一類新的非環核苷膦酸酯類化合物及其組合物、製備方法和用途的製作方法

2023-07-20 04:26:21 1

專利名稱：一類新的非環核苷膦酸酯類化合物及其組合物、製備方法和用途的製作方法
技術領域：
本發明屬於藥物學領域，涉及藥物合成和藥理學領域，更具體而言，涉及含有胺基酸基團的非環核苷膦酸酯類化合物及其組合物、製備方法和在製備抗病毒藥物中的用途。

背景技術：
據世界衛生組織估計，目前全世界大約有3.5億HBV(hepatitis B virus，HBV)攜帶者，僅中國就有1.2億HBV攜帶者。HBV慢性感染可引起慢性B型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)、肝硬化(liver cirrhosis)和原發性肝細胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)等相關疾病。目前治療B型肝炎的主要藥物為幹擾素和核苷類化合物。α-幹擾素聯合利巴韋林不僅療效有限而且不良反應較多，因此核苷類化合物是近年來B肝抗病毒藥物研究的主要領域[Current Medicinal Chemistry，2003，10，1825；Expert Opinion onInvestigatinalDrugs 2003，12，1269；Current Drug Targets-Infections Disorders 2005，5，307]。
核苷類抗病毒藥物分為核苷類似物和非環核苷膦酸酯。非環核苷膦酸酯類似物具有廣譜的抗病毒活性，該類化合物的特點是結構中具有穩定的膦醯基甲基醚結構，其O-C-P鍵連接使非環核苷膦酸酯具有很高的生物(酶)學及化學穩定性。與核苷類似物相比，由於非環核苷膦酸酯結構中具有膦酸酯部分，能有效地繞開病毒編碼激酶催化的初次磷酸化過程，因而對於不能編碼胸腺嘧啶激酶或胸腺嘧啶激酶水平較低的病毒能產生較好的抑制效果。目前上市的非環核苷膦酸酯類抗病毒藥物有西多福韋、阿德福韋二吡呋酯以及替諾福韋酯三種藥物，其中阿德福韋酯是繼拉米夫定後上市的第二個小分子抗HBV藥物，而且對拉米夫定耐受的變異B肝病毒(YMDD)有很強的活性(Expert Opinion on Pharmacotherapy 2004，5(11)2361-7)。替諾福韋酯福馬酸鹽(Tenofovir diisoproxil fumarate)作為抗HIV藥物已上市，作為抗HBV藥物目前進入III期臨床研究。LG Life Sciences公司研製的PMCG二吡呋酯前藥LB 80380，目前進入II期臨床[Current Drug Targets-Infectious Disorders2005，5，307]。
非環核苷膦酸酯類化合物在生理pH條件下離解為雙負離子的膦酸基團使其不易透過細胞膜吸收，生物利用度很低，並且還存在劑量依賴性腎毒性，限制了其作為抗HBV藥物的應用，必須製成膦酸酯前藥才能用於臨床。因此，前文提及的已上市和正在臨床研究的藥物均為膦酸酯前藥。
而且，非環核苷膦酸酯類藥物普遍存在以下缺點(1)化學性質不穩定，其對於血清酶介導的水解反應高度敏感，不能有效增加作用部位藥物濃度[Pharmaceutical Research.1997，14(4)492-496.]；(2)轉化一分子的核酸需要釋放兩當量的具有潛在毒性的甲醛和特戊酸[Drugs of the Future 2004，29(2)；163-177]。
為了克服以上缺點，本發明提供一類新型非環核苷膦酸酯類化合物及其合成方法和用途。


發明內容
本發明的一個目的是提供下面通式(I)表示的非環核苷膦酸酯類化合物或其各種光學異構體、各種晶型、藥學上可接受的無機或有機鹽、水合物或溶劑合物。


本發明的另一個目的是提供含有通式(I)所示化合物中的一種或多種為主要活性成分的藥物組合物。
本發明的又一個目的是提供通式(I)所示的非環核苷膦酸酯類化合物或其各種光學異構體、各種晶型、藥學上可接受的無機或有機鹽、水合物或溶劑合物的製備方法。
本發明的再一個目的是提供通式(I)所示的非環核苷膦酸酯類化合物或其各種光學異構體、各種晶型、藥學上可接受的無機或有機鹽、水合物或溶劑合物，以及含有式(I)所示化合物為主要活性成分的藥物組合物在製備治療病毒感染性疾病特別是HBV和HIV病毒引起的感染性疾病的藥物中的應用。
下面對本發明進行具體的說明。
本發明提供如下通式(I)所示的非環核苷膦酸酯類化合物或其各種光學異構體、各種晶型、藥學上可接受的無機或有機鹽、水合物或溶劑合物
通式(I)中 R1代表氫、滷素、氨基、羥基、直鏈或支鏈或環狀C1-C6烷基氨基、直鏈或支鏈C1-C6烷氧基、取代芳香基氧基或者取代芳香基硫基； R2代表氫或氨基； R3代表氫、環丙基、直鏈或支鏈C1-C6烷基、單氟甲基或二氟甲基； R5代表氫，芳香基，或者含有1～2個選自N、O和S中的雜原子的五元或六元芳香雜環基； R4代表氫、直鏈或支鏈C1-C6基、直鏈或支鏈C1-C6滷代烷基、苄基或者式(II)，
在式(II)中， R6和R7彼此獨立地代表氫、苄基、直鏈或支鏈C1-C6烷基或者天然胺基酸或非天然胺基酸的側鏈，所述胺基酸的構型可以是L-型或D-型； R8代表氫、直鏈或支鏈C1-C6烷基、三氟乙基或苄基。
在本發明優選的實施方案中，對於上述通式(I)化合物 R1代表氫、滷素、氨基、羥基或者直鏈或支鏈C1-C4烷基氨基； R2代表氫或氨基； R3代表氫或者直鏈或支鏈C1-C4烷基； R5代表氫； R4代表直鏈或支鏈C1-C4烷基、直鏈或支鏈C1-C4滷代烷基、苄基或者式(II)，
在式(II)中， R6和R7彼此獨立地代表氫、苄基或直鏈或支鏈C1-C4烷基， R8代表氫或直鏈或支鏈C1-C4烷基。
本發明化合物存在一個或多個不對稱碳原子或磷原子，因此通式(I)包括單一旋光體、單一對映體、單一非對映體、非對映體混合物和外消旋體混合物。
「藥學上可接受的無機或有機鹽」具體地可列舉本發明化合物與酸形成的鹽，適合成鹽的酸為鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等無機酸；本發明化合物可與甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、苦味酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸等有機酸或者天冬氨酸、穀氨酸等酸性胺基酸成鹽；或與鹼形成的鹽，如鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鋁鹽等無機鹼的鹽，銨鹽、甲胺鹽、乙胺鹽、乙醇胺鹽等，或與賴氨酸、精氨酸、鳥氨酸等鹼性胺基酸形成的鹽。
對於上述定義的C1-C6的烷基、C1-C6的烷氧基、C1-C6的烷基氨基，其中的烷基可以是C1-C6的直鏈、支鏈或環烷基，具體為甲基、乙基、丙基、異丙基、環丙基、環丁基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、新戊基、叔戊基、1-甲基丁基、2-甲基丙基、己基、異己基、1-甲基戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基丁基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、3，3-二甲基丁基、1-乙基丁基、2-乙基丁基、1，1，2-三甲基丙基、1，2，2-三甲基丙基、1-乙基-1-甲基丙基或1-乙基-2-甲基丙基。這些基團中，優選為甲基、乙基、丙基、環丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基等碳原子數為1-4個的烷基。
在本發明最優選的實施方案中，本發明的通式(I)所示的化合物代表性化合物可以為以下化合物

下面具體地描述本發明通式(I)結構化合物的製備方法，但這些具體方法不對本發明構成任何限制。
本發明通式(I)化合物可通過如下的方法製得，然而如下方法的條件，例如反應物、溶劑、鹼、所用化合物的量、反應溫度、反應所需時間等不限於下面的解釋。本發明化合物還可以任選將在本說明書中描述的或本領域已知的各種合成方法組合起來而方便的製得，這樣的組合可由本發明所屬領域的技術人員容易的進行。
本發明通式(I)化合物的製備方法包括 方法一 (1)N-苄基胺基酸酯與烯丙基溴反應，再經水合、脫苄等反應生成化合物(IIIa)；
其中R6、R7、R8定義如前； (2)化合物(IIIa)與9-[2-(膦醯基甲氧基)乙基]腺嘌呤(PMEA)或9-[2-(R)-(膦醯基甲氧基)丙基]腺嘌呤(PMPA)的膦醯氯化合物反應生成膦酸酯化合物(I)，化合物(I)根據需要在溶劑中與相應的酸反應生成化合物(I)的鹽，也可根據需要按常規方法可以將化合物(I)製成水合物或溶劑合物。例如，化合物(I)和富馬酸反應得到化合物(I)的富馬酸鹽(Ia)。

或者， 方法二 (1)3-氨基丙醇與相應的醛反應或3-氯丙醇與相應的胺反應生成化合物(IIIb)；
其中R4定義如前，但不為式(II)； (2)化合物(IIIb)與9-[2-(膦醯基甲氧基)乙基]腺嘌呤(PMEA)或9-[2-(R)-(膦醯基甲氧基)丙基]腺嘌呤(PMPA)的膦醯氯化合物反應生成膦酸酯化合物(I)；根據需要，通過與相應的酸反應可以將式(I)化合物製備成相應的藥學上可接受的鹽；按通常方法，式(I)化合物用水或含水溶劑重結晶，可以製備成其水合物、溶劑合物。化合物(I)和富馬酸反應得到化合物(I)的富馬酸鹽(Ib)
其中R3定義如前。
下面更詳細地描述本發明化合物的製備方法 對於方法一，本發明式(Ia)化合物可按如下流程製備 流程I

aSOCl2；bPhCHO，NaBH3CN，MeOH；cCH2＝CHCH2Br，DIPEA，DMSO；d9-BBN，THF；ePd/C，H2，MeOH；fEt2NCHO，(COCl)2，CH2Cl2；gPy，TEA，CH2Cl2；hAcOH，MeOH；iHOOCCH＝CHCOOH，CH3CN. 其中R3、R6、R7、R8定義如前。
a、化合物(III-1)代表各種天然或非天然α-胺基酸，上述α-胺基酸的構型可以是L-型或D-型，在醯氯試劑存在下，以R8OH作為反應溶劑，於-30～100℃反應0.5～72小時，得到胺基酸酯(III-2)。醯氯試劑可以選用草醯氯、五氯化磷、三氯氧磷或氯化亞碸。最佳反應條件為在甲醇(MeOH)中，加入氯化亞碸(SOCl2)，於-10℃反應1小時，加熱回流反應24小時。
b、化合物(III-2)與苯甲醛(PhCHO)，在還原劑作用下，於質子性溶劑中，-30～50℃反應0.5～72小時，得到N-苄基胺基酸酯產物(III-3)。還原劑可以選用硼氫化鋰、硼氫化鈉、硼氫化鉀、氰基硼氫化鈉或三乙醯氧基硼氫化鈉。質子性溶劑選用乙醇、甲醇或異丙醇。最佳反應條件為在甲醇(MeOH)中，加入氰基硼氫化鈉(NaBH3CN)，於-10℃反應1小時，室溫反應24小時。
c、化合物(III-3)與烯丙基溴(CH2＝CHCH2Br)，在有機鹼存在下，在極性非質子性溶劑中，於-30～100℃反應0.5～72小時，生成N-苄基-N-烯丙基化胺基酸酯(III-4)。有機鹼選用三乙胺、N，N′-二環己基-4-嗎啉基脒(DCMC)、1，8-二氮雜雙環[5，4，0]十一烷-7-烯(DBU)、N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)、N，N-二異丙基乙基胺(DIPEA)、嗎啉、N-甲基嗎啉(NMM)、吡啶或2，6-二甲基吡啶。極性非質子性溶劑選用氯仿、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙醚、甲基叔丁醚、二甲基甲醯胺、二甲基亞碸或六甲基磷醯胺。最佳反應條件為在二甲基亞碸(DMSO)中，加入二異丙基乙基胺，於40℃反應24小時。
d、化合物(III-4)在氧化劑存在下，在醚類溶劑中，於-30～100℃反應0.5～72小時，生成化合物(III-5)。氧化劑可以選用雙氧水、高錳酸鉀、高碘酸鈉、次氯酸鈉、三氧化鉻、重鉻酸鉀、DMSO或9-硼雙環[3，3，1]壬烷(9-BBN)。醚類溶劑可以選用四氫呋喃、乙醚、甲基叔丁醚、1，6-二氧六環或乙二醇二甲醚。最佳反應條件為在四氫呋喃(THF)中，加入9-BBN，於-10℃反應1小時，室溫反應24小時。
e、化合物(III-5)在含金屬催化劑作用下，在質子性溶劑中，於-30～50℃催化氫化反應0.5～72小時，生成脫苄基產物(IIIa)。適合的含金屬的催化劑為鈀、鉑或鎳催化劑，適合的質子性溶劑選用乙醇、甲醇、異丙醇、醇類與乙酸混合溶劑或醇類與硫酸混合溶劑。最佳反應條件為在10％鈀碳(Pd/C)乙醇或甲醇中，於室溫加氫反應24小時。
f、PMEA與PMPA分別與醯氯試劑、Et2NCHO，在極性非質子性溶劑中，於-30～100℃反應0.5～72小時，得到膦醯氯化合物(I-1)，再用有機鹼活化備用。醯氯試劑可以選用草醯氯、五氯化磷、三氯氧磷、三氯氧磷或氯化亞碸。極性非質子性溶劑可以選用二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙醚、甲基叔丁醚、二氧六環、二甲基甲醯胺或二甲基亞碸。有機鹼選用三乙胺、N，N′-二環己基-4-嗎啉基脒(DCMC)、1，8-二氮雜雙環[5，4，0]十一烷-7-烯(DBU)、N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)、N，N-二異丙基乙基胺(DIEA)、嗎啉、N-甲基嗎啉(NMM)、吡啶或2，6-二甲基吡啶。最佳反應條件為在二氯甲烷(CH2Cl2)中，於室溫加入草醯氯((COCl)2)、Et2NCHO，加熱回流反應3小時，生成相應的膦醯氯(I-1)，再加入吡啶活化備用。
g、化合物(IIIa)和上述已經製備好的化合物(I-1)溶液[Bio.&Med.Chem.2003，11，5461]，在極性非質子性溶劑中，有機鹼作用下，於-80～25℃反應0.5～72小時，生成相應的膦酸酯(I-2)。有機鹼選用三乙胺、N，N′-二環己基-4-嗎啉基脒(DCMC)、1，8-二氮雜雙環[5，4，0]十一烷-7-烯(DBU)、N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)、N，N-二異丙基乙基胺(DIEA)、嗎啉、N-甲基嗎啉(NMM)、吡啶或2，6-二甲基吡啶。極性非質子性溶劑選用二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙醚、甲基叔丁醚、1，6-二氧六環、二甲基甲醯胺或二甲基亞碸。最佳反應條件為在二氯甲烷(CH2Cl2)中，以三乙胺(TEA)為鹼在-70～-50℃反應1～2小時。
h、膦酸酯(I-2)在質子性溶劑中，加入酸，於25～100℃反應0.5～72小時，生成脫去亞胺保護基產物膦酸酯(I-3)。酸可以選用硫酸、鹽酸、冰乙酸、三氟乙酸、甲磺酸或磷酸。適合的質子性溶劑選用乙醇、甲醇或異丙醇。最佳反應條件為在甲醇(MeOH)中，加入冰乙酸(AcOH)回流2個小時。
i、膦酸酯(I-3)在極性非質子性溶劑中，與相應的酸，於25～100℃反應0.5～72小時，生成鹽(Ia)。極性非質子性溶劑可以選用二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙腈、乙醚、甲基叔丁醚或二氧六環。酸可以選用鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、硫酸、硝酸或磷酸等無機酸；甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、苦味酸、甲磺酸、乙磺酸或苯磺酸等有機酸或者天冬氨酸、穀氨酸等酸性胺基酸；優選與富馬酸(HOOCCH＝CHCOOH)反應，在乙腈(CH3CN)中，回流2個小時。
根據需要，式(I-3)化合物按常規方法可製備成相應的藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑合物。
對於方法二，本發明式(Ib)化合物可按如下流程製備 流程II
aCH(OMe)3，NaBH4，MeOH；bEt2NCHO，(COCl)2，CH2Cl2；cPy，TEA，CH2Cl2；dAcOH，MeOH；eHOOCCH＝CHCOOH，CH3CN. 其中，R3、R4定義如前，但R4不為式(II)。
a、3-氨基丙醇與相應的醛反應或3-氯丙醇與相應的胺反應生成化合物(IIIb)； b、PMEA與PMPA分別與醯氯試劑、Et2NCHO，在極性非質子性溶劑中，於-30～100℃反應0.5～72小時，得到膦醯氯化合物(I-1)，再用有機鹼活化備用。醯氯試劑可以選用草醯氯、五氯化磷、三氯氧磷、三氯氧磷或氯化亞碸。極性非質子性溶劑可以選用二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙醚、甲基叔丁醚、二氧六環、二甲基甲醯胺或二甲基亞碸。有機鹼選用三乙胺、N，N′-二環己基-4-嗎啉基脒(DCMC)、1，8-二氮雜雙環[5，4，0]十一烷-7-烯(DBU)、N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)、N，N-二異丙基乙基胺(DIEA)、嗎啉、N-甲基嗎啉(NMM)、吡啶或2，6-二甲基吡啶。最佳反應條件為在二氯甲烷(CH2Cl2)中，於室溫加入草醯氯((COCl)2)、Et2NCHO，加熱回流反應3小時，生成相應的膦醯氯(I-1)，再加入吡啶活化備用。
c、化合物(I-1)[Bio.&Med.Chem.2003，11，5461]和化合物(IIIb)[J.Org.Chem.1998，636]在極性非質子性溶劑中，有機鹼作用下，於-80～25℃反應0.5～72小時，生成相應的膦酸酯(Ib-1)。有機鹼選用三乙胺、N，N′-二環己基-4-嗎啉基脒(DCMC)、1，8-二氮雜雙環[5，4，0]十一烷-7-烯(DBU)、N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)、N，N-二異丙基乙基胺(DIEA)、嗎啉、N-甲基嗎啉(NMM)、吡啶或2，6-二甲基吡啶。極性非質子性溶劑選用二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙醚、甲基叔丁醚、1，6-二氧六環、二甲基甲醯胺或二甲基亞碸。最佳反應條件為在二氯甲烷(CH2Cl2)中，以三乙胺(TEA)為鹼在-70～-50℃反應1～2小時。
d、膦酸酯(Ib-1)在質子性溶劑中，加入酸，於25～100℃反應0.5～72小時，生成脫去亞胺保護基產物膦酸酯(Ib-2)。酸可以選用硫酸、鹽酸、冰乙酸、三氟乙酸、甲磺酸或磷酸。適合的質子性溶劑選用乙醇、甲醇或異丙醇。最佳反應條件為在甲醇(MeOH)中，加入冰乙酸(AcOH)回流2個小時。
e、膦酸酯(Ib-2)在極性非質子性溶劑中，與相應的酸，於25～100℃反應0.5～72小時，生成鹽(Ib)。極性非質子性溶劑可以選用二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙腈、乙醚、甲基叔丁醚或二氧六環。酸可以選用鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、硫酸、硝酸或磷酸等無機酸；甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、苦味酸、甲磺酸、乙磺酸或苯磺酸等有機酸或者天冬氨酸、穀氨酸等酸性胺基酸；優選與富馬酸(HOOCCH＝CHCOOH)反應，在乙腈(CH3CN)中，回流2個小時。
根據需要式(Ib-2)化合物可製備成相應的藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑合物。
本發明提供一種含有式(I)表示的非環核苷膦酸酯類化合物或其各種光學異構體、各種晶型、藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑合物中的一種或多種作為主要活性成分的藥物組合物，該組合物可以進一步包含藥學上可以接受的輔料，例如賦形劑、載體等。
本發明提供的式(I)所示的非環核苷膦酸酯類化合物或其各種光學異構體、各種晶型、藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑合物具有抗病毒活性，因此可在製備治療病毒感染性疾病特別是B型肝炎病毒HBV或HIV病毒引起的感染性疾病的藥物中的應用。
本發明所要求保護的含有胺基酸基團的非環核苷膦酸酯類化合物及其藥學上可接受的鹽具有治療病毒感染性疾病特別是HBV和HIV病毒引起的感染性疾病的功能。
本發明所要求保護的含有胺基酸基團的非環核苷類化合物及其藥學上可接受的鹽具有與現有技術中核苷類小分子抗HBV藥物阿德福韋相似或更強的治療病毒感染性疾病的活性，所以這些化合物可用於製備新型的治療病毒感染性疾病，特別是HBV和HIV病毒引起的感染性疾病的藥物。

具體實施例方式 在下述製備例和實施例中更具體地解釋本發明。然而，應當理解，這些製備例和實施例是為了舉例說明本發明，而並不是以任何方式限制本發明的範圍。所有製備例和實施例中，熔點用MEL-TEMP熔點儀測定，溫度計未校正；1H-NMR用Varian Mercury 400核磁共振儀記錄，化學位移以δ(ppm)表示；分離用矽膠未說明均為200-300目。洗脫液的配比均為體積比。
式(IIIa)化合物的製備 實施例1 L-纈氨酸甲基酯鹽酸鹽的製備
在-10℃，將纈氨酸(10g，85.5mmol)溶於甲醇(120ml)中，緩慢滴入氯化亞碸(22.4ml，307mmol)，滴畢，反應液緩慢升至室溫，回流反應24小時。降至室溫，減壓蒸去甲醇，殘渣於甲醇-乙醚混合物中重結晶，得到標題產品(10g，70％)。1H NMR(CDCl3)8.8(br，3H)，4.0(t，1H)，3.8(s，3H)，2.5(m，1H)，1.1(d，6H). 下表所列的化合物可以由各種天然胺基酸和非天然胺基酸為原料按照與實施例1相同的步驟製備得到。
實施例2-10
實施例11 N-苄基-L-纈氨酸甲基酯的製備
在0℃下，將L-纈氨酸甲基酯鹽酸鹽(7g，41.8mmol)溶於甲醇(150ml)中，再加入氰基硼氫化鈉(2.63g，41.8mmol)，然後滴加苯甲醛(4.43g，41.8mmol)，升至室溫，反應過夜。冷至0℃，用濃鹽酸酸化至反應液pH＝1，同溫度下攪拌3.5h，減壓蒸餾，再加入水，用碳酸鈉飽和溶液調pH＝9，乙酸乙酯萃取2遍，水洗，飽和氯化鈉洗後，無水硫酸鎂乾燥，過濾，減壓蒸餾至幹，殘留物柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1)得到標題產品(6g，64.9％)。1H NMR(CDCl3)7.2-7.4(m，5H)，3.82，3.6(dd，2H)，3.7(s，3H)，3.0(d，1H)，1.9(m，1H)，1.8(s，1H)，0.95(m，6H)。
下表所列的化合物可由實施例2-10所得化合物為原料按照與實施例11相同的步驟製備得到。
實施例12-20


實施例21 N-苄基-N-烯丙基-L-纈氨酸甲基酯的製備
在室溫下，將N-苄基-L-纈氨酸甲基酯(5g，22.6mmol)與烯丙基溴(3.93ml，45.2mmol)溶於二甲基亞碸(20ml)中，滴加二異丙基乙基胺(7.46ml，4.52mmol)，40℃反應過夜，用10倍水稀釋，乙酸乙酯萃取1次，有機層用水洗滌，再用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝20∶1)得到標題產品(3.6g，61％)。1H NMR(CDCl3)7.2-7.4(m，5H)，5.8(m，1H)，5.2-5.1(dd，2H)，4.0，3.3(dd，2H)，3.8(s，3H)，3.4(d，2H)，2.9(d，1H)，2.1(m，1H)，1.0(d，3H)，0.8(d，3H)。
下表所列的化合物可由實施例12-20所得化合物為原料按照與實施例21相同的步驟製備得到。
實施例22-30
實施例31 N-苄基-N-(3-羥基丙基)-L-纈氨酸甲基酯的製備
N2保護下，將N-苄基-N-烯丙基-L-纈氨酸甲基酯(2.6g，10mmol)溶於無水四氫呋喃(10ml)中，再將此溶液滴加入用冰冷卻的9-硼雙環[3，3，1]壬烷(30ml，15mmol)四氫呋喃溶液中，室溫攪拌4.5h，反應液冷卻至0℃，加入水(8ml)，攪拌15min，再依次加入20％氫氧化鈉(6ml)，30％雙氧水(5ml)，反應液於0℃攪拌1.5h，用4N鹽酸中和至pH＝7，減壓濃縮，加入水，用乙酸乙酯萃取3遍，無水硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)得到標題產品(2.5g，90％)。1H NMR(CDCl3)7.2-7.4(m，5H)，3.82，3.6(dd，2H)，3.8(t，2H)，3.75(s，3H)，3.05(d，1H)，3.0，2.6(m，2H)，1.98(m，1H)，1.63(m，2H)，0.98(m，6H)。
下表所列的化合物可由實施例22-30所得化合物為原料按照與實施例31相同的步驟製備得到。
實施例32-40
實施例41 N-(3-羥基丙基)-L-纈氨酸甲基酯的製備
將N-苄基-N-(3-羥基丙基)-L-纈氨酸甲基酯(2.8g，10mmol)和10％Pd/C(280mg)加入至無水乙醇(20ml)中，催化氫化反應2.5h。減壓濃縮，殘留物柱層析(二氯甲烷∶甲醇＝30∶1)得到標題產品(1.6g，84.6％)。1HNMR(CDCl3)3.8(t，2H)，3.75(s，3H)，3.05(d，1H)，3.0，2.6(m，2H)，1.98(m，1H)，1.75(m，2H)，0.98(m，6H)。
下表所列的化合物可由實施例32-40所得化合物為原料按照與實施例41相同的步驟製備得到。
實施例42-50
式(IIIb)化合物的製備 實施例51 N-苄基-3-胺基丙醇的製備
將苯甲醛(10g，94.2mmol)與原甲酸三甲酯(15.5ml，141mmol)溶於甲醇(300ml)中，室溫下，加入3-氨基丙醇(7.2ml，94.2mmol)，室溫攪拌5h，用冰冷卻至0℃，硼氫化鈉(3.6g，94.2mmol)分兩批加入，當沒有氣體放出時，減壓濃縮，加入水(300ml)，用乙酸乙酯萃取兩次，再用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，得到標題產品(14.82g，95.3％)。1H NMR(CDCl3)7.3(m，5H)，3.8(dd，2H)，3.0(s，2H)，2.9(t，2H)，1.63(t，2H)。
實施例52 N-丙基-3-胺基丙醇的製備
0℃，將正丙胺(16.4ml，0.2mol)滴加至3-氯丙醇(4.18ml，0.05mol)中，室溫反應2-3d，再回流3-5h，用水(50ml)洗，無水硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮至幹，減壓蒸餾得到標題產品(3.427g，58.6％)。1H NMR(CDCl3)3.8(t，2H)，2.9(t，2H)，2.6(t，2H)，1.7(m，2H)，1.5(m，2H)，0.9(t，3H). 實施例53 9-{2-[3-(R)-[1-(S)-甲氧羰基乙基]-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-乙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物1a)；9-{2-[3-(S)-[1-(S)-甲氧羰基乙基]-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-乙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物1b)的製備
N2保護下，將9-[2-(膦醯基甲氧基)乙基]腺嘌呤(PMEA)(273mg，1mmol)懸浮於二氯甲烷中(20ml)，分別加入N，N-二乙基甲醯胺(0.121ml，1.08mmol)，草醯氯(0.305ml，3.5mmol)回流3h，冷至室溫，減壓濃縮，再加入二氯甲烷(20ml)，再減壓濃縮一次，再加入二氯甲烷(20ml)，用冰冷卻至0℃，加入吡啶(0.162ml，2mmol)，此膦醯氯溶液冷卻備用。
將N-(3-羥基丙基)-L-丙氨酸甲基酯(160mg，1mmol)，三乙胺(0.878ml，6.3mmol)溶於二氯甲烷(20ml)，反應液冷至-78℃。將上述已製備好的磷醯氯溶液滴加至此反應液中，內溫不得高於-50℃，滴畢，緩慢升至室溫，用水(20ml)洗滌二次，無水硫酸鎂乾燥，減壓濃縮，殘留物柱層析(二氯甲烷∶甲醇＝20∶1)得到膦酸酯化合物(210mg)。
該膦酸酯化合物溶於甲醇(30ml)中，加入冰乙酸(0.25ml，4.38mmol)，加熱回流2h，減壓濃縮，殘留物柱層析梯度洗脫(二氯甲烷∶甲醇＝20∶1～15∶1)分別得到兩個非對映異構體1a(100mg)和1b(50mg)。
將得到的兩個非對映異構體分別溶於乙腈(20ml)，加入1倍量的富馬酸，回流2h，室溫下放置兩個小時，析出白色固體，過濾，分別得到標題化合物1a(100mg，29.1％)和1b(50mg，14.5％)。化合物1a1H NMR(CD3OD)8.2(d，2H)，6.8(s，2H)，4.6(m，2H)，4.4(m，3H)，4.0(m，4H)，3.6(s，3H)，3.1，2.9(m，2H)，1.9，1.7(m，2H)，1.4(d，3H)。MS(ESI)m/z(％)399(MH+，100)。化合物1b1H NMR(CD3OD)8.2(d，2H)，6.8(s，2H)，4.6(m，2H)，4.4(m，3H)，4.0(m，4H)，3.65(s，3H)，3.1，2.9(m，2H)，1.9，1.7(m，2H)，1.15(d，3H)。MS(ESI)m/z(％)399(MH+，100)。
實施例54 9-{2-(R)-[3-(R)-[1-(S)-甲氧羰基乙基]-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-丙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物2a)；9-{2-(R)-[3-(S)-[1-(S)-甲氧羰基乙基]-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-丙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物2b)的製備
按照實施例53的操作，9-[2-(R)-(膦醯基甲氧基)丙基]腺嘌呤(PMPA)(287mg，1mmol)和上述實施例45生成的化合物(161mg，1mmol)為原料反應生成標題產物2a(30mg，5.6％)和2b(45mg，8.4％)。化合物2a1HNMR(CD3OD)8.2(d，2H)，6.8(s，2H)，4.4-4.2(m，4H)，4.0(m，2H)，3.6-4.0(m，2H)，3.62(s，3H)，3.2，2.8(m，2H)，2.0，1.7(m，2H)，1.4(d，3H)，1.22(d，3H)。MS(ESI)m/z(％)413(MH+，100)。化合物2b1H NMR(CD3OD)8.2(d，2H)，6.8(s，2H)，4.4-4.2(m，4H)，4.0(m，2H)，3.6-4.0(m，2H)，3.66(s，3H)，3.2，2.8(m，2H)，2.0，1.7(m，2H)，1.38(d，3H)，1.25(d，3H)。MS(ESI)m/z(％)413(MH+，100) 實施例55 9-{2-[3-[1-(S)-甲氧羰基-3-甲基丁基]-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-乙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物3)的製備
按照實施例53的操作，9-[2-(膦醯基甲氧基)乙基]腺嘌呤(PMEA)(273mg，1mmol)和上述實施例46生成的化合物(203mg，1mmol)為原料反應生成標題產物(170mg，30.5％)。1H NMR(CD3OD)8.05(d，2H)，6.6(s，2H)，4.4(m，2H)，4.1(m，3H)，3.8(m，4H)，3.5(d，3H)，3.0-2.8(m，2H)，1.7-1.3(m，5H)，0.9(t，3H)，0.8(d，3H).MS(ESI)m/z(％)441(MH+，100) 實施例56 9-{2-(R)-[3-(R)-[1-(S)-甲氧羰-3-甲基丁基]-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-丙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物4a)；9-{2-(R)-[3-(S)-[1-(S)-甲氧羰-3-甲基丁基]-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-丙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物4b)的製備
按照實施例53的操作，9-[2-(R)-(膦醯基甲氧基)丙基]腺嘌呤(PMPA)(430mg，1.5mmol)和上述實施例46生成的化合物(305mg，1.5mmol)為原料反應生成標題產物4a(120mg，14％)和4b(150mg，17.5％)。化合物4a1H NMR(CD3OD)8.05(d，2H)，6.75(s，2H)，4.4-4.4(m，4H)，4.2-4.0(m，2H)，3.9-3.8(m，2H)，3.62(s，3H)，3.1-3.2(m，2H)，2.0-2.1(m，1H)，1.6-1.8(m，4H)，1.2(d，3H)，1.98(dd，6H)。MS(ESI)m/z(％)455(MH+，100)。化合物4b1H NMR(CD3OD)8.05(d，2H)，6.75(s，2H)，4.4-4.4(m，4H)，4.2-4.0(m，2H)，3.9-3.8(m，2H)，3.66(s，3H)，3.1-3.2(m，2H)，2.0-2.1(m，1H)，1.6-1.8(m，4H)，1.2(d，3H)，1.98(dd，6H)。MS(ESI)m/z(％)455(MH+，100)。
實施例57 9-{2-[3-[1-(S)-甲氧羰基-2-甲基丙基]-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-乙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物5)的製備
按照實施例53的操作，9-[2-(膦醯基甲氧基)乙基]腺嘌呤(PMEA)(722mg，2.6mmol)和上述實施例41生成的化合物(500mg，2.6mmol)為原料反應生成標題產物5(200mg，14.2％)。1H NMR(CD3OD)8.2(d，2H)，6.78(s，2H)，4.5(m，2H)，4.2(m，2H)，4.0-3.8(m，4H)，3.62(d，3H)，3.0(m，2H)，2.0-1.8(m，2H)，1.6-1.8(m，1H)，2.0(dd，3H)，0.8(dd，3H)。MS(ESI)m/z(％)427(MH+，100)。
實施例58 9-{2-(R)-[3-[1-(S)-甲氧羰基-2-甲基丙基]-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-丙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物6)的製備
按照實施例53的操作，9-[2-(R)-(膦醯基甲氧基)丙基]腺嘌呤(PMPA)(287mg，1mmol)和上述實施例41生成的化合物(190mg，1mmol)為原料反應生成標題產物(45mg，8.1％)。1H NMR(CD3OD)8.2(d，2H)，6.88(s，2H)，4.5-4.2(m，4H)，4.0(m，2H)，3.8(m，2H)，3.75(d，3H)，3.2-3.0(m，2H)，2.2(m，1H)，2.0(m，1H)，1.6-1.8(m，1H)，1.2(dd，3H)，0.9(dd，6H)。MS(ESI)m/z(％)442(MH+，100)。
實施例59 9-{2-[3-[1-(S)-甲氧羰基苯乙基]-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-乙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物7)的製備
按照實施例53的操作，9-[2-(膦醯基甲氧基)乙基]腺嘌呤(PMEA)(273mg，1mmol)和上述實施例47生成的化合物(250mg，1mmol)為原料反應生成標題產物(140mg，23.7％)。1H NMR(CD3OD)8.2(d，2H)，7.0-7.3(m，5H)，6.78(s，2H)，4.5-4.4(m，4H)，4.0-4.4(m，2H)，4.0-3.8(m，3H)，3.8(d，3H)，3.0-3.3(m，2H)，2.0-1.8(m，2H)。MS(ESI)m/z(％)475(MH+，100)。
實施例609-{2-(R)-[3-[1-(S)-甲氧羰基苯乙基]-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-丙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物8)的製備
按照實施例53的操作，9-[2-(R)-(膦醯基甲氧基)丙基]腺嘌呤(PMPA)(419mg，1.46mmol)和上述實施例47生成的化合物(346mg，1.46mmol)為原料反應生成標題產物(113mg，18.7％)。1H NMR(CD3OD)8.2(d，2H)，7.0-7.3(m，5H)，6.78(s，2H)，4.5-4.4(m，1H)，4.0-4.4(m，6H)，3.8(m，4H)，3.3(d，2H)，3.0(m，2H)，1.8(m，2H)，1.0(d，3H)。MS(ESI)m/z(％)489(MH+，100)。
實施例61 9-{2-[3-甲氧羰基亞甲基]-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-乙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物9)的製備
按照實施例53的操作，9-[2-(膦醯基甲氧基)乙基]腺嘌呤(PMEA)(273mg，1mmol)和上述實施例48生成的化合物(150mg，1mmol)為原料反應生成標題產物(30mg，15.4％)。1H NMR(CD3OD)8.2(d，2H)，6.78(s，2H)，4.5(m，2H)，4.3(m，2H)，3.96(m，2H)，3.9(d，2H)，3.6(s，3H)，3.3(s，2H)，3.1，3.0(m，2H)，2.0，1.8(m，2H)。MS(ESI)m/z(％)385(MH+，100)。
實施例62 9-{2-[3-[1-(S)-甲氧羰基-2-甲基丁基]-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-乙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物10)的製備
按照實施例53的操作，9-[2-(膦醯基甲氧基)乙基]腺嘌呤(PMEA)(273mg，1mmol)和上述實施例49生成的化合物(203mg，1mmol)為原料反應生成標題產物(185mg，33.2％)。1H NMR(CD3OD)8.2(d，2H)，6.75(s，2H)，4.4-4.5(m，2H)，4.2-4.0(m，2H)，3.9-3.8(m，5H)，3.72(s，3H)，3.0(m，2H)，2.0-2.1(m，2H)，1.6-1.8(m，2H)，1.4(m，1H)，0.8(dd，6H)。MS(ESI)m/z(％)441(MH+，100)。
實施例63 9-{2-(R)-[3-[1-(S)-甲氧羰基-3-甲基丁基]-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-丙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物11)的製備
按照實施例53的操作，9-[2-(R)-(膦醯基甲氧基)丙基]腺嘌呤(PMPA)(287mg，1.0mmol)和上述實施例49生成的化合物(203mg，1.0mmol)為原料反應生成標題產物(50mg，8.7％)。1H NMR(CD3OD)8.2(d，2H)，6.75(s，2H)，4.4-4.5(m，3H)，4.2-4.0(m，4H)，3.6(d，3H)，3.0(m，2H)，2.0(m，3H)，1.6(m，2H)，1.2(t，3H)，1.0(m，6H)。MS(ESI)m/z(％)455(MH+，100)。
實施例64 9-{2-[3-(R)-[1-(S)-乙氧羰基-2-甲基丙基]-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-乙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物12a)；9-{2-[3-(S)-[1-(S)-乙氧羰基-2-甲基丙基]-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-乙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物12b)的製備
按照實施例53的操作，9-[2-(膦醯基甲氧基)乙基]腺嘌呤(PMEA)(403mg，1.5mmol)和上述實施例42生成的化合物(300mg，1.5mmol)為原料反應生成標題產物12a(130mg，18.5％)和12b(100mg，11.9％)。化合物12a1HNMR(CD3OD)8.2(d，2H)，6.78(s，2H)，4.5(m，2H)，4.2(m，2H)，4.15(m，2H)，4.0-3.8(q，2H)，3.62(d，3H)，3.0(m，2H)，2.0-1.8(m，2H)，1.6-1.8(m，1H)，1.1(t，3H)，2.0(dd，3H)，0.8(dd，3H)。MS(ESI)m/z(％)441(MH+，100)。化合物12b1H NMR(CD3OD)8.2(d，2H)，6.78(s，2H)，4.5(m，2H)，4.2(m，2H)，4.15(m，2H)，4.0-3.8(q，2H)，3.66(d，3H)，3.0(m，2H)，2.0-1.8(m，2H)，1.6-1.8(m，1H)，1.1(t，3H)，1.9(dd，3H)，0.7(dd，3H)。MS(ESI)m/z(％)441(MH+，100)。
實施例65 9-{2-[3-[1-(S)-異丙氧羰基-2-甲基丙基]-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-乙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物13)的製備
按照實施例53的操作，9-[2-(膦醯基甲氧基)乙基]腺嘌呤(PMEA)(403mg，1.48mmol)和上述實施例43生成的化合物(321mg，1.47mmol)為原料反應生成標題產物(210mg，24.6％)。1H NMR(CD3OD)8.2(d，2H)，6.78(s，2H)，5.0(m，1H)，4.5(m，2H)，4.2(m，2H)，4.0-3.8(m，4H)，3.6(d，1H)，3.0(m，2H)，2.0-1.8(m，2H)，1.6-1.8(m，1H)，1.2(m，6H)，1.0-1.9(dd，3H)，0.8-0.7(dd，3H)。MS(ESI)m/z(％)455(MH+，100)。
實施例66 9-{2-[3-(R)-[1-(R)-乙氧羰基-2-甲基丙基]-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-乙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物14a)；9-{2-[3-(S)-[1-(R)-乙氧羰基-2-甲基丙基]-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-乙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物14b)的製備
按照實施例53的操作，9-[2-(膦醯基甲氧基)乙基]腺嘌呤(PMEA)(403mg，1.5mmol)和上述實施例44生成的化合物(300mg，1.5mmol)為原料反應生成標題產物14a(110mg，13.5％)和14b(100mg，12.2％)。化合物14a1H NMR(CD3OD)8.2(d，2H)，6.78(s，2H)，4.5(m，2H)，4.2(m，2H)，4.15(m，2H)，4.0-3.8(q，2H)，3.62(d，3H)，3.0(m，2H)，2.0-1.8(m，2H)，1.6-1.8(m，1H)，1.1(t，3H)，2.0(dd，3H)，0.8(dd，3H)。MS(ESI)m/z(％)441(MH+，100)。化合物14b1H NMR(CD3OD)8.2(d，2H)，6.78(s，2H)，4.5(m，2H)，4.2(m，2H)，4.15(m，2H)，4.0-3.8(q，2H)，3.66(d，3H)，3.0(m，2H)，2.0-1.8(m，2H)，1.6-1.8(m，1H)，1.1(t，3H)，1.9(dd，3H)，0.7(dd，3H)。MS(ESI)m/z(％)441(MH+，100)。
實施例67 9-{2-[3-[1-甲基-1-乙氧羰基乙基]-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-乙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物15)的製備
按照實施例53的操作，9-[2-(膦醯基甲氧基)乙基]腺嘌呤(PMEA)(273mg，1mmol)和上述實施例50生成的化合物(189mg，1mmol)為原料反應生成標題產物(100mg，18.4％)。1H NMR(CD3OD)8.2(d，2H)，6.8(s，2H)，4.6(m，2H)，4.4(m，2H)，4.2(q，2H)，4.0(m，4H)，3.1，2.9(m，2H)，1.9，1.7(m，2H)，1.4(s，6H)，1.0(t，3H)。MS(ESI)m/z(％)427(MH+，100)。
實施例68 9-{2-[3-[1-(S)-羥基羰氧基-2-甲基丙基]-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-乙-1-基}腺嘌呤(化合物16)的製備
將實施例57中得到的化合物5(110mg，26mmol)溶於乾燥的甲醇(2ml)，加入含水氫氧化鈉(2M，2ml)，室溫攪拌過夜，用4M冰乙酸酸化，用乙酸乙酯萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物柱層析(氯仿∶甲醇∶冰乙酸＝80∶20∶1)得到標題產物(90mg，83.2％)。1H NMR(CD3OD)8.2(d，2H)，4.5(m，2H)，4.2(m，2H)，4.0-3.8(m，4H)，3.0(m，2H)，2.0-1.8(m，2H)，1.6-1.8(m，1H)，1.0-1.9(dd，3H)，0.8-0.7(dd，3H)。MS(ESI)m/z(％)413(MH+，100)。
實施例69 9-{2-[3-苄基-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-乙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物17)的製備
按照實施例53的操作，9-[2-(膦醯基甲氧基)乙基]腺嘌呤(PMEA)(819mg，3mmol)和上述實施例51生成的化合物(495mg，3mmol)為原料反應生成標題產物(227mg，14.6％)。1H NMR(CD3OD)7.25(m，5H)，6.78(s，2H)，4.4(m，2H)，4.2(m，2H)，3.8(m，4H)，3.6(d，2H)，2.8(m，2H)，1.6(m，2H)。MS(ESI)m/z(％)403(MH+，100)。
實施例70 9-{2-(R)-[3-苄基-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-丙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物18)的製備
按照實施例53的操作，9-[2-(R)-(膦醯基甲氧基)丙基]腺嘌呤(PMPA)(287mg，1.0mmol)和上述實施例51生成的化合物(165mg，1.0mmol)為原料反應生成標題產物(50mg，11.6％)。1H NMR(CD3OD)8.2(dd，2H)，7.5(m，5H)，6.78(s，2H)，4.4(m，2H)，4.2(m，2H)，3.8(m，3H)，3.6(d，2H)，2.8(m，2H)，2.0(m，2H)，1.3(d，3H)。MS(ESI)m/z(％)417(MH+，100)。
實施例71 9-{2-[3-正丙基-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-乙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物19)的製備
按照實施例53的操作，9-[2-(膦醯基甲氧基)乙基]腺嘌呤(PMEA)(546mg，2mmol)和上述實施例52生成的化合物(234mg，2mmol)為原料反應生成標題產物(152mg，16.1％)。1HNMR(CD3OD)8.1(s，2H)，6.6(s，2H)，4.4(t，2H)，4.2(m，2H)，3.8(m，4H)，2.8(m，2H)，1.8(m，1H)，1.6(m，1H)，1.4(m，2H)，1.2(m，2H)，0.6(t，3H)。MS(ESI)m/z(％)255(MH+，100)。
實施例72 9-{2-[3-(1-氯代正丁基)-2-氧雜-1，3，2-氧氮雜磷醯己烷基-2-亞甲基氧基]-乙-1-基}腺嘌呤富馬酸鹽(化合物20)的製備
按照實施例53的操作，9-[2-(膦醯基甲氧基)乙基]腺嘌呤(PMEA)(273mg，1mmol)和3-羥基正丙基-1-氯代正丁胺(165mg，1mmol)為原料反應生成標題產物(100mg，24.8％)。1H NMR(CD3OD)8.2(d，2H)，6.8(s，2H)，4.6(m，2H)，4.4(m，2H)，4.2(q，2H)，4.0(m，4H)，3.1，2.9(m，4H)，1.9，1.7(m，2H)，1.4(m，4H)。MS(ESI)m/z(％)403(MH+，100)。
實施例73抗病毒實驗 1、細胞毒性試驗 採用四氮唑還原法檢測化合物對HepG 2215生長的抑制作用。取HepG 2215細胞一瓶，用胰酶消化後製備成單細胞懸液，計數後調整細胞濃度至2×104cell/ml，加入96孔培養板中。置於細胞培養箱中，37℃、5％CO2培養過夜。吸去上清液後加入含有不同濃度化合物的DMEM培養基(5％胎牛血清)。作用9天之後，各孔中加入10ml的MTT並繼續培養4小時。仔細吸去上清液，每孔加入150ml DMSO，輕輕振蕩後，用酶標儀檢測570nm處的OD值。
2、細胞化合物處理 取HepG 2215細胞一瓶，用胰酶消化後製備成單細胞懸液，調節細胞濃度至2×104cell/ml，加入24孔細胞培養板中(1ml/well)。37℃、5％CO2培養過夜。取出24孔細胞培養板，吸出上清液後依次加入5個5倍稀釋濃度的化合物，以及陽性對照藥物。繼續培養，每3天更換含有藥物的培養基，並於第9天收集各孔上清液至離心管中-20℃凍存備用。
3、螢光定量PCR反應 血清標本(100μl)置於裂解液(1mmol/L Tris-HCl，pH 8.0，10mmol/L NaCl，0.1mmol/L EDTA，0.5％SDS，0.8mg/ml蛋白酶K)中，在37℃孵化5h，然後用酚氯仿和氯仿分別抽提兩次，再用乙醇沉澱。溶解在50μl水中以備作PCR擴增。
2ml病毒DNA放入48μl的反應混合物中，包括5mmol/L MgCl2、每種dNTP0.2mmol/L、2.5U的Gold Taq多聚酶，0.2U的UNG酶及引物各0.4mmol/L，探針0.15mmol/L。37℃5min後，95℃變性3min30s，94℃20s、60℃40s(螢光信號檢測)循環41次，最後4℃保存。檢測所用Taqman探針序列5』FAM-CCAGCAGCGCCTCCTCCTGC-3』TAMARA；引物序列正向引物5』-CCCTCAGGCTCAGGGCATA-3』；反向引物5』-CTTCCTGACTGCCGATTGGT-3』。
4、試驗細胞系 HepG 2215細胞，引自復旦大學分子病毒實驗室。該細胞株是用2個頭尾相連的HBV DNA全基因的重組質粒轉染受體細胞HepG2而成，可在體外穩定的分泌HBsAg、HBeAg和完整的Dane顆粒，還能產生大量的複製中間體(RI)。細胞培養於含10％胎牛血清的DMEM中。
5、陽性對照藥為阿德福韋雙特戊酸酯(Adefovir Dipivoxil，ADV)。
抗病毒結果如下

a.EC50半數有效濃度；b.CC50半數細胞毒性濃度；c.SI作用選擇性指數(CC50/EC50)。
從上表可以看出，本發明化合物都顯示出比上市藥物ADV(阿德福韋雙特戊酸酯)相似或更好的抗HBV的活性，而毒性普遍明顯降低，因此，本發明化合物的作用選擇性指數(SI)和上市藥物ADV相比有很大提高。特別是化合物5抗HBV活性比陽性對照藥ADV高2.6倍，SI值約是ADV的8倍。因此本發明化合物可成為一類更有效的新型的抗病毒藥物，尤其用於治療HBV和HIV病毒引起的感染性疾病。
權利要求
1、通式(I)所示的非環核苷膦酸酯類化合物或其各種光學異構體、各種晶型、藥學上可接受的無機或有機鹽、水合物或溶劑合物
通式(I)中
R1代表氫、滷素、氨基、羥基、直鏈或支鏈或環狀C1-C6烷基氨基、直鏈或支鏈C1-C6烷氧基、取代芳香基氧基或者取代芳香基硫基；
R2代表氫或氨基；
R3代表氫、環丙基、直鏈或支鏈C1-C6烷基、單氟甲基或二氟甲基；
R5代表氫，芳香基，或者含有1～2個選自N、O和S中的雜原子的五元或六元芳香雜環基；
R4代表氫、直鏈或支鏈C1-C6烷基、直鏈或支鏈C1-C6滷代烷基、苄基或者式(II)，
在式(II)中，
R6和R7彼此獨立地代表氫、苄基、直鏈或支鏈C1-C6烷基或者天然胺基酸或非天然胺基酸的側鏈，所述胺基酸的構型是L-型或D-型；
R8代表氫、直鏈或支鏈C1-C6烷基、三氟乙基或苄基。
2、根據權利要求1所述的非環核苷膦酸酯類化合物或其各種光學異構體、各種晶型、藥學上可接受的無機或有機鹽、水合物或溶劑合物，其特徵在於，在通式(I)化合物中
R1代表氫、滷素、氨基、羥基或者直鏈或支鏈C1-C4烷基氨基；
R2代表氫或氨基；
R3代表氫或者直鏈或支鏈C1-C4烷基；
R5代表氫；
R4代表直鏈或支鏈C1-C4烷基、直鏈或支鏈C1-C4滷代烷基、苄基或者式(II)，
在式(II)中，
R6和R7彼此獨立地代表氫、苄基或直鏈或支鏈C1-C4烷基，
R8代表氫或直鏈或支鏈C1-C4烷基。
3、根據權利要求1或2所述的非環核苷膦酸酯類化合物或其各種光學異構體、各種晶型、藥學上可接受的無機或有機鹽、水合物或溶劑合物，其特徵在於，所述的藥學上可接受的無機或有機鹽是通式(I)化合物與酸形成的鹽，所述的酸為鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、苦味酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、天冬氨酸或者穀氨酸；或通式(I)化合物與鹼形成的鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鋁鹽、銨鹽、甲胺鹽、乙胺鹽或乙醇胺鹽；或通式(I)化合物與鹼性胺基酸形成的鹽，所述的鹼性胺基酸為賴氨酸、精氨酸或鳥氨酸。
4、根據權利要求1-3任意一項所述的非環核苷膦酸酯類化合物或其各種光學異構體、各種晶型、藥學上可接受的無機或有機鹽、水合物或溶劑合物，其特徵在於，包括以下化合物
5、權利要求1所述的非環核苷膦酸酯類化合物或其各種光學異構體、各種晶型、藥學上可接受的無機或有機鹽、水合物或溶劑合物的製備方法，其特徵在於，包括
方法一
(1)N-苄基胺基酸酯與烯丙基溴反應，再經水合、脫苄反應生成化合物(IIIa)；
其中R6、R7、R8定義與權利要求1中相同；
(2)化合物(IIIa)與9-[2-(膦醯基甲氧基)乙基]腺嘌呤或9-[2-(R)-(膦醯基甲氧基)丙基]腺嘌呤的膦醯氯化合物反應生成膦酸酯化合物(I)，化合物(I)根據需要在溶劑中與相應的酸反應生成化合物(I)的鹽，或根據需要按常規方法可以將化合物(I)製成水合物或溶劑合物；
或者，
方法二
(1)3-氨基丙醇與相應的醛反應或3-氯丙醇與相應的胺反應生成化合物(IIIb)；
其中R4定義與權利要求1中相同，但不為式(II)；
(2)化合物(IIIb)與9-[2-(膦醯基甲氧基)乙基]腺嘌呤或9-[2-(R)-(膦醯基甲氧基)丙基]腺嘌呤的膦醯氯化合物反應生成膦酸酯化合物(I)；根據需要，通過與相應的酸反應可以將式(I)化合物製備成相應的藥學上可接受的鹽；按通常方法，式(I)化合物用水或含水溶劑重結晶，可以製備成其水合物、溶劑合物。
6、根據權利要求5所述的非環核苷膦酸酯類化合物或其各種光學異構體、各種晶型、藥學上可接受的無機或有機鹽、水合物或溶劑合物的製備方法，其特徵在於，所述方法一為
其中R3、R6、R7、R8定義與權利要求1相同；
a、化合物(III-1)代表天然或非天然α-胺基酸，上述α-胺基酸的構型是L-型或D-型，在醯氯試劑存在下，以R8OH作為反應溶劑，於-30～100℃反應0.5～72小時，得到胺基酸酯(III-2)；醯氯試劑可以選用草醯氯、五氯化磷、三氯氧磷或氯化亞碸；
b、化合物(III-2)與苯甲醛，在還原劑作用下，於質子性溶劑中，-30～50℃反應0.5～72小時，得到N-苄基胺基酸酯產物(III-3)；還原劑選用硼氫化鋰、硼氫化鈉、硼氫化鉀、氰基硼氫化鈉或三乙醯氧基硼氫化鈉；質子性溶劑選用乙醇、甲醇或異丙醇；
c、化合物(III-3)與烯丙基溴，在有機鹼存在下，在極性非質子性溶劑中，於-30～100℃反應0.5～72小時，生成N-苄基-N-烯丙基化胺基酸酯(III-4)；有機鹼選用三乙胺、N，N′-二環己基-4-嗎啉基脒、1，8-二氮雜雙環[5，4，0]十一烷-7-烯、N，N-二甲氨基吡啶、N，N-二異丙基乙基胺、嗎啉、N-甲基嗎啉、吡啶或2，6-二甲基吡啶；極性非質子性溶劑選用氯仿、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙醚、甲基叔丁醚、二甲基甲醯胺、二甲基亞碸或六甲基磷醯胺；
d、化合物(III-4)在氧化劑存在下，在醚類溶劑中，於-30～100℃反應0.5～72小時，生成化合物(III-5)；氧化劑選用雙氧水、高錳酸鉀、高碘酸鈉、次氯酸鈉、三氧化鉻、重鉻酸鉀、DMSO或9-硼雙環[3，3，1]壬烷；醚類溶劑選用四氫呋喃、乙醚、甲基叔丁醚、1，6-二氧六環或乙二醇二甲醚；
e、化合物(III-5)在含金屬催化劑作用下，在質子性溶劑中，於-30～50℃催化氫化反應0.5～72小時，生成脫苄基產物(IIIa)；適合的含金屬的催化劑為鈀、鉑或鎳催化劑，適合的質子性溶劑選用乙醇、甲醇、異丙醇、醇類與乙酸混合溶劑或醇類與硫酸混合溶劑；
f、PMEA與PMPA分別與醯氯試劑、Et2NCHO，在極性非質子性溶劑中，於-30～100℃反應0.5～72小時，得到膦醯氯化合物(I-1)，再用有機鹼活化備用；醯氯試劑選用草醯氯、五氯化磷、三氯氧磷、三氯氧磷或氯化亞碸；極性非質子性溶劑選用二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙醚、甲基叔丁醚、二氧六環、二甲基甲醯胺或二甲基亞碸；有機鹼選用三乙胺、N，N′-二環己基-4-嗎啉基脒、1，8-二氮雜雙環[5，4，0]十一烷-7-烯、N，N-二甲氨基吡啶、N，N-二異丙基乙基胺、嗎啉、N-甲基嗎啉、吡啶或2，6-二甲基吡啶；
g、化合物(IIIa)和上述已經製備好的化合物(I-1)溶液，在極性非質子性溶劑中，有機鹼作用下，於-80～25℃反應0.5～72小時，生成相應的膦酸酯(I-2)；有機鹼選用三乙胺、N，N′-二環己基-4-嗎啉基脒、1，8-二氮雜雙環[5，4，0]十一烷-7-烯、N，N-二甲氨基吡啶、N，N-二異丙基乙基胺、嗎啉、N-甲基嗎啉、吡啶或2，6-二甲基吡啶；極性非質子性溶劑選用二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙醚、甲基叔丁醚、1，6-二氧六環、二甲基甲醯胺或二甲基亞碸；
h、膦酸酯(I-2)在質子性溶劑中，加入酸，於25～100℃反應0.5～72小時，生成脫去亞胺保護基產物膦酸酯(I-3)；酸選用硫酸、鹽酸、冰乙酸、三氟乙酸、甲磺酸或磷酸；適合的質子性溶劑選用乙醇、甲醇或異丙醇；
i、膦酸酯(I-3)在極性非質子性溶劑中，與相應的酸，於25～100℃反應0.5～72小時，生成鹽(Ia)；極性非質子性溶劑選用二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙腈、乙醚、甲基叔丁醚或二氧六環。
7、根據權利要求5所述的非環核苷膦酸酯類化合物或其各種光學異構體、各種晶型、藥學上可接受的無機或有機鹽、水合物或溶劑合物的製備方法，其特徵在於，所述方法二為
其中，R3、R4定義與權利要求1相同，但R4不為式(II)；
a、3-氨基丙醇與相應的醛反應或3-氯丙醇與相應的胺反應生成化合物(IIIb)；
b、PMEA與PMPA分別與醯氯試劑、Et2NCHO，在極性非質子性溶劑中，於-30～100℃反應0.5～72小時，得到膦醯氯化合物(I-1)，再用有機鹼活化備用；醯氯試劑選用草醯氯、五氯化磷、三氯氧磷、三氯氧磷或氯化亞碸；極性非質子性溶劑選用二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙醚、甲基叔丁醚、二氧六環、二甲基甲醯胺或二甲基亞碸；有機鹼選用三乙胺、N，N′-二環己基-4-嗎啉基脒、1，8-二氮雜雙環[5，4，0]十一烷-7-烯、N，N-二甲氨基吡啶、N，N-二異丙基乙基胺、嗎啉、N-甲基嗎啉、吡啶或2，6-二甲基吡啶；
c、化合物(I-1)和化合物(IIIb)在極性非質子性溶劑中，有機鹼作用下，於-80～25℃反應0.5～72小時，生成相應的膦酸酯(Ib-1)；有機鹼選用三乙胺、N，N′-二環己基-4-嗎啉基脒、1，8-二氮雜雙環[5，4，0]十一烷-7-烯、N，N-二甲氨基吡啶、N，N-二異丙基乙基胺、嗎啉、N-甲基嗎啉、吡啶或2，6-二甲基吡啶；極性非質子性溶劑選用二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙醚、甲基叔丁醚、1，6-二氧六環、二甲基甲醯胺或二甲基亞碸；
d、膦酸酯(Ib-1)在質子性溶劑中，加入酸，於25～100℃反應0.5～72小時，生成脫去亞胺保護基產物膦酸酯(Ib-2)；酸選用硫酸、鹽酸、冰乙酸、三氟乙酸、甲磺酸或磷酸；適合的質子性溶劑選用乙醇、甲醇或異丙醇；
e、膦酸酯(Ib-2)在極性非質子性溶劑中，與相應的酸，於25～100℃反應0.5～72小時，生成鹽(Ib)；極性非質子性溶劑選用二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙腈、乙醚、甲基叔丁醚或二氧六環。
8、一種具有抗病毒活性的藥物組合物，其特徵在於，其包含治療有效量的一種或多種權利要求1-4所述的非環核苷膦酸酯類化合物或其各種光學異構體、各種晶型、藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑合物以及藥學上可以接受的輔料。
9、權利要求1-4所述的非環核苷膦酸酯類化合物或其各種光學異構體、各種晶型、藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑合物在製備治療病毒感染性疾病藥物中的應用。
10、根據權利要求9所述的應用，其特徵在於，所述的疾病是HBV和HIV病毒引起的感染性疾病。
全文摘要
本發明提供一類新的非環核苷膦酸酯類化合物及其組合物、製備方法和用途。具體地，本發明提供一類如下通式(I)所示的非環核苷膦酸酯類化合物或其在藥學上可接受的無機或有機鹽，以及包含通式(I)化合物的組合物。本發明還提供該類化合物的製備方法及通式(I)化合物作為活性物質用於治療病毒感染性疾病，特別是HBV和HIV病毒引起的感染性疾病的用途。
文檔編號A61P31/12GK101585854SQ200810037620
公開日2009年11月25日 申請日期2008年5月19日 優先權日2008年5月19日
發明者楊玉社, 朋 盧, 戰 李, 嵇汝運 申請人:中國科學院上海藥物研究所, 南京長澳醫藥科技有限公司