利用rna吸附柱快速提取植物rna的試劑盒及方法
2023-07-06 07:34:36
利用rna吸附柱快速提取植物rna的試劑盒及方法
【專利摘要】本發明提供一種利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的試劑盒及方法，屬於生物【技術領域】。利用該試劑盒能夠快速獲得純度高、完整性好的RNA。所述試劑盒的組成包括：裂解液、BufferA、BufferB、去蛋白液、漂洗液、RNA吸附柱。利用該試劑盒通過植物組織細胞的破碎、RNA的吸附，快速提取植物DNA。本發明通過採用RNA吸附柱吸附RNA，同時使用去蛋白溶液和漂洗溶液去除蛋白等雜質，可以在較短時間內獲得較高純度的植物RNA。本發明能快速獲得質量較高的植物RNA。
【專利說明】利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的試劑盒及方法
【技術領域】
[0001]本發明提供一種利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的試劑盒及方法，屬於生物【技術領域】。
【背景技術】
[0002]核酸是生物遺傳的物質基礎，決定生物體的遺傳、變異、生長和發育。在基因工程中，核酸分子是主要的研究對象，因此核酸的分離、提取是分子生物學研究中很重要的技術。從植物組織中提取RNA是進行植物分子生物學方面研究的必要前提，要克隆基因，或是簡歷cDNA文庫，RT-PCR以及Northern雜交等都需要有高質量的RNA。因此，從植物組織中提取純度高、完整性好的RNA是上述研究的關鍵所在。
[0003]RNA是一類極易降解的分子，要得到完整的RNA必須最大限度地抑制提取過程中內源性及外源性核糖核酸酶對RNA的降解。高濃度強變性劑硫氰酸胍，可以溶解蛋白質、破壞細胞結構，使核蛋白與核酸分離，失活RNAaseJfW RNA從細胞中釋放出來時不會被降解。細胞裂解後，除了 RNA，還有DNA、蛋白質和細胞碎片，通過苯酚、氯仿等有機溶劑處理得到純化、均一的總RNA。
[0004]在提取植物RNA的過程中，常由於提取時間過長，RNA酶汙染等原因造成RNA降解，使得後續試驗無法進行。因此，採用一種快速植物RNA的方法對於進行RNA的相關實驗至關重要。
【發明內容】
[0005]本發明提供一種利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的試劑盒及方法，利用該試劑盒能夠快速獲得純度高、完整性好的RNA。
[0006]本發明首先提供了一種利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的試劑盒，所述試劑盒的組成包括:
1)裂解液=Trizol提取液；
2)Buffer A:氯仿；
3)BufferB:70%重量比乙醇；
4)去蛋白液:5M鹽酸胍，20mMTris-HCI pH6.6，38%重量比乙醇；
5)漂洗液:20mMNaCL, 2mM Tris-HCI pH7.5，80% 重量比乙醇；
6)RNA吸附柱。
[0007]所述Trizol 提取液配製如下:174ml solut1nD、17.4 ml 0.2M Nacl(ph4.2_4.5)、174 ml 水飽和酌.、34.8 ml 氯仿、1.2 ml 2-Mercaptoethaol (b_ 硫基乙醇)，其中solut1nD的配方如下:283.5g異硫氰酸胍、2.5g月桂酸、50ml 250mM檸檬酸鈉(ph7.0)，加 DEPC 處理水至 500ml ο
[0008]本發明還提供了一種利用所述試劑盒快速提取植物DNA的方法，依次包括以下步驟:(O植物組織細胞的破碎:稱取0.5g植物樣品加入液氮研磨成粉狀，將其迅速轉入1.5ml離心管，加入1ml裂解液，振蕩器震蕩30秒後，加入200ul的Buffer A，振蕩器震蕩30秒；
(2)RNA的吸附:將細胞破碎後的樣品12000rpm/min離心10min，離心後將上清吸到1.5ml離心管,加入等體積的Buffer B,混勻後將樣品加到RNA吸附柱上，12000rpm/min離心lmin,倒掉液體,加入500ul去蛋白液，12000rpm/min離心lmin,倒掉液體，加入500ul漂洗液，12000rpm/min離心lmin，倒掉液體，再加入500ul漂洗液，12000rpm/min離心lmin,倒掉液體，吹乾後加入50ul DEPC水，12000 rpm/min離心2min,收集液體。
[0009]其中所述RNA吸附柱為矽膠膜RNA吸附柱，購自北京天恩澤公司。
[0010]常規的植物RNA提取方法步驟繁瑣、費時長，容易造成RNA降解。本發明通過採用RNA吸附柱吸附RNA，同時使用去蛋白溶液和漂洗溶液去除蛋白等雜質，可以在較短時間內獲得較高純度的植物RNA。本發明能快速獲得質量較高的植物RNA。
[0011]採用本發明所提供的方法具有突出的特點:
1.降低了植物組織RNA的提取時間。
[0012]2.提高了植物組織RNA的提取純度和完整性。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0013]圖1為植物組織RNA的提取檢測結果圖。泳道1，2，3，4，5分別代表利用本方法提取的水稻、 玉米、甘蔗、花生、小麥組織RNA電泳結果圖。
【具體實施方式】
[0014]本發明的一種利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的試劑盒及方法，具體步驟如下
(I)原料:稱取0.5g水稻、玉米、甘蔗、花生、小麥樣品。
[0015](2)植物組織細胞的破碎:分別將樣品加入液氮研磨成粉狀，將其迅速轉入1.5ml離心管，加入1ml Trizol提取液。振蕩器震蕩30秒後，加入200ul的Buffer A，振蕩器震湯30秒。
[0016](3)RNA的吸附:將樣品12000rpm/min離心1min,離心後將上清吸到1.5ml離心管。加入等體積的Buffer B,混勻後將樣品加到RNA吸附柱上，12000rpm/min離心lmin,倒掉液體，加入500ul去蛋白液，12000rpm/min離心lmin,倒掉液體,加入500ul漂洗液，12000rpm/min離心lmin,倒掉液體，加入500ul漂洗液，12000rpm/min離心lmin,倒掉液體，吹乾後加入50ul DEPC水，12000 rpm/min離心2min,收集液體。通過瓊脂糖凝膠電泳電測RNA。
[0017](4)利用紫外分光光度計對提取到的植物根部RNA進行溶度以及純度的檢測。
[0018]Buffer A 溶液:氯仿。
[0019]Buffer B 溶液:70% 乙醇。
[0020]去蛋白液溶液:5M鹽酸胍，20mM Tris_HCI，pH6.6，38%乙醇。
[0021]漂洗液溶液:20mMNaCL, 2mM Tris-HCI, ρΗ7.5，80% 乙醇。
[0022]植物組織RNA的提取檢測結果見圖1，泳道1，2，3，4，5分別代表利用本方法提取的水稻、玉米、甘蔗、花生、小麥組織RNA電泳結果圖。圖中的28sr RNA亮度約為18sr RNA亮度的2倍，說明本方法能夠快速提取到具有較高完整性的RNA。植物根部RNA濃度以及純度的檢測結果見表1，RNA樣品的OD (260:280)比值均在1.9-2.0之間，說明本方法提取的RNA具有較高的純度，RNA樣品的濃度範圍在0.49 μ g/μ 1-0.62 μ g/μ I。說明本方法能快速提取到濃度高、純度好的植物RNA。
[0023]表1:不同植物RNA的溶度以及OD (260:280)
【權利要求】
1.一種利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的試劑盒，其特徵在於，所述試劑盒的組成包括: 裂解液=Trizol提取液； Buffer A:氯仿； Buffer B:70%重量比乙醇； 去蛋白液:5M鹽酸胍，20mM Tris-HCI pH6.6，38%重量比乙醇； 漂洗液:20mM NaCL, 2mM Tris-HCI ρΗ7.5，80%重量比乙醇； RNA吸附柱。
2.一種利用權利要求1所述試劑盒快速提取植物DNA的方法，其特徵在於:依次包括以下步驟: (O植物組織細胞的破碎:稱取0.5g植物樣品加入液氮研磨成粉狀，將其迅速轉入.1.5ml離心管，加入1ml裂解液，振蕩器震蕩30秒後，加入200ul的Buffer A，振蕩器震蕩.30秒； (2)RNA的吸附:將細胞破碎後的樣品12000rpm/min離心10min，離心後將上清吸到.1.5ml離心管,加入等體 積的Buffer B,混勻後將樣品加到RNA吸附柱上，12000rpm/min離心Imin,倒掉液體,加入500ul去蛋白液，12000rpm/min離心Imin,倒掉液體,加入500ul漂洗液，12000rpm/min離心lmin，倒掉液體，再加入500ul漂洗液，12000rpm/min離心Imin,倒掉液體，吹乾後加入50ul DEPC水，12000 rpm/min離心2min,收集液體。
【文檔編號】C12N15/10GK104164423SQ201410449503
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2014年9月5日 優先權日:2014年9月5日
【發明者】王清水, 餘彥 申請人:福建師範大學