一種多倍體大花萱草組培方法及培養基的製作方法
2023-07-16 06:10:06 1
一種多倍體大花萱草組培方法及培養基的製作方法
【專利摘要】本發明提供一種多倍體大花萱草組培方法，同時還公開了適用於本發明組培方法的培養基，本發明方法提高了多倍體大花萱草的繁殖係數，彌補了傳統組織培養技術的一些不足，如降低了外植體的汙染率、提高了愈傷組織分化率和移栽成活率等。通過外植體採集、外植體消毒效果、生根效果、移栽苗成活率等方面均優於以往萱草品種的組培快繁技術，所建立的規模化商品生產體系穩定，生產周期只需2個月左右。加快多倍體大花萱草繁殖速度，打破繁殖的季節限制，實現育苗工廠化生產。本發明的組培配方是多倍體大花萱草大量擴繁的最佳組合，可以快速大量的繁殖組培苗，適應園林綠化市場需求。
【專利說明】一種多倍體大花萱草組培方法及培養基
【技術領域】
[0001]本發明提供一種多倍體大花萱草組培方法，同時還公開了適用於本發明組培方法的培養基，屬於花卉培育【技術領域】。
【背景技術】
[0002]萱草為多年生宿根花卉，近幾年廣泛用於城市綠化和園林景觀建設中。在眾多萱草品種中，多倍體大花萱草花色豐富，花姿優美，且葉色翠綠，具備栽培簡易，春季萌發早等栽培優勢。近年來市場對多倍體大花萱草的需求量越來越大，單純的分株繁殖速度，遠不能滿足商品化生產的需要，從而限制了多倍體大花萱草在園林中的大量應用。因此，探索出多倍體大花萱草快速繁殖的技術和方法，開展組織培養的研究及加速其推廣應用就顯得至關重要。
【發明內容】
[0003]本發明提供一種多倍體大花萱草組培方法，解決多倍體大花萱草外植體選擇、夕卜植體採集時間、外植體消毒方法、培養基配方、煉苗方法等方面的技術難點。
[0004]本發明還公開了適用於本發明組培方法的多種培養基，可以快速大量繁殖的多倍體大花萱草，彌補傳統技術的外植體汙染率高、分化率低、移栽成活率低等問題，移栽成活率可達95%。
[0005]本發明公開的多倍體大花萱草組培方法，包括以下步驟:
1)在植株抽蕾期，採集健壯的無病蟲害的嫩葉、生長點、腋芽、花蕾、花瓣、花梗，作為組織培養的外植體，將採集 到的外植體用洗衣粉水清洗乾淨，再放在流水下衝洗30min，在超淨工作檯上用75%酒精消毒5-30s，再用無菌水衝洗3-5遍，之後用0.1% (質量百分比)升萊消毒5-20min ；
2)將消毒後的外植體接種到誘導培養基上，送入培養室進行無菌培養，培養基為MS1L+NAA 0.2mg/L+6-BA 0.5mg/L+2, 4_D 0.7mg/L+ 鹿糖 3 mg/L、瓊脂 9 mg/L ;將分化後的外植體轉移到繼代增殖培養基上進行繼代培養，得到分化苗，繼代培養基為MS+NAA 0.2mg/L+6-BA 2.0mg/L+ 鹿糖 3 mg/L、瓊脂 9 mg/L ；
3)將分化苗接種到壯苗培養基上進行壯苗培養，壯苗培養基為MS1L+6-BA 0.2 mg/L+IBA 0.04mg/L+馬鈴薯20g/L+蔗糖3 mg/L、瓊脂9 mg/L ;然後，將健壯的瓶苗轉移到生根培養基上進行生根培養，生根培養基為MS 1L+NAA 0.02mg/L+蔗糖3 mg/L、瓊脂9 mg/L；
4)把生根後的組培苗移出培養瓶，藉助毛刷洗淨根部的培養基，將根部置於盛滿水的容器中，置於煉苗室鍛鍊3-5天，然後移栽到腐殖土:珍珠巖=1:1的基質中，得到成品。
[0006]所述MS培養基的工作液濃度單位為mg/L，含:
大量元素:NH4NO3 1650、KNO3 1900、CaCl2.2H20 440、MgSO4.7H20 370、KH2PO4 170 ；
微量元素:KI 0.83、H3BO3 6.2、MnSO4.4H20 22.3、ZnSO4.7H20 8.6、Na2MnO4.2H20
0.25、CuSO4.5H20 0.0025、CoCl2.6H20 0.0025 ;鐵鹽=FeSO4.7H20 27.8、Na2-EDTA.2H2037.3 ；
肌醇100、鹽酸0.5、鹽酸吡哆醇0.5、鹽酸硫胺素0.1、甘氨酸2.0。
[0007]本發明公開的多倍體大花萱草組培用誘導培養基，其特徵在於是由以下原料製成的:
MS 1L、萘乙酸0.2mg/L、6-節基嘌呤0.5mg/L、2, 4-二氯苯氧乙酸0.7mg/L、鹿糖3 mg/L、瓊脂 9 mg/L ;pH 值 5.8-6.0。
[0008]本發明公開的多倍體大花萱草組培用繼代增殖培養基:其特徵在於是由以下原料製成的:
MS 1L、萘乙酸 0.2mg/L、6-節基嘌呤 2.0mg/L、鹿糖 3 mg/L、瓊脂 9 mg/L ；pH 值
5.8-6.00
[0009]本發明公開的多倍體大花萱草組培用壯苗培養基；其特徵在於是由以下原料製成的:
MS 11 、6-苄基嘌呤0.2 mg/L、吲哚-3-丁酸 0.04mg/L、馬鈴薯 20g/L、蔗糖 3 mg/L、瓊月旨 9 mg/L 巾!1值5.8-6.0。
[0010]本發明公開的多倍體大花萱草組培用生根培養基；其特徵在於是由以下原料製成的:
MS 1L、萘乙酸 0.02mg/L、蔗糖 3 mg/L、瓊脂 9 mg/L ;pH 值 5.8-6.0。
[0011 ] 所述MS的工作液濃度單位為mg/L，含:
大量元素:NH4NO3 1650、KNO3 1900、CaCl2.2H20 440、MgSO4.7H20 370、KH2PO4 170 ；
微量元素:KI 0.83、H3BO3 6.2、MnSO4.4H20 22.3、ZnSO4.7H20 8.6、Na2MnO4.2H20
0.25、CuSO4.5H20 0.0025、CoCl2.6H20 0.0025 ;鐵鹽=FeSO4.7H20 27.8、Na2-EDTA.2H2037.3 ；
肌醇100、鹽酸0.5、鹽酸吡哆醇0.5、鹽酸硫胺素0.1、甘氨酸2.0。
[0012]本發明相對於現有技術具有的優點和進步在於:
本發明方法提高了多倍體大花萱草的繁殖係數，彌補了傳統組織培養技術的一些不足，如降低了外植體的汙染率、提高了愈傷組織分化率和移栽成活率等。通過外植體採集、外植體消毒效果、生根效果、移栽苗成活率等方面均優於以往萱草品種的組培快繁技術，所建立的規模化商品生產體系穩定，生產周期只需2個月左右。加快多倍體大花萱草繁殖速度，打破繁殖的季節限制，實現育苗工廠化生產。本發明的組培配方是多倍體大花萱草大量擴繁的最佳組合，可以快速大量的繁殖組培苗，適應園林綠化市場需求。
【具體實施方式】
[0013]通過以下實施例進一步舉例描述本發明，並不以任何方式限制本發明，在不背離本發明的技術解決方案的前提下，對本發明所作的本領域普通技術人員容易實現的任何改動或改變都將落入本發明的權利要求範圍之內。
[0014]實施例1 MS的配製:
工作液濃度單位為mg/L，其中:`
大量元素:NH4NO3 1650、KNO3 1900、CaCl2.2H20 440、MgSO4.7H20 370、KH2PO4 170 ；微量元素:KI 0.83、H3BO3 6.2、MnSO4.4H20 22.3、ZnSO4.7H20 8.6、Na2MnO4.2H20 0.25、CuSO4.5Η20 0.0025、CoC12.6Η20 0.0025 ;鐵鹽:FeS04.7Η20 27.8、Na2_EDTA.2Η20 37.3 ；肌醇100、鹽酸0.5、鹽酸吡哆醇0.5、鹽酸硫胺素0.1、甘氨酸2.0。按比例稱取上述原料，混合均勻即得MS。
[0015]實施例2多倍體大花萱草組培用誘導培養基
稱取實施例1製備的MS IL加入萘乙酸0.2mg/L、6-苄基嘌呤0.5mg/L、2，4-二氯苯氧乙酸0.7mg/L、蔗糖30 g/L、瓊脂9 g/L ；pH值5.8-6.0 ;將上述原料，混合均勻即得。
[0016]實施例3繼代增殖培養基
稱取實施例1製備的MS IL加入萘乙酸0.2mg/L、6-苄基嘌呤2.0mg/L、蔗糖30 g/L、瓊脂9 g/L ；pH值5.8-6.0 ;將上述原料，混合均勻即得。
[0017]實施例4壯苗培養基
稱取實施例1製備的MS IL加入6-苄基嘌呤0.2 mg/L、吲哚-3- 丁酸0.04mg/L、馬鈴薯20g/L、蔗糖30g/L、瓊脂9 g/L ；pH值5.8-6.0 ;將上述原料，混合均勻即得。
[0018]實施例5生根培養基
稱取實施例1製備的MS IL加入萘乙酸0.02mg/L、蔗糖30 g/L、瓊脂9 g/L ;pH值
5.8-6.0 ;將上述原料，混合均勻即得。
[0019]實施例6 1、選擇在I月中旬(植株抽蕾期)連續3天無雨後對外植體進行採集，可有效降低外植體的汙染率。將採集到的外植(花萱草花蕾)體用洗衣粉水清洗乾淨，再放在流水下衝洗30min，在超淨工作檯上用75%酒精消毒5_30s，再用無菌水衝洗3_5遍，之後用0.1% (質量百分比)升汞消毒5-20min ;其中，最佳的外植體滅菌方法:75%酒精10s+0.1%(質量百分比)升萊消毒12min。
[0020]2、將消毒後的外植體接種到誘導培養基(實施例2)上，送入培養室進行無菌培養，培養室的條件為溫度:25土1°C，光照強度:15001x-20001x，光照時間:12h/d。在此過程中根據外植體誘導和分化情況帥選出最適宜的外植體種類和培養基配方。將芽分化明顯的接種塊轉移到繼代增殖培養基(實施例3)上，經過30d培養即可增殖1-2倍，得到分化苗。
[0021]3、為了提高了分化苗的質量，提高移栽的成活率，將生長較弱的分化苗接種到壯苗培養基(實施例4)上進行壯苗培養，經過10-20d的培養即可使瓶苗變粗壯。然後，將健壯的瓶苗轉移到生根培養基(實施例5)上進行生根培養。
[0022]4、生根培養後要先經過煉苗的過程，然後移栽，才能適應露地栽培的要求。把生根後的組培苗移出培養瓶，藉助毛刷洗淨根部的培養基，放在盛滿水的小盒中，藉助橡皮筋固定小苗，水面高度以不超過根部為宜，置於煉苗室鍛鍊3-5天，上罩透明塑料布。然後移栽到腐殖土:珍珠巖=1: I的基質中。移栽成活率達96%左右。
[0023]移栽過程中要注意幾點，①藉助鑷子將小苗根部的土捏實，讓根與基質充分接觸；②移栽過程中，最好將2-3棵小苗種植在一個穴洞內；③移栽後的小苗要套上帶孔的透明塑膠袋，一周後去掉；④移栽後每半個月澆一次稀釋500倍的MS營養液(不含蔗糖和瓊脂的MS培養基)。以上幾點均可提高移栽苗成活率。
[0024]實施例7
1、選擇在I月中旬(植株抽蕾期)連續3天無雨後對外植體進行採集，可有效降低外植體的汙染率。採集健壯的無病蟲害的嫩葉、、腋芽、花蕾、花瓣、花梗，作為組織培養的外植體，將採集到的外植(花萱草生長點)體用洗衣粉水清洗乾淨，再放在流水下衝洗30min，在超淨工作檯上用75%酒精消毒5-30s，再用無菌水衝洗3-5遍，之後用0.1% (質量百分比)升汞消毒5-20min ;其中，最佳的外植體滅菌方法:75%酒精lOs+0.1% (質量百分比)升汞消毒 12min。
[0025]2、將消毒後的外植體接種到誘導培養基(實施例2)上，送入培養室進行無菌培養，培養室的條件為溫度:25土1°C，光照強度:15001x-20001x，光照時間:12h/d。在此過程中根據外植體誘導和分化情況帥選出最適宜的外植體種類和培養基配方。將芽分化明顯的接種塊轉移到繼代增殖培養基(實施例3)上，經過30d培養即可增殖1-2倍，得到分化苗。
[0026]3、為了提高了分化苗的質量，提高移栽的成活率，將生長較弱的分化苗接種到壯苗培養基(實施例4)上進行壯苗培養，經過10-20d的培養即可使瓶苗變粗壯。然後，將健壯的瓶苗轉移到生根培養基(實施例5)上進行生根培養。
[0027]4、生根培養後要先經過煉苗的過程，然後移栽，才能適應露地栽培的要求。把生根後的組培苗移出培養瓶，藉助毛刷洗淨根部的培養基，放在盛滿水的小盒中，藉助橡皮筋固定小苗，水面高度以不超過根部為宜，置於煉苗室鍛鍊3-5天，上罩透明塑料布。然後移栽到腐殖土:珍珠巖=1: I的基質中。移栽成活率達96%左右。
[0028]移栽過程中要注意幾點，①藉助鑷子將小苗根部的土捏實，讓根與基質充分接觸；②移栽過程中，最好將2-3棵小苗種植在一個穴洞內；③移栽後的小苗要套上帶孔的透明塑膠袋，一周後去掉；④移栽後每半個月澆一次稀釋500倍的MS營養液(不含蔗糖和瓊脂的MS培養基)。以上幾點均可提高移栽苗成活率。
[0029]實施例8
1、選擇在7月中旬(植株抽蕾期)連續3天無雨後對外植體進行採集，可有效降低外植體的汙染率。將採集到的.外植(花萱草腋芽)體用洗衣粉水清洗乾淨，再放在流水下衝洗30min，在超淨工作檯上用75%酒精消毒5_30s，再用無菌水衝洗3_5遍，之後用0.1% (質量百分比)升汞消毒5-20min ;其中，最佳的外植體滅菌方法:75%酒精10s+0.1%(質量百分比)升萊消毒12min。
[0030]2、將消毒後的外植體接種到誘導培養基(實施例2)上，送入培養室進行無菌培養，培養室的條件為溫度:25土1°C，光照強度:15001x-20001x，光照時間:12h/d。在此過程中根據外植體誘導和分化情況帥選出最適宜的外植體種類和培養基配方。將芽分化明顯的接種塊轉移到繼代增殖培養基(實施例3)上，經過30d培養即可增殖1-2倍，得到分化苗。
[0031]3、為了提高了分化苗的質量，提高移栽的成活率，將生長較弱的分化苗接種到壯苗培養基(實施例4)上進行壯苗培養，經過10-20d的培養即可使瓶苗變粗壯。然後，將健壯的瓶苗轉移到生根培養基(實施例5)上進行生根培養。
[0032]4、生根培養後要先經過煉苗的過程，然後移栽，才能適應露地栽培的要求。把生根後的組培苗移出培養瓶，藉助毛刷洗淨根部的培養基，放在盛滿水的小盒中，藉助橡皮筋固定小苗，水面高度以不超過根部為宜，置於煉苗室鍛鍊3-5天，上罩透明塑料布。然後移栽到腐殖土:珍珠巖=1: I的基質中。移栽成活率達96%左右。
[0033]移栽過程中要注意幾點，①藉助鑷子將小苗根部的土捏實，讓根與基質充分接觸；②移栽過程中，最好將2-3棵小苗種植在一個穴洞內；③移栽後的小苗要套上帶孔的透明塑膠袋，一周後去掉；④移栽後每半個月澆一次稀釋500倍的MS營養液(不含蔗糖和瓊脂的MS培養基)。以上幾點均 可提高移栽苗成活率。
【權利要求】
1.一種多倍體大花萱草組培方法，其特徵在於包括以下步驟: 1)在植株抽蕾期，採集健壯的無病蟲害的嫩葉、生長點、腋芽、花蕾、花瓣、花梗，作為組織培養的外植體，將採集到的外植體用洗衣粉水清洗乾淨，再放在流水下衝洗30min，在超淨工作檯上用75%酒精消毒5-30s，再用無菌水衝洗3-5遍，之後用0.1% (質量百分比)升萊消毒5-20min ； 2)將消毒後的外植體接種到誘導培養基上，送入培養室進行無菌培養，培養基為MS1L+NAA 0.2mg/L+6-BA 0.5mg/L+2, 4_D 0.7mg/L+ 鹿糖 3 mg/L、瓊脂 9 mg/L ;將分化後的外植體轉移到繼代增殖培養基上進行繼代培養，得到分化苗，繼代培養基為MS+NAA 0.2mg/L+6-BA 2.0mg/L+ 鹿糖 3 mg/L、瓊脂 9 mg/L ； 3)將分化苗接種到壯苗培養基上進行壯苗培養，壯苗培養基為MS1L+6-BA 0.2 mg/L+IBA 0.04mg/L+馬鈴薯20g/L+蔗糖3 mg/L、瓊脂9 mg/L ;然後，將健壯的瓶苗轉移到生根培養基上進行生根培養，生根培養基為MS 1L+NAA 0.02mg/L+蔗糖3 mg/L、瓊脂9 mg/L ； 4)把生根後的組培苗移出培養瓶，藉助毛刷洗淨根部的培養基，將根部置於盛滿水的容器中，置於煉苗室鍛鍊3-5天，然後移栽到腐殖土:珍珠巖=1:1的基質中，得到成品； 所述MS培養基的工作液濃度單位為mg/L，含:
大量元素:NH4NO3 1650、KNO3 1900、CaCl2.2H20 440、MgSO4.7H20 370、KH2PO4 170 ；
微量元素:KI 0.83、H3BO3 6.2、MnSO4.4H20 22.3、ZnSO4.7H20 8.6、Na2MnO4.2H200.25、CuSO4.5H20 0.0025、CoCl2.6H20 0.0025 ;鐵鹽=FeSO4.7H20 27.8、Na2-EDTA.2H2037.3 ； 肌醇100、鹽酸0.5、鹽酸吡哆醇0.5、鹽酸硫胺素0.1、甘氨酸2.0。
2.一種多倍體大花萱草組培用誘導培養基，其特徵在於是由以下原料製成的: MS 1L、萘乙酸0.2mg/L、6-節基嘌呤0.5mg/L、2, 4-二氯苯氧乙酸0.7mg/L、鹿糖3 mg/L、瓊脂 9 mg/L 巾!1值5.8-6.0。
3.一種多倍體大花萱草組培用繼代增殖培養基:其特徵在於是由以下原料製成的: MS 1L、萘乙酸 0.2mg/L、6-節基嘌呤 2.0mg/L、鹿糖 3 mg/L、瓊脂 9 mg/L ；pH 值5.8-6.00
4.一種多倍體大花萱草組培用壯苗培養基；其特徵在於是由以下原料製成的: MS 11 、6-苄基嘌呤0.2 mg/L、吲哚-3-丁酸 0.04mg/L、馬鈴薯 20g/L、蔗糖 3 mg/L、瓊月旨 9 mg/L 巾!1值5.8-6.0。
5.一種多倍體大花萱草組培用生根培養基；其特徵在於是由以下原料製成的:
MS 1L、萘乙酸 0.02mg/L、蔗糖 3 mg/L、瓊脂 9 mg/L ；pH 值 5.8-6.0。
【文檔編號】A01H4/00GK103430850SQ201310405775
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年9月9日 優先權日:2013年9月9日
【發明者】溫娜, 武術傑, 王麗蘭, 高志新, 劉亞亮, 尹立輝, 席應琪, 孟慶明, 譚首創 申請人:中邦園林股份有限公司, 長春大學