將河魨毒素作為鎮痛藥的耐受抑制劑在製備複方鎮痛製劑中的應用的製作方法
2023-07-03 15:40:36 1
專利名稱：將河魨毒素作為鎮痛藥的耐受抑制劑在製備複方鎮痛製劑中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及將河魨毒素作為鎮痛藥的耐受抑制劑在製備複方鎮痛製劑中的應用，屬於生物醫藥領域。
背景技術：
河魨毒素(Tetrodotoxin，TTX)是一種化學結構獨特，生物活性極強的海洋生物神經毒素，其分子式為C11H17N3O8，分子量為319.27。TTX毒性極強，其毒性比氰化納強1250倍，這種令人生畏的毒素，只需0.35mg-0.5mg就可致人於死地。由於TTX具有阻斷神經細胞膜Na+通道的作用，所以，TTX目前已成為神經生物學和生理學研究領域一種非常重要的工具藥。
日本從上世紀三十年代起就將TTX用於人體鎮痛、局麻、鎮痙、鎮癢等臨床試用(潘心富，黃致強.藥學通報，1984，440)，但因TTX毒性極強，TTX的治療劑量與中毒量較接近的技術難題長期以來未能得到徹底解決，所以，TTX至今仍未被列入藥典名錄，其在臨床上的運用受到較大的局限性。
十幾年來，我國在TTX的藥用研究方面得到了卓有成效的發展，尤其是在TTX的臨床應用上取得多項成果(1)如以TTX為原料製成注射劑，用於戒除藥物依賴性和鎮痛的應用(WO95/24903、ZL981020720、CN1145225A、CN1353990A、CN1356104A、CN1051706C)；(2)採用新技術研製TTX呼吸道給藥製劑和TTX油相製劑等新劑型，在戒毒或鎮痛中的應用(CN1459286A、CN1754539A)；(3)TTX與其他藥物的配伍研究，如與抗心律失常藥配伍或與局麻藥配伍的研究等，表明TTX可提高抗心律失常藥物或局麻藥物的療效和治療指數，而對抗心律失常藥物毒性無明顯影響(李蘊山等，海洋藥物，1984，17-9；1986，210-12；張永健，河北醫學院學報，1989，19-13)。
目前現有技術中尚未有關於將TTX作為藥物耐受抑制劑在製備複方鎮痛製劑運用方面的報導。
眾所周知，目前臨床上應用的阿片類藥物在顯示其優異的鎮痛作用的同時，人們也一直為其所帶來的耐受性和依賴性問題所困擾，這不僅限制了阿片類藥物的臨床應用，而且還造成了吸毒這一世界性社會問題。儘管目前人們尚未尋找到鎮痛作用強、耐受性和依賴性小的新型鎮痛藥物，但有關報導說明，通過給老鼠服用少劑量的第二種止痛藥，這種動物開始形成耐藥性的時間會減慢(Li He，etal.Cell.2002，108271.)，此舉不失為解決目前鎮痛類藥物產生耐受性問題的一種方法。目前現有鎮痛藥物的抑制劑主要有NOS(一氧化氮合酶)抑制劑L-甲基精氨酸(L-NMMA)、N(G)-硝基-L-精氨酸(L-NNA)、N(G)-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)、7-N1等；另外CaM(鈣調蛋白)抑制劑-三氟拉嗪、CaMK II(依賴(於)鈣-鈣調蛋白的蛋白激酶II)抑制劑KN-62和KN-93、NMDA(N-甲基-D-天冬氨酸)受體拮抗劑MK801、DAMGO(腦啡肽)和氯胺酮等均可不同程度地阻斷嗎啡耐受性的產生，但是，有的抑制劑在對動物試驗中，動物體會出現血壓升高及與嗎啡有交叉產生耐受性等副作用(朱興族.藥理學進展，北京人民衛生出版社，1997.14；Fan GH，Wang LE，Qiu HC，et al.Mol Pharmacol，1999，56(1)39；Menendez L，Hidalgo A，BaamondeA.Eur J Pharmacol，1997，335(1)9；CN1309562A)。
據報導，微量TTX(1nmol.L-1)對交感神經釋放去甲腎上腺素具有選擇生抑制作用(任雷鳴等.TTX對電刺激誘發的兔隱動脈雙相血管收縮反應的作用.中國藥理學通報，2005，91123)，這表明微量TTX的脫癮和抑制嗎啡耐受作用，可能是TTX選擇性抑制交感神經所致。這一研究結果使我們萌生出新的思路，為將TTX作為耐受生抑制劑的應用提供了依據。
發明內容
本發明的目的是為了將河魨毒素作為鎮痛藥的耐受抑制劑在製備複方鎮痛製劑中的應用方法，另一目的在於，用TTX與阿片受體的弱激動劑(美沙酮、丁丙諾啡)配伍製成複方製劑，用於戒毒治療並能消除美沙酮等藥物本身所引起的戒斷綜合症。將TTX作為耐受抑制劑與鎮痛藥物配伍製成的複方鎮痛製劑，既不影響原鎮痛藥物的療效，又能抑制或降低鎮痛藥物所產生的耐受性。
為了達到上述目的，本發明是通過以下技術手段實現的一、TTX與鹽酸嗎啡進行配伍，可製成複方鹽酸嗎啡注射液(2)。
方法取鹽酸嗎啡10g溶於約900ml注射用中水，另取TTX 10mg溶於0.1％1ml稀鹽酸中，兩藥進行混合後，過濾，在自濾器上添加注射用水，使混合藥液達到1000ml的劑量，再經過混合攪拌均勻後，進行精濾，灌封，滅菌程序處理，即可得到複方鹽酸嗎啡注射液。
二、TTX與鹽酸嗎啡進行配伍，可製成複方鹽酸嗎啡粉劑。
方法取TTX 1mg和鹽酸嗎啡5g，置於容器內，在容器內再加入枸櫞酸鹽緩衝溶液，將兩藥進行溶解，再經過混合攪拌均勻後，進行精濾、分裝(每瓶複方鹽酸嗎啡粉劑含有鹽酸嗎啡5mg，TTX 1μg)，經過低溫真空乾燥，進行瓶口熔封，即可得到複方鹽酸嗎啡粉劑。
三、TTX與美沙酮進行配伍，可製成複方美沙酮片劑。
方法取美沙酮2.5g、醋酸鹽TTX 0.5mg，加入適量賦型劑，混合攪拌均勻，用製藥設備壓製成1000片的片劑，(每片含有美沙酮2.5mg，TTX 0.5μg，用玻璃藥瓶進行封裝，即可得到複方美沙酮片劑。
本發明所述的TTX的化學登記號為CAS-4368-28-9，在國內外均有銷售，TTX也可以用公開的技術從河豚魚等生物組織中提取(潘心富，黃致強等.從蟲紋東方豚卵巢中分離TTX的研究簡報.海洋藥物通訊.1980，246；ZL98102596.X)。
本發明所述的TTX包括以下一種或多種化合物TTX，4-表TTX，6-表TTX，脫水TTX，脫氧TTX，胺基TTX。
本發明所述的複方鎮痛製劑每毫升或每片(粒)TTX有效含量為0.01μg-15μg。
本發明所述TTX的溶劑為醋酸、稀鹽酸，苯甲酸，檸檬酸，及其酸的緩衝液。
本發明所述的鎮痛藥主要包括阿片、嗎啡、哌替啶、美沙酮、丁丙諾啡、二氫埃託啡、芬太尼、曲馬多、鎮痛新、及其製劑。
本發明所述的複方鎮痛製劑可以是注射劑、粉針劑，口服劑，口含片，噴霧劑、膠囊、栓劑、油相製劑。
本發明複方鎮痛製劑中，TTX的含量僅是TTX中毒量的幾十之一至幾百分之一，而該劑量與人的致死量相差幾十倍至幾百倍，所以上述複方鎮痛製劑是安全、可靠的，而且療效顯著，克服了TTX常規臨床用藥中，有時出現中毒症狀的難題，從而實現了鎮痛類藥物的升級。
本發明所述的複方鎮痛製劑中，鎮痛藥的用量可參照《中國藥典》或《中國藥物大全》規定藥劑的劑量±50％範圍配製。
表1 幾種常用鎮痛藥的劑型和劑量
摘自2005中國藥典、中國藥物大全 第三版本發明主要具有以下優點和特徵1、本發明的複方鎮痛製劑可以按常規鎮痛藥方法生產，生產工藝簡單、易於實施，生產成本低。
2、本發明將TTX作為耐受性抑制劑與鎮痛藥配伍製成的複方製劑，能抑制或降低鎮痛類藥物的耐受性，不產生影響鎮痛藥的毒性，且可提高鎮痛藥治療指數，延續治療時間。其中，製成的複方美沙酮製劑等既不影響在戒毒治療中的療效，又能降低或消除美沙酮等本身所引起的耐受生。
圖1是嗎啡與TTX合用對大鼠甩尾痛閾時程的曲線圖；圖2是納絡酮催促小鼠體重改變的曲線圖。
圖1中的豎坐標軸代表大鼠甩尾痛閾時間，橫坐標軸代表對大鼠的治療天數。
圖2中的豎坐標軸代表小鼠體重改變的百分比，橫坐標軸代表測定小鼠體重的時間。
下面結合實施例對本發明作進一步的詳細描述
具體實施例方式
實施例1取鹽酸嗎啡10g溶於約900ml的注射用水中，另取TTX 5mg溶於pH為4.5的苯甲酸10m中，兩藥進行混合後，過濾，在自濾器上添加注射用水，使混合藥液達到1000ml的劑量，再經過混合攪拌均勻後，進行精濾，灌封，滅菌程序處理，即可得到複方鹽酸嗎啡注射液(1)。
實施例2取鹽酸嗎啡10g溶於約900ml注射用中水，另取TTX 10mg溶於0.1％1ml稀鹽酸中，兩藥進行混合後，過濾，在自濾器上添加注射用水，使混合藥液達到1000ml的劑量，再經過混合攪拌均勻後，進行精濾，灌封，滅菌程序處理，即可得到複方鹽酸嗎啡注射液(2)。
實施例3取TTX 1mg和鹽酸嗎啡5g，置於容器內，在容器內再加入枸櫞酸鹽緩衝溶液，將兩藥進行溶解，再經過混合攪拌均勻後，進行精濾、分裝(每瓶複方鹽酸嗎啡粉劑含有鹽酸嗎啡5mg，TTX 1μg)，經過低溫真空乾燥，瓶口熔封，即可得到複方鹽酸嗎啡粉劑。
實施例4取美沙酮2.5g、醋酸鹽TTX 0.5mg，加入適量賦型劑，混合攪拌均勻，用製藥設備壓製成1000片的片劑，(每片含有美沙酮2.5mg，TTX 0.5μg，用玻璃藥瓶進行封裝，即可得到複方美沙酮片劑。
實施例5取鹽酸哌替啶50g，溶於約900ml注射用水中，另取TTX 1mg溶於0.1％2ml的醋酸中，將兩藥混合後，過濾，在自濾器上添加注射用水，使混合藥液達到1000ml的劑量，再經過混合攪拌均勻後，進行精濾，灌封，滅菌程序處理，即可得到複方鹽酸哌替啶注射液。
實施例6取枸櫞酸芬太尼100mg和枸櫞酸鹽TTX 0.1mg，置於容器內，在容器內再加入注射用水，使混合藥液達到1000ml的劑量，再經過混合攪拌均勻後，進行精濾，灌封，滅菌程序處理，即可得到複方枸櫞酸芬太尼注射液。
實驗例實驗例1TTX抑制嗎啡耐受性的實驗。
取大鼠24隻，隨機分成四組1、嗎啡組 2、嗎啡+TTX-a組 3、嗎啡+TTX-b組 4、生理鹽水對照組。
四組均採用在大鼠尾部靜脈滴注給藥，嗎啡+TTX二個組中除TTX外，所注射的嗎啡量與嗎啡組相同，對照組為生理鹽水。採用溫浴浸尾測定大鼠的甩尾痛閥，間隔同樣時間後，每天以同樣方法測試鎮痛效果一次，連續7天。實驗結果表明嗎啡組在給藥第3天後痛刺激閾值逐日下降，到第7天痛閾值與生理鹽水對照組接近(P＞0.05)；嗎啡+TTX二個組鎮痛作用明顯，嗎啡+TTX-a組與嗎啡組相比較有顯著差異(P＜0.01)(見圖1嗎啡與TTX合用對大鼠甩尾痛閾時程曲線)。研究表明TTX能抑制嗎啡耐受性的產生。
實驗例2TTX抑制嗎啡依賴性實驗取體重為21-25克的小鼠40隻，隨機分成4組1、生理鹽水對照組 2、嗎啡組組 3、嗎啡+TTX-1組 4、嗎啡+TTX-2組。採用2天遞增法，建立嗎啡依賴小鼠模型，除生理鹽水對照組外，實驗三個組，二天共接受7次腹腔注射不同劑量的嗎啡，造成小鼠對嗎啡的依賴性。嗎啡+TTX二個組在接受同嗎啡組一樣劑量嗎啡外，還注射TTX。各組小鼠末次給藥後2h，分別腹腔注射納絡酮(6mg/kg)催促戒斷反應。觀察記錄20min內小鼠跳躍次數，記錄催促24h內小鼠體重變化。
實驗結果表明，納絡酮催促後小鼠平均跳躍次數與生理鹽水組相比有明顯增加。嗎啡+TTX-1組和嗎啡+TTX-2組均能減少跳躍次數，尤其是在11-20min之間抑制作用明顯，嗎啡+TTX-1組與嗎啡組相比較有顯著差異(P＜0.01)，見表2。
納絡酮催促後各組小鼠體重均有下降，其中嗎啡組催促6h體重下降最明顯，嗎啡+TTX-1組和嗎啡+TTX-2組體重下降與生理鹽水對照組基本一致(P＞0.05)，嗎啡+TTX-1組下降程度顯著低於嗎啡組(P＜0.01)(圖2納絡酮催促小鼠體重改變曲線)。表明TTX能有效防止嗎啡依賴性的產生。
表2 納絡酮催促後20分鐘內小鼠跳躍反應 (X±SD)
與嗎啡組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
權利要求
1.將河魨毒素作為鎮痛藥的耐受抑制劑在製備複方鎮痛製劑中的應用，其特徵在於所述的複方鎮痛製劑每毫升或每片(粒)的河魨毒素的有效含量為0.01μg-15μg。
2.根據權利要求1所述的將河魨毒素作為耐受抑制劑在製備複方鎮痛製劑中的應用，其特徵在於所述的鎮痛藥主要包括阿片、嗎啡、哌替啶、美沙酮、丁丙諾啡、二氫埃託啡、芬太尼、曲馬多、鎮痛新、及其製劑。
3.根據權利要求1或2所述的將河魨毒素作為耐受抑制劑在製備複方鎮痛製劑中的應用，其特徵在於所述的複方鎮痛製劑可以是注射劑、粉針劑、口服劑、口含片、噴霧劑、膠囊、栓劑、油相製劑。
全文摘要
本發明涉及將河魨毒素作為鎮痛藥的耐受抑制劑在製備複方鎮痛製劑中的應用，所述的複方鎮痛製劑為注射劑、粉針劑、口服劑、口含片、噴霧劑、膠囊、栓劑和油相製劑，可抑制鎮痛藥的耐受性，不產生影響鎮痛藥的毒性，提高鎮痛藥的療效。所述的複方鎮痛製劑的製備方法具有工藝簡單，容易實施，所需成本低的優點。
文檔編號A61K31/135GK1864685SQ20061009263
公開日2006年11月22日 申請日期2006年6月26日 優先權日2006年6月26日
發明者黃致強, 黃海燕, 黃海楓 申請人:黃致強