滅齧齒動物的誘餌凝膠中的微生物製劑的製作方法

2023-12-12 05:21:12

專利名稱：滅齧齒動物的誘餌凝膠中的微生物製劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種在凝膠中含有不同期致病原蟲的製劑及其在滅齧齒動物中的應用。
人們熟知，肉孢子蟲類群的原生動物(原生動物門、孢子蟲綱、球蟲亞綱、真球蟲目、艾美球蟲亞目)對齧齒動物(家鼠類、害鼠、水 、Nosokia、鼠屬)是致病菌，在足夠的劑量下可使動物致死(Rzepczyk 1974，Intern.J.Parasitol.4，447-449；Brehm，Frank1980，Z.Parasitenkd.62，15-30)。一種這類群中的特別對於多種鼠類致病的寄生蟲是Singaporensis肉孢子蟲(Zamman等人，1975，z.Parasitenkd.47，169-185)。
寄生蟲的終宿主是食肉動物或雜食動物；對於singaporensis肉孢子蟲則是蛇亞目，例如蟒蛇。在終宿主的腸內形成孢子囊寄生蟲。這種孢子囊將持續從糞便排出。如果中間宿主，在Singaporensis肉孢子的情況下例如鼠，通過口腔感染孢子囊，則孢子囊在鼠的腸內孵化並穿過腸壁。通過血液循環這時到達另外的器官，在那裡它們能通過分裂(裂配生殖)繁殖。
在這種情況下可證實有兩種裂配生殖，其一是在感染後約第六天，其二是在感染後約第14-16天。特別大量的裂殖體(裂殖子)出現在肺中，那裡它們在內皮細胞中繁殖。
如果由於嚴重感染而使裂殖子在肺中大量繁殖，則鼠將在感染後約第16天的第二個寄生蟲裂配生殖期間染病，並且大多數在數小時內死亡。
有可能將這種病源體的孢子囊施加給齧齒動物，以致使其死於感染。這種原理可用於滅齧齒動物(Wood 1985，J.Plant Protect.Trop．2，67-69)。已用Singaporensis肉孢子蟲成功地進行滅鼠(Jkel等人，1996，J.Parasitol.82280-287)。
鼠類和norvegicus感染20000以上孢子囊(與門類有關)照例會致死。動物在感染後14天之前無任何症狀。然後很快衰弱，並在感染後的約第16天死於感染。
亞致死感染的鼠也在感染後14天無任何病狀，並在抗過感染後未喪命。感染數天之後這些動物已具有抗病菌的免疫力。這些動物在以後對用Singaporensis肉孢子蟲製劑殺滅已不敏感了。
孢子囊可在水性懸浮應付中保存兩年，而不明顯喪失及致病性。這種懸浮液可通過食管飼法對鼠給藥，並表明在相應劑量下的致死作用。但是在乾燥狀態下孢子囊不能存活。
為了滅鼠應利用誘餌，並被動物吞食。這種帶有Singaporensis肉孢子蟲的孢子囊的誘餌在潮溼時都是致病的。在乾燥後孢子囊很快喪失其致病能力。因此通常的基於穀物的誘餌不能用於這種寄生蟲的有效施藥。在申請人的研究中，亦未能在基於穀物的誘餌中保持Singaporensis肉孢子蟲的孢子囊的傳染能力。在混合後僅一天，這種誘餌已喪失作用。
含孢子囊的誘餌應該以溼狀態包裝在薄膜中。這種溼製劑的缺點是難於保存，因為穀物在數天內便會發黴或發芽。一種方案是在誘餌的空腔內配入懸浮液。膏狀誘餌的碎塊是成功應用的例子，該誘餌內部的空腔中皆含有致死劑量的懸浮液。但是，這種誘餌也應在製備後數天中應用，因為水會散發，或者膏狀基質吸收水並脹起或發酵，從而使這種誘餌不能使用。
迄今用如Singaporensis肉孢子蟲的原生動物滅齧齒動物的唯一實際可能是用含孢子囊的水性懸浮液和誘餌基質，例如穀物就在應用前製成誘餌。但問題在於很難取出計算量的孢子囊，因為它在懸浮液中很快下沉並濃集在容器的底部。因此，這樣製成的誘餌含不確定量的、不均勻分布的孢子囊。這種誘餌很快變幹，常常在混制過程中變幹。其結果是孢子囊死亡，而誘餌則在數小時後即不再有效。
現在發現，肉孢子蟲屬-孢子囊出人意料地能在某些凝膠中長期保持其感染性，雖然過去的研究曾經表明，在穀物上、在如膨潤土的膏狀物和凝膠中在數天之後不再具有感染性。它們在本文所述的凝膠中能存活幾個月是令人吃驚和意料之外的。從文獻已知，在溫和地區的很強的肉孢子蟲，例如gigantea肉孢子蟲對pH-值的變化和化學物質的反應敏感(McKenna等人，Veterinary Parasitology 1992，451-16)。因此，特別意外的是甚至地pH-值可能變化，此外還加防腐劑的情況下，寄生物的存活概率無明顯的減小。
因此，本發明能夠將孢子囊保存在凝膠中以便以後用於滅齧齒動物。它們的這種基質中均勻分布。從而有可能取出確定量的孢子囊。確定量的這種凝膠能與誘餌基質混合，直至達到均勻狀態，因為凝膠只是很慢地被基質吸收。由於所採用的凝膠只是很慢地通過蒸發脫水，誘餌在乾燥氣氛中應用時亦能保持潮溼，從而保留其感染性。
通過這種方式可能將孢子囊保存數月，而不致使凝膠分離或使病原體感染性明顯降低。所引的應用Carbopo1-凝膠的例子證明，這種混合物可應用數月。
本發明要求保護在凝膠中保存單細胞寄生蟲狀態的原理。這種凝膠單獨或與餌劑混合用於滅齧齒動物。
原則上孢子蟲綱的全部原生動物皆適宜作為致病生物。特別適宜的是球蟲亞綱類，最適宜的是艾美球蟲亞目的代表。例如，但不限於肉孢子蟲屬，如Singaporensis肉孢子蟲。
本發明的製劑可以所有常規為製備齧齒動物的飼料誘餌的配方加工，例如加工成基於穀物的誘餌，呈膏、凝膠和蠟塊形式，以及呈穀物和配方助劑的擠壓混合物。其次，病源體可以水基飲用誘餌的形式提供。本發明意義中的誘餌可如滅有害齧齒動物的常規誘餌那樣使用。它們可放在改建的空間和野外，根據目標物和誘餌放置密度，每個誘餌放置位置可放5g-500g。它們也可放在擬滅齧齒動物的建築物的入口。
凝膠中病源體的劑量可任意調整。優選的劑量為1000-10000000孢子囊/ml。特別優選500000-2000000孢子囊/ml。
誘餌中病源體的劑量應為1000-200000孢子囊/g誘餌，優選2000-100000孢子囊/g，更優選的濃度為10000-30000，特別優選20000孢子囊/g。亦可採用更高的劑量，但通常不需要。而且既可採用一種病源體的孢子囊，又可採用不同病源體的孢子囊的混合物。
本發明意義上的擬滅的齧齒動物係指齧齒目的齧齒動物，特指家鼠類、鼠屬、害鼠、Nosokia和田鼠屬。尤其指鼠類和害鼠的代表，例如家鼠類、norvegicus鼠、bengalensis鼠、indica鼠。
本發明意義上的凝膠係指水基和與相應增稠劑混合的凝膠。作為增稠劑可採用如纖維素衍生物的高分子，例如羥丙基纖維素、羥乙基纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥乙基甲基纖維素、羥乙基丙基纖維素或黃原膠、藻酸鹽、聚乙烯基醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚丙烯酸和它們的衍生物或無機凝膠形成劑如高分散的二氧化矽(參見，例如，Rudolf Voigt，PharmazeutischeTechnologie(藥物工業)，362-385頁，Ulstein Mosby)。特別適宜的是纖維素衍生物和聚丙烯酸。
凝膠的水含量變化寬，例如30-98重量％，尤其是50-90重量％，更優選70-80重量％。
凝膠的pH-值變化也寬，例如pH2-10，尤其是pH4-9，更優選pH6-8。
凝膠可添加防府劑如對羥基苯甲酸酯、苯甲酸鹽、山梨酸、檸檬酸鹽或對羥基苯甲酸酯；保溼劑如甘油或丙二醇；氧化穩定劑如丁基羥甲苯或丁基羥苯甲醚、維生素E、抗壞血酸、調味劑或其它配方助劑。
在本發明的製劑中，病源原生物的孢子囊還可與另一些如對滅齧齒動物有作用的化學活性物組合使用。這裡可列舉，但不限於香豆素的例子。
本發明的製劑通過相應量的組分的混合來製備。混合可採用機械的，例如在攪拌罐或其它適合此目的的設備中實現。
下列實施例應對本發明作出闡明，但不作限制。實施例方法所採用的S5門類的孢子囊(由Hohenheim大學，寄生蟲系提供)在1998年8月17日取自泰國的一個海峽。計數採用NeubauerHmozytometer計。凝膠用1％Carbopol 974P(Carbopole弱交聯的聚丙烯酸)和水(342ppm)製備。pH值採用2N NaOH滴定。作為防腐劑採用0.02％Solbrol P和0.14％Solbrol M(Solbrole對-羥基苯甲酸酯(-甲基，-乙基，-丁基)。一個試樣含20％甘油。向所有的凝膠加入50000孢子囊/ml，並劇烈攪拌，以便達到均勻分布。凝膠在約6℃下保存在冷箱中，並按相應的試驗計劃按各種試驗日期進行施藥。
用野生的norvegicus鼠作試驗動物。在餵孢子囊誘餌前14小時動物不隨意進食和水。誘餌基於麥屑。每隻鼠得到5g與1ml凝膠混合的麥屑。只是在鼠吞食孢子囊誘餌之後，鼠才能再隨意得到標準飼料。每種劑量採用2隻鼠，對它們在接受劑量後觀察21天。死亡率按與凝膠配方和貯存時間的關係來確定。在預期的病源體作用期(第13-第17天)內症狀表現重的鼠在自然條件下不能活下來，因此被滅掉。結果表1攝取含50000孢子囊(*為100000孢子囊)的不同凝膠的麥屑誘餌後的死亡率與凝膠貯存時間的關係。凝膠 貯存期(周)內的死亡率(％)pHSolbrol 甘油 0246810121419246,17 + -100100 100 5007,04 + +10050 00 07,05 - -100 100 1000 50*8,19 + -100100 100 0 0
權利要求
1.一種在含水凝膠中含孢子囊致病原生動物的製劑。
2.權利要求1的製劑，其特徵在於，該水性凝膠基於水和增稠劑，增稠劑選自纖維素衍生物、黃原膠、藻酸鹽、聚乙烯基醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚丙烯酸和無機凝膠形成劑。
3.權利要求1和2的製劑，其特徵在於，它們含有濃度為1000-10000000/ml的孢子囊致病原生動物。
4.權利要求1和2的製劑，其特徵在於，它們含30-98％的水。
5.一種滅齧齒動物的製劑，其特徵在於，除常規誘餌物質之外，還含有權利要求1和2的製劑。
6.權利要求1和2的製劑在製備滅齧齒動物的誘餌中的應用，其特徵在於，將該製劑與常規誘餌物質混合。
7.權利要求1、2和5的製劑在滅齧齒動物中的應用，其特徵在於，將製劑撒在齧齒動物的生活空間。
全文摘要
本發明涉及一種含不同階段的致病單細胞生物的凝膠製劑及其在滅齧齒動物中的應用。
文檔編號A01N63/00GK1429076SQ01809153
公開日2003年7月9日 申請日期2001年5月4日 優先權日2000年5月12日
發明者J·卡爾貝, T·貝克, S·恩德波爾斯, T·耶克爾, S·洪納克 申請人:拜爾農作物科學股份公司