用於檢測HER2基因的FISH探針、其製備方法及應用與流程
2024-03-30 14:55:05 2
本發明屬於分子生物學領域，涉及醫學和生物技術，具體涉及一種用於檢測her2基因的fish探針，同時本發明還涉及該fish探針的製備方法及應用。
背景技術：
乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，發病率佔全身各種惡性腫瘤的7％～10％，僅次於宮頸癌。流行病學調查發現，5％～10％的乳腺癌是家族性的，有明顯的家族遺傳傾向。在40～60歲間、絕經期前後的婦女發病率較高。在我國，婦女乳腺癌發病率正逐年上升，並且顯示出年輕化趨勢。與30年前相比，我國乳腺癌死亡率上升了34.1％，其中城市上升了38.8％，它正以每年3％～4％的速度遞增，死亡率已經排在女性癌症死亡率之首。乳腺癌病因尚未完全闡明，但許多研究資料表明，乳腺癌的發生除去出生地的因素外，還與內源性或外源性雌激素的長期刺激：雌激素的活性和表皮生長因子受體(her2)的過表達對乳癌的發生有重要作用。
人類her-2/neu基因(her-2基因)定位於染色體17q21，其編碼產物為185kd的跨膜精蛋白p185，由1255個胺基酸組成，720—987位屬於酪氨酸激酶區。her-2/neu蛋白是具有酪氨酸蛋白激酶活性跨膜慵蛋白，是egfr家族成員之一。her-2/neu蛋白由胞外的配體結合區、單鏈跨膜區及胞內的蛋白酪氨酸激酶區三部分組成，由於目前尚未發現能與her-2/neu蛋白直接結合的配體.其主要通過與家族中其他成員包括egfr(herl/erbbi)，her3/erbb3，her4/erbb4形成異二聚體而與各自的配體結合。her-2/neu蛋白常為異二聚體首選伴侶，且活性常強於其它異二聚體。當與配體結合後，主要通過引起受體二聚化及胞漿內酪氨酸激酶區的自身磷酸化.激活酪氨酸激酶的活性。her-2/neu蛋白在胃癌中的表達情況及影響因素her-2/neu蛋白通常只在胎兒時期表達，成年以後只在極少數組織內低水平表達。然而在多種人類腫瘤中卻過度表達，如乳腺癌、卵巢癌、肺腺癌、原發性。腎細胞癌、子宮內膜癌等，並提示預後不良。螢光原位雜交的方法檢測乳腺癌細胞中her-2/neu基因(17q12)的擴增，作為判斷預後以及乳腺癌藥物治療，尤其是抗her-2單克隆抗體(赫賽汀)靶向治療的一項輔助檢測手段。
目前檢測her2基因的方法包括:免疫組織化學(ihc)法檢測her2蛋白過表達、螢光原位雜交(fish)法檢測her2基因拷貝數、酶聯免疫吸附試驗(elisa)檢測血清her2ecd或腫瘤組織p185。但病理常規工作中最實用的方法是ihc和fish。ihc較fish節約成本、簡單易行,但容易受到組織處理方法、固定時間等影響,其結果判斷和解釋存在較大的變異,而fish具有高度的重複性和可靠性。
技術實現要素：
本發明的目的是提供一種用於檢測her2基因的fish探針的製備方法。
一種用於檢測her2基因的fish探針的製備方法包括以下步驟：
a、提取探針合成模板：利用基因組dna提取試劑盒提取人類基因組dna，作為her2基因以及17號染色體著絲粒區域檢測探針合成的模板；
b、第一步pcr反應：採用第一組pcr反應引物，以人體基因組dna為模板，進行pcr體系的擴增，得到dna產物；
c、第二步pcr反應：採用第二組pcr反應引物，以與其對應的第一步pcr反應獲得的dna產物為模板進行pcr體系的擴增，得到第二步pcr反應產物；
d、純化：將第二步pcr反應產物進行瓊脂糖凝膠電泳，採用pcr產物凝膠回收試劑盒進行切膠、回收、純化，得到檢測her2基因的fish探針；
所述的第一組pcr反應引物包括her2基因第一組pcr反應引物和17號染色體著絲粒區域第一組pcr反應引物；
所述的第二組pcr反應引物包括her2基因第二組pcr反應引物和17號染色體著絲粒區域第二組pcr反應引物。
相對於現有技術，本發明具有以下有益效果：
利用兩對引物、分別進行兩步pcr獲得探針，如果第一次pcr體系的擴增產生了錯誤片斷，則第二次pcr體系的擴增能在錯誤片段上進行引物配對並擴增的概率極低，因此，增加了擴增特異性。同時通過兩步pcr放大，提高了探針製備效率且降低了生產成本。
進一步的，步驟b第一步pcr反應中包含以下組分：反應引物、模板、2×estaqmastermix。
進一步的，步驟c第二步pcr反應中包含以下組分：反應引物、模板、dntp、螢光標記的dutp、taqdna聚合酶、含mg2+的10×taq酶反應緩衝液。
本發明直接通過螢光標記的dutp在第二步pcr擴增反應過程中即可將探針產物進行螢光標記，操作方便、簡單、高效、經濟。
進一步的，所述her2基因第一組pcr反應引物包括以下15對：seqidno.1和seqidno.2、seqidno.3和seqidno.4、seqidno.5和seqidno.6、seqidno.7和seqidno.8、seqidno.9和seqidno.10、seqidno.11和seqidno.12、seqidno.13和seqidno.14、seqidno.15和seqidno.16、seqidno.17和seqidno.18、seqidno.19和seqidno.20、seqidno.21和seqidno.22、seqidno.23和seqidno.24、seqidno.25和seqidno.26、seqidno.27和seqidno.28、seqidno.29和seqidno.30；
所述her2基因第二組pcr反應引物包括以下15對：seqidno.46和seqidno.47、seqidno.48和seqidno.49、seqidno.50和seqidno.51、seqidno.52和seqidno.53、seqidno.54和seqidno.55、seqidno.56和seqidno.57、seqidno.58和seqidno.59、seqidno.60和seqidno.61、seqidno.62和seqidno.63、seqidno.64和seqidno.65、seqidno.66和seqidno.67、seqidno.68和seqidno.69、seqidno.70和seqidno.71、seqidno.72和seqidno.73、seqidno.74和seqidno.75。
進一步的，所述17號染色體著絲粒區域第一組pcr反應引物包括以下5對：seqidno.91和seqidno.92、seqidno.93和seqidno.94、seqidno.95和seqidno.96、seqidno.97和seqidno.98、seqidno.99和seqidno.100；
所述17號染色體著絲粒區域第二組pcr反應引物包括以下5對：seqidno.106和seqidno.107、seqidno.108和seqidno.109、seqidno.110和seqidno.111、seqidno.112和seqidno.113、seqidno.114和seqidno.115。
進一步的，所述her2基因第一組pcr反應產物包括seqidno.31-seqidno.45，所述17號染色體著絲粒區域第一組pcr反應產物包括seqidno.101-seqidno.105。
根據上述的製備方法得到的用於檢測her2基因的fish探針包括有標記螢光染料的、針對her2基因的第一組探針和針對人類17號染色體著絲粒區域的第二組探針，所述第一組探針選自seqidno.76-seqidno.90中的至少一條探針，所述第二組探針選自seqidno.116-seqidno.120中的至少一條探針，所述第一組探針與第二組探針所標記的螢光染料顏色不一樣。
fish探針應用於檢測her2基因的檢測方法包括以下步驟：
步驟一、製片：在載玻片上將細胞鋪成單層，用丙酮固定8-12分鐘，滅菌純水中煮沸20-25分鐘，在37℃孵箱中用蛋白酶消化3-5min，用2×ssc洗滌4-6min，放入70％乙醇、85％乙醇、100％乙醇中脫水各3min，室溫晾乾；
步驟二、雜交：將含有第一組探針和第二組探針的雜交液加至載玻片細胞區，蓋上蓋玻片，使其分布均勻，避免產生氣泡，載玻片封邊，放於85℃熱臺上變性4-6min，42℃孵箱中避光孵育18-20小時；
步驟三、洗片：去除蓋玻片，依次在2×ssc、0.1％np-40/2×ssc中清洗載玻片，然後放入70％乙醇、85％乙醇、100％乙醇中脫水各3min，室溫晾乾；
步驟四、核染：將核染液滴加至載玻片細胞區，蓋上蓋玻片，使其分布均勻，避免產生氣泡，避光染色5min，鏡檢觀察。
進一步的，所述雜交液包括以下成分：第一組探針中的至少一種、第二組探針中的至少一種、去離子甲醯胺、ssc、硫酸葡聚糖。
進一步的，所述核染液為hoechst33258粉末經pbs配製濃度為1μg/ml的溶液。
本發明設計了多條探針進行檢測，提高了檢測靈敏度，協同增加了螢光強度，便於更加快速、準確的讀取信號，方便結果判讀。
附圖說明
圖1為陰性細胞系pbmc染色結果。
圖2為陽性細胞系skbr3染色結果。
其中，箭頭指示為17號染色體著絲粒區域信號(綠色)，其餘為her2基因信號點(橙色)。
具體實施方式
實施例1
用於檢測her2基因的fish探針的製備方法
1、her2基因探針的製備。
her2基因探針的製備方法包括以下步驟：
a、提取探針合成模板：抽取健康人外周血5ml，利用ficoll密度梯度離心法分離外周血單個核細胞(pbmc)，利用基因組dna提取試劑盒提取pbmc基因組，即人類基因組dna，作為her2基因檢測探針合成的模板。
b、第一步pcr反應：採用seqidno.1—seqidno.30共15對pcr反應引物，每對引物分別以人體基因組dna為模板，進行15個pcr體系的擴增，得到dna產物，以第一對引物seqidno.1和seqidno.2為例的反應體系配製如下：
pcr反應程序為：95℃，5min；(95℃，30s；57℃，30s；72℃，40s)×35個循環；72℃，10min；4℃保存。
c、第二步pcr反應：採用seqidno.46—seqidno.75為15對第二步pcr反應引物，每對引物分別以與其對應的第一步pcr反應獲得的dna產物seqidno.31-seqidno.45為模板，進行15個pcr體系的擴增，得到第二步pcr反應產物，以引物對seqidno.46和seqidno.47為例的反應體系配製：
pcr反應程序為：95℃，5min；(95℃，30s；58℃，30s；72℃，40s)×30個循環；72℃，10min；4℃保存。
d、純化：將第二步pcr反應產物進行1％瓊脂糖凝膠電泳，採用pcr產物凝膠回收試劑盒進行切膠、回收、純化，得到檢測her2基因的fish探針seqidno.76—seqidno.90，最終獲得標記有tamra(橙色)的her2基因檢測探針。
2、人類17號染色體著絲粒區域檢測探針的製備
人類17號染色體著絲粒區域檢測探針的製備方法包括以下步驟：
a、提取探針合成模板：抽取健康人外周血5ml，利用ficoll密度梯度離心法分離外周血單個核細胞(pbmc)，利用基因組dna提取試劑盒提取pbmc基因組，即人類基因組dna，作為人類17號染色體著絲粒區域檢測探針的模板。
b、第一步pcr反應：採用seqidno.91—seqidno.100共5對pcr反應引物，每對引物分別以人體基因組dna為模板，進行5個pcr體系的擴增，得到dna產物，以第一對引物seqidno.91和seqidno.92為例的反應體系配製如下：
pcr反應程序為：95℃，5min；(95℃，30s；57℃，30s；72℃，40s)×35個循環；72℃，10min；4℃保存。
c、第二步pcr反應：採用seqidno.106—seqidno.115為5對第二步pcr反應引物，每對引物分別以與其對應的第一步pcr反應獲得的dna產物seqidno.101-seqidno.105為模板，進行5個pcr體系的擴增，得到第二步pcr反應產物，以引物對seqidno.106和seqidno.107為例的反應體系配製：
pcr反應程序為：95℃，5min；(95℃，30s；58℃，30s；72℃，40s)×30個循環；72℃，10min；4℃保存。
d、純化：將第二步pcr反應產物進行1％瓊脂糖凝膠電泳，採用pcr產物凝膠回收試劑盒進行切膠、回收、純化，得到人類17號染色體著絲粒區域檢測探針seqidno.116—seqidno.120，最終獲得標記有fluorescein(綠色)的17號染色體檢測探針。
實施例2
fish探針應用於檢測her2基因
1、her2基因拷貝數變異陰性細胞系pbmc染色
a、製片：調節pbmc細胞密度為4×106/ml，取20μl細胞液滴加至防脫載玻片上，用蓋玻片輕柔將細胞液鋪平成單層細胞，待細胞晾乾後滴加丙酮覆蓋住細胞區固定10min。傾斜玻片棄去丙酮，室溫晾乾後將玻片放入滅菌純水中沸水煮片20min。取出玻片，晾乾並恢復至室溫後，取適量胃蛋白酶消化液滴加至平鋪細胞區，然後將玻片放入37℃孵箱的溼盒中，消化3min。取出玻片，傾斜玻片棄去消化液，將其放入2×ssc中，室溫洗滌5min。取出玻片，傾斜去除液體，將其依次放入70％乙醇，85％乙醇，100％乙醇中脫水各3min，取出玻片室溫晾乾。
b、雜交：-20℃冰箱中取出製備好的雜交液，震蕩混勻後快速離心。取10μl加至細胞區，蓋上22×22mm蓋玻片，輕壓使雜交液分布均勻，避免產生氣泡。用封片膠沿蓋玻片邊緣封邊，將玻片放於85℃熱臺上，變性5min。轉入42℃孵箱的溼盒中，避光孵育過夜(18～20小時)。
c、洗片：取出雜交結束的玻片，去除橡皮膠及蓋玻片，放入37℃預熱的2×ssc中，洗滌10min。取出玻片，放入37℃預熱的0.1％np-40/2×ssc中，清洗5min。然後依次放入70％乙醇，85％乙醇，100％乙醇中脫水各3min，取出玻片室溫晾乾。
d、核染：取10μl核染液，滴加至細胞區，蓋上22×22mm蓋玻片，輕壓使雜交液分布均勻，避免產生氣泡。避光染色5min後即可鏡檢觀察。
於螢光顯微鏡下367/452(核染藍色)、552/576(her2探針橙色)、496/520(17號染色體綠色)濾光片下進行觀察。
陰性細胞系pbmc染色結果見圖1：圖中箭頭所指的染色信號點為綠色信號點，其餘信號點為橙色信號點，可見細胞核內橙色的信號點數(her2基因染色)與綠色的信號點數(17號染色體著絲粒染色)比值正常，為1。
2、her2基因拷貝數變異陽性細胞系skbr3染色
a、製片：調節skbr3細胞密度為4×106/ml，取20μl細胞液滴加至防脫載玻片上，用蓋玻片輕柔將細胞液鋪平成單層細胞，待細胞晾乾後滴加丙酮覆蓋住細胞區固定10min。傾斜玻片棄去丙酮，室溫晾乾後將玻片放入滅菌純水中沸水煮片20min。取出玻片，晾乾並恢復至室溫後，取適量胃蛋白酶消化液滴加至平鋪細胞區，然後將玻片放入37℃孵箱的溼盒中，消化3min。取出玻片，傾斜玻片棄去消化液，將其放入2×ssc中，室溫洗滌5min。取出玻片，傾斜去除液體，將其依次放入70％乙醇，85％乙醇，100％乙醇中脫水各3min，取出玻片室溫晾乾。
b、雜交：-20℃冰箱中取出製備好的雜交液，震蕩混勻後快速離心。取10μl加至細胞區，蓋上22×22mm蓋玻片，輕壓使雜交液分布均勻，避免產生氣泡。用封片膠沿蓋玻片邊緣封邊，將玻片放於85℃熱臺上，變性5min。轉入42℃孵箱的溼盒中，避光孵育過夜(18～20小時)。
c、洗片：取出雜交結束的玻片，去除橡皮膠及蓋玻片，放入37℃預熱的2×ssc中，洗滌10min。取出玻片，放入37℃預熱的0.1％np-40/2×ssc中，清洗5min。然後依次放入70％乙醇，85％乙醇，100％乙醇中脫水各3min，取出玻片室溫晾乾。
d、核染：取10μl核染液，滴加至細胞區，蓋上22×22mm蓋玻片，輕壓使雜交液分布均勻，避免產生氣泡。避光染色5min後即可鏡檢觀察。
於螢光顯微鏡下367/452(核染藍色)、552/576(her2探針橙色)、496/520(17號染色體綠色)濾光片下進行觀察。
陽性細胞系skbr3染色結果見圖2：圖中箭頭所指的染色信號點為綠色信號點，其餘信號點為橙色信號點，可見細胞核內橙色的信號點數(her2基因染色)與綠色的信號點數(17號染色體染色)比值結果增加，說明her2基因拷貝數增加。
上述實施例中各試劑組成如下：
胃蛋白酶：取40mg胃蛋白酶，加1ml去離子水溶解。
20×ssc：稱取nacl175g，檸檬酸三鈉88g，加入800ml去離子水，充分溶解並調ph至7.4左右，去離子水定容至1000ml，高壓滅菌。使用時取50ml20×ssc，加入450ml無菌去離子水，充分混勻後獲得2×ssc工作液。
50％硫酸葡聚糖：稱取0.5g硫酸葡聚糖，去離子水定容至1ml。
雜交液：以100μl雜交液為例，體系配製如下：
0.1％np-40/2×ssc：20×ssc100ml，np-401ml，去離子水899ml，用naoh調節ph值至7.0～7.5。
核染液：hoechst33258粉末經pbs配製濃度為1μg/ml的溶液。
以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，並不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護範圍之內。
sequencelisting
河北德路通生物科技有限公司
用於檢測her2基因的fish探針、其製備方法及應用
120
patentinversion3.3
1
20
dna
her2基因第一組pcr反應引物
1
agtacgcagtcgcggtacac20
2
21
dna
her2基因第一組pcr反應引物
2
ggtggtgacagtaaacagccc21
3
21
dna
her2基因第一組pcr反應引物
3
gaacaggacgcttgctttagt21
4
23
dna
her2基因第一組pcr反應引物
4
ctccctattttgtcaggatttca23
5
21
dna
her2基因第一組pcr反應引物
5
tgaatgaaaccatcagaaacg21
6
19
dna
her2基因第一組pcr反應引物
6
gctgccagggtctgagtct19
7
21
dna
her2基因第一組pcr反應引物
7
aggtgagtcgcaggacagaag21
8
22
dna
her2基因第一組pcr反應引物
8
gaaaacaaacagaaatcgggag22
9
21
dna
her2基因第一組pcr反應引物
9
gagccctgtcctgcctcttca21
10
20
dna
her2基因第一組pcr反應引物
10
acaatgcccagtcccggtgg20
11
23
dna
her2基因第一組pcr反應引物
11
gtagctttcctgactggactaac23
12
24
dna
her2基因第一組pcr反應引物
12
gtaaggataaggtggagttttgta24
13
20
dna
her2基因第一組pcr反應引物
13
gggaccggagaaaccagggg20
14
20
dna
her2基因第一組pcr反應引物
14
ggaggcggaggctgccaact20
15
21
dna
her2基因第一組pcr反應引物
15
gcaggggagacaaaatgaaag21
16
21
dna
her2基因第一組pcr反應引物
16
gaggggtgaggacatgaggag21
17
20
dna
her2基因第一組pcr反應引物
17
ggaggaagtgtggggaagag20
18
20
dna
her2基因第一組pcr反應引物
18
gccagtgaggggagattaaa20
19
23
dna
her2基因第一組pcr反應引物
19
gggcatttctggtctcagggata23
20
23
dna
her2基因第一組pcr反應引物
20
gcacaactcagggcaaaggggta23
21
21
dna
her2基因第一組pcr反應引物
21
gaaatccctctacttcccaag21
22
21
dna
her2基因第一組pcr反應引物
22
gaaacacagacgcatcccatc21
23
21
dna
her2基因第一組pcr反應引物
23
cagagtagaggtgagaaggaa21
24
21
dna
her2基因第一組pcr反應引物
24
ctataagcagagggagacaag21
25
21
dna
her2基因第一組pcr反應引物
25
ggaatgcaggtgtcatacagg21
26
20
dna
her2基因第一組pcr反應引物
26
gaaagaacaaggcagctcgg20
27
21
dna
her2基因第一組pcr反應引物
27
ggctacatgttcctgatctcc21
28
21
dna
her2基因第一組pcr反應引物
28
ggtctcccatctgctttcttt21
29
20
dna
her2基因第一組pcr反應引物
29
agtttggactttattgtgga20
30
20
dna
her2基因第一組pcr反應引物
30
aagatttctttgttggcttt20
31
389
dna
her2基因第一組pcr反應產物
31
agtacgcagtcgcggtacaccggctcacggtcgccctgggagccgctcgccagcgccgct60
gccccagctagcaggaccaaccgcgccgccaggccggccatcctttctccctggctcgcc120
gccgggggaggagcttaggagtatgaagcttccacttccggagtaaccggaagttcctgt180
gttctttattctactctccgctgaagtccacacagtttaaattaaagttcccggattttt240
gtgggcgcctgccccgcccctcgtccccctgctgtgtccatatatcgaggcgatagggtt300
aagggaaggcggacgcctgatgggttaatgagcaaactgaagtgttttccatgatctttt360
ttgaggtagggctgtttactgtcaccacc389
32
640
dna
her2基因第一組pcr反應產物
32
gaacaggacgcttgctttagtatcctctccctgctcacctcccctgcactcccatcagca60
ccgacccacacccaatctcatagaagccttgtagctaaggatcaccctttctcctccccc120
actctcctcaccccttgtcaacttttctttttcgtcctgggggttggaatgagtaagaag180
tagcctgggattccattcactcacttaacaaacatttctgagtccttagctctagcacct240
tgctaagcaaggcaaaatctccaggaggcaccattcacattgcattttctgtgaatggtg300
ctctggggagcagcattcacattgccttttctgtgaatggcaaattcttccagttaaata360
taacatgaatagtgtcccctggagttgaccacccaactgatactgactgagaagctgaaa420
tgaacaaaacaaccccttagccctccaggagctgaccggaaatccagtgctaatactact480
ttgcatcttacagattagttcttttacaatactgtttttttttcttttttcatttcattt540
tgtcctttctgtgactctgggatgagtctttttatgaggatcctcatataaagatggaca600
tttaggattaaagaggatgaaatcctgacaaaatagggag640
33
516
dna
her2基因第一組pcr反應產物
33
tgaatgaaaccatcagaaacgaattgtcccctgaaatcaagactttgtgattgccatagt60
tgtatgcttctcaaaggttcctcgtctcctcttccttggaccaaaagtcagaggcaagaa120
tgccctcattcataccccagtggtctatacctccagcagcaagtcgagtgagcaagtgat180
gtcctgaaaggcccagtggatcagtggaatgaagcgggcaggaagacttagtgctcctga240
aacaaggaatccagaatccaggagaaggatggctcagtggggctttcaagggacaagtat300
gggggttgaaggggtcactgtccctataccaaatccgaaaatattgtgaccaggaaccat360
tctgtccaactcttctatttcaggtggcaaagcaaagctatattcaagaccacatgcaaa420
gctactccctgagcaaagagtcacagataaaacgggggcaccagtagaatggccaggaca480
aacgcagtgcagcacagagactcagaccctggcagc516
34
463
dna
her2基因第一組pcr反應產物
34
aggtgagtcgcaggacagaagagtgctttttgtttcagcagagcagcctggggagagata60
aaagctactcctggggcctgggcctgcattcctgagatgtgggtaagaggggcccagggt120
cagagtgtctggcaagcttggctctgcccctttgctgtcctggagactagggctaatcct180
gggctcagggagtggcctccccatggttaggatacaagtgctcatcaagggccaccccta240
ggaaggaccaattttcctatcagaagcttctaagttatcctcctttggcccaaagggaca300
cctcaagcctactctgaggaactctttccaatgaactaattcctacagtcacttccccag360
caacctgtgcctcagcctcaaggcactgtggggtaggcctcagtttgtggcctggacatc420
ggactgtggaccagacgactcctcccgatttctgtttgttttc463
35
519
dna
her2基因第一組pcr反應產物
35
gagccctgtcctgcctcttcagtgtcagtggtcactccactgcccacaggctggggtctt60
gggcaaaacacacgcatctgccctgatctgagtttgctgccctctgtcccgcagtcagcc120
ccactctgttcccactccctctccccagccccctagctagacccctctcaccagcacccc180
tttcccttccctgagggtccccctcgctgtctttgtccctcagacatcctctttcctggg240
ctctcctgccaggccctgctggagggacagttaaggaggaaatcgaatcagcagcgccca300
cccctgccccccttcctctcctcttgtcagacaccagacgaggttttttcctctggcttc360
ccagctctgaatgggctcattctttttcagaggctcggcccctctcgagcctcctcccca420
gggcgtgagttctgaccccagctcctccccccatccccactccagccccctctccagctt480
gctccaccctctctaccgcccaccgggactgggcattgt519
36
534
dna
her2基因第一組pcr反應產物
36
gtagctttcctgactggactaacctttccggacacaacagcagggcaggggtggggcctg60
gggagaaaggacacctctaaccctgatcctaacatcccgatggcctctaaggctgcctgc120
acactcatccaggtgcaagccctccaaggtgtggtgtgatgaaccagtgactcctggagc180
caggtcagcgcatcctcttcccgcagggctgtaagctgcaggactgagaggcaggttgac240
caggtcctgggctggatgatggggtgagagtaaggggtcagttttgatacatgcccaact300
tttctctctagccctaagacatcctgggcaaattgcttacctcagttcccctgatcctca360
ccctaaccctaacaccagctcaagagaaaatagggatattgatggccatccagaagggct420
gctgtgttccatacacagcaatatttctcgaatgtttgtgacagcggtccaaggaataag480
ttaattttacattatcactctggatacctgtacaaaactccaccttatccttac534
37
630
dna
her2基因第一組pcr反應產物
37
gggaccggagaaaccaggggagccccccgggcagccgcgcgccccttcccacggggccct60
ttactgcgccgcgcgcccggcccccacccctcgcagcaccccgcgccccgcgccctccca120
gccgggtccagccggagccatggggccggagccgcagtgagcaccatggagctggcggcc180
ttgtgccgctgggggctcctcctcgccctcttgccccccggagccgcgagcacccaaggt240
gggtctggtgtggggaggggacggagcagcggcgggaccctgccctgtggatgccccgcc300
gaggtcccgcggccggcggggccagaggggcccggacgagctctcctatcccgaagttgt360
ggacagtcgagacgctcagggcagccgggccctggggccctcgggcgggagggggcagtt420
acacggcagcggctcgagatggcccatccaagagactggcgctttccaggctccgagggg480
ctccgggaacttgtcaaagaagttctctgaaattgttcagaaagttttcccgcaaagggt540
gtattgcgtagagcgcgcgcgcgcgtttccccccttcttgagccccctcaagctttctca600
aagcctttccagttggcagcctccgcctcc630
38
575
dna
her2基因第一組pcr反應產物
38
gcaggggagacaaaatgaaagtgttctgggagtcgtgggtggtctccataggtcagaggg60
tctggggagggagtgggtgtcatcgtggctgtgtgttgcccgaggggccctctgtgagtg120
agtgcatggccgtgttatctctgcaggtctacgccagggtgttcctcagttgtgtggtct180
ttgtatttgtgtgtctgggctttgtgttgccaaacagcagtctctctgctgacttgggga240
cacaggctgaactctgtcctctgcaggaactcccttaaggtgctgggccagatctgccat300
aaacagagggaggtagccttctatggccacgccttcttgctgaggaagaaggttcctctc360
ttccagggagtacatccttgccctccctgtttcccagacaagcatcttcacctctcatct420
tctgatgagaagggtgaggccatactgagctgtcaggctgagctgctgcccttcctcacc480
ttgggctgggagttgatcagggaatggcagttgctgcagagctggatttgagggctgggt540
tctctggatggggcctcctcatgtcctcacccctc575
39
556
dna
her2基因第一組pcr反應產物
39
ggaggaagtgtggggaagaggagggggtgcaagtgggtgaggcatggagtggggaggcct60
ccctcagggacatggacccttgagttctatttctgttcctccctcctgttcctccctctt120
tgtccttatctgcctagagaggtgggaatagaggccattctgagtatcactaggagacca180
ccagtttgtggccactggccactggcccaggcagggaacctgggggcttgccctaccagc240
ctctcccagcaatctgaaggcagggggtacctcgtattaccccctaggatttgaccttag300
gctccaacttgctgggagagcagtgcctctggtgtcagaccccaagccagcccttgtgct360
gtccctgaatctgcatgtagcctgtgggaggcggagcagtgaccggcaggaattctgggc420
agctcaggcacctgtgggcctgagggtgccctctgcccccacccttccgatctcctgggc480
aagacacgccaggtgattcatctcaccagagcagaaaaacaagttcaactgggcacttta540
atctcccctcactggc556
40
573
dna
her2基因第一組pcr反應產物
40
gggcatttctggtctcagggataccaggctggggtccaagtgggccaggtgtggcagttc60
agccctatgccccatggctgatggctcgcgctgggcaggtatgcagggctgacgtagtgc120
ctttgtggcagcagtttcgtggcacacattctgccagctggttctggagtcttgccctga180
ggaggtggccagggtgagggtgccagcgcaggaacctttggcgcatgcttcaccctggcc240
tgggatctgcagcctgggtccagatgcccacaactggaatctgacgctccttttctcttc300
atgggggactcccagaggtctctgcaatgaccagagccccggttgtcccatgcctcagct360
gcaactccagctgaccctccttccccactctctgggtggcattacgggggtgtggatccc420
ttgccaagaggttggcatgtgggtgtgctggaatggcatagggagaatgcaccgagtttg480
tttgcttgggagaggggcagggggtatccagaagattcatgattcgtcatcgcctctctt540
gggggatttttacccctttgccctgagttgtgc573
41
587
dna
her2基因第一組pcr反應產物
41
gaaatccctctacttcccaagcacgcaagctttctcctgctgttaaacctgcagtgtgca60
agggacatgggcggaggggtccttcagtcaggcttctccctgtctgaggtggcatgactt120
ggagtgagtttggatggggtggccaggtctgagaaggtcccccgccagtgtcctctgacc180
catctgctctctcctgccagtgtgcaccggcacagacatgaagctgcggctccctgccag240
tcccgagacccacctggacatgctccgccacctctaccagggctgccaggtggtgcaggg300
aaacctggaactcacctacctgcccaccaatgccagcctgtccttcctgcaggtgaggcc360
cgtgggcaacccagccaggccctgcctccagctgggctgagccctctgtttacaggtggg420
tggcagaagaaggtgccctgcccttctgtttcctctcttgttgtggtttctcaaccagga480
agtcctttctaacatctaacccccattcattttactgcagaatcagttgactctctctat540
aacgtggctggccgaggtcatgtctggatgggatgcgtctgtgtttc587
42
607
dna
her2基因第一組pcr反應產物
42
cagagtagaggtgagaaggaaggagagagctgcggtccacatgagcatctggacctagca60
tggacaactcactcctccctggctctcgctttgttcttgttgcgggtgtggtggtggtgg120
gactcaaagacggtaaagatagctttctctcctccctggggaatctgggggttgtttaaa180
aggcctgctcctcttttagaaggcaggagggccccaagggaagcagaaggtgacagaagg240
ggaaagggtcctctgatcattgctcaccccacagagatcttgaaaggaggggtcttgatc300
cagcggaacccccagctctgctaccaggacacgattttgtggaaggacatcttccacaag360
aacaaccagctggctctcacactgatagacaccaaccgctctcgggcctgtaagccatgc420
ccctccctgctgcctcttctctcagacagcctgaccccagccgcaaactcccaacttaca480
acccagtgcctgcccgccactgccccagccgcctacaccacccatttcctccctctctgt540
ccctcctgccatctccctgtgcctcttcatctctggggttctctgtcttgtctccctctg600
cttatag607
43
689
dna
her2基因第一組pcr反應產物
43
ggaatgcaggtgtcatacaggtgacatgggaggggtgggataacaggcttgggatgtctc60
ccctgggccaggtagtctccctagaaggtgatgctgatgagggtctggtgcccagggcgc120
cactcagccctcatcctgccctttgcccaacagtgacgcgcactgtctgtgccggtggct180
gtgcccgctgcaaggggccactgcccactgactgctgccatgagcagtgtgctgccggct240
gcacgggccccaagcactctgactgcctggtatgtgcctctgctttgtgcccaatgtgct300
ctaccccccaggatgcaaggggtgggcaccctgcctggtactgccctattgcccctggca360
caccagggcaaaacagcacagtgaaagccagccacctgtccccccaggcctgcctccact420
tcaaccacagtggcatctgtgagctgcactgcccagccctggtcacctacaacacagaca480
cgtttgagtccatgcccaatcccgagggccggtatacattcggcgccagctgtgtgactg540
cctgtccctgtgagtgccagggagaaacacagttttctcattttggtggggaggtttgtt600
tctgtaaatgggagcatatggggagcactgtctgcatcttgctttgagagctggtcatga660
cagttcctgccgagctgccttgttctttc689
44
683
dna
her2基因第一組pcr反應產物
44
ggctacatgttcctgatctccttagacaactacctttctacggacgtgggatcctgcacc60
ctcgtctgccccctgcacaaccaagaggtgacagcagaggatggaacacagcggtgtgag120
aagtgcagcaagccctgtgcccgaggtacccactcactgcccccgaggccagctgcagtt180
cctgtccctctgcgcatgcagcctggcccagcccaccctgtcctatccttcctcagaccc240
tcttgggacctagtctctgccttctactctctacccctggcccccctcagccctacaagt300
gtccctatatcccctgtcagtgtggggaggggcccggaccctgatgctcatgtggctgtt360
gacctgtcccggtatgaaggctgagacggccccttccccacccacccccacctcctcagt420
gtgctatggtctgggcatggagcacttgcgagaggtgagggcagttaccagtgccaatat480
ccaggagtttgctggctgcaagaagatctttgggagcctggcatttctgccggagagctt540
tgatgggtaagagtgggcacgatgacctgagacagtgtcagggcagacagagtcctgagg600
atccagatgtggcagcatctcttggggatggcaggagacagaagtggggggatcaagaat660
gcaaagaaagcagatgggagacc683
45
878
dna
her2基因第一組pcr反應產物
45
agtttggactttattgtggaggcagcggggagccaaggcaggttttagagtaggagaggg60
tccaagcctgtgggtcacccttccgacttccctttccgaatgccaaacaccttcatgtcc120
cccgtgggccccctttgtccctcccaccccaaactagccctcaatccctgaccctggctt180
ccgcccccagccctctgacgtccatcatctctgcggtggttggcattctgctggtcgtgg240
tcttgggggtggtctttgggatcctcatcaagcgacggcagcagaagatccggaagtaca300
cgatgcggagactgctgcaggaaacggaggtgaggcggggtgaagtcctcccagcccgcg360
tggggtctgcaccggcccccggcactgacccaccaccccctcaccccagctggtggagcc420
gctgacacctagcggagcgatgcccaaccaggcgcagatgcggatcctgaaagagacgga480
gctgaggaaggtgaaggtgcttggatctggcgcttttggcacagtctacaaggtcagggc540
caggtcctggggtgggcggccccagaggatgggggcggtgcctggaggggtgtggtcggc600
agttctgatgggaggggcaagagctggaggcagtgtttgggggagggcagttacagcgga660
gaagggagcggggccaagccctagggtggtgaaggatgtttggaggacaagtaatgatct720
cctggaaggcaggtaggatccagcccacgctcttctcactcatatcctcctctttctgcc780
cagggcatctggatccctgatggggagaatgtgaaaattccagtggccatcaaagtgttg840
agggaaaacacatcccccaaagccaacaaagaaatctt878
46
17
dna
her2基因第二組pcr反應引物
46
acggtcgccctgggagc17
47
21
dna
her2基因第二組pcr反應引物
47
atcatggaaaacacttcagtt21
48
20
dna
her2基因第二組pcr反應引物
48
cacccaatctcatagaagcc20
49
21
dna
her2基因第二組pcr反應引物
49
agactcatcccagagtcacag21
50
25
dna
her2基因第二組pcr反應引物
50
gattgccatagttgtatgcttctca25
51
19
dna
her2基因第二組pcr反應引物
51
tgtgctgcactgcgtttgt19
52
21
dna
her2基因第二組pcr反應引物
52
cagcagagcagcctggggaga21
53
20
dna
her2基因第二組pcr反應引物
53
tctggtccacagtccgatgt20
54
19
dna
her2基因第二組pcr反應引物
54
ggggtcttgggcaaaacac19
55
19
dna
her2基因第二組pcr反應引物
55
agggtggagcaagctggag19
56
19
dna
her2基因第二組pcr反應引物
56
caacagcagggcaggggtg19
57
21
dna
her2基因第二組pcr反應引物
57
ggaccgctgtcacaaacattc21
58
20
dna
her2基因第二組pcr反應引物
58
ttcccacggggccctttact20
59
20
dna
her2基因第二組pcr反應引物
59
agcgccagtctcttggatgg20
60
19
dna
her2基因第二組pcr反應引物
60
cgtgggtggtctccatagg19
61
19
dna
her2基因第二組pcr反應引物
61
ctgcagcaactgccattcc19
62
20
dna
her2基因第二組pcr反應引物
62
ctccctctttgtccttatct20
63
20
dna
her2基因第二組pcr反應引物
63
ttgaacttgtttttctgctc20
64
19
dna
her2基因第二組pcr反應引物
64
gttcagccctatgccccat19
65
19
dna
her2基因第二組pcr反應引物
65
ggataccccctgcccctct19
66
19
dna
her2基因第二組pcr反應引物
66
tctccctgtctgaggtggc19
67
19
dna
her2基因第二組pcr反應引物
67
tgaatgggggttagatgtt19
68
19
dna
her2基因第二組pcr反應引物
68
ttcttgttgcgggtgtggt19
69
19
dna
her2基因第二組pcr反應引物
69
ggaaatgggtggtgtaggc19
70
19
dna
her2基因第二組pcr反應引物
70
gccactcagccctcatcct19
71
19
dna
her2基因第二組pcr反應引物
71
gaaacaaacctccccacca19
72
19
dna
her2基因第二組pcr反應引物
72
cagttcctgtccctctgcg19
73
19
dna
her2基因第二組pcr反應引物
73
ttctgtctcctgccatccc19
74
19
dna
her2基因第二組pcr反應引物
74
ccaaactagccctcaatcc19
75
19
dna
her2基因第二組pcr反應引物
75
gctcccttctccgctgtaa19
76
329
dna
第一組探針
76
acggtcgccctgggagccgctcgccagcgccgctgccccagctagcaggaccaaccgcgc60
cgccaggccggccatcctttctccctggctcgccgccgggggaggagcttaggagtatga120
agcttccacttccggagtaaccggaagttcctgtgttctttattctactctccgctgaag180
tccacacagtttaaattaaagttcccggatttttgtgggcgcctgccccgcccctcgtcc240
ccctgctgtgtccatatatcgaggcgatagggttaagggaaggcggacgcctgatgggtt300
aatgagcaaactgaagtgttttccatgat329
77
501
dna
第一組探針
77
cacccaatctcatagaagccttgtagctaaggatcaccctttctcctcccccactctcct60
caccccttgtcaacttttctttttcgtcctgggggttggaatgagtaagaagtagcctgg120
gattccattcactcacttaacaaacatttctgagtccttagctctagcaccttgctaagc180
aaggcaaaatctccaggaggcaccattcacattgcattttctgtgaatggtgctctgggg240
agcagcattcacattgccttttctgtgaatggcaaattcttccagttaaatataacatga300
atagtgtcccctggagttgaccacccaactgatactgactgagaagctgaaatgaacaaa360
acaaccccttagccctccaggagctgaccggaaatccagtgctaatactactttgcatct420
tacagattagttcttttacaatactgtttttttttcttttttcatttcattttgtccttt480
ctgtgactctgggatgagtct501
78
448
dna
第一組探針
78
gattgccatagttgtatgcttctcaaaggttcctcgtctcctcttccttggaccaaaagt60
cagaggcaagaatgccctcattcataccccagtggtctatacctccagcagcaagtcgag120
tgagcaagtgatgtcctgaaaggcccagtggatcagtggaatgaagcgggcaggaagact180
tagtgctcctgaaacaaggaatccagaatccaggagaaggatggctcagtggggctttca240
agggacaagtatgggggttgaaggggtcactgtccctataccaaatccgaaaatattgtg300
accaggaaccattctgtccaactcttctatttcaggtggcaaagcaaagctatattcaag360
accacatgcaaagctactccctgagcaaagagtcacagataaaacgggggcaccagtaga420
atggccaggacaaacgcagtgcagcaca448
79
400
dna
第一組探針
79
cagcagagcagcctggggagagataaaagctactcctggggcctgggcctgcattcctga60
gatgtgggtaagaggggcccagggtcagagtgtctggcaagcttggctctgcccctttgc120
tgtcctggagactagggctaatcctgggctcagggagtggcctccccatggttaggatac180
aagtgctcatcaagggccacccctaggaaggaccaattttcctatcagaagcttctaagt240
tatcctcctttggcccaaagggacacctcaagcctactctgaggaactctttccaatgaa300
ctaattcctacagtcacttccccagcaacctgtgcctcagcctcaaggcactgtggggta360
ggcctcagtttgtggcctggacatcggactgtggaccaga400
80
400
dna
第一組探針
80
cagcagagcagcctggggagagataaaagctactcctggggcctgggcctgcattcctga60
gatgtgggtaagaggggcccagggtcagagtgtctggcaagcttggctctgcccctttgc120
tgtcctggagactagggctaatcctgggctcagggagtggcctccccatggttaggatac180
aagtgctcatcaagggccacccctaggaaggaccaattttcctatcagaagcttctaagt240
tatcctcctttggcccaaagggacacctcaagcctactctgaggaactctttccaatgaa300
ctaattcctacagtcacttccccagcaacctgtgcctcagcctcaaggcactgtggggta360
ggcctcagtttgtggcctggacatcggactgtggaccaga400
81
435
dna
第一組探針
81
caacagcagggcaggggtggggcctggggagaaaggacacctctaaccctgatcctaaca60
tcccgatggcctctaaggctgcctgcacactcatccaggtgcaagccctccaaggtgtgg120
tgtgatgaaccagtgactcctggagccaggtcagcgcatcctcttcccgcagggctgtaa180
gctgcaggactgagaggcaggttgaccaggtcctgggctggatgatggggtgagagtaag240
gggtcagttttgatacatgcccaacttttctctctagccctaagacatcctgggcaaatt300
gcttacctcagttcccctgatcctcaccctaaccctaacaccagctcaagagaaaatagg360
gatattgatggccatccagaagggctgctgtgttccatacacagcaatatttctcgaatg420
tttgtgacagcggtc435
82
418
dna
第一組探針
82
ttcccacggggccctttactgcgccgcgcgcccggcccccacccctcgcagcaccccgcg60
ccccgcgccctcccagccgggtccagccggagccatggggccggagccgcagtgagcacc120
atggagctggcggccttgtgccgctgggggctcctcctcgccctcttgccccccggagcc180
gcgagcacccaaggtgggtctggtgtggggaggggacggagcagcggcgggaccctgccc240
tgtggatgccccgccgaggtcccgcggccggcggggccagaggggcccggacgagctctc300
ctatcccgaagttgtggacagtcgagacgctcagggcagccgggccctggggccctcggg360
cgggagggggcagttacacggcagcggctcgagatggcccatccaagagactggcgct418
83
486
dna
第一組探針
83
cgtgggtggtctccataggtcagagggtctggggagggagtgggtgtcatcgtggctgtg60
tgttgcccgaggggccctctgtgagtgagtgcatggccgtgttatctctgcaggtctacg120
ccagggtgttcctcagttgtgtggtctttgtatttgtgtgtctgggctttgtgttgccaa180
acagcagtctctctgctgacttggggacacaggctgaactctgtcctctgcaggaactcc240
cttaaggtgctgggccagatctgccataaacagagggaggtagccttctatggccacgcc300
ttcttgctgaggaagaaggttcctctcttccagggagtacatccttgccctccctgtttc360
ccagacaagcatcttcacctctcatcttctgatgagaagggtgaggccatactgagctgt420
caggctgagctgctgcccttcctcaccttgggctgggagttgatcagggaatggcagttg480
ctgcag486
84
417
dna
第一組探針
84
ctccctctttgtccttatctgcctagagaggtgggaatagaggccattctgagtatcact60
aggagaccaccagtttgtggccactggccactggcccaggcagggaacctgggggcttgc120
cctaccagcctctcccagcaatctgaaggcagggggtacctcgtattaccccctaggatt180
tgaccttaggctccaacttgctgggagagcagtgcctctggtgtcagaccccaagccagc240
ccttgtgctgtccctgaatctgcatgtagcctgtgggaggcggagcagtgaccggcagga300
attctgggcagctcaggcacctgtgggcctgagggtgccctctgcccccacccttccgat360
ctcctgggcaagacacgccaggtgattcatctcaccagagcagaaaaacaagttcaa417
85
453
dna
第一組探針
85
gttcagccctatgccccatggctgatggctcgcgctgggcaggtatgcagggctgacgta60
gtgcctttgtggcagcagtttcgtggcacacattctgccagctggttctggagtcttgcc120
ctgaggaggtggccagggtgagggtgccagcgcaggaacctttggcgcatgcttcaccct180
ggcctgggatctgcagcctgggtccagatgcccacaactggaatctgacgctccttttct240
cttcatgggggactcccagaggtctctgcaatgaccagagccccggttgtcccatgcctc300
agctgcaactccagctgaccctccttccccactctctgggtggcattacgggggtgtgga360
tcccttgccaagaggttggcatgtgggtgtgctggaatggcatagggagaatgcaccgag420
tttgtttgcttgggagaggggcagggggtatcc453
86
415
dna
第一組探針
86
tctccctgtctgaggtggcatgacttggagtgagtttggatggggtggccaggtctgaga60
aggtcccccgccagtgtcctctgacccatctgctctctcctgccagtgtgcaccggcaca120
gacatgaagctgcggctccctgccagtcccgagacccacctggacatgctccgccacctc180
taccagggctgccaggtggtgcagggaaacctggaactcacctacctgcccaccaatgcc240
agcctgtccttcctgcaggtgaggcccgtgggcaacccagccaggccctgcctccagctg300
ggctgagccctctgtttacaggtgggtggcagaagaaggtgccctgcccttctgtttcct360
ctcttgttgtggtttctcaaccaggaagtcctttctaacatctaacccccattca415
87
436
dna
第一組探針
87
ttcttgttgcgggtgtggtggtggtgggactcaaagacggtaaagatagctttctctcct60
ccctggggaatctgggggttgtttaaaaggcctgctcctcttttagaaggcaggagggcc120
ccaagggaagcagaaggtgacagaaggggaaagggtcctctgatcattgctcaccccaca180
gagatcttgaaaggaggggtcttgatccagcggaacccccagctctgctaccaggacacg240
attttgtggaaggacatcttccacaagaacaaccagctggctctcacactgatagacacc300
aaccgctctcgggcctgtaagccatgcccctccctgctgcctcttctctcagacagcctg360
accccagccgcaaactcccaacttacaacccagtgcctgcccgccactgccccagccgcc420
tacaccacccatttcc436
88
484
dna
第一組探針
88
gccactcagccctcatcctgccctttgcccaacagtgacgcgcactgtctgtgccggtgg60
ctgtgcccgctgcaaggggccactgcccactgactgctgccatgagcagtgtgctgccgg120
ctgcacgggccccaagcactctgactgcctggtatgtgcctctgctttgtgcccaatgtg180
ctctaccccccaggatgcaaggggtgggcaccctgcctggtactgccctattgcccctgg240
cacaccagggcaaaacagcacagtgaaagccagccacctgtccccccaggcctgcctcca300
cttcaaccacagtggcatctgtgagctgcactgcccagccctggtcacctacaacacaga360
cacgtttgagtccatgcccaatcccgagggccggtatacattcggcgccagctgtgtgac420
tgcctgtccctgtgagtgccagggagaaacacagttttctcattttggtggggaggtttg480
tttc484
89
468
dna
第一組探針
89
cagttcctgtccctctgcgcatgcagcctggcccagcccaccctgtcctatccttcctca60
gaccctcttgggacctagtctctgccttctactctctacccctggcccccctcagcccta120
caagtgtccctatatcccctgtcagtgtggggaggggcccggaccctgatgctcatgtgg180
ctgttgacctgtcccggtatgaaggctgagacggccccttccccacccacccccacctcc240
tcagtgtgctatggtctgggcatggagcacttgcgagaggtgagggcagttaccagtgcc300
aatatccaggagtttgctggctgcaagaagatctttgggagcctggcatttctgccggag360
agctttgatgggtaagagtgggcacgatgacctgagacagtgtcagggcagacagagtcc420
tgaggatccagatgtggcagcatctcttggggatggcaggagacagaa468
90
521
dna
第一組探針
90
ccaaactagccctcaatccctgaccctggcttccgcccccagccctctgacgtccatcat60
ctctgcggtggttggcattctgctggtcgtggtcttgggggtggtctttgggatcctcat120
caagcgacggcagcagaagatccggaagtacacgatgcggagactgctgcaggaaacgga180
ggtgaggcggggtgaagtcctcccagcccgcgtggggtctgcaccggcccccggcactga240
cccaccaccccctcaccccagctggtggagccgctgacacctagcggagcgatgcccaac300
caggcgcagatgcggatcctgaaagagacggagctgaggaaggtgaaggtgcttggatct360
ggcgcttttggcacagtctacaaggtcagggccaggtcctggggtgggcggccccagagg420
atgggggcggtgcctggaggggtgtggtcggcagttctgatgggaggggcaagagctgga480
ggcagtgtttgggggagggcagttacagcggagaagggagc521
91
19
dna
17號染色體著絲粒區域第一組pcr反應引物
91
gggaggcaatgagaagcaa19
92
20
dna
17號染色體著絲粒區域第一組pcr反應引物
92
caggctgatccatcttaggg20
93
22
dna
17號染色體著絲粒區域第一組pcr反應引物
93
aaagtgaaggaggatagaatgt22
94
19
dna
17號染色體著絲粒區域第一組pcr反應引物
94
agatggtcccgtagaaatg19
95
19
dna
17號染色體著絲粒區域第一組pcr反應引物
95
ggcagaacactgagcaatc19
96
19
dna
17號染色體著絲粒區域第一組pcr反應引物
96
gaacccaaggctgtagaaa19
97
19
dna
17號染色體著絲粒區域第一組pcr反應引物
97
gtctttctgctccctttac19
98
19
dna
17號染色體著絲粒區域第一組pcr反應引物
98
gtccctctgagtttacctt19
99
21
dna
17號染色體著絲粒區域第一組pcr反應引物
99
agcaaagagggatagataggt21
100
19
dna
17號染色體著絲粒區域第一組pcr反應引物
100
tcctggtggacactgaact19
101
427
dna
17號染色體著絲粒區域第一組pcr反應產物
101
gggaggcaatgagaagcaaggaggatctaccctgctcaggcccagggaagggctgcagca60
gaggacagcaagggagcagtgtcctcaggggattgggcctcttactcacagcaaggaaca120
aaaggaagagttccctgaggctgctgaaaaccagggggctgctggtgctggagcaggatt180
ttgaggacatgcaaaagggtttcggcaagggacagagggaggaaggaactggggagtgag240
ggtcagcccaagataaccaggcctctcccaggaatcttcgggacactcagaagcagtggc300
catgcccagttgggcccacaaagggcacccagtgcctagcatgagaaacaggcctgccta360
ttgcccaggcctgacaaagcccagccattgctggcacctgctgtagcccctaagatggat420
cagcctg427
102
613
dna
17號染色體著絲粒區域第一組pcr反應產物
102
aaagtgaaggaggatagaatgtgtcagtgggagagggggatgggagagccatattttaga60
cagggtcatacaggagggtatagatctaaccactattcctctggcccattccacatctat120
ccccatcccaccccctgcacagtgcttgggtcaaagcctctcagtcctgcttgtatttct180
ccaagagtgatccggggaccaactgcatcagaactgtggggcgaggtcacagcccctgcc240
tgtgagaagtgcagattcctctgcctggaccagaatccctgggaactggacccaggaatt300
tcccaagatctctgggggattctgagacagcccaaagtatgggaactgcagatgtcctcc360
taaaaggggagcactgtctcaaggggtccaggtcacctagctctaccctgcagtgaccac420
accagtctgagccttggagaatgctgctctttcctcctggaattcccttcccagcattcc480
tcacctggtaactcttacacatccctcaagacccaactcaagggccacctcctcctgatg540
tcacttcctgaactttctcctgtgcttccactctcctctaccaagtgatgttgacatttc600
tacgggaccatct613
103
445
dna
17號染色體著絲粒區域第一組pcr反應產物
103
ggcagaacactgagcaatcctcagaaggaagaagcagagggagggaggcccacaggggag60
acagaacctttaacaccaaccagggtcctggtcctgggtccagcagatctggcaggaatg120
aggaatgggaggcttatgggtaagggcttcagccaggcagggaaaggcctcactctccct180
tccactcctttccctgctccccactttcctgtcccatctttggtaacaggctcagcatct240
ccagctgcacccacccactagatttgccccaattccttctcctctctcatgcctgaggcc300
caggtggcttccagagctgaccaggtctactttagaattttaatgaaataacctgggtag360
aagtgctggtgccctgccagccacagcaggtactccacatatggtaaactggaactgtct420
tctcagtttctacagccttgggttc445
104
498
dna
17號染色體著絲粒區域第一組pcr反應產物
104
gtctttctgctccctttacactctgtgcagcatccagacctgcctgcagtgagctcctct60
actcccccaccaaagctctgttgaattaatgtccctgtggggtttaagtgactgacagta120
acttcctcagtctccttgcagcctagtctaggaaggtgccttctaaagaatagcattcta180
atgtgaaattttagtactgtgaaagtctaatgggagaaatcagattcctttacaagatta240
cagaaaaaaaacagggcaatgagtatctctaaaagagaatgctcacttggagtgtcgatg300
gggttaggtggccgatacaggatgaaaggctttcatttggctccctgacttgctgggttt360
ggggatttccctggtccgcgtcattatctcttccctcctgcccagcatgtgctcacacta420
gcccctctgcctggttgtccttcccacaggccctttttcttacatttttttagacaatta480
aggtaaactcagagggac498
105
524
dna
17號染色體著絲粒區域第一組pcr反應產物
105
agcaaagagggatagataggtgtgggagtacagggacagaatcacagttgggacccttga60
gaaggcagttggagtttttctgccagggcaggagaagtcttctgggcacccagactggca120
cgtgcaaaggcatagaggcaagcttcccctgacacacggctggaggggaagctctaagtg180
ctgcgcacaggctgttcacactgcatccttctccctggacttgctccccccacagcacct240
ccatccttccagttagctatccagaccacccccctcaccctctcacacccacatcctgtg300
ggccccacatttgagaaacaagaattcagttgcttctcacccccccaccccatggctgct360
catcacctggtctgagtccccatcccctctctccccatacttggtctctgcttccatcct420
tgactcctgacgtctaattgcaactcaatactaggtcagatcatgtcacacttctgctct480
ggtgcaagaattatgtggttccttcagttcagtgtccaccagga524
106
19
dna
17號染色體著絲粒區域第二組pcr反應引物
106
gggacagagggaggaagga19
107
19
dna
17號染色體著絲粒區域第二組pcr反應引物
107
tacagcaggtgccagcaat19
108
21
dna
17號染色體著絲粒區域第二組pcr反應引物
108
ctcagtcctgcttgtatttct21
109
19
dna
17號染色體著絲粒區域第二組pcr反應引物
109
ccatactttgggctgtctc19
110
20
dna
17號染色體著絲粒區域第二組pcr反應引物
110
cccactttcctgtcccatct20
111
19
dna
17號染色體著絲粒區域第二組pcr反應引物
111
ggcaccagcacttctaccc19
112
21
dna
17號染色體著絲粒區域第二組pcr反應引物
112
aaagtctaatgggagaaatca21
113
19
dna
17號染色體著絲粒區域第二組pcr反應引物
113
gaaggacaaccaggcagag19
114
19
dna
17號染色體著絲粒區域第二組pcr反應引物
114
cttgagaaggcagttggag19
115
18
dna
17號染色體著絲粒區域第二組pcr反應引物
115
aaggatggaggtgctgtg18
116
197
dna
第二組探針
116
gggacagagggaggaaggaactggggagtgagggtcagcccaagataaccaggcctctcc60
caggaatcttcgggacactcagaagcagtggccatgcccagttgggcccacaaagggcac120
ccagtgcctagcatgagaaacaggcctgcctattgcccaggcctgacaaagcccagccat180
tgctggcacctgctgta197
117
183
dna
第二組探針
117
ctcagtcctgcttgtatttctccaagagtgatccggggaccaactgcatcagaactgtgg60
ggcgaggtcacagcccctgcctgtgagaagtgcagattcctctgcctggaccagaatccc120
tgggaactggacccaggaatttcccaagatctctgggggattctgagacagcccaaagta180
tgg183
118
174
dna
第二組探針
118
cccactttcctgtcccatctttggtaacaggctcagcatctccagctgcacccacccact60
agatttgccccaattccttctcctctctcatgcctgaggcccaggtggcttccagagctg120
accaggtctactttagaattttaatgaaataacctgggtagaagtgctggtgcc174
119
242
dna
第二組探針
119
aaagtctaatgggagaaatcagattcctttacaagattacagaaaaaaaacagggcaatg60
agtatctctaaaagagaatgctcacttggagtgtcgatggggttaggtggccgatacagg120
atgaaaggctttcatttggctccctgacttgctgggtttggggatttccctggtccgcgt180
cattatctcttccctcctgcccagcatgtgctcacactagcccctctgcctggttgtcct240
tc242
120
193
dna
第二組探針
120
cttgagaaggcagttggagtttttctgccagggcaggagaagtcttctgggcacccagac60
tggcacgtgcaaaggcatagaggcaagcttcccctgacacacggctggaggggaagctct120
aagtgctgcgcacaggctgttcacactgcatccttctccctggacttgctccccccacag180
cacctccatcctt193