一種固定化金屬的親和色譜固定相及其製備方法

2023-08-05 06:35:06 3

專利名稱：一種固定化金屬的親和色譜固定相及其製備方法
技術領域：
本發明涉及分離與純化技術，具體是一種固定化金屬的親和色譜固定 相及其製備方法。
背景技術：
翻譯後蛋白質的修飾是蛋白質組中研究的熱點課題。蛋白質磷酸化作 為一種最常見，最重要的一種蛋白質翻譯後修飾方式，參與了幾乎所有調 節生命活動的整個過程，包括細胞的增殖，發育和分化，神經活動，肌肉 收縮，新陳代謝，腫瘤發生等，蛋白質磷酸化還是目前所知道的信號的主 要傳遞方式。
蛋白質磷酸化分析的傳統方法如放射性同位素標記、化學修飾、Edman 降解以及薄層層析等方法。這些方法操作相對繁瑣，對實驗技能要求較高， 蛋白樣品需求量較大，或存在放射性汙染等問題，限制了其廣泛使用。
近些年來用固定化金屬親和色譜來富集磷酸化肽段的方法由於其操作 簡單，成本較低，對實驗室要求也不那麼嚴格，近些年得到了最為廣泛的 應用。該方法的主要原理是利用磷酸化肽段所帶的磷酸根與固定化金屬親 和色譜中所固載的金屬離子之間發生作用，而非磷酸化肽不與之發生作用， 從而起到分離富集的效果。目前常用於磷酸化肽段富集的固定相多種多樣， 主要有瓊酯糖基、澱粉基、A1203、磁珠以及矽膠基質等，通過用亞胺二乙 酸等衍生，利用羧基再與金屬離子如鐵、鎵等螯合，再用於磷酸化肽段富 集Aprilita, N. H. 等，"Poly(glycidyl methacrylate/divinylbenzene)-IDA-Fe-III in phosphoproteomics"，《Journal of Proteome Research》，P2312-2319 (2005年)；近 些年來Ti02和Zr02微球(Kweon, H. K等，"Selective zirconium dioxide-based enrichment of phosphorylated peptides for mass spectrometric analysis", 《Analytical Chemistry》，1743-1749 (2006年))也應用於磷酸化肽段的富集，其本身即充當 基質，又提供與磷酸化肽段作用的金屬離子。亦有文獻報導利用磷酸酯中 的磷酸集團，與鋯等金屬離子相互作用，得到寡核苷酸單分子層，或利用 這種現象合成了以矽基質為基礎的固定化金屬親和色譜基質，但以聚甲基 丙烯酸縮水甘油酯類聚合物磷酸酯為基質的固定化金屬親和色譜固定相用 於磷酸化肽段富集未見報導。

發明內容
本發明提供一種通過化學反應將聚甲基丙烯酸縮水甘油酯類聚合物， 鍵合上磷酸酯基團，再與鋯、鐵等金屬離子螯合，實現對磷酸化肽段的高 選擇性分離、富集與純化固定化金屬的親和色譜固定相及其製備方法。
為實現上述目的，本發明採用的技術方案為 固定相結構式為-.formula see original document page 5
其中GMA Polymer微球，粒徑為1 OOnm— 50um 。
所述GMA Polymer微球為聚甲基丙烯酸縮水甘油酯類聚合物微球。所 述聚甲基丙烯酸縮水甘油酯類聚合物微球為甲基丙烯酸縮水甘油酯的交聯 均聚物或甲基丙烯酸縮水甘油酯與烯烴的交聯共聚物微球。所述甲基丙烯 酸縮水甘油酯的交聯均聚物是指聚甲基丙烯酸縮水甘油酯-乙烯基甲基丙烯 酸縮水甘油酯(GMA-EDMA);甲基丙烯酸縮水甘油酯與烯烴的交聯共聚 物是指聚甲基丙烯酸縮水甘油酯與苯乙烯的的交聯共聚物。
固定相的製備方法包括以下步驟
1) 氨基化反應將100-400 g/L的氨基化試劑溶液與GMAPolymer微 球以5-25ml/lg比例混合，在0-80。C下反應3-12h,反應後產物用水衝洗 至中性，得氨基化的微球；
或將上述GMA Polymer微球採用上述GMA Polymer整體柱替換，泵入 流速為0.001-0.5 mL/min，即得氨基化的整體柱。
2) 將步驟1 )得到每lg的氨基化的微球置於5-10 ml無水乙腈溶液中， 室溫條件下反應過夜，待用；無水乙腈溶液中含有40-100mMPOC13, 40-60 mM2, 4, 6-三甲基卩比嚏;
或將含有40-100 mM POC13, 40-60 mM 2, 4, 6-三甲基吡嚏的無水乙腈 溶液以0.001-0.5 mL/min的流速泵入步驟1)得到的氨基化的整體柱內,過 夜；
3) 將50-100倍微球或整體柱體積的水加入到步驟2)得產物中，使其 充分水解；
4) 將水解後的微球用醋酸或三氟乙酸將調至pH2-3，而後加入100 mM 的EDTA溶液(l g/5-10ml)，震蕩l-2小時，離心，棄去上清液，沉澱用水 洗滌3-5次，真空乾燥，即可到固定化金屬親和色譜固定相。
或將pH 2-3醋酸或三氟乙酸溶液泵入整體柱，流速為0.001-0.5 mL/min, 時間30-60 min,然後將1.00 mM的EDTA溶液泵入整體柱，流速為0.001-0.5 mL/min,時間30-60 min,再用水以0.001-0.5 mL/min的流速衝洗整體柱 30-60min,即可到固定化金屬親和色譜固定相。
所述氨基化試劑為氨水、3，3-二氨丙基亞胺、乙二胺或1,6-二氨基已烷。
固定相的預處理，使用前將所述固定化金屬親和色譜固定相與鋯或鐵離 子溶液以l:50-100(g/ml)的比例加入含有100-200 mM鋯或鐵離子的質量濃 度10%的醋酸溶液，放置過夜；離心，棄去溶液部份，再用質量濃度10% 的醋酸溶液洗滌3次，真空乾燥；
磷酸化肽段的分離、富集與純化，具體操作使用所得的固定相時，將固定化金屬親和色譜固定相與蛋白樣品以重量比為100-200: l混合，孵育30 分鐘，洗滌去除非磷酸化肽段，最後用質量濃度為12.5%的氨水洗脫。 本發明所具有的優點
本發明較傳統固定化金屬親和色譜固定相可有效提高對磷酸化肽段的 選擇性富集效果，且可以有效降低對非磷酸化肽段的非特異性吸附，基質 化學性質穩定，可在較廣的pH範圍內使用。
本發明通過化學反應將聚甲基丙烯酸縮水甘油酯類聚合物，鍵合上磷 酸酯基團，再與鋯、鐵等金屬離子螯合，實現對磷酸化肽段的高選擇性分 離、富集與純化。與傳統的IMAC材料相比，其具有非特異性吸附小，分 辨率高等優點，聚合物微球可以方便的裝填成各成IMAC柱，整體柱由於 體積可變，可以製成不同長度，不同內徑的IMAC柱，特別是製成微柱後， 適合於微量樣品中的磷酸化肽段的富集，並且可以方便地與^HPLC-ESI-MS 聯用，提高質譜的檢測限和靈敏度。


圖1為本發明的固定化金屬親和色譜固定相的合成路線示意圖。
圖2為採用本發明的固定化鋯離子親和色譜固定相富集(x-酪蛋白中磷 酸化肽段的MALDITOF MS譜圖。
圖3為釆用本發明的固定化鋯離子親和色譜固定相富集p-酪蛋白中磷 酸化肽段與標準磷酸化酪氨酸肽段混合的MALDITOF MS譜圖。
圖4為採用本發明的固定化鐵離子親和色譜固定相富集a-酪蛋白中磷 酸化肽段的MALDITOFMS譜圖。
具體實施例方式
下面結合

對本發明作具體敘述。 實施例1
固定相的製備方法包括以下步驟
GMA Polymer微球的製備由聚甲基丙烯酸縮水甘油酯與乙烯基甲基 丙烯酸縮水甘油酯所得的微球，通過溶脹法，以聚乙烯基苯為種子(0.5g)， 通過甲基丙烯酸縮水甘油酯(9.0 g)與乙烯基甲基丙烯酸縮水甘油酯(3.5 g)在 種子上聚合，2% (w/w)的AIBN為引發劑，在120 mL 0.1% SDS (w/w)溶 液反應，超聲震蕩至成固體，得到無孔的的聚合物微球，粒徑8-12 um。(參 見Boling Gong, Jinxia Zhu, Long Li, Kejuan Qiang, Li Ren, Synthesis of non-porous poly(glycidylmethacrylate國co-ethylenedimethacrylate) beads and their application in separation of biopolymers,Talanta， 2006, 68: 666-672。
l)氨基化反應釆用25%(質量濃度)的濃氨水為氨基化試劑與10 ml/ lg的上述製備的GMAPolymer微球混合，在60°C下反應3小時，反應後 產物用水衝洗至中性，得氨基化的微球；
或將上述GMA Polymer微球釆用上述GMA Polymer整體柱替換，泵入 速度為0.5mL/min 。2) 將步驟l)得到每lg的氨基化的微球置於10ml無水乙腈溶液中， 室溫條件下反應12小時，待用；無水乙腈溶液中含有40mMPOC13,40mM 2, 4, 6-三甲基吡啶;
或將無水乙腈溶液以0.5 mL/min的流速泵入步驟1 )得到氨基化的整體 柱內；使其用無水乙腈將反應體系置換至無水體系；
3) 將50倍微球或整體柱體積的水加入到步驟2)得產物中，使其充分 水解；
4) 將水解後的產物用醋酸將調至pH2-3，而後加入30)iL100mM的 EDTA溶液，震蕩1小時，離心，棄去上清液，沉澱水洗滌3次；真空乾燥， 即可到固定化金屬親和色譜固定相。
或將pH2-3醋酸溶液以流速為0.5mL/min，時間30min,泵入整體柱， 然後將100 mM的EDTA溶液以流速為0.5 mL/min，時間30min,泵入整 體柱，再用水以0.5 mL/min的流速衝洗整體柱30min,即可到固定化金屬 親和色譜固定相。
固定相的預處理，使用前將所述固定化金屬親和色譜固定相與鋯或鐵離 子溶液以1: 100(g/ml)的比例加入含有100 mM鋯離子的質量濃度10%的醋 酸溶液，放置過夜；離心，棄去溶液部份，再用質量濃度10%的醋酸溶液 洗滌3次，真空乾燥；
磷酸化肽段的分離、富集與純化，具體操作使用所得的固定相時，將固 定化金屬親和色譜固定相與蛋白樣品以重量比為100: 1混合，孵育30分 鍾，洗滌去除非磷酸化肽段，最後用質量濃度為12.5%的氨水洗脫。
實施例2
與實施例l不同之處在於
GMA Polymer微球的製備通過溶脹法，以聚乙烯基苯為種子，通過 甲基丙烯酸縮水甘油酯與乙烯基甲基丙烯酸縮水甘油酯在種子上聚合，得 到大孔的的聚合物微球，粒徑8-12 um。 (BolingGong,Lili Wang, Chaozhan Wang, Xindu Geng, Preparation of hydrophobic interaction chromatographic packings based on monodysperse
poly(glycidylmethacrylate畫co-ethylenedimethacrylate) beads and their application, Journal of Chromatography A, 2004， 1022:33-39。)
1) 氨基化反應將20g3,3-二氨丙基亞胺溶於lOOmL無水丙酮中，聚 甲基丙烯酸縮水甘油酯類聚合物微球加入該無水丙酮溶液中(l g/ 10 mL), 室溫條件下反應4h，反應後產物用水衝洗至中性，得氨基化的微球；
或將上述GMA Polymer微球釆用上述GMA Polymer整體柱替換，泵入 速度為0.5mL/min 。
2) 將步驟1 )得到每lg的氨基化的微球置於5 ml無水乙腈溶液中，室 溫條件下反應過夜，待用；無水乙腈溶液中含有100mMPOC13，60mM2,4, 6-三甲基p比p定；或將無水乙腈溶液以0.001 mL/min的流速泵入步驟1 )得到每lg的氨 基化的整體柱內；
3) 將100倍微球或整體柱體積的水加入到步驟2)得產物中，使其充 分水解；
4) 將水解後的微球用三氟乙酸將調至pH 2-3，而後加入100 mM的 EDTA溶液(l g/5-10ml)，震蕩2小時，離心，棄去上清液，沉澱用水洗滌 5次，真空乾燥，即可到固定化金屬親和色譜固定相。
或將pH2-3三氟乙酸溶液以泵入流速為0.001 mL/min,時間60 min整 體柱，然後將100 mM的EDTA溶液以流速為0.001 mL/min，時間60min， 泵入整體柱，再用水以0.001 mL/min的流速衝洗整體柱60 min，即可到固 定化金屬親和色譜固定相。
固定相的預處理，使用前將所述固定化金屬親和色譜固定相與鋯或鐵離 子溶液以1: 50(g/ml)的比例加入含有100 mM鋯離子的質量濃度10%的醋 酸溶液，放置過夜；離心，棄去溶液部份，再用質量濃度10%的醋酸溶液 洗滌3次，真空乾燥；
磷酸化肽段的分離、富集與純化，具體操作使用所得的固定相時，將固 定化金屬親和色譜固定相與蛋白樣品以重量比為200: 1混合，孵育30分 鍾，洗滌去除非磷酸化肽段，最後用質量濃度為12.5%的氨水洗脫。 實施例3
與實施例l不同之處在於
GMAPolymer微球的製備通過溶脹法，以聚乙烯基苯為種子(0.5 g)， 通過甲基丙烯酸縮水甘油酯(9.0 g)與乙烯基甲基丙烯酸縮水甘油酯(3.5 g)在 種子上聚合，2% (w/w)的AIBN為引發劑，在120 mL 0.1% SDS (w/w)溶 液反應，超聲震蕩至成固體，得到無孔的的聚合物微球，粒徑8-12 um。 (Boling Gong, Jinxia Zhu， Long Li, Kejuan Qiang, Li Ren, Synthesis of non-porous poly(glycidylmethacrylate-co-ethylenedimethacrylate) beads and their application in separation of biopolymers，Talanta, 2006, 68: 666-672)。
1)氨基化反應將乙二胺40g溶於100mLpH5左右的嗎啉乙烷碘酸 (MES),聚甲基丙烯酸縮水甘油酯類聚合物微球加入溶液中(lg/10mL)，室 溫條件下反應3h，反應後產物用水衝洗至中性，得氨基化的微球；
或將上述GMA Polymer微球釆用上述GMAPolymer整體柱替換，泵入 速度為0.5mL/min 。
2)將步驟1)得到每lg的氨基化的微球置於8 ml無水乙腈溶液中，室 溫條件下反應過夜，待用；無水乙腈溶液中含有60mMPOC13,50mM2,4, 6-三甲基吡P定；
或將無水乙腈溶液以0.05 mL/min的流速泵入步驟1 )得到每lg的氨基 化的整體柱內；
3 )將80倍微球或整體柱體積的水加入到步驟2 )得產物中，使其充分水解；4)將水解後的微球用三氟乙酸將調至pH 2-3，而後加入100 mM的 EDTA溶液(l g/5-10 ml),震蕩1.5小時，離心，棄去上清液，沉澱用水洗 滌4次，真空乾燥，即可到固定化金屬親和色譜固定相。或將pH2-3三氟乙酸溶液泵入整體柱，流速為0.001-0.5 mL/min,時間 30-60 min，然後將100 mM的EDTA溶液泵入整體柱，流速為0.001-0.5 mL/min，時間30-60 min，再用水以0.001-0.5 mL/min的流速衝洗整體柱 30-60min,即可到固定化金屬親和色譜固定相。 實施例4與實施例1不同之處在於GMA Polymer微球的製備首先在3%的KPS(過磷酸鉀)做引發劑，將 亞胺基二乙酸(IDA)衍生的GMA與苯乙烯在乙醇/水溶液中70攝氏度反應 12h，得到苯乙烯基-甲基丙烯酸縮水甘油酯-IDA-微球，粒徑100nm左右。 (C.Y. Chen, and C.Y Chen, Stability constants of water-soluble and latex types of chelating polymers containing iminodiacetic acid with some transition-metal ions. European Polymer Journal, 2003， 39: 991-1000.)1) 氨基化反應將1，6-二胺基己烷10g冰水洛中溶於pH7.5, 200 mM 磷酸鹽緩衝體系中，用濃HCl調節pH值保持在7.5，最終體積為100 mL,聚 甲基丙烯酸縮水甘油酯類聚合物微球加入該溶液中(l g/ 10 mL)， 4攝氏度 反應5h，反應後產物用水衝洗至中性，得氨基化的微球；或將上述GMA Polymer微球採用上述GMA Polymer整體柱替換，泵入 速度為0.001 mL/min 。2) 將步驟1)得到每lg的氨基化的微球置於7 ml無水乙腈溶液中，室 溫條件下反應過夜，待用；無水乙腈溶液中含有80mMPOC13,45mM2,4, 6-三甲基吡嚏；或將無水乙腈溶液以0.001-0.5 mL/min的流速泵入步驟1)得到每lg的氨基化的整體柱內；3) 將50-100倍微球或整體柱體積的水加入到步驟2)得產物中，使其充分水解；4) 將水解後的微球用醋酸或三氟乙酸將調至pH2-3，而後加入100 mM 的EDTA溶液(l g/5-10 ml),震蕩2小時，離心，棄去上清液，沉澱用水洗 滌3次，真空乾燥，即可到固定化金屬親和色譜固定相。或將pH2-3醋酸或三氟乙酸溶液泵入整體柱，流速為0.001-0.5 mL/min, 時間30-60 min, 然後將100 mM的EDTA溶液泵入整體柱，流速為0.001-0.5 mL/min,時間30-60 min,再用水以0.001-0.5 mL/min的流速衝洗整體柱 30-60min,即可到固定化金屬親和色譜固定相。應用例1樣品蛋白酶解溶液的製備1 mg的ot-酪蛋白和(3-酪蛋白的分別溶解在lmL, 50 mM的碳酸氫胺溶液中(pH 8.2)，按照與胰蛋白酶的質量比40:1 的比例加入胰蛋白酶進行酶解反應，反應時間為16 h，酶解溫度控制在37 °C，加入0.1%甲酸。獲得的蛋白酶解溶液置於冰箱中保存備用。磷酸化肽段的分離、富集與純化將實施例1中所得的固定化鋯離子 親和色譜固定相加入至乙腈，得最終濃度為30mg/mL。1. 將a-酪蛋白和卩-酪蛋白的酶解液2 pmol加入100 的10%醋酸溶液， 再加入10pL的實施例1的固定相，室溫下孵育30分鐘，然後在35000xg 下高速離心，棄去上層清液。2. 加入100 jiL含100 mM NaCl的10%醋酸溶液，振搖清洗5分鐘，然 後在35000xg下高速離心，棄去上層清液。3. 加入100 iliL的10%醋酸溶液，振搖清洗5分鐘，然後在335000xg下 高速離心，棄去上層清液。4. 加入100 pL的12.5%氨水，超聲清洗Zr02納米粒子5分鐘，然後 在35000xg下高速離心，收集上層清液。5. 將上步收集的上清液放入冷凍乾燥機濃縮。6. 用MALDI TOF MS分析(參見圖2、圖3 )從圖中可以看到所有的主要質譜峰均為磷酸化肽段，非磷酸化肽段的質 譜峰很少，即使有也強度很低，這說明所合成的固定化鋯離子親和色譜固 定相對磷酸化肽段具有很好的選擇性和較高特異性。而且對各種類型的磷 酸化肽段(蘇氨酸、絲氨酸和酪氨酸)都一樣有效。應用例2樣品蛋白酶解溶液的製備同應用例1。磷酸化肽段的分離、富集與純化釆用實施例2製備的固定化鐵離子 親和色譜固定相1. a-酪蛋白的酶解液用10。/。醋酸溶液調節pH值約為2,將2 pmol蛋白酶解液緩慢通過整體柱中。2. 用30 pL含100 mMNaCl的10%醋酸溶液，衝洗柱子。3. 用30 pL的10%醋酸溶液衝洗柱子。4. 用30)iL的12.5%氨水，衝洗柱子並收集。5. 將上步收集的上清液放入冷凍乾燥機濃縮乾燥。6. 用MALDI TOF MS分析(參見圖4 )從圖中可以看到所有的主要質譜峰均為磷酸化肽段，非磷酸化肽段的質 譜峰很少，即使有也強度很低，這說明所合成的固定化鐵離子親和色譜固 定相對磷酸化肽段具有很好的選擇性和較高特異性。
權利要求
1.一種固定化金屬的親和色譜固定相，其特徵在於固定相結構式為其中GMA Polymer微球，粒徑為100nm-50um。
2. 按權利要求l所述固定化金屬的親和色譜固定相，其特徵在於所述 GMAPolymer微球為聚甲基丙烯酸縮水甘油酯類聚合物微球。
3. 按權利要求2所述固定化金屬的親和色譜固定相，其特徵在於所述 聚甲基丙烯酸縮水甘油酯類聚合物微球為甲基丙烯酸縮水甘油酯的交聯均 聚物或甲基丙烯酸縮水甘油酯與烯烴的交聯共聚物微球。
4. 按權利要求3所述固定化金屬的親和色譜固定相，其特徵在於所述 甲基丙烯酸縮水甘油酯的交聯均聚物是指聚甲基丙烯酸縮水甘油酯-乙烯基 甲基丙烯酸縮水甘油酯(GMA-EDMA);甲基丙烯酸縮水甘油酯與烯烴的 交聯共聚物是指聚甲基丙烯酸縮水甘油酯與苯乙烯的的交聯共聚物。
5. —種權利要求l所述親和色譜固定相的製備方法，其特徵在於包括 以下步驟，.1 )氨基化反應將100-400 g/L的氨基化試劑溶液與GMAPolymer微 球以5-25ml/lg比例混合，在0-8(TC下反應3-12h,反應後產物用水衝洗 至中性，得氨基化的微球；或將上述GMA Polymer微球釆用上述GMA Polymer整體柱替換，泵入 流速為0.001-0.5 mL/min，即得氨基化的整體柱。.2) 將步驟1 )得到每lg的氨基化的微球置於5-10 ml無水乙腈溶液中， 室溫條件下反應過夜，待用；無水乙腈溶液中含有40-100mMPOC13, 40-60 mM2, 4, 6-三甲基吡啶；或將含有40-100 mM POC13， 40-60 mM 2， 4, 6-三甲基吡嚏的無水乙腈 溶液以0.001-0.5 mL/min的流速泵入步驟1)得到的氨基化的整體柱內,過 夜；.3) 將50-100倍微球或整體柱體積的水加入到步驟2)得產物中，使其 充分水解；.4) 將水解後的微球用醋酸或三氟乙酸將調至pH2-3，而後加入100 mM 的EDTA溶液(l g/5-10ml)，震蕩l-2小時，離心，棄去上清液，沉澱用水 洗滌3-5次，真空乾燥，即可到固定化金屬親和色譜固定相。或將pH2-3醋酸或三氟乙酸溶液泵入整體柱，流速為0.001-0.5 mL/min, 時間30-60 min,然後將100 mM的EDTA溶液泵入整體柱，流速為0.001-0.5 mL/min,時間30-60 min,再用水以0.001-0.5 mL/min的流速衝洗整體柱30-60min,即可到固定化金屬親和色譜固定相。
6. 按照權利要求5所述的固定化金屬的親和色譜固定相的製備方法，其 特徵在於所述氨基化試劑為氨水、3,3-二氨丙基亞胺、乙二胺或l,6-二氨 基&烷
7. —種權利要求1所述的親和色譜固定相的應用，其特徵在於固定相的預處理，使用前將所述固定化金屬親和色譜固定相與鋯或鐵離子溶液以 l:50-100(g/ml)的比例加入含有100-200 mM鋯或鐵離子的質量濃度10%的 醋酸溶液，放置過夜；離心，棄去溶液部份，再用質量濃度10%的醋酸溶 液洗滌3次，真空乾燥；磷酸化肽段的分離、富集與純化，具體操作使用所得的固定相時，將固 定化金屬親和色譜固定相與蛋白樣品以重量比為100-200: l混合，孵育30 分鐘，洗滌去除非磷酸化肽段，最後用質量濃度為12.5%的氨水洗脫。
全文摘要
本發明涉及分離與純化技術，具體是一種固定化金屬的親和色譜固定相及其製備方法。固定相結構如圖，其中GMAPolymer微球，粒徑為100nm-50um，GMAPolymer微球為聚甲基丙烯酸縮水甘油酯類聚合物微球。通過氨基化和磷酸脂化，得到一種具有高效的聚甲基丙烯酸縮水甘油酯類聚合物磷酸酯基新型固定化金屬親和色譜固定相的合成方法，通過與鋯離子和鐵離子螯合，用於磷酸化蛋白質組學中的研究，可用於磷酸化肽段高選擇性分離、富集與純化，同時較傳統固定相，降低了對非磷酸化肽段的非特異性吸附。
文檔編號B01J20/281GK101288844SQ20071001103
公開日2008年10月22日 申請日期2007年4月20日 優先權日2007年4月20日
發明者葉明亮, 周厚江, 順 封, 鄒漢法 申請人:中國科學院大連化學物理研究所