一種從巴戟天藥材中提取分離水晶蘭苷單體的方法
2023-06-14 06:05:06
專利名稱：一種從巴戟天藥材中提取分離水晶蘭苷單體的方法
技術領域：
本發明涉及從植物中分離化合物單體技術領域，尤其是一種從巴戟天藥材中提取分離水晶蘭苷單體的方法。
背景技術：
巴戟天是著名的「南藥」，為茜草科植物巴戟天Morinda officinalis How的乾燥 根。性甘、辛微溫，具有補肝腎、強筋骨、祛風溼的功效，用於治療陽痿遺精，宮冷不孕，月經 不調，少腹冷痛，風溼痺痛等症。巴戟天藥材中含有包括大黃素甲醚、甲基異茜草素-ι-甲 醚、1-羥基蒽醌、1-羥基-2-甲氧基蒽醌等蒽醌類成分，葡萄糖、甘露糖、巴戟素等多種糖類 成分，水晶蘭苷、四乙醯車葉草苷等環烯醚萜苷類成分，還含有8種人體必需胺基酸，β _谷 甾醇以及24-乙基膽留醇等留體化合物。藥理研究表明，巴戟天屬植物中環烯醚萜具有抗 菌、抗氧化、抗誘變、抗腫瘤、消炎鎮痛等廣泛作用，其中環烯醚萜苷抓水晶蘭苷是其特徵性 成分，在5年生藥材中含量約為1. 2%，結構式如下
formula see original document page 3《中國藥典》2005年一版中收載了巴戟肉、鹽巴戟天、制巴戟天，但均只規定做定性 鑑別對其進行質量控制，無含量檢測要求。隨著近年來研究的深入，發現巴戟天中環烯醚萜 苷類成分具有顯著生物活性，已引起人們的廣泛關注，尤其是其特徵性成分水晶蘭苷具有 較強的抗炎、鎮痛作用這一研究成果，從藥效學角度闡明了水晶蘭苷作為巴戟天祛風溼的 物質基礎。因此，為加強對巴戟天及其同屬藥材及製劑的質量控制，僅依靠定性鑑別顯然是 不夠準確的，需要對其特徵性成分如水晶蘭苷等進行定量檢測。但目前市面上尚缺乏可用 作含量檢測對照品的高純度水晶蘭苷單體。而且現有技術在水晶蘭苷分離純化手段上多採 用反覆矽膠柱層析等傳統方法，生產周期長，且存在水晶蘭苷與糖分不易分離的情況，使得 產品純化困難、純度不高，其質量和數量難以滿足需要。
發明內容
本發明的目的就是針對上述現有技術中無高純度水晶蘭苷的分離製備方法、因而 缺少高純度水晶蘭苷單體化合物等問題，提供一種從巴戟天藥材中提取分離水晶蘭苷單體 的方法。該方法操作簡便，分離效率高，工藝穩定，成本低廉，可實現大量水晶蘭苷單體的高 純度分離製備，得到的水晶蘭苷單體純度高，可達到98%以上。為了實現上述發明目的，本發明採用的技術方案如下
—種從巴戟天藥材中提取分離水晶蘭苷單體的方法，包括下述主要步驟A、乙醇溶液提取將巴戟天藥材切成2_5mm左右的段，裝入提取容器中，加入5-8倍量(ml/g，即按照 每g藥材加入溶劑5-8ml計算)的體積百分比為50% -85%的乙醇溶液，於35°C _55°C水 浴加熱提取2-4次，每次l-2h，過濾，棄去藥渣，收集過濾液於35°C -50°C水浴減壓濃縮至無 醇味，得提取濃縮液，進行下述步驟B。本步驟通過含醇水溶液加熱提取、濃縮，所得的藥材有效成分提取液中主要含水 晶蘭苷、蒽醌類和糖類等成分。B、乙酸乙酯萃取向步驟A所得的提取濃縮液中加入體積比0.7-1. 5倍量的乙酸乙酯，萃取2-4次， 靜置分層，收集下層水相，進行下述步驟C。本步驟中，由於蒽醌類成分更易溶於乙酸乙酯中，而水晶蘭苷等在乙酸乙酯中溶 解度較小，因而，採用乙酸乙酯萃取可較完全的除去提取濃縮液中的蒽醌類成分(可單獨 收集、另行分離獲得蒽醌類單體產品)，水晶蘭苷和糖類等成分保留在下層水相中，為後續 分離減少雜質幹擾，並同時起到富集水晶蘭苷的作用。C、正丁醇萃取向步驟B所得的萃取後下層水相中，加入體積比2-4倍量的正丁醇萃取3-6次，棄 去水相，合併正丁醇相，將正丁醇相於50°C _65°C水浴減壓濃縮至幹，得到的幹品為水晶蘭 苷半成品，進行下述步驟D。本步驟中，由於水晶蘭苷在正丁醇中具有更大的溶解度，而糖類等成分更易溶於 水中，因而，用正丁醇萃取可較完全的將水相中的水晶蘭苷萃取出來，將糖類等其他雜質留 在水中，起到除雜和富集水晶蘭苷的作用。D、過濾進一步除雜將步驟C所得的除雜富集後的水晶蘭苷半成品用<30%的甲醇(包括體積百分比 (30%的甲醇水溶液和純水，下同)作為溶劑溶解，溶劑用量按固體物重量溶劑體積= Ig (4-8)ml計算，溶解後的溶液用孔徑0.22um-0.45um的水繫膜過濾，得澄清透明濾液； 再進行下述步驟E。本步驟中，通過< 30 %的甲醇溶解、水系濾膜過濾，可進一步除去大分子雜質，純 化水晶蘭苷。E、通過製備型高效液相色譜分離水晶蘭苷單體採用填料為C18的色譜柱，流動相組成為體積分數5% -20%的甲醇水溶液(其中還含有體積分數為 0. 1% -0. 3%的磷酸)，檢測波長為233nm，取步驟D所得的澄清透明濾液進樣，進行水晶蘭苷單體的製備分離，紫外檢測器 在線監測，針對性收集水晶蘭苷單體的製備餾分溶液，得水晶蘭苷單體溶液，進行下述步驟 F0本步驟在進行高效製備液相色譜分離前，可通過液_質聯用或其它本技術領域常 用的方法(如氣-質聯用，核磁共振碳譜、氫譜等)確定高效液相色譜中黃連鹼單體的峰形。以液-質聯用(HPLC-MS)方法為例，可採用填料為C18的色譜柱，流動相組成可同上(也可略有差異)，柱溫為室溫(柱溫無特別要求，室溫即可)，檢測波長為為233nm，取步 驟D所得的澄清透明濾液適量進樣，進行水晶蘭苷單體的HPLC-MS檢測，根據負離子檢測結 果，確定水晶蘭苷單體在液相色譜中所對應的峰(由於製備型高效液相色譜分離水晶蘭苷 單體也採用C18色譜柱，對同樣的樣品，即使流動相等有差異而導致出峰時間有所不同，但 出峰順序及峰形等大致相同，因而可用於推斷在製備型高效液相色譜中水晶蘭苷單體的出 峰位置及峰形等)。F、大孔樹脂富集將步驟E所得的水晶蘭苷單體溶液，於40°C _55°C水浴減壓濃縮至無醇，水溶液 用環烯醚萜苷專用大孔吸附樹脂(環烯醚萜苷專用大孔吸附樹脂可選自D301、HPD600、 NKA-9、AB-8中的任意一種；大孔吸附樹脂在使用前按相應的樹脂產品附帶的說明書進行 活化處理)富集，用2. 5-5倍柱體積的80%-95% (體積百分比)乙醇解吸附，收集該乙醇 解吸附液，進行下述步驟G。通過本步驟操作，將水溶液中的水晶蘭苷吸附於樹脂上，磷酸則隨水通過樹脂，起 到將產品與雜質磷酸分離，同時用80% -95%乙醇解吸附，可將水晶蘭苷從樹脂轉移至較 高濃度醇溶液中，便於產品的回收，減少產品受熱時間。G、乾燥製得水晶蘭苷單體產品取步驟F所得的乙醇解吸附液，於40°C _55°C水浴減壓濃縮至幹，再將固體物於 400C -50°C與另器盛放的五氧化二磷共存，真空乾燥至恆重，收集幹品，即得所述的水晶蘭 苷單體產品。由於高效液相色譜對樣品溶液的純度、色澤等要求均較高，通過提取等簡單處理 得到的提取液不能直接作為樣品溶液進入高效液相色譜系統，否則既可能達不到良好的分 離效果，還可能對高效液相色譜系統的色譜柱等配件產生難以逆轉的影響，縮短其使用周 期；而色譜柱等液相色譜的相關配件成本通常較高，其使用周期的縮短顯然將造成最終產 品的生產成本大大提高；因而，對進入高效液相色譜的樣品溶液要求較高，其前處理過程非 常重要。本發明方法通過前述步驟A、B、C、D的順序搭配，以及適當的參數組合，可有效提 取出巴戟天藥材中的水晶蘭苷等成分，並除去提取液中含有的蒽醌類、糖類、及一些大分子 物質等大量雜質，獲得可以進入製備型高效液相色譜系統的樣品溶液(即步驟D得到的澄 清透明濾液)，不至對高效液相色譜系統造成很大的影響，儘量延長其使用周期，節約生產 成本。在高效液相色譜分離過程中，色譜條件的選擇非常重要，它對樣品溶液中各物質 的出峰順序、峰形、分離效果等起著決定性的作用；色譜條件主要包括色譜柱(包括填料、 柱長及內徑等)、流動相(包括組成及流速等)、柱溫、檢測波長、檢測器等，各色譜條件的選 擇及其組合至關重要。本發明人通過大量的試驗研究及對比分析，確定了如上所述的各色譜條件，使樣 品溶液中各物質的出峰時間、峰形、分離效果等最佳化，有利於水晶蘭苷單體得到充分有效 的分離。
與現有技術相比，本發明的有益效果是本發明方法通過適當參數條件的選擇、以及按照前後順序缺一不可的前處理步 驟，可從巴戟天藥材中有效的提取出含水晶蘭苷等成分，並有效除去提取液中的蒽醌類、糖 類、及其它大分子雜質等，獲得可以通過製備型高效液相色譜分離單體的樣品溶液；再通過 製備型高效液相色譜系統對水晶蘭苷單體進行分離，紫外檢測器在線監測，針對性收集水 晶蘭苷單體，過程直觀，目標明確，避免了常規柱層析和先分離後檢測造成的資源浪費，且 對產品的質量易於控制，產品純度可達98 %以上。另一方面，該方法操作簡便，分離效率高，工藝穩定，重現性好，成本低廉，可實現大量水晶蘭苷單體的高純度分離製備，得到的水晶蘭苷單體純度高，收率高，產量大，適合 工業化生產。
圖1是實施例2水晶蘭苷的高效液相製備色譜圖，圖中記錄為2針樣品連續進樣 色譜圖，圖中峰1、2為水晶蘭苷；圖2是實施例2水晶蘭苷單體產品復檢的高效液相分析色譜圖，圖中A為水晶蘭 苷。
具體實施例方式下面結合具體實施方式
對本發明作進一步的詳細描述。但不應將此理解為本發明上述主題的範圍僅限於下述實施例。下述各實施例中，終產品水晶蘭苷單體的純度復檢均採用反相分析型液相色譜 (RPHPLC)法，色譜條件如下流動相組成為甲醇水(水中含體積百分比為0. 2 %的磷酸)，二者體積比為 15 85 ；流速 1. OmL/min ；色譜柱填料為C18，粒度為5um，色譜柱內徑為4. 6mm，長度為150mm ；檢測波長為 233nm。實施例1本實施例從巴戟天藥材中提取分離水晶蘭苷單體的方法，包括下述主要步驟A、乙醇溶液提取將IKg巴戟天藥材切成3mm左右的段，裝入提取容器中，加入6. 5L體積百分比為 50 %的乙醇溶液，於45°C水浴加熱提取3次，每次2h，過濾，棄去藥渣，收集過濾液19L，於 45°C水浴減壓濃縮至無醇味，得提取濃縮液8L，進行下述步驟B。B、乙酸乙酯萃取除去蒽醌類雜質將步驟A所得的濃縮水溶液，加入體積比1. 5倍量的乙酸乙酯，萃取2次，靜置分 層，收集下層水相7. 5L，進行下述步驟C。C、正丁醇萃取向步驟B所得的萃取後下層水相中，加入體積比2倍量的正丁醇萃取6次，棄 去水相，合併正丁醇相，將正丁醇相於65°C水浴減壓濃縮至幹，得到幹品(水晶蘭苷半成 品)20. lg，進行下述步驟D。
D、過濾進一步除雜將步驟C所得的除雜富集後的水晶蘭苷半成品用15%的甲醇溶解，甲醇用量約 120ml，溶解後的溶液用孔徑0. 45um的水繫膜過濾，得澄清透明濾液117ml ；再進行下述步驟E。
E、通過製備型高效液相色譜分離水晶蘭苷單體採用填料為C18的色譜柱(內徑80mm，C18粒度為8um)，流動相組成為體積分數5%的甲醇水溶液(其中還含有體積分數為0. 的磷 酸)，流速 140ml/min,檢測波長為233nm，取步驟D所得的澄清透明濾液進樣，進行水晶蘭苷單體的製備分離，紫外檢測器 在線監測，針對性收集水晶蘭苷單體的製備餾分溶液(出峰時間為48. 2-52. 3min)，得水晶 蘭苷單體溶液，進行下述步驟F。本步驟在進行高效製備液相色譜分離前，通過液質聯用(HPLC-MS)方法確定高效 液相色譜中水晶蘭苷單體的峰形，採用填料為C18的色譜柱(C18粒度為5um，柱長為250mm， 內徑4. 6mm)，流動相組成同上，流速lml/min，柱溫為室溫(柱溫無特別要求，室溫即可)，檢 測波長為233nm，取步驟D所得的澄清透明濾液SOul進樣，進行水晶蘭苷單體的HPLC-MS檢 測，根據負離子檢測結果，確定水晶蘭苷單體在液相色譜中的出峰順序及其所對應的峰形。F、大孔樹脂富集將步驟E所得的水晶蘭苷單體溶液，於45°C水浴減壓濃縮至無醇，水溶液用經活 化(活化方法按樹脂產品附帶的說明書操作)的環烯醚萜苷專用大孔吸附樹脂D301富集， 用2. 5倍柱體積的95%乙醇解吸附，收集該95%乙醇解吸附液，進行下述步驟G。G、乾燥製得水晶蘭苷單體產品取步驟F所得的95%乙醇解吸附液，於45°C水浴減壓濃縮至幹，再將固體物於 40°C與另器盛放的五氧化二磷共存，真空乾燥至恆重，收集幹品，得所述的水晶蘭苷單體產 品 14g。計算產品收率為(14/1000)X 100%= 1.4%。利用反相分析型液相色譜(RP-HPLC)復檢產品純度，測得結果為98. 95%。實施例2本實施例從巴戟天藥材中提取分離水晶蘭苷單體的方法，包括下述主要步驟A、乙醇溶液提取將0. 3Kg巴戟天藥材切成2mm左右的段，裝入提取容器中，加入2. 4L體積百分比 為85%的乙醇溶液，於35°C水浴加熱提取2次，每次1. 5h，過濾，棄去藥渣，收集過濾液5L， 於35°C水浴減壓濃縮至無醇味，得提取濃縮液約0. 5L，進行下述步驟B。B、乙酸乙酯萃取除去蒽醌類雜質將步驟A所得的濃縮水溶液，加入體積比0. 7倍量的乙酸乙酯，萃取2次，靜置分 層，收集下層水相0. 4L，進行下述步驟C。C、正丁醇萃取向步驟B所得的萃取後下層水相中，加入體積比3倍量的正丁醇萃取4次，棄 去水相，合併正丁醇相，將正丁醇相於50°C水浴減壓濃縮至幹，得到幹品(水晶蘭苷半成品)7. 3g，進行下述步驟D。 D、過濾進一步除雜將步驟C所得的除雜富集後的水晶蘭苷半成品用30%的甲醇溶解，甲醇用量約 58ml，溶解後的溶液用孔徑0. 22um的水繫膜過濾，得澄清透明濾液55ml ；再進行下述步驟E.E、通過製備型高效液相色譜分離水晶蘭苷單體採用填料為C18的色譜柱(內徑50mm，C18粒度為5um)，流動相組成為體積分數20%的甲醇水溶液(其中還含有體積分數為0. 2%的磷 酸)，流速 60ml/min，檢測波長為233nm，取步驟D所得的澄清透明濾液進樣，進行水晶蘭苷單體的製備分離，紫外檢測器 在線監測，針對性收集水晶蘭苷單體的製備餾分溶液(出峰時間為24. 6-26min)，得水晶蘭 苷單體溶液，進行下述步驟F。本步驟在進行高效製備液相色譜分離前，通過液質聯用(HPLC-MS)方法確定高效 液相色譜中水晶蘭苷單體的峰形，採用填料為C18的色譜柱(C18粒度為5um，柱長為250mm， 內徑4. 6mm)，流動相組成同上，流速lml/min，柱溫為室溫(柱溫無特別要求，室溫即可)，檢 測波長為233nm，取步驟D所得的澄清透明濾液IOOul進樣，進行水晶蘭苷單體的HPLC-MS 檢測，根據負離子檢測結果，確定水晶蘭苷單體在液相色譜中的出峰順序及其所對應的峰 形。F、大孔樹脂富集將步驟E所得的水晶蘭苷單體溶液，於40°C水浴減壓濃縮至無醇，水溶液用經活 化(活化方法按樹脂產品附帶的說明書操作)的環烯醚萜苷專用大孔吸附樹脂HPD600富 集，用5倍柱體積的80%乙醇解吸附，收集該80%乙醇解吸附液，進行下述步驟G。G、乾燥製得水晶蘭苷單體產品取步驟F所得的80%乙醇解吸附液，於55°C水浴減壓濃縮至幹，再將固體物於 55°C與另器盛放的五氧化二磷共存，真空乾燥至恆重，收集幹品，得所述的水晶蘭苷單體產 品 3. 3g。計算收率為(3.3/300) X 100%= 1. 1% ；利用反相分析型液相色譜(RP-HPLC)復檢產品純度，測得結果為98. 11%。實施例3本實施例從巴戟天藥材中提取分離水晶蘭苷單體的方法，包括下述主要步驟A、乙醇溶液提取將2. 5Kg巴戟天藥材切成5mm左右的段，裝入提取容器中，加入12. 5L體積百分比 為65 %的乙醇溶液，於55°C水浴加熱提取4次，每次lh，過濾，棄去藥渣，收集過濾液47L， 於50°C水浴減壓濃縮至無醇味，得提取濃縮液15L，進行下述步驟B。B、乙酸乙酯萃取除去蒽醌類雜質將步驟A所得的濃縮水溶液，加入體積比1倍量的乙酸乙酯，萃取3次，靜置分層， 收集下層水相14. 3L，進行下述步驟C。C、正丁醇萃取
向步驟B所得的萃取後下層水相中，加入體積比4倍量的正丁醇萃取3次，棄去水相，合併正丁醇相，將正丁醇相於60°C水浴減壓濃縮至幹，得到幹品(水晶蘭苷半成 品)28g，進行下述步驟D。D、過濾進一步除雜將步驟C所得的除雜富集後的水晶蘭苷半成品用5%的甲醇溶解，甲醇用量約112ml，溶解後的溶液用孔徑0. 45um的水繫膜過濾，得澄清透明濾液108ml ；再進行下述步 驟E。E、通過製備型高效液相色譜分離水晶蘭苷單體採用填料為C18的色譜柱(內徑150mm，C18粒度為IOum)，流動相組成為體積分數15%的甲醇水溶液(其中還含有體積分數為0. 3%的磷 酸)，流速 200ml/min，檢測波長為233nm，取步驟D所得的澄清透明濾液進樣，進行水晶蘭苷單體的製備分離，紫外檢測器 在線監測，針對性收集水晶蘭苷單體的製備餾分溶液(出峰時間為11. 5-12. 3min)，得水晶 蘭苷單體溶液，進行下述步驟F。本步驟在進行高效製備液相色譜分離前，通過液質聯用(HPLC-MS)方法確定高效 液相色譜中水晶蘭苷單體的峰形，採用填料為C18的色譜柱(C18粒度為5um，柱長為250mm， 內徑4. 6mm)，流動相組成同上，流速lml/min，柱溫為室溫(柱溫無特別要求，室溫即可)，檢 測波長為233nm，取步驟D所得的澄清透明濾液50ul進樣，進行水晶蘭苷單體的HPLC-MS檢 測，根據負離子檢測結果，確定水晶蘭苷單體在液相色譜中的出峰順序及其所對應的峰形。F、大孔樹脂富集將步驟E所得的水晶蘭苷單體溶液，於55°C水浴減壓濃縮至無醇，水溶液用經活 化(活化方法按樹脂產品附帶的說明書操作)的環烯醚萜苷專用大孔吸附樹脂NKA-9富 集，用3. 5倍柱體積的85%乙醇解吸附，收集該85%乙醇解吸附液，進行下述步驟G。G、乾燥製得水晶蘭苷單體產品取步驟F所得的85%乙醇解吸附液，於40°C水浴減壓濃縮至幹，再將固體物於 40°C與另器盛放的五氧化二磷共存，真空乾燥至恆重，收集幹品，得所述的水晶蘭苷單體產 品 36g。計算收率為(36/2500)X 100%= 1. 4% ；利用反相分析型液相色譜(RP-HPLC)復檢產品純度，測得結果為98. 43%。
權利要求
一種從巴戟天藥材中提取分離水晶蘭苷單體的方法，包括下述主要步驟A、乙醇溶液提取將巴戟天藥材切成2-5mm的段，裝入提取容器中，加入5-8倍量體積百分比為50％-85％的乙醇溶液，於35℃-55℃水浴加熱提取2-4次，每次1-2h，過濾，棄去藥渣，收集過濾液於35℃-50℃水浴減壓濃縮至無醇味，得提取濃縮液，進行下述步驟B；B、乙酸乙酯萃取向步驟A所得的提取濃縮液中加入體積比0.7-1.5倍量的乙酸乙酯，萃取2-4次，靜置分層，收集下層水相，進行下述步驟C；C、正丁醇萃取向步驟B所得的萃取後下層水相中，加入體積比2-4倍量的正丁醇萃取3-6次，棄去水相，合併正丁醇相，將正丁醇相於50℃-65℃水浴減壓濃縮至幹，得到的幹品為水晶蘭苷半成品，進行下述步驟D；D、過濾進一步除雜將步驟C所得的除雜富集後的水晶蘭苷半成品用≤30％的甲醇作為溶劑溶解，溶劑用量按固體物重量∶溶劑體積＝1g∶(4-8)ml計算，溶解後的溶液用孔徑0.22um-0.45um的水繫膜過濾，得澄清透明濾液，再進行下述步驟E；E、通過製備型高效液相色譜分離水晶蘭苷單體採用填料為C18的色譜柱，流動相組成為體積分數5％-20％的甲醇水溶液(其中還含有體積分數為0.1％-0.3％的磷酸)，檢測波長為233nm，取步驟D所得的澄清透明濾液進樣，進行水晶蘭苷單體的製備分離，紫外檢測器在線監測，針對性收集水晶蘭苷單體的製備餾分溶液，得水晶蘭苷單體溶液，進行下述步驟F；F、大孔樹脂富集將步驟E所得的水晶蘭苷單體溶液，於40℃-55℃水浴減壓濃縮至無醇，水溶液用環烯醚萜苷專用大孔吸附樹脂富集，用2.5-5倍柱體積的80％-95％乙醇解吸附，收集該乙醇解吸附液，進行下述步驟G；G、乾燥製得水晶蘭苷單體產品取步驟F所得的乙醇解吸附液，於40℃-55℃水浴減壓濃縮至幹，再將固體物於40℃-50℃與另器盛放的五氧化二磷共存，真空乾燥至恆重，收集幹品，即得所述的水晶蘭苷單體產品。
2.根據權利要求1中的方法，其特徵在於所述的步驟F 「大孔樹脂富集」過程中，大孔吸附樹脂選自D301、HPD600、NKA-9、AB-8 中的任意一種。
全文摘要
本發明公開了一種從巴戟天藥材中提取分離水晶蘭苷單體的方法，包括乙醇溶液提取、乙酸乙酯萃取、正丁醇萃取、過濾進一步除雜、通過製備型高效液相色譜分離水晶蘭苷單體、大孔樹脂富集、乾燥製得水晶蘭苷單體產品等步驟。該方法操作簡便，分離效率高，工藝穩定，成本低廉，可實現大量水晶蘭苷單體的高純度分離製備，得到的水晶蘭苷單體純度高，可達到98％以上。
文檔編號C07H17/04GK101812098SQ20091031130
公開日2010年8月25日 申請日期2009年12月13日 優先權日2009年12月13日
發明者劉丁, 夏柯, 文煥松, 郭建華 申請人:成都普思生物科技有限公司