一種複方矮地茶片的定性定量檢測方法
2023-06-03 10:51:36 2
一種複方矮地茶片的定性定量檢測方法
【專利摘要】本發明公開了一種複方矮地茶片的定性定量檢測方法，改進了複方矮地茶片中矮地茶的顯微鑑別，增加了複方矮地茶片中矮地茶、野菊花、甘草的薄層鑑別，建立了複方矮地茶片中巖白菜素的含量測定方法；鑑別：採用顯微鑑別法鑑別矮地茶，薄層色譜法鑑別矮地茶、野菊花、甘草；含量測定：採用高效液相色譜法測定矮地茶中巖白菜素的含量；每片含矮地茶以巖白菜素(C14H16O9)計，不得少於1.5mg。本發明方法可增加該產品的質量可控性，克服現有技術的不足，以便能夠更好的保證療效，更好的為廣大患者服務。
【專利說明】一種複方矮地茶片的定性定量檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬於中藥【技術領域】，具體涉及一種複方矮地茶片的質量控制方法。
【背景技術】
[0002] 複方矮地茶片是清熱解毒，化痰止咳的藥品，臨床上用於肺熱咳嗽及慢性氣管炎 等症。其原質量標準為部頒標準，標準編號：WS3-B-1793-94,原標準中僅有1項顯微鑑別和 2項化學鑑別，該標準難以有效控制產品質量。中國藥事2010年第24卷第10期《HPLC法 測定複方矮地茶片中巖白菜素含量》記載了採用HPLC法測定複方矮地茶片中巖白菜素含 量的方法，中國藥業2009年第18卷第22期《反相高效液相色譜法測定複方矮地茶膠囊中 巖白菜素含量》建立了一種複方矮地茶膠囊中巖白菜素含量的RP-HPLC法，湖南中醫雜誌 2009年第25卷第6期《HPLC法測定複方矮地茶片中巖白菜素的含量》記載了HPLC法測定 複方矮地茶片中巖白菜素的含量的方法，發明人經過提取溶劑對比考察，這三篇文獻中採 用甲醇的提取率次於本發明中採用的80%甲醇的提取率。中國實驗方劑學雜誌2010年第 16卷第9期《HPLC測定複方矮地茶片中巖白菜素的含量》記載了HPLC法測定複方矮地茶 片中巖白菜素的含量的方法。上述方法都是只建立了巖白菜素含量測定方法，無法對製劑 質量進行全面可靠的控制。
[0003] 總得來說，現有的定性定量檢測方法不能有效的控制複方矮地茶片的質量，從而 將影響該產品的生產和質量保證及其臨床療效。
[0004]
【發明內容】
： 本發明的目的是提供一種複方矮地茶片的定性定量檢測方法，包括複方矮地茶片中 矮地茶的顯微鑑別，矮地茶、野菊花、甘草的薄層鑑別，複方矮地茶片中巖白菜素的含量 測定方法；鑑別：採用顯微鑑別法鑑別矮地茶、薄層色譜法鑑別矮地茶、野菊花、甘草；含 量測定：採用高效液相色譜法測定矮地茶中巖白菜素的含量；每片含矮地茶以巖白菜素 (C14H16O9)計不得少於1.5mg。本發明方法可增加產品的質量可控性，克服現有技術的不足， 以便能夠更好的保證療效，更好的為廣大患者服務。
[0005] 本發明的目的是通過如下技術方案實現的：一種複方矮地茶片的定性定量檢測方 法，（1)採用顯微鑑別矮地茶，採用薄層色譜法鑑別矮地茶、野菊花、甘草；（2)採用高效液 相色譜法測定矮地茶中巖白菜素的含量，包含如下步驟： (1)鑑別： 矮地茶的顯微鑑別包括下列步驟：取本品，置顯微鏡下觀察：螺紋導管直徑7. 5? 25ym，纖維成束，壁較厚，草酸興方晶直徑7. 5?26ym(矮地茶)。
[0006] 矮地茶的薄層鑑別包括下列步驟：取本品2片，除去包衣，研細，加甲醇20ml，超聲 處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。另取巖白菜素對照品適量，加甲 醇製成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附 錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液3?5W，分別點於同一矽膠G薄層板上，以石油醚（60? 90°C)_乙酸乙酯-甲醇（9 : 8 : 2)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1%三氯化鐵-1%鐵 氰化鉀（I: 1)的混合溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的 斑點。
[0007] 野菊花的薄層鑑別包括下列步驟：取本品3片，除去包衣，研細，加甲醇15ml，超聲 處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。另取蒙花苷對照品適量，加甲醇 製成每Iml含0. 2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附 錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液1?2W，分別點於同一聚醯胺薄膜上，以乙酸乙酯-丁 酮-三氯甲烷-甲酸-水（15 : 15 : 6 : 4 : 1)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以2%三 氯化鋁溶液，在l〇5°C加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈（365nm)下檢視。供試品色譜中，在 與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
[0008] 甘草的鑑別包括下列步驟：取本品20片，除去包衣，研細，加乙醚40ml，超聲處理 15分鐘，濾過，棄去乙醚液，藥渣加甲醇50ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水 40ml使溶解，用以水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合併正丁醇提取液，用以正丁 醇飽和的水洗滌3次，每次20ml，棄去水液，取正丁醇液蒸乾，殘渣加甲醇5ml使溶解，作為 供試品溶液。另取甘草對照藥材lg，同法製成對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典 2010年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各3?5iU，分別點於同一矽膠G薄層板 上，使成條狀，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15 : 1 : 1 : 2)為展開劑，展開，取出，晾 幹，噴以10%硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈（365nm)下檢視。供試 品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
[0009] (2)含量測定： 矮地茶中巖白菜素的含量測定方法包括下列步驟：照高效液相色譜法（中國藥典2010 年版一部附錄VID)測定。
[0010] 色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-水 (20 : 80)為流動相；檢測波長為275nm。理論板數按巖白菜素峰計算應不低於3000。
[0011] 對照品溶液的製備取巖白菜素對照品適量，精密稱定，加80%甲醇製成每Iml 含50吒的溶液，即得。
[0012] 供試品溶液的製備取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細，取約0. 15g，精密稱 定，置25ml量瓶中，加80%甲醇20ml，超聲處理(功率300W，頻率40kHz) 45分鐘，放冷，力口 80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
[0013] 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10yi，注入液相色譜儀，測 定，即得。
[0014] 複方矮地茶片每片含矮地茶以巖白菜素（C14H16O9)計，不得少於I. 5mg。
[0015] 為更好的表明本發明的實質，將本發明的方法學考察詳述如下： (1)矮地茶的顯微鑑別 取本品，置顯微鏡下觀察：螺紋導管直徑7. 5~25ym，纖維成束，壁較厚，草酸鈣方晶直 徑7. 5?26iim(矮地茶)。結果見圖1。
[0016](2)矮地茶的薄層色譜鑑別 ①供試品溶液的製備：取本品2片，除去包衣，研細，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾 過，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。
[0017]②對照品溶液的製備：取巖白菜素對照品適量，加甲醇製成每Iml含Img的溶液， 作為對照品溶液。
[0018] ③陰性樣品溶液的製備：按處方配比，取除去矮地茶的其他味藥材，按製法項下的 工藝製成樣品，再按上述供試品溶液製備方法製得陰性樣品溶液。
[0019] ④薄層色譜條件及結果：照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VIB)試 驗，取上述三種溶液3?5W，分別點於同一矽膠G薄層板上，以石油醚（60?90°C)_乙酸乙 酯-甲醇（9 : 8 : 2)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1%三氯化鐵-1%鐵氰化鉀（1 : 1) 的混合溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，缺矮地茶 的陰性對照無幹擾，結果見圖2。
[0020] (3)野菊花的薄層色譜鑑別 ①供試品溶液的製備：取本品3片，除去包衣，研細，加甲醇15ml，超聲處理30分鐘，濾 過，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。
[0021]②對照品溶液的製備：取蒙花苷對照品適量，加甲醇製成每Iml含0. 2mg的溶液， 作為對照品溶液。
[0022] ③陰性樣品溶液的製備：按處方配比，取除去野菊花的其他味藥材，按製法項下的 工藝製成樣品，再按上述供試品溶液製備方法製得陰性樣品溶液。
[0023] ④薄層色譜條件及結果：照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VIB)試 驗，吸取上述三種溶液1?2W，分別點於同一聚醯胺薄膜上，以乙酸乙酯_ 丁酮-三氯甲 烷-甲酸-水（15 : 15 : 6 : 4 : 1)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以2%三氯化鋁溶液， 在105°C加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈（365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色 譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，缺野菊花的陰性對照無幹擾，結果見圖3。
[0024] (4)甘草的薄層色譜鑑別 ①供試品溶液的製備：取本品20片，除去包衣，研細，加乙醚40ml，超聲處理15分鐘， 濾過，棄去乙醚液，藥渣加甲醇50ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水40ml使溶 解，用以水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合併正丁醇提取液，用以正丁醇飽和的 水洗滌3次，每次20ml，棄去水液，取正丁醇液蒸乾，殘渣加甲醇5ml使溶解，作為供試品溶 液。
[0025] ②對照藥材溶液的製備：取甘草對照藥材lg，加乙醚40ml，超聲處理15分鐘，濾 過，棄去乙醚液，藥渣加甲醇50ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水40ml使溶解， 用以水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合併正丁醇提取液，用以正丁醇飽和的水洗 滌3次，每次20ml，棄去水液，取正丁醇液蒸乾，殘渣加甲醇5ml使溶解，作為對照藥材溶液。
[0026] ③陰性樣品溶液的製備：按處方配比，取除去甘草的其他味藥材，按製法項下的工 藝製成樣品，再按上述供試品溶液製備方法製得陰性樣品溶液。
[0027] ④薄層色譜條件及結果：照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VIB)試驗， 吸取上述三種溶液各3?5yl，分別點於同一矽膠G薄層板上，使成條狀，以乙酸乙酯-甲 酸-冰醋酸-水（15 : 1 : 1 : 2)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液， l〇5°C加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈（365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色 譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點，缺甘草的陰性對照無幹擾，結果見圖4。
[0028](3)巖白菜素含量測定 ①儀器與試藥=Wasters1525高效液相色譜儀；CG-300超聲清洗儀（300W，25kHz);天 平：AE240，CP22? ;WasterS 2996 (PDA);巖白菜素（中國藥品生物製品檢定所提供，供含量 測定用，批號=111532-200202)。甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。
[0029]②系統適應性：色譜柱：Agient C18( DB) ( 250mm X4. 6mmX5Mm)，Agilent公司； 柱溫：35°C;流動相：甲醇一水（20 : 80);流速l.Oml/min;檢測波長275nm;色譜工作站 Empower。
[0030] ③對照品溶液的製備：精密稱取巖白菜素對照品24. 79mg，置50ml量瓶中，力口 80%甲醇適量使溶解，加80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品貯備液（C=0. 4958mg/ml)。 精密量取貯備液l〇ml，置IOOml量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液 (C=0. 04958mg/ml)。精密吸取lOiil，注入液相色譜儀，測定，見圖5。
[0031] ④供試品溶液的製備 取本品適量(批號=20110714)，除去包衣，研細，備用。
[0032] ⑤提取溶劑的選擇 取上述粉末〇. 15g，共8份，精密稱定，置25ml量瓶中，加入甲醇、80%甲醇、50%甲醇、 20%甲醇20ml，超聲45分鐘，放冷，補充相應的溶劑至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。精 密吸取對照品溶液10 與供試品溶液10Ul，注入液相色譜儀，測定並計算，結果見表1。
[0033]表1提取溶劑選擇結果比較表
【權利要求】
1. 一種複方矮地茶片的定性定量檢測方法，其特徵在於包括（1)採用顯微鑑別矮地 茶，採用薄層色譜法鑑別矮地茶、野菊花、甘草，（2)採用高效液相色譜法測定矮地茶中巖白 菜素的含量，所述定性定量檢測方法包含如下步驟： (1) 鑑別： 矮地茶的顯微鑑別包括下列步驟；取本品，置顯微鏡下觀察；螺紋導管直徑7. 5? 25 y m，纖維成束，壁較厚，草酸巧方晶直徑7. 5?26 y m (矮地茶）； 矮地茶的薄層鑑別包括下列步驟；取本品2片，除去包衣，研細，加甲醇20ml，超聲處 理30分鐘，濾過，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液；另取巖白菜素對照品適量，加甲醇 製成每1ml含Img的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄 VI B)試驗，吸取上述兩種溶液3?5W，分別點於同一娃膠G薄層板上，W石油離（60? 9(TC)-己酸己醋-甲醇（9 : 8 : 2)為展開劑，展開，取出，瞭幹，噴^1%立氯化鐵-1%鐵 氯化鍾（1 : 1)的混合溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的 斑點； 野菊花的薄層鑑別包括下列步驟；取本品3片，除去包衣，研細，加甲醇15ml，超聲處理 30分鐘，濾過，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液；另取蒙花巧對照品適量，加甲醇製成每 1ml含0. 2mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B) 試驗，吸取上述兩種溶液1?2W，分別點於同一聚醜胺薄膜上，W己酸己醋-下麗-H氯甲 焼-甲酸-水（15 : 15 : 6 : 4 : 1)為展開劑，展開，取出，瞭幹，噴W 2% H氯化鉛溶液， 在105C加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈（365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色 譜相應的位置上，顯相同顏色的英光斑點； 甘草的鑑別包括下列步驟；取本品20片，除去包衣，研細，加己離40ml，超聲處理15分 鍾，濾過，棄去己離液，藥渣加甲醇50ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水40ml使 溶解，用W水飽和的正下醇振搖提取3次，每次20ml，合併正下醇提取液，用W正下醇飽和 的水洗塗3次，每次20ml，棄去水液，取正下醇液蒸乾，殘渣加甲醇5ml使溶解，作為供試品 溶液；另取甘草對照藥材Ig，加己離40ml，超聲處理15分鐘，濾過，棄去己離液，藥渣加甲 醇50ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水40ml使溶解，用W水飽和的正下醇振搖 提取3次，每次20ml，合併正下醇提取液，用W正下醇飽和的水洗塗3次，每次20ml，棄去水 液，取正下醇液蒸乾，殘渣加甲醇5ml使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法（中國藥典 2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各3?5 y 1，分別點於同一娃膠G薄層板 上，使成條狀，W己酸己醋-甲酸-冰醋酸-水（15 : 1 : 1 : 2)為展開劑，展開，取出，瞭 幹，噴W 10%硫酸己醇溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈（365nm)下檢視；供試 品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的英光斑點； (2) 含量測定： 矮地茶中巖白菜素的含量測定方法包括下列步驟：照高效液相色譜法（中國藥典2010 年版一部附錄VI D)測定； 色譜條件與系統適用性試驗：用十八焼基娃焼鍵合娃膠為填充劑；W甲醇-水 (20 : 80)為流動相；檢測波長為275nm，理論板數按巖白菜素峰計算應不低於3000; 對照品溶液的製備；取巖白菜素對照品適量，精密稱定，加80%甲醇製成每1ml含50嗦 的溶液，即得； 供試品溶液的製備；取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細，取約0. 15g，精密稱定，置 25ml量瓶中，加80 %甲醇20ml，超聲處理(功率300W，頻率40曲Z )45分鐘，放冷，加80 %甲 醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得： 測定法；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 y 1，注入液相色譜儀，測定，即 得； 複方矮地茶片每片含矮地茶W巖白菜素（CwHieOg)計，不得少於1.5mg。
【文檔編號】G01N30/02GK104345117SQ201310318365
【公開日】2015年2月11日 申請日期:2013年7月26日 優先權日:2013年7月26日
【發明者】辛秀, 谷陟欣, 張妮瑜, 歐金秀, 郗瑞雲, 袁莉, 朱麗, 顏冬蘭 申請人:九芝堂股份有限公司