治療肉瘤和前列腺癌的營養性組合物的製作方法

2023-05-31 11:43:41 3

專利名稱：治療肉瘤和前列腺癌的營養性組合物的製作方法
治療肉瘤和前列腺癌的營養性組合物
本發明涉及包含抗壞血酸化合物、L-賴氨酸化合物、L-脯氨酸化 合物和多酚化合物的組合物在製備治療纖維-或滑膜肉瘤和前列腺癌 的藥物組合物中的應用。此外，本發明進一步涉及一種治療方法，其 中將所述組合物施用於患纖維-或滑膜肉瘤和前列腺癌的患者。
美國癌症協會估計，在2004年大約563， 700名美國人將死於癌症， 並將才艮道約 1， 368， 030 個新的癌症病例[American Cancer Society (2004)]。已經改善了檢測工具，可以進行各種癌症的早期檢 測，隨後可以有較寬範圍的治療選擇，使其相關的死亡減少[Haese等 人，(2001)]。此外，當診斷較早時，有利於存活率的升高；但是，在 晚期的癌症和稱作軟組織肉瘤的高度轉移癌中，相關的預測一般是很 難的。大約90%的癌症死亡是發生在轉移癌的患者中。例如，甚至當 診斷出纖維肉瘤，並進行了早期的手術治療時，轉移到身體遠端部分 的癌症的死亡率大於70%[Papagelopoulos等人，(2002)]。
儘管手術是早期癌症的治療選擇，但是它的應用一般僅限於集中 性的腫瘤，並且會伴隨很多可能的副作用。作為前列腺切除術的結果， 患者可能遭受神經損害、陽痿、失禁或直腸損傷[Bishoff等人，(1998)， Melman等人，(2004)， Talcott等人，(2003)]。防禦癌症的第二條 線是激素療法、化學療法和放射療法。儘管前列腺患者最初可以從激 素療法或雄激素去除療法中受益，但是至多幾年以後非-雄激素依賴性 或敏感的癌症細胞的出現就會使該治療方式變得無效[Isaacs等人， (1999)]。此外，結果是患者可能發生陽痿、熱潮紅、噁心、嘔吐、腹 瀉、肝併發症、骨衰退、胸部生長和/或壓痛[National Cancer Institute(2004)， Conde等人，(2003)]。化學療法和放射療法一般 對晚期癌症患者沒有益處，因為它們針對的是破壞癌症細胞，但是不 會作用於轉移灶。這些治療方法不僅不能有效地提供治療，而且會無 針對性地攻擊所有的細胞一導致細胞損害和身體的結締組織被破壞， 促進了癌症的轉移。這清楚地表明，當前的治療方式限制了治療和預 防轉移癌，因此迫切需要新的安全和有效的治療途徑。
已經報導了幾種營養性化合物顯示出抗癌活性。已經報導，抗壞
血酸對於惡性細胞系具有細胞毒性和抗轉移活性[Koh， Lee等人， (1998)， Roomi， House等人，(1998)， Naidu， Karl等人，(2003)]; 此外，淨艮道了低水平的抗壞血酸可以用於癌症患者[Anthony and Schorah (1982) ， N畫z， Ortiz de Apodaca等人，(1995)， Kurbacher， Wagner等人，(1996)]。 ECGC是一種有效的抗癌劑，已經報導了它對 於某些人癌症細胞系具有生長抑制作用[Valcic， Timmerman等人， (1996)， Mukhtar and Ahmed (2000) ， Yang， Liao等人，(1998)]。但 是，所觀察到的作用相當的弱，因此，不適合以此為基礎作為快速生 長和攻擊性癌症的治療途徑。其他研究提示，在組織培養研究中，抗 壞血酸和EGCG與其他化合物一起對於數種癌症細胞系的協同抗癌作 用大於單獨使用所述營養素[Netke， Roomi等人，(2003)]。癌細胞形 成腫瘤，並經各種基質金屬蛋白酶(MMPs),通過降解細胞外基質(ECM) 擴散。已經假定，營養素例如賴氨酸和抗壞血酸可以作為ECM蛋白水 解的天然抑制劑，這樣，其就具有抑制腫瘤生長和膨脹的潛力[Rath 和Pauling(1992)]。此外，提示通過抑制透明質酸酶，抗壞血酸可以 通過防止腫瘤周圍的基質降解而預防轉移[Cameron等人，(1979)]。
這清楚地表明，需要安全和有效的治療途徑來控制癌症轉移的過 程，特別是攻擊性癌症例如纖維-或滑膜肉瘤和前列腺癌。
因此，本發明的技術問題必須視作是提供手段和方法來滿足上述 需要。
通過權利要求和下文表徵的實施方案來解決該問題。 因此，本發明涉及包含
(a) 抗壞血酸化合物，
(b) L-賴氨酸化合物，
(c) L-脯氨酸化合物，和(d)多酚化合物
的組合物在製備治療纖維-或滑膜肉瘤或前列腺癌的藥物組合物 中的應用。
術語"組合物"包括上述涉及的營養性化合物的液體和固體製劑 以及其凝膠。固體製劑可以製備成適當的形式，包括片劑、膠嚢、粉 末、顆粒、茶製品等等。本領域公知如何製備本文涉及的所述液體、 凝膠樣和固體製劑。本文涉及的組合物可以根據本發明作為化合物的 混合物使用，或通過包含分離的成分的試劑盒來使用。各成分可以在 分開的玻璃瓶中包裝於所述試劑盒中。該組合物也適合人或動物使用。 優選地，所述動物是哺乳動物，最優選狗、貓或馬。
本發明涉及的胺基酸"脯氨酸"或"賴氨酸"優選是L-胺基酸。 "脯氨酸"或"賴氨酸"也包括其羥基衍生物羥脯氨酸和羥賴氨酸及 其鹽。
術語"抗壞血酸"優選是指抗壞血酸酯(ascorbate)、抗壞血酸 及其鹽。有時抗壞血酸化合物也稱作維生素C。
本發明使用的術語"多酚化合物"優選是指綠茶植物的製品，包 含存在於綠茶中的多酚化合物。多酚化合物最高可以是綠茶的30%幹 重。它們包括生物黃酮素(bioflavinoids)，例如黃烷醇、黃烷二醇、 黃酮和酚酸。黃垸醇代表綠茶中最豐富的多酚，通常稱作兒茶素。最 優選地，所述兒茶素是EGCG、 EG、 ECG或EC。 EGCG是指(-)-表沒食子 兒茶精-3-沒食子酸酯、EC是指表兒茶素，是指(-)-表兒茶素，ECG 是指表兒茶素-3-沒食子酸酯，是指(-)-表兒茶素-3-沒食子酸酯，EGC 是指表沒食子兒茶精，是指(-)-表沒食子兒茶精。本領域公知如何獲 得這些製品。優選地，以每天和每位患者200 mg到5000 mg的量^(吏用 多酚。
本發明的應用中涉及的化合物可以以任意適當的比例或量使用。 本領域技術人員通過使用下文涉及的伴隨的實施例指定的測定法確定 該比例或量是否適當。最優選地，本發明涉及的化合物提供的每日劑 量是維生素C (例如抗壞血酸和抗壞血酸Mg、 Ca棕櫚酸酯)700 mg;
L-賴氨酸1000 mg; L-脯氨酸750 mg; L-精氨酸500 mg; N-乙醯半胱 氨酸200 mg;標準化的綠茶提取物(80%多酚)1000 mg;硒30 mg; 銅2 mg; 錳lmg。
本發明所施用的藥物組合物包括藥學可接受的栽體、稀釋劑或賦 形劑。本發明中使用的組合物可以通過本領域已知的方法來製備。代 表性的成分可以與常規的賦形劑、稀釋劑或載體配製在一起，形成片 劑、膠嚢、混懸劑、粉末等等，賦形劑、稀釋劑和載體的例子包括 i)填充劑和混合劑例如澱粉、糖、甘露醇和矽的衍生物；ii)粘合劑 例如羧甲基纖維素和其他纖維素衍生物、海藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡 咯烷酮；iii)保溼劑例如甘油；崩解劑例如碳酸4丐和碳酸氫鈉；防止 溶解的試劑例如石蠟；iv)促進吸收劑例如季胺類化合物；v)表面活 性劑例如乙醯醇和單硬脂酸甘油酯；v)吸附載體例如高冷土和膨潤 土；和vi)潤滑劑例如滑石、硬脂酸鈣和鎂及固體聚乙二醇。該組合 物也可以配製成常規口服的酏劑或溶液，或適合胃腸外施用例如肌內、 皮下或靜脈途徑的溶液。理想地，該製劑是丸劑、片劑、膠嚢、錠劑、 液體或上述的類似劑型。該組合物適合配製成持續釋放的劑型等等。
本文使用的術語"治療"是指減少、抑制、減弱或治療伴隨著本 發明所涉及的病理性情況的症狀。通過監測所述病理性情況伴隨的症 狀，該治療對於臨床醫生變的顯而易見。症狀在標準教科書例如 Stedman或Pschyrembel中進行了詳述。治療優選是指顯著地減少、 抑制、減弱或治療。通過統計學的標準方法，例如Student t-檢驗、 卡方檢驗等等可以確定顯著性。術語"纖維-或滑膜肉瘤"是指在結締 組織和滑膜中出現的間質細胞源性的癌症類型。術語"前列腺癌"是 指前列腺發生的所有癌症類型。所述疾病或病症伴隨的症狀是本領域 公知的，並在醫學教科書例如Stedman或Pschyrembel中進行了詳述。 因此，臨床醫生可以無需費力確定患者是否具有那些症狀。術語"預 防"是指也可以施用所述營養性組合物，以避免發生上述疾病。
在本發明的研究中，研究了在無胸腺的棵鼠中，包含賴氨酸、脯 氨酸、精氨酸、抗壞血酸和表沒食子兒茶精沒食子酸酯的該組合物，
有時也稱作營養性混合物(NS)對人癌異種移植物的抑制作用。在分離 一周後，用3xl(T乳腺癌細胞MBA-MD-231接種5-6周大的雌性小鼠(I 組)；將雄性小鼠分為5組，並用3xl(^癌細胞皮下接種II組，前 列腺癌細胞PC-3; III組結腸癌細胞HCT 116; IV組，黑色素瘤細胞 A2058; V組，纖維肉瘤HT 1080; VI組，滑膜肉瘤Hs 701 T。在注 射後，將每組隨機分成2個亞組；IA-VIA組用普通膳食餵食，IB-VIB 組用含0. 5°/。的營養性混合物的普通膳食餵食。(每個亞組包括6隻小 鼠)。4周後，處死小鼠，將腫瘤分離，稱重，進行組織學處理。令 人驚奇地，結果表明，營養物質的協同作用押制了棵鼠腫瘤的生長並 使其尺寸減小特別是強烈地將前列腺癌減小了 53%，纖維肉瘤減小 了 5.9%,滑膜肉瘤減小了 44%,而乳腺癌的減小強度較小(27%,未顯 示數據)。此外，組織學檢查顯示，營養性混合物降低了分裂指數。 在棵鼠中，該營養性混合物強烈地抑制了腫瘤的生長，而沒有任何副 作用，提示它是有希望的抗癌劑。
由於本發明，可以治療肉瘤例如纖維肉瘤和滑膜肉瘤和前列腺癌， 而沒有常規療法例如手術和/或放射療法的有害副作用。
案的各種變形.
在本發明的應用的一個優選實施方案中，所述抗壞血酸化合物選 自抗壞血酸、藥學可接受的抗壞血酸鹽、抗壞血酸酯，更優選抗壞血 酸棕櫚酸酯，和/或上述化合物的混合物。更優選地，所述藥學可接受 的抗壞血酸鹽選自抗壞血酸鉤鹽和抗壞血酸鎂鹽。在根據本發明的組 合物的製備中使用的化合物的適當量在W0 03/057201 A2中詳細地公 開，通過參考引入本文。優選地，該抗壞血酸化合物是量為25 mg到 5000 mg的抗壞血酸，和/或相同量的抗壞血酸鉤和/或抗壞血酸鎂和/ 或抗壞血酸椋櫚酸酯。所有的量是根據每天和每位患者計算的。
在本發明的應用的一個進一步優選的實施方案中，所述L-賴氨酸 化合物選自鹽酸L-賴氨酸、L-賴氨酸和藥學可接受的L-賴氨酸鹽。
曰月的紐^物的嶽l備屮估用的化^物的i舌當量在W003/057201 A2中詳細地公開，通過參考引入本文。L-賴氨酸化合物優 選也可以是上述組的物質的至少兩種的混合物。優選地，L-賴氨酸化 合物是每日和每位患者50 mg到5000 mg的量的L-賴氨酸。
在本發明的應用的另一個進一步優選的實施方案中，所述L-脯氨 酸化合物選自鹽酸L-脯氨酸、L-脯氨酸和藥學可接受的L-脯氨酸鹽。
在根據本發明的組合物的製備中使用的化合物的適當量在W0 03/057201 A2中詳細地公開，通過參考引入本文。L-脯氨酸化合物優 選也可以是上述組的物質的至少兩種的混合物。優選地，L-脯氨酸化 合物是每日和每位患者25 mg到3000 mg的量的L-脯氨酸。
在本發明的應用的另一個優選的實施方案中，所述組合物進一步 包含微量元素，選自硒、錳、鎂、4丐和銅。
在根據本發明的組合物的製備中使用的化合物的適當量在WO 03/057201 A2中詳細地公開，通過參考引入本文。該組合物優選包含至 少兩種，至少三種或更多的上述組的微量元素。優選地，微量元素可以 按每天和每位患者的下列量一起，分別或任意組合使用硒lyg到200 jig; 4同20 jng到9000 m g;錳50 |i g到10000 m g; 4丐300 mg 到600 mg; 4美300 mg到600 mg。
在本發明的應用的一個進一步優選的實施方案中，所述組合物進 一步包含L-精氨酸化合物。優選地，所述L-精氨酸化合物選自鹽酸 L-精氨酸、L-精氨酸和藥學可接受的L-精氨酸鹽。
在根據本發明的組合物的製備中使用的化合物的適當量在WO 03/057201 A2中詳細地公開，通過參考引入本文。L-精氨酸化合物優 選也可以是上述組的物質的至少兩種的混合物。優選地，L-精氨酸化 合物是每日和每位患者50 mg到3000 mg的量的L-精氨酸。
在本發明的應用的另一個優選的實施方案中，該組合物進一步包 含N-乙醯半胱氨酸。
本文使用的"N-乙醯半胱氨酸"包含半胱氨酸或胱氨酸(半胱氨 酸的二聚體)及其半胱氨酸鹽。在根據本發明的組合物的製備中使用 的化合物的適當量在WO 03/057201 A2中公開，通過參考引入本文。
優選地，N-乙醯半胱氨酸是每日和每位患者10 mg到1500 mg的量。 在本發明的應用的一個優選的實施方案中，所述組合物是以口服、
胃腸外、皮下、動脈內或靜脈內的形式施用。
本發明也涉及一種在患者中治療纖維-或滑膜肉瘤或前列腺癌的
方法，包括給纖維-或滑膜肉瘤或前列腺癌的患者施用治療有效量的上
述定義的組合物的步驟。
本領與技術人員公知如何將該組合物施用於患者。特別優選的技
術在W0 03/057201 A2中詳細地公開，通過參考引入本文。此外，本
發明的應用的所有實施方案可以用於上述治療纖維-或滑膜肉瘤或前
列腺癌的方法的所有變形。
在該方法一個優選的實施方案中，所述患者是人。 在該方法一個進一步優選的實施方案中，該組合物是口服、胃腸
外、胃腸外、皮下、動脈內或靜脈內施用。
參考文獻的內容通過參考引入本文。
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附圖表示的是
附

圖1:在用營養性混合物(NS)治療4周後，在棵鼠中測定腫瘤
的大小和重量人乳腺癌細胞MDA-231(1A)、前列腺癌細胞PC-3 (IB)、 結腸癌細胞HCT 116(1C)、黑色素瘤細胞A2058 (1D)、纖維肉瘤HT 1 080 (1E)和滑膜肉瘤Hs 701. T(F)。每組的結果表示為平均值± SE。
附圖2:營養物質的協同作用對於雄性棵鼠負載的腫瘤，即結腸 癌細胞HCT 116、黑色素瘤細胞A2058和前列腺癌PC-3(2A)的作用， 及0. 5y。的營養性製劑(NS)對於棵鼠(2B)中前列腺癌細胞PC-3的腫瘤 生長(腫瘤值)的作用。
附圖3:在施用0. 5。/。的營養性混合物(NS)4周後的組織學檢查表 明，人乳腺癌細胞MDA-231(3A-對照，3B -0. 5% NS)、結腸癌細胞HCT 116(3C-對照，3D-0. 5%NS)、黑色素瘤細胞A2058 (3E-對照，3F-O. 5% NS)和前列腺癌細胞PC-3(3G -對照，3H -0.5% NS)的分裂指數降低。
將通過下列的實施方案解釋本發明。但是，這些實施例並不是用 於限制本發明的範圍。
實施例在棵鼠中不同癌症類型的治療
在該研究中使用的所有癌症林是得自American Type Culture Collect ion (Rockvi lie, MD)。這些包括乳腺癌(MDA-MB-231)、前 列腺癌(PC-3)、結腸癌(HCT 116)、黑色素瘤(A2058)、纖維肉瘤 (HT-1080)和滑膜肉瘤(HTB-93)。
將黑色素瘤和滑膜肉瘤培養物保持在Dulbecco改性Eagle培養 基中，將PC-3保持在Ham F12培養基(F12K)中，將結腸癌保持在McCoy 培養基中，將HT-1080保持在MEM中，將MBA-MD-231保持在Leibovi tz 培養基中。所有的培養基中都補充10%胎牛血清、100 U/ml青黴素和 100 pg/ml鏈黴素。所使用的培養基和血清得自ATCC,抗生素(青黴 素和鏈黴素)是得自Gibco BRL， Long Island, NY。在接近融合時， 通過胰蛋白酶作用分離所培養的細胞，用PBS洗滌，稀釋並乳化，使 在0. 2 ml PBS和0. 1 ml Matrigel(BD Bioscience, Bedford, MA) 中細胞濃度為3 X1(T細胞，以進行培養。
到來時約6周大的雄性和雌性無胸腺棵鼠(NCr-nu/nu)購自 Simonsen Laboratories, Gilroy， CA,將其在無病原體的環境中按 照12小時光亮、12小時黑暗的方案在微型絕緣體籠中保持1周。根 據制度性的指導方針來護理所有動物，以進行實驗動物的護理和使用。
在圏養1周後，將小鼠分成下列的組雌性棵鼠在I組，雄性小 鼠分為5個組，II-VI組，每組包含6隻小鼠。用乙醇清潔注射位 點右側腹部，並用3xl(T癌細胞的0. 2 ml的PBS和0. 1 ml的Matrigel 接種II組前列腺癌細胞PC-3; III組結腸癌細胞HCT 116; IV組， 黑色素瘤細胞A2058; V組，纖維肉瘤HT 1080; VI組，滑膜肉瘤Hs 701. T。用乳腺癌細胞MBA-MD-231接種雌性小鼠(I組)。在注射後， 將每組隨機分為兩個亞組，A和B。每個亞組包括6隻小鼠。從第一天 起，IA-VIA組用普通膳食餵食，IB-VIB組用補充了 0. 5%的營養性制
劑(NS)的普通膳食餵食。每3天用測徑器測定腫瘤的長度和寬度來監 測胂瘤的生長。用下列等式計算腫瘤體積體積(1111113)=長度x寬度2 x1/2。 4周後，處死小鼠，將腫瘤分離，稱重，固定於10y。(v/v)緩沖 的福馬林中，並進行組織學處理。
結果表明，在IB-VIB組(補充了 0. 5%的營養性混合物的棵鼠) 中，營養物質的協同作用抑制了棵鼠腫瘤的生長並使其尺寸減小。在
研究的所有癌症林中，營養物質的協同作用顯著地減小了腫瘤的體積 乳腺癌細胞MBA-MD-231減小了 27%(p=. 0082)，前列腺癌細胞PC-3
減小了 53°/"p=. 0001)，結腸癌細胞HCT 116減小了 63%(p=. 0002)， 黑色素瘤細胞A2058減小了 57%(p=. 0001)，纖維肉瘤HT 1080減小 了 59%(p=. OOOl)和滑膜肉瘤Hs 701. T.減小了 44°/"p=. 0099)(見 附圖1A-1E)。組織學檢查顯示，用營養性混合物治療降低了分裂指數。 在4周的治療時間裡，用營養性製劑治療顯著地降低了所研究的具有 人癌細胞異種移植物(前列腺、黑色素瘤和結腸)的棵鼠負載的平均腫 瘤大小結腸減小了 46% (p=. 0005);黑色素瘤減小了 32% (p=. 0015); 前列腺減小了 47°/"p=. 0001)。見附圖2A。在補充了營養性製劑的棵 鼠中，在4周的治療期後前列腺腫瘤生長與4. 5周的對照組的生長相 比，降低了 36% (p= .002)(見附圖2B)。
所使用的所有化學品都購自Sigma (St. Louis， Mo)，都是高質量 的。營養性混合物的母液(總重量4.4Gm)由下列物質組成維生素C(即 抗壞血酸及抗壞血酸鎂、釣和棕櫚酸酯)7GGmg; L-賴氨酸1QQ0 mg; L-脯氨酸750 mg; L-精氨酸500 mg; N-乙醯半胱氨酸200 mg;標 準化的綠茶提取物(80°/。多酚)1000 mg;硒30 mg;銅2 mg;錳lmg。各 組的統計學結果表示為平均值士SE。通過獨立的樣本"t"檢驗來分析 數據。
權利要求
1.包含(a)抗壞血酸化合物，(b)L-賴氨酸化合物，(c)L-脯氨酸化合物，和(d)多酚化合物的組合物在製備治療纖維-或滑膜肉瘤或前列腺癌的藥物組合物中的應用。
2. 權利要求l的應用，其中所述抗壞血酸化合物選自抗壞血酸、 藥學可接受的抗壞血酸鹽、抗壞血酸酯和/或上述化合物的混合物。
3. 權利要求2的應用，其中所述藥學可接受的抗壞血酸鹽選自抗 壞血酸鈞鹽和抗壞血酸鎂鹽。
4. 權利要求l的應用，其中所述抗壞血酸化合物是抗壞血酸酯。
5. 權利要求4的應用，其中所述抗壞血酸酯是抗壞血酸棕櫚酸酯。
6. 權利要求1到5任一項的應用，其中所述L-賴氨酸化合物選自 鹽酸L-賴氨酸、L-賴氨酸和藥學可接受的L-賴氨酸鹽。
7. 權利要求1到6任一項的應用，其中所述L-脯氨酸化合物選自 鹽酸L-脯氨酸、L-脯氨酸和藥學可接受的L-脯氨酸鹽。
8. 權利要求1到7任一項的應用，其中所述組合物進一步包含微 量元素，選自硒、錳、鎂、鉤和銅。
9. 權利要求1到8任一項的應用，其中所述組合物進一步包含L-精氨酸化合物。
10. 權利要求9的應用，其中所述L-精氨酸化合物選自鹽酸L-精 氨酸、L-精氨酸和藥學可接受的L-精氨酸鹽。
11. 權利要求1到10任一項的應用，其中所述組合物進一步包含 N-乙醯半胱氨酸。
12. 權利要求1到11任一項的應用，其中所述組合物是以口服、 胃腸外、皮下、動脈內或靜脈內的形式施用。
13. —種在患者中治療纖維-或滑膜肉瘤或前列腺癌的方法，包括 給纖維-或滑膜肉瘤或前列腺癌的患者施用治療有效量的權利要求1到 12任一項定義的組合物的步驟。
14. 權利要求13的方法，其中所述患者是人。
15. 權利要求13或14的方法，其中該組合物是口服、胃腸外、胃腸 外、皮下、動脈內或靜脈內施用。
全文摘要
本發明涉及包含抗壞血酸化合物、L-賴氨酸化合物、L-脯氨酸化合物和多酚化合物的組合物在製備治療纖維-或滑膜肉瘤和前列腺癌的藥物組合物中的應用。此外，本發明進一步涉及一種治療方法，其中將所述組合物施用於患纖維-或滑膜肉瘤和前列腺癌的患者。
文檔編號A61K31/375GK101180049SQ200580049840
公開日2008年5月14日 申請日期2005年4月11日 優先權日2005年4月11日
發明者M·瓦希德·魯米, 亞歷山德拉·涅季維茨基, 瓦迪姆·伊瓦諾夫, 馬蒂亞斯·拉特 申請人:馬蒂亞斯·拉特