脂多糖或脂質a結合劑以及新型肽的製作方法

2023-07-29 10:20:01

專利名稱：：脂多糖或脂質a結合劑以及新型肽的製作方法
技術領域：
：本發明涉及脂多糖(LPS)和/或脂質A結合劑和新型肽。
背景技術：
：已知LPS例如存在於革蘭氏陰性菌的外膜，革蘭氏陰性菌感染時，溶出到體內的LPS誘發敗血症。其主要的發病機理是LPS通過LBP(LPS結合蛋白)等血漿中的LPS結合蛋白被募集在細胞膜上的TLR4(Toll樣受體4)上，誘發以NFkB(核因子kB)途徑為中心的炎症反應。它們引起各處的炎症或發熱，除此之外還誘發毛細血管內的血液凝固(彌散性血管內凝血；DIC),由於多器官衰竭等不可逆的反應而導致患者死亡。因此，人們希望有在來自革蘭氏陰性菌的、敗血症或者是敗血症性休克時能夠與LPS結合、中和其毒素的藥物，或者有體外循環用的LPS去除柱。對於中和藥物，人們寄希望於革蘭氏陰性菌的強力抗生素一多粘菌素(PMB),但是它有腎毒性和神經毒性，不可能向血液中施用。另外，兩種抗LPS抗體在美國進行了臨床試驗，但都是以失敗告終。另一方面，體外循環用LPS去除柱，例如7>知的"Toraymyxin，，(東麗製造)，但由於使用了具有毒性的PMB，因此必須對製備步驟進行嚴格管理，有成本高的缺點。另一方面，含有本說明書記載的SEQIDNO,9所示的胺基酸序列的肽，特別是專利文獻1中公開的公知的肽。專利文獻l中記載上述肽與來自貓的IgG的Fc片段具有結合活性。專利文獻1:日本特開2004-189657號公淨艮
發明內容有關PMB的上述腎毒性和神經毒性，例如有DanneRL等人的報導[Purification,toxicity,andantiendotoxinactivityofpolymyxinB腿apeptide.,AntimicrobAgentsChemother.1989Sep;33(9):1428-1434(PMID2554795)]。另外，關於抗LPS抗體的上述美國臨床試驗，例如有AngusDC等人的才艮道[E5murinemonoclonalantiendotoxinantibodyin.gram-negativesepsis:arandomizedcontrolledtrial.E5StudyInvestigators.,JAMA.2000Apr5;283(13):1723-1730(PMID10755499)]或者DerkxB等人的才艮道[Randomized,placebo-controlledtrialofHA-1A,ahumanmonoclonalantibodytoendotoxin,inchildrenwithmeningococcalsepticshock.EuropeanPediatricMeningococcalSepticShockTrialStudyGroup.,ClinInfectDis.1999Apr;28(4):770-777(PMID10825037)]。本發明的課題在於提供可代替上述PMB或抗LPS抗體的、例如作為脂多糖和/或脂質A中和劑、或者脂多糖和/或脂質A去除劑使用的脂多糖和/或脂質A結合劑。上述課題可通過本發明的脂多糖和/或脂質A結合劑解決，該脂多糖和/或脂質A結合劑含有下述肽(l)-(6)或其衍生物作為有效成分(1)含有SEQIDNO.l所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(2)含有SEQIDN0.2所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(3)含有SEQIDNO.3所示的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(4)含有SEQIDN0.4所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(5)含有SEQIDNO.5所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(6)含有SEQIDNO.6所示的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽。本發明還涉及脂多糖和/或脂質A去除劑，該脂多糖和/或脂質A去除劑含有上述肽(l)-(6)或其衍生物作為有效成分。本發明又涉及脂多糖和/或脂質A中和劑(例如敗血症治療藥)，該脂多糖和/或脂質A中和劑含有上述肽(l)-(6)或其衍生物、編碼上述肽(1)-(6)的多核苷酸、或含有上述多核苷酸的表達載體作為有效成分。本發明又涉及脂多糖和/或脂質A的結合方法，該方法包含使上述肽(l)-(6)或其衍生物與脂多糖和/或脂質A接觸的步驟。本發明涉及脂多糖和/或脂質A的去除方法，該方法包含以下步驟使可能含有脂多糖和/或脂質A的處理對象與上述肽(l)-(6)或其衍生物接觸的步驟；以及將與脂多糖和/或脂質A形成複合物的上述肽或其衍生物與上述處理對象分離的步驟。本發明涉及脂多糖和/或脂質A中和方法(例如敗血症治療方法)，該方法包含將上述肽(l)-(6)或其衍生物、編碼上述肽(l)-(6)的多核苷酸、或含有上述多核苷酸的表達載體以有效量給予需要進行脂多糖和/或脂質A中和的對象。本發明又涉及上述肽(l)-(6)或其衍生物在製備脂多糖和/或脂質A中和劑中的應用。本發明還涉及上述肽(l)-(6)或其衍生物在製備脂多糖和/或脂質A去除劑中的應用。本發明又涉及上述肽(l)-(6)或其衍生物、編碼上述(l)-(6)的多核苷酸或含有上述多核苷酸的表達載體在製備脂多糖和/或脂質A中和劑(例如敗血症治療藥)中的應用。本發明又涉及選自下述的肽(含有SEQIDNO,9所示的胺基酸序列的肽除外)或其衍生物(1)含有SEQIDNO.l所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(2)含有SEQIDN0.2所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(3)含有SEQIDN0.3所示的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(4)含有SEQIDNO.4所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(5)含有SEQIDN0.5所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(6)含有SEQIDN0.6所示的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽。本發明涉及編碼上述肽(1)-(6)(含有SEQIDN0.9所示胺基酸序列的肽除外)的多核苷酸。本發明又涉及含有上述多核苷酸的表達載體。本發明涉及藥物組合物，該藥物組合物含有上述肽(1)-(6)(含有SEQIDNO.9所示胺基酸序列的肽除夕卜)或其衍生物、編碼上述肽的多核苷酸、或含有上述多核苷酸的表達載體，以及藥劑學或者是獸醫學可接受的通常的載體或稀釋劑。本發明涉及脂多糖和/或脂質A的分析方法，其特徵在於使用上述肽(l)-(6)或其衍生物。根據上述分析方法的優選的實施方案，本發明包含以下步驟將可能含有脂多糖和/或脂質A的受檢試樣與上述肽(l)-(6)或其衍生物接觸的步驟；對與上述肽或衍生物結合的脂多糖和/或脂質A進行分析的步驟。本發明涉及革蘭氏陰性菌的檢測方法，其特徵在於使用上述肽(1)-(6)或其衍生物。根據上述檢測方法的優選的實施方案，包含以下步驟將可能含有革蘭氏陰性菌的受檢試樣與上述肽(l)-(6)或其衍生物接觸的步驟；對與上述肽或衍生物結合的革蘭氏陰性菌進行分析的步驟。發明效果根據本發明，可以提供新型的脂多糖和/或脂質A結合劑。本發明的脂多糖和/或脂質A結合劑，例如可用作脂多糖和/或脂質A去除劑或脂多糖和/或脂質A中和劑。實施發明的最佳方式本發明的脂多糖和/或脂質A結合劑包含下述(l)-(6)的肽或肽(1)-(6)的衍生物作為有效成分(l)含有SEQIDNO.l所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(2)含有SEQIDN0.2所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(3)含有SEQIDNO.3所示的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(4)含有SEQIDN0.4所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(5)含有SEQIDN0.5所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(6)含有SEQIDN0.6所示的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽。以下，將本發明中可作為有效成分使用的上述肽(l)-(6)及其^f汙生物總稱為"脂多糖和/或脂質A結合肽"。本說明書中的術語"肽"包含寡肽和多肽兩方面。本說明書中，"脂多糖和/或脂質A結合活性"是指可以與脂多糖(LPS)或脂質A的至少一方特異性結合的活性，優選識別脂多糖和脂質A兩者並結合的活性。脂多糖含有多糖部分和磷脂部分(即脂質A),糖鏈部分根據菌種或菌林不同而具有多樣性，而脂質A部分在任何菌種或菌抹中均幾乎具有相同結構。脂質A部分發揮脂多糖毒性的中心作用。肽是否具有脂多糖和/或脂質A結合活性，這可通過公知的方法容易地判定。例如，將脂多糖和/或脂質A(優選脂質A、或脂多糖與脂質A的組合)固定在適當的載體(例如ELISA板或珠載體)上，對是否與上述脂多糖結合進行分析的方法(例如參照後述的實施例1或實施例3),或者根據表面等離子共振(SPR)的方法[例如使用BIACORE系統(例如BIACORE2000;BIACORE製備)的方法],可以容易地判定肽是否具有與脂多糖和/或脂質A結合的活性。本發明中，構成上述脂多糖和/或脂質A結合肽的胺基酸殘基數隻要顯示脂多糖和/或脂質A結合活性即可，沒有特別限定，例如有5-100個，優選5-61個，更優選5-37個，更進一步優選5-25個，特別優選5-13個。上述胺基酸序列可以只含有單獨即可顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的胺基酸序列(基本序列)，也可以含有其重複序列。含有重複序列時，可以只是一種基本序列的重複序列，也可以是兩種或以上基本序列的組合。通過將基本序列重複，可以使結合力增大。另外，結合率弱時，使用高密度且相接近地具有的聚賴氨酸等反應性高的支鏈的支撐體固定該肽，通過多聚化，可以提高結合力。該多聚化可以參考FassinaG等人的製作IgG純化柱的方法[FassinaGetal，ProteinAmimeticpeptideligandforaffinitypurificationofantibodies.J.Mol.Recognit1996,9(5-6),564畫569〗等。上述脂多糖和/或脂質A結合肽(l)、即"含有SEQIDNO.l所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽"中，例如包含SEQIDNO.l所示的胺基酸序列組成的肽；在SEQIDNO.l所示胺基酸序列的N末端和/或C末端附加適當的胺基酸序列所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；或者含有在SEQIDNO.l所示的胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽。本說明書中，為保持肽的功能而置換的胺基酸優選為與置換前的胺基酸具有類似性質的胺基酸。例如，以下所示的分成各組的胺基酸為在組內互相具有類似的性質的胺基酸。將這些胺基酸置換為組內的其它胺基酸，大多不會損害蛋白質的本質性功能。上述胺基酸的置換稱為保守性置換，作為可以保持多肽的功能、同時可變換胺基酸序列的方法而^^口。非才及性胺基酸Ala、Val、Leu、Ile、Pro、Met、Phe和Trp不帶電的胺基酸Gly、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、和Gln酸性胺基酸Asp和Glu石威性胺基酸Lys、Arg、和HisSEQIDNO.l所示的胺基酸序列包括SEQIDNO.l所示的胺基酸序列的第l位和第11位的各胺基酸X可以分別獨立、為鹼性胺基酸K、R或H的序列，即包含KNYSSSISSIKA(SEQIDNO.:7)KNYSSSISSIRA(SEQIDNO.:8)KNYSSSISSIHA(SEQIDNO.:9)RNYSSSISSIKA(SEQIDNO.:10)RNYSSSISSIRA(SEQIDNO.:l1)RNYSSSISSIHA(SEQIDNO.:12)HNYSSSISSIKA(SEQIDNO.:13)HNYSSSISSIRA(SEQIDNO.:14)HNYSSSISSIHA(SEQIDNO.:15)含有SEQIDN0.9所示胺基酸序列的肽例如是在日本特開2004-189657號公報中公開的公知的肽，如後述實施例所示，是顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽。日本特開2004-189657號^^艮中記載，上述肽具有與來自貓的IgG的Fc片段的結合活性，但關於脂多糖和/或脂質A結合活性並未記載。"在SEQIDNO.l所示的胺基酸序列的N末端和/或C末端(優選C末端)附加了適當的胺基酸序列所得的胺基酸序列組成的、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽"中，可以在N末端和/或C末端附加的上述胺基酸序列例如有接頭序列、標識序列、多肽序列或其它的脂多糖和/或脂質A結合肽序列。上述接頭序列例如可使用用於將肽擔載在載體上的序列，例如含有1個具有硫醇基的胺基酸[例如半胱氨酸(L-半胱氨酸或D-半胱氨酸)或高半胱氨酸]或其支鏈具有不與氨基反應的官能團(例如馬來醯亞胺基)的胺基酸的接頭序列、或者具有至少一個末端具有硫醇基的胺基酸或具有不與氨基反應的官能團的胺基酸的接頭序列。上述標識序列例如可4吏用用於肽的表達的確i人、細胞內定位的確認、或者容易地進行純化等的序列，例如有FLAG標籤、6個組氨酸標籤、或紅細胞凝集素標籤、myc表位、或含有GGLLLLLLL(SEQIDN0.125)的肽等。含有SEQIDNO.125的上述肽的C末端羧基可以直接使用或者進行醯胺化。上述多肽序列例如有純化用的多肽[例如穀胱苦肽S-轉移酶(GST)的全部或部分]、檢測用多肽[例如紅細胞凝集素或P-半乳糖苷酶a肽(LacZa)的全部或部分]、或表達用多肽(例如信號序列)等。"在SEQIDNO.l所示的胺基酸序列的N末端和/或C末端(優選C末端)附加適當的胺基酸序列所得的胺基酸序組成的、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽"例如XNYSSSISSIXAC(SEQIDN0.16)組成的肽。SEQIDN0.16所示胺基酸序列中的第1位胺基酸X是石鹹性胺基酸K、R、或H(優選K),第11位胺基酸X是石威性胺基酸K、R或H(優選R或H,更優選R)。"含有在SEQIDNO.l所示的胺基酸序列中有一或多個(優選1-10個、更優選l-8個、進一步優選l-6個、更進一步優選l-4個、又進一步優選1-3個、再進一步優選1或2個、特別優選1個)胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽，，例如有以下詳述的上述脂多糖和/或脂質A結合肽(2)-(6)。上述脂多糖和/或脂質A結合肽(2)、即，"含有SEQIDNO.2所示胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽"中，例如包含以下的肽SEQIDNO.2所示胺基酸序列組成的肽；在SEQIDNO.2所示的胺基酸序列的N末端和/或C末端附加適當的胺基酸序列所得的胺基酸序列組成的、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；或含有在SEQIDNO.2所示的胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽。SEQIDNO.2所示的胺基酸序列包括SEQIDNO.l所示的胺基酸序列中第l位-第6位胺基酸的序列。SEQIDN0.2所示的胺基酸序列包含SEQIDNO.2所示的胺基酸序列中的第1位胺基酸X為^鹹性胺基酸K、R或H的序列，即KNYSSS(SEQIDNO.:17)RNYSSS(SEQIDNO.:18)HNYSSS(SEQIDNO.:19)"在SEQIDN0.2所示胺基酸序列的N末端和/或C末端(優選C末端)附加有適當的胺基酸序列的胺基酸序列組成的、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽"中，可以附加在N末端和/或C末端的上述胺基酸序列例如有在脂多糖和/或脂質A結合肽(l)中所敘述的接頭序列、標識序列、多肽序列或其它的脂多糖和/或脂質A結合肽序列。"在SEQIDN0.2所示胺基酸序列的N末端和/或C末端(優選C末端)附加適當的胺基酸序列所得的胺基酸序列組成的、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽"例如下述序列的肽XNYSSSI(SEQIDNO.:20)XNYSSSIS(SEQIDNO.:21)XNYSSSISS(SEQIDNO.:22)XNYSSSISSI(SEQIDNO.:23)XNYSSSISSIX(SEQIDNO.:24)XNYSSSISSIXA(SEQIDNO.:l)或者在這些胺基酸序列(或者SEQIDN0.2所示的胺基酸序歹'j)的C末端進一步附加C的下述肽XNYSSSC(SEQIDNO.:25)XNYSSSIC(SEQIDNO.:26)XNYSSSISC(SEQIDNO.:27)XNYSSSISSC(SEQIDNO.:28)XNYSSSISSIC(SEQIDNO.:29)XNYSSSISSIXC(SEQIDNO.:30)XNYSSSISSIXAC(SEQIDNO.:16)這些胺基酸序列中的第1位胺基酸X是^5鹹性胺基酸K、R或H(優選K)，第11位胺基酸X是鹼性胺基酸K、R或H(優選R或H，更優選R)。"含有在SEQIDN0.2所示的胺基酸序列中有一或多個(優選1-10個、更優選l-8個、進一步優選l-6個、更進一步優選l-4個、又進一步優選1-3個、再進一步優選1或2個、特別優選1個)胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽"例如可以是含有NYSSS(SEQIDN0.31)、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽，例如下述序列的肽NYSSS(SEQID藍:31)NYSSSI(SEQIDNO.:32)NYSSSIS(SEQIDNO.:33)NYSSSISS(SEQIDNO.:34)NYSSSISSI(SEQIDNO.:35)NYSSSISSIX(SEQIDNO.:36)NYSSSISSIXA(SEQIDNO.:37)或這些胺基酸序列的C末端進一步附加C得到的下述序列的肽NYSSSC(SEQIDNO.:38)NYSSSIC(SEQIDNO.:39)NYSSSISC(SEQIDNO.:40)NYSSSISSC(SEQIDNO.:41)NYSSSISSIC(SEQIDNO.:42)NYSSSISSIXC(SEQIDNO.:43)NYSSSISSIXAC(SEQIDNO.:44)這些胺基酸序列中的第10位胺基酸X為鹼性胺基酸K、R或H(優選R或H，更優選R)。上述脂多糖和/或脂質A結合肽(3)、即"含有SEQIDNO.3所示的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽"例如包含SEQIDNO.3所示的胺基酸序列組成的、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；或在SEQIDNO.3所示胺基酸序列的N末端和/或C末端附加適當的胺基酸序列所得的胺基酸序列組成的、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽。SEQIDN0.3所示的胺基酸序列包含SEQIDN0.3所示胺基酸序列的第l位和第11位的各胺基酸X各自獨立地為鹼性胺基酸K、R或H的序列，即KXXXXXXXXXK(SEQIDNO.:45)KXXXXXXXXXR(SEQIDNO.:46)KXXXXXXXXXH(SEQIDNO.:47)RXXXXXXXXXK(SEQIDNO.:48)RXXXXXXXXXR(SEQIDNO.:49)RXXXXXXXXXH(SEQIDNO.:50)HXXXXXXXXXK(SEQIDNO.:51)HXXXXXXXXXR(SEQIDNO.:52)HXXXXXXXXXH(SEQIDNO.:53)這些胺基酸序列中的各胺基酸X(即第2位-第IO位胺基酸X)各自獨立地為任意的胺基酸。"在SEQIDNO.3所示胺基酸序列的N末端和/或C末端附加適當的胺基酸序列所得的胺基酸序列組成的、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽"例如可以是含有在SEQIDNO.3所示的胺基酸序列的C末端進一步附加A、C或AC所得的下述序列的肽XXXXXXXXXXXA(SEQIDNO.:54)XXXXXXXXXXXC(SEQIDNO.:55)XXXXXXXXXXXAC(SEQIDNO.:56)這些胺基酸序列中的第1位胺基酸X是鹼性胺基酸K、R或H(優選K)，第11位胺基酸X是鹼性胺基酸K、R或H(優選R或H，更優選R),其餘的各胺基酸X(即第2位-第IO位胺基酸X)各自獨立地為任意的胺基酸。第2位-第10位胺基酸的序列優選為NYSSSISSI(SEQIDN0.57)。上述脂多糖和/或脂質A結合肽(4)、即，"含有SEQIDNO.4所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽"中例如包含下述肽SEQIDN0.4所示的胺基酸序列組成的肽；在SEQIDN0.4所示胺基酸序列的N末端和/或C末端附加適當的胺基酸序列所得的胺基酸序列組成的、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；或含有在SEQIDN0.4所示的胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽。SEQIDN0.4所示的胺基酸序列是在SEQIDNO.l所示的胺基酸序列中，第2位的N缺失的序列。SEQIDN0.4所示的胺基酸序列包含SEQIDN0.4所示的胺基酸序列的第l位和第IO位各胺基酸X各自獨立地為鹼性胺基酸K、R或H的序列，即KYSSSISSIKA(SEQIDNO.:58)KYSSSISSIRA(SEQIDNO.:59)KYSSSISSIHA(SEQIDNO.:60)RYSSSISSIKA(SEQIDNO.:61)RYSSSISSIRA(SEQIDNO.:62)RYSSSISSIHA(SEQIDNO.:63)HYSSSISSIKA(SEQIDNO.:64)HYSSSISSIRA(SEQIDNO.:65)HYSSSISSIHA(SEQIDNO.:66)"在SEQIDNO.4所示胺基酸序列的N末端和/或C末端(優選C末端)附加適當的胺基酸序列所得的胺基酸序列組成、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽"例如有XYSSSISSIXAC(SEQIDN0.67)組成的肽。SEQIDN0.67所示的胺基酸序列中的第1位胺基酸X為鹼性胺基酸K、R或H(優選K),第10位胺基酸X為鹼性胺基酸K、R或H(優選R或H，更優選R)。"含有在SEQIDN0.4所示的胺基酸序列中，有一或多個(優選1-10個、更優選l-8個、進一步優選l-6個、更進一步優選l-4個、又進一步優選1-3個、再進一步優選1或2個、特別優選1個)胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽"例如有上述脂多糖和/或脂質A結合肽(l)-(3)、(5)或(6),特別有以下詳述的脂多糖和/或脂質A結合肽(5)或(6)。上述脂多糖和/或脂質A結合肽(5)、即，"含有SEQIDNO.5所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽"中例如包含以下的肽SEQIDNO.5所示胺基酸序列組成的肽；在SEQIDNO.5所示胺基酸序列的N末端和/或C末端附加適當的胺基酸序列所得的胺基酸序列組成的、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；或含有在SEQIDNO.5所示的胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽。SEQIDNO.5所示的胺基酸序列是包括SEQIDNO.4所示的胺基酸序列中第1位至第5位的胺基酸的序列。SEQIDN0.5所示的胺基酸序列包含SEQIDNO.5所示的胺基酸序列的第1位胺基酸X為石威性胺基酸K、R、或H的序列，即，KYSSS(SEQIDNO.:68)RYSSS(SEQIDNO.:69)HYSSS(SEQIDNO.:70)"在SEQIDNO.5所示胺基酸序列的N末端和/或C末端(優選C末端)附加適當的胺基酸序列所得的胺基酸序列組成的、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽，，中，可以附加在N末端和/或C末端的上述胺基酸序列例如有在脂多糖和/或脂質A結合肽(l)中所述的接頭序列、標識序列、多肽序列或其它的脂多糖和/或脂質A結合肽序列。"在SEQIDNO.5所示胺基酸序列的N末端和/或C末端(優選C末端)附加適當的胺基酸序列所得的胺基酸序列組成、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽"例如下述序列組成的肽XYSSSI(SEQIDNO.:71)XYSSSIS(SEQIDNO.:72)XYSSSISS(SEQIDNO.:73)XYSSSISSI(SEQIDNO.:74)XYSSSISSIX(SEQIDNO.:75)XYSSSISSIXA(SEQIDNO.:4)或者在這些胺基酸序列(或SEQIDNO.5所示的胺基酸序列)的C末端進一步附加C所得的下述序列的肽XYSSSC(SEQIDNO.:76)XYSSSIC(SEQIDNO.:77)XYSSSISC(SEQIDNO.:78)XYSSSISSC(SEQIDNO.:79)XYSSSISSIC(SEQIDNO.:80)XYSSSISSIXC(SEQIDNO.:81)XYSSSISSIXAC(SEQIDNO.:82)這些胺基酸序列中的第1位胺基酸X為鹼性胺基酸K、R或H(優選K),第10位胺基酸X為鹼性胺基酸K、R或H(優選R或H,更優選R)。"含有在SEQIDN0.5所示的胺基酸序列中有一或多個(優選1-10個、更優選l-8個、進一步優選l-6個、更進一步優選l-4個、又進一步優選1-3個、再進一步優選1或2個、特別優選1個)胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽"例如有含有YSSS(SEQIDN0.83)、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；例如下述序列組成的肽YSSS(SEQIDNO.:83)YSSSI(SEQIDNO.:84)YSSSIS(SEQIDNO.:85)YSSSISS(SEQIDNO.:86)YSSSISSI(SEQIDNO.:87)YSSSISSIX(SEQIDNO.:88)YSSSISSIXA(SEQIDNO.:89)或者含有在這些胺基酸序列的c末端進一步附加有c所得的下述序列的肽YSSSC(SEQIDNO.:90)YSSSIC(SEQIDNO.:91)YSSSISC(SEQIDNO.:92)YSSSISSC(SEQIDNO.:93)YSSSISSIC(SEQIDNO.:94)YSSSISSIXC(SEQIDNO.:95)YSSSISSIXAC(SEQIDNO.:96)這些胺基酸序列中的第9位胺基酸X為鹼性胺基酸K、R或H(優選R或H，更優選R)。上述脂多糖和/或脂質A結合肽(6)、即，"含有SEQIDNO.6所示的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽"中包含例如以下的肽SEQIDNO.6所示的胺基酸序列組成的、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；或在SEQIDNO.6所示胺基酸序列的N末端和/或C末端附加適當的胺基酸序列所得的胺基酸序列組成的、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽。SEQIDNO.6所示的胺基酸序列包含SEQIDNO.6所示胺基酸序列的第1位和第10位的胺基酸X各自獨立地為鹼性胺基酸K、R或H的序列，即，KXXXXXXXXK(SEQIDNO.:97)KXXXXXXXXR(SEQIDNO.:98)KXXXXXXXXH(SEQIDNO.:99)RXXXXXXXXK(SEQIDNO.:100)RXXXXXXXXR(SEQIDNO.:9)RXXXXXXXXH(SEQIDNO.:102)HXXXXXXXXK(SEQIDNO.:103)HXXXXXXXXR(SEQIDNO.:104)HXXXXXXXXH(SEQIDNO.:105)這些胺基酸序列中的各胺基酸X(即第2位-第9位的胺基酸X)各自獨立地為任意的胺基酸。"在SEQIDNO.6所示胺基酸序列的N末端和/或C末端附加適當的胺基酸序列所得的胺基酸序列組成的、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽"例如是含有在SEQIDNO.6所示的胺基酸序列的C末端進一步附加A、C或AC所得的下述序列的肽XXXXXXXXXXA(SEQIDNO.:106)XXXXXXXXXXC(SEQIDNO.:107)XXXXXXXXXXAC(SEQIDNO.:108)這些胺基酸序列中第1位胺基酸X是鹼性胺基酸K、R或H(優選K),第10位胺基酸X是石鹹性胺基酸K、R或H(優選R或H,更優選R),其餘的各胺基酸X(即第2位-第9位胺基酸X)各自獨立地為任意的胺基酸。第2位-第9位胺基酸的序列優選為YSSSISSI(SEQIDNO.109)。SEQIDN0.6所示的胺基酸序列中，第2位胺基酸優選為Y，第3位胺基酸優選為S或T，第4位胺基酸優選為S或T,第5位胺基酸優選為S、T或I，第6位胺基酸優選為I、F、S、或L,第7位胺基酸優選為S或T,第8位胺基酸優選為S或T、第9位胺基酸優選為I、F或L。這些優選的胺基酸可以以任意的組合使用。本發明中可作為有效成分使用的"肽(l)-(6)的衍生物"只要是上述肽(l)-(6)的衍生物，且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性即可，沒有特別限定。"肽(l)-(6)的衍生物"例如有實施了使肽的穩定性提高的各種修飾的肽衍生物。上述修飾例如有L型胺基酸的D型化(例如N末端胺基酸的D型化、C末端胺基酸的D型化、N末端和C末端以外的胺基酸的D型化)、N末端氨基的乙醯化、C末端羧基的醯胺化、天然型胺基酸(性質類似的)置換為非天然型胺基酸，或它們的組合。將N末端胺基酸(L型)置換為D型胺基酸的衍生物優選置換為D型鹼性胺基酸的衍生物，更優選置換為D型賴氨酸或D型精氨酸的衍生物。本發明的脂多糖和/或脂質A結合劑含有脂多糖和/或脂質A結合肽作為有效成分。脂多糖和/或脂質A結合肽具有與脂多糖的結合活性，因此，本發明的脂多糖和/或脂質A結合劑例如可以作為脂多糖和/或脂質A去除劑(例如體外循環用脂多糖去除柱)或脂多糖和/或脂質A中和劑(例如敗血症治療藥)使用。使用本發明的脂多糖和/或脂質A結合劑，可以進行脂多糖和/或脂質A的分析(例如ELISA法、單分子螢光測定法、表面等離子共振法)。另外，本發明的脂多糖和/或脂質A結合劑與存在於革蘭氏陰性菌外膜的脂多糖結合，因此，可以用作革蘭氏陰性菌(例如大腸桿菌)的染色或標記等，並且可用於革蘭氏陰性菌的分析(特別是檢測)。本發明的脂多糖和/或脂質A結合劑根據它們的用途，可以以任意的形態含有作為有效成分的脂多糖和/或脂質A結合肽。本發明的脂多糖和/或脂質A結合劑作為脂多糖和/或脂質A去除劑使用時，作為需要去除脂多糖的處理對象，例如有血漿、血清、血液、透析液、輸液、注射劑或各種緩衝液。此時，作為本發明的有效成分的脂多糖和/或脂質A結合肽例如可以將肽本身單獨、優選以與適當的載體結合的狀態使用。上述載體例如可使用二氧化矽珠、瓊脂糖珠、纖維素珠、磁珠、或玻璃纖維等。脂多糖和/或脂質A結合肽與載體的結合例如可通過二硫鍵的結合、或者利用載體馬來醯亞胺基的馬來醯亞胺法等實施。本發明的脂多糖和/或脂質A結合劑作為脂多糖和/或脂質A中和劑使用時，例如可以將肽本身單獨、或者根據需要與藥劑學或獸醫學可接受的通常的載體或稀釋劑一起給予動物、優選哺乳動物(特別是人)。此時，也可以使用編碼肽的多核苷酸(優選含有上述多核苷酸的表達載體)代替肽[例如GeneTher.,Developmentofsafeandefficientnovelnonviralgenetransferusingultrasound:enhancementoftransfectionefficiencyofnakedplasmidDNAinskeletalmuscle.,2002Mar;9(6):372-80]。該肽的中和活性例如"7.通過噬菌體展示法研究內毒素的新戰略鈴木政嗣等人內毒素研究7醫學圖書出版2004、65-72"記載，將脂多糖以及脂多糖和/或脂質A結合肽按照各濃度和比例混合，通過鱟試驗(測定脂多糖濃度的常規方法)確認。作為評價，可以通過實際的脂多糖濃度與實測值的偏離，在體外確認該肽的中和活性。使用本發明的脂多糖和/或脂質A結合劑進行脂多糖和/或脂質A的分析時，例如可以使可能含有脂多糖和/或脂質A的受檢試樣與脂多糖和/或脂質A結合肽(優選固定在適當的載體上的肽)接觸，對與上述肽結合的脂多糖和/或脂質A進行分析，由此可以進行受檢試樣中脂多糖和/或脂質A的分析。本說明書中的術語"分析"包含判定分析對象物質是否存在的"檢測"、和對分析對象物質的量或活性進行定量性或半定量性確定的"測定"。上述載體例如有珠(例如二氧化珪珠、瓊脂糖珠、纖維素珠、》茲珠)、板(例如ELISA用板)。與肽結合的脂多糖和/或脂質A的分析例如可通過市售的內毒素測定試劑盒(例如ES-50M;生化學工業製備)、或者是通過使用脂多糖和/或脂質A特異性的抗體的免疫學分析方法、或者通過表面等離子共振法實施。將本發明的脂多糖和/或脂質A結合劑用於革蘭氏陰性菌的染色或標記時，例如，在脂多糖和/或脂質A結合肽的C末端附加半胱氨酸，利用其硫醇基，例如可以使其與標記化合物(例如染料、螢光化合物、發光化合物等)、蛋白質[例如酶(例如過氧化物酶)、抗體Fc部位等]結合。例如，使用螢光素-5-馬來醯亞胺(Fluorescein-5-Maleiide;PRERCE製備)作為螢光化合物，在結合後通過高效液相色譜法等純化，可獲得螢光染色、標記用的肽複合物。或者，酶或抗體的Fc部位等在有用蛋白質中的標記也可以使用硫代-SMCC(Sulfo-SMCC;PRERCE製備)等，可簡便地進行標記。通過將上述標記的脂多糖和/或脂質A結合肽與革蘭氏陰性菌混合，可以進行染色、標記等。將本發明的脂多糖和/或脂質A結合劑用於革蘭氏陰性菌的分析時，例如可以使可能含有革蘭氏陰性菌的受檢試樣與脂多糖和/或脂質A結合肽(優選固定在適當的載體上的肽)接觸，對與上述肽結合的革蘭氏陰性菌進行分析，可以進行受檢試樣中的革蘭氏陰性菌的分析(特別是檢測)。與肽結合的革蘭氏陰性菌的分析例如可通過使用革蘭氏陰性菌特異性抗體的免疫學分析方法、或者通過使螢光染料與肽融合的螢光的檢測，或者通過辣根過氧化物酶(HRP)或鹼性磷酸酶與肽融合的酶底物反應的4企測等來實施。實施例以下通過實施例具體說明本發明，但它們並不限定本發明的範圍。實施例1:通過噬菌體展示法篩選LPS和/或脂質A結合肽本發明中，通過噬菌體展示法進行與來自大腸桿菌的脂質A(脂質A;大腸桿菌K12,D31m4〈主要二磷醯基(Primarilydiphosporyl)〉，Funakoshi製備)和來自大腸桿菌的LPS(大腸桿菌K12D31m4(Re)，Funakoshi製備)兩者具有結合性的肽的篩選。噬菌體展示法中使用的文庫是根據Smith,G.P.，Science,288,1315-1317(1985),J.K.ScottandG.P.Smith,Science,249，386-390(1990)，和美國專利第5,223,409號說明書(Ladner等人)的記載，製備在M13噬菌體表面次要蛋白(minorprotein)pIII的N末端隨機展示的文庫(所展示的隨機胺基酸數為7個或12個的兩種肽文庫)。具體的操作按照日本特開2004-189657號公報的記載實施。與噬菌體文庫的靶(脂質A或LPS)的結合性通過ELISA(酶聯免疫測定)判定。具體來說，靶的固定是向脂質A或LPS中加入磷酸緩衝生理鹽水(pH7.4,以下稱為PBS)，溶解為100pg/mL,然後將各50juL該溶液分別加入到96孔板[對於脂質A是使用96孔PolySorp板(NUNC製備)，對於LPS是使用96孑LMediSorp板(NUNC製備)],在4。C下溫育過夜實施。標記抗體使用過氧化物酶標記抗M13抗體(抗M13抗體HRP單克隆螯合劑(AmershamBiosceiences公司))，酶底物使用2,2，-聯氮基-雙(3-乙基苯並噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽[(八8丁8);和光純藥製備]。關於與脂質A和LPS兩者具有結合性的肽展示噬菌體，確定其肽的胺基酸序列，得到了SEQIDN0.9所示的胺基酸序列KNYSSSISSIHA(SEQIDN0.9)。實施例2:與LPS和脂質A的結合能力的確認本實施例中，使用BIACORE系統(BIACORE2000;BIACORE製備)對實施例1所得的含有SEQIDN0.9所示胺基酸序列的肽(以下稱為Li5)與LPS和脂質A的結合能力進行確認。如無特別說明，下述的緩衝液、蒸餾水、試驗器具等均使用不含內毒素的。為了向SEQIDN0.9所示的胺基酸序列的C末端導入硫醇基，合成含有附加了半胱氨酸的胺基酸序KNYSSSISSIHAC(SEQIDNO.l10)的肽(以下稱為Li5C)。將合成的肽Li5C通過硫醇偶聯固定在傳感晶片(BIACORE傳感晶片CM5,BIACORE製備)的流式細胞(以下稱為Fc)2中。作為對照，在Fcl上固定半胱氨酸。為了進行比較，經由胺偶聯通過氨基將多粘菌素B(以下稱為PMB)固定在Fc4上。作為PMB的對照，在Fc3上固定乙醇胺。以脂質A溶液和LPS溶液[濃度=100|ug/mL、50|ug/mL、25jug/mL、12.5|ig/mL;緩衝用的緩衝液HBS(0.01mol/LHEPES,pH7.4，0.15mol/LNaCl，3mmol/LEDTA)]作為分析物，由低濃度依次流入上述傳感晶片進行測定。結果，濃度的解離常數平均值(KD)在脂質A或LPS的任意情況下均是肽Li5C為1(T7-10-9,可以確認肽Li5C與脂質A以及LPS強烈結合。另一方面，為了比較而測定的與PMB的結合能力(KD)為10—7-10—1G，同時顯示肽Li5C的結合能力與現有的抗生素PMB幾乎同等。解離常數的值是有幅度的，這可認為LPS或脂質A的膠束狀態等對其有影響。實施例3:對固定LPS和/或脂質A結合肽的珠去除LPS的能力進行評價(3-1)肽Li5C與珠載體的固定本實施例中，在具有醯氯的矽膠(丙醯氯官能化的矽膠200-400目，Sigma-Aldrich製備)(以下稱為珠載體)中加入溶劑進行反應，最終利用C末端的半胱氨酸的硫醇基固定肽Li5C。如無特別說明，上述緩衝液、蒸餾水、試驗器具等均使用不含內毒素的。具體來說，首先，稱量0.5g珠載體，轉移至乾熱滅菌試管中。向其中加入1mL2-碘乙醇(和光純藥製備)，使與珠載體結合的醯氯化物與碘乙醇的羥基反應，共價結合。此時，作為副產物產生了氯化氫(HC1),因此，為了防止石典乙醇反應並發生副反應，加入100juL吡啶(和光純藥製備)(含有胺鹼的物質)並混合。將其用封口膜覆蓋，充分混合，穩定攪拌，在室溫下反應4小時。將反應物轉移至Econo柱(BIO-RAD製造)，用蒸餾水充分洗滌，然後用偶聯緩衝液(50mmol/LTris-HCl、5mmol/LEDTA'2Na，pH8.5)平衡。向其中加入溶解於偶聯緩衝液的肽Li5C溶液(5mg/mL,1mL)混合，穩定攪拌，在室溫下》文置3小時。固定肽Li5C後，沖洗未反應的肽，用蒸餾水洗滌珠載體，進一步用偶聯緩衝液平衡。接著將封閉緩衝液(2-巰基乙醇溶解於偶聯緩沖液中所得，濃度為100mmol/L)加入到平衡後的珠載體中，混合，一邊穩定攪拌一邊在室溫下放置3小時，為防止非特異性吸附而進行封閉。封閉後用蒸餾水充分洗滌，去除未反應的巰基乙醇。然後用PBS平衡，將珠載體從柱中轉移到鱟試管(帶旋蓋)(第一化學藥品製備)，在使用之前保存在4°C。固定在珠載體上的肽Li5C的固定量是通過SH基定量試劑(Ellman，s試劑；PIERCE製備)進行定量，固定了4.9mg,固定效率為98%。作為對照用的珠載體，是製備用巰基乙醇完全封閉的載體。(3-2)LPS吸附能力試驗將來自大腸桿菌的LPS(大腸桿菌0111:B4,Funakoshi製備)溶解於PBS(1mg/mL)中，作為LPS溶液，進一步用PBS稀釋，製備LPS溶液(終濃度=500ng/mL)。對於上述實施例3-1中製備的固定肽Li5C的珠載體和對照用珠載體，完全去除其分散溶液(上清)。將2mL上述LPS溶液與各珠載體充分混合，然後回收200iaL測定用樣品，轉移至另外的新的乾熱滅菌試管中。回收的樣品立即通過臺式離心機離心數秒鐘，使珠沉澱，將上清轉移至新的乾熱滅菌試管中。另一方面，樣品回收後的珠溶液與溶液充分混合，一邊穩定攪拌一邊在室溫下溫育。在不同的時間(30分鐘後、60分鐘後)用同樣的方法取樣。回收的樣品中的LPS量使用市售的測定試劑盒(EndospecyES-50MSet,生化學工業社)測定。結果，對照(封閉珠載體)中，剛混合後的LPS濃度和60分鐘後的LPS濃度沒有變化，大致一定。固定肽Li5C的珠載體中，固定肽的珠載體和LPS溶液混合後立即(經過時間=0分鐘)回收的樣品中的LPS濃度(A)為384.7ng/mL,上述混合後經過30分鐘後回收的樣品中的LPS濃度(B)為85.2ng/mL。由B/A比(0.22)計算的LPS去除率為78%,可見強LPS吸附作用。(3-3)不同肽固定量的LPS去除能力的評價本實施例中，製備肽的固定量不同的固定肽Li5C的珠載體，對它們的LPS去除能力進行比較。固定肽Li5C的珠載體的製備是使用濃度不同的三種肽Li5C溶液(5mg/mL、0.5mg/mL、0.05mg/mL)代替肽Li5C溶液(5mg/mL,1mL),除此之外，重複上述實施例3-2的步驟。結果如表1所示。表1中，欄A表示將固定肽的珠載體與LPS溶液剛混合(經過時間=0分鐘)後回收的樣品中的LPS濃度(單位二ng/mL),欄B表示上述混合經過30分鐘後回收的樣品中的LPS濃度(單位-ng/mL)。tableseeoriginaldocumentpage26(3-4)各種條件下的LPS去除能力的評價使用LPS和/或脂質A結合劑去除血液中的LPS時，必須在血液中可能含有的各種成分(例如血清白蛋白、IL-1P、肝素)的存在下、或者在各種條件下(例如鹽濃度、LPS濃度)中顯示LPS去除能力。本實施例中，確認了固定肽Li5C的珠載體在各種條件下均顯示高的LPS去除能力。使用含有牛血清白蛋白(BSA)的LPS溶液(l。/oBSA，500ng/mLLPS)代替LPS溶液(終濃度=500ng/mL),除此之外重複上述實施例3-2的步驟。結果表明，BSA的存在對於固定肽Li5C的珠載體對LPS的去除能力幾乎沒有影響。使用含有人IL-1(3(PeproTech製備)的LPS溶液(200ng/mLIL-1P，500ng/mLLPS)代替LPS溶液(終濃度=500ng/mL)，除此之外重複上述實施例3-2的步驟。結果，IL-1P的存在對於固定肽Li5C的珠載體對LPS的去除能力幾乎沒有影響。另外，在使用固定Li5C的珠載體時，未見IL-1P本身的非特異性吸附，顯示Li5C可以特異性去除LPS。去除血液中的LPS的體外循環柱中使用抗凝劑(例如肝素、萘莫司他曱磺酸鹽等)。使用含有肝素的LPS溶液(l單位/mL肝素，500ng/mLLPS)代替LPS溶液(終濃度=500ng/mL),除此之外重複上述實施例3-2的步驟。結果，不含有肝素的LPS中，LPS去除率為74.4%，與此相對，含有肝素的LPS中的LPS的去除率為45.0%。由此表明，常規使用濃度(l單位/mL)肝素的存在可以使固定肽Li5C的珠載體去除LPS的能力稍微降低，但實際應用上幾乎沒有問題。使用含有鹽(NaCl)的LPS溶液(0.25、0.5或1mol/LNaCl,500ng/mLLPS)代替LPS溶液(終濃度^500ng/mL),除此之外，重複上述實施例3-2的步驟。結果如表2所示。tableseeoriginaldocumentpage27在通過大腸桿菌生產有用蛋白的基因工程中，去除純化蛋白質溶液中所含的高濃度LPS是很重要的。使用噬菌體溶液(LPS濃度=360Hg/mL)代替LPS溶液(終濃度=500ng/mL)，除此之外重複上述實施例3-2的步驟。結果表明，可以將初始濃度為360iug/mL的高濃度LPS有效地去除至30lag/mL。另一方面，對於可從低濃度LPS溶液中去除LPS至發熱極限的1EU/mL的初期LPS濃度進行了研究。由用PBS稀釋的濃度為25、50和100EU/mL的LPS(USP參考標準內毒素，生化學工業製備)代替LPS溶液(終濃度=500ng/mL),重複上述實施例3-2的步驟，結果，初期LPS濃度25EU/mL時，5分鐘後降低為1EU/mL或以下。單位"EU"是內毒素單位的簡稱。實施例4:各種LPS和/或脂質A結合肽與LPS的結合能力的評價本實施例中，關於實施例1所得的SEQIDN0.9所示胺基酸序列KNYSSSISSIHA(SEQIDN0.9)組成的肽，為了研究哪些胺基酸與LPS結合有關，合成各種肽，評價其LPS結合能力。如無特別說明，本實施例中合成的肽是為了在C末端一側導入硫醇基而附加半胱氨酸。如無特別說明，上述緩沖液、蒸餾水、試驗器具等全部使用不含內毒素的。(4-1)各種LPS和/或脂質A結合肽的製備合成了以下的、在SEQIDNO.1所示的胺基酸序列中，由C末端一側依次缺失一個胺基酸而成的肽肽Li56C:KNYSSSC(SEQIDNO.:111)肽Li57C:KNYSSSIC(SEQIDNO.:112)肽Li58C:KNYSSSISC(SEQIDNO.:113)肽Li59C:KNYSSSISSC(SEQIDNO.:114)肽Li510C:KNYSSSISSIC(SEQIDNO.:115)肽Li511C:KNYSSSISSIHC(SEQIDNO.:116)作為在SEQIDNO.l所示的胺基酸序列中使N末端胺基酸缺失的肽，合成了下述肽肽Li5KldelC:NYSSSISSIHAC(SEQlDNO.:l17)。作為在SEQIDNO.l所示的胺基酸序列中將鹼性胺基酸，即第1位賴氨酸(K)和第11位的組氨酸(H)的至少一方置換為其它的鹼性胺基酸(K、R或H)的肽，合成了以下的肽肽Li5H11KC:KNYSSSISSIKAC(SEQIDNO.:118)肽Li5H11RC:KNYSSSISSIRAC(SEQIDNO.:119)肽Li5KIRHI1RC:RNYSSSISSIRAC(SEQIDNO.:120)肽Li5KIRC:RNYSSSISSIHAC(SEQIDNO.:121)肽Li5K1HC:HNYSSSISSIHAC(SEQIDNO.:122)作為在SEQIDNO.l所示的胺基酸序列中將N末端胺基酸(L型)置換為D型的胺基酸的肽，合成了以下的肽肽Li5KldKC:在SEQIDNO.l10所示的胺基酸序列中，將第1位K(L型)置換為D型賴氨酸的肽肽Li5KldRC:在SEQIDNO.l10所示的胺基酸序列中，將第1位K(L型)置換為D型精氨酸的肽肽Li5KldKHllRC:在SEQIDN0.119所示的胺基酸序列中，將第1位K(L型)置換為D型賴氨酸的肽肽Li5KldRHllRC:在SEQIDNO.l19所示的胺基酸序列中，將第1位K(L型)置換為D型精氨酸的肽作為在SEQIDNO.l所示的胺基酸序列中、將N末端胺基酸乙醯化而成的肽，合成了肽Li5KlactylKC:在SEQIDNO.l10所示的胺基酸序列中將第l位K乙醯化的肽。作為在SEQIDNO.l所示的胺基酸序列中、使第2位天冬醯胺(N)缺失、將第11位組氨酸(H)置換為精氨酸(R)而成的肽，合成了肽Li5N2delH10RC:KYSSSISSIRAC(SEQIDNO.123),並且，作為將第1位的K(L型)置換為D型賴氨酸的肽，合成了肽Li5KldKN2delH10RC:在SEQIDN0.123所示的胺基酸序列中、將第1位K(L型)置換為D型賴氨酸的肽，並且，作為將第12位C(L型)置換為D型半胱氨酸的肽，合成肽Li5KldKN2delH10RC12dC:在SEQIDNO.123所示的胺基酸序列中、將第1位K(L型)置換為D型賴氨酸、將第12位C(L型)置換為D型半胱氨酸的肽。進一步合成了下述肽肽Li5KldKN2dNH11RC:在SEQIDNO.119所示的胺基酸序列中，將第1位K(L型)置換為D型賴氨酸，將第2位N(L型)置換為D型天冬醯胺所得的肽；肽Li5-lGKldKHllRC:在SEQIDN0.119中所示的胺基酸序列中，將第1位K(L型)置換為D型賴氨酸，在N末端附加G所得的肽；肽Li5-lacetylKHllRC:在SEQIDN0.119中所示的胺基酸序列中，在N末端附加K，再將其N末端胺基酸乙醯化所得的肽；肽Li5KldKHllRC13dC:在SEQIDN0.119中所示的胺基酸序列中，將第13位C(L型)置換為D型半胱氨酸所得的肽；(4-2)通過BIACORE系統評價LPS結合能力使用BIACORE系統(BIACORE2000;BIACORE製備)，對上述實施例2合成的肽Li5C和上述實施例4-1中合成的各肽評價LPS結合能力評價。上述評價是使用LPS溶液(濃度二50jag/mL、25jug/mL、12.5|ug/mL、6.25ng/mL)代替脂質A溶液和LPS溶液(濃度=100jug/mL、50jng/mL、25jug/mL、12.5jng/mL),除此之外4安照上述實施例2的順序實施。(4-3)通過固定肽的珠(分批法)對LPS吸附能力進行評價通過固定有肽的珠(分批法)，對上述實施例2合成的肽Li5C和上述實施例4-2中合成的各肽評價其LPS吸附能力。上述評價(使第2位N缺失的肽除外)是使肽在珠載體上固定的量為2jamol、5mg,或者是2mg,除此之外，按照上述實施例3所述實施。使第2位N缺失的肽的評價是使用0.2g珠載體(實施例3-1中為0.5g)、0.5mL2-硤乙醇(實施例3-1中為1mL)、50iuL吡啶(實施例3-1中為100"L)、2mg/mL肽溶液、1mL(實施例3-1中為5mg/mL,1mL)、0.8mLLPS溶液(實施例3-2中為2mL)、;50|uL測定用樣品(實施例3-2中為200|iL),在5分鐘後、30分鐘後、60分鐘後(實施例3-2中為30分鐘後、60分鐘後)取樣，除此之外按照上述實施例3所述實施。C末端缺失型肽的結果如表3所示，鹼性胺基酸置換肽的結果如表4所示，第2位N缺失的肽的結果如表5和表6所示。表3-表5中，欄A表示將固定有肽的珠載體與LPS溶液混合後立即(經過時間=0分鐘)回收的樣品中的LPS濃度(單位二ng/mL)，欄B表示上述混合經過30分鐘後回收的樣品中的LPS濃度(單位二ng/mL)。表6中，欄A表示將固定有肽的珠載體與LPS溶液混合後立即(經過時間-O分鐘)回收的樣品中的LPS濃度(單位^ng/mL),欄B表示上述混合經過5分鐘後回收的樣品中的LPS濃度(單位勻g/mL)。tableseeoriginaldocumentpage31tableseeoriginaldocumentpage31tableseeoriginaldocumentpage32[表6]tableseeoriginaldocumentpage32(4-4)結果將上述實施例4-2和實施例4-3的結果與血液穩定性的數據一起表示在表7中。所使用的肽匯總於表8中。血液穩定性按以下方法評價。首先，將肽用蒸餾水溶解，使其濃度為10mg/mL。再將其用蒸餾水10倍稀釋，調節至終濃度為1mg/mL。將10luL肽溶液加入到50UL的血漿(人)中，5分鐘後添加25UL30%TCA，終止反應。充分攪拌後以12,000rpm離心5分鐘，使變性蛋白質沉澱，將上清過HPLC。高效液相色譜(HPLC)按以下條件進行。柱Tosoh-ODS80TM(4.6x100mm)溶劑A:0.1。/。三氟乙酸(TFA)溶劑B:900/o乙腈(0."/oTFA中)流速0.8mL/分鐘梯度10-60%B(55分鐘)監測是210nm(1.0AUSF)和280nm(0.2AUSF)的吸光度在不同的時間進行上述操作(加入25pL30%TCA終止反應，通過離心使變性蛋白質沉澱，通過HPLC對上清進行分析)、測定峰高。另外，通過測序儀對該峰的胺基酸序列進行分析，由此確認分解產物、評價血漿中的穩定性。表7中，(a)欄是結合力(KD)，(b)欄是LPS(50lig/mL)時的結合量(Rmax)[通過BIACORE軟體得到的計算值],(c)欄是通過BIACORE進行的評價[即基於(a)欄和(b)欄的評價]，(d)是分批法評價，(e)欄是血液穩定性的評價，(f)欄是綜合評價[即基於(c)欄-(e)欄的評價]。欄(c)-欄(f)中的評價是四階段評價，符號"A"表示極為優異，符號"B，，表示優異，符號"C"表示可以常規使用，符號"D"是單獨很差，但通過含有重複序列的多聚體或以高密度固定肽的方法等則可以使用。更具體地說，(c)欄的基於BIACORE的評價[基於(a)欄和(b)欄的評價]中，對(a)欄和(b)欄進行綜合評價時，如果比肽Li5C更為優異則評價為"A",如果為同等程度則評價為"B"，如果比肽Li5C稍差則評價為"C",比肽Li5C差則評價為"D"。(d)欄中的分批法評價中，如果比同時測定的肽Li5C的LPS吸附能力優異、或者LPS去除效率顯示70%或以上的吸附能力時則評價為"A，，，與肽Li5C同等、或者LPS去除效率顯示50%-69%的吸附能力時則評價為"B"，比肽Li5C稍差或LPS去除效率顯示為30-49%的吸附能力時評價為"C",差或者LPS去除效率顯示為10-29%的吸附能力時評價為"D"。(e)欄中的血液穩定性的評價中，在血漿中經過l小時或以上仍可以確認殘留時評價為"A，，，在血漿中在30分鐘-l小時以內分解時評價為"B",血漿中在10分鐘-30分鐘以內完全分解時評價為"C",血漿中在1分鐘-10分鐘以內完全分解時評價為"D"。由上述各試驗導出的結果中，優選N末端為鹼性的胺基酸(特別是K)。這可以說，如果去除N末端的K,則LPS結合能力降低。通過N末端的氨基乙醯化，結合力減弱，因此優選N末端的氨基游離。還優選N末端第ll位或第IO位的胺基酸為鹼性胺基酸(特別是R)。這可能是由於如果從C末端去除，則該鹼性胺基酸被去除，LPS結合能力降低。在穩定性方面，優選使N末端胺基酸為D型。為了更穩定，如果作為C末端的胺基酸也為D型則有協同效果。由使第2位N缺失的肽的結果可知，通過將N末端的K置換為D型的K,LPS吸附效率進一步增大。並且，對於將兩側均變為D型的肽，可以確i人LPS的吸附能力，顯示即使將N末端變為D型或者將兩側均變為D型，其吸附能力也不會變差。tableseeoriginaldocumentpage35表8中，小寫字母所表示的各胺基酸(k、r、n和c)是指D型胺基酸，"ak"是指肽的N末端的氨基乙醯化。實施例5:通過開放柱法去除LPS(5-1)肽Li5C在珠載體上的固定和柱的製作本實施例中，在結合了醯氯化物的矽膠(Propionylchloridefunctionalizedsilicagel200-400mesh;Sigma-Aldrich)(以下稱為珠載體)中加入溶劑，使其反應，最終利用C末端的半胱氨酸的硫醇基固定肽Li5C。如無特別說明，下述緩衝液、蒸餾水、試驗器具等均使用不含內毒素的。具體來說，首先稱量1.0g珠載體，轉移至乾熱滅菌試管中。向其中加入2mL2-碘乙醇(和光純藥製備)，使與珠載體結合的醯氯化物和碘乙醇的鞋基反應，共價結合，此時，作為副產物產生氯化氫(HC1)，因此，為防止石典乙醇反應並發生副反應，加入200juL吡"定(和光純藥)(含有胺鹼的物質)並混合。將其用封口膜覆蓋，充分混合，穩定攪拌，在室溫下反應4小時。將反應產物轉移至Econo柱中(產品編號737-0516,內徑=0.5cm，長度-15cm，截面積^0.2cm2,BIO-RAD製備)，用蒸餾水充分洗滌，然後用偶聯緩衝液(50mmol/LTris-HCl、5mmol/LEDTA.2Na，pH8.5)平衡。向其中加入溶解於偶聯緩衝液的肽Li5C溶液(2.5mg/mL，2mL)並混合，穩定攪拌，在室溫下》文置3小時。肽Li5C固定後，沖洗未反應的肽，用蒸餾水洗滌珠載體，再用偶聯緩衝液平衡。將封閉緩衝液(將2-巰基乙醇溶解於偶聯緩衝液中，濃度為10Ommol/L)加入到平衡後的珠載體中混合，穩定攪拌，在室溫下放置3小時，為防止非特異性吸附而進行封閉。封閉後，用蒸餾水充分洗滌，去除未反應的巰基乙醇。然後用PBS平衡，在柱的上部和下部蓋蓋，使用之前在4。C下保存。固定有肽Li5C的珠載體上肽的固定量通過SH基定量試劑(Ellman，s試劑；PIERCE製備)進行定量，固定了4.95mg,固定效率為99%。作為對照用的珠載體，製備用巰基乙醇完全封閉的載體。(5-2)LPS去除試驗將來自大腸桿菌的LPS(大腸桿菌0111:B4;Funakoshi製備)溶解於PBS(1mg/mL)中，再用PBS稀釋，由此製備LPS溶液(終濃度=500ng/mL)。將實施例5-1中製備的柱中的溶液(PBS)與珠載體的表面相同高度。將上述LPS溶液(IOmL)由柱上部流入，流過柱，由柱下部將各0.5mL溶液回收至乾熱滅菌的試管中。回收的樣品中的LPS量通過實施例3-2的方法定量。對照中，添加到柱中後稍過一段時間即達到飽和狀態，而固定了肽Li5C的柱中，LPS去除率為91.1%,表示可以有效去除LPS。實施例6:使用固定肽的珠載體進行LPS的定量本實施例中，使用在上述實施例4-l中合成的固定有肽Li5KldKN2delH10RC12dC的珠載體，與LPS反應，然後測定與珠載體結合的LPS量，確認可以定量。與此同時，只將用巰基乙醇完全封閉的珠載體作為對照進行比較。如無特別說明，上述記載的緩沖液、蒸餾水、試驗器具等完全使用不含內毒素。(6-1)肽Li5KldKN2delH10RC12dC在珠載體上的固定本實施例中，在結合有醯氯化物的珪膠中(Propionylchloridefunctionalizedsilicagel200-400mesh;Sigma-Aldrich)(以下稱為珠載體)加入溶劑，使其反應，最終利用C末端的半胱氨酸的硫醇基固定肽。具體來說，首先稱量珠載體[lOmg(—個樣品的量)]，轉移至乾熱滅菌試管中。向其中加入O.lmL2-碘乙醇(和光純藥製備)，使與珠載體結合的醯氯化物與硤乙醇的羥基反應，進行共價結合。此時，作為副產物產生氯化氫(HC1),因此，為了防止碘乙醇反應，發生副反應加入10pL吡啶(和光純藥製備)(含有胺鹼的物質)並混合。將其用封口膜覆蓋，充分混合，穩定攪拌，同時在室溫下反應4小時。將反應物轉移至Econo柱(BIO-RAD製備)中，用蒸餾水充分洗滌，然後用偶聯緩衝液(50mmol/LTris-HCl,5mmol/LEDTA.2Na，pH8.5)平衡。向其中加入溶解於偶聯緩衝液的肽溶液(20mg/mL,0.25mL)並混合，穩定攪拌，同時在室溫下放置3小時。肽固定後，沖洗未反應的肽，用蒸餾水洗滌珠載體，並且用偶聯緩衝液平衡。接著將封閉緩衝液(將2-巰基乙醇溶解於偶聯緩沖液中，使其濃度為100mmol/L)加入到平衡後的珠載體中並混合，邊穩定攪拌邊在室溫下放置3小時，進行防止非特異性吸附的封閉。封閉後，用蒸餾水充分洗滌，去除未反應的巰基乙醇。然後用PBS平衡，將珠載體由柱中轉移至乾熱滅菌試管(生化學工業)，在使用之前保存在4。C下。固定有肽的珠載體上的肽的固定量通過SH基定量試劑(Ellman，s試劑；PIERCE)進行定量，固定效率為90%或以上。作為對照用的珠載體，製備用巰基乙醇完全封閉的載體。(6-2)LPS吸附能力試驗首先，將來自大腸桿菌(大腸桿菌0113:H10抹)的美國藥典內毒素標準品(RSE:參考標準內毒素，生化學工業製備)用不含內毒素的蒸餾水(LRW:LAL反應水，生化學工業製備)溶解(2,000EU/mL),再用PBS稀釋，製備濃度不同的LPS溶液(終濃度=10EU/mL、5EU/mL、2.5EU/mL、0EU/mL)。接著，對於上述實施例6-1中製備的固定有肽的珠載體和作為對照用的珠載體，完全去除混入到該乾熱滅菌試管中的溶液(上清)。將1mL各濃度的LPS溶液分別加入到珠載體中混合，用封口膜覆蓋試管口，穩定攪拌，同時在室溫下反應30分鐘(此時回收10juL上清，製成剛添加的溶液)。然後立即用臺式離心^^離心翁:秒，使珠沉澱，然後將上清轉移至新的千熱滅菌試管中(製成反應後的上清)。另一方面，在沉澱的珠中加入0.5mLPBS溶液，混合後使珠沉澱，然後去除上清，將該操作反覆進行，去除未結合的LPS，洗滌珠。將該操作重複6次(共3mL)進行。為了對該洗滌後的溶液也進行最終的LPS濃度定量，用乾熱滅菌試管保管(製成洗滌後的溶液)。另外，向珠載體中加入1mLPBS溶液並混合。然後，對剛添加或反應後的上清、洗滌後的溶液中與珠結合的LPS量分別定量。LPS量使用市售的測定試劑盒(EndospecyES-50MSet,生化學工業製備)測定。結果如表9所示。投入LPS量珠結合量剛添加後反應後上清中洗淨液對照EU/mLLPS量(EU)LPS量咖LPS量卿LPS量(EU)0~0.050.000.00-0.012.5"0.042.613.100.0850.015.165.320.10100.0810.2012.180.07Li5麵N2delH10RC12dCEU/mLLPS量咖LPS量(EU)LPS量(EU)LPS量咖00.850.190,11■0.042.54.162.53■0.280.0656.204.74-0.670.21109.859.55-0.480.15結果，對照中，與珠結合的LPS量幾乎為0EU，在固定有肽的珠載體中對濃度相關性的與珠結合的LPS的量進行了定量。在剛添加LPS之後的上清中到所加入的LPS量均同等量，洗滌後的溶液中幾乎不含有LPS(OEU),反應後的上清中幾乎未殘留LPS，由此顯示可以確實地對與珠結合的LPS的量定量。實施例7:對開放柱法對LPS的去除效率的確認本實施例中，對填充固定了肽Li5KldKN2delH10RC12dC的載體的柱和填充未進行任何固定的載體的柱的LPS去除效率進行比較。如無特別說明，下述緩衝液、蒸餾水、試驗器具等全部採用不含內毒素的。(7-1)肽與珠載體的固定本實施例中，使用將含有硫醇基的物質通過二硫鍵(S-S)固定的載體(ThiopropylSepharose6BLabPack;AmershamBiosceiences製備)(以下稱為載體)固定肽。具體來說，首先將0.5g(容量1.5mL)載體稱量在離心管中，加入蒸餾水，使其溶脹，然後轉移至Econo柱(BIO-RAD製備)(以下稱為柱)。在柱中通入100mL蒸鎦水，洗滌載體。向其中添加肽溶液[在1.35mL蒸餾水、0.15mL0.1mol/L曱酸(pH4.5)中溶解5mg肽所得],在室溫下放置過夜，固定肽。接著，將封閉緩衝液(以蒸鎦水:O.lmol/L曱酸(pH4.5"9:l的比例的溶液溶解2-巰基乙醇，濃度為100mmol/L)添加到柱中，在室溫下放置過夜，為了防止非特異性吸附而進行封閉。封閉後，向柱中通入蒸餾水，去除未反應的巰基乙醇。然後用PBS平衡，在使用之前保存在4。C下。作為對照用的載體，製備用巰基乙醇完全封閉的載體。(7-2)LPS去除效率確認試驗首先，捨去柱中所含的PBS溶液，使其與載體的表面處於相同位置。向該柱中通入8mLLPS溶液(溶解於人血漿中，LPS大腸桿菌0111:B4為10ng/mL)。由柱的下部分別回收1mL或0.5mLLPS溶液。樣品在乾熱滅菌試管中保存。然後，進行各樣品中所含LPS量的定量，確認通過肽去除LPS的效率。LPS量是使用市售的測定試劑盒(EndospecyES-50Mset,生化學工業製備)測定。結果，在對照(只有載體)中，PBS溶液流過之後立即達到飽和狀態，而固定肽的柱保持50%左右的LPS去除效率，然後顯示逐漸飽和的傾向。流過8mLLPS溶液時的去除效率尚未達到完全飽和狀態。由此顯示固定肽的載體去除了血漿中的LPS。實施例8:肽穩定性評價本實施例中，通過測定蛋白質與蛋白質等分子之間的結合強度或結合量的儀器[BIACORE系統(BIACORE2000;BIACORE製造)]測定肽Li5KldKN2delH10RC12dC的穩定性。也同時測定多粘菌素B(PMB)，進行比較。如無特別說明，下述緩衝液、蒸餾水、試驗器具等均使用不含內毒素的。具體來說，將上述肽通過硫醇偶聯固定在傳感晶片(BIACORE傳感晶片CM5;BIACORE製備)的流式細胞(以下稱為Fc)2上。作為對照，在Fcl上固定半胱氨酸。為了進行比較，通過經由氨基通過胺偶聯將PMB固定在Fc4上。分別等摩爾固定。以濃度為50|ug/mL的LPS溶液[緩沖液HBS-EP(0.01mol/LHEPES、pH7.4、0.15mol/LNaCl、3mmol/LEDTA)]作為分析物，通入該傳感晶片，測定結合量(RU:共振單位)，通入強鹼溶液(15mmol/LNaOH),洗滌傳感晶片。將其作為一個周期，重複進行，調查結合量的變化，確認穩定性。結果，PMB隨著多次重複，LPS結合量降低，而肽Li5KldKN2delH10RC12dC與LPS的結合量保持一定。由此顯示在強鹼洗滌下肽也穩定。實施例9:革蘭氏陰性菌的螢光染色本實施例中，使用在上述實施例4-l中合成的肽Li5KldKN2delH10RC實施革蘭氏陰性菌(大腸桿菌和綠膿桿菌)和革蘭氏陽性菌(乳桿菌)的螢光染色。製備1mL肽Li5KldKN2delH10RC，通過常規方法加入5mg螢光素-5-馬來醯亞胺(PIERCE製備)，在室溫下反應2小時，然後添加50mgL-半胱氨酸，進行封閉，製備螢光素標記的肽。各菌充分增殖(完全生長)時離心，回收沉澱，再懸浮於離心前的培養基量的10倍量的水中。將5iaL所得各菌的懸浮液滴加到矽烷處理的載玻片上，使其乾燥。為了固定，滴加10yL100。/o乙醇，使其乾燥。滴力o100iaL螢光素標記肽溶液(25jug/mL)，直接放置3小時，實施染色。作為對照，使用螢光素標記的半胱氨酸溶液或水代替螢光素標記的肽溶液作為對照。螢光顯微鏡(BX50WI，奧林巴斯)觀察的結果中，作為革蘭氏陰性菌的大腸桿菌或綠膿桿菌用螢光素標記的肽染色，而作為革蘭氏陽性菌的乳桿菌未被染色。另外，作為對照使用的螢光素標記的半胱氨酸中，革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌均未被染色。實施例10:Li5-025與各種LPS的結合力(親和性)的評伯、(通過BIACORE系統)本實施例中，對於實施例4-1中合成的肽Li5KldKN2delH10RC(以下同時使用肽Li5-025的名稱)，使用BIACORE系統(BIACORE2000;BIACORE製備)，評價與種類不同的各種LPS的結合力。具體來說，通過硫醇基偶聯，將合成的肽(Li5-025)固定在傳感晶片(BIACORE傳感晶片CM5;BIACORE製備)的流式細胞(以下稱為Fc)2上。作為對照，在Fcl上固定半胱氨酸。以各種[百日咳桿菌C8ora^e〃a/eWw^^(Bp)、霍亂弧菌稻葉血清型569B(P76n'oc/io/eraeInaba569B(Vc)、肺炎克氏桿菌(X7^S7W/a/M謂ow^(Kp)、綠膿桿菌血清型屍"wdo附owasam/g7'wc^aSerotype10(Pa)、和大腸桿菌0111:B4(Ec)]不同的LPS[濃度二50jag/mL、25|ag/mL、12.5iug/mL、6.25|ag/mL,緩衝液HBS-EP(無吐溫-20)(0.01mol/LHEPES,pH7.4，0.15mol/LNaCl,3mol/LEDTA)]作為分析物，分別由低濃度依次流入上述傳感晶片進行測定。結果，與LPS的結合力[解離常數平均值(Kd)]在Bp、Kp、Ec中為l(T8，在Vc中為10-8畫l(T9，在Pa中為10-u-10-12，LPS在任何情況下都可見&(1=10-8級的與LPS的強烈結合。實施例11:對Li5-025吸附各種LPS的能力的評價(通過分批法)與實施例10中所使用的同樣，使用肽(Li5-025)和各種LPS,通過分批法測定肽Li5-025與各種LPS的吸附能力，同時與多粘菌素B(PMB)比較。如無特別說明，下述的緩衝液、蒸餾水、試驗器具等使用完全不含內毒素的。(1)肽的固定方法在結合了醯氯4b物的石圭月交(Propionylchloridefunctionalizedsilicagel200-400mesh;Sigma-Aldrich)(以下稱為珠載體)中加入溶劑，使其反應，最終利用C末端的半胱氨酸的硫醇基，以共價鍵固定肽Li5C-025。具體來說，首先稱量0.2g珠載體，轉移至乾熱滅菌試管中。向其中加入0.4mL2-碘乙醇(和光純藥製備)，使與珠載體結合的醯氯化物和碘乙醇的羥基反應，共價結合，此時，作為副產物產生氯化氫(HC1),因此，為防止硤乙醇反應並發生副反應，加入40juL吡啶(和光純藥)(含有胺鹼的物質)並混合。將其用封口膜覆蓋，充分混合，穩定攪拌，在室溫下反應4小時。將反應產物轉移至Econo柱中(BIO-RAD製備)，用蒸餾水充分洗滌，然後用偶聯緩衝液(50mmol/LTris-HCl、5mmol/LEDTA'2Na,pH8.5)平衡。向其中加入1mL溶解於偶聯緩衝液的肽溶液，Li5-025為2.5mg/mL,混合，穩定攪拌，在室溫下放置6小時。肽固定後，使用溶液，用SH基定量試劑(Ellman，s試劑；PIERCE製備)對肽固定量進行定量。Li5-025固定後，為了衝洗未反應的肽，用蒸餾水洗滌珠載體，再用偶聯緩衝液平衡。另一方面，用偶聯緩衝液溶解2-巰基乙醇(關東化學製備)，濃度為100mmol/L,製備封閉緩衝液。將其加入到經平衡後的珠載體中並混合，邊穩定攪拌邊在室溫下放置3小時或以上，進行用於防止非特異性吸附的封閉。封閉後，用蒸餾水充分洗滌，去除未反應的巰基乙醇。然後用PBS平衡，將珠載體從柱中轉移到鱟試管(帶旋蓋)(第一化學藥品製備)中，使用之前在4"下保存。(2)多粘菌素B(PMB)的固定方法結合醯氯化物的娃月交(Propionylchloridefunctionalizedsilicagel200-400mesh;Sigma-Aldrich)(以下稱為珠載體)中加入溶劑，使其反應，最終利用氨基、通過共價鍵固定PMB。具體來說，首先稱量0.2g珠載體，轉移至乾熱滅菌的試管中。向其中加入蒸餾水(H20)並混合，用封口膜覆蓋，在室溫下穩定攪拌，放置至氣泡消失，與珠載體結合的醯氯化物與水反應，通過共價鍵將氯部分置換為羥基(-OH)。確認試管中沒有氣泡之後，轉移至Econo柱(BIA-RAD)中，用蒸餾水洗滌。然後用0.1mol/LNaHC03緩衝液(pH8.0)平衡。向其中加入EDC[l-乙基-3-(3-二曱基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸]和NHS(N-羥基琥珀醯亞胺)並混合，在室溫下反應l小時。反應後排出柱內的溶液，通入O.lmol/LNaHC03緩衝液。向其中加入1mL溶解於O.lmol/LNaHC03緩衝液的PMB溶液，使PMB的濃度為2mg/mL，穩定攪拌，在室溫下放置6小時。PMB固定後使用溶液，用氨基定量試劑盒(CBQCA蛋白質定量試劑盒；MolecularProbes製備)對PMB固定量進行定量。固定了PMB之後，衝洗未反應的PMB，為此用蒸餾水洗滌珠載體。然後再用0.1mol/LNaHC03緩衝液平衡。另一方面，將乙醇胺(和光純藥製備)用蒸餾水溶解，濃度為1.0mol/L，用鹽酸調節至pH8.5，製備封閉緩衝液。將3mL封閉緩衝液加入到珠載體中並混合，穩定攪拌，同時在室溫下放置3小時或以上，為防止非特異性吸附而進行封閉。封閉後，用蒸餾水充分洗滌，去除未反應的乙醇胺。然後用PBS平衡，將珠載體從柱中轉移到鱟試管(帶旋蓋)(第一化學藥品製備)中，在使用之前在4"C下保存。(3)對照(只含有未進行任何固定的珠載體)的製備方法對照是只進行上述項目(l)中Li5-025固定法中的封閉處理，以用巰基乙醇完全封閉的載體作為對照。(4)LPS(內毒素)吸附能力試驗和樣品的回收方法製備LPS溶液，與固定肽(或PMB)的珠載體混合，在不同的時間回收樣品，準備測定用的樣品。具體來說，首先完全去除各固定或者封閉的珠載體的分散溶液(上清)。一方面，將各LPS用PBS溶解，調節至500ng/mL，製備LPS溶液。將0.8mL該LPS溶液與珠載體充分混合，然後回收200|liL,轉移至另外的新的乾熱滅菌試管中。將回收的樣品立即用臺式離心機離心數秒中，使珠沉澱，將上清液轉移至新的乾熱滅菌試管中。另一方面，樣品回收後的珠溶液與溶液充分混合，穩定攪拌，在室溫下溫育。按照同樣的方法，在不同時間取樣。(5)內毒素量的定量回收的樣品中的內毒素的量通過市售的測定試劑盒(EndospecyES-50Mset;生化學工業製備)測定，確認LPS吸附能力。具體來說，將之前回收的樣品用蒸餾水稀釋(該稀釋是稀釋為Endospecy的定量範圍內的範圍)。將其以各50iuL/孔分別加入到Toxipetplate聚苯乙烯制96孔板(無Et)(生化學工業製備)中。接著，準備EndospecyES^0Mset。向試劑盒中的溶胞產物試劑(一支)中加入試劑盒所附的一支緩衝液(總量)，用手振蕩溶解5分鐘，使其不發泡。將其以50iaL/孔添加到添加了樣品的孔中，充分混合。然後，在37。C下穩定攪拌，同時溫育30分鐘。然後，用吸光光度計(ARVO;wallac製備)測定405nm的吸光度。此時，製作校正曲線，由近似直線的方程式計算LPS濃度。結果如表10所示。該表10中，各符號Bp、Vc、Kp、Ec分別指百日咳桿菌、霍亂弧菌稻葉血清型569B、肺炎克氏桿菌、和大腸桿菌OUl:B4。對照中，剛混合後的LPS的量、以及60分鐘後的LPS的濃度沒有變化、大致一定，但在固定Li5-025的珠載體中，在各LPS中，LPS濃度顯著降低，可見LPS吸附作用。與PMB相比，顯示LPS去除效率高。使用固定Li5-025的珠載體進行的Bp(百日咳桿菌)吸附試驗中，吸附95%或以上的500ng/mLLPS。對Vc(霍亂弧菌稻葉血清型569B)吸附90%或以上，對Kp(肺炎克氏桿菌)吸附50%或以上(最大80%左右)，對Pa(綠膿桿菌血清型IO)吸附95%或以上，對Ec(大腸桿菌0111:B4)吸附95%或以上，對於各種種類的LPS均顯示高的吸附能力。同時測定的PMB中，在Bp吸附試-驗中可見吸附95%或以上500ng/mL的LPS,對Vc為60。/。或以上，對Kp或Pa則幾乎未見吸附能力，顯示根據LPS的種類不同，吸附能力有很大差異。LPS去除率(96)LPS的來源-5分鐘後30分鐘後60分鐘後已p98.496.497.1Vc68.189.092.1Kp3.342.050.1Ec6.283.895.1實施例12:對固定Li5-025的珠吸附低濃度LPS的能力的評價使用按照與實施例11同樣的方法製備的固定肽Li5-025(或PMB)的珠載體，向其中加入lmL1EU/mL這樣低濃度的LPS溶液並混合，進行分批法，確認低濃度的LPS吸附能力。LPS是使用來自大腸桿菌O113:H10的LPS。分批的測定方法按照實施例10。結果如表11所示。對照的LPS濃度並未降低至最低，但固定Li5-025或PMB的珠最終吸附了70%或以上1EU/mL的LPS,顯示為0.3EU/mL或以下。在通過開^:柱法測定，則有望可以去除至更低濃度。LPS去除率(％)固定化對象-5分鐘後3O分鐘後60分鐘後l_i5—02555.660.072.7PMB33.360.072.7實施例13:對固定Li5-025的珠在1%BSA溶液中吸附LPS的能力的評價使用按照與實施例11同樣的方法製備的固定肽Li5-025(或PMB)的珠載體，向其中加入1mLlQ/oBSA溶液(LPS濃度=500ng/mL)並混合，通過進行分批法，對在P/。BSA溶液中的LPS吸附能力進行研究。LPS使用來自大腸桿菌0111:B4的LPS。分批法的基本流程按照實施例10。結果如表12所示。在P/。BSA共存下，顯示吸附60%或以上500ng/mL的LPS。從以前已實施的固定肽的濃度相關性試驗(例如實施例3-3)的結果可以認為，隨著肽的固定量增加，可以提高LPS吸附能力。LPS去除率(％)固定化對象5分鐘後30分鐘後60分鐘後Li5—025PMB36.859.162.422.17.5實施例14:對使用聚賴氨酸類似肽和Li5-025吸附LPS的能力的比較(通過分批法)作為LPS結合體，為了將現有的聚賴氨酸和Li5-025(或PMB)進行比較，由Sigma公司合成肽K7C:KKKKKKKC(SEQIDN0.124)作為聚賴氨酸類似肽。向按照與實施例11同樣的方法製備的固定肽(或PMB)的珠載體中加入2mL10ng/mL濃度的LPS溶液，混合，通過分批法確認LPS吸附能力並進行比較。LPS使用來自大腸桿菌0111:B4的LPS。基本操作按照實施例11進行。結果如表13所示。Li5-025為約90%左右、PMB為65%左右、K7C為約60%左右的LPS吸附能力，顯示聚賴氨酸的LPS吸附能力低。固定化對象PS去除率(96)5分鐘後30分鐘後60分鐘後Li5—O25K7CPMB81.218.828.286.021.957.988.320.467.0實施例15:對使用Li5-025及其衍生物吸附LPS的能力的評價(l)(通過分批法)本實施例中，使用表14所示的Li5-025及其衍生物，通過分批法比4交LPS吸附能力。具體來說，基本操作與實施例11同樣進行。添加LPS的溶液使用0.8mL濃度500ng/mL的LPS。LPS使用來自大腸桿菌0111:B4的LPS。tableseeoriginaldocumentpage47將所得結果的一部分表示在表15中。Li5-025的LPS吸附能力是吸附95%或以上的500ng/mL濃度的LPS,Li5-032是約85%左右，Li5-029和Li5-030是約75%左右的吸附能力，顯示Li5-025具有最高的LPS吸附能力。tableseeoriginaldocumentpage47實施例16:對使用Li5-025及其衍生物吸附LPS的能力的評價(2)(通過分批法)本實施例中，使用表16所示的Li5-025及其衍生物，通過分批法對LPS吸附能力進行比較。具體來說，基本操作與實施例11同樣進行。添加LPS溶液使用2.0mL濃度為10ng/mL的LPS。LPS使用來自大腸桿菌0111:B4的LPS。tableseeoriginaldocumentpage48[胺基酸序列中，小寫字母所表示的胺基酸(k、c)是D型的胺基酸]結果如表17所示。結果，LiF-I6FI9F為約75%左右的LPS吸附能力，其它的Li5-025、Li5-I6F、Li5-I9F幾乎接近於100%吸附10ng/mL濃度的LPS,可見非常強烈的LPS吸附作用。tableseeoriginaldocumentpage48實施例17:對固定Li5-025的柱去除LPS的效率的評價(開放柱法)製備固定Li5-025的柱，通過開放柱法確認LPS去除效率。同時，製備固定PMB的柱或未進行任何固定的柱，比較LPS去除效率。具體來說，按照與實施例11同樣的方法，製備固定肽(或PMB)的柱，由柱上部通入7mL10ng/mL濃度的LPS溶液，由柱下部各回收0.4mL洗脫的LPS，對該4企樣中所含的LPS量進4亍定量，由此評價LPS去除效率。柱的條件如下。柱Econo柱(BIO-RAD製造)產品編號737-0516，內徑0.5cm長度15cm,底面積0.2cm2柱內的珠Si-醯氯珠(Si-AcidChloridebeads)(0.8g)(柱容量=1.2mL)配體肽Li5-025或PMB(8mg)內毒素LPS(大腸桿菌0111:B4)內毒素溶液10ng/mL(7mL)保持容量0.4mL流速0.5mL/分鐘結果，對照立即達到飽和的狀態，而固定Li5-025的柱是顯示可以將10ng/mL濃度的LPS去除至0.1ng/mL或以下。該去除效率是在通入LPS溶液期間持續保持0.1ng/mL或以下。固定PMB的柱的LPS去除效率約為50%左右。實施例18:對固定Li5-025的柱去除低濃度LPS的效率的評價(2)(開放柱法)製備固定Li5-025的柱，通過開放柱法確認對低濃度LPS的去除效率。同時，製備固定PMB的柱或未進行任何固定的柱，比較LPS去除效率。具體來說，按照與實施例11同樣的方法製備固定肽(或PMB)的柱，由該柱的上部通入7mL2EU/mL濃度的LPS溶液，由柱的下部分別回收0.4mL洗脫的LPS,對該檢樣中所含的LPS量進行定量，由此評價對低濃度LPS的去除效率。柱條件如下。《柱條件》柱Econo柱(BIO-RAD製造)產品編號737-0516，內徑0.5cm長度15cm,底面積0.2cm2柱內的珠Si-醯氯珠(0.8g)(柱容量=1.2mL)配體肽Li5-025或PMB(8mg)內毒素USPRSE(LPS大腸桿菌0113:H10;生化學工業製備)內毒素溶液2EU/mL(7mL)保持容量0.4mL流速0.5mL/分鐘結果，對照立即達到飽和的狀態，而固定Li5-025的柱顯示可以將2EU/mL這樣低濃度的LPS去除至0.05EU/mL或以下，顯示可進一步去除低濃度的LPS。固定PMB的柱的LPS去除效率約為60%左右。實施例19:對固定Li5-025的柱在1%BSA溶液中去除LPS的效率的評價(3)(開放柱法)製備固定Li5-025的柱，通過開放柱法對在P/。BSA溶液中的LPS去除效率進行確認。同時，製備固定PMB的柱或未進行任何固定的柱，比4交LPS去除效率。具體來說，按照與實施例11同樣的方法製備固定肽(或PMB)的柱，由該柱的上部通入7mL1%BSA溶液(LPS濃度10ng/mL),由柱的下部分別回收0.4mL洗脫的LPS,通過對該檯r樣中所含的LPS的量進行定量，評價1。/。BSA溶液中的LPS去除效率。柱條件如下所述。柱Econo柱(BIO-RAD製造)產品編號737-0516，內徑0.5cm長度15cm,底面積0.2cm2柱內的珠Si-醯氯珠(0.8g)(柱容量4.2mL)配體肽Li5-025或PMB(8mg)內毒素LPS(大腸桿菌0111:B4)內毒素溶液10ng/mL(7mL)保持容量0.4mL流速0.5mL/分鐘結果，對照立即達到飽和狀態，而固定Li5-025的柱顯示以40%左右去除混合在P/。BSA溶液中的10ng/mL的LPS。另外，固定PMB的柱的LPS去除效率與對照在相同範圍內，幾乎未見LPS去除能力。使用二氧化矽珠的固定PMB的柱中，在其它蛋白質共存的條件下，並未發揮LPS去除效率。實施例20:對固定Li5-025的柱在1%BSA溶液中去除LPS的效率的評價(4)(肽固定化濃度相關性評價)(開放柱法)使用使肽的固定量增加的柱，進行與實施例19同樣的試驗，測定P/。BSA溶液中的LPS去除能力，由此對肽固定化濃度相關性進4亍評fT。將肽的固定量由8mg改為24mg，除此之外4安照與實施例18同樣的條件進行。結果，對照立即達到飽和狀態，而固定Li5-025的柱去除約90%或以上混合在1。/oBSA溶液中的10ng/mL的LPS，通過使肽的固定量增加，顯示LPS去除效率增加。另外，固定PMB的柱與實施例18同樣，幾乎未見LPS去除能力。實施例21:對於使用微調(fine-tuned)的肽中和LPS的能力的評價用微調的表18所示的三種肽合成Li5-001，對LPS的中和能力進行評價。將上述肽與LPS混合，測定之後的LPS量，由此對LPS中和能力進行評價。以PMB作為正對照進行比較。如無特別說明，下述的緩衝液、蒸餾水、試驗器具等均使用不含內毒素的。[表18]_^__胺基酸序列Li5—025U5K1dKN2deIH10RCWineOpener具體來說，首先將各肽(或PMB)用蒸餾水溶解，製備成1mg/mL的濃度。將它們用蒸餾水10倍稀釋，製備稀釋至1ng/mL的10個稀釋系列。向其中加入LPS(USP參考標準內毒素，來自大腸桿菌0113:H10林，生化學工業製備)並混合，使終濃度為1EU/mL，穩定攪拌，同時在室溫下溫育30分鐘。然後通過市售的測定試劑盒(EndospecyES-50Mset,生化學工業製備)測定檢樣中的LPS量。結果，任何肽均可確認濃度相關性的中和能力。顯示在100ng/mL下以70%或以上中和1EU/mL的LPS。其中，肽WineOpener在100ng/mL下顯示87%或以上的中和能力，顯示具有比PMB強100kYSSSISSIRAckYSSSISSIRACkYSSSISSIRGGLLLLLLL倍左右的中和能力。實施例22:使用Li5-025檢測LPS的靈敏度(通過BIACORE系統)本實施例中，關於Li5-025測定LPS的靈敏度，使用BIACORE系統(BIACORE2000;BIACORE製造)確認，並研究了表面等離子共振法4全測LPS的方法。具體來說，通過硫醇偶聯，以固定量271RU將Li5-025固定在傳感晶片(BIACORE傳感晶片CM5;BIACORE製造)的流式細胞(以下稱為Fc)2上，在Fc3上以843RU固定。作為對照，在Fcl上固定半胱氨酸。以濃度不同的LPS(大腸桿菌K12抹)[濃度=10ng/mL、100ng/mL、1000ng/mL;HBS緩衝液(O.Olmol/LHEPES,pH7.4,0.15mol/LNaCl,3mmol/LEDTA)]作為分析物，分別從低濃度開始依次流入上述傳感晶片，測定。結果，在Fc2中檢測出的信號是10ng/mL下為1.7RU,100ng/mL下為2RU，1000ng/mL下為3.3RU，靈敏度顯示10ng/mL左右。另外，在Fc3中，以10ng/mL檢測出3.2RU，顯示了Li5-025的晶片固定量的相關性。實施例23:螢光標記Li5-025對革蘭氏陰性菌的染色在Li5-025中融合螢光素，嘗試革蘭氏陰性菌的染色。螢光標記肽是利用Li5-025的C末端的半胱氨酸的SH基，通過融合螢光素來製備。菌使用綠膿桿菌(Pseudomonasaeruginosa)和乾酪乳桿菌(丄a"o^"7/wca"0。在各種液體培養基中充分增殖，然後用純水100倍稀釋，混合，塗布在載玻上。乾燥後滴加100%乙醇，進行乙醇固定。固定後，滴加1jag/mL的Li5-025螢光素，遮光15分鐘，在室溫下溫育。用純水洗滌後用螢光顯微鏡觀察。作為革蘭氏陰性菌的綠膿桿菌被強烈螢光染色，顯示可以作為革蘭氏染色的替代法。實施例24:使用固定Li5-025的柱去除血液內毒素使用固定Li5-025的柱(在0.8g珠(Si-醯氯)中固定8mg肽或PMB]，通過開放柱法比較全血中的內毒素去除效果。對照是使用未進行任何固定、只進行封閉的珠。方法如下將LPS溶解於人的全血中，濃度為2ng/mL，通入5mL，將洗脫的全血加入到新的全血+RPMI培養基上，在37。C下溫育4小時。評價是通過LPS誘導TNFa的量進行。全血是由三人的靜脈中採集，與10units的肝素混合。LPS(內毒素)誘導TNFa的表達，因此，可以通過TNFa的誘導量間接評價LPS的吸附能力。誘導的TNFa的值如表19所示。與對照比較，通入固定Li5-025的珠的血液，其TNFa的誘導量降低，顯示可以通過柱去除LPS。tableseeoriginaldocumentpage53實施例25:Li5-025書f生物的敗血症治療和預防效果Li5-025衍生物使用在實施例21中合成的肽WineOpener(以下稱為肽WO),評價對小鼠內毒素敗血症模型的治療、預防效果。小鼠使用C3H/HeN。給予方法如下。各組由8隻構成。組A:對照。對小鼠靜脈注射生理鹽水，30分鐘後再次靜脈注射。組B:靜脈注射生理鹽水，30分鐘後靜脈注射10mg/kg肽WO。組C:靜脈給予2mg/kg的LPS,30分鐘後靜脈給予生理鹽水。組E:靜脈給予2mg/kg的LPS,30分鐘後以10mg/kg靜脈給予肽WO。組G:將2mg/kg的LPS與10mg/kg的肽WO混合後靜脈給予。評價是將由敗血症性休克誘導的體重減少以與給予前體重的比的形式表示。第3天、第6天的體重減少量(比)表示在表20中。表20中，數值表示平均減少量(與給予前的體重比)，括號內表示由組的平均中分離出的上限和範圍。tableseeoriginaldocumentpage54如表20所示，在只給予LPS的給予組(C)中，與對照(A)比較，第3天、第6天均可見顯著的體重減少。給予LPS30分鐘後給予WO的組(E)中，在第一天即可見與組C同樣的體重減少，在第3天、第6天可見顯著的恢復。另外，在LPS和WO的混合給予組(G)中，未見顯著的體重減少，顯示對於WO有預防效果。在組B的只給予肽的給予組中，與對照(組A)比較，未見顯著的體重減少，未見單獨的肽對於體重的影響的短期毒性(表中未顯示)。產業實用性本發明的脂多糖和/或脂質A結合劑例如可適用於脂多糖和/或脂質A的去除、或脂多糖和/或脂質A的中和的用途。序列表自由文本序列表的SEQIDNO.1-124序列所示的各胺基酸序列是脂多糖和/或脂質A結合肽。序列表的SEQIDN0.125序列所示的胺基酸序列是標識序列。序列表的SEQIDNO,l、16、24、30序列所示的各胺基酸序列中第l位和第ll位各胺基酸"Xaa"各自獨立地表示賴氨酸、精氨酸或組氨酸。序列表的SEQIDN0.2、5、20-23、25-29、71-74、76-80序列所示的各胺基酸序列中第1位胺基酸"Xaa"表示賴氨酸、精氨酸或組氨酸。序列表的SEQIDN0.3、54-56序列所示的各胺基酸序列中第1位和第ll位各胺基酸"Xaa"各自獨立地表示賴氨酸、精氨酸或組氨酸，第2位-第IO位各胺基酸"Xaa"各自獨立地表示任意的胺基酸。序列表的SEQIDN0.4、67、75、81、82序列所示的各胺基酸序列中第l位和第IO位各胺基酸"Xaa"各自獨立地表示賴氨酸、精氨酸或組氨酸。序列表的SEQIDN0.6、106-108序列所示的各胺基酸序列中第1位和第IO位各胺基酸"Xaa"各自獨立地表示賴氨酸、精氨酸或組氨酸，第2位-第9位各胺基酸"Xaa"各自獨立地表示任意的胺基酸。序列表的SEQIDN0.36、37、43、44序列所示的各胺基酸序列中第IO位胺基酸"Xaa"表示賴氨酸、精氨酸或組氨酸。序列表的SEQIDNO.45-53序列所示的各胺基酸序列中第2位-第IO位各胺基酸"Xaa"各自獨立地表示任意的胺基酸。序列表的SEQIDN0.88、89、95、96序列所示的各胺基酸序列中第9位胺基酸"Xaa"表示賴氨酸、精氨酸或組氨酸。序列表的SEQIDNO.97-105序列所示的各胺基酸序列中第2位曙第9位各胺基酸"Xaa"各自獨立地表示任意的胺基酸。權利要求1.脂多糖和/或脂質A結合劑，該脂多糖和/或脂質A結合劑含有下述肽(1)-(6)或其衍生物作為有效成分(1)含有SEQIDNO.1所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(2)含有SEQIDNO.2所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(3)含有SEQIDNO.3所示的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(4)含有SEQIDNO.4所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(5)含有SEQIDNO.5所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(6)含有SEQIDNO.6所示的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽。2.脂多糖和/或脂質A去除劑，該脂多糖和/或脂質A去除劑含有權利要求1所述肽(l)-(6)或其衍生物作為有效成分。3.脂多糖和/或脂質A中和劑，該脂多糖和/或脂質A中和劑含有上述肽(l)-(6)或其衍生物、編碼權利要求1所述肽(l)-(6)的多核苷酸、或含有上述多核苷酸的表達載體作為有效成分。4.敗血症治療藥，該藥物含有權利要求1所述肽(l)-(6)或其衍生物、編碼上述肽(l)-(6)的多核苷酸、或含有上述多核苷酸的表達載體作為有效成分。5.脂多糖和/或脂質A的結合方法，該方法包含使權利要求1所述肽(l)-(6)或其衍生物與脂多糖和/或脂質A接觸的步驟。6.脂多糖和/或脂質A的去除方法，該方法包含以下步驟使可能含有脂多糖和/或脂質A的處理對象與權利要求1所述肽(l)-(6)或其衍生物接觸的步驟；以及將與脂多糖和/或脂質A形成複合物的上述肽或其衍生物與上述處理對象分離的步驟。7.脂多糖和/或脂質A中和方法，該方法包含將權利要求1所述肽(l)-(6)或其衍生物、編碼上述肽(l)-(6)的多核苷酸、或含有上述多核苷酸的表達載體以有效量給予需要進行脂多糖和/或脂質A中和的對象。8.敗血症治療方法，該方法包含將權利要求1所述肽(l)-(6)或其衍生物、編碼上述肽(l)-(6)的多核普酸、或含有上述多核苦酸的表達載體以有效量給予需要進行敗血症治療的對象。9.權利要求1的肽(l)-(6)或其衍生物在製備脂多糖和/或脂質A中和劑中的應用。10.權利要求1的肽(l)-(6)或其衍生物在製備脂多糖和/或脂質A去除劑中的應用。11.權利要求1的肽(l)-(6)或其衍生物、編碼上述(l)-(6)的多核苷酸或含有上述多核苷酸的表達載體在製備脂多糖和/或脂質A中和劑中的應用。12.權利要求1的肽(l)-(6)或其衍生物、編碼上述(l)-(6)的多核普酸或含有上述多核苷酸的表達載體在製備敗血症治療藥中的應用。13.選自下述的肽或其衍生物，其中不包括SEQIDN0.9所示的胺基酸序列的肽(1)含有SEQIDNO.l所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(2)含有SEQIDNO.2所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(3)含有SEQIDN0.3所示的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(4)含有SEQIDN0.4所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(5)含有SEQIDNO.5所示的胺基酸序列，或在上述胺基酸序列中有一或多個胺基酸缺失、置換、和/或附加所得的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽；(6)含有SEQIDN0.6所示的胺基酸序列、且顯示脂多糖和/或脂質A結合活性的肽。14.多核苷酸，該多核苷酸編碼權利要求13所述、除含有SEQIDN0.9所示胺基酸序列的肽之外的肽(1)-(6)。15.表達載體，該表達載體含有權利要求14所述多核苷酸。16.藥物組合物，該藥物組合物含有權利要求13所述的除SEQIDN0.9所示胺基酸序列的肽之外的肽(l)-(6)或其衍生物、編碼上述肽的多核苷酸、或含有上述多核苷酸的表達載體，以及藥劑學或者是獸醫學可接受的通常的載體或稀釋劑。17.脂多糖和/或脂質A的分析方法，其特徵在於使用權利要求1所述肽(l)-(6)或其衍生物。18.脂多糖和/或脂質A的分析方法，該方法包含以下步驟將可能含有脂多糖和/或脂質A的受檢試樣與權利要求1所述的肽(1)-(6)或其衍生物接觸的步驟；對與上述肽或衍生物結合的脂多糖和/或脂質A進行分析的步驟。19.革蘭氏陰性菌的分析方法，其特徵在於使用權利要求l所述的肽(l)-(6)或其衍生物。20.革蘭氏陰性菌的分析方法，該方法包含以下步驟將可能含有革蘭氏陰性菌的受檢試樣與權利要求1所述的肽(l)-(6)或其衍生物接觸的步驟；對與上述肽或其衍生物結合的革蘭氏陰性菌進行分析的步驟。全文摘要本發明提供脂多糖和/或脂質A結合劑。上述脂多糖和/或脂質A結合劑含有脂多糖和/或脂質A結合肽[例如含有XYSSS(X＝K、R或H)所示的胺基酸序列的肽]或其衍生物作為有效成分。上述脂多糖和/或脂質A結合劑例如可作為脂多糖和/或脂質A中和劑、或脂多糖和/或脂質A去除劑使用。文檔編號A61P29/00GK101360824SQ20068005169公開日2009年2月4日申請日期2006年11月22日優先權日2005年11月24日發明者松本惠,鈴木政嗣申請人:株式會社肽門