薑黃素在製備甲狀腺癌治療劑中的應用的製作方法
2023-07-25 21:25:41 2
專利名稱：薑黃素在製備甲狀腺癌治療劑中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種治療甲狀腺癌的藥物，具體的說是將薑黃素及其衍生物用於在製備甲狀腺癌治療劑中的應用，屬於薑黃素的醫藥用途技術領域。
背景技術：
甲狀腺癌是內分泌系統最常見的腫瘤，是由數種不同生物學行為以及不同病理類型的癌腫組成，主要包括乳頭狀癌(papillary thyroid carainoma，PTC)、濾泡 ^ IS (follicular thyroid carainoma, FTC)> 未分化癌(undifferentiated thyroid carainoma，uDTC)、髓樣癌(medulla thyroid carcinoma，MTC))四種類型。甲狀腺癌的發病率為2 - 10/10萬，約佔全身惡性腫瘤的1%。據國際癌症學會資料統計，各國甲狀腺癌的發病率逐年增加。2009年，美國甲狀腺癌的新發病例數達37200， 死亡病例數為1630，主要是PTC發病率的增加。研究調查結果顯示，我國甲狀腺癌的發病率也在明顯增加。而且，在國內一些腫瘤醫院中，甲狀腺癌佔頭頸部腫瘤的首位。薑黃素(curcumin)是從姜科薑黃屬植物薑黃中提取得到的一種植物多酚。除薑黃外，咖喱、芥茉中也富含薑黃素，因其毒副作用小，已廣泛用作食品天然色素。同時薑黃素的藥理作用廣泛，是抗突變劑，也是抗癌劑，美國國家腫瘤研究所已將其列為第三代癌化學預防藥。近年來，對薑黃素在各種生物學體系的作用機制的研究越來越多，薑黃素顯著抑制腫瘤細胞增殖也得以證實。薑黃素抗腫瘤作用的分子機制相當複雜，其作用靶點從基因 (DNA)水平到mRNA水平及酶(蛋白質)水平，薑黃素可能在某一水平或在這幾個水平上同時產生作用。總結起來其抗癌機制有以下幾方面(1)細胞毒作用；(2)誘導腫瘤細胞凋亡； (3)誘導腫瘤細胞分化；(4)抑制腫瘤的侵襲與轉移。目前已有文獻報導薑黃素對多種腫瘤細胞具有殺傷作用，但薑黃素對甲狀腺癌細胞的作用國內外均尚無報導。我們通過研究發現薑黃素可特異性殺傷甲狀腺癌細胞而對正常甲狀腺細胞影響較小並能促進甲狀腺癌細胞凋亡，引起聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP) 的切割並顯著抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表達，同時能夠抑制甲狀腺癌細胞基質金屬蛋白酶-9的分泌和對細胞外基質的粘附，對甲狀腺癌細胞的增殖、遷移、粘附各環節都顯示出良好的幹預作用，可以用於製備治療甲狀腺癌藥物的應用。
發明內容
本發明的目的是提供薑黃素在製備治療甲狀腺癌藥物的用途。薑黃素化學命名1，7_bis_(4-hydroxy-3_methoxyphenyl)_1，6-heptadiene_3，5-dione,英文名為 curcumin，分子式為C21H2tlO6,分子量368. 37，對人體毒性小。本發明的技術方案薑黃素及其衍生物的應用，用於製備治療甲狀腺癌的藥物。抑制甲狀腺癌細胞增殖，使甲狀腺癌細胞接觸薑黃素，薑黃素能夠抑制甲狀腺癌細胞增殖。誘導甲狀腺癌細胞凋亡，使甲狀腺癌細胞接觸薑黃素，薑黃素能誘導甲狀腺癌細胞凋亡。誘導甲狀腺癌細胞凋亡，薑黃素誘導甲狀腺癌細胞凋亡的機制主要是通過促進甲狀腺癌細胞PARP的切割並抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表達。抑制甲狀腺癌細胞侵襲及轉移，使甲狀腺癌細胞接觸薑黃素，薑黃素能抑制甲狀腺癌細胞基質金屬蛋白酶一 9的分泌和對細胞外基質的粘附。所述薑黃素選用薑黃素、去甲氧基薑黃素、或雙去甲氧基薑黃素；薑黃素衍生物選用取代薑黃素中的甲氧基或雙甲氧基的基團後的衍生物。薑黃素及其衍生物用化學合成方法製備得到。薑黃素及其衍生物從植物提取得到。薑黃素及其衍生物用於製備治療甲狀腺癌藥物劑型為液體製劑、顆粒劑、片劑、 衝劑、膠丸、膠囊、緩釋劑、滴丸劑、口崩製劑或注射劑。腫瘤細胞最顯著的特點之一就是其生長不受機體控制，進入無限增殖狀態。這可能與細胞正常的生長調控機制發生障礙有關。我們研究發現薑黃素對於惡性程度不同的甲狀腺癌細胞均有不同程度的抑制增殖作用，其中以濾泡癌FTC-133最為敏感。30 μΜ薑黃素作用，FTC-133細胞死亡率達40. 9 士 5. 7%，而乳頭狀癌Kl為23. 3 士 8. 3%，未分化癌8505C 為7. 9士 1. 7%。目前臨床使用的抗癌藥物多無選擇性，有不同程度的毒副作用，藥物在消滅腫瘤細胞的同時也破壞正常細胞。然而，我們研究發現，對於原代培養的甲狀腺正常或癌細胞，高劑量的薑黃素(50 μ Μ)對甲狀腺癌細胞殺傷強度要遠遠高於對正常甲狀腺細胞的損害(50. 5士4. 68% vs20. 87士 1. 65%)，顯示出一定的腫瘤殺傷特異性。在腫瘤發生和發展過程中，細胞不僅發生了異常增殖，更重要的是其發生凋亡的能力和傾向降低了。薑黃素與Kl或FTC-133細胞作用對小時後，Armexin V/PI雙染，流式細胞儀檢測發現，薑黃素可梯度依賴性地誘導Kl和FTC-133細胞凋亡。當薑黃素濃度達 40 μ M時，所有細胞幾乎都發生了凋亡，其中Kl細胞的凋亡率為99. 41%，FTC-133細胞的凋亡率為99. 56%οBcl-2家族在細胞凋亡調控中有重要的作用，是目前細胞凋亡研究的熱點之一。 Bcl-2家族分為抑制凋亡和促進凋亡蛋白兩大類。Bcl-2和Bax分別是Bcl_2家族中最主要的抑制凋亡和促進凋亡蛋白。當細胞凋亡，DNA發生損傷時，聚腺苷二磷酸核糖聚合酶 (PARP)可作為細胞內的分子感受器，識另I」、結合到DNA斷裂處，並被激活。我們通過western blot方法檢測，薑黃素梯度依賴性地促進Kl和FTC-133細胞PARP的切割並抑制Bcl_2的表達，其中20 μ M以上薑黃素對Bcl-2的抑制效果極為顯著。腫瘤轉移是一個多步驟、多因素、多基因相互作用的連續複雜的過程。一個有轉移潛能的腫瘤細胞從離開腫瘤原發部位到新的部位紮根增殖，需要經過許多步驟1.原發部位的細胞轉化和腫瘤生長；2.原發部位血管生長因子的合成與分泌以及血管形成； 3.癌細胞浸潤薄壁淋巴管、小靜脈或毛細管的基質；4.癌細胞進入血循環或淋巴循環繼續存活並隨之轉運；5.癌細胞通過粘附新部位的內皮細胞或暴露的內皮下基底膜而被捕獲；6.癌細胞通過降解細胞外基質而滲出血管或淋巴管；7.癌細胞在新的部位增殖，形成腫瘤。目前已知，轉移的腫瘤細胞通常會發生一系列的生理生化過程，包括細胞骨架的重排、粘附能力的改變及運動能力的提高，並可合成分泌蛋白水解酶來降解基底膜等。這些變化在腫瘤細胞發生轉移的過程中起到了十分重要的作用。通過明膠酶譜分析，我們發現薑黃素與Kl細胞作用M小時後，可梯度依賴性地抑制基質金屬蛋白酶-9的活性，其中 25，50，100 μ M薑黃素能夠極顯著地抑制基質金屬蛋白酶-9的活性。同時對細胞做粘附分析，發現薑黃素可顯著降低甲狀腺癌細胞對胞外基質I型膠原蛋白的粘附。與溶劑對照組相比，以薑黃素12. 5，25，50 μ M處理FTC-133細胞，可將細胞粘附率分別由69. 2士7. 7%， 60. 8 士 1. 9%, 65. 5 士8. 4% 降低至 28. 5 士0. 9%，6 士4. 5%, 6. 8 士 5. 6%，抑制效果極其顯著。本發明的有益效果(1)提出了薑黃素的新用途；(2)薑黃素可特異性殺傷甲狀腺癌細胞而對正常甲狀腺細胞影響較小並能促進甲狀腺癌細胞凋亡，引起PARP的切割並顯著抑制抗凋亡Bcl-2的表達，同時能夠抑制甲狀腺癌細胞基質金屬蛋白酶-9的分泌並降低細胞對胞外基質的粘附，對甲狀腺癌細胞的增殖、遷移、粘附各環節都顯示出良好的幹預作用；(3)薑黃素對人體正常細胞安全、低毒，可用於治療甲狀腺癌的藥物。
圖1薑黃素對三種甲狀腺癌細胞(Kl，FTC-133，8505C)的生長抑制率比較。 薑黃素與細胞作用M小時後，Hoechest/PI雙染，計數細胞死亡率。溶劑對照(0.1% DMSO). *P<0. 05，**P<0. 01 vs 溶劑對照(學生 t 檢驗).
圖2薑黃素對原代培養甲狀腺正常及癌細胞生長抑制率比較。溶劑對照(0.1% DMSO). . *P<0. 05，#P<0.01 vs溶劑對照(學生t檢驗).##P<0. 01，原代甲狀腺正常細胞與原代甲狀腺癌細胞比較.
圖3薑黃素誘導甲狀腺癌細胞凋亡。薑黃素與細胞作用M小時後，Armexin V/PI雙染，流式細胞儀檢測。(A) Kl0 (B)FTC-133。圖4薑黃素促進甲狀腺癌細胞PARP的切割並抑制Bcl-2的表達。圖5薑黃素抑制甲狀腺癌細胞基質金屬蛋白酶-9的分泌。圖6薑黃素降低甲狀腺癌細胞對細胞外基質的粘附。
具體實施例方式下面結合具體實施例和附圖對本發明作進一步的說明。實施例1 薑黃素抑制原代培養或甲狀腺癌細胞株的增殖。1.實驗材料
下述實施例中的實驗方法和所用的試劑，如無特別說明，均為常規方法和常規試劑。1. 1細胞系本實驗中所用乳頭狀癌細胞株K1、濾泡狀癌細胞株FTC-133、未分化癌細胞株8505C均購自歐洲細胞庫。FTC-133細胞使用DMEM與Hams F-12培養基1 1(ν/ ν)培養；Kl細胞使用DMEM培養基、Hams F-12培養基與MCDB105培養基2 1 1 (ν/ν)培養， 8505C細胞使用MEM培養基培養。以上三株細胞在相應培養基中均添加10%胎牛血清(杭州四季青)培養。1. 2原代細胞培養流程取適量臨床手術並經病理鑑定的甲狀腺癌組織、癌旁或對側正常甲狀腺組織，用含1000 U/mL硫酸慶大黴素的1640培養基洗滌3次，去除包膜和結締組織，剪成1立方毫米大小碎塊。用0. (600 U/mL)膠原酶37°C消化，每15分鐘振搖一次，4小時後吸取上清，800 rpm離心10分鐘後，棄上清，細胞重懸於紅細胞裂解液中3 分鐘，再以1000 rpm離心10分鐘，棄上清。細胞重懸，用含15%胎牛血清和1U/L牛促甲狀腺激素(TSH)和100 U/mL青-鏈黴素的F-12培養基常規二氧化碳培養箱培養。1.3薑黃素的配製薑黃素(sigma公司，貨號C7727，純度彡80%)以二甲基亞碸 (DMSO)充分溶解，配成lOmg/mL貯存液，-20°C保存。臨用時以各細胞使用的培養基稀釋到所需藥物濃度。2.實驗方法
2. 1 細胞處理當原代培養的甲狀腺癌細胞或甲癌細胞株匯合度達80%左右時， 進行胰酶消化，按10000個細胞/孔接種於96孔板中，待細胞貼壁後給藥，以不同濃度的薑黃素(10，20，30，40，50 μ M)作用M小時，溶劑對照組按薑黃素最大劑量(50 μ Μ)中所含溶劑的量加入0. 18% (ν/ν)的DMS0。藥物作用結束後，加入碘化吡啶(PI) (10 μ g/ mL)和赫斯特33；342 螢光染料(Hoechest 33；342) (10 μ g/mL)染色10分鐘後，螢光顯微鏡下(Olympus，1X5)拍攝5個視野，計數。細胞死亡率(%)= (PI陽性染色細胞/總細胞數)X 100%。2.2實驗結果
薑黃素與甲狀腺癌細胞株或原代培養甲狀腺正常或癌細胞共孵M小時後，Hoechest 33342/PI雙染，計算PI陽性細胞比例。如圖1所示，薑黃素對於惡性程度不同的甲狀腺癌細胞均有不同程度的殺傷作用，其中以濾泡癌FTC-133最為敏感。30 μ M薑黃素作用，FTC-133細胞死亡率達40. 9 士 5. 7%，而乳頭狀癌Kl為23. 3 士8. 3%，未分化癌8505C為 7.9士 1.7%。圖2顯示，對於原代培養的甲狀腺正常或癌細胞，高劑量的薑黃素(50 μΜ)對甲癌細胞殺傷強度要遠遠高於對正常甲狀腺細胞的損害(50. 5士4. 68% vs20. 87士 1. 65%)， 顯示出一定的腫瘤殺傷特異性。實施例2 薑黃素對原代培養或甲狀腺癌細胞株的生長抑制作用。1.實驗材料
AnnexinV-FITC (異硫氰酸螢光素標記的磷脂結合蛋白5)細胞凋亡檢測試劑盒，BD Pharmingen 公司，貨號 556547。2.實驗方法
凋亡檢測按照BD公司ArmexinV-FITC細胞凋亡檢測試劑盒使用說明進行。細胞重懸於1 X結合緩衝液中，調整到1 X lOVmL,每100 μ L細胞懸液中加入5 μ L的Annexin V-FITC和5 μ L的PI溶液，室溫避光保存15分鐘。進行流式細胞儀分析前每管中加入400 μ L 1 X結合緩衝液。流式細胞儀，FLl和FL2通道分別檢測AnnexinV和PI陽性細胞，統計分析細胞凋亡率。3.實驗結果
薑黃素與Kl或FTC-133細胞作用M小時後，Annexin V/PI雙染，流式細胞儀檢測。 如圖3所示，薑黃素可梯度依賴性地誘導Kl和FTC-133細胞凋亡。當薑黃素濃度達40 μ M 時，所有細胞幾乎都發生了凋亡，其中Kl細胞的凋亡率為99. 41%，FTC-133細胞的凋亡率為 99. 56%ο實施例3 薑黃素促進甲狀腺癌細胞PARP的切割並抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表達。1.實驗材料
PARP —抗，碧雲天生物技術公司，1 1000稀釋；Bcl-2 —抗，碧雲天生物技術公司，1 1000稀釋；辣根過氧化物酶標記羊抗兔二抗，碧雲天生物技術公司，1 1000稀釋。ECL 化學發光試劑盒，碧雲天生物技術公司。2.實驗方法
細胞內凋亡蛋白表達的檢測採用Astern blot法。Kl和FTC-133細胞以4X IO5個/ mL的密度接種到6孔細胞培養板，每孔1 mL，37°C、5% CO2培養過夜後，加入不同濃度的薑黃素(10-50 μ Μ)或溶劑對照分組處理，培養結束後收集細胞，6000 rpm離心5分鐘，PBS 洗滌兩次，加入25 μ L細胞裂解緩衝液[150 mM NaCl，l%(w/v)已基苯基聚乙二醇，0.0 (w/v)疊氮化納，10 μ g/mL苯甲基磺醯氟，50 mM Tris-HCl (pH8. 0)]裂解細胞，裂解產物在41下10，000 rpm離心5離心，收集上清，考馬斯亮蘭法測定蛋白濃度。取30 yg蛋白，加入4 PL上樣緩衝液(500 mM三羥甲基氨基甲烷，600 mM 二硫蘇糖醇，20. 3% (w/v) 十二烷基硫酸鈉，30% (ν/ν)甘油，0.012% (w/v)溴酚蘭，pH 6. 8)，煮沸5分鐘，15% (w/v) SDS-PAGE凝膠電泳，溼法轉膜，硝酸纖維素膜室溫下置於含5% (w/v)脫脂牛奶的TBST緩衝液(137 mM NaCl, 20 mM三羥甲基氨基甲烷-HCl，0. 1%(ν/ν)吐溫_20，pH 7.6)中封閉1 小時，孵育PARP、Bcl-2 —抗，4°C過夜，用TBST緩衝液清洗三次，每次5分鐘，孵育辣根過氧化物酶標記的羊抗兔或抗鼠二抗，室溫下1小時，生物素標記法化學發光，X光膠片感光顯影。3.實驗結果
薑黃素與Kl或FTC-133細胞作用M小時後，western blot檢測PARP的切割及抗凋亡蛋白Bcl-2的表達水平。如圖4所示，薑黃素梯度依賴性地促進Kl和FTC-133細胞PARP的切割並抑制Bcl-2的表達。其中20 μ M以上薑黃素對Bcl-2的抑制效果尤為顯著。β -肌動蛋白(β -actin)作為內參對照。實施例4 薑黃素抑制甲狀腺癌細胞基質金屬蛋白酶的分泌。1.實驗材料
明膠，上海生工生物工程有限公司，貨號G9764。2.實驗方法
使用明膠酶譜分析可檢測基質金屬蛋白酶-2 (MMP-2，72KD)和9 (MMP-9，92KD)的活性。甲狀腺乳頭狀癌細胞株K1，以7. 5X IO4/孔懸於M孔培養板中，加入不同濃度的薑黃素(12. 5、25、50、100 μ M)或溶劑對照分組處理，在37°C、5%C02的培養箱中孵育M小時，離心，取上清。將 20 μ L 上清與 IOyL Tris 緩衝液(62.5 mM Tris-HCl，10% 甘油，0. 00125% 溴酚藍，12% SDS)混合，以含2 mg/mL明膠的10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳 (SDS-PAGE)分離。電泳後凝膠用洗滌緩衝液(50 mM Tris-HCl, 2. 5% Triton X-100,5 mM CaCl2,1 μ M ZnCl2,0. 05% NaN3)洗滌，每次30分鐘，以除去SDS，再以去離子水洗滌30分鐘， 重複以上洗滌步驟一次，然後將凝膠置於孵育緩衝液中(50 mM Tris-HCl, 5 mM CaCl2, ΙμΜ ZnCl2,0. 05% NaN3) 37°C孵育M小時，用蒸餾水洗兩次後再用0. 25%考馬斯亮藍R-250染色30 min，並用含10%醋酸和10%異丙醇的溶液脫色2小時。藍色背景上的亮帶(明膠降解區)即顯示蛋白裂解活性。3.實驗結果
薑黃素與Kl細胞作用M小時後，使用明膠酶譜法分析基質金屬蛋白酶-2和9的活性。 如圖5所示，薑黃素可梯度依賴性地抑制基質金屬蛋白酶-9的活性，其中25，50，100 μ M薑黃素能夠極顯著地抑制基質金屬蛋白酶-9的活性，而對基質金屬蛋白酶-2的活性基本沒有影響，各溶劑對照組基質金屬蛋白酶酶活無顯著變化。實施例5 薑黃素降低甲狀腺癌細胞對細胞外基質的粘附能力。1.實驗材料
鼠尾I型膠原，sigma,貨號C7661 ；BSA，上海申能博彩生物公司，貨號A0710。2.實驗方法
在96孔板內加入50 μ L用0.02 M醋酸稀釋的鼠尾I型膠原(50 μ g/mL)，4°C過夜。PBS 洗三次後，用0. BSA室溫封閉2小時，再以PBS洗滌三次。胰酶消化細胞，記數，稀釋成 2. 5X IOVmL的細胞懸液，每孔加入100 μ L細胞懸液，同時加入不同濃度的薑黃素(12. 5、 25,50 μ Μ)或溶劑對照處理，每組做三個平行的孔，37°C培養2小時。孵育完畢後，用溫熱的無血清培養基洗三次，洗去未粘附的細胞，以Hoechest 33342 (10 μ g/mL)染色10分鐘後，螢光顯微鏡拍照並計數。以只用BSA包被孔的細胞數作為空白對照，以加入細胞不經衝洗直接染色的孔的細胞數做為接種總細胞數，粘附細胞百分數通過以下公式計算得到，粘附細胞百分數(％)=[(膠原包被組細胞數一 BSA包被組細胞數)/不洗組細胞數]X 100%。3.實驗結果
細胞粘附是細胞遷移運動的首要條件。通過粘附分析，考察薑黃素對甲狀腺癌細胞與胞外基質I型膠原蛋白粘附能力的影響。如圖6所示，薑黃素可顯著降低甲狀腺癌細胞與胞外基質I型膠原蛋白的粘附。與溶劑對照組相比，以薑黃素12. 5，25，5(^11處理？幾-133 細胞，可將細胞粘附率分別由69. 2士7. 7%, 60. 8士 1. 9%, 65. 5士8. 4%降低至28. 5士0. 9%， 6士4. 5%, 6. 8士5. 6%，而各溶劑對照組對細胞的粘附能力影響不大。
權利要求
1.薑黃素及其衍生物的應用，用於製備治療甲狀腺癌的藥物。
2.根據權利要求1所述薑黃素及其衍生物的應用，其特徵在於抑制甲狀腺癌細胞增殖，使甲狀腺癌細胞接觸薑黃素，薑黃素能夠抑制甲狀腺癌細胞增殖。
3.根據權利要求1所述薑黃素及其衍生物的應用，其特徵在於誘導甲狀腺癌細胞凋亡，使甲狀腺癌細胞接觸薑黃素，薑黃素能誘導甲狀腺癌細胞凋亡。
4.根據權利要求3所述薑黃素及其衍生物的應用，其特徵在於誘導甲狀腺癌細胞凋亡，薑黃素誘導甲狀腺癌細胞凋亡的機制是通過促進甲狀腺癌細胞PARP的切割並抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表達。
5.根據權利要求1所述薑黃素及其衍生物的應用，其特徵在於抑制甲狀腺癌細胞侵襲及轉移，使甲狀腺癌細胞接觸薑黃素，薑黃素能抑制甲狀腺癌細胞基質金屬蛋白酶一 9 的分泌和對細胞外基質的粘附。
6.根據權利要求1所述的薑黃素及其衍生物的應用，其特徵在於所述薑黃素選用薑黃素、去甲氧基薑黃素、或雙去甲氧基薑黃素；薑黃素衍生物選用取代薑黃素中的甲氧基或雙甲氧基的基團後的衍生物。
7.根據權利要求1所述的薑黃素及其衍生物的應用，其特徵在於薑黃素及其衍生物用化學合成方法製備得到。
8.根據權利要求1所述的薑黃素及其衍生物的應用，其特徵在於薑黃素及其衍生物從植物提取得到。
9.根據權利要求1所述的薑黃素及其衍生物的應用，其特徵在於薑黃素及其衍生物用於製備治療甲狀腺癌藥物劑型為液體製劑、顆粒劑、片劑、衝劑、膠丸、膠囊、緩釋劑、滴丸劑、口崩製劑或注射劑。
全文摘要
本發明公開了薑黃素在製備甲狀腺癌治療劑中的應用，屬於薑黃素的醫藥用途技術領域。薑黃素可特異性殺傷甲狀腺癌細胞而對正常甲狀腺細胞影響較小。薑黃素能促進甲狀腺癌細胞凋亡，引起聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的切割並顯著抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表達，同時，薑黃素還能夠抑制甲狀腺癌細胞基質金屬蛋白酶-9的分泌以及細胞對胞外基質的粘附。以上結果顯示，薑黃素對甲狀腺癌細胞的增殖、遷移、粘附各環節都顯示出良好的幹預作用，可以用於製備治療甲狀腺癌藥物。
文檔編號A61P35/00GK102319234SQ20111020168
公開日2012年1月18日 申請日期2011年7月19日 優先權日2011年7月19日
發明者俞惠新, 包建東, 宋菲, 張弛羽, 張莉, 譚成 申請人:江蘇省原子醫學研究所