使用細胞系來製備傳染性囊病病毒及禽呼腸病毒的方法
2023-08-09 08:43:11
專利名稱：使用細胞系來製備傳染性囊病病毒及禽呼腸病毒的方法
技術領域：
本發明涉及一種使用細胞系製備傳染性囊(bursal)病病毒(IBDV)和禽呼腸病毒(ARV)的方法。更具體地講，本發明涉及一種用於製備IBDV和ARV的方法，該方法包括用IBDV或ARV感染細胞系，培養所說的受到感染的細胞系以便增殖IBDV或ARV以及從所說的受病毒感染的細胞中回收IBDV或ARV。對IBDV而言，上述細胞係為那些從禽類得到的細胞系，而對ARV而言為從禽類或者哺乳動物中得到的細胞系。本發明還涉及傳染性囊病和禽呼腸病毒傳染病的疫苗以及用所說的疫苗預防傳染性囊病和禽呼腸病毒傳染病的方法，而所說的疫苗包括作為主要成分的由所說的方法獲得的IBDV或ARV抗原。
傳染性囊病為一種由傳染性囊病病毒(下文也稱作「IBDV」)引起的雞急性傳染病。傳染性囊病為一種病毒疾病，該病的主要症狀為包括法氏囊在內的淋巴組織發生壞死。當感染雞時，IBDV抑制宿主的免疫應答，從而通過疫苗免疫作用的減小或者宿主抵抗力的降低而造成誘發並加劇了由機會性感染引起的多種疾病。針對IBDV，已經鑑定出兩種血清型(血清型1和2)。儘管血清型1和2都感染雞，但是血清型1的病毒誘導傳染性囊病的發作。
禽呼腸病毒(下文也稱作「ARV」)為一種由於腱鞘炎、腹瀉或者生長遲緩引起腿虛弱的傳染病。ARVs廣泛分布於雞中並且被分成許多的血清型。每種血清型都表現出不同的致病性，並且疾病的嚴重性在很大程度上受到上述多種致病性、感染的程度和途徑或者雞的年齡和免疫力的影響。IBDV或ARV對雞的感染將造成很大的經濟損失。
迄今為止，為了預防各種IBDV或ARV的感染，已經研製出了幾種疫苗並且可以通過商業途徑得到它們。通過把IBDV接種到雞中以使上述病毒在法氏囊中增殖、通過把IBDV接種到正在形成胚胎的蛋中以使上述病毒在絨毛膜尿囊的膜、胚胎或者尿囊中增殖、通過在雞胚成纖維細胞(CEF)中培養上述病毒以及類似的方法(家禽疾病，第8版，566-576，1984)已經生產出用於製備傳染性囊病疫苗的抗原物質。例如通過用ARV感染CEF以便增殖所說的病毒並從中回收該病毒，已經生產出用於製備ARV傳染病疫苗的抗原物質(T.Uchimura，日本家禽疾病協會雜誌，第26卷，26-30，1990)。
但是，如上所述的常規方法因其耗費體力和時間而有不足之處，這表現在以下方面當使用雞時，需要孵化許多的雞並從這些雞中無菌地取出法氏囊；在蛋的生產中，當使用正在形成胚胎的蛋時，需要孵化這些蛋並從正在形成胚胎的蛋中無菌地取出絨毛膜尿囊的膜、雞的胚胎或者尿囊液；或者當使用CEFs時，從正在形成胚胎的蛋中得到雞的胚胎，切割該胚胎並用酶法進行處理以便得到CEFs。另外在這些方法中，由於在生產疫苗時使用了不同的起始培養細胞或組織，所以也不容易保持疫苗質量的穩定。
反之，使用用於感染並增殖病毒的細胞系以便從受感染的細胞中獲得用於生產疫苗的病毒抗原將會使用於生產病毒的起始物質的製備更加容易，提高了生產率並且可以保持疫苗質量的穩定。
迄今為止，已經報導了許多從哺乳動物或禽類得到的細胞系(Witter R.L.與禽類病理學委員會，8，487-498，1979)，其中包括例如從倉鼠的肺中得到的HmLu-1細胞(H.Okumura，培養物中的癌細胞，292-298，1968)，從倉鼠的腎中得到的BHK-21細胞(LAN Macpherson和Michael Stoker，病毒學，16147-151，1962)，Vero細胞、即一種類人猿的細胞系(Y.Yasumura，A.Kawayoshi，Nippon Rinsho，第21卷，第6期，1201-1219，1963)，從雞的成淋巴細胞中得到的細胞系(Akiyama和Kato，BikenJ.，17105-116，1974)，用勞斯肉瘤病毒或致癌物處理的雞成纖維細胞(Kaaden等人，In Vitro，18827-834，1982；H.Ogura等人，Gann.，75410-414，1984；Dinowitz M.，國家癌症研究院雜誌，58307-312，1977；Lerman等人，國家癌症研究院雜誌，57295-301，1976)，用亞硝基胍處理的雞胚成纖維細胞CHCC-OU2細胞(H.Ogura等人，Acta Med Okayama，41(3)141-143，1987)，從用致癌物處理的特有的雞上皮肝細胞癌中得到的LMH細胞(Kawaguchi等人，癌症研究，474460-4464，1987)以及類似的細胞。
但是，這些常規的細胞系或者生產出一些用於無限增殖化的病毒，或者由於上述報導公開了病毒在宿主細胞中的增殖能力但卻從未公開所得到的病毒抗原的免疫原性從而證實上述細胞系不適於生產傳染性囊病或禽呼腸病毒傳染病的疫苗。
P.D.Lukert等人公開了IBDV在來自類人猿的哺乳動物細胞系中的增殖(Am.J.Vet.Res.，第36卷，第4期，1975539-540；日本專利公開號2-78634)。但是，Lukert等人也報導了隨給藥途徑而定在用在雞胚腎細胞中增殖的IBDV抗原免疫接種的雞和用為IBDV所適應的Vero細胞(非洲綠猴的腎細胞系)免疫接種的雞之間，保護雞免受IBDV病毒攻擊的能力有所不同。即用從雞胚腎細胞中得到的IBDV抗原免疫接種的那些雞表現為通過皮下給藥及通過飲水給藥都能完全地保護雞不受病毒的攻擊，而用從Vero細胞得到的IBDV免疫接種的那些雞在皮下給藥時可以保護雞不受病毒的攻擊，但通過飲水給藥時卻不能對雞進行保護。以不同的給藥途徑而觀察到的保護效果有所不同的理由可能在於用來自哺乳動物的細胞和來自禽類的細胞生產的病毒抗原在其糖類結構方面有所區別、從而引起抗原性的不同，結果可能會影響作為疫苗誘導免疫力的能力。也就是說，即使觀察到了病毒對宿主細胞的敏感性以及病毒在宿主細胞中的增殖，所得到的病毒的抗原性可能會隨著病毒與宿主細胞的結合而改變。因此，為了證實從病毒/宿主細胞的每種結合得到的病毒抗原適用於疫苗，就必須測定每種病毒抗原的免疫原性。Lukert等人的上述報導也表明來自哺乳動物的細胞系不利於生產傳染性囊病的疫苗。
從實施例1所示的結果顯而易見，儘管IBDV和ARV可以感染來自禽類的細胞系、LMH和CHCC-OU2，但除了IBDV和ARV以外還有多種禽類傳染性病毒僅僅可以感染LMH和CHCC-OU2中的一種或者這兩種細胞系都不能被感染。即存在多種禽類傳染性病毒，這些病毒在其對宿主細胞的敏感性以及在宿主細胞中的增殖方面可以有所不同。因此，儘管Lukert等人揭示出IBDV可以感染來自哺乳動物的細胞系並在其中進行增殖，但Lukert等人的公開文件中從未表明IBDV和ARV可以感染來自雞(禽類)的細胞系以及在其中進行的增殖。
在這種情況下，本發明人已經研究開發了一種通過簡單的方式用於製備作為疫苗的抗原物質的IBDV或ARV的方法，該方法生產率高並且質量穩定，結果發明人已經發現使用對病毒的感染和增殖具有特異性的細胞系可以生產出病毒或其抗原組分，其中病毒對宿主細胞的敏感性、病毒在宿主細胞中的增殖以及得到的病毒抗原的免疫原性都很顯著，而且病毒抗原可以誘導對IBDV或ARV具有中和活性的抗體的生產。即本發明人已經發現了IBDV對LMH細胞、對來自雞特有的上皮肝細胞癌的細胞生長良好的細胞系具有高敏感性，並且從受到IBDV感染的LMH細胞中得到的病毒的數量與從受IBDV感染的CEF細胞中得到的量相當。而且，本發明人已經製備了一種含有從LMH細胞得到的病毒抗原的疫苗並用所說的疫苗免疫接種雞，結果本發明人已經發現在雞的血清中誘導出了對IBDV具有高度中和活性的抗體。
本發明人也已經發現ARV對禽類的細胞系LMH細胞以及哺乳動物細胞系Vero、BHK-21和HmLu-1細胞具有高的敏感性並且在上述細胞中生長良好，並且發現生所說的病毒抗原製備的疫苗對ARV具有足夠的免疫原性。
本發明的一個目的為提供一種通過使用禽類細胞系LMH細胞來製備可以誘導對IBDV具有中和活性的抗體生產的IBDV抗原的方法以及一種通過使用禽類細胞系LMH細胞或哺乳動物細胞系Vero、BHK-21或HmLu-1細胞來製備可以誘導對ARV具有中和活性的抗體生產的ARV抗原的方法。
本發明的另一個目的為提供傳染性囊病和ARV傳染病的疫苗，該疫苗包括IBDV或ARV或生上述方法生產的這些病毒的抗原成分。
本發明的再一個目的為提供一種混合疫苗，該疫苗包括所說的傳染性囊病和ARV傳染病的疫苗中的至少一種疫苗以及一種來自至少一種微生物的抗原，而所說的微生物選自生其它的病毒、支原體、細菌和寄生蟲組成的組中。
本發明的方法的特徵在於使用了來自哺乳動物或者禽類的細胞系來增殖IBDV或ARV。
可以根據本發明的方法進行生產的IBDV菌株例如包括菌株SAL，D-78，OH，Variabt-A，2512，03，03BF，FK-78，K以及類似的菌株，其中優選減毒的IBDV菌株K。用於增殖病毒的宿主細胞可以是來自禽類的任意的細胞系，只要IBDV可以在其中進行增殖並且不生產不希望有的病毒即可。優選使用雞的細胞系。上述細胞系優選包括來自雞特有的上皮肝細胞癌的LMH細胞以及CHCC-OU2細胞，其中優選LMH細胞。
可以根據本發明的方法進行生產的ARV菌株例如包括菌株58-132E50，S1133，P100，CO8以及類似的菌株，其中優選菌株58-132E50。用於增殖病毒的宿主細胞可以是來自哺乳動物或禽類的任意的細胞系，只要ARV可以在其中進行增殖並且不生產不希望有的病毒即可。一種來自哺乳動物的細胞系優選包括類人猿的細胞系或倉鼠的細胞系，更優選Vero細胞、BHK-21細胞或HmLu-1細胞。一種來自禽類的細胞系優選包括一種雞的細胞系，更優選LMH細胞。
用於製備增殖IBDV或ARV的細胞和細胞培養物的培養基可以是任意的用於通常的組織培養的培養基。例如，可以使用補充有0至30％的小牛、雞或山羊血清的Eagle MEM培養基，其中補充的上述血清的量優選為2至5％。
為了增殖病毒，將製備成密度為每1ml培養基1×104至3×106個細胞的上述細胞的懸浮液與病毒溶液混合，其中優選的細胞密度為每1ml培養基1×105至1×106個細胞。可以通過使混合物在Roux燒瓶或滾瓶中保持靜止的靜置培養來培養上述細胞，可以通過採用中空纖維的附著培養來培養細胞，通過懸浮並培養附著在載體(例如微載體)上的細胞可以進行懸浮培養，或者可以通過懸浮並培養細胞而不必把細胞附著在載體上的懸浮培養以及類似的方式來培養細胞。另一方面，首先通過上述任意一種培養方法單獨培養細胞1至3天，之後將病毒溶液接種到培養的細胞中並繼續進行培養。可以在30至42℃、優選32至38℃的溫度範圍內進行細胞的培養。可以將培養持續到病毒的數量達到最大值時為止，優選的培養時間為2至8天。在氫離子濃度(pH)在6至8、優選6.5到7.5的範圍內以及溶氧(DO)在1至6 ppm、優選2至4ppm的範圍內可以使用發酵罐進行大規模培養。
可以使用通過本發明的方法製備的IBDV和ARV抗原作活疫苗或者在按照需要將所說的病毒抗原滅活後作為滅活疫苗。通過在1500rpm下離心由上述培養方法得到的培養溶液、移走用作病毒懸浮液的上清液、向其中加入穩定劑(例如乳糖)並且凍幹懸浮液便可以製備出活疫苗。為了製備滅活疫苗，向上述病毒懸浮液中加入如福馬林、戊二醛或β-丙醇酸內酯等的滅活劑從而使病毒滅活，然後向其中加入免疫增強劑，如氫氧化鋁、磷酸鋁、磷酸鉀、礦物油或非礦物油等。
本發明經過如上製備的疫苗可以誘導對病毒具有中和活性的抗體的生產，並且通過肌肉或皮下注射疫苗或將疫苗注射進入蛋中、通過噴霧的方式吸入、通過用滴注設備在眼或鼻中滴注或者把疫苗和飲用水混合來向家禽給藥。
也可以把本發明的傳染性囊病和禽呼腸病毒傳染病的疫苗按照混合疫苗來使用。當本發明的疫苗為活疫苗的形式時，將至少一種用於傳染性囊病或禽呼腸病毒傳染病的活疫苗與至少一種抗其它病毒的活疫苗結合起來，其中上述病毒選自由雞瘟病毒(NDV)、禽傳染性支氣管炎病毒(IBV)、禽傳染性喉氣管炎病毒(ILTV)、Marek’s病病毒(MDV)和禽腦脊髓炎病毒組成的組中。當本發明的疫苗為滅活疫苗的形式時，將至少一種用於傳染性囊病或禽呼腸病毒傳染病的滅活疫苗與至少一種抗其它病毒、細菌(例如大腸桿菌、副雞嗜血桿菌等)、支原體(例如雞敗血支原體、滑液支原體等)和寄生蟲(例如艾美球蟲屬)的滅活疫苗結合起來，其中上述病毒選自由NDV、IBV、卵下垂綜合症-1976病毒(egg drop syndrome-1976 virus)(EDSV)組成的組中。
根據本發明提供了傳染性囊病和禽呼腸病毒傳染病的疫苗來分別預防傳染性囊病和禽呼腸病毒傳染病。根據本發明的方法，可以在與常規方法相比成本更低的情況下穩定地供應質量恆定的疫苗。
通過下面的實施例將更為詳細地解釋本發明，但這不應構成對本發明的限制。實施例1(病毒對LMH和CHCC-OU2細胞的敏感性)將LMH細胞(ATCC No.CRL-2117)或CHCC-OU2細胞懸浮在補充有5％小牛血清的Eagle MEM培養基(pH 7.2)中，其中細胞的密度為6×105/ml，在把5ml懸浮液轉移到培養皿中之後，在37℃下、在CO2培養箱中培養細胞24小時。在移走培養上清液後，將各0.1ml(感染複數＝1)的ARV(菌株58-132E50)、IBDV(菌株K)、ILTV(菌株CE)、火雞的皰疹病毒(HVT)(菌株YT-7)、NDV(菌株B1)、IBV(菌株Nerima)或EDSV(菌株KE-80)接種到細胞中。在37℃下保持細胞靜止1小時並加入5ml補充有5％小牛血清的EagleMEM培養基之後，在37℃下再繼續培養5至7天。在培養開始後，定期地取出培養溶液以測定病毒的含量。用雞胚細胞通過50％的感染滴度來測定ARV和IBDV的病毒含量，用雞腎細胞通過50％的感染滴度測定病毒含量，用雞胚細胞通過噬斑方法(噬斑形成單位；PFU)測定HVT的病毒含量，用正在形成胚胎的雞蛋通過50％的感染滴度來測定NDV和IBV的病毒含量，用雞胚肝細胞通過50％的感染滴度來測定EDSV的病毒含量。結果顯示在表1中。
表1病毒菌株細胞(TCID50/ml)LMHCHCC-OU2ARV 58-132E50 109.0109.0IBDV K108.1108.6ILTV CE106.5-1)HVT YT-7 --NDV B1 - 106.3IBVNerima--EDSVKE-80--(注釋)1)沒有增殖如表1所示，ARV和IBDV在LMH和CHCC-OU2細胞中都進行了增殖，ILTV僅在LMH細胞中增殖，而NDV僅在CHCC-OU2細胞中增殖。其它的病毒對上述細胞沒有表現出敏感性。實施例2(製備IBDV抗原)將LMH細胞(ATCCNo.CRL-2117)以2×105/ml的密度懸浮在200ml補充有5％小牛血清的EagleMEM培養基(pH7.2)中。在感染複數為1的條件下，將懸浮液與減毒的IBDV菌株K(Y.Ohtaki，本家禽疾病協會雜誌，第18卷，特刊，1-15，1982)混合併且在滾瓶中攪拌混合物的同時在37℃下培養細胞3天。作為對照，將CEF細胞以2×106/ml的密度懸浮在200ml上述MEM培養基中，在感染複數為0.001的條件下將懸浮液與減毒的IBDV菌株K混合併且在滾瓶中攪拌混合物的同時在37℃下培養細胞3天。
在1500rpm下離心上述每種培養液並將得到的上清液當作病毒溶液來使用。根據日本用於動物的生物製品的最低需求量(由日本獸醫生物藥品協會出版，178-183，1993年6月)來測定病毒溶液的病毒含量。即在補充有5％小牛血清的EagleMEM培養基(pH7.2)中以1.2×106/ml的密度製備CEF細胞的懸浮液，在把0.5ml的懸浮液轉移到24孔板之後，在37℃下培養細胞24小時。在移走培養上清液後，向5個孔的每個孔中各加入0.2ml用病毒稀釋劑(磷酸鹽緩衝鹽水PBS)稀釋了10倍的樣品病毒溶液。在吸附1小時後，加入0.5ml補充有5％小牛血清的EagleMEM培養基(pH7.2)，在37℃下培養細胞6天並通過Behrens-Karber方法計算TCID50。在表2中顯示了結果。
表2細胞病毒的含量每個細胞所生產的病毒的數量(TCID50/ml) (TCID50/2×105細胞)LMH 108.1108.2CEF 108.2107.2如表2所示，結果表明按每個接種的細胞計算，根據本發明採用LMH細胞進行IBDV的培養可以生產出比採用CEF細胞培養高出大約10倍量的病毒。實施例3(用IBDV抗原免疫接種雞)在PBS中，在1052TCID50/ml的條件下製備出用在LMH細胞中增殖的IBDV製得的活疫苗以及用在CEF細胞中增殖的IBDV製得的可以通過商業途徑得到的活疫苗。將各0.2ml的疫苗經口服給藥至14天大的SPF雞，並在給藥後兩周按照日本用於動物的生物製品的最低需求量(由日本獸醫生物製品協會出版，178-183，1993年6月)來測定中和抗體滴度。即在1.2×106/ml的密度下在補充5％小牛血清的EagleMEM培養基(pH7.2)中製備CEF細胞的懸浮液並將5ml的懸浮液轉移到培養皿中。在培養24小時後，除去培養上清液並向其中接種0.1ml用等量的病毒溶液連續稀釋的血清的混合物來進行在4℃下溫育18小時的中和試驗(200PFU/0.1ml)。
在37℃下保持混合物靜止1小時後，加入第一層瓊脂培養基(含有1％瓊脂、0.295％胰蛋白 磷酸鹽肉湯和2％小牛血清的Eagle MEM培養基，pH7.2)並在37℃下靜止培養2天。然後，鋪制第二層瓊脂培養基(含有1％瓊脂、0.295％胰蛋白磷酸鹽肉湯和0.01％中性紅的EagleMEM培養基，pH7.2)，在37℃下靜止培養24小時。將可以使噬斑的數目減少50％的血清的最大稀釋度表示為中和抗體滴度。在表3中顯示出結果。
表3疫苗 細胞 雞的數量 中和抗體滴度＜200 200 800 ≥3200本發明的疫苗 LMH 10 004 6可以通過商業途徑 CEF 10 003 7得到的疫苗如表3所示，根據本發明從在LMH細胞中增殖的病毒製備的IBDV活疫苗表現出與可以通過商業途徑得到的疫苗的滴度相同，而該滴度足以預防雞感染上IBDV。實施例4(製備ARV抗原)在6×105/ml的密度下，把Vero細胞(ATCC No.CCL-81)、HmLu-1細胞(由農業與林業部發放，國家動物健康研究院)、BHK-21細胞(ATCCNo.CCL-10)或LMH細胞(ATCC No.CRL-2117)懸浮在200ml補充有5％小牛血清的EagleMEM培養基(pH7.2)中。在感染複數為1的條件下，將上述懸浮液與ARV菌株58-132E50(日本家禽疾病協會雜誌，23(2)38，1990)混合，並在滾瓶中攪拌混合物的同時在37℃下培養細胞7天。作為對照，將CEF細胞以2×106/ml的密度懸浮在200ml的上述MEM培養基中，在滾瓶中攪拌混合物的同時在37℃下培養細胞1天，在感染複數為0.001的條件下用ARV菌株58-132E50接種上述細胞並在37℃下再培養4天。在1500rpm下離心上述培養溶液並把得到的上清液當作病毒懸浮液來使用。
通過用補充有1％小牛血清的EagleMEM培養基(pH7.2)連續10倍地稀釋病毒懸浮液、把每種稀釋的懸浮液接種到在微滴板上培養了24小時的CEF細胞中、培養上述CEF細胞4天並測定50％的感染滴度來測定病毒懸浮液的病毒含量。在表4中顯示出結果。
表4細胞 病毒的含量每個細胞所生產的病毒的數量(TCID50/ml) (TCID50/6×105細胞)Vero 108.0108.0HmLu-1108.9108.9BHK-21108.9108.9LMH 108.3108.3CEF 108.5108.0如表4所示，結果表明按每個接種的細胞計算，根據本發明採用Vero細胞或LMH細胞進行ARV的培養可以生產出與採用CEF細胞培養相同量的病毒，而按每個接種的細胞計算，採用HmLu-1細胞或BHK-21細胞進行ARV的培養可以生產出比採用CEF細胞培養高出大約10倍量的病毒。實施例5(用ARV抗原免疫接種雞)向在LMH細胞、Vero細胞或HmLu-1細胞中增殖的ARV病毒的懸浮液中加入濃度為0.2％的福馬林，並且在37℃下使上述細胞致敏8天從而使病毒滅活。向其中加入等量的鋁含量為1.9mg/ml的氫氧化鋁凝膠的懸浮液，從而製備出滅活疫苗。
在大腿肌處，把如上製備的疫苗和用在CEF細胞中增殖的ARV製備的可以通過商業途徑得到的滅活疫苗經肌肉注射到35天大的SPF雞中。在注射後四周，從雞的體內取血並測定免疫接種的血清的中和抗體滴度。為了測定中和抗體滴度，在培養皿中在補充有5％(V/V)小牛血清的Eagle MEM培養基(pH7.2)上培養來自SPF雞的雞腎細胞，從而生成一單層細胞。
在用上述EagleMEM培養基稀釋免疫接種的血清後，將每種稀釋的血清與等量的含有200PFU/0.1ml的用於中和的病毒溶液混合，並且在4℃下致敏18小時。然後，將各0.1ml的致敏溶液接種到培養的細胞中並在37℃下保持上述混合物靜止60分鐘以進行吸附。之後加入第一瓊脂培養基並培養細胞4天，鋪制第二瓊脂培養基(含有1％瓊脂和0.5％中性紅的EagleMEM培養基，含量為2％，pH7.2)並測定噬斑的數量。將可以使噬斑的數量減少90％的血清的最大稀釋度表示為中和抗體滴度。在表5中顯示了結果。
表5疫苗 細胞 雞的數量 中和抗體滴度＜160 160 640 2560本發明的疫苗 LMH 100631本發明的疫苗 Vero 101720本發明的疫苗 HmLu-1100730可以通過商業途徑 CEF 100640得到的疫苗如表5所示，根據本發明從在Vero細胞、LMH細胞或HmLu-1細胞中增殖的病毒中製備的ARV疫苗表現出與可以通過商業途徑得到的疫苗的滴度相同，其中所說的滴度可以誘導在雞中生產中和抗體。
權利要求
1.一種用於製備傳染性囊病病毒或其抗原成分的方法，該方法包括用傳染性囊病病毒感染來自禽類的細胞系，培養所說的細胞系以增殖所說的病毒以及從所說的細胞系中回收所說的病毒。
2.權利要求1的方法，其中所說的來自禽類的細胞係為雞的細胞系。
3.權利要求2的方法，其中所說的雞的細胞係為LMH細胞或CHCC-OU2細胞。
4.通過如權利要求1至3之任一所述的方法製備的傳染性囊病病毒或其抗原成分。
5.叔利要求4的傳染性囊病病毒或其抗原成分，其中它們可以誘導對傳染性囊病病毒具有中和活性的抗體的生產。
6.一種傳染性囊病的疫苗，該疫苗包括如權利要求4或5所述的傳染性囊病病毒或其抗原成分。
7.一種用於預防傳染性囊病的方法，該方法包括把如權利要求6所述的疫苗向家禽給藥。
8.一種混合疫苗，該疫苗包括如權利要求6所述的疫苗以及一種來自至少一種微生物的抗原，而所說的微生物選自由其它的病毒、支原體、細菌和寄生蟲組成的組中。
9.一種用於製備禽呼腸病毒或其抗原成分的方法，該方法包括用禽呼腸病毒感染來自禽類或來自哺乳動物的細胞系，培養所說的細胞系以增殖所說的病毒以及從所說的細胞系中回收所說的病毒。
10.權利要求9的方法，其中所說的來自禽類的細胞係為雞的細胞系。
11.權利要求10的方法，其中所說的雞的細胞係為LMH細胞。
12.權利要求9的方法，其中所說的來自哺乳動物的細胞係為類人猿的細胞系。
13.權利要求12的方法，其中所說的類人猿的細胞係為Vero細胞。
14.權利要求9的方法，其中所說的來自哺乳動物的細胞係為倉鼠的細胞系。
15.權利要求14的方法，其中所說的倉鼠的細胞係為HmLu-1細胞或BHK-21細胞。
16.通過如權利要求9至15之任一所述的方法製備的禽呼腸病毒或其抗原成分。
17.權利要求16的禽呼腸病毒或其抗原成分，其中它們可以誘導對禽呼腸病毒具有中和活性的抗體的生產。
18.一種禽呼腸病毒傳染病的疫苗，該疫苗包括如權利要求16或17所述的禽呼腸病毒或其抗原成分。
19.一種用於預防禽呼腸病毒傳染病的方法，該方法包括把如權利要求18所述的疫苗向家禽給藥。
20.一種混合疫苗，該疫苗包括如權利要求18所述的疫苗以及一種來自至少一種微生物的抗原，而所說的微生物選自由其它的病毒、支原體、細菌和寄生蟲組成的組中。
全文摘要
本發明涉及一種用於製備傳染性囊病病毒(IBDV)或禽呼腸病毒(ARV)的方法,該方法包括用IBDV或ARV感染來自禽類或來自哺乳動物的細胞系,培養所說的細胞系以增殖病毒以及從所說的細胞系中回收所說的病毒;傳染性囊病或禽呼腸病毒傳染病的疫苗,其中所說的疫苗包括作為活性成分的IBDV或ARV抗原;以及一種通過使用所說的疫苗來預防傳染性囊病或禽呼腸病毒傳染病的方法。
文檔編號A61K39/15GK1202378SQ9811515
公開日1998年12月23日 申請日期1998年6月2日 優先權日1997年6月2日
發明者江副伸介, 河口德一, 銀永明弘, 北川知行, 藤川英雄 申請人:財團法人化學及血清療法研究所