll500927U rs76091599、rs78865162、rs78917656、rs6693659、rsl2566159、rsll7282985] ；rs3021304[rsll4800139] ；rs442309 和 rs224058[rs224048、rs224052、rs224057、rsl0995307、rsl0995281、rs7088592、rs224071、rs224031、rs224032、rs224033]可用作藥物設計的分子靶標的篩選，以幫助尋找具有調節這些基因表達的活性分子，促進新藥開發。3)為判斷預後提供分子生物學依據。攜帶有上述位點危險等位基因的病人可能在一定程度上預後差於其他未攜帶有危險等位基因的病人。
[0018]本發明所述試劑盒可對VKH症候群高危的人群進行早期的篩查、正確診斷、及時有效治療，對可能發生的嚴重併發症儘早發現以及預防病變發展。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0019]圖1-3是Sequenom MassARRAY SNP技術檢測rs78377598位點的基因分型圖譜；
[0020]圖4-6是Sequenom MassARRAY SNP技術檢測rs77258390位點的基因分型圖譜；
[0021]圖7-9是Sequenom MassARRAY SNP技術檢測rs78597810位點的基因分型圖譜；
[0022]圖10-12是Sequenom MassARRAY SNP技術檢測rsl2568393位點的基因分型圖
-1'Tfe1曰；
[0023]圖13-15是Sequenom MassARRAY SNP技術檢測rsl2561798位點的基因分型圖
-1'Tfe1曰；
[0024]圖16-18是Sequenom MassARRAY SNP技術檢測rs76436269位點的基因分型圖
-1'Tfe1曰；
[0025]圖19-21是Sequenom MassARRAY SNP技術檢測rs3021304位點的基因分型圖譜；
[0026]圖22-24是Sequenom MassARRAY SNP技術檢測rs442309位點的基因分型圖譜；
[0027]圖25-27是Sequenom MassARRAY SNP技術檢測rs224058位點的基因分型圖譜。
【具體實施方式】
[0028]本發明所用試劑均為市售產品，其中。乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)作為抗凝劑，QIAGEN QIAamp DNA Mini Blood Kit (購自德國QIAGEN公司)為市售的快速高效抽提基因組DNA的試劑盒。
[0029]實施例1樣本收集和基因組DNA的提取
[0030]樣本來自於重慶醫科大學附屬第一醫院，共收集VKH患者1559例，其中男性佔55.0%,女性佔45.0 % ;正常對照者5640例，其中男性佔50.8 %，女性佔49.2 %。所有受試者均為漢族，且自願籤署知情同意書，這一研究也得到了倫理委員會批准。
[0031]根據QIAGEN QIAamp DNA Mini Blood Kit 試劑盒(購自德國 QIAGEN 公司)說明書提供的操作步驟，製備人外周血基因組DNA。
[0032]實施例2 包括 rs78377598、rs77258390、rs78597810、rsl2568393、rsl2561798、rs76436269, [rsl17633859、 rsl2564219、 rsl2563505、 rs34017352、 rsll4661385、rsll7301158、rsll500927U rs76091599、rs78865162、rs78917656、rs6693659、rsl2566159、rsll7282985] ；rs3021304[rsll4800139] ；rs442309 和 rs224058[rs224048、rs224052、rs224057、rsl0995307、rsl0995281、rs7088592、rs224071、rs224031、rs224032、rs224033]單核苷酸多態性DNA片段的PCR擴增和基因型分析
[0033]本發明採用Sequenom MassARRAY SNP 檢測技術對位點 rs78377598、rs77258390、rs78597810、rsl2568393、rsl2561798、rs76436269、rs3021304、rs442309 和 rs224058 變異進行檢測(如下所示)。
[0034]I)用 SEQ ID N0.1 ~2、SEQ ID N0.3 ~4、SEQ ID N0.5 ~6、SEQ ID N0.7 ~8、SEQ ID N0.9 ~10、SEQ ID N0.11 ~12、SEQ ID N0.13 ~14、SEQ ID N0.15 ~16、SEQ IDN0.17~18所示的引物進行包含特異位點的目的基因片段；
[0035]PCR 擴增:94°C 4min ；94°C 20s, 56V 30s, 72V lmin,共 45 個循環；72°C 5min ；4°C保持。每個反應體積為5ul，包括2ul Taq酶，1.5ul無酶水，PCR上遊和下遊引物各0.25ul，Iul DNA樣本溶液(濃度為50ng/ul)。
[0036]2) PCR產物鹼性磷酸化處理；
[0037]①在PCR 結束後,將 PCR 產物用 SAP (shrimp alkaline phosphatase,奸喊性憐酸酶)處理，以去除體系中游離的dNTPs。
[0038]②配製鹼性磷酸酶處理反應液，SAP Mix。每個反應體積為2ul，其中包括1.53ul無酶水，0.17ul SAP Buffer,0.3ul SAP Enzyme。
[0039]③反應條件:37°C 40min, 85°C 5min, 4°C保持，啟動PCR儀進行鹼性磷酸酶處理。
[0040]3)用特異的單鹼基延伸引物包括 SEQ ID N0.28、SEQ ID N0.29、SEQ ID N0.30、SEQ ID N0.3KSEQ ID N0.32,SEQ ID N0.33,SEQ ID N0.34,SEQ ID N0.35,SEQ ID N0.36進行單喊基延伸；
[0041]將2ul單鹼基延伸反應液加入上述每個反應體系中，按照以下PCR反應條件進行反應:
[0042]1.94°C for 30s, I1.94°C for 5s, II1.52°C for 5s, IV.80°C for 5s, V.go toIII, 4more times, V1.go to II, 39more times, VI1.72°C for 3min, VDI.4。。保持。
[0043]4)樹脂純化，晶片點樣，質譜分析，檢測結果用TYPER 4.0軟體(sequenom)分型並輸出結果(見圖1-27)。
[0044]採用如下PCR引物對A-1以及單鹼基延伸引物a-1根據上述方法進行分型。
[0045]PCR 引物對 A(rs78377598)(如 SEQ ID N0.1 ~2 所示):
[0046]F: 5，ACGTTGGATGGAGACATTTATCAGTGCAGG 3，
[0047]R:5』 ACGTTGGATGCTCCAAGAAGAAGGGTATAG 3』
[0048]PCR 引物對 B(rs77258390)(如 SEQ ID N0.3 ~4 所示):
[0049]F: 5，ACGTTGGATGAAGAGGCAAAATGTCATCCC 3，
[0050]R:5』 AC GTTGGATGGAAAAATACAGCTGTGTGTG 3』
[0051]PCR 引物對 C(rs78597810)(如 SEQ ID N0.5 ~6 所示):
[0052]F: 5 』 ACGTTGGATGATGACTGACTTGAAAACAGC 3，
[0053]R:5』 ACGTTGGATGGGAATGATGAACAACCCCTG 3』
[0054]PCR 引物對 D (rsl2568393)(如 SEQ ID N0.7 ~8 所示):
[0055]F: 5 』 ACGTTGGATGGTTGATAGTGGTGATTTGTC 3，
[0056]R:5， ACGTTGGATGGAACTGAATTCTTAAGAAGC 3』
[0057]PCR 引物對 E(rsl2561798)(如 SEQ ID N0.9 ~10 所示):
[0058]F: 5 』 ACGTTGGATGGTTGATAGTGGTGATTTGTC 3，
[0059]R:5，ACGTTGGATGGAACTGAATTCTTAAGAAGC 3』
[0060]PCR 引物對 F(rs76436269)(如 SEQ ID N0.11 ~12 所示):
[0061]F: 5 』 ACGTTGGATGCAGATTACAACTAGCCAAGG 3，
[0062]R:5， ACGTTGGATGGAGGACAATAAAAGCTCCAC 3，
[0063]PCR 引物對 G(rs3021304)(如 SEQ ID N0.13 ~14 所示):
[0064]F: 5，ACGTTGGATGCCTAGTCTCACTGTCACCTC 3，
[0065]R:5』 ACGTTGGATGTTGGTAAGGCAAGTGTCATA 3』
[0066]PCR 引物對 H(rs442309)(如 SEQ ID N0.15 ~16 所示):
[0067]F: 5 』 ACGTTGGATGTCTCTGTGAAGTGAAGGGAC 3，
[0068]R:5， ACGTTGGATGGTTCTGTTCTTTGCAGACCG 3，
[0069]PCR 引物對 I (rs224058)(如 SEQ ID N0.17 ~18 所示):
[0070]F: 5 』 ACGTTGGATGTAGGCACGTGATAGTGATTC 3，
[0071]R: 5，ACGTTGGATGTGGGTAGTCTAAATCCCAGG 3』
[0072]所得到的擴增序列如下(其中序列中的方框中表示鹼基發生變異)
[0073]序列28(rs78377598):l26bp
[0074](方框處為SNP)
[0075]AaaccaagatGTTCAACATGTCCAGACAAGtaaatctaagactagagacatttatcagtgcaggatacctccc C/T tatcttcacgattatctgctaaCAGCTATACCCTTCTTCTTGgAgaaAttGc
[0076]序列29(rs77258390):96bp
[0077](方框處為SNP)
[0078]AgGacattTtAAGAGGCAAAATGTCATCCCattatacacacacacatac A/G cacatgcacgcacat
gCACACACAGCTGTATTTTTCtATatAcaGT
[0079]序列30(rs78597810):114bp
[0080](方框處為SNP)
[0081 ] taaTctaAaaATGACTGACTTGAAAACAGCttgtatttaatttaaaatgatggggaatttcacaa C/T
attggttacattttaagtCAGGGGTTGTTCATCATTCCaAgaatgtac
[0082]序列31(rsl2568393):112bp
[0083](方框處為SNP)
[0084]CtGgaatcTaGTTGATAGTGGTGATTTGTCtaagattgtt A/G taataccttcagctcaaaaatttgt
acagaggtgaaaattaGCTTCTTAAGAATTCAGTTCagaaacgtta
[0085]序列32(rsl2561798):112bp
[0086](方框處為SNP)
[0087]ctGgaatcTaGTTGATAGTGGTGATTTGTCtaagattgttgtaataccttcagctcaaaaatttg C/T
acagaggtgaaaattaGCTTCTTAAGAATTCAGTTCagaaacgtta
[0088]序列33(ι^76436269):101bp
[0089](方框處為SNP)
[0090]GgaaaGGtTaCAGATTACAACTAGCCAAGGaaagaagttcacagggca A/G agtcagtcccgaaataa
caaatGTGGAGCTTTTATTGTCCTCttcCtgtgGa
[0091]序列34(rsll7633859):119bp
[0092](方框處為SNP)
[0093]ggagTGagccATCGTGCCAGGCCATAAATGggatttttgatgaaccattact A/G ttttttttttaaa
cattggataaaatttatatgtaaAATTTTACTTGATTTCTTTCagatttggtT
[0094]序列35Crs3O2I3O4):88bp
[0095](方框處為SNP)
[0096]AaaccaGtacCCTAGTCTCACTGTCACCTCcccagccttgatgctcctccT C/G tacctaTATGACAC
TTGCCTTACCAACAgatgAttT
[0097]序列36(rs442309):98bp
[0098](方框處為SNP)
[0099]ttGgTcagcaTCTCTGTGAAGTGAAGGGACtaccca,C/T gcacacatggcctctctgccctagaagagccCGGTCTGCAAAGAACAGAACttgaCAtaaa
[0100]序列37(rs224058):106bp
[0101](方框處為SNP)
[0102]tgGgatGtaGTAGGCACGTGATAGTGATTCaaagattagtctccaaagttaaattctgctgttc C/T g
taaaagtggcCCTGGGATTTAGACTACCCAtgatCcttGT
[0103]延伸引物a(rs78377598)(如 SEQ ID N0.19 所示):
[0104]5， cccTGCAGGATACCTCCC 3，
[0105]延伸引物b(rs77258390)(如 SEQ ID N0.20 所示):
[0106]5』 CCATTATACACACACACATAC 3』
[0107]延伸引物c(rs78597810)(如 SEQ ID N0.21 所示):
[0108]5』 TGATGGGGAATTTCACAA 3』
[0109]延伸引物d(rsl2568393)(如 SEQ ID N0.22 所示):
[0110]5』 AGTGGTGATTTGTCTAAGATTGTT 3』
[0111]延伸引物e(rsl2561798)(如 SEQ ID N0.23 所示):
[0112]5 』 AGCTAATTTTCACCTCTGT 3，
[0113]延伸引物f (rs76436269)(如 SEQ ID N0.24 所示):
[0114]5， aaacGAAGTTCACAGGGCA 3，
[0115]延伸引物h(rs3021304)(如 SEQ ID N0.25 所示):
[0116]5 』 ACTTGATGCTCCTCCT 3，
[0117]延伸引物i (rs442309)(如 SEQ ID N0.26 所示):
[0118]5』 gaatTGAAGGGACTACCCA 3』
[0119]延伸引物j (rs224058)(如 SEQ ID N0.27 所示):
[0120]5』 CCCAGGGCCACTTTTAC 3』
[0121]統計方法:利用SPSS 13.0軟體進行分析，檢測Hardy-Weinberg平衡，數量變量採用t檢驗，質量變量採用卡方檢驗。雙側P〈0.05認為有統計學意義的差異。結果如下(圖1-27為SNP基因分型結果圖):
[0122]SNP位點多態性與VKH症候群密切相關
[0123]
【權利要求】
1.一種用於檢測VKH症候群的試劑盒，其特徵在於:該試劑盒包含用於擴增位點rs78377598、rs77258390、rs78597810、rsl2568393、rsl2561798、rs76436269、rs3021304、rs442309和rs224058的基因片段的試劑的引物對，以及特異性檢測個體基因型的Sequenom MassARRAY單喊基延伸引物。
2.根據權利要求1所示的試劑盒，其特徵在於:所述基因片段的試劑的引物 rs78377598基因片段的試劑的PCR引物對序列如SEQ ID N0.1~2所示； rs77258390基因片段的PCR引物對序列如SEQ ID N0.3~4所示； rs78597810基因片段的PCR引物對序列如SEQ ID N0.5~6所示； rsl2568393基因片段的PCR引物對序列如SEQ ID N0.7~8所示； rsl2561798基因片段的PCR引物對序列如SEQ ID N0.9~10所示； rs76436269基因片段的PCR引物對序列如SEQ ID N0.11~12所示； rs3021304基因片段的的PCR引物對序列如SEQ ID N0.13~14所示； rs442309基因片段的的PCR引物對序列如SEQ ID N0.15~16所示； rs224058基因片段的的PCR引物對序列如SEQ ID N0.17~18所示。
3.根據權利要求1所示的試劑盒，其特徵在於:所述特異性檢測個體基因型的Sequenom MassARRAY單喊基延伸引物的序列如SEQ ID N0.19~27所不。
4.根據權利要求1所示的試劑盒，其特徵在於:所述試劑盒還包括Taq酶，SAP,SAPBuffer,無酶水，以及位點 rs78377598、rs77258390、rs78597810、rsl2568393、rsl2561798、rs76436269、rs3021304、rs442309 和 rs224058 的標準 DNA 樣本。
【文檔編號】C12Q1/68GK104164505SQ201410388922
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2014年8月8日 優先權日:2014年8月8日
【發明者】楊培增, 楊正林, 侯勝平, 杜利平, 雷博 申請人:重慶醫科大學附屬第一醫院