使用抗ereg抗體的癌症的診斷和治療的製作方法

2023-05-31 03:22:41 4

專利名稱：：使用抗ereg抗體的癌症的診斷和治療的製作方法
技術領域：
：本發明涉及癌症的診斷和治療方法、以及細胞增殖抑制劑和抗癌藥。
背景技術：
：豐田等人純化的上皮細胞成長因子(epidermalgrowthfactor,以下記作EGF)家族的成員被命名為epiregulin(EREG)。已知EREG發揮誘導Hela細胞的形態變化的癌增殖抑制因子的作用(非專利文獻1)。由豐田等人純化的來自小鼠的EREG(成熟蛋白質)的胺基酸序列包含46個胺基酸殘基，與EGF家族的其它成員顯示出24%~50°/。左右的序列同源性。另外，小鼠EREG對人上皮癌細胞林A431細胞上的EGF受體顯示出低親和性。在豐田等人進行的人EREG基因的克隆和表達分析中顯示其它EGF家族成員在人組織中普遍表達，相對於此，在巨噬細胞、胎盤、各種癌細胞中可檢測到EREG的表達(非專利文獻2)。另外，有人公開了可溶型EREG對幾種癌細胞具有增殖抑制效果(WO94/29340)。高橋等人揭示了Erk(MPK3)和p38(MAPK14)在大鼠的分化型動脈血管平滑肌細胞(vascularsmoothmusclecell,以下記作VSMC)中的活化誘導細胞的去分化。並且證實VSMC分泌的EREG發揮自分泌和/或旁分泌分化因子的作用。另外，有可能發揮VSMC的分化因子作用的不飽和溶血磷脂酸和PDGFB同型二聚體，以Erk-和p38Mapk-依賴型的方式迅速增量調節EREG的mRNA表達。逆轉錄酶-多聚酶鏈式反應(reversetranscriptasepolymerasechainreaction;k乂下i己訐乍RT-PCR)分析和免疫組織化學(immunohistochemical，immunohistochemistry;以下記作IHC)分析明確了EREG在動脈粥樣硬化血管或氣嚢損傷大鼠動脈中的局限性表達。根據上述結果，高橋等人推測EREG參與了動脈粥樣硬化等血管重建進程(非專利文獻3)。Minn等人基於體內選擇、轉錄組分析、功能分析和臨床研究，鑑定了幾個與乳癌的肺轉移相關的基因簇，明確了其中的一個分子為EREG(非專利文獻4)。白澤等人進一步明確EREG不僅在角質形成細胞中表達，還在組織巨噬細胞中表達；以及EREG缺失小鼠出現慢性皮炎的症狀。通過本小鼠的分析中的諸多研究顯示在與外部環境的邊界(boundary)，EREG在角質形成細胞和巨噬細胞引起的免疫和炎症相關應答中發揮重要作用(非專利文獻5)。如上所述，明確了皮炎、癌轉移、動脈粥樣硬化與EREG的相關性。但迄今為止，關於與EREG結合且具有中和活性和細胞毒活性的抗體對表達EREG的癌細胞的影響，則沒有具體的記載。非專利文獻1非專利文獻2非專利文獻3非專利文獻4非專利文獻5J.Biol.Chem.270:7495-7500,1995Biochem.J.326:69-75,1997Circulation108:2524-2529，2003Nature436:518-524,2005Proc.NatAcad.Sci.101:13921-13926,200
發明內容發明所要解決的課題本發明的課題在於提供抗EREG抗體及其用途。更詳細而言，其目的在於提供使用抗EREG抗體診斷和治療癌症的新型方法、含有抗EREG抗體的新型細胞增殖抑制劑和抗癌藥、以及新型抗EREG抗體。解決課題的方法
技術領域：
：本發明人等發現EREG在大腸癌等癌細胞中高度表達。並且，在測定4元EREG4元體的4卜體依賴性細月包毒(complement-dependentcytotoxicity;CDC)活性以及4元體依賴性細月包毒(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity;ADCC)活性時，發現抗EREG抗體對EREG表達細胞具有CDC活性和ADCC活性。另外明確了抗EREG抗體對癌細胞^K具有中和作用所產生的增殖抑制效果。4艮據上述認識，本發明人等進一步發現抗EREG抗體對原發性或轉移性的各種癌症的診斷、預防和治療有效，從而完成了本發明。更具體而言，本發明人等發現EREG可用作用於治療或診斷包括大腸癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌、腎癌在內的EREG表達亢進的癌症的手段，從而完成了本發明。本發明提供含有與EREG蛋白質結合的抗體作為有效成分的藥物組合物。本發明還提供含有與EREG蛋白質結合的抗體作為有效成分的細胞增殖抑制劑。本發明又提供含有與EREG蛋白質結合的抗體作為有效成分的抗癌藥。優選與EREG蛋白質結合的抗體為具有細胞毒活性的抗體。進一步優選該抗體為進一步具有中和活性的抗體。在本發明的優選方式中，可作為治療對象的癌症為大腸癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌、腎癌。基於本發明的含有抗EREG抗體的抗癌藥對上述EREG表達亢進的癌症、即原發性或轉移性的癌症的治療有用。本發明中特別優選的治療對象為原發性大腸癌、轉移性大腸癌、胰腺癌。本發明還提供含有與EREG蛋白質結合的抗體和藥學上可接受的載體的藥物組合物。本發明的藥物組合物對EREG表達亢進的癌症的治療和/或預防有用。即，本發明涉及與EREG蛋白質結合的抗體在製造用於癌症的治療和/或預防的藥物組合物中的應用。在另一方式中，本發明提供通過使EREG表達細胞和與EREG蛋白質結合的抗體接觸而在表達EREG蛋白質的細胞中引發細胞毒的方法。本發明還提供通過使表達EREG蛋白質的細胞和與EREG蛋白質結合的抗體接觸來抑制表達EREG蛋白質的細胞增殖的方法。優選與EREG蛋白質結合的抗體為具有細胞毒活性的抗體。還優選表達EREG蛋白質的細胞為癌細胞。在又一方式中，本發明提供與EREG蛋白質結合、且對表達EREG蛋白質的細胞具有細胞毒活性的抗體。優選該細胞毒活性為ADCC活性。優選該細胞毒活性為CDC活性。本發明還提供結合有細胞毒性物質的抗體。本發明中，作為抗體所結合的細胞毒性物質，可以例示化療藥物、放射性同位素和毒性肽。本發明中的抗體優選為抗體本身具有細胞毒活性的抗體。本發明進一步提供與EREG蛋白質結合、且對表達EREG蛋白質的細胞具有細胞毒活性、並具有中和活性的抗體。在另一方式中，本發明提供EREG蛋白質作為癌症診斷標誌物的應用。另外，在又一方式中，本發明提供癌症的診斷方法，其特徵在於使用與EREG蛋白質結合的抗體檢測EREG蛋白質。在本發明的方法中，優選檢測EREG蛋白質的胞外區。還優選本發明的方法使用識別EREG蛋白質的抗體來進行。在本發明的方法中，優選檢測血液中、血清中或血漿中的EREG蛋白質、或從細胞中分離的EREG蛋白質。在另一方式中，本發明提供癌症的診斷方法，該方法包括以下步驟(a)從受試者體內採取試樣的步驟；(b)使用與EREG蛋白質結合的抗體，檢測採集的試樣中所含的EREG蛋白質的步驟。本發明中，上述試樣只要可以從受試者體內採集即可，可以使用任何試樣。在一方式中，使用從受試者體內採集的血液試樣。本發明中優選的血液試樣為血清。在另一方式中，還使用通過外科或活組織檢查(biopsy)從受試者體內採集的試樣。該診斷方法所涉及的癌症只要是作為對象的癌細胞表達EREG蛋白質的癌症即可，可以是任何癌症。本發明中優選的癌症為大腸癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌和腎癌。基於本發明，上述癌症的原發性病灶和轉移性病灶均可診斷。特別優選的癌症為原發性大腸癌、轉移性大腸癌和胰腺癌。本發明中，從受試者體內採集試樣的步驟也可描述為提供從受試者體內採集的試樣的步驟。在另一方式中，本發明提供癌症的診斷方法，該方法包括(1)給予受試者用放射性同位素標記的與EREG蛋白質結合的抗體的步驟；以及(2)檢測上述放射性同位素的累積的步驟。在某方式中，放射性同位素為正電子發射核素。本發明中優選的正電子發射核素例如可以從nC、13N、150、18F、45Ti、55Co、64Cu、66Ga、68Ga、76Br、89Zr和1241中選擇。在另一方式中，本發明提供癌症的診斷方法，其特徵在於檢測編碼EREG蛋白質的基因的表達。在又一方式中，本發明提供在本發明的診斷方法中使用的診斷試劑或試劑盒。此外，本發明提供用於篩選癌症治療藥的候選化合物的方法。在本發明中，例如可以以EREG的表達水平為指標，選擇癌症治療藥的候選化合物。或者，還可以以對EREG的細胞增殖刺激作用的中和作用為指標，選擇癌症治療藥的候選化合物。即，本發明提供以下發明。藥物組合物，該藥物組合物含有與EREG蛋白質結合的抗體作為有效成分。細胞增殖抑制劑，該細胞增殖抑制劑含有與EREG蛋白質結合的抗體作為有效成分。抗癌藥，該抗癌藥含有與EREG蛋白質結合的抗體作為有效成分。[3]所述的抗癌藥，其中，與EREG蛋白質結合的抗體為具有細胞增殖抑制活性的抗體。[3]或[4]所述的抗癌藥，其中，與EREG蛋白質結合的抗體為以下(1)(57)中任一項所述的抗體(1)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:2的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:4的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:6的胺基酸序列。(2)抗體，該抗體含有(l)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:8的胺基酸序列的117-452位的胺基酸序列。(3)抗體，該抗體含有(1)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117-446位的胺基酸序列。(4)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:12的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:14的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:16的胺基酸序列。(5)抗體，該抗體含有(4)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:18的胺基酸序列的107-213位的胺基酸序列。(6)抗體，該抗體含有(4)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107213位的胺基酸序列。(7)抗體，該抗體含有(1)所述的H鏈和(4)所述的L鏈。(8)抗體，該抗體含有(2)所述的H鏈和(5)所述的L鏈。(9)抗體，該抗體含有(3)所述的H鏈和(6)所述的L鏈。(10)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:49的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:51的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:53的胺基酸序列。(11)抗體，該抗體含有(10)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:149的氨基斷列的118~441位的氨基斷列。(12)抗體，該抗體含有(10)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的氨基賄列的117-446位的胺基酸序列。(13)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:55的氨基^列、作為CDR2的SEQIDNO:57的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:59的胺基酸序列。(14)抗體，該抗體含有(13)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:151的胺基酸序列的108~214位的氨基齡列。(15)抗體，該抗體含有(13)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的氨基齡列的107~213位的氨基斷列。(16)抗體，該抗體含有(10)所述的H鏈和(13)所述的L鏈。(17)抗體，該抗體含有(11)所述的H鏈和(14)所述的L鏈。(18)抗體，該抗體含有(12)所述的H鏈和(15)所述的L鏈。(19)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:61的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:63的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:65的胺基酸序列。(20)抗體，該抗體含有(19)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:153的胺基酸序列的116439位的胺基酸序列。(21)抗體，該抗體含有(19)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117446位的胺基酸序列。(22)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:67的氨基#列、作為CDR2的SEQIDNO:69的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:71的胺基酸序列。(23)抗體，該抗體含有(22)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:155的胺基酸序列的108-214位的氨基斷列。(24)抗體，該抗體含有(22)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107~213位的胺基酸序列。(25)抗體，該抗體具有(19)所述的H鏈和(22)所述的L鏈。(26)抗體，該抗體具有(20)所述的H鏈和(23)所述的L鏈。(27)抗體，該抗體具有(21)所述的H鏈和(24)所述的L鏈。(28)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:73的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:75的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:77的胺基酸序列。(29)抗體，該抗體含有(28)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:157的胺基酸序列的119442位的胺基酸序列。(30)抗體，該抗體含有(28)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117-446位的胺基酸序列。(31)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:79的氨基醯字列、作為CDR2的SEQIDNO:81的氨基,列、以及作為CDR3的SEQIDNO:83的胺基酸序列。(32)抗體，該抗體含有(31)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:159的胺基酸序列的109~215位的胺基酸序列。(33)抗體，該抗體含有(31)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的氨基^f列的107~213位的氨基餅列。(34)抗體，該抗體具有(28)所述的H鏈和(31)所述的L鏈。(35)抗體，該抗體具有(29)所述的H鏈和(32)所述的L鏈。(36)抗體，該抗體具有(30)所述的H鏈和(33)所述的L鏈。(37)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:85的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:87的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:89的胺基酸序列。(38)抗體，該抗體含有(37)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:161的胺基酸序列的117-440位的胺基酸序列。(39)抗體，該抗體含有(37)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的氨基^f列的117-446位的氨基斷列。(40)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:91的氨基斷列、作為CDR2的SEQIDNO:93的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:95的氨基^列。(41)抗體，該抗體含有(40)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:163的胺基酸序列的108-214位的胺基酸序列。(42)抗體，該抗體含有(40)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107-213位的胺基酸序列。(43)抗體，該抗體含有(37)所述的H鏈和(40)所述的L鏈。(44)抗體，該抗體含有(38)所述的H鏈和(41)所述的L鏈。(45)抗體，該抗體含有(39)所述的H鏈和(42)所述的L鏈。(46)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:97的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:99的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:101的胺基酸序列。(47)抗體，該抗體含有(46)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:165的胺基酸序列的113436位的胺基酸序列。(48)抗體，該抗體含有(46)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117-446位的胺基酸序列。(49)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:103的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:105的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:107的胺基酸序列。(50)抗體，該抗體含有(49)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:167的胺基酸序列的108-214位的胺基酸序列。(51)抗體，該抗體含有(49)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的氨基,列的107~213位的氨基,列。(52)抗體，該抗體具有(46)所述的H鏈和(49)所述的L鏈。(53)抗體，該抗體具有(47)所述的H鏈和(50)所述的L鏈。(54)抗體，該抗體具有(48)所述的H鏈和(51)所述的L鏈。(55)抗體，該抗體是在(1)(54)中任一項所述的抗體中有一個或多個胺基酸被置換、缺失、附加和/或插入而得到的抗體，所得抗體與(1)(54)中任一項所述的抗體具有同等活性。(56)抗體，該抗體與表位結合，所述表位與(1)(55)中任一項所述的抗體所結合的EREG蛋白質的表位相同。(57)(1)(56)中任一項所述的抗體的小分子抗體。[3][5]中任一項所述的抗癌藥，其特徵在於與EREG蛋白質結合的抗體識別SEQIDNO:21的胺基酸序列中第29位的Ala第69位的Ser或第63位的Val第108位的Leu。[3][6]中任一項所述的抗癌藥，其中，癌症為選自大腸癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌和腎癌中的任一種癌。[8][7]所述的抗癌藥，其中，癌症為原發性癌症。[9][7]所述的抗癌藥，其中，癌症為轉移性癌症。[10]抗體，該抗體與EREG蛋白質結合，並且對表達EREG蛋白質的細胞具有細胞增殖抑制活性。[IO]所述的抗體，其中，細胞增殖抑制活性為細胞毒活性。[ll]所述的抗體，其中，細胞毒活性為ADCC活性。[ll]所述的抗體，其中，細胞毒活性為CDC活性。[10][13]中任一項所述的抗體，其特徵在於進一步附加具有對EREG蛋白質的中和活性。[IO]所述的抗體，其中，細胞增殖抑制活性為中和活性。小分子抗體，該小分子抗體由[10]所述的抗體製成。[10][16]中任一項所述的抗體，該抗體結合有化療藥物或毒性肽。抗體，該抗體與EREG蛋白質結合，並結合有選自化療藥物、毒性肽和放射性同位素的任一種細胞毒性物質。[10][18]中任一項所述的抗體，其中，該抗體為以下(1)(57)中任一項所述的抗體(1)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:2的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:4的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:6的胺基酸序列。(2)抗體，該抗體含有(l)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:8的胺基酸序列的117-452位的胺基酸序列。(3)抗體，該抗體含有(l)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:IO的胺基酸序列的117~446位的胺基酸序列。(4)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:12的氨基酉拼列、作為CDR2的SEQIDNO:14的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:16的胺基酸序列。(5)抗體，該抗體含有(4)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:18的胺基酸序列的107~213位的胺基酸序列。(6)抗體，該抗體含有(4)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107-213位的胺基酸序列。(7)抗體，該抗體含有(l)所述的H鏈和(4)所述的L鏈。(8)抗體，該抗體含有(2)所述的H鏈和(5)所述的L鏈。(9)抗體，該抗體含有(3)所述的H鏈和(6)所述的L鏈。(10)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:49的氨基斷列、作為CDR2的SEQIDNO:51的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:53的胺基酸序列。(11)抗體，該抗體含有(10)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:149的氨基斷列的118441位的氨基斷列。(12)抗體，該抗體含有(10)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117-446位的胺基酸序列。(13)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:55的氨基g踏列、作為CDR2的SEQIDNO:57的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:59的胺基酸序列。(14)抗體，該抗體含有(13)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:151的胺基酸序列的108-214位的胺基酸序列。(15)抗體，該抗體含有(13)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107-213位的胺基酸序列。(16)抗體，該抗體含有(10)所述的H鏈和(13)所述的L鏈。(17)抗體，該抗體含有(ll)所述的H鏈和(14)所述的L鏈。(18)抗體，該抗體含有(12)所述的H鏈和(15)所述的L鏈。(19)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:61的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:63的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:65的胺基酸序列。(20)抗體，該抗體含有(19)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:153的胺基酸序列的116~439位的胺基酸序列。(21)抗體，該抗體含有(19)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117~446位的胺基酸序列。(22)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:67的氨基i^列、作為CDR2的SEQIDNO:69的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:71的胺基酸序列。(23)抗體，該抗體含有(22)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:155的氨基醯字列的108214位的氨基,列。(24)抗體，該抗體含有(22)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107-213位的氨基斷列。(25)抗體，該抗體具有(19)所述的H鏈和(22)所述的L鏈。(26)抗體，該抗體具有(20)所述的H鏈和(23)所述的L鏈。(27)抗體，該抗體具有(21)所述的H鏈和(24)所述的L鏈。(28)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:73的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:75的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:77的胺基酸序列。(29)抗體，該抗體含有(28)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:157的氨基S吏序列的119-442位的胺基酸序列。(30)抗體，該抗體含有(28)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117-446位的胺基酸序列。(31)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:79的氨基^f列、作為CDR2的SEQIDNO:81的氨基斷列、以及作為CDR3的SEQIDNO:83的胺基酸序列。(32)抗體，該抗體含有(31)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:159的胺基酸序列的109~215位的胺基酸序列。(33)抗體，該抗體含有(31)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107-213位的胺基酸序列。(34)抗體，該抗體具有(28)所述的H鏈和(31)所述的L鏈。(35)抗體，該抗體具有(29)所述的H鏈和(32)所述的L鏈。(36)抗體，該抗體具有(30)所述的H鏈和(33)所述的L鏈。(37)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:85的氨基酉拼列、作為CDR2的SEQIDNO:87的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:89的胺基酸序列。(38)抗體，該抗體含有(37)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:161的胺基酸序列的117~440位的胺基酸序列。(39)抗體，該抗體含有(37)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117-446位的胺基酸序列。(40)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:91的氨基斷列、作為CDR2的SEQIDNO:93的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:95的胺基酸序列。(41)抗體，該抗體含有(40)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:163的胺基酸序列的108~214位的氨基亂亭列。(42)抗體，該抗體含有(40)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107~213位的胺基酸序列。(43)抗體，該抗體含有(37)所述的H鏈和(40)所述的L鏈。(44)抗體，該抗體含有(38)所述的H鏈和(41)所述的L鏈。(45)抗體，該抗體含有(39)所述的H鏈和(42)所述的L鏈。(46)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:97的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:99的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:101的胺基酸序列。(47)抗體，該抗體含有(46)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:165的氨基斷列的113436位的氨基,列。(48)抗體，該抗體含有(46)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的氨基斷列的117446位的胺基酸序列。(49)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:103的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:105的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:107的胺基酸序列。(50)抗體，該抗體含有(49)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:167的胺基酸序列的108~214位的胺基酸序列。(51)抗體，該抗體含有(49)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的氨基^列的107~213位的氨基^列。(52)抗體，該抗體具有(46)所述的H鏈和(49)所述的L鏈。(53)抗體，該抗體具有(47)所述的H鏈和(50)所述的L鏈。(54)抗體，該抗體具有(48)所述的H鏈和(51)所述的L鏈。(55)抗體，該抗體是在(1)(54)中任一項所述的抗體中有一個或多個胺基酸被置換、缺失、附加和/或插入而得到的抗體，所得抗體與(1)~(54)中任一項所述的抗體具有同等活性。(56)抗體，該抗體與表位結合，所述表位與(1)(55)中任一項所述的抗體所結合的EREG蛋白質的表位相同。(57)(1)(56)中任一項所述的抗體的小分子抗體。[10][20]中任一項所述的抗體，其特徵在於識別SEQIDNO:21的胺基酸序列中第29位的Ala~第69位的Ser或第63位的Val~第108位的Leu。EREG蛋白質和/或EREGmRNA作為癌症i貪斷標誌物的應用。癌症的診斷方法，該方法包括使與EREG蛋白質結合的抗體與EREG蛋白質結合的步驟。癌症的診斷方法，該方法包括以下步驟(a)從受試者體內採集試樣的步驟；(b)使用與EREG蛋白質結合的抗體檢測採集的試樣中所含的EREG蛋白質的步驟。癌症的診斷方法，該方法包括(1)給予受試者用^:射性同位素標記的與EREG蛋白質結合的抗體的步驟；以及(2)檢測上述放射性同位素的累積的步驟。[22]所述的診斷方法，其中，放射性同位素為正電子發射核素。[25]所述的診斷方法，其中，正電子發射核素為選自"C、13N、150、18F、45Ti、55Co、64Cu、66Ga、68Ga、76Br、89Zr和124I的任一種核素。癌症的診斷方法，其特徵在於檢測編碼EREG蛋白質的基因的表達。[22][27]中任一項所述的診斷方法，其中，癌症為選自大腸癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌和腎癌的任一種癌。[28]所述的診斷方法，其中，癌症為原發性癌症。[30][28]所述的診斷方法，其中，癌症為轉移性癌症。[31]診斷藥物，該診斷藥物含有與EREG蛋白質結合的抗體，並用於癌症的診斷方法。試劑盒，該試劑盒含有與EREG蛋白質結合的抗體和包括EREG蛋白質的生物試劑，並用於癌症的診斷方法。癌症治療藥的候選化合物的篩選方法，該方法包括以下步驟(1)使被檢化合物與EREG表達細胞接觸的步驟；(2)測定EREG表達細胞中EREG的表達水平的步驟；以及(3)選擇與對照相比使EREG的表達水平降低的化合物作為癌症治療藥的候選化合物的步驟。[33]所述的方法，其中，EREG的表達水平通過分泌在培養上清中的EREG蛋白質的水平來評價。癌症治療藥的候選化合物的篩選方法，該方法包括以下步驟(1)在EREG和被檢化合物的存在下，培養EREG依賴性增殖的細胞的步驟；(2)測定細胞增殖水平的步驟；以及(3)選擇與對照相比抑制細胞增殖的被檢化合物作為癌症治療藥的候選化合物的步驟。發明效果基於各種癌組織或癌細胞林的基因表達分析，確認EREG基因在癌細胞中呈現顯著的表達亢進。另一方面，在正常細胞中，EREG的表達水平非常低。因此，EREG可作為用於特異性檢測癌症的標誌物。在本發明中，確認到抗EREG抗體對EREG表達細胞的細胞毒作用。EREG的表達水平在正常細胞中非常低，而在癌細胞中亢進。這證實通過給予抗EREG抗體，例如在機體內可獲得癌細胞特異性的細胞毒作用。並且，在本發明中，確認到EREG依賴性的細胞增殖被抗EREG抗體中和。因此，在優選方式中，抗EREG抗體除產生細胞毒作用外，還通過中和EREG的細胞增殖作用，來抑制癌細胞的增殖。附圖簡述圖1是顯示正常組織和癌組織中EREGmRNA的轉錄量的圖。縱軸表示探針ID:205767—atHG-U133A的信號強度(以基因晶片U133A的全部基因的表達分值的平均作為IOO的相對值)。圖2是顯示癌細胞抹中EREGmRNA的轉錄量的圖。縱軸表示探針ID:205767—atHG-U133A的信號強度(以基因晶片U133A的全部基因的表達分值的平均作為IOO的相對值)。圖3是表示使用流式細胞術來顯示抗EREG單克隆抗體與EREG_DG細胞的結合活性的試驗結果的圖。縱軸表示細胞數(螢光計數值)，橫軸表示螢光強度值。圖4是表示使用流式細胞術來顯示抗EREG單克隆抗體與大腸癌細胞林DLD1的結合活性的試驗結果的圖。縱軸表示細胞數(螢光計數值)，橫軸表示螢光強度值。圖5是顯示抗EREG單克隆抗體對大腸癌細胞4朱DLD1的CDC活性的圖。縱軸表示鉻游離率(％)，橫軸表示抗體的種類。活性的圖。縱軸表示鉻游離率(％),橫軸表示抗體的種類。圖7是顯示EGFR—BAF細胞對人EREG的增殖依賴性的圖。縱軸表示450nm的吸光度(參比波長為655nm)，橫軸表示EREG的濃度(ng/mL)。圖8是顯示胰臟癌細胞抹AsPCl對人EREG的增殖依賴性的圖。縱軸表示450nm的吸光度(參比波長為655nm)，橫軸表示EREG的濃度(ng/mL)。圖9是顯示大腸癌細胞林DLD1對人EREG的增殖依賴性的圖。縱軸表示450nm的吸光度(參比波長為655nm)，橫軸表示EREG的濃度(ng/mL)。圖10是使用EGFR_BAF細胞來顯示抗EREG單克隆抗體對人EREG的中和活性的圖。縱軸表示細胞增殖率(各抗體濃度下的吸光度/對照的吸光度x100°/。)，橫軸表示抗體濃度Cwg/mL)。圖11是使用胰臟癌細胞抹AsPCl來顯示抗EREG單克隆抗體對人EREG的中和活性的圖。縱軸表示細胞增殖率(各抗體濃度下的吸光度/對照的吸光度xlOO。/c))，橫軸表示抗體濃度Cwg/mL)。圖12是顯示通過鑑定可變區序列而重構的嵌合抗體與EREG結合的情況的圖。圖13是顯示嵌合抗體對癌細胞抹的ADCC誘導活性的圖。圖14是顯示嵌合抗體對EREG的種交叉性分析結果的圖。圖15是顯示比^^重組可溶型EREG與EGF的EREG受體活化能的結果的圖。圖16是顯示通過EREG強制表達細胞共培養引起EGF受體活化、以及利用抗EREG抗體抑制該活化的圖。圖17是顯示通過EREG強制表達細胞共培養引起EGF受體活化、以及利用抗EREG抗體抑制該活化的圖。圖18是顯示通過DLD-1細胞共培養引起EREG受體活化、以及該活化因添加抗EREG抗體而被抑制的圖。EREG蛋白質的情況的圖。圖20是顯示利用抗EREG小鼠單克隆抗體EP27進行的免疫染色結果的圖。圖21-1是顯示使用小鼠抗EREG抗體和人嵌合抗EREG抗體的抗原蛋白質的夾層ELISA的結果的圖。圖21-2是顯示圖21-1的後續的圖。圖21-3是顯示圖21-2的後續的圖。圖22是顯示根據夾層ELISA的數據對抗體的結合反應性圖案進行聚類分析的結果的圖。具體實施例方式EREG是膜結合型上皮細胞成長因子蛋白質。其胺基酸序列和編碼該序列的基因序列分別公開在GemBank檢索號NP_001423(SEQIDNO:22)和NM—001432(SEQIDNO:21)中。在本發明中，EREG蛋白質的含義包括全長蛋白質及其片段兩者。片段是指含有EREG蛋白質的任意區域的多肽，可以不具有天然EREG蛋白質的功能。片段的例子可以是包括EREG蛋白質的胞外區的片段。EREG蛋白質的胞外區在SEQIDNO:22的胺基酸序列中相當於第29~122位。跨膜區在SEQIDNO:22的胺基酸序列中相當於第123-140位。本發明中，臨床檢樣和癌細胞林的分析顯示在原發性大腸癌、轉移性大腸癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌、腎癌組織中，EREG以非常高的頻率在基因水平表達。並且，在癌細胞抹中，EREG更以蛋白質水平高度表達。即，EREG蛋白質可作為癌症的診斷標誌物。EREG基因表達的檢測本發明的癌症診斷方法包括糹企測EREG基因表達的步驟。在本發明方法的一方式中，檢測EREG蛋白質的表達。本發明中，檢測包括定量或定性的檢測。例如，定性檢測可以是下述測定僅測定是否存在EREG蛋白質；測定是否存在一定量以上的EREG蛋白質；將EREG蛋白質的量與其它試樣(例如對照試樣等)進行比較的測定等。而定量檢測可以是EREG蛋白質濃度的測定、EREG蛋白質量的測定等。本發明中的被檢試樣只要是可能含有EREG蛋白質的試樣即可，沒有特別限定。具體優選從哺乳類等生物的體內採集的試樣。進一步優選的試樣為從人體內採集的試樣。被4企試樣的具體例子例如有血液、間質液、血漿、血管外液、腦脊髓液、滑液、胸膜液、血清、淋巴液、唾液、尿等。優選的試樣為血液試樣。血液試樣包括血清、血漿和全血。這些血液試樣中，優選血清。此外，本發明的祐J險試樣還包括由下述被檢試樣得到的試樣，所述被檢試樣為將從生物體內採集的組織或細胞固定而得到的標本或細胞的培養液等。對根據本發明診斷的癌症沒有特別限定，可以是任何癌症。具體有大腸癌、轉移性大腸癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌或腎癌等。本發明中，對上述癌症的原發病灶和轉移病灶均可診斷。本發明中，特別優選的癌症為原發性大腸癌、轉移性大腸癌和胰腺癌。本發明中，當在被檢試樣中檢測出EREG蛋白質時，即檢測出癌症。具體而言，與陰性對照或正常者相比，被檢試樣中檢測出的EREG蛋白質的量多時，顯示受試者患有癌症、或者將來罹患癌症的可能性高。即，本發明涉及癌症的^r測方法，該方法包括以下步驟(1)檢測從受試者體內採集的生物樣品中EREG的表達水平的步驟；和(2)當(1)中檢測的EREG的表達水平與對照相比高時，顯示受試者患有癌症的步驟。本發明中，對照包括陰性對照和正常者的生物樣品。陰性對照可以通過採集正常者的生物樣品，並根據需要進行混合而得到。對照的EREG表達水平可以和受試者的生物樣品中的EREG表達水平同時檢測。或者，可以預先檢測多名正常者的生物樣品中的EREG表達水平，再對正常者中的標準表達水平進行統計學判定。具體而言，例如還可以使用平均值士2x標準偏差(S.D.)或平均值士3x標準偏差(S.D.)作為標準值。在統計學上，平均值士2x標準偏差(S.D.)包括80°/。的正常者的值，而平均值士3x標準偏差(S,D.)包括90%的正常者的值。或者，可以利用ROC曲線設定對照中的EREG的表達水平。ROC曲線(receiveroperatingcharacteristiccurve;接收者操作特性曲線)是縱軸表示檢測靈敏度、橫軸表示假陽性率(即"l-特異度")的曲線圖。本發明中，當連續改變用於判定生物樣品中的EREG表達水平的基準值時，通過將靈敏度和假陽性率的變化作圖，可以得到ROC曲線。需要說明的是，用於得到ROC曲線的"基準值"，是為了進行統計學分析而暫時使用的數值。用於得到ROC曲線的"基準值"通常在可以覆蓋可選擇的所有基準值的範圍內連續變化。例如可以使基準值在所分析的集團的EREG測定值的最小值與最大值之間變化。基於所得的ROC曲線，可以選擇可以期待所需的檢測靈敏度以及精度的標準值。根據ROC曲線等在統計學上設定的標準值也稱為截斷值(cut-off值)。基於截斷值的癌症的檢測方法為在上述步驟(2)中，將(1)中檢測的EREG的表達水平與截斷值比較。而且，當(l)中檢測的EREG的表達水平比截斷值高時，表示受試者被檢測出癌症。本發明中，EREG的表達水平可以通過任意方法來確定。具體而言，通過評價EREG的mRNA的量、EREG蛋白質的量、以及EREG蛋白質的生物學活性，可以知道EREG的表達水平。EREG的mRNA和蛋白質的量可以通過本說明書中所述的方法來確定。或者，還可以使用誘導EREG依賴性細胞增殖的細胞，來評價細胞增殖誘導活性，作為EREG的生物學活性。本發明中，可以以表達EREG蛋白質的任意動物種作為受試者。例如已知猴、牛、綿羊、小鼠、狗、貓、倉鼠等人以外的多種哺乳類表達EREG蛋白質。因此，本發明中的受試者包括這些動物。特別適合的受試者是人。需要說明的是，以人以外的動物作為受試者時，當然可以才企測該動物種的EREG蛋白質。作為本發明的診斷方法的優選方式，可以列舉下述癌症的診斷方法，該方法包括在固定有組織或細胞的切片上檢測EREG蛋白質的步驟，所述組織或細胞從罹患了上述癌症的患者體內獲得。在本發明的另一方式中，更可以列舉下述診斷方法，該方法包括檢測從細胞中游離出、存在於血液中的EREG蛋白質的步驟。特別優選本發明為下述癌症的診斷方法，該方法包括檢測存在於血液中的、含有EREG蛋白質胞外區的片段的步驟。對被檢試樣中所含的EREG蛋白質的檢測方法沒有特別限定。優選通過使用抗EREG抗體的免疫學方法進行檢測。作為免疫學方法，例如可以採用下述方法放射免疫測定(RIA);酶耳關免疫測定(EIA);螢光免疫測定(FIA);發光免疫測定(LIA);免疫沉澱法(IP);免疫比濁法(TIA);蛋白質印跡法(WB);免疫組織化學法(IHC);以及免疫擴散法(SRID)。上述方法中，酶聯免疫測定是優選的免疫學測定法之一。作為優選的酶聯免疫測定，可以更具體地例示酶聯免疫吸附定量法(enzyme-linkedimmunosorbentassay:ELISA)。作為ELISA的一個方式，例如有夾層ELISA(sandwichELISA)。ELISA等上述免疫學方法33是本領域技術人員所公知的方法。使用抗EREG抗體的常規檢測方法例如有以下方法。首先，將抗EREG抗體固定在支撐體上，之後封閉支撐體，以防止蛋白質與支撐體的非特異性結合。封閉時使用例如胎牛血清白蛋白(BSA)、明膠、白蛋白等。用於使抗體與支撐體結合的各種方法是公知的。例如，聚苯乙烯樹脂等合成樹脂物理性吸附抗體。或者，還可以使抗體化學結合於導入有官能團的支撐體上。為了化學結合抗體，還可以利用二官能性接頭。接下來，向支撐體中加入被檢試樣進行培養。此時，已經與支撐體結合的抗EREG抗體與被檢試樣中的EREG蛋白質結合。然後，檢測經由抗EREG抗體與支撐體結合的EREG。在檢測與支撐體結合的EREG之前，還可以清洗支撐體。與支撐體結合的EREG例如可以通過識別EREG的第二抗體來4企測。第二抗體可以用標記物標記。或者，還可以通過識別第二抗體的第三抗體(二次抗體)間接標記第二抗體。如此操作，通過定性或定量檢測與支撐體上的抗EREG抗體結合的EREG蛋白質，可以檢測被檢試樣中的EREG蛋白質。以下，進一步說明幾個具體例子。本發明中，用於固定抗EREG抗體的支撐體可以使用以下原材料。不溶性多糖類瓊脂糖、纖維素等；合成樹脂有機矽樹脂、聚苯乙烯樹脂、聚丙烯醯胺樹脂、尼龍樹脂、聚碳酸酯樹脂等；以及玻璃等不溶性支撐體。上述支撐體可以以珠或板等形狀使用。為珠狀時，可以使用填充有它們的柱等。為板狀時，可以使用多孔板(96孔多孔板等)或生物傳感晶片等。在抗EREG抗體與支撐體的結合中，利用化學鍵合或物理吸附等通常使用的方法，可以使抗EREG抗體與支撐體結合。這些支撐體均可優選使用市售品。抗EREG抗體與EREG蛋白質的結合通常在緩沖液中進行。緩衝液例如可以使用磷酸緩衝液、Tris緩衝液、檸檬酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液、碳酸鹽緩衝液等。培養條件可以是已經常用的條件，例如優選在4'C室溫之間的溫度下培養1小時~24小時。培養後的清洗只要不妨礙EREG蛋白質與抗EREG抗體的結合即可，例如優選使用含有吐溫20等表面活性劑的緩衝液等。在本發明的EREG蛋白質檢測方法中，除了製備檢測該EREG蛋白質含量的被檢試樣外，還可適當製備對照試樣。對照試樣的例子有不含EREG蛋白質的陰性對照試樣、或含有EREG蛋白質的陽性對照試樣等。這種情況下，通過比較由不含EREG蛋白質的陰性對照試樣得到的結果和由含有EREG蛋白質的陽性對照試樣得到的結果，可以確認被檢試樣中是否存在EREG蛋白質。另外，製備使濃度階段性變化的一系列對照試樣，以數值的形式得到相對於各對照試樣的檢測結果，之後基於與EREG蛋白質的濃度值對應的測定值，可以得到標準曲線。由被檢試樣中所含的EREG蛋白質的測定結果和標準曲線，可以定量檢測被檢試樣中所含的EREG蛋白質。作為檢測經由抗EREG抗體與支撐體結合的EREG蛋白質的優選方式，可以列舉使用用標記物標記的抗EREG抗體的方法。例如，使被檢試樣與固定在支撐體上的抗EREG抗體接觸，根據需要進行清洗，之後使特異性識別EREG蛋白質的標記抗體結合，從而可以檢測該EREG蛋白質。抗EREG抗體可以利用通常已知的方法進行標記。標記物可以使用螢光染料、酶、輔酶、化學發光物質、放射性物質等本領域技術人員所公知的標記物。具體而言，下述標記物可用於抗體的標記放射性同位素32P、14C、125I、3H、1311等；螢光染料螢光素、羅丹明、丹磺醯氯、傘形酮等；酶螢光素酶、過氧化物酶、鹼性磷酸酶、P-半乳糖苷酶、(3-葡糖苷酶、辣根過氧化物酶、葡糖澱粉酶、溶菌酶、糖氧化酶、微過氧化物酶等；以及結合親和性物質生物素等。使用生物素作為標記物時，利用使鹼性磷酸酶等酶結合的抗生物素蛋白，可以;險測生物素標記抗體。為了使標記物與抗EREG抗體結合，可以採用戊二醛法、馬來醯亞胺法、二硫吡。定法、高碘酸法等公^p的方法。標記物的;險測方法也是^^知的。例如，4企測用放射性物質標記的抗EREG抗體時，可以利用液體閃爍計數儀檢測放射活性。檢測用酶標記的抗EREG抗體時，向該標記抗EREG抗體中加入底物，然後可以通過底物的酶促變化進行檢測。催化顯色反應或發光反應的酶與底物的組合是公知的。例如，用於檢測過氧化物酶的底物的具體例子有2，2-連氮雙(3-乙基苯並噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)、1，2-苯二胺(鄰苯二胺)、3，3，，5，5，-四曱基聯苯胺(TMB)等。使用上述顯色底物時，可以通過吸光光度計來追蹤反應。底物為螢光發光物質時，使用螢光光度計可以檢測底物的酶促變化。作為本發明的EREG蛋白質的^r測方法的特別優選的方式，可以列舉使用用生物素標記的抗EREG抗體和抗生物素蛋白的方法。具體而言，可以利用結合有酶的抗生物素蛋白或鏈黴抗生物素蛋白檢測生物素標記的抗EREG抗體。結合有石威性磷酸酶、過氧化物酶等酶的抗生物素蛋白或鏈黴抗生物素蛋白是公知的。本發明的檢測EREG蛋白質的方法的另一方式為使用一種以上的特異性識別EREG蛋白質的一次抗體和一種以上的特異性識別該一次抗體的二次抗體的方法。使用二次抗體時，使用來自不同於與支撐體結合的抗體(固化抗體)的動物種的抗EREG抗體作為液相抗體。液相抗體與^:固相抗體捕獲的EREG蛋白質結合。並且，二次抗體與液相抗體結合。二次抗體與液相抗體結合，但不能與固相抗體結合。因此，支撐體上殘留的二次抗體的量取決於經由EREG蛋白質與支撐體結合的液相抗體的量。上述操作的結果，通過定性或定量檢測結合的二次抗體，可以檢測出被檢試樣中的EREG蛋白質。此時，二次抗體可以用標記物適當標記。作為本發明的EREG蛋白質的^r測方法的又一方式，可以列舉利用凝聚反應的^r測方法。該方法中，使用吸附有抗EREG抗體的載體可以檢測EREG蛋白質。吸附抗體的載體只要是不溶性的、不發生非特異性反應、且穩定即可，可以使用任何載體。例如可以使用膠乳顆粒、急土、膠棉、高嶺土、固定羊紅細胞等。膠乳顆粒是均勻性和穩定性優異的優選載體。膠乳顆粒例如可使用聚苯乙烯膠乳顆粒、苯乙烯-丁二烯共聚物膠乳顆粒、聚乙烯基曱苯膠乳顆粒等。或者，導入了羧基等官能團的膠乳顆粒也是公知的。例如聚苯乙烯膠乳顆粒是優選的膠乳顆粒。具有疏水性表面的膠乳顆粒，通過與抗體混合可物理性吸附抗體。或者，當膠乳顆粒具有官能團時，還可化學性結合抗體。將結合有抗體的顆粒與試樣混合，並攪拌一定時間。試樣中EREG蛋白質的濃度越高，顆粒的聚集度越大，因此通過肉眼估算該聚集度，可以檢測EREG蛋白質。另外，通過用分光光度計等測定聚集導致的濁度或散射光的增加，也可檢測EREG蛋白質。作為本發明的EREG蛋白質的檢測方法的又一方式，可以列舉如使用利用了表面等離子體共振現象的生物傳感器的方法。通過使用利用了表面等離子體共振現象的生物傳感器，無需標記該蛋白質，即可實時以表面等離子體共振信號的形式觀察蛋白質與蛋白質間的相互作用。例如，通過使用BIAcore(Biacore社制)等生物傳感器，可以檢測EREG蛋白質與抗EREG抗體的結合。具體而言，使淨皮4企試樣與固定有抗EREG抗體的傳感晶片接觸，可以以共振信號的變化的形式檢測與抗EREG抗體結合的EREG蛋白質。EREG是癌細胞中特異性表達增強的膜蛋白質。因此，利用抗EREG抗體可以檢測癌細胞或癌組織。例如，通過使用抗EREG抗體的免疫組織學分析，檢測從機體內採集的細胞或組織中所含的癌細胞。或者，還可以利用抗EREG抗體來檢測機體內的癌組織。即，本發明涉及癌症的檢測方法，該方法包括(l)給予受試者用放射性同位素標記的與EREG蛋白質結合的抗體的步驟；以及(2)檢測上述力文射性同位素的累積的步驟。為了追蹤給予到機體內的抗體，可以標記抗體以能夠進行4企測。例如，可以追蹤用螢光物質、發光物質或放射性同位素標記的抗體在機體內的行為。用螢光物質或發光物質標記的抗體，可以使用內視鏡或腹腔鏡來觀察。至於放射性同位素，通過追蹤其放射活性，可以將抗體的定位圖像化。本發明中，機體內的抗EREG抗體的定位表示癌細胞的存在。為了檢測機體內的癌症，標記抗體的放射性同位素可以使用正電子發射核素。例如可以用18F、55Co、"Cu、66Ga、68Ga、76Br、89Zr和124I等正電子發射核素標記抗體。利用這些正電子發射核素標記抗EREG抗體時，可採用公知的方法(ActaOncol.32,825830，1993)。將用正電子發射核素標記的抗EREG抗體給予人或動物後，使用PET(正電子斷層攝影裝置)從體外計測該放射性核素放射的放射線，通過計算機層析成像的方法轉換為圖像。PET是用於非侵襲性地獲得有關藥物的體內行為等的數據的裝置。利用PET可以將放射強度以信號強度的形式定量圖像化。通過按上述方式使用PET,無需從患者體內採集試樣，即可檢測在特定癌症中高度表達的抗原分子。抗EREG抗體除了用上述核素標記外，還可以利用使用"C、13N、150、18F、45Ti等正電子發射核素的短壽命核素進行放射標記。使用由醫療用回旋加速器得到的上述核素的短壽命核素的生產、短壽命放射標記化合物的製備技術等相關研究開發得到推進。利用上述技術，可以用各种放射性同位素標記抗EREG抗體。給予患者的抗EREG抗體，根據抗EREG抗體對各部位的病理組織的特異性而累積在原發灶和轉移灶中。抗EREG抗體用正電子發射核素標記時，檢測其放射活性，從而根據放射活性的定位，檢測該原發灶和轉移灶的存在。用於該診斷用途時，可適當使用25-4000keV的y粒子或正電子放射量的活性值。另外，選擇適當的核素、再大量給予時，也有望獲得治療效果。為了得到放射性產生的抗癌作用，可以使用給予70700keV的Y粒子或正電子放射量值的核素。在本發明方法的另一方式中，檢測EREGmRNA的表達。本發明中，檢測包含定量或定性檢測。定性檢測的例子有下述測定操作。僅測定是否存在EREGmRNA;測定是否存在一定量以上的EREGmRNA;以及將EREGmRNA的量與其它試樣(例如對照試樣等)進行比較的測定等。而定量檢測可以是EREGmRNA濃度的測定、EREGmRNA量的測定等。本發明中的被檢試樣可以使用有可能含有EREGmRNA的任意試樣。優選從哺乳類等生物的體內採集的試樣，進一步優選為從人體內採集的試樣。被^r試樣的具體例子例如有血液、間質液、血漿、血管外液、腦脊髓液、滑液、胸膜液、血清、淋巴液、唾液、尿等。優選的試樣為血液試樣。血液試樣中包括血清、血漿或全血。此外，本發明的被檢試樣中還包括由下述被才企試樣獲得的試樣，所述被檢試樣為將從生物體內採集的組織或細胞固定而得到的標本或細胞的培養液等=對所要診斷的癌症沒有特別限定。具體有大腸癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌或腎癌等。本發明中，對上述癌症的原發病灶和轉移病灶均可診斷。特別優選的癌症為原發性大腸癌、轉移性大腸癌和胰腺癌。本發明中，可以以表達EREG蛋白質的任意動物種作為受試者。例如已知猴、牛、綿羊、小鼠、狗、貓、倉鼠等人以外的多種哺乳類表達EREG。特別適合的受試者是人。需要說明的是，當以人以外的動物種作為受試者時，檢測該動物種的EREGmRNA。以下給出^r測方法的具體方式。首先，由受試者製備試樣。然後，檢測該試樣中所含的EREGmRNA。本發明中，還可檢測由mRNA合成的cDNA。本發明中，在被4企試樣中檢測出EREGmRNA或編碼EREG的cDNA時，意味著受試者被檢測出癌症。例如，與陰性對照或正常者相比，在被檢試樣中檢測出的EREGmRNA或編碼EREG的cDNA的量多時，顯示受試者患有癌症、或者將來罹患癌症的可能性大。檢測mRNA的方法是公知的。在本發明中，具體可以利用例如RNA印跡法、RT-PCR法、DNA陣列法等。上述本發明的檢測方法，還可以使用各種自動檢查裝置自動進行。通過自動化，可以一次性;險查大量試樣。本發明的目的還在於提供用於診斷癌症的診斷試劑或試劑盒，所述診斷試劑或試劑盒含有用於檢測被檢試樣中的EREG蛋白質的試劑。本發明的診斷試劑至少含有抗EREG抗體。基於ELISA法等EIA法進行時，本發明的診斷試劑或試劑盒可以含有固定有抗體的載體。或者，還可以供給預先與載體結合的抗體。基於使用膠乳等載體的聚集法時，本發明的診斷試劑或試劑盒可以含有抗體所吸附的載體。通過將本發明的癌症診斷用試劑與用於檢測EREG的其它要素組合，可以製成用於診斷癌症的試劑盒。即，本發明涉及用於診斷癌症的試劑盒，該試劑盒含有與EREG結合的抗體和包含含有EREG的生物樣品的對照試樣。本發明的試劑盒可以進一步附加含有用於EREG的免疫分析的試劑。例如，可以將用於檢測酶標記的顯色底物和用於清洗固相的洗滌液組合作為ELISA用的試劑。此外，還可以在試劑盒中附帶用於說明測定操作的說明書。本發明還提供用於診斷癌症的診斷試劑或試劑盒，該診斷試劑或試劑盒含有用於4企測被檢試樣中的EREGmRNA或編碼EREG的cDNA的試劑。本發明的診斷試劑至少含有編碼EREG的DNA(SEQIDNO:21;包含NMJ)01423中所述核苷酸序列的DNA)或含有至少15個與其互補鏈互補的核苦酸的寡核苦酸。這裡的"互補鏈"是指，包含A:T(為RNA時則為U)、G:C鹼基對的雙鏈核酸中相對於一條鏈的另一條鏈。另外，"互補的"並不限於在至少15個連續的核苦酸區完全為互補序列的情形，還可以在核苷40酸序列上具有至少70%、優選至少80%、更優選90%、進一步優選95%以上的同源性。用於確定同源性的算法可以採用本說明書中所述的方法。上述寡核苷酸可以用作用於檢測或擴增編碼EREG的DNA的探針或引物、用於檢測該DNA表達的探針或引物。探針可以以DNA陣列基板的形式使用。使用該寡核苷酸作為引物時，其長度通常為15bp100bp。優選的引物的長度為17bp~30bp。引物可以使用可擴增編碼EREG的DNA或其互補鏈的至少一部分的任意引物。用作引物時，3'側的區域可製成互補的，在5'側可以附加限制酶識別序列或tag等。另外，可以使用與編碼EREG的DNA或其互補鏈的至少一部分特異性雜交的任意寡核苷酸作為探針。用於檢測mRNA的探針的核苷酸序列選自與EREG的有義鏈互補的核苷酸序列。該探針通常至少具有15bp以上的鏈長。本發明中，寡核苷酸可以在適當標記後作為探針。標記寡核苷酸的方法是公知的。例如可以以用"P標記的ATP作為底物，使用T4多核苷酸激酶將寡核苷酸的5'端磷酸化來進行標記。或者可以例示使用DNA聚合酶，以隨機六聚寡核苷酸等作為引物，攝入已標記的底物核苷酸的方法(隨機引物法等)。在隨機引物法中，使用克列諾酶等作為DNA聚合酶。另外，核苷酸可以用^P等放射性同位素、螢光染料、生物素或地高辛等進行標記。本發明中的寡核苷酸，例如可以利用市售的寡核苷酸合成儀來製備。探針還可以製成通過限制酶處理等獲得的雙鏈DNA片段的形式。上述診斷試劑或試劑盒中，除作為有效成分的寡核苦酸和抗體外，根據需要，例如可以混合無菌水、生理鹽水、植物油、表面活性劑、脂類、助溶劑、緩沖劑、蛋白質穩定劑(BSA或明膠等)、保存劑、封閉溶液、反應溶液、反應中止液、用於處理試樣的試劑等。抗EREG抗體的製備本發明中使用的抗EREG抗體只要與EREG蛋白質特異性結合即可，不限定其來源、種類和形狀。具體而言，可以使用非人動物的抗體(例如小鼠抗體、大鼠抗體、駱駝抗體)、人抗體、嵌合抗體、人源化抗體等公知的抗體。本發明中，所用抗體可以是單克隆抗體或多克隆抗體等。優選的抗體為單克隆抗體。本發明中使用的抗EREG抗體，可以利用公知的方法，以單克隆或多克隆抗體的形式獲得。本發明中使用的抗EREG抗體特別優選來自哺乳動物的單克隆抗體。來自哺乳動物的單克隆抗體包括通過雜交瘤產生的單克隆抗體；以及利用基因工程的方法，由用含有抗體基因的表達載體轉化的宿主產生的單克隆抗體等。產生單克隆抗體的雜交瘤基本上可以採用公知技術如下製備。首先，使用EREG蛋白質作為致敏抗原，按照常規的免疫方法對其進行免疫。按照常規的細胞融合法使由免疫動物得到的免疫細胞與公知的親本細胞融合，得到雜交瘤。再利用通常的篩選法，從該雜交瘤中篩選產生目標抗體的細胞，從而可以選擇產生抗EREG抗體的雜交瘤。具體而言，單克隆抗體的製備可如下進行。首先，通過表達EREG基因，可以獲得用作取得抗體的致敏抗原的EREG蛋白質。EREG基因的核苷酸序列公開在GenBank檢索號NM—001432(SEQIDNO:21)等中。即，將編碼EREG的基因序列插入公知的表達載體中，轉化適當的宿主細胞，之後按照公知的方法，可以從其宿主細胞中或培養上清中純化目標人EREG蛋白質。純化的天然EREG蛋白質也可同樣使用。另外，象本發明所使用的那樣，還可以利用使EREG蛋白質的所需的部分多肽與不同的多肽融合的融合蛋白作為免疫原。為了製造作為免疫原的融合蛋白，例如可以利用抗體的Fc片段或肽tag等。表達融合蛋白的載體可如下製作通過使所需的編碼兩種或兩種以上多肽片段的基因進行符合讀框的融合，將該融合基因按上述方式插入表達載體中來製作。融合蛋白的製作方法例如記載在MolecularCloning2nded.(Sambrook,J等人.，MolecularCloning2nded.,9.479.58,ColdSpringHarborLab.Press,1989)中。如此操作而純化的EREG蛋白質可以用作用於對哺乳動物進行免疫的致壽文抗原。EREG的部分肽也可用作致敏抗原。例如，可以以下述肽作為致^:抗原。由人EREG的胺基酸序列通過化學合成獲得的肽；將EREG基因的一部分整合到表達載體中，使其表達而獲得的肽；利用蛋白分解酶分解EREG蛋白質而獲得的肽。對用作部分肽的EREG的區域和大小沒有限定。優選的區域可以從構成EREG的胞外結構域的胺基酸序列(SEQIDNO:22的氨基,列中第29-122位)中選擇。構成作為致敏抗原的肽的胺基酸數目優選為至少3以上、例如5以上或6以上。更具體而言，可以以8~50、優選10~30個殘基的肽作為致l文抗原。對用該致敏抗原免疫的哺乳動物沒有特別限定。為了利用細胞融合法得到單克隆抗體，優選考慮與用於細胞融合的親本細胞的適合性來選擇免疫動物。通常作為免疫動物，優選嚙齒類動物。具體可以以小鼠、大鼠、倉鼠或兔作為免疫動物。此外，猴等也可作為免疫動物。可以按照公知的方法，利用致敏抗原免疫上述動物。例如常規方法為通過腹腔內或皮下注射致敏抗原，可以對哺乳動物實施免疫。具體而言，每4~21天對哺乳動物多次給予該致敏抗原。致敏抗原用PBS(磷酸緩沖鹽)或生理鹽水等按適當的稀釋倍率稀釋後用於免疫。並且，可以將致敏抗原與佐劑一同給藥。例如，可以將致敏抗原與弗氏完全佐劑混合、乳化，作為致敏抗原。另外，用致敏抗原進行免疫時可使用適當的載體。特別是使用分子量小的部分肽作為致敏抗原時，優選將該致敏抗原肽與白蛋白、鑰孔蟲戚血藍蛋白(keyholelimpethemocyanin)等載體蛋白結合後進行免疫。如此地對哺乳動物進行免疫，確認血清中所需抗體量升高後，從哺乳動物中採集免疫細胞用於細胞融合。優選的免疫細胞特別可以使用脾細胞。與上述免疫細胞融合的細胞使用哺乳動物的骨髓瘤細胞。優選骨髓瘤細胞具備用於篩選的適當的選擇標誌物。選擇標誌物是指，可以(或者不可以)在特定的培養條件下生存的特性。選擇標誌物中，次黃噪呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶缺陷(以下簡記為HGPRT缺陷)或胸腺嘧啶核苷激酶缺陷(以下簡記為TK缺陷)等是公知的。存在HGPRT或TK缺陷的細胞具有次黃噤呤-氨基蝶呤-胸苷感受性(以下簡記為HAT感受性)。HAT感受性的細胞在HAT選擇培養基中無法進行DNA合成而死亡，但與正常細胞融合時，利用正常細胞的補救途徑可以繼續進行DNA的合成，所以在HAT選擇培養基中也能夠增殖。HGPRT缺陷或TK缺陷的細胞，各自可以在含有6-硫代鳥噪呤、8-氮鳥嘌呤(以下簡記為8AG)或5，-溴脫氧尿苷的培養基中進行選擇。正常細胞由於將上述嗜啶類似物攝入DNA中而死亡，但缺失了上述酶的細胞由於不攝入上述嗜啶類似物，所以可以在選擇培養基中生存。此外，被稱作G418耐性的選擇標誌物由於新黴素耐性基因，提供對2-脫氧鏈黴胺類抗生素(慶大黴素類似物)的耐性。適於細胞融合的各種骨髓瘤細胞是公知的。例如，製造本發明的單克隆抗體時可以使用下述骨髓瘤細胞。P3(P3x63Ag8.653)(J.Immunol.(1979)123，1548-1550);P3x63Ag8U.1(CurrentTopicsinMicrobiologyandImmunology(1978)81,1-7);NS-1(Kohler.G.andMilstein,C.Eur.J.Immunol.(1976)6,511-519);MPC畫l1(Margulies.D.H.等人"Cell(1976)8,405-415);SP2/0(Shulman,M.等人.，Nature(1978)276，269-270);FO(deSt.Groth,S.F.等人.，J.Immunol.Methods(1980)35,1-21);SI94(Trowbridge,I.S.J.Exp.Med.(1978)148,313-323);以及R210(Galfre，G.等人.，Nature(1979)277,131畫133)等。基本上可以按照公知的方法、例如Kohler和Milstein等人的方法(Kohler.G.和Milstein,C.,MethodsEnzymo1.(1981)73,3-46),進行上述更具體而言，例如在細胞融合促進劑的存在下、在通常的營養培養液中，可以實施上述細胞融合。融合促進劑例如可以使用聚乙二醇(PEG)、仙臺病毒(HVJ)等。為了進一步提高融合效率，根據需要，還可以添加二曱基亞石風等輔助劑。免疫細胞與骨髓瘤細胞的使用比例可以任意設定。例如，優選相對於骨髓瘤細胞，使免疫細胞為1~10倍。用於上述細胞融合的培養液例如可以使用適合上述骨髓瘤細胞4朱增殖的RPMI1640培養液、MEM培養液、以及用於該種細胞培養的常規培養液。並且，可以在培養液中添加胎牛血清(FCS)等血清補液。細胞融合可如下形成將規定量的上述免疫細胞和骨髓瘤細胞在上述培養液中充分混合，再混合預先加熱至37t:左右的PEG溶液，從而形成目標融合細胞(雜交瘤)。在細胞融合法中，通常可以以30~60%(w/v)的濃度添加例如平均分子量為1000-6000左右的PEG。接著，依次添加上述例舉的適當培養液，離心以除去上清，通過重複該操作，可除去不利於雜交瘤生長的細胞融合劑等。如此操作而得到的雜交瘤，可以通過使用選擇培養液而進行選擇，所述選擇培養液對應於用於細胞融合的雜交瘤所具有的選擇標誌物。例如，具有HGPRT或TK缺陷的細胞，可通過在HAT培養液(含有次黃噪呤、氨基蝶呤和胸腺嗜啶的培養液)中培養來進行選擇。即，將HAT感受性的骨髓瘤細胞用於細胞融合時，在HAT培養液中，成功與正常細胞進行細胞融合的細胞能夠選擇性地增殖。為了使目標雜交瘤以外的細胞(非融合細胞)死亡，使用上述HAT培養液繼續培養足夠的時間。具體而言，通常通過培養數天至數周，可以選擇目標雜交瘤。接著，通過實施常規的極限稀釋法，可以實施產生目標抗體的雜交瘤的篩選和單一克隆。或者，還可以按照國際公開WO03/104453中所述的方法製備識別EREG的抗體。目標抗體的篩選和單一克隆可優選按照基於公知的抗原抗體反應的篩選方法進行實施。例如，使抗原與用聚苯乙烯等製成的珠或市售的96孔微量滴定板等載體結合，再與雜交瘤的培養上清反應。然後清洗載體，之後與用酶標記的二次抗體等反應。當培養上清中含有與致敏抗原反應的目標抗體時，二次抗體經由該抗體與載體結合。最終，通過檢測與載體結合的二次抗體，可以確定培養上清中是否存在目的抗體。利用極限稀釋法等可以克隆能與抗原結合的產生所需抗體的雜交瘤。此時，抗原不僅可以使用用於免疫的抗原，還可以適當使用實施上為相同性質的EREG蛋白質。例如，可以使用EREG的胞外結構域、或者包含構成該區的部分胺基酸序列的寡肽作為抗原。法外，對人淋巴細胞進行抗原致敏，也可得到目標抗體。具體而言，首先，在體外用EREG蛋白質致敏人淋巴細胞。然後，使免疫致敏的淋巴細胞與適當的融合配偶體融合。融合配偶體可以使用例如來自人的具有永久分裂能力的骨髓瘤細胞(參照日本特公平1-59878號公報)。通過該方法得到的抗EREG抗體是與EREG蛋白質具有結合活性的人抗體。並且，通過對具有完全人抗體基因的所有組成成分的轉基因動物給予作為抗原的EREG蛋白質，也可得到抗EREG抗體。免疫動物的抗體產生細胞通過與適當的融合配偶體進行細胞融合、或者通過EB病毒感染等處理，可以使之無限增殖。通過從如此操作而得到的無限增殖細胞中可以分離抗EREG蛋白質的人抗體(參照國際公開W094/25585、W093/12227、WO92/03918、WO94/02602)。並且，通過克隆無限增殖的細胞，也可以克隆具有目標反應特異性的產生抗體的細胞。以轉基因動物作為免疫動物時，該動物的免疫系統將人EREG識別為異物。因此，可以容易地得到抗人EREG的人抗體。如此操作而製備的產生單克隆抗體的雜交瘤可在常規培養液中繼代培養。還可以在液氮中長期保存該雜交瘤。按照常規方法培養該雜交瘤，從其培養上清中可以獲得目標單克隆抗體。或者，可以將雜交瘤給予與其具有適合性的哺乳動物以使其增殖，以其腹水的形式獲得單克隆抗體。前一種方法適合獲得高純度的抗體。本發明中，還可以利用由抗體產生細胞克隆的抗體基因所編碼的抗體。將克隆的抗體基因整合到適當的載體中，再導入宿主中，從而可以以抗體的形式表達。用於抗體基因的分離、載體的導入、以及宿主細胞的轉化的方法已經確立(例如參照Vandamme,A.M.等人.，Eur丄Biochem.(1990)192,767~775)。例如，可以從產生抗EREG抗體的雜交瘤細胞中得到編碼抗EREG抗體的可變區(V區)的cDNA。因此，通常首先從雜交瘤中提取總RNA。作為用於從細胞中提取mRNA的方法，可以採用以下方法。胍超離心法(Chirgwin,J.M.等人.，Biochemistry(1979)18,5294~5299);APGC法(Chomczynski,P.等人.，Anal.Biochem.(1987)162,156~159)。所提取的mRNA可以用mRNA純化試劑盒(GEHealthcareBio-Sciences製備)等進行純化。或者，象QuickPrepmRNA純化試劑盒(GEHealthcareBio-Sciences製備)等那樣，用於從細胞中直接提取總mRNA的試劑盒也有市售。使用這種試劑盒，也可以從雜交瘤中得到總mRNA。可以使用逆轉錄酶，由所得mRNA合成編碼抗體V區的cDNA。cDNA可以通過AMV逆轉錄酶第一鏈cDNA合成試劑盒(AMVReverseTranscriptaseFirst-StrandcDNASynthesisKit)(生化學工業社制)等來合成。為了進行cDNA的合成和擴增，可以採用5，-AmpliFINDERRACE試劑盒(Clontech製備)和使用PCR的5，-RACE法(Frohman,M.A.等人.，Proc.Natl.Acid.Sci.USA(1988)85,8998~9002、Belyavsky,A.等人，NucleicAcidsRes.(1989)17,2919-2932)。並且，在上述cDNA的合成過程中，可以向cDNA的兩個末端導入後述的適當的限制酶切位點。由所得的PCR產物純化目標cDNA片段，接著與載體DNA連接。如上製備重組載體，將其導入大腸桿菌等中，選擇集落後，可以由形成該集落的大腸桿菌製備所需的重組載體。而且，關於該重組載體是否具有目標cDNA的核苦酸序列，這可以通過公知的方法、例如雙脫氧核苷酸鏈終止法等進行確認。為了得到編碼可變區的基因，還可以使用利用引物擴增可變區基因的PCR法。首先，以提取的mRNA為模板合成cDNA，得到cDNA文庫。在cDNA文庫的合成中，使用市售的試劑盒是便利的。實際上，由於僅由少數細胞得到的mRNA極其微量，所以若將其直接純化則收率低。因此，通常是添加已明確不含抗體基因的載體RNA後再純化。或者，在可以提取一定量的RNA時，即使僅是抗體產生細胞的RNA，也可以高效率地提取。例如從10以上、或30以上、優選50以上的抗體產生細胞中提取RNA時，有時不必添加載體RNA。已所得cDNA文庫為模板，利用PCR法擴增抗體基因。用於通過PCR法擴增抗體基因的引物是公知的。例如，可以根據論文(J.Mol.Biol.(1991)222,581-597)等公開的內容，設計人抗體基因擴增用的引物。這些引物在每一免疫球蛋白的亞級都形成不同的核苷酸序列。因此，以亞級不明確的cDNA文庫為模板時，考慮所有可能性後再進行PCR法。具體而言，例如為了取得編碼人IgG的基因時，可以使用可擴增編碼作為重鏈的y1，5、作為輕鏈的K鏈和X鏈的基因的引物。為了擴增IgG的可變區基因，通常3，側的引物中使用相當於鉸鏈區的部分退火的引物。而5'側的引物中可以使用相當於各亞級的引物。將由重鏈和輕鏈的各亞級的基因擴增用引物得到的PCR產物製成各自獨立的文庫。利用如此合成的文庫，可以重構包含重鏈與輕鏈的組合的免疫球蛋白。以重構的免疫球蛋白與EREG的結合活性為指標，可以篩選目標抗體。例如，為了獲取抗EREG抗體時，進一步優選抗體與EREG的結合為特異性的。與EREG結合的抗體例如可以如下篩選。(1)使抗體與EREG接觸的步驟，所述抗體含有由雜交瘤得到的cDNA所編碼的V區；(2)檢測EREG與抗體之間結合的步驟；以及(3)選擇與EREG結合的抗體的步驟。檢測抗體與EREG之間結合的方法是公知的。具體而言，使被檢抗體與固定有載體的EREG反應，接下來使之與識別抗體的標記抗體反應。清洗後檢測出載體上的標記抗體時，可以證明該^皮檢抗體與EREG結合。標記中可以使用過氧化物酶或P-半乳糖苷酶等酶活性蛋白質、或FITC等焚光物質。為了評價抗體的結合活性，還可以使用表達EREG的細胞的固定標本。作為以結合活性為指標的抗體的篩選方法，還可採用利用了噬菌體載體的淘選法。按上述方式獲取抗體基因作為重鏈和輕鏈的亞級的文庫時，利用噬菌體載體的篩選法是有利的。編碼重鏈和輕鏈的可變區的基因通過以適當的接頭序列連接，可以形成單鏈Fv(scFv)。將編碼scFv的基因插入噬菌體載體中時，可以得到在表面表達scFv的噬菌體。使該噬菌體與目標抗原接觸，回收與抗原結合的噬菌體時，可以回收編碼具有目標結合活性的scFv的DNA。根據需要重複該操作，可以濃縮具有目標結合活性的scFv。本發明中，編碼抗體的多核苷酸可以編碼抗體的全長、或者可以編碼抗體的一部分。抗體的一部分是指抗體分子的任意部分。以下，作為表示抗體的一部分的用語，有時使用抗體片段。本發明中優選的抗體片IS:包4舌抗體的互補鏈決定區(complementaritydeterminationregion;CDR)。進一步優選本發明的抗體片段包括構成可變區的全部的3個CDR。獲得編碼目標抗EREG抗體V區的cDNA後，通過識別插入到該cDNA的兩個末端的限制酶切位點的限制酶消化該cDNA。優選的限制酶識別、消化在構成抗體基因的核苷酸序列中出現的可能性^f氐的核苷酸序列。為了進一步將1複製的消化片段按正確方向插入載體中，優選提供附著末端的限制酶。通過將上述^C消化的編碼抗EREG抗體V區的cDNA插入適當的表達載體中，可以得到抗體表達載體。此時，通過使編碼抗體恆定區(C區)的基因與編碼上述V區的基因進行符合讀框的融合，可以得到嵌合抗體。此處的嵌合抗體是指恆定區和可變區的來源不同。因此，除了小鼠-人等的異種嵌合抗體外，人-人同種嵌合抗體也包括在本發明的嵌合抗體中。預先將上述V區基因插入具有恆定區的表達載體中，也可以構建嵌合抗體表達載體。具體而言，例如在保持有編碼所需抗體恆定區(C區)的DNA的表達載體的5，側，可以預先配置消化上述V區基因的限制酶的限制酶識別序列。用相同組合的限制酶消化兩者，使之進行符合讀框的融合，從而構建嵌合抗體表達載體。為了製備本發明中使用的抗EREG抗體，可以將抗體基因整合到表達載體中，使在表達控制區的控制下表達。用於表達抗體的表達控制區例如包括增強子和啟動子。接著，使用該表達載體轉化適當的宿主細胞，由此可以獲得表達編碼抗EREG抗體的DNA的重組細胞。為了表達抗體基因，可以將編碼抗體重鏈(H鏈)和輕鏈(L鏈)的DNA分別整合到另一表達載體中。將整合有H鏈和L鏈的載體同時轉化(co-transfect)到相同的宿主細胞中，從而可以使具備H鏈和L鏈的抗體分子表達。或者，可以將編碼H鏈和L鏈的DNA整合到單一的表達載體中，來轉化宿主細胞(參照國際公開W094/11523)。用於暫且分離抗體基因、再導入適當的宿主細胞中以製備抗體的宿主與表達載體的多個組合是公知的。這些表達系統均可應用於本發明。^吏用真核細胞作為宿主時，可以〗吏用動物細胞、植物細胞或真菌細胞。具體而言，可用於本發明的動物細胞可以例示下述細胞(1)哺乳類細胞CHO、COS、骨髓瘤、BHK(幼倉鼠腎)、Hela、Vero等；(2)兩棲類細胞非洲爪蟾卵細胞等；以及(3)昆蟲細胞sf9、sf21、Tn5等。或者，作為植物細胞，來自菸草(Nicotianatabacum)等菸草屬(Nicotiana)的細胞產生的抗體基因的表達系統是公知的。在植物細胞的轉化中，可以使用進行了愈傷組織培養的細胞。並且，作為真菌細胞，可以使用下述細胞。酵母啤酒糖酵母(Saccharomycesserevisiae)等糖酵母屬(Saccharomyces)、曱醇型畢赤酵母(Pichiapastoris)等畢赤酵母屬(Pichia);絲狀菌黑麴黴(Aspergillusniger)等麴黴屬(Aspergillus)。或者，使用原核細胞的抗體基因的表達系統也是公知的。例如，使用細菌細胞時，可以將大腸桿菌(E.coli)、枯草桿菌等細菌細胞用於本發明。通過轉化將含有目標抗體基因的表達載體導入上述細胞中。通過在體外培養被轉化的細胞，可以從該轉化細胞的培養物中獲得所需的抗體。另外，在重組型抗體的產生中，除了使用上述宿主細胞外，還可以使用轉基因動物。即，將編碼目標抗體的基因導入動物體內，可以由該動物得到該抗體。例如，通過將抗體基因符合讀框地插入到編碼乳汁中特性產生的蛋白質的基因內部，可以構建融合基因。作為乳汁中所分泌的蛋白質，例如可以使用山羊I3酪蛋白等。將含有插入了抗體基因的融合基因的DNA片段注入到山羊胚胎中，再將該注入胚胎導入雌山羊體內。接受了胚胎的山羊生出轉基因山羊，從該轉基因山羊(或其後代)產生的乳汁中，可以以與乳汁蛋白質形成的融合蛋白的形式獲得所需抗體。另外，為了增加由轉基因山羊產生的含有所需抗體的乳汁量，可以將激素適當用於轉基因山羊(Ebert,K.M.等人.，Bio/Technology(1994)12,699~702)。本發明的重組抗體的C區可以使用來自動物抗體的C區。例如，小鼠抗體的H鏈C區可以使用Cyl、Cy2a、Cy2b、Cy3、Qw、C3、Cl、Cct2、Ce，L鏈C區可以使用Oc、CA。另外，除小氣抗體以外的動物抗體可以使用大鼠、兔、山羊、綿羊、駱駝、猴等的動物抗體。它們的序列是公知的。為了改善抗體或其產生的穩定性，可以對C區進行修飾。本發明中，將抗體給予人時，為了降低對人的異種抗原性等，可以製成人工修飾的基因重組型抗體。基因重組型抗體例如包括嵌合抗體、人源化抗體等。這些修飾抗體可以採用公知的方法進行製備。嵌合抗體是指將來源互不相同的可變區和恆定區連接而成的抗體。例如，包含小鼠抗體的重鏈、輕鏈的可變區和人抗體的重鏈、輕鏈的恆定區的抗體是小鼠-人-異種嵌合抗體。將編碼小鼠抗體可變區的DNA與編碼人抗體恆定區的DNA連接，將其整合到表達載體中，從而可以製備表達嵌合抗體的重組載體。培養通過該載體轉化的重組細胞，使整合的DNA表達，從而可以獲得培養中所產生的該嵌合抗體。在嵌合抗體和人源化抗體的C區使用人抗體的C區。例如，在H鏈中，可以使用Cyl、Cy2、Cy3、Cy4、C〃、G5、Ccd、Ca2和Ce作為C區。在L鏈中，可以使用Oc和CA作為C區。上述C區的胺基酸序列以及編碼該胺基酸序列的核苷酸序列是公知的。為了改善抗體本身或抗體產生的穩定性，可以對人抗體C區進行修飾。通常，嵌合抗體由來自人以外的動物的抗體的V區和來自人抗體的C區構成。相對於此，人源化抗體由來自人以外的動物的抗體的互補性決定區(CDR)和來自人抗體的構架區(FR)、以及來自人抗體的C區構成。由於人源化抗體在人體內的抗原性降低，因此可用作本發明的治療藥的有效成分。例如，作為本發明中的單克隆抗體，優選通過將基於本發明而製作的抗EREG單克隆抗體B3#18的可變區和構成人恆定區的氨基^列連接而得到的小鼠-人嵌合抗體。即，本發明提供小鼠-人嵌合單克隆抗體，該抗體含有包括下述胺基酸序列的H鏈和L鏈。H鏈SEQIDNO:IO所述的胺基酸序列中1~446位的氨基斷歹寸(除信號序列-19--1以外的序列)L鏈SEQIDNO:20所述的胺基酸序列中1~213位的胺基酸序列(除信號序列-20-1以外的序列)並且，本發明的嵌合抗體的優選的其它例子有以下抗體抗體，該抗體含有H鏈和L鏈，所述H鏈具有SEQIDNO:129所述的胺基酸序列中除去信號序列(-19~-1)後的序列，所述L鏈具有SEQIDNO:131所述的胺基酸序列中除去信號序列(-19~-1)後的序列；抗體，該抗體含有H鏈和L鏈，所述H鏈具有SEQIDNO:133所述的氛基酸序列中除去信號序列(-19~-1)後的序列，所述L鏈具有SEQIDNO:135所述的胺基酸序列中除去信號序列(-19-l)後的序列；抗體，該抗體含有H鏈和L鏈，所述H鏈具有SEQIDNO:137所述的^JJ吏序列中除去信號序列(-19~-1)後的序列，所述L鏈具有SEQIDNO:139所述的胺基酸序列中除去信號序列(-19~-1)後的序列；抗體，該抗體含有H鏈和L鏈，所述H鏈具有SEQIDNO:141所述的胺基酸序列中除去信號序列(-19-l)後的序列，所述L鏈具有SEQIDNO:143所述的胺基酸序列中除去信號序列(-19~-1)後的序列；以及抗體，該抗體含有H鏈和L鏈，所述H鏈具有SEQIDNO:145所述的胺基酸序列中除去信號序列(-19~-1)後的序列，所述L鏈具有SEQIDNO:147所述的胺基酸序列中除去信號序列(-19~-1)後的序列。抗體可變區通常由夾在4個構架區(FR)中的3個互補性決定區(CDR)構成。CDR實質上是決定抗體的結合特異性的區。CDR的胺基酸序列富有多樣性。一方面，構成FR的胺基酸序列即使在具有不同結合特異性的抗體間往往也顯示出高度同源性。因此，通常通過移植CDR,可以將某抗體的結合特異性移植到其它抗體中。人源化抗體也稱作重構(reshaped)人抗體。具體而言，將人以外的動物例如小鼠抗體的CDR移植到人抗體中的人源化抗體等是公知的。用於得到人源化抗體的常規基因重組方法也是已知的。具體而言，作為用於將小鼠抗體的CDR移植到人的FR中的方法，例如重疊序列延伸PCR(OverlapExtensionPCR)是公知的。在重疊序列延伸PCR中，將移植了編碼小鼠抗體CDR的核苷酸序列附加在用於合成人抗體FR的引物上。分別準備4個FR的引物。通常，向人FR中移植小鼠CDR時，選擇與小鼠的FR同源性高的人FR，這對維持CDR的功能有利。即，通常優選利用包含與移植了小鼠CDR相鄰的FR的胺基酸序列同源性高的氨基#列的人FR。另外，被連接的核苷酸序列設計成彼此符合讀框地進行連接。利用各自的引物分別合成人FR。其結果，得到在各FR中附加有編碼小鼠CDR的DNA的產物。各產物的編碼小鼠CDR的核苷酸序列設計成相互重疊。接著，使以人抗體基因為模板合成的產物的重疊CDR部分相互退火，進行互補鏈合成反應。通過該反應，人FR經由小鼠CDR序列進行連接。最終，連接有3個CDR和4個FR的全長V區基因使用下述引物進行擴增，所述引物為對其5，末端和3，末端退火且附加有適當的限制酶識別序列。將如上得到的DNA與編碼人抗體C區的DNA插入表達載體中，使符合讀框地融合，從而可以製備人型抗體表達用載體。將該整合載體導入宿主中，建立重組細胞，之後培養該重組細胞，使編碼該人源化抗體的DNA表達，從而在該培養細胞的培養物中產生該人源化抗體(參照歐洲專利7>開EP239400、國際7>開WO96/02576)。通過定性或定量測定並評價如上製備的人源化抗體與抗原的結合活性，可以適當選#^經由CDR連接時該CDR可形成良好的抗原結合部位的人抗體的FR。根據需要，還可以置換FR的胺基酸殘基，使重構人抗體的CDR形成適當的抗原結合部位。例如，應用用於向人FR中移植小鼠CDR的PCR法，可以向FR中導入胺基酸序列的突變。具體而言，可以向對FR退火的引物中導入一部分核苷酸序列的突變。利用上述引物合成的FR中，導入了核苷酸序列的突變。通過用上述方法測定並評價置換了胺基酸的突變型抗體與抗原的結合活性，可以選擇具有所需性質的突變FR序列(Sato,K.等人.，CancerRes,1993,53，851~856)。另外，人抗體的獲得方法也是已知的。例如，在體外用所需抗原或表達所需抗原的細胞致敏人淋巴細胞。接著，使致敏淋巴細胞與人骨髓瘤細胞融合，從而可以獲得與抗原具有結合活性的所需人抗體(參照曰本特公平1-59878)。在作為融合配偶體的人骨髓瘤細胞中，例如可以使用U266等。通過用所需抗原對具有完全人抗體基因的所有組成成分的轉基因動物進行免疫，可以獲得所需的人抗體(參照國際公開W093/12227、WO92/03918、WO94/02602、W094/25585、WO96/34096、W096/33735)。並且，還已知4吏用人抗體文庫，通過淘選獲得人抗體的技術。例如，利用噬菌體展示法，使人抗體的V區作為單鏈抗體(scFv)在噬菌體表面表達，可以選擇與抗原結合的噬菌體。通過分析所選擇的噬菌體的基因，可以確定編碼與抗原結合的人抗體V區的DNA序列。確定了與抗原結合的scFv的DNA序列後，使該V區序列與所需人抗體C區序列進行符合讀框的融合，之後插入適當的表達載體中，從而可以製備表達載體。將該表達載體導入上述所例舉的優選的表達細胞中，使編碼該人抗體的基因表達，從而可獲得該人抗體。這些方法已經公知(國際公開WO92/01047、WO92/20791、WO93/06213、WO93/11236、WO93/19172、WO95/01438、WO95/15388)。本發明所使用的抗體，只要與EREG蛋白質結合即可，不僅包括IgG所代表的二價抗體，還包括一價抗體或IgM所代表的多價抗體。本發明的多價抗體包括具有完全相同的抗原結合部位的多價抗體、或具有一部分或完全不同的抗原結合部位的多價抗體。本發明所使用的抗體並不限於抗體的全長分子，只要與EREG蛋白質結合即可，可以是小分子抗體或其修飾物。小分子抗體包括全長抗體(wholeantibody,例如全長IgG等)的一部分缺失的抗體片段。只要與EREG抗原具有結合能力即可，允許抗體分子的部分缺失。本發明中的抗體片段優選含有重鏈可變區(VH)和/或輕鏈可變區(VL)。VH或VL的胺基酸序列可以包括置換、缺失、附加和/或插入。並且，只要與EREG抗原具有結合能力即可，可以缺失VH和/或VL的一部分。另外，可變區可以進行嵌合或人源化。抗體片段的具體例子例如有Fab、Fab，、F(ab，)2、Fv等。小分子抗體的具體例子例如有Fab、Fab，、F(ab，)2、Fv、scFv(單鏈Fv)、雙抗體、sc(Fv)2(單鏈(Fv)2)等。這些抗體的多聚體(例如二聚體、三聚體、四聚體、多聚體)也包含在本發明的小分子抗體中。抗體片段可以通過用酶處理抗體生成抗體片段而得到。作為生成抗體片段的酶，例如木瓜蛋白酶、胃蛋白酶或纖溶酶等是公知的。或者，構建編碼這些抗體片段的基因，將其導入表達載體中，之後可以在適當的宿主細胞中表達(例如參照Co，M.S.等人.，J.Immuno1.(1994)152，2968~2976;Better,M.和Horwitz，A.H.MethodsinEnzymology(1989)178，476~496;Plueckthun,A.和Skerra，A.MethodsinEnzymology(1989)178,476~496;Lamoyi,E.，MethodsinEnzymology(1989)121，652~663;Rousseaux,J.等人.，MethodsinEnzymology(1989)121，663~669;Bird,R.E.等人.，TIBTECH(1991)9,132~137)。消化酶切斷抗體片段的特定位置，給予下述特定結構的抗體片段。對上述酶解得到的抗體片段應用基因工程方法時，可以使抗體的任意部分缺失。木瓜蛋白酶消化F(ab)2或Fab胃蛋白酶消4匕F(ab，)2或Fab，纖溶酶消化Facb因此，本發明中的小分子抗體只要與EREG具有結合親和性即可，可以是缺失了任意區的抗體片段。並且，特別是在本發明的癌症等細胞增殖性疾病的治療中，優選抗體維持其效應子活性。即，本發明中優選的小分子抗體具有與EREG的結合親和性和效應子功能兩者。抗體的效應子功能包括ADCC活性和CDC活性。本發明中的治療用抗體，特別優選具有ADCC活性和/或CDC活性作為效應子功能。雙抗體(Diabody)是指通過基因融合構建的二價抗體片段(HolligerP等人.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:64446448(1993);EP404,097號；W093/11161號等)。雙抗體是由兩條多肽鏈構成的二聚體。通常，構成二聚物的多肽鏈，各自在同一條鏈中VL和VH通過接頭進行結合。雙抗體中的接頭通常短至VL和VH無法相互結合。具體而言，構成接頭的胺基酸殘基例如為5個殘基左右。因此，編碼在同一條多肽鏈上的VL和VH無法形成單鏈可變區片段，而是與另一單鏈可變區片段形成二聚體。其結果，雙抗體具有兩個抗原結合部位。scFv可通過連接抗體的H鏈V區和L鏈V區而得到。在scFv中，H鏈V區和L鏈V區經由接頭、優選肽接頭進行連接(Huston,J.S.等人.，Proc.Natl.Acid.Sci.U.S.A.(1988)85,58795883)。scFv中的H鏈V區和L鏈V區可以來自本說明書中作為抗體而記載的任何抗體。對連接V區的肽接頭沒有特別限定。例如可以使用包含3~25個殘基左右的任意單鏈肽作為接頭。具體而言，例如可以使用後述的肽接頭等。V區例如可以按照上述PCR法進行連接。為了利用PCR法連接V區，首先，在下述DNA中，以編碼全部或所需的部分胺基酸序列的DNA作為模板上述編碼抗體H鏈或H鏈V區的DNA序列；以及上述編碼抗體L鏈或L鏈V區的DNA序列。編碼H鏈和L鏈的V區的DNA分別利用PCR法進行擴增，所述PCR法使用具有與應擴增的DNA兩端的序列對應的序列的一對虧1物。接著，準備編碼肽接頭部分的DNA。編碼肽接頭的DNA也可利用PCR來合成。在此時使用的引物的5'側附加可與另外合成的各V區的擴增產物連接的核苷酸序列。接著，利用[H鏈V區DNA]-[肽接頭DNA]-[L鏈V區DNA]的各DNA和裝配PCR用的引物進行PCR反應。裝配PCR用的引物包含在[H鏈V區DNA]的5'側退火的引物和在[L鏈V區DNA]的3'側退火的引物的組合。即，裝配PCR用引物是指可以擴增編碼應合成的csFv的全長序列的引物組。另一方面，[肽接頭DNA]中附加有可與各V區DNA連接的核苷酸序列。其結果，連接上述DNA，再利用裝配PCR用引物，最終以擴增產物的形式生成csFv的全長。暫且製作編碼scFv的DNA，^按照常M^方法可以獲取含有上述DNA的表達載體和通過該表達載體轉化的重組細胞。其結果，培養所得的重組細胞，使編碼該scFv的DNA表達，從而可獲得該scFv。sc(Fv)2是兩個VH和兩個VL通過接頭等連接形成單鏈的小分子抗體(Hudson等人.，JImmunol,Methods1999;231:177189)。sc(Fv)2例如可以通過用接頭連接scFv來製備。優選具有以下特徵的抗體，所述特徵為2個VH和2個VL以單鏈多肽的N末端側為基點，按照VH、VL、VH、VL([VH]-接頭-[VL]-接頭-[VH]-接頭-[VL])的順序排列。2個VH和2個VL的順序並不特別限於上述排列，可以按照任何順序進行排列。例如包括以下排列[VL]-接頭-[VH]-接頭-[VH]-接頭-[VL]H/H]-接頭-[VL]-接頭-[VL]-接頭-[VH][VH]-接頭-[VH]-接頭-[VL]-接頭-[VL][VL]-接頭-[VL]-接頭-[VH]-接頭-[VH][VL]-接頭-[VH]-接頭-[VL]-接頭-[VH]連接抗體可變區的接頭可以使用能夠通過基因工程導入的任意肽接頭、或化學合成接頭(例如參照ProteinEngineering,9(3)，299-305,1996)中公開的接頭等。本發明中優選肽接頭。對肽接頭的長度沒有特別限定，本領域技術人員可以根據目的適當選擇。通常，構成肽接頭的胺基酸殘基為1~100個胺基酸，優選3~50個胺基酸，進一步優選5~30個胺基酸，特別優選為1218個胺基酸(例如15個胺基酸)。構成肽接頭的胺基酸序列，只要不阻礙scFv的結合活性即可，可以形成任意序列。例如，當為肽接頭時，可以使用下述胺基酸序列。SerGly.SerGly,GlySerSerGlyGlyGlyGly.Gly.Ser(SEQIDNO:23)SerGly,Gly.Gly(SEQIDNO:24)GlyGlyGly.GlySer(SEQIDNO:25)SerGly.Gly,Gly'Gly(SEQIDNO:26)GlyGly.Gly.Gly.Gly'Ser(SEQIDNO:27)Ser-GlyGly'Gly.Gly.Gly(SEQIDNO:28)Gly.Gly.GlyGly.GlyGly.Ser(SEQIDNO:29)Ser.Gly.GlyGly.GlyGly'Gly(SEQIDNO:30)(Gly,Gly.Gly.Gly.Ser(SEQIDNO:3l))n(SerGly.Gly'GlyGly(SEQIDNO:32))n[n為1以上的整數]關於肽接頭的胺基酸序列，本領域技術人員可以根據目的適當選擇。例如，決定上述肽接頭的長度的n通常為1~5，優選1~3，更優選為l或2。因此，本發明中特別優選的sc(Fv)2的方式例如有以下sc(Fv)2。[VH]-肽接頭(15個胺基酸)-[VL]-肽接頭(15個胺基酸)-[VH]-肽接頭(15個胺基酸)-[VL]或者，還可以利用化學合成接頭(化學交聯劑)來連接V區。本發明中可以使用通常用於交聯肽化合物等的交聯劑。例如下述化學交聯劑是公知的。這些交聯劑均有銷售。N-羥基琥珀醯亞胺(NHS);二琥珀醯亞氨基辛二酸酯(DSS);雙(磺基琥珀醯亞氨基)辛二酸酯(BS3);二硫代雙(琥珀醯亞氨基丙酸酯)(DSP);二硫代雙(磺基琥珀醯亞氨基丙酸酯)(DTSSP);雙(琥珀醯亞氨基琥珀酸)乙二醇酯(EGS);雙(磺基琥珀醯亞氨基琥珀酸)乙二醇酯(磺基-EGS);二琥珀醯亞氨基酒石酸鹽(DST);二磺基琥珀醯亞氛基酒石酸鹽(磺基-DST);雙[2-(琥珀醯亞胺氧基羰基氧基)乙基]碸(BS0C0ES);以及雙[2-(磺基琥珀醯亞胺氧基羰基氧基)乙基]碸(磺基-BSOCOES)等。連接4個抗體可變區時，通常需要3個接頭。多個接頭可以使用相同的接頭，也可以使用不同的接頭。本發明中，優選的小分子抗體為雙抗體或sc(Fv)2。為了獲得上述小分子抗體，可以用酶、例如木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等處理抗體，生成抗體片段；或者構建編碼這些抗體片段的DNA，將其導入表達載體中，之後在適當的宿主細胞中表達即可(例如參照Co,M.S.等人.，J.Imm腸l.(1994)152,2968-2976;Better,M.和Horwitz，A.H.MethodsEnzymol(1989)178,476~496;Plueckthun,A.和Skerra，A.MethodsEnzymol(1989)178，497515;Lamoyi，E.,MethodsEnzymol(1986)121,652~663;Rousseaux,J.等人.,MethodsEnzymol(1986)121,663-669;Bird,R.E.和Walker,B.W.，TrendsBiotechnol.(1991)9，132~137)。本發明的抗體可以使用識別EREG的任意抗體。例如，優選的抗體可以例示以下(1)~(57)所述的抗體。這些抗體例如可以是全長抗體、小分子抗體、動物抗體、嵌合抗體、人源化抗體或人抗體。(1)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:2的胺基酸序列(B3弁18抗體的H鏈CDR1序列)、作為CDR2的SEQIDNO:4的胺基酸序列(B3W8抗體的H鏈CDR2序列)、以及作為CDR3的SEQIDNO:6的胺基酸序列(B3弁18抗體的H鏈CDR3序列)。(2)抗體，該抗體含有(l)所述的H鏈，該H鏈具有作為CH(H鏈恆定區)的SEQIDNO:8的氨基齡列的117452位的胺基酸序列(B3W8抗體的CH序列)。(3)抗體，該抗體含有(l)所述的H鏈，該H鏈具有作為CH的SEQIDNO:IO的胺基酸序列的117~446位的胺基酸序列(DF151小鼠-人嵌合抗體的CH序列)。(4)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:12的胺基酸序列(B3W8抗體的L鏈CDR1序列)、作為CDR2的SEQIDNO:14的胺基酸序列(B3弁18抗體的L鏈CDR2序列)、以及作為CDR3的SEQIDNO:16的胺基酸序列(B3弁18抗體的L鏈CDR3序列)。(5)抗體，該抗體含有(4)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL(L鏈恆定區)的SEQIDNO:18的胺基酸序列的107-213位的胺基酸序列(B3弁18抗體的CL的序列)。(6)抗體，該抗體含有(4)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107-213位的胺基酸序列(B3W8小鼠-人嵌合抗體的CL的序列)。(7)抗體，該抗體含有(1)所述的H鏈和(4)所述的L鏈。(8)抗體，該抗體含有(2)所述的H鏈和(5)所述的L鏈。(9)抗體，該抗體含有(3)所述的H鏈和(6)所述的L鏈。(10)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:49的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:51的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:53的胺基酸序列。(11)抗體，該抗體含有(10)所述的H鏈，該H鏈具有作為CH的SEQIDNO:149的胺基酸序列的118~441位的胺基酸序列。(12)抗體，該抗體含有(10)所述的H鏈，該H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117446位的胺基酸序列。(13)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:55的氨基麟列、作為CDR2的SEQIDNO:57的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:59的胺基酸序列。(14)抗體，該抗體含有(13)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:151的胺基酸序列的108~214位的胺基酸序列。(15)抗體，該抗體含有(13)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107-213位的胺基酸序列。(16)抗體，該抗體含有(10)所述的H鏈和(13)所述的L鏈。(17)抗體，該抗體含有(11)所述的H鏈和(14)所述的L鏈。(18)抗體，該抗體含有(12)所述的H鏈和(15)所述的L鏈。(19)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:61的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:63的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:65的胺基酸序列。(20)抗體，該抗體含有(19)所述的H鏈，該H鏈具有作為CH的SEQIDNO:153的胺基酸序列的116~439位的胺基酸序列。(21)抗體，該抗體含有(1力所述的H鏈，該H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117-446位的胺基酸序列。(22)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:67的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:69的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:71的氨基蔣列。(23)抗體，該抗體含有(22)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:155的胺基酸序列的108214位的胺基酸序列。(24)抗體，該抗體含有(22)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107~213位的胺基酸序列。(25)抗體，該抗體具有(19)所述的H鏈和(22)所述的L鏈。(26)抗體，該抗體具有(20)所述的H鏈和(23)所述的L鏈。(27)抗體，該抗體具有(21)所述的H鏈和(24)所述的L鏈。(28)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:73的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:75的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:77的胺基酸序列。(29)抗體，該抗體含有(28)所述的H鏈，該H鏈具有作為CH的SEQIDNO:157的胺基酸序列的119442位的氨基^列。(30)抗體，該抗體含有(28)所述的H鏈，該H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117-446位的胺基酸序列。(31)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:79的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:81的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:83的胺基酸序列。(32)抗體，該抗體含有(31)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:159的胺基酸序列的109~215位的胺基酸序列。(33)抗體，該抗體含有(31)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107-213位的胺基酸序列。(34)抗體，該抗體含有(28)所述的H鏈和(31)所述的L鏈。(35)抗體，該抗體含有(29)所述的H鏈和(32)所述的L鏈。(36)抗體，該抗體含有(30)所述的H鏈和(33)所述的L鏈。(37)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:85的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:87的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:89的胺基酸序列。(38)抗體，該抗體含有(37)所述的H鏈，所述H鏈具有作為CH的SEQIDNO:161的胺基酸序列的117~440位的胺基酸序列。(39)抗體，該抗體含有(37)所述的H鏈，該H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117-446位的胺基酸序列。(40)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:91的氨基S^f列、作為CDR2的SEQIDNO:93的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:95的胺基酸序列。(41)抗體，該抗體含有(40)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:163的胺基酸序列的108~214位的胺基酸序列。(42)抗體，該抗體含有(40)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107~213位的胺基酸序列。(43)抗體，該抗體具有(37)所述的H鏈和(40)所述的L鏈。(44)抗體，該抗體具有(38)所述的H鏈和(41)所述的L鏈。(45)抗體，該抗體具有(39)所述的H鏈和(42)所述的L鏈。(46)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:97的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:99的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:101的胺基酸序列。(47)抗體，該抗體含有(46)所述的H鏈，該H鏈具有作為CH的SEQIDNO:165的胺基酸序列的113~436位的胺基酸序列。(48)抗體，該抗體含有(46)所述的H鏈，該H鏈具有作為CH的SEQIDNO:IO的胺基酸序列的117-446位的胺基酸序列。(49)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:103的胺基酸序歹'J、作為CDR2的SEQIDNO:105的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:107的胺基酸序列。(50)抗體，該抗體含有(49)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:167的胺基酸序列的108~214位的胺基酸序列。(51)抗體，該抗體含有(49)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107-213位的胺基酸序列。(52)抗體，該抗體具有(46)所述的H鏈和(49)所述的L鏈。(53)抗體，該抗體具有(47)所述的H鏈和(50)所述的L鏈。(54)抗體，該抗體具有(48)所述的H鏈和(51)所述的L鏈。(55)抗體，該抗體是在(1)~(54)中任一項所述的抗體中有一個或多個胺基酸被置換、缺失、附加和/或插入而得到的抗體，所得抗體與(1)(54)中任一項所述的抗體具有同等活性。(56)抗體，該抗體與表位結合，所述表位與(1)(55)中任一項所述的抗體所結合的EREG蛋白質的表位相同。(57)(1)(56)中任一項所述的抗體的小分子抗體。上述(1)所述的具有下述CDR的H鏈中的VH可以例示具有SEQIDNO:44所述胺基酸序列(B3弁18抗體的VH序歹寸)的VH。CDR1:SEQIDNO:2的胺基酸序列(B3弁18(EP27)抗體的H鏈的CDR1序列)；CDR2:SEQIDNO:4的胺基酸序列(B3弁18(EP27)抗體的H鏈的CDR2序列)；以及CDR3:SEQIDNO:6的胺基酸序列(B3弁18(EP27)抗體的H鏈的CDR3序列)上述(4)所述的具有下述CDR的L鏈中的VL可以例示具有SEQIDNO:46所述胺基酸序列(B3弁18抗體的VL序歹'J)的VL。CDR1:SEQIDNO:12的胺基酸序列(B3弁18(EP27)抗體的L鏈的CDR1序列)；CDR2:SEQIDNO:14的胺基酸序列(B3針8(EP27)抗體的L鏈的CDR2序列)；以及CDR3:SEQIDNO:16的胺基酸序列(B3弁18(EP27)抗體的L鏈的CDR3序列)上述(10)所述的具有下述CDR的H鏈中的VH可以例示具有SEQIDNO:109所述胺基酸序列(C7(EP03)的VH序列)的VH。CDR1:SEQIDNO:49的胺基酸序列(C7(EP03)抗體的H鏈的CDR1序列)；CDR2:SEQIDNO:51的胺基酸序列(C7(EP03)抗體的H鏈的CDR2序列)；以及CDR3:SEQIDNO:53的胺基酸序列(C7(EP03)抗體的H鏈的CDR3序列)上述(13)所述的具有下述CDR的L鏈中的VL可以例示具有SEQIDNO:111所述胺基酸序列(C7(EP03)抗體的VL序列)的VL。CDR1:SEQIDNO:55的胺基酸序列(C7(EP03)抗體的L鏈的CDR1序列)；CDR2:SEQIDNO:57的胺基酸序列(C7(EP03)抗體的L鏈的CDR2序列)；以及CDR3:SEQIDNO:59的胺基酸序列(C7(EP03)抗體的L鏈的CDR3序列)上述(19)所述的具有下述CDR的H鏈中的VH可以例示具有SEQIDNO:113所述胺基酸序列(#15(EP08)的VH序列)的VH。CDR1:SEQIDNO:61的胺基酸序列(#15(EP08)抗體的H鏈的CDR1序列)；CDR2:SEQIDNO:63的胺基酸序列(#15(EP08)抗體的H鏈的CDR2序列)；以及CDR3:SEQIDNO:65的胺基酸序列(#15(EP08)抗體的H鏈的CDR3序列)上述(22)所述的具有下述CDR的L鏈中的VL可以例示具有SEQIDNO:115所述胺基酸序列(#15(EP08)抗體的VL序列)的VL。CDR1:SEQIDNO:67的胺基酸序列(#15(EP08)抗體的L鏈的CDR1序列)；CDR2:SEQIDNO:69的胺基酸序列(#15(EP08)抗體的L鏈的CDR2序列)；以及CDR3:SEQIDNO:71的胺基酸序列(#15(EP08)抗體的L鏈的CDR3序列)上述(28)所述的具有下述CDR的H鏈中的VH可以例示具有SEQIDNO:117所述胺基酸序列(B2弁30(EP20)的VH序列)的VH。CDR1:SEQIDNO:73的胺基酸序列(B2弁30(EP20)抗體的H鏈的CDR1序列)；CDR2:SEQIDNO:75的胺基酸序列(B2弁30(EP20)抗體的H鏈的CDR2序列)；以及CDR3:SEQIDNO:77的胺基酸序列(B2弁30(EP20)抗體的H鏈的CDR3序列)上述(31)所述的具有下述CDR的L鏈中的VL可以例示具有SEQIDNO:119所述胺基酸序列(B2弁30(EP20)抗體的VL序列)的VL。CDR1:SEQIDNO:79的胺基酸序列(B2弁30(EP20)抗體的L鏈的CDR1序列)；CDR2:SEQIDNO:81的胺基酸序列(B2弁30(EP20)抗體的L鏈的CDR2序列)；以及CDR3:SEQIDNO:83的胺基酸序列(B2弁30(EP20)抗體的L鏈的CDR3序列)上述(37)所述的具有下述CDR的H鏈中的VH可以例示具有SEQIDNO:121所述胺基酸序列(B3弁8(EP24)抗體的VH序列)的VH。CDR1:SEQIDNO:85的胺基酸序列(B3弁8(EP24)抗體的H鏈的CDR1序列)；CDR2:SEQIDNO:87的胺基酸序列(B3糾(EP24)抗體的H鏈的CDR2序列)；以及CDR3:SEQIDNO:89的胺基酸序列(B3弁8(EP24)抗體的H鏈的CDR3序列)上述(40)所述的具有下述CDR的L鏈中的VL可以例示具有SEQIDNO:123所述胺基酸序列(B3弁8(EP24)抗體的VL序列)的VL。CDR1:SEQIDNO:91的胺基酸序列(B3弁8(EP24)抗體的L鏈的CDR1序列)；CDR2:SEQIDNO:93的胺基酸序列(B3弁8(EP24)抗體的L鏈的CDR2序列)；以及CDR3:SEQIDNO:95的胺基酸序列(B3弁8(EP24)抗體的L鏈的CDR3序列)上述(46)所述的具有下述CDR的H鏈中的VH可以例示具有SEQIDNO:125所述胺基酸序列(B3弁41(EP29)抗體的VH序列)的VH。CDR1:SEQIDNO:97的胺基酸序列(B3弁41(EP29)抗體的H鏈的CDR1序列)；CDR2:SEQIDNO:99的胺基酸序列(B3弁41(EP29)抗體的H鏈的CDR2序列)；以及CDR3:SEQIDNO:101的胺基酸序列(B3弁41(EP29)抗體的H鏈的CDR3序列)上述(49)所述的具有下述CDR的L鏈中的VL可以例示具有SEQIDNO:127所述胺基酸序列(B3存41(EP29)抗體的VL序列)的VL。CDRl:SEQIDNO:103的胺基酸序列(B3糾1(EP29)抗體的L鏈的CDR1序列)；CDR2:SEQIDNO:105的胺基酸序列(B3//41(EP29)抗體的L鏈的CDR2序列)；以及CDR3:SEQIDNO:107的胺基酸序列(B3存41(EP29)抗體的L鏈的CDR3序列)上述(1)(57)所述的抗體不僅包括一價抗體，還包括二價以上的多價抗體。本發明的多價抗體包括具有完全相同的抗原結合部位的多價抗體、或者具有一部分或完全不同的抗原結合部位的多價抗體。上述(55)所述抗體的優選方式為CDR未被修飾的抗體。例如，上述(55)所述的抗體中，"在(l)所述的抗體中，有一個或多個胺基酸被置換、缺失、附加和/或插入而得到的、與(l)所述的抗體具有同等活性的抗體"的優選方式為"抗體，該抗體為與(l)所述的抗體具有同等活性、在(l)所述的抗體中有一個或多個胺基酸被置換、缺失、附加和/或插入而得到的抗體，其含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:2的氨基醯字列、作為CDR2的SEQIDNO:4的氨基餅列、以及作為CDR3的SEQIDNO:6的胺基酸序列"。上述(55)所述的抗體中，其它抗體的優選方式也可同樣描述。向多肽中導入突變的方法，是用於製備與某種多肽功能相同的多肽的、本領域技術人員所熟知的方法之一。例如，本領域技術人員可採用位點特異性誘變法(Hashimoto-Gotoh，T.等人.(1995)Gene152,271~275;Zoller，MJ,和Smith,M.(1983)MethodsEnzymol.100，468~500;Kramer,W.等人.(1984)NucleicAcidsRes.12，9441~9456;Kramer,W.和FritzHJ(1987)MethodsEnzymol.154，350367;Kunkel，TA(1985)ProcNatlAcidSciUSA.82，488492;Kunkel(1988)Methods.Enzymol.85，2763~2766)等，向本發明的抗體中導入適當的突變，從而可以製備與該抗體功能相同的抗體。另外，胺基酸的突變在自然界中也可發生。如上所述，在本發明抗體的胺基酸序列中，具有一個或多個胺基酸發生突變的胺基酸序列、且與該抗體功能相同的抗體也包含在本發明的抗體中。上述突變體中，突變的胺基酸數目通常為50個胺基酸以內，優選為30個胺基酸以內，進一步優選為10個胺基酸以內(例如5個胺基酸以內)。在突變的胺基酸殘基中，優選突變成保存有胺基酸側鏈的性質的其它胺基酸。例如，根據胺基酸側鏈的性質，確立以下分類疏水性胺基酸(A、I、L、M、F、P、W、Y、V);親水性胺基酸(R、D、N、C、E、Q、G、H、K、S、T);具有脂族支鏈的胺基酸(G、A、V、L、I、P);具有含羥基支鏈的胺基酸(S、T、Y);具有含硫原子支鏈的胺基酸(C、M);具有羧酸和含醯胺支鏈的胺基酸(D、N、E、Q);具有鹼性支鏈的胺基酸(R、K、H);以及具有含芳族支鏈的胺基酸(H、F、Y、W)(括號內均表示胺基酸的單一字母標記)。已知具有對某一胺基酸序列通過一個或多個胺基酸殘基的缺失、附加和/或用其它胺基酸的置換進行修飾的胺基酸序列的多肽可保持其生物學活性(Mark，D.F.等人.,Proc.Natl.Acid.Sci.USA(1984)81,5662~5666;Zoller,M.J.和Smith,M.,NucleicAcidResearch(1982)10,6487~6500;Wang，A.等人.，Science224,1431~1433;Dalbadie-McFarland,G.等人.，Proc.Natl.Acid.Sci.USA.(1982)79,64096413)。即，通常構成某多肽的胺基酸序列中，被分成各組的胺基酸在相互置換時，該多肽的活性得以保持的可能性高。本發明中，將上述胺基酸組的組內胺基酸間的置換稱作保守置換。本發明還提供與表位結合的抗體，所述表位與本發明所公開的抗EREG抗體所結合的表位相同。即，本發明涉及識別與上述(1)(57)中任一項的抗體所識別的表位相同的表位的抗體及其用途。上述抗體例如可以通過以下方法獲得。被檢抗體與某抗體共有表位，這可通過兩者對同一表位的竟爭來確認。抗體間的竟爭通過交叉阻斷測定等進行檢測。例如，竟爭ELISA測定為優選的交叉阻斷測定。具體而言，在交叉阻斷測定中，在候選的竟爭抗體的存在或非存在下，培養包被在微量板的孔上的EREG蛋白質，之後添加本發明的抗EREG抗體。與孔中的EREG蛋白質結合的本發明的抗EREG抗體的量與對相同表位竟爭性結合的候選竟爭抗體(被檢抗體)的結合能力間接相關。即，被檢抗體與相同表位的親和性越大，則本發明的抗EREG抗體與包被EREG蛋白質的孔的結合活性越降低。或者反之，被檢抗體與同一表位的親和性越大，則被檢抗體與包被EREG蛋白質的孔的結合活性越增加。關於與孔結合的抗體量，通過預先標記抗體，可以容易地測定。例如，生物素標記的抗體可通過使用抗生物素蛋白過氧化物酶綴合物和適當的底物來測定。將利用了過氧化物酶等酶標記的交叉阻斷測定特別地稱作竟爭ELISA測定。抗體可以用可^r測或可測定的其它標記物標記。具體而言，放射標記或焚光標記等是公知的。並且，當被;險抗體具有來自與本發明的抗EREG抗體不同種的恆定區時，還可以通過識別任一恆定區的標記抗體來測定與孔結合的任一種抗體。或者，即使是來自同種的抗體，當類別(class)不同時，可以利用識別各類別的抗體測定與孔結合的抗體。與在候選竟爭抗體非存在下實施的對照試驗中得到的結合活性相比，候選抗體可以阻斷至少20%、優選至少20~50%、進一步優選至少50。/。的抗EREG抗體的結合時，該候選竟爭抗體是與本發明的抗EREG抗體實質上結合在同一表位上、或者是竟爭結合在同一表位上的抗體。結合在與抗EREG抗體所結合的表位相同的表位上的抗體例如有上述(57)所述的抗體，但並不限於此。如上所述，上述(1)(57)所述的抗體中不僅包括一價抗體，還包括多價抗體。本發明的多價抗體中，包括具有完全相同的抗原結合部位的多價抗體、或者具有部分或完全不同的抗原結合部位的多價抗體。作為抗體修飾物，還可以使用與聚乙二醇(PEG)等各種分子結合的抗體。而且，抗體上還可以結合化療藥物、毒性肽或放射性化學物質等。上述抗體修飾物(以下稱為抗體綴合物)可以通過對所得抗體施行化學修飾而獲得。尚需說明的是，抗體的修飾方法在該領域中已經確立。如後所述，還可以以雙特異性抗體(bispecificantibody)等分子型的形式獲取，所述雙特異性抗體通過基因重組技術設計成不僅識別EREG蛋白質、還識別化療藥物、毒性肽或放射性化學物質等的形式。本發明中的"抗體"也包括這些抗體。與抗EREG抗體結合、發揮細胞毒活性作用的化療藥物可以例示如下述化療藥物阿扎立平、阿那曲唑、5-氮雜胞苷、博來黴素、硼替佐米(Bortezomib)、苔蘚抑素-1、白消安、喜樹鹼、10-羥基喜樹鹼、卡莫司汀、西樂葆、苯丁酸氮芥、順鉑、伊立替康、卡鉑、克拉屈濱、環磷醯胺、阿糖胞苷、達卡巴。秦、多西他賽、放線菌素D、道諾黴素葡萄糖醛酸苷、柔紅黴素、地塞米松、己烯雌酚、多柔比星、多柔比星葡萄糖醛酸苷、表柔比星、炔雌醇、雌莫司汀、依託泊苷、依託泊苷葡萄糖醛酸苷、氟尿苷、氟達拉濱、氟他胺、氟尿嘧啶、氟曱睪酮、吉西他濱、己酸羥孕酮、羥基尿、伊達比星、異環磷醯胺、亞葉酸、洛莫司汀、氮芥、醋酸曱羥孕酮、醋酸曱地孕酮、美法侖、巰嘌呤、曱氨蝶呤、米託蒽醌、普卡黴素、絲裂黴素、米託坦、丁酸苯酯、潑尼松、丙卡巴肼、紫杉醇、噴司他丁、司莫司汀、鏈佐星、他莫昔芬、紫杉烷類、泰素、丙酸睪酮、沙利度胺、硫鳥嘌呤、塞替派、替尼泊苷、託泊替康、烏拉莫司汀、長春鹼、長春瑞濱、長春新鹼。本發明中，優選的化療藥物為小分子化療藥物。小分子化療藥物與抗體結合後，其幹涉抗體功能的可能性也小。本發明中，小分子化療藥物通常具有100-2000、優選200-1000的分子量。此處例示的化療藥物均為小分子化療藥物。本發明中的這些化療藥物包括在機體內轉化成活性化療藥物的前體藥物。前體藥物的活化可以是酶轉化，也可以是非酶轉化。另外，還可以用蓖麻毒蛋白、相思豆毒蛋白、核糖核酸酶、豹蛙酶(Onconase)、DNaseI、葡萄球菌腸毒素-A、美洲商陸抗病毒蛋白、白樹毒素、白喉毒素、假單胞菌外毒素、假單胞菌內毒素、L-天冬醯胺酶、PEGL-天冬醯胺酶等毒性肽修飾抗體。在另一方式中，將一種或兩種以上的低分子化療藥物與毒性肽分別組合，可用於抗體的修飾。抗EREG抗體與上述小分子化療藥物的結合可以利用共價一睫或非共價鍵。結合有上述化療藥物的抗體的製備方法是公知的。並且，蛋白質性的藥物或毒素可以通過基因工程的方法與抗體結合。具體而言，例如使編碼上述毒性肽的DNA與編碼抗EREG抗體的DNA進行符合讀框的融合，之後整合到表達載體中，可以構建重組栽體。將該載體導入適當的宿主細胞中，培養由此得到的轉化細胞，使整合的DNA表達，可以以融合蛋白的形式獲取結合有毒性肽的抗EREG抗體。以融合蛋白的形式得到抗體時，通常將蛋白質性的藥物或毒素配置在抗體的C末端側。還可以使肽接頭介於抗體與蛋白質性的藥物或毒素之間。並且，本發明中使用的抗體可以是雙特異性抗體。雙特異性抗體是指，在同一抗體分子內具有識別不同表位的可變區的抗體。本發明中，雙特異性抗體可以具有識別EREG分子上的不同表位的抗原結合部位。這種雙特異性抗體相對於1分子的EREG可以結合2分子的抗體分子。其結果，有望獲得更強效的細胞毒作用。或者，還可以形成其中一個抗原結合部位識別EREG、另一個抗原結合部位識別細胞毒性物質的雙特異性抗體。細胞毒性物質具體包括化療藥物、毒性肽或放射性化學物質等。這種雙特異性抗體與表達EREG的細胞結合，另一方面捕獲細胞毒性物質。其結果，可以使細胞毒性物質直接作用於表達EREG的細胞。即，利用識別細胞毒性物質的雙特異性抗體，可以特異性阻礙腫瘤細胞，抑制腫瘤細胞的增殖。本發明中，還可以組合識別EREG以外的抗原的雙特異性抗體。例如，可以組合識別非EREG抗原的雙特異性抗體，所述抗原與EREG一樣在作為靶的癌細胞的細胞表面特異性表達。用於製備雙特異性抗體的方法是公知的。例如，使識別抗原不同的兩種抗體結合，可以製作雙特異性抗體。進行結合的抗體可以是各自具有H鏈和L鏈的1/2分子，也可以是僅包含H鏈的1/4分子。或者，使產生不同的單克隆抗體的雜交瘤融合，也可以製備產生雙特異性抗體的融合細胞。並且，利用基因工程方法可以製備雙特異性抗體。如上構建的抗體基因，可以利用公知的方法使之表達並獲得。當為哺乳類細胞時，可以使polyA信號與常用的有效啟動子、要表達的抗體基因、其3，側下遊進行功能性結合來表達。例如，啟動子/增強子可以是人巨細胞病毒早期啟動子/增強子。此外，可以將病毒啟動子/增強子、或人延伸因子la(HEFla)等來自哺乳類細胞的啟動子/增強子等用於抗體表達。可以利用啟動子/增強子的病毒具體有逆轉錄病毒、多瘤病毒、腺病毒、猿猴病毒40(SV40)等。使用SV40啟動子/增強子時，可以採用Mulligan等人的方法(Nature(1979)277，108)。另夕卜，利用Mizushima等人的方法(NucleicAcidsRes.(19卯)18,5322),可以容易地將HEF1a啟動子/增強子用於目標基因的表達。當為大腸桿菌時，使常用的有效啟動子、用於抗體分泌的信號序列和要表達的抗體基因功能性連接，可以表達該基因。啟動子例如有lacZ啟動子、araB啟動子。使用lacZ啟動子時，可以採用Ward等人的方法(Nature(1989)341，544~546;FASEBJ.(1992)6，24222427)。或者，利用Better等人的方法(Science(1988)240,1041~1043)，可以將araB啟動子用於目標基因的表達。用於抗體分泌的信號序列在大腸桿菌的周質中產生時，可以使用pelB信號序列(Lei,S.P.等人.,J.Bacterio1.(1987)169,4379)。接著，分離在周質中產生的抗體，之後通過使用尿素的胍鹽酸鹽等蛋白質改性劑，可重摺疊抗體的結構，使其具有所需的結合活性。插入到表達載體中的複製起點可以使用來自SV40、多瘤病毒、腺病毒、牛乳頭瘤病毒(BPV)等的複製起點。並且，為了在宿主細胞體系中擴增基因拷貝數，可以向表達載體中插入選擇標誌物。具體可以使用下述選擇標誌物氨基糖苷磷酸轉移酶(APH)基因；胸腺嗜啶核普激酶(TK)基因；大腸桿菌黃噤呤-鳥噤呤磷酸核糖轉移酶(Ecogpt)基因；以及二氬葉酸還原酶(dhfr)基因等。為了製備本發明所使用的抗體，可以使用任意的表達系統、例如真核細胞或原核細胞系統。真核細胞例如有建立的哺乳類細胞系、昆蟲細胞系、真絲狀菌細胞和酵母細胞等動物細胞等。原核細胞例如有大腸桿菌細胞等細菌細胞。優選本發明中使用的抗體用哺乳類細胞來表達。哺乳類細胞可以使用例如CHO、COS、骨髓瘤、BHK、Vero、Hela細胞等。接下來，將轉化的宿主細胞在體外或體內進行培養，產生目標抗體。宿主細胞的培養可以按照公知的方法進行。例如，培養液可以使用DMEM、MEM、RPMI1640、IMDM，還可以結合使用胎牛血清(FCS)等血清補液。如上表達並產生的抗體，可以通過將常規蛋白質純化中使用的公74知方法單獨使用或適當組合來進行純化。例如，可以通過適當選擇並組合蛋白A柱等親和柱、色語柱、濾器、超濾、鹽析、透析等，來分離、純4b4元體(AntibodiesALaboratoryManual.EdHarlow,DavidLane,ColdSpringHarborLaboratory,1988)。測定抗體的抗原結合活性(AntibodiesALaboratoryManual.EdHarlow,DavidLane,ColdSpringHarborLaboratory,1988)時，可以採用公知的方法。例如可以使用ELISA(酶聯免疫吸附測定法)、EIA(酶聯免疫測定法)、RIA(放射免疫測定法)或螢光免疫法等。本發明所使用的抗體可以是糖鏈被修飾的抗體。已知通過修飾抗體的糖鏈，可以增強抗體的細胞毒活性。作為糖鏈被修飾的抗體，例如以下抗體是公知的。進行糖基化修飾的抗體(W099/54342等)；附加在糖鏈上的巖藻糖缺失的抗體(W000/61739、WO02/31140等)；具有具等分GlcNAc的糖鏈的抗體(W002/79255等)等。本發明所使用的抗體優選為具有細胞毒活性的抗體。本發明中的細胞毒活性例如有抗體依賴性細胞介導的細胞毒(ADCC)活性、補體依賴性細胞毒(CDC)活性等。本發明中，CDC活性是指補體系統產生的細胞毒活性。而ADCC活性是指，特異性抗體附著於靶細胞的細胞表面抗原上時，保有Fcy受體的細胞(免疫細胞等)經由Fey受體與其Fc部位結合，給耙細胞帶來阻礙的活性。抗EREG抗體是否具有ADCC活性、或者是否具有CDC活性，這可以利用公知的方法進行測定(例如CurrentprotocolsinImmunology,Chapter7.Immunologicstudiesinhumans,Editor,JohnE,Coligan等人.，JohnWiley&Sons,Inc.,(1993)等)。具體而言，首先，製備效應細胞、補體溶液、靶細胞。(1)效應細胞的製備從CBA/N小鼠等中摘出脾臟，在RPMI1640培養基(Invitrogen公司製備)中分離脾細胞。用含有10。/o胎牛血清(FBS、HyClone公司製備)的相同培養基清洗，之後將細胞濃度調整至5xl(^個細胞/mL，即可製備效應細胞。(2)補體溶液的製備將幼兔補體(BabyRabbitComplement)(CEDARLANE公司製備)用含有10%FBS的培養基(Invitrogen公司製備)稀釋10倍，可以製備補體溶液。(3)靶細胞的製備將表達EREG蛋白質的細胞與0.2mCi的51Cr-鉻酸鈉(GEHealthcareBio-Sciences公司製備)一起在含有10%FBS的DMEM培養基中、在37。C下培養1小時，從而可以放射性標記該靶細胞。表達EREG蛋白質的細胞可以使用以編碼EREG蛋白質的基因轉化的細胞、原發性大腸癌、轉移性大腸癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌、腎癌細胞、大腸癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、胰l^癌細胞等。》文射性標記後，將細胞用含有10%FBS的RPMI1640培養基清洗3次，將細胞濃度調整至2xlS個細胞/mL，從而可以製備該耙細胞。ADCC活性或CDC活性可以利用下述方法測定。測定ADCC活性時，在96孔U底板(BectonDickinson公司製造)中分別加入50靶細胞和抗EREG抗體，在冰上反應15分鐘。之後，加入100^L效應細胞，在二氧化碳培養箱內培養4小時。抗體的終濃度為0或10〃g/mL。培養後，回收100〃l上清，用y計數儀(COBRAIIAUTO-GAMMA,型號D5005，PackardInstrumentCompany公司製造)測定放射活性。細胞毒活性(％)可以使用所得值、根據算式(A-C)/(B-C)x100來計算。A表示各試樣的放射活性(cpm)，B表示加入了1%NP-40(nacalaitesque公司製備)的試樣的放射活性(cpm)，C表示只含耙細胞的試樣的放射活性(cpm)。另一方面，測定CDC活性時，向96孔平底板(BectonDickinson公司製造)中分別加入50耙細胞和抗EREG抗體，在冰上反應15分鐘。之後，加入100^L補體溶液，在二氧化石灰培養箱內培養4小時。抗體的終濃度為0或3pg/mL。培養後，回收100/zL上清，用y計數儀測定放射活性。細胞毒活性可以和ADCC活性的測定同樣計算。而當測定抗體綴合物產生的細胞毒活性時，向96孔平底板(BectonDickinson公司製造)中分別加入50〃L靶細胞和抗EREG抗體綴合物，在冰上反應15分鐘。在二氧化碳培養箱內培養1~4小時。使抗體的終濃度達到0或3^g/mL。培養後，回收100^L上清，用y計數儀測定放射活性。細胞毒活性可以和ADCC活性的測定同樣計算。本發明的具有細胞毒活性的抗體，進一步優選為具有中和活性的抗體。通常，中和活性是指，病毒或毒素等對細胞具有生物學活性的配體抑制該生物學活性的活性。即，具有中和活性的物質是指，與該配體或該配體所結合的受體結合、阻礙該配體與受體結合的物質。利用中和活性阻礙與配體的結合的受體，無法發揮該受體介導的生物學活性。具有這種中和活性的抗體通常被稱作中和抗體。該中和活性可以在作為對象的配體的存在下，通過在評價其中和活性的被檢物質的存在或非存在下的條件之間比較該生物學活性來測定。當為被認為是本發明所涉及的EREG的主要受體的EGF受體時，通過配體的結合形成二聚物，將存在於細胞內的自身結構域一酪氨酸激酶活化。被活化的酪氨酸激酶通過自身磷酸化，形成含有磷酸化酪氨酸的肽，使各種信號傳遞的附屬分子與上述肽締合。上述肽主要是PLCY(磷脂酶C力、Sch、Grb2等。上述附屬分子中，前兩者進一步通過EGF受體的酪氨酸激酶進行磷酸化。來自EGF受體的信號傳遞中的主要途徑按照Shc、Grb2、Sos、Ras、Raf/MAPK激酶/MAP激酶的順序傳遞磷酸化。認為還存在旁路途徑一從PLCy到PKC的途徑。由於上述細胞內的信號級聯在每一細胞種中都不同，所以每種目標靶細胞可以設定適當的靶分子，並不限於上述因子。機體內信號活化的測定試劑盒可以適當使用市售品(例如蛋白激酶C活性測定系統(GEHealthcareBio-Sciences抹式會社)等)。另外，以對存在於機體內信號級聯下遊的靶基因的轉錄誘導作用為指標，也可檢測機體內信號的活化。轉錄活性的變化可以根據報告基因測定的原理進行檢測。具體而言，將GFP(綠色焚光蛋白)或螢光素酶等報告基因配置在靶基因的轉錄因子或啟動子區的下遊，通過測定其報告基因活性，可以以報告基因活性的形式測定轉錄活性的變化。並且，由於EGF受體通常起到促進細胞增殖的作用，所以通過測定耙細胞的增殖活性，可以評價機體內信號傳遞的活化。本發明中，通過評價後者的細胞增殖活性，來評價本發明的中和抗體的中和活性，但並不限於本方法，對於所選擇的每一種靶細胞，可以適當釆用上述列舉的方法進行評價。即，例如通過測定下述細胞增殖活性，可以評價或測定抗EREG抗體的中和活性。例如採用下述方法以添加在培養基中的卩H]標記的胸苷向活細胞中的攝入作為DNA複製能力的指標進行測定的方法。更簡便的方法是在顯微鏡下計測將臺盼藍等色素排除到細胞外的能力的色素排除法或MTT法。後者利用的是活細胞具有將四唑鹽MTT(3-(4,5-二曱基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽)轉化成藍色的曱臘(formazan)產物的能力。更具體而言，向被檢細胞的培養液中添加被檢抗體，經過一定時間後向培養液中添加MTT溶液，靜置一定時間，使MTT攝入到細胞中。其結果，黃色化合物MTT通過細胞中線粒體內的琥珀酸脫氬酶變換為藍色化合物。溶解該藍色產物使其顯色，之後測定其吸光度，以此作為活細胞數的指標。除MTT外，MTS、XTT、WST-1、WST-8等試劑也有銷售(nacalaitesque等)，可適當使用。此外，以細胞的ATP或細胞培養物的阻抗(impedance)為指標，評價細胞增殖活性的方法也是公知的。測定活性抗體作為對照抗體，與抗EREG抗體同樣地加以^使用，抗EREG抗體顯示出較對照抗體強的中和活性，由此可以判定活性。增殖被抗EREG抗體抑制的細胞只要是表達EREG蛋白質的細胞即可，沒有特別限定。優選的EREG表達細胞例如為癌細胞。具體而言，來自大腸癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌、腎癌的細胞適合作為本發明中的EREG表達細胞。根據本發明，可以得到對上述癌症的原發病灶和轉移病灶均有效的細胞增殖抑制效果。進一步優選的癌細胞為原發性大腸癌、轉移性大腸癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌、腎癌。因此，抗EREG抗體可用於起因於細胞增殖的疾病、例如大腸癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌、腎癌等的治療和預防。上述癌症無論是原發病灶還是轉移病灶，均可成為治療或預防的對象。為了治療和/或預防原發性大腸癌、轉移性大腸癌、胰腺癌，更優選使用抗EREG抗體。並且，在上述癌症中，EREG依賴性增殖的癌症優選作為本發明的治療和/或預防的對象。本發明還提供多核苷酸，所述多核苷酸是編碼本發明抗體的多核普酸、或者與該多核苷酸在嚴謹條件下雜交且編碼與本發明抗體具有同等活性的抗體的多核苷酸。另外，本發明提供含有上述多核苷酸的栽體、含有該載體的轉化體(包括轉化細胞)。本發明的多核苷酸只要編碼本發明的抗體即可，沒有特別限定，可以是包含多個脫氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)等的鹼基或鹼基對的聚合物。本發明的多核苷酸可以含有天然以外的鹼基。本發明的多核苷酸可以在利用基因工程方法表達抗體時使用。還可以在選擇與本發明抗體具有同等功能的抗體時作為探針使用。即，使用編碼本發明抗體的多核苷酸或其一部分作為探針，利用雜交、基因擴增技術(例如PCR)等技術，可以獲得與該多核苷酸在嚴謹條件下雜交、且編碼與本發明抗體具有同等活性的抗體的DNA。這種DNA也包括在本發明的多核苷酸中。雜交技術(Sambrook,J等人.，MolecularCloning2nded.,9.47~9.58，ColdSpringHarborLab.Press,1989)為本領域技術人員所熟知。雜交條件例如有低嚴謹條件。低嚴謹條件是指，在雜交後的清洗中，例如為42°C、O.lxSSC、0.1%SDS的條件，優選為50°C、O.lxSSC、0.1。/。SDS的條件。更優選的雜交條件例如有高嚴謹條件。高嚴謹條件例如是65。C、5xSSC和0.1。/。SDS的條件。在這些條件下，可以期待如同提高溫度一樣，有效獲得具有高同源性的多核苷酸。但是，作為影響雜交嚴謹度的要素，要考慮溫度或鹽濃度等多個要素，本領域技術人員通過適當選擇這些要素，可以實現同樣的嚴謹度。利用上述雜交技術或基因擴增技術得到的多核苷酸所編碼的、與本發明抗體功能同等的抗體，通常在胺基酸序列方面與這些抗體具有高度同源性。本發明的抗體也包括與本發明抗體功能相同、且與該抗體的胺基酸序列具有高同源性的抗體。高同源性是指，在胺基酸水平通常具有至少50%以上的同一性、優選75%以上的同一性、進一步優選85%以上的同一性、更進一步優選95%以上的同一性。確定多肽的同源性時，可以遵照文獻(Wilbur，W丄和Lipman,D丄Proc.Natl.Sci.USA(1983)80,726730)所述的算法。藥物組合物從另一角度來看，本發明提供含有與EREG蛋白質結合的抗體作為有效成分的藥物組合物。此外，本發明涉及含有與EREG蛋白質結合的抗體作為有效成分的細胞增殖抑制劑、特別是抗癌藥。優選將本發明的細胞增殖抑制劑和抗癌藥給予罹患癌症的對象或有可能罹患癌症的對象。本發明中，含有與EREG蛋白質結合的抗體作為有效成分的細胞增殖抑制劑還可描述為抑制細胞增殖的方法，該方法包括將與EREG蛋白質結合的抗體給予對象的步驟；或者，與EREG蛋白質結合的抗體在製造細胞增殖抑制劑中的應用。本發明中，含有與EREG蛋白質結合的抗體作為有效成分的抗癌藥還可描述為預防或治療癌症的方法，該方法包括將與EREG蛋白質結合的抗體給予對象的步驟；或者，與EREG蛋白質結合的抗體在製造抗癌藥中的應用。本發明中，"含有與EREG結合的抗體作為有效成分"是指，含有抗EREG抗體作為主要活性成分，並不限定抗EREG抗體的含有率。本發明的藥物組合物(例如細胞增殖抑制劑、抗癌藥，下同)中所含的抗體只要與EREG蛋白質結合即可，沒有特別限定，可以例示本說明書中所述的抗體。本發明的藥物組合物可以通過口服、胃腸外給藥等任一種途徑給予患者。優選為胃腸外給藥。所述給藥方法具體有注射給藥、經鼻給藥、經肺給藥、經皮給藥等。注射給藥的例子有例如可以通過靜脈內注射、肌內注射、腹腔內注射、皮下注射等全身或局部給予本發明的藥物組合物。還可以根據患者的年齡、症狀選擇適當的給藥方法。給藥量例如可以在每次、每kg體重0.0001mg~1000mg的範圍內選擇。或者，例如可以在每位患者0.001mg~100000mg/個體的範圍內選擇給藥量。但本發明的藥物組合物並不限於上述給藥量。本發明的藥物組合物可以按照常規方法製成製劑(例如Remington'sPharmaceuticalScience,latestedition,MarkPublishingCompany,Easton，U.S.A)，可以同時含有藥學上可接受的載體或添加劑。例如有表面活性劑、賦形劑、著色劑、香料、保存劑、穩定劑、緩沖劑、懸浮劑、等滲劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、流動性促進劑、矯味劑等。並不限於這些，可以進一步適當使用其它常用的載體。載體具體有輕質矽酸酐、乳糖、結晶纖維素、甘露糖醇、澱粉、羧曱纖維素釣、羧曱纖維素鈉、羥丙基纖維素、羥丙基曱基纖維素、聚乙烯基縮醛二乙基氨基乙酸酯、聚乙烯吡咯烷酮、明膠、中鏈脂肪酸三甘油酯、聚氧乙烯氫化蓖麻油60、蔗糖、羧曱基纖維素、玉米澱粉、無機鹽類等。本發明還提供通過使EREG表達細胞和與EREG蛋白質結合的抗體接觸，而在EREG表達細胞中引發毒性的方法或抑制細胞增殖的方法。即，本發明包括以下方式。—在EREG表達細胞中引發細胞毒的方法，該方法包括使表達EREG蛋白質的細胞和與EREG蛋白質結合的抗體接觸的步驟。"中制EREG表達細胞增殖的方法，該方法包括使表達EREG蛋白質的細胞和與EREG蛋白質結合的抗體接觸的步驟。一上述方法，其中，與EREG蛋白質結合的抗體為具有細胞毒活性的抗體。一上述方法，其中，與EREG蛋白質結合的抗體為具有中和活性的抗體。一上述方法，其中，與EREG蛋白質結合的抗體為以下(1)(57)中任一項所述的抗體。(1)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:2的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:4的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:6的胺基酸序列。(2)抗體，該抗體含有(l)所述的H鏈，該H鏈具有作為CH的SEQIDNO:8的胺基酸序列的117~452位的胺基酸序列。(3)抗體，該抗體含有(l)所述的H鏈，該H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117446位的胺基酸序列。(4)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:12的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:14的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:16的胺基酸序列。(5)抗體，該抗體含有(4)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:18的氨基齡列的107~213位的氨基,列。(6)抗體，該抗體含有(4)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107~213位的胺基酸序列。(7)抗體，該抗體含有(l)所述的H鏈和(4)所述的L鏈。(8)抗體，該抗體含有(2)所述的H鏈和(5)所述的L鏈。(9)抗體，該抗體含有(3)所述的H鏈和(6)所述的L鏈。(10)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:49的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:51的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:53的胺基酸序列。(11)抗體，該抗體含有(10)所述的H鏈，該H鏈具有作為CH的SEQIDNO:149的胺基酸序列的118~441位的胺基酸序列。(12)抗體，該抗體含有(10)所述的H鏈，該H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117-446位的胺基酸序列。(13)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:55的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:57的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:59的胺基酸序列。(14)抗體，該抗體含有(13)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:151的胺基酸序列的108214位的胺基酸序列。(15)抗體，該抗體含有(13)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107~213位的胺基酸序列。(16)抗體，該抗體含有(10)所述的H鏈和(l"所述的L鏈。(17)抗體，該抗體含有(11)所述的H鏈和(14)所述的L鏈。(18)抗體，該抗體含有(12)所述的H鏈和(15)所述的L鏈。(19)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:61的氨基斷列、作為CDR2的SEQIDNO:63的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:65的胺基酸序列。(20)抗體，該抗體含有(19)所述的H鏈，該H鏈具有作為CH的SEQIDNO:153的胺基酸序列的116~439位的胺基酸序列。(21)抗體，該抗體含有(19)所述的H鏈，該H鏈具有作為CH的SEQIDNO:IO的胺基酸序列的117-446位的胺基酸序列。(22)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:67的氨基斷列、作為CDR2的SEQIDNO:69的氨基麟列、以及作為CDR3的SEQIDNO:71的胺基酸序列。(23)抗體，該抗體含有(22)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:155的胺基酸序列的108~214位的胺基酸序列。(24)抗體，該抗體含有(22)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107213位的胺基酸序列。(25)抗體，該抗體具有(19)所述的H鏈和(22)所述的L鏈。(26)抗體，該抗體具有(20)所述的H鏈和(23)所述的L鏈。(27)抗體，該抗體具有(21)所述的H鏈和(24)所述的L鏈。(28)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:73的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:75的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:77的胺基酸序列。(29)抗體，該抗體含有(28)所述的H鏈，該H鏈具有作為CH的SEQIDNO:157的胺基酸序列的119~442位的胺基酸序列。(30)抗體，該抗體含有(28)所述的H鏈，該H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117~446位的胺基酸序列。(31)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:79的氨基^列、作為CDR2的SEQIDNO:81的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:83的胺基酸序列。(32)抗體，該抗體含有(31)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:159的胺基酸序列的109215位的胺基酸序列。(33)抗體，該抗體含有(31)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107-213位的胺基酸序列。(34)抗體，該抗體含有(28)所述的H鏈和(31)所述的L鏈。(35)抗體，該抗體含有(29)所述的H鏈和(32)所述的L鏈。(36)抗體，該抗體含有(30)所述的H鏈和(33)所述的L鏈。(37)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:85的氨基,列、作為CDR2的SEQIDNO:87的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:89的胺基酸序列。(38)抗體，該抗體含有(37)所述的H鏈，該H鏈具有作為CH的SEQIDNO:161的胺基酸序列的117~440位的胺基酸序列。(39)抗體，該抗體含有(37)所述的H鏈，該H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117-446位的胺基酸序列。(40)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:91的氨基齡列、作為CDR2的SEQIDNO:93的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:95的胺基酸序列。(41)抗體，該抗體含有(40)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:163的胺基酸序列的108~214位的胺基酸序列。(42)抗體，該抗體含有(40)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107-213位的胺基酸序列。(43)抗體，該抗體具有(37)所述的H鏈和(40)所述的L鏈。(44)抗體，該抗體具有(38)所述的H鏈和(41)所述的L鏈。(45)抗體，該抗體具有(39)所述的H鏈和(42)所述的L鏈。(46)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:97的氨基酉拼列、作為CDR2的SEQIDNO:99的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:101的胺基酸序列。(47)抗體，該抗體含有(46)所述的H鏈，該H鏈具有作為CH的SEQIDNO:165的胺基酸序列的113-436位的胺基酸序列。(48)抗體，該抗體含有(46)所述的H鏈，該H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117446位的胺基酸序列。(49)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:103的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:105的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:107的胺基酸序列。(50)抗體，該抗體含有(49)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:167的胺基酸序列的108-214位的胺基酸序列。(51)抗體，該抗體含有(49)所述的L鏈，該L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107-213位的胺基酸序列。(52)抗體，該抗體具有(46)所述的H鏈和(49)所述的L鏈。(53)抗體，該抗體具有(47)所述的H鏈和(50)所述的L鏈。(54)抗體，該抗體具有(48)所述的H鏈和(51)所述的L鏈。(55)抗體，該抗體是在(1)(54)中任一項所述的抗體中有一個或多個胺基酸被置換、缺失、附加和/或插入而得到的抗體，所得抗體與(1)~(54)中任一項所述的抗體具有同等活性。(56)抗體，該抗體與表位結合，所述表位與(1)(55)中任一項所述的抗體所結合的EREG蛋白質的表位相同。(57)(1)(56)中任一項所述的抗體的小分子抗體。一上述方法，其中，表達EREG蛋白質的細胞為癌細胞。如上所述，上述(1)(57)所述的抗體中，不僅包括一價抗體，還包括二價以上的多價抗體。本發明的多價抗體中，包括具有完全相同的抗原結合部位的多價抗體、或具有部分或完全不同的抗原結合部位的多價抗體。如上所述，與EREG蛋白質結合的抗體作為本發明的細胞增殖抑制劑中所含的與EREG蛋白質結合的抗體。抗EREG抗體所結合的細胞只要是表達EREG的細胞即可，沒有特別限定。本發明中優選的EREG表達細胞為癌細胞。更優選為大腸癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌和腎癌的細胞。本發明的方法對上述癌症的原發病灶和轉移病灶均適用。進一步優選的癌細胞為原發性大腸癌、轉移性大腸癌和胰腺癌的細胞。本發明中，"接觸，，例如可以通過向在試管內培養的EREG表達細胞的培養液中添加抗體來進行。這種情況下，所添加的抗體的形狀可以適當使用溶液或通過冷凍乾燥等得到的固體等形狀。以水溶液形式添加時，可以是純粹地只含有抗體的水溶液，也可以是含有例如上述表面活性劑、賦形劑、著色劑、香料、保存劑、穩定劑、緩沖劑、懸浮劑、等滲劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、流動性促進劑、矯味劑等的溶液。對添加濃度沒有特別限定，但培養液中的最終濃度優選為1pg/mL1g/mL的範圍，更優選為1ng/mL~lmg/mL,進一步優選使用1^g/mL1mg/mL。在另一方式中，本發明中的"接觸"還可以通過對將EREG表達細胞移植到體內的非人動物、或具有內源性表達EREG的癌細胞的動物進行給藥來進行。給藥方法可以通過口服、胃腸外給藥中的任一種途徑來實施。特別優選為胃腸外給藥的給藥方法，所述給藥方法具體有注射給藥、經鼻給藥、經肺給藥、經皮給藥等。注射給藥的例子例如有通過靜脈內注射、肌內注射、腹腔內注射、皮下注射等全身或局部給予本發明的藥物組合物、細胞增殖抑制劑和抗癌藥。此外，可以根據受試動物的年齡、症狀選擇適當的給藥方法。以水溶液形式給藥時，可以是純粹地只含有抗體的水溶液，也可以是含有例如上述表面活性劑、賦形劑、著色劑、香料、保存劑、穩定劑、緩沖劑、懸浮劑、等滲劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、流動性促進劑、矯味劑等的溶液。給藥量例如可以在每次、每kg體重0.0001mg-lOOOmg/的範圍內選擇。或者，例如可以在每位患者0.001mg100000mg/個體的範圍內選擇給藥量。但本發明的抗體給藥量並不限於上述給藥量。作為評價或測定通過抗EREG抗體的接觸在EREG表達細胞中引發的細胞毒的方法，優選採用以下方法。在試管內評價或測定該細胞毒活性的方法有上述抗體依賴性細胞介導的細胞毒(ADCC)活性、補體依賴性細胞毒(CDC)活性等的測定方法。抗EREG抗體是否具有ADCC活性、或者是否具有CDC活性，這可以按照公知的方法進行觀寸定(例i口CurrentprotocolsinImmunology,Chapter7.Immunologicstudiesinhumans，Editor,JohnE,Coligan等人,JohnWiley&Sons,Inc.:(1993)等)。測定活性時，以具有與抗EREG抗體相同的同工型、但不具有該細胞毒活性的結合抗體作為對照抗體，與抗EREG抗體同樣地加以使用，根據抗EREG抗體顯示出較對照抗體強的細胞毒活性，可以判定活性。抗體的同工型由該抗體的胺基酸序列的H鏈恆定區的序列來規定。在機體內，根據產生抗體的B細胞成熟時發生的染色體上的基因重組所產生的類別轉換，最終決定抗體的同工型。同工型的不同反映在抗體的生理、病理性功能的不同。具體而言，例如已知細胞毒活性的強度和抗原的表達量同時受抗體的同工型影響。因此，測定上述細胞毒活性時，用作對照的抗體優選使用與被檢抗體相同的同工型。此外，為了在機體內評價或測定細胞毒活性，例如將表達EREG的癌細胞移植到非人被檢動物的皮內或皮下，之後從當天或第二天起每天或間隔數天靜脈或腹腔內給予被檢抗體。通過每天測定腫瘤的大小，可以確定細胞毒活性。與試管內的評價同樣，給予具有相同同工型的對照抗體，根據抗EREG抗體給藥組的腫瘤大小明顯小於對照抗體給藥組的腫瘤大小，可以判定細胞毒活性。使用小鼠作為非人被檢動物時，可適當使用遺傳性缺失胸腺從而缺失其T淋巴細胞的功能的棵小鼠(nu/nu)。通過使用該小鼠，在評價、測定給予的抗體所產生的細胞毒活性時，可以排除被檢動物中T淋巴細胞的幹預。作為評價或測定由抗EREG抗體的接觸產生的對EREG表達細胞增殖的抑制效果的方法，可以適當使用與上述中和活性測定方法相同的方法。作為在機體內評價或測定細胞增殖抑制活性的方法，可適當使用與上述在機體內評價或測定細胞毒活性的方法相同的方法。篩選方法由本發明人等明確細胞分泌的EREG誘導EREG依賴性增殖的細胞的細胞增殖。還確認到EREG在癌細胞中特異性表達尤進。因此，通過抑制EREG表達細胞中EREG的表達水平，可以治療癌症。即，根據本發明，表明了抑制癌細胞的EREG表達水平的化合物可作為癌症治療藥的候選化合物。基於上述認識，本發明提供癌症治療藥的候選化合物的篩選方法，該方法包括以下步驟(1)使被;險化合物與EREG表達細胞接觸的步驟；(2)測定EREG表達細胞中EREG的表達水平的步驟；以及(3)選擇與對照相比使EREG的表達水平降低的化合物作為癌症治療藥的候選化合物的步驟。本發明中，EREG表達細胞例如可以使用表達EREG的癌細胞。具體而言，例如在圖2中顯示出EREG的表達亢進的癌細胞林均可在大腸癌細胞抹本發明的篩選方法中應用。具體而言，作為可用於本發明的篩選方法的細胞，可以使用下述癌細胞林。以下例示的細胞林均可從細胞庫獲取。上述細胞抹的培養條件已經確立。具體可以在例如表2所示的條件下培養。TE2GT3MKN452M2MD3CAC02DLD1hCT116LOVOAlexander(亞歷山大細胞)CapanlPaca2PK畫1CakilCaki2A549H157H1648H2009H23H2347H522在被檢化合物的存在下培養上述細胞抹，測定該細胞抹中EREG的表達水平。EREG的表達水平可以通過測定細胞內mRNA的量、或肝癌細胞林胰腺癌細胞林腎癌細胞抹肺癌細胞林者分泌在細胞內、細胞表面或細胞外的EREG蛋白質的量來評價。EREG的mRNA或蛋白質的測定方法可以採用本說明書中所述的任意方法。由本發明人等確認所分泌的EREG在EREG依賴性增殖的細胞中的細胞增殖誘導作用。因此，以分泌在細胞外的EREG的量為指標的抗癌藥候選化合物的篩選方法是本發明的優選方式。本發明中，與對照相比EREG的表達水平低的被檢化合物被選擇作為目標候選化合物。本發明中的對照例如可以使用在被;險化合物的非存在下培養的相同細胞抹。或者，還可以以在預先已明確對EREG表達水平具有影響的化合物的存在下培養的細胞株作為對照。通過使用上述對象，還可以選擇較某種化合物的作用更大的化合物。本發明中，還可以以被檢化合物對EREG的中和作用為指標，來篩選癌症治療藥。即，本發明涉及癌症治療藥的候選化合物的篩選方法，該方法包括以下步驟(1)在EREG和被檢化合物的存在下，培養EREG依賴性增殖的細胞的步驟；(2)測定細胞增殖水平的步驟；以及(3)選擇與對照相比抑制了細胞增殖的被檢化合物作為癌症治療藥的候選化合物的步驟。本發明中，EREG依賴性增殖的細胞是指，對EREG顯示出用量依賴性細胞增殖的細胞。例如在後述實施例中，胰腺癌細胞林AsPCl顯示出EREG的用量依賴性細胞增殖。或者，根據本發明人等的認識，明確了通過使EGF受體/G-CSF受體的嵌合受體表達,可以賦予EREG依賴性。具體而言，用編碼包含EGF受體的胞外結構域和G-CSF受體的胞內結構域的嵌合受體的DNA轉化的小鼠細胞，對人EREG顯示出用量依賴性的細胞增殖。因此，如此操作而人為誘導出EGFR依賴性的細胞也可應用於本發明的篩選方法。然後，測定在EREG和被檢化合物的存在下培養的EREG依賴性增殖的細胞的增殖水平。細胞增殖可以按照任意的方法進行測定。例如，可以使用實施例所示的市售的存活細胞計數用試劑，來比較存活細胞數。或者，用於有效進行更大規模的篩選的系統也有銷售。例如，可以使用多孔板來評價各孔的存活細胞數的系統已實際應用。比較存活細胞數的結果，可以選擇與對照相比抑制了細胞數增加的被檢化合物作為癌症治療藥的候選化合物。在本發明的篩選方法中，例如可以使用在被檢化合物的非存在下培養的相同細胞林作為對照。或者，還可以以在預先已明確對由EREG的分泌形式產生的細胞增殖誘導作用具有影響的化合物的存在下培養的細胞林作為對照。通過使用上述對象，還可以選擇較某種化合物的作用更大的化合物。按照本發明的篩選方法選擇的候選化合物，可以作為以抑制EREG的作用為作用機理的抗癌藥的治療藥的候選化合物。本發明中，通過抗EREG抗體可確認癌症的治療效果。因此，按照本發明的篩選方法選擇的化合物，也可期待與抗體相同的作用。按照本發明的篩選方法選擇的候選化合物，根據需要，進一步評價其對其它癌細胞抹或初代培養細胞的作用、以及對正常細胞的毒性等的影響。通過上述評價，可以選擇可作為癌症治療藥的化合物。一系列的作為癌症治療藥的評價方法已經確立。在本發明的篩選方法中，可以使用天然的或人工合成的所有化合物作為被檢化合物。例如，本發明中的被檢化合物的文庫優選蛋白質文庫或抗體文庫。或者，還可以以提呈蛋白質或抗體的噬菌體文庫作為被檢化合物。並且，還可以使用組合文庫等人工合成化合物的文庫作為被檢化合物。需要說明的是，本說明書中引用的所有先行技術文獻均作為參照而納入本說明書中。實施例以下，通過實施例更詳細地說明本發明，但本發明的範圍並不受這些實施例的限定。實施例1.各種癌症中的人EREG的基因表達分析1-1.使用基因晶片的人EREG基因表達分析為了探索在大腸癌或胰腺癌等癌組織中特異性表達亢進的基因，使用基因晶片U133A(Affymetrix公司製備)，實施正常組織、癌組織和癌細胞林的網羅性(comprehensive)基因表達分析。首先，使用ISOGEN(NipponGene公司製備)，按照常規方法由表l和表2所示的正常組織、癌組織和癌細胞抹製備總RNA。然後，使用各10^g的上述總RNA，供給使用基因晶片U-133A(Affymetrix公司製備)的轉錄分析，從而進行基因表達分析。該方法根據表達分析技術手冊(Affymetrix公司制訂)來實施。以全部基因的表達分值的平均值作為100，探索在癌組織或癌細胞中表達亢進的基因。其結果，明確了人EREGmRNA(探針ID:205767_atHG-U133A)在調查的正常組織中沒有顯著的表達，而在原發性大腸癌、轉移性大腸癌、肺腺癌、胰腺癌組織以及大腸癌細胞4朱(CAC02、DLD1、HCT116、LOVO)、胃癌細胞林(2M、2MD3)、肝癌細胞林(Alexander)、胰腺癌細胞林(Capanl、Paca2)、腎癌細胞林(Cakil、Caki2)、以及原發性大腸癌、轉移性大腸癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌、肺癌細胞抹(H157、H1648、H2009、H23、H2347)中表達亢進(圖1和圖2)。由以上結果可知人EREG基因(探針ID:205767_atHG-U133A)在正常組織中表達量非常低；相對於此，在原發性大腸癌、轉移性大腸癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌、腎癌、大腸癌、胰腺癌、胃癌和腎癌等廣泛的癌症種類中表達亢進。tableseeoriginaldocumentpage93tableseeoriginaldocumentpage94[表2]EREG基因表達分析中使用的細胞林和培養條件tableseeoriginaldocumentpage95實施例2.抗EREG單克隆抗體的製作2-1.表達全長人EREG的細胞的建立將序列如SEQIDNO:21所示的全長人EREGcDNA(NM—001432)按常規方法進行分離，將其基因片段克隆到哺乳細胞表達用載體(pMCN)中，命名為hEREG/pMCN。pMCN可以在小鼠CMV啟動子(ACCESSIONNo.U68299)的控制下表達誘導外來基因，並且是插入有新黴素抗性基因的載體。利用電穿孔法將hEREG/pMCN導入CHO細胞DG44林(Invitrogen公司)中，通過在500^g/mL的遺傳黴素(Geneticin)中選擇，建立恆定表達全長人EREG的CHO細胞，命名為EREG_DG。2-2.可溶型人EREG/小鼠IgG2aFc融合蛋白(sEREG-mFc)的製作接下來，製作可溶型人EREG/小鼠IgG2aFc融合蛋白(以下稱為sEREG-mFc)，作為用於製作抗EREG抗體的免疫抗原。在pMCDN載體上構建通過鉸鏈部位的Cpol識別序列連接人EREG胞夕卜區(7-122胺基酸)和小鼠IgG2a恆定區而得到的sEREG_mFc，命名為sEREG—mFc/pMCDN,所述pMCDN栽體是將DHFR基因整合到表達載體pMCN中而得到的。SEQIDNO:33所示的序列表示sEREG—mFc基因的核苷酸序列，SEQIDNO:34所示的序列表示sEREG—mFc的胺基酸序列。利用電穿孑L法將sEREG—mFc/pMCDN導入CHO細胞DG44抹(Invitrogen公司)中，通過在500Ag/mL的遺傳黴素中選擇，建立表達sEREG—mFc的CHO細胞。接下來，從培養上清中純化sEREG—mFc。將培養上清添加到HiTrapProteinGHP(Amersham公司CAT#17-0404-0l)柱上，用結合緩沖液(20mM的磷酸鈉(pH7.0))清洗後，用洗脫緩沖液(O.lM的甘氨酸-HC1(pH2.7))洗脫目標sEREG—mFc。洗脫液回收到加入了中和緩衝液(1M的Tris-HCl(pH9.0))的管中，立即中和。接下來，將洗脫的sEREG一mFc供給利用Superdex200HR10/30(Amersham7>司)進行的凝膠過濾，該溶液被置換成PBS。純化蛋白的定量使用DC蛋白測定(BIO-RAD公司)來實施，以添附的牛IgG作為標準試樣，換算其中含有的蛋白質量。2-3.抗EREG單克隆抗體的製作使用Balb/c和MRL/MpJ-Tnfrs^/Ciij小鼠(日本CharlesRiver)作為免疫動物。從5~8周齡開始免疫，初次免疫時按100^g/只製備sEREG_mFc，用弗氏完全佐劑(FCA，BecktonDickinson公司)製成乳液，將所得乳液進行皮下給藥。兩周後將製備成50^g/只的sEREG_mFc用弗氏不完全佐劑(FIA,BecktonDickinson公司)製成乳液，進行皮下給藥。以後按1周的間隔追加免疫23次，最終免疫是將sEREG—mFc用PBS稀釋至50〃g/只，進行尾靜脈內給藥。最終免疫4天後，摘出脾細胞，與小鼠骨髓瘤細胞P3-X63Ag8Ul(P3U1，購自ATCC)按2:1進行混合，之後緩慢加入PEG1500(RocheDiagnostics公司)，進行細胞融合。慎重地加入RPMI1640培養基(GIBCOBRL公司)，稀釋PEG1500,之後通過離心操作除去PEG1500。之後，用含有10%FBS、"HAT培養基添加劑(SIGMA公司)、0.5xBM-CondimedHl雜交瘤克隆添加劑(RocheDiagnosticsz〉司)的RPMI1640(以後記作HAT培養基)懸浮，按200^L/孔接種在96孔培養板中。通過使用人流式細胞儀評價與EREG一DG的結合活性，來進行篩選。其結果，利用極限稀釋法將顯示陽性結合活性的克隆製成單克隆。再利用使用HeliosGeneGun系統(Bio-Rad)的DNA免疫法對小鼠進行免疫，獲取單克隆抗體。金-DNA(人EREG全長表達載體)顆粒在試管上的包被按照HeliosGeneGun操作指南進行。量取50mg1.0/mi的金顆粒，用0.1ml0.05M的亞精胺溶液懸浮、混合，加入0.1ml1mg/ml的質粒溶液，進行渦旋。再加入0.1ml1M的CaCl2,放置10分鐘，輕微離心後除去上清，用乙醇懸浮、離心。將乙醇脫水的操作重複3次後，最終懸浮於6ml0.05mg/ml的聚乙烯吡咯烷酮-乙醇溶液中。將該溶液吸入包被用試管中，包被、乾燥試管，用試管切刀切成0.5英寸長。對達到4~5周齡的小鼠MRL/MpJ-Tnfrsf6/Crlj，按13次/周的間隔進行DNA免疫(~200psi氦壓力)，在此期間間斷性地監測血清中的抗EREG抗體效價。對於確認到血清抗體效價上升的個體，尾靜脈內或腹腔內給予EREG強制表達細胞抹(5xl(^個細胞/只)。祠養2~3天後摘出脾臟，分離含有抗體產生細胞的單核細胞。利用與sEREG一mFc免疫時相同的方法進4亍細胞融合和克隆化。從在加入了血清的HAT培養基中培養的雜交瘤的培養上清中純化抗體。加入到培養基中的血清為FBS(UltralowIgG)(GIBCOBRL公司)。利用實施例2-2所示的、與sEREG—mFc的純化方法相同的方法，使用HiTrapProteinGHP從培養上清中純化抗體。使用PD-IO柱(Amersham公司)將HiTrapProteinGHP的洗脫組分置換成PBS,之後在4。C下保管。純化抗體的定量使用DC蛋白測定(BIO-RAD公司)來實施，以添附的牛IgG作為標準試樣，換算其中含有的蛋白質量。其結果，表3所示的克隆B2弁30(IgGl，Kappa)、B3#18(IgG2b，Kappa)以及B3弁41(IgGl，Kappa)等被成功分離。[表3]已分離的抗EREG小鼠單克隆抗體的抗體亞型、識別表位部位和種交叉性tableseeoriginaldocumentpage99*注(ereg):雖然結合，但反應性弱NA:未分析2-4.利用流式細胞術評價結合活性使用通過上述方法獲得的抗體，利用流式細胞術評價與EREG—DG的結合。向EREG—DG中添加稀釋至適當濃度的抗EREG抗體，在冰上反應60分鐘，所述EREG—DG以lxlS個細胞/mL的密度懸浮於FACS緩衝液(1%FBS/PBS)中。細胞用FACS緩衝液清洗1次後，添加FITC標記抗小鼠IgG抗體，在水上反應30分鐘。反應後，通過離心除去上清，之後將細胞懸浮於150//LFACS緩沖液中，供給利用流式細胞術進行的分析。流式細胞儀使用FACSCalibur(BectonDickinson公司)。使用前散射光和側散射光的直方圖，對活細胞集團設定閥值(gate)。加入到EREG一DG中，一併評價與人大腸癌細胞林DLD1的結合活性。由圖2所示的結果可知人大腸癌細胞林DLD1與EREG—DG細胞同樣，確認到人EREG基因的表達亢進。如圖3所示，雜交瘤所產生的抗EREG單克隆抗體(B2W0、B3弁18以及B3糾1)與EREG一DG強烈結合，但不與作為母抹的DG44細胞結合。由上述試驗結果判定上述單克隆抗體與提呈於細胞膜上的EREG發生特異性結合。另外，確認到上述本發明的抗EREG單克隆抗體對於亢進表達人EREG基因的DLD1，也如同對EREG—DG—樣發生特異性結合(圖4)。迄今為止，有關人EREG基因表達亢進，在膀胱癌(Thogersen,V.等人.，CancerRes.61:6227-6233，2001)、胰腺癌(Zhu.Z.,等人.,Biochem.Biophys.Res.Commun.273:1019-1024，2000)、前列腺癌(Toning,N.，等人.，AnticancerRes.20:91-95，2000)、大腸癌(Baba,I"等人.，CancerRes.60:6886-6889,2000)等中有報導，但關於人EREG基因的表達亢進與人EREG蛋白質的表達亢進相關，這是在本發明中首次公開。實施例3.抗EREG單克隆抗體的補體依賴性細胞毒(CDC)活性和抗體依賴性細胞毒(ADCQ活性的測定3-1.抗EREG單克隆抗體的CDC活性的測定使用人大腸癌細胞林DLD1作為靶細胞。培養DLD1時使用含有10%FBS的RPMI1640培養基(GIBCOBRL公司)。通過離心(IOOOrpm,5分鐘，4。C)回收5xl5個DLDl細胞，將細胞團塊懸浮於約200的培養基和3.7MBq的鉻-51(CodeNo.CJS4,AmershamPharmaciaBiotech)中，之後在5%二氧化碳培養箱中、在37。C下培養1小時。將上述細胞用培養基清洗3次，之後用培養基製備成細胞密度為lx104個細胞/mL，按每100〃L添加到96孔平底板中。接下來，用培養基稀釋抗EREG單克隆抗體(B3W8JgG2b)和對照小鼠IgG2a抗體(Cat.No.553453，BDBiosciencesPharmingen)，之後向各孔中分別添加50pL。將抗體製備成終濃度為10//g/mL。接著，將幼兔補體(Cat.No.CL3441,Cederlane)用培養基稀釋5倍後，向該板的各孔中分別添加50pL，將該板在5%二氧化碳培養箱中、在37°C下靜置1.5小時。靜置後將該板離心(1000rpm、5分鐘、4°C),從各孔中分別回收100/^L的上清，用y計數儀(1480WIZARD3",Wallac)測定回收的上清的放射活性。根據下式求出特異性鉻游離率。特異性鉻游離率(％)=(A-C)xl00/(B-C)式中，A表示各孔中的放射活性(cpm);B表示在100細胞中添加有100//L2%NP-40溶液(NonidetP-40，CodeNo.252-23，NacalaiTesque林式會社)的孔中的放射活性(cpm)的平均值；而C表示在100//L細胞中添加有100,L培養基的孔中的放射活性(cpm)的平均值。測定利用雙份實驗來進行，算出來自各孔的上清的特異性鉻游離率的平均值和標準偏差。其結果，如圖5所示，在試驗所使用的抗EREG單克隆抗體中確認到CDC活性。另一方面，用作對照的小鼠IgG2a抗體在相同濃度下未顯示出CDC活性。3-2.抗EREG單克隆抗體的ADCC活性的測定測定ADCC活性時，與測定CDC活性時一樣，使用人大腸癌細胞抹DLD1來實施。即，用96孔平底板培養細胞，並使之與鉻-51反應，之後用含有10%FBS的RPMI1640培養基(Invitrogen公司)清洗，再添加100pL培養基。接下來，用培養基稀釋抗EREG單克隆抗體(B2#30、B3弁18和B3弁41)，之後向該板的各孔中分別添加50〃L。按終濃度1pg/mL添加抗體。接著，向各孔中分別添加50效應細胞溶液(lxl(^個細胞/mL),將該板在5%二氧化碳培養箱中、在37。C下靜置4小時，確定特異性鉻游離率。效應細胞使用下述細胞將Balb/c小鼠(日本CharlesRiver抹式會社)的脾細胞用含有50ng/mL重組人白細胞介素-2(Cat.No.200-02,Peprotech)的培養基培養5天所得的細胞、或者將相同小鼠的骨髓細胞用含有50ng/mL重組人白細胞介素-2和10ng/mL重組小鼠GM-CSF(Cat.No.315-03,Peprotech)的培養基培養6天所得的細胞。由其結果可知試驗中使用的所有抗EREG單克隆抗體均對DLD1誘導ADCC活性(圖6)。實施例4.抗EREG單克隆抗體對由人EREG產生的細胞增殖刺激的中和活性的測定4-1.表達EGFR-mG-CSF嵌合受體的Ba/F3細胞株(EGFR—BAF)的建立利於常規方法分離序列如SEQIDNO:35(GenenBankAcc.No.NMJ)05228)所示的人EGF受體(以下記作"EGFR"),之後製作可以表達使人EGF受體與mG-CSFR融合而得到的嵌合受體的載體。即，製作表達人EGFR的胞外區(Met7-Ser645)與小鼠G-CSFR(NM—007782)的胞內區的嵌合受體(hEGFR/mG-CSFR)的載體(pCV—hEGFR/mG-CSFR)。該嵌合受體hEGFR/mG-CSFR的核苷,列見SEQIDNO:39，其胺基酸序列見SEQIDNO:40。利於電穿孔法(GenePulser;BioRad)，在0.33kV、950〃FD的條件下，將15經PvuI切斷而直鏈化的嵌合受體(hEGFR/mG-CSFR)表達載體(pCVJiEGFR/mG-CSFR)導入Ba/F3細胞中。導入了基因的細胞用含有10%FBS(GIBCO公司)、200^g/mL遺傳黴素和重組人EREG(R&DSystems公司，Cat:1195匿EP/CF，200ng/mL)的RPMI1640培養基進行選擇，分離EGFR一BAF林。4-2.EGFR—BAF的EREG依賴性評價實施測定利用4-l.所述的方法分離的EGFR—BAF的人EREG濃度依賴性細胞增殖的試驗。清洗細胞以除去培養時的人EREG，並再+10%FBS培養基中，之後按2xl04個細胞/100^L/孔的密度接種在％孔板上。將人EREG(R&DSystems公司)用培養基稀釋、調製成各濃度(7.8250ng/mL)後添加到細胞中，之後將細胞在37°C、5%C02培養箱中培養3天。培養後，按照說明書加入CellCountReagentSF(NacalaiTesque7>司)的測定試劑，顯色2小時，用BenchmarkPlus(Bio-Rad公司)測定反應液的吸光度(450/655nm)。與上述同樣地測定人胰腺癌細胞林AsPCl和人大腸癌細胞才朱DLD1對人EREG的依賴性增殖。培養基使用CHO-S-SFMII(GIBCO公司)。由結果可知EGFR—BAF(圖7)和AsPCl(圖8)依賴於人EREG的濃度而增殖。而DLD1不具有人EREG的依賴性(圖9)。4-3.抗EREG單克隆抗體對人EREG依賴性細胞增殖的中和活性的測定使用已建立的EGFR—BAF，測定抗EREG單克隆抗體對人EREG依賴性增殖的中和活性。將EGFR—BAF懸浮於含有人EREG(終濃度為125ng/mL)的RPMI1640+10。/oFBS培養基中，之後按2乂104個細胞/孔的密度接種在96孔板上。將抗EREG單克隆抗體用培養基稀釋至各濃度(0.008~25//g/mL)後添加到細胞中，之後將細胞在37°C、5%C02培養箱中培養3天。培養後，加入測定試劑盒CellCountReagentSF(NacalaiTesque公司)的測定試劑，顯色2小時。以655nm為參比波長，用BenchmarkPlus(Bio-Rad公司)測定反應液在450nm下的吸光度。以抗體濃度為O^g/mL時的數值作為對照值，算出細胞增殖率(各抗體濃度下的OD值/對照的OD值xl00(。/。))。抑制活性的陽性對照使用公知的抗人EREG山羊多克隆抗體(R&DSystems公司，Cat:AF1195)。在產品附錄中，記載著該抗體對成纖維細胞4朱Balb/3T3的人EREG依賴性增殖的中和活性。但有關對癌細胞林的增殖抑制效果的信息，附錄中則沒有記載。另外，關於使用AsPCl作為靶細胞的抗EREG單克隆抗體的中和活性，也按照與上述相同的方法，在抗體濃度為25、2.5、0.25//g/mL的3種條件下進行測定。各自的結果見圖IO和圖11。結果顯示在使用EGFR—BAF和AsPCl的任一系統中，B2#30和B3弁18均顯示出中和活性，但B3弁41的中和活性非常弱。另外，與B2#30或B3#18相比，公知的抗hEREG山羊多克隆抗體的中和活性非常弱。由以上結果可知B2#30和B3#18具有EREG依賴性中和活性，抑制胰腺癌細胞林AsPCl的增殖。此次分離的抗EREG單克隆抗體(B2弁30和B3弁18)兼具由ADCC活性或CDC活性產生的殺細胞效果和人EREG依賴性細胞增殖抑制效果(中和活性)，是對抗人EREG基因表達亢進的癌細胞的新型機制的抗體藥物，這通過本研究得到證明。實施例5.抗EREG單克隆抗體的可變區基因序列的確定由產生B3#18(EP27)的雜交瘤確定抗體可變區的基因序列，所述B3#18(EP27)保持EREG依賴性中和活性，且對DLD1細胞林顯示出ADCC活性和CDC活性。使用從產生抗EREG抗體B3#18的雜交瘤中提取的總RNA，通過RT-PCR法擴增該抗體可變區基因。總RNA是使用RNeasyPlantMini試劑盒(QIAGEN公司)，從lxlO個細胞的雜交瘤中提取。使用1的總RNA,利用SMARTRACEcDNA擴增試劑盒(CLONTECH公司)構建RACE文庫。使用與小鼠IgG2b恆定區序列互補的合成寡核苷酸MHC-IgG2b(SEQIDNO:41)或與小鼠k鏈恆定區核苦酸序列互補的合成寡核苷酸kappa(SEQIDNO:42)，擴增5，末端側基因片段。逆轉錄反應在42。C下進行1小時30分鐘。PCR溶液(50中)的組成如下5//L10xAdvantage2PCR緩沖液；5jL10xUniversalPrimerAMix;0.2mMdNTPs(dATP、dGTP、dCTP、dTTP);1Advantage2聚合酶Mix(以上由CLONTECH公司製備)；2.5^L逆轉錄反應產物；以及10pmole合成寡核苷酸MHC-IgG2b或kappa。PCR和反應條件如下循環重複5次；以及94t:下反應5秒/68'C下反應10秒/72。C下反應3分鐘的循環重複25次；最後，將反應產物在72。C下加熱7分鐘。各PCR產物使用QIAquickGel純化試劑盒(QIAGEN公司製備)，由瓊脂糖凝膠進行純化，之後克隆到pGEM-TEasy載體(Promega公司製備)中，確定其核苷酸序列。B3弁18的H鏈可變區的核苷酸序列見SEQIDNO:43、胺基酸序列見SEQIDNO:44，L鏈可變區的核苷酸序列見SEQIDNO:45,而胺基酸序列見SEQIDNO:46。對於C7(EP03)、#15(EP08)、B2#30(EP20)、B3#8(EP24)和B3#41(EP29)，按照相同的方法確定可變區序列。擴增重鏈可變區時使用與小鼠IgGl恆定區序列互補的合成寡核苷酸MHC-IgGl(SEQIDNO:47、5，-ccatggagttagtttgggcagcagatcc-3，)。所確定的可變區核苦酸序列見SEQIDNO:108(EP03、重鏈)、110(EP03、輕鏈)、112(EP08、重鏈)、114(EP08、輕鏈)、116(EP20、重鏈)、118(EP20、輕鏈)、120(EP24、重鏈)、122(EP24、輕鏈)、124(EP29、重鏈)、126(EP29、輕鏈)。可變區翻譯序列見SEQIDNO:109(EP03、重鏈)、111(EP03、輕鏈)、113(EP08、重鏈)、115(EP08、輕鏈)、117(EP20、重鏈)、119(EP20、輕鏈)、121(EP24、重鏈)、123(EP24、輕鏈)、125(EP29、重鏈)、127tableseeoriginaldocumentpage106實施例6.重組嵌合抗體與EREG的結合活性的確認通過以下方法確認重組嵌合抗體保持與EREG的結合性，所述重組嵌合抗體具有所分離的抗體可變區序列和人IgGl/IgK恆定區序列。PCR擴增各自的重鏈可變區序列，之後整合到人嵌合抗體表達載體的重鏈克隆位點中。隨後PCR擴增輕鏈可變區序列，之後整合到上述整合有重鏈的人嵌合抗體表達載體的輕鏈克隆位點中。在構建的細胞表達載體中，重鏈和輕鏈中的抗體基因均設計成在小鼠CMV啟動子下轉錄。各人嵌合抗體的核苷酸序列及其翻譯序列的序列編號的對應匯總在表5中。tableseeoriginaldocumentpage107使用人嵌合抗體表達載體，利用電穿孔法轉化DG44細胞。以通過存在於人嵌合抗體表達載體上的選擇標誌物獲得的遺傳黴素耐性為指標，進行重組細胞克隆選擇。利用使用抗人抗體的夾層ELISA法;險測克隆化的重組細胞培養上清中的抗體量，選擇重組抗體表達細胞。4吏用HiTrapProteinA柱(AmershamBioscience),4姿照附錄手冊乂人的溶液封閉後，分析純化的嵌合抗體的結合反應性。添加嵌合抗體，培養1小時後清洗板，添加石威性磷酸酶標記的抗人IgG抗體(BIOSOURCE，AHI0305)，使之反應。清洗後，加入檢測試劑Sigma104，來測定嵌合抗體結合量。如圖12所示，嵌合抗體對EREG顯示出容量依賴性結合。由以上結果確認所分離的抗體可變區序列確實來自抗EREG抗體。實施例7.嵌合抗EREG抗體的體外ADCC活性使用嵌合抗體的人PBMC的體外ADCC活性見圖13。使用預先注入有2001000單位/mL的肝素溶液(NovoHeparin注5千單位，NovoNordisk公司)的注射器，從正常人體內採集50mL末梢血。將該末梢血用PBS(-)稀釋2倍後4等分，加入到預先注入了15mLFicoll-PaquePLUS(GEHealthcare7>司)並進行了離心操作的Leucosep淋巴細胞分離管(Cat.No.227290,Greinerbio-one公司)中。將其離心(2150rpm，10分鐘，室溫)後，分離收集單核細胞組分層。用含有10%FBS的Dulbecco，sModifiedEagle's培養基(SIGMA公司製備)(以下記作10。/。FBS/D-MEM)清洗細胞1次，之後用10%FBS/D-MEM將細胞密度調整至5xl(^個細胞/mL，製成人PBMC溶液。利用與實施例3相同的方法，對DLD-1和MIA-PaCa2細胞進行鉻-51標記。向靶細胞中添加調製成各濃度的抗體溶液，在室溫下反應15分鐘後加入人PBMC溶液(5xl(^個細胞/孔)，在5。/。二氧化碳培養箱中培養約4小時，用Y計數儀測定培養後的培養上清中的放射活性，利用實施例3所述的方法算出鉻游離率。在所有嵌合抗體中均確認到ADCC誘導活性，嵌合抗體EP20、EP27、EP08具有特別強的活性。關於各抗體的ADCC誘導強度，在胰腺癌細胞林MIA-PaCa2和大腸癌細胞林DLD-1中顯示出相同的趨勢。實施例8.抗EREG抗體的種交叉性和表位分析分析所分離的抗體與小鼠EREG和猴EREG的交叉反應性。以cDNA文庫為模板，對全長小鼠EREGcDNA(NM—007950)和猴EREGcDNA(XM—001102069)進行PCR擴增及克隆。所分離的序列分別見SEQIDNO:168和169。利用實施例2所示的方法，製備可溶型小鼠EREG/小鼠IgG2aFc融合蛋白(以下記作小鼠EREG-mFc)和可溶型猴EREG/小鼠IgG2aFc融合蛋白(以下記作猴EREG-mFc)。小鼠EREG-mFc和猴EREG-mFc的序列分別見SEQIDNO:170和171。將人EREG-mFc、小鼠EREG-mFc、猴EREG-mFc分別包被在Nunc-Immuno板上，用含有BSA的溶液封閉。之後，分析純化的嵌合抗體的結合反應性。添加嵌合抗體，培養l小時後清洗板，添加鹼性磷酸酶標記的抗人IgG抗體(BIOSOURCE,AHI0305),使之反應。清洗後，加入檢測試劑Sigma104，來測定嵌合抗體結合量(圖14)。將在同一抗體濃度下與各種EREG的結合作圖，如橫軸[人EREG-mFc]對縱軸[小鼠EREG-mFc]、橫軸[人EREG-mFc]對縱軸[猴EREG-mFc]，從而展示在同一抗體濃度下抗體與EREG的結合飽和度的不同。沿橫軸的圖表示與人EREG的結合選擇性，表明EP08雖然與人EREG結合，但不與小鼠EREG結合。顯示出拋物線圖的EP27也與小鼠分子結合，但為了達到結合飽和，需要更高濃度的抗體，即與人EREG相比，EP27與小鼠EREG的結合親和性弱。給予對角線圖的抗體對不同種的EREG顯示出與人同等的親和性。使用產生雜交瘤的小鼠抗體進行同樣的分析，結果匯總在表3中。以未反應(-)、非常弱的反應性(+)、與人相比稍弱(++)、與人分子同等的反應性(+++)四個等級表示。為了進行抗體的表位部位分析，分析與人EREG胞外結構域部分片段的結合反應性。以GST融合蛋白的形式表達SEQIDNO:21的人EREG的29Ala~69Ser的N末端部分序列並進行純化。所得重組蛋白序列見SEQIDNO:172。具有成熟型EGF結構域結構的可溶型人EREG片段(相當於SEQIDNO:21的63Val~108Leu>^R&DSystems(cat.no.1195-EP/CF)購入。將EREG序列片段固定在免疫板上，利用ELISA。大多數抗體與含有EGF結構域的可溶型EREG片段(表3中表示成ereg)結合。EP25、EP32與N末端部分序列(Nterm)結合。分離的所有抗體與任意的肽片段結合，不存在識別109殘基以後的序列的抗體。實施例9.利用EREG表達細胞活化EGF受體信號有人將可溶型EREG作為低親和性EGF家族配體進行了報導(參考文獻Shelly等人.(1998)JBiolChem273，10496-505;Jones等人.(1999)FEBSLett447，227-31)。由使用EGFR—BaF的作用比較確認與EGF相比，EREG對EGF受體僅顯示出1/100以下的低活性(親和性)(圖15)。生理條件下，EREG並不是血中大量存在的因子。另有報導稱伴隨著癌化，EREG在基因水平的表達出現上升，但並沒有報導在癌症患者的血中檢測出高濃度的EREG蛋白質。本發明人等假設不是可溶型EREG、而是在細胞膜上表達的膜型EREG刺激鄰近的EGF受體，並對存在上述局部活化機制的假設進行了如下驗證。首先，將EREG強制表達細胞和EGFR一BaF進行共培養，來確認在不存在可溶型EREG的情況下EGFR一BaF的增殖是否得到促進。將EREG表達細胞EREG_DG、作為陰性對照的DG44細胞按5xl03個細胞/孔接種在96孔板中，在FCS存在下培養過夜。第二天添加lxl04的EGFR—BaF、作為陰性對照的Ba/F3細胞，繼續培養3天。如圖16所示，即使與不表達EREG的DG44細胞共培養，EGFR—BaF的增殖也絲毫沒有受到刺激；而通過與EREG強制表達細胞EREG一DG共培養，觀察到顯著的EGFR一BaF增殖促進。EREG一DG引起的增殖促進通過添加抗EREG抗體EP20(10^g/mL)而被抑制。通過添加WST-8試劑來定量EGFR—BaF細胞增殖(圖17)。結果顯示即使將Ba/F3細胞與EREG—DG細胞共培養，也沒有產生增殖刺激；以及通過EREG—DG與EGFR_BaF的共培養而得到促進的細胞增殖因添加抗EREG抗體而幾乎完全被抑制。通過基因晶片分析，確認在大腸癌細胞4朱DLD-1中，除EREG外，雙調蛋白(EGF配體家族成員)也在基因水平產生過量表達。在EGF受體信號中，存在活化受體的配體家族分子的重複性，阻礙一個配體，這在理論上並不等價於阻礙受體信號活化。結果顯示將DLD-1和EGFR一BaF共培養時，與Ba/F3相比，EGFR—BaF中存在顯著的增殖刺激；以及該增殖刺激因添加抗EREG中和抗體EP20、EP27而被抑制(圖18)。利用夾層ELISA法定量EREG_DG、DLD-1細胞培養上清中的可溶性EREG量。將小鼠EP30包被在免疫板上、封閉，之後添加作為濃度標準品的可溶型重組人EREG(R&DSystems)和作為被^r樣品的培養3天後的細胞培養上清。培養後，用嵌合EP20抗體和鹼性磷酸酶標記抗人IgG抗體檢測EREG。使用標準品的可溶型EREG檢測結果見圖19。培養上清中的EREG量在EREG一DG(A405/655檢測值為0.157)、DLD-1(A405/655檢測值為0.184)中均在檢測限(lng/mL)以下。以上結果表明EREG介導的EGF受體信號的活化發生在鄰近的細胞間；以及膜型EREG很有可能參與了活化。該結果、即EREG介導的EGF受體活化通過細胞間相互作用而高效率發生，這由本發明首次發現，該活化可被J元EREG抗體抑制也是首次發現。實施例10.通過免疫組織染色檢測大腸癌組織中的EREG蛋白質通過免疫組織染色，確認到癌組織中表達EREG蛋白質、且該蛋白質定位於癌細胞膜上。免疫組織染色使用由臨床癌組織製作的組織陣列來進行，組織標本的製作如下進行。將手術後摘出的組織用4%多聚曱醛固定一夜,之後用0.01M磷酸緩衝液清洗2小時，按照AMeX法(參考文獻Sato等人.(1986)AmJPathol125，431-5)包埋在石蠟中。從該包埋塊中切取直徑為1.5mm的癌組織，移才直到約2.5x3.0cm的新的包埋塊中，排列不同的組織，形成組織陣列。薄切組織陣列，脫石蠟後，4吏用VentanaHXDiscovery系統(VentanaMedicalSystems,Inc.)進行免疫組織染色。向薄切的組織中添加50^g/mL的抗EREG小鼠單克隆抗體(EP27),使之反應。加入作為二次抗體的過氧化物酶標記的抗小鼠IgG抗體，之後用DAB進行顯色反應。其結果，在大腸癌原發部位確認到EREG蛋白質的表達、以及該蛋白質定位於細胞膜上(圖20)。另一方面，在非癌部分組織中，在相同的染色條件下完全沒有檢測到EREG蛋白質。在癌組織中檢測出EREG蛋白質的表達、以及確認到該蛋白質定位於膜上，這在本發明中首次顯示。實施例11.利用夾層ELISA進行抗EREG單克隆抗體的表位識別分類在實施例8中已經明確多數抗體的識別表位位於EREG的成熟型EGF結構域內。更詳細而言，利用夾層ELISA法分析對同一抗原分子不發生結合竟爭、且表位不同的抗體的組合。將小鼠抗EREG抗體稀釋至1Ag/mL，固定在Nunc-Immuno板上。封閉後，按100//L/孔添加50^g/mL的成熟型EGF結構域結構的可溶型人EREG片段(SEQIDNO:21的63Val咖Leu)或100pg/mL的人EREG畫mFc(SEQIDNO:34)，使抗原分子被小鼠抗體捕獲。清洗後，添加抗EREG嵌合抗體(抗體濃度為1、0.33、0.11、0.037^g/mL)，利用鹼性磷酸酶標記抗人IgG抗體和Sigma104顯色檢測嵌合抗體與被捕獲的抗原分子的結合反應性。使用統計分析軟體R(URLhttp:〃www.R-project.org.)，對所得數據(圖21-1~圖21-3)進行聚類分析，樹形圖見圖22。圖22中，到橫軸支化點的距離越遠，表明夾層ELISA系統中的反應模式越不同、抗原識別方式越不同。EP20能夠和EP27等多數抗體結合，可知其具有特徵性的表位。圖22中屬於EP29EP25聚類的抗體幾乎不允許與其它抗體同時結合，推測抗原分子被這些抗體牢牢捕獲。產業實用性本發明的EREG蛋白質特異性抗體，可用作大腸癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌或腎癌等的診斷試劑。本發明的診斷試劑可用於診斷原發性或轉移性的癌症。具體而言，通過4全測從患者體內採集的生物樣品中所含的EREG蛋白質或編碼EREG的mRNA，可以檢測癌症。或者，通過檢測機體內EREG表達細胞的定位，可以檢測出機體內原發性大腸癌、轉移性大腸癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌或腎癌的存在。另外，本發明的具有細胞毒活性的抗EREG抗體可用於治療或預防表達EREG蛋白質的癌症。具體而言，基於本發明，提供大腸癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌、腎癌等的各種癌細胞的細胞毒性劑或細胞增殖抑制劑。本發明的癌細胞的細胞毒性劑或細胞增殖抑制劑對原發性和轉移性的任一種癌症均可適用。並且，本發明的具有細胞毒活性的抗EREG抗體可用作大腸癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌、腎癌等各種癌症的治療藥。本發明中，抗EREG抗體還可用作原發性和轉移性的任一種癌症的治療藥。而且，編碼本發明抗體的基因和通過該基因轉化的重組細胞可用於製作發揮上述效果或更適當的效果的重組抗體。此外，基於本發明的認識，可以篩選作為癌症治療藥有效的候選化合物。根據本發明，明確了癌症的EREG依賴性增殖。因此，根據本發明的篩選方法選擇的化合物，可謂是抑制癌症的EREG依賴性增殖的化合物。根據本發明而選擇的化合物可作為候選化合物，所述候選化合物通過評價其安全性和對癌症的特異性而明確其作為抗癌藥的有用性。權利要求1.藥物組合物，該藥物組合物含有與EREG蛋白質結合的抗體作為有效成分。2.細胞增殖抑制劑，該細胞增殖抑制劑含有與EREG蛋白質結合的抗體作為有效成分。3.抗癌藥，該抗癌藥含有與EREG蛋白質結合的抗體作為有效成分。4.權利要求3所述的抗癌藥，其中，與EREG蛋白質結合的抗體為具有細胞增殖抑制活性的抗體。5.權利要求3或4所述的抗癌藥，其中，與EREG蛋白質結合的抗體為以下(1)(5"中任一項所述的抗體(1)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:2的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:4的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:6的胺基酸序列；(2)抗體，該抗體含有(l)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:8的胺基酸序列的117-452位的胺基酸序列；(3)抗體，該抗體含有(l)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:IO的胺基酸序列的117-446位的胺基酸序列；(4)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:12的氨基,歹'J、作為CDR2的SEQIDNO:14的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:16的胺基酸序列；(5)抗體，該抗體含有(4)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:18的胺基酸序列的107213位的胺基酸序列；(6)抗體，該抗體含有(4)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107213位的氨基^列；(7)抗體，該抗體含有(l)所述的H鏈和(4)所述的L鏈；(8)抗體，該抗體含有(2)所述的H鏈和(5)所述的L鏈；(9)抗體，該抗體含有(3)所述的H鏈和(6)所述的L鏈；(10)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:49的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:51的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:53的胺基酸序列；(11)抗體，該抗體含有(10)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:149的氨基齡列的118~441位的氨基睃字列；(12)抗體，該抗體含有(10)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:IO的氨基齡列的117~446位的氨基瞎列；(13)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:55的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:57的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:59的胺基酸序列；(14)抗體，該抗體含有(13)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:151的胺基酸序列的108214位的胺基酸序列；(15)抗體，該抗體含有(13)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的氨基斷列的107~213位的胺基酸序列；(16)抗體，該抗體含有(10)所述的H鏈和(13)所述的L鏈；(17)抗體，該抗體含有(11)所述的H鏈和(14)所述的L鏈；(18)抗體，該抗體含有(1"所述的H鏈和(l"所述的L鏈；(19)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:61的氨基斷歹ll、作為CDR2的SEQIDNO:63的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:65的胺基酸序列；(20)抗體，該抗體含有(19)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:153的胺基酸序列的116-439位的氨基,列；(21)抗體，該抗體含有(19)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117-446位的胺基酸序列；(22)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:67的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:69的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:71的胺基酸序列；(23)抗體，該抗體含有(22)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:155的胺基酸序列的108-214位的胺基酸序列；(24)抗體，該抗體含有(22)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107-213位的氨基麟列；(25)抗體，該抗體具有(19)所述的H鏈和(22)所述的L鏈；(26)抗體，該抗體具有(20)所述的H鏈和(23)所述的L鏈；(27)抗體，該抗體具有(21)所述的H鏈和(24)所述的L鏈；(28)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:73的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:75的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:77的胺基酸序列；(29)抗體，該抗體含有(28)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:157的胺基酸序列的119~442位的氨基斷列；(30)抗體，該抗體含有(28)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的氨基餅列的117~446位的氨基^Jf列；(31)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:79的氨基斷列、作為CDR2的SEQIDNO:81的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:83的胺基酸序列；(32)抗體，該抗體含有(31)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:159的胺基酸序列的109~215位的胺基酸序列；(33)抗體，該抗體含有(31)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107~213位的胺基酸序列；(34)抗體，該抗體具有(28)所述的H鏈和(31)所述的L鏈；(35)抗體，該抗體具有(29)所述的H鏈和(32)所述的L鏈；(36)抗體，該抗體具有(30)所述的H鏈和(33)所述的L鏈；(37)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:85的氨基斷歹'J、作為CDR2的SEQIDNO:87的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:89的胺基酸序列；(38)抗體，該抗體含有(37)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:161的胺基酸序列的117~440位的胺基酸序列；(39)抗體，該抗體含有(37)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117-446位的胺基酸序列；(40)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:91的氨基睃序列、作為CDR2的SEQIDNO:93的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:95的胺基酸序列；(41)抗體，該抗體含有(40)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:163的胺基酸序列的108~214位的胺基酸序列；(42)抗體，該抗體含有(40)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的氨基Si^列的107213位的胺基酸序列；(43)抗體，該抗體含有(37)所述的H鏈和(40)所述的L鏈；(44)抗體，該抗體含有(38)所述的H鏈和(41)所述的L鏈；(45)抗體，該抗體含有(39)所述的H鏈和(42)所述的L鏈；(46)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:97的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:99的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:101的胺基酸序列；(47)抗體，該抗體含有(46)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:165的氨基,列的113~436位的氨基斷列；(48)抗體，該抗體含有(46)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117-446位的胺基酸序列；(49)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:103的胺基酸序歹'J、作為CDR2的SEQIDNO:105的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:107的胺基酸序列；(50)抗體，該抗體含有(49)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:167的胺基酸序列的108214位的氨基斷列；(51)抗體，該抗體含有(49)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的氨基*列的107~213位的胺基酸序列；(52)抗體，該抗體具有(46)所述的H鏈和(49)所述的L鏈；(53)抗體，該抗體具有(47)所述的H鏈和(50)所述的L鏈；(54)抗體，該抗體具有(48)所述的H鏈和(51)所述的L鏈；(55)抗體，該抗體是在(1)(54)中任一項所述的抗體中有一個或多個胺基酸被置換、缺失、附加和/或插入而得到的抗體，所得抗體與(1)~(54)中任一項所述的抗體具有同等活性；(56)抗體，該抗體與表位結合，所述表位與(1)(55)中任一項所述的抗體所結合的EREG蛋白質的表位相同；(57)(1)(56)中任一項所述的抗體的小分子抗體。6.權利要求3~5中任一項所述的抗癌藥，其特徵在於與EREG蛋白質結合的抗體識別SEQIDNO:21的胺基酸序列中第29位的Ala第69位的Ser或第63位的Val第108位的Leu。7.權利要求3~6中任一項所述的抗癌藥，其中，癌症為選自大腸癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌和腎癌中的任一種癌。8.權利要求7所述的抗癌藥，其中，癌症為原發性癌症。9.權利要求7所述的抗癌藥，其中，癌症為轉移性癌症。10.抗體，該抗體與EREG蛋白質結合，並且對表達EREG蛋白質的細胞具有細胞增殖抑制活性。11.權利要求10所述的抗體，其中，細胞增殖抑制活性為細胞毒活性。12.權利要求ll所述的抗體，其中，細胞毒活性為ADCC活性。13.權利要求ll所述的抗體，其中，細胞毒活性為CDC活性。14.權利要求10~13中任一項所述的抗體，其特徵在於進一步附加具有對EREG蛋白質的中和活性。15.權利要求10所述的抗體，其中，細胞增殖抑制活性為中和活性。16.小分子抗體，該小分子抗體由權利要求IO所述的抗體製成。17.權利要求10~16中任一項所述的抗體，該抗體結合有化療藥物或毒性肽。18.抗體，該抗體與EREG蛋白質結合，並結合有選自化療藥物、毒性肽和放射性同位素的任一種細胞毒性物質。19.權利要求10~18中任一項所述的抗體，其中，該抗體為以下(1)~(57)中任一項所述的抗體(1)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:2的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:4的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:6的胺基酸序列；(2)抗體，該抗體含有(l)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:8的胺基酸序列的117-452位的胺基酸序列；(3)抗體，該抗體含有(l)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117446位的胺基酸序列；(4)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:12的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:14的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:16的胺基酸序列；(5)抗體，該抗體含有(4)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:18的胺基酸序列的107-213位的胺基酸序列；(6)抗體，該抗體含有(4)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107~213位的胺基酸序列；(7)抗體，該抗體含有(l)所述的H鏈和(4)所述的L鏈；(8)抗體，該抗體含有(2)所述的H鏈和(5)所述的L鏈；(9)抗體，該抗體含有(3)所述的H鏈和(6)所述的L鏈；(10)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:49的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:51的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:53的胺基酸序列；(11)抗體，該抗體含有(10)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:149的胺基酸序列的118-441位的胺基酸序列；(12)抗體，該抗體含有(10)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117-446位的胺基酸序列；(13)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:55的氨基^f列、作為CDR2的SEQIDNO:57的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:59的胺基酸序列；(14)抗體，該抗體含有(13)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:151的胺基酸序列的108214位的氨基亂宇列；(15)抗體，該抗體含有(13)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的氨基斷列的107~213位的胺基酸序列；(16)抗體，該抗體含有(10)所述的H鏈和(13)所述的L鏈；(17)抗體，該抗體含有(ll)所述的H鏈和(14)所述的L鏈；(18)抗體，該抗體含有(12)所述的H鏈和(15)所述的L鏈；(19)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:61的氨基,列、作為CDR2的SEQIDNO:63的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:65的胺基酸序列；(20)抗體，該抗體含有(19)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:153的胺基酸序列的116439位的胺基酸序列；(21)抗體，該抗體含有(19)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117~446位的胺基酸序列；(22)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:67的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:69的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:71的胺基酸序列；(23)抗體，該抗體含有(22)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:155的氨基醋列的108214位的氨基齡列；(24)抗體，該抗體含有(22)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107~213位的胺基酸序列；(25)抗體，該抗體具有(19)所述的H鏈和(22)所述的L鏈；(26)抗體，該抗體具有(20)所述的H鏈和(23)所述的L鏈；(27)抗體，該抗體具有(21)所述的H鏈和(24)所述的L鏈；(28)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:73的氨基^列、作為CDR2的SEQIDNO:75的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:77的胺基酸序列；(29)抗體，該抗體含有(28)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:157的胺基酸序列的119~442位的氨基醯字列；(30)抗體，該抗體含有(28)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:IO的胺基酸序列的117-446位的胺基酸序列；(31)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:79的氨基S^列、作為CDR2的SEQIDNO:81的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:83的胺基酸序列；(32)抗體，該抗體含有(31)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:159的胺基酸序列的109~215位的胺基酸序列；(33)抗體，該抗體含有(31)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107~213位的胺基酸序列；(34)抗體，該抗體具有(28)所述的H鏈和(31)所述的L鏈；(35)抗體，該抗體具有(29)所述的H鏈和(32)所述的L鏈；(36)抗體，該抗體具有(30)所述的H鏈和(33)所述的L鏈；(37)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:85的胺基酸序列、作為CDR2的SEQIDNO:87的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:89的胺基酸序列；(38)抗體，該抗體含有(37)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:161的氨基斷列的117~440位的胺基酸序列；(39)抗體，該抗體含有(37)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的胺基酸序列的117-446位的胺基酸序列；(40)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:91的氨基S^列、作為CDR2的SEQIDNO:93的氨基^列、以及作為CDR3的SEQIDNO:95的胺基酸序列；(41)抗體，該抗體含有(40)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:163的胺基酸序列的108-214位的氨基^f列；(42)抗體，該抗體含有(40)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的胺基酸序列的107~213位的胺基酸序列；(43)抗體，該抗體含有(37)所述的H鏈和(40)所述的L鏈；(44)抗體，該抗體含有(38)所述的H鏈和(41)所述的L鏈；(45)抗體，該抗體含有(39)所述的H鏈和(42)所述的L鏈；(46)抗體，該抗體含有H鏈，所述H鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:97的氨基斷列、作為CDR2的SEQIDNO:99的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:101的胺基酸序列；(47)抗體，該抗體含有(46)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:165的胺基酸序列的113-436位的氨基斷列；(48)抗體，該抗體含有(46)所述的H鏈，其中H鏈具有作為CH的SEQIDNO:10的氨基,列的117~446位的胺基酸序列；(49)抗體，該抗體含有L鏈，所述L鏈具有作為CDR1的SEQIDNO:103的氨基,列、作為CDR2的SEQIDNO:105的胺基酸序列、以及作為CDR3的SEQIDNO:107的胺基酸序列；(50)抗體，該抗體含有(49)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:167的氨基齡列的108~214位的胺基酸序列；(51)抗體，該抗體含有(49)所述的L鏈，其中L鏈具有作為CL的SEQIDNO:20的氨基酉拼列的107~213位的胺基酸序列；(52)抗體，該抗體具有(46)所述的H鏈和(49)所述的L鏈；(53)抗體，該抗體具有(47)所述的H鏈和(50)所述的L鏈；(54)抗體，該抗體具有(48)所述的H鏈和(51)所述的L鏈；(55)抗體，該抗體是在(1)(54)中任一項所述的抗體中有一個或多個胺基酸被置換、缺失、附加和/或插入而得到的抗體，所得抗體與(1)(54)中任一項所述的抗體具有同等活性；(56)抗體，該抗體與表位結合，所述表位與(1)(55)中任一項所述的抗體所結合的EREG蛋白質的表位相同；(57)(1)(56)中任一項所述的抗體的小分子抗體。20.權利要求10-20中任一項所述的抗體，其特徵在於識別SEQIDN0:21的胺基酸序列中第29位的Ala第69位的Ser或第63位的Val第108位的Leu。21.EREG蛋白質和/或EREGmRNA作為癌症診斷標誌物的應用。22.癌症的診斷方法，該方法包括使與EREG蛋白質結合的抗體與EREG蛋白質結合的步驟。23.癌症的診斷方法，該方法包括以下步驟(a)從受試者體內採集試樣的步驟；(b)使用與EREG蛋白質結合的抗體檢測採集的試樣中所含的EREG蛋白質的步驟。24.癌症的診斷方法，該方法包括(l)給予受試者用放射性同位素標記的與EREG蛋白質結合的抗體的步驟；以及(2)檢測上述放射性同位素的累積的步驟。25.權利要求22所述的診斷方法，其中，放射性同位素為正電子發射核素。26.權利要求25所述的診斷方法，其中，正電子發射核素為選自"C、13N、150、18F、45Ti、55Co、64Cu、66Ga、68Ga、76Br、89Zr和1241的任一種核素。27.癌症的診斷方法，其特徵在於檢測編碼EREG蛋白質的基因的表達。28.權利要求22~27中任一項所述的診斷方法，其中，癌症為選自大腸癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌和腎癌的任一種癌。29.權利要求28所述的診斷方法，其中，癌症為原發性癌症。30.權利要求28所述的診斷方法，其中，癌症為轉移性癌症。31.診斷藥物，該診斷藥物含有與EREG蛋白質結合的抗體，並在癌症的診斷方法中應用。32.試劑盒，該試劑盒含有與EREG蛋白質結合的抗體和包括EREG蛋白質的生物試劑，並在癌症的診斷方法中應用。33.癌症治療藥的候選化合物的篩選方法，該方法包括以下步驟(1)使被檢化合物與EREG表達細胞接觸的步驟；(2)測定EREG表達細胞中EREG的表達水平的步驟；以及(3)選擇與對照相比使EREG的表達水平降低的化合物作為癌症治療藥的候選化合物的步驟。34.權利要求33所述的方法，其中，EREG的表達水平通過分泌在培養上清中的EREG蛋白質的水平來評價。35.癌症治療藥的候選化合物的篩選方法，該方法包括以下步驟(1)在EREG和被檢化合物的存在下，培養EREG依賴性增殖的細胞的步驟；(2)測定細胞增殖水平的步驟；以及(3)選擇與對照相比抑制細胞增殖的被檢化合物作為癌症治療藥的候選化合物的步驟。全文摘要本發明公開了癌症的診斷方法，其特徵在於檢測epiregulin(EREG)蛋白質。發現EREG在大腸癌、肺腺癌、胰腺癌、胃癌或腎癌中以非常高的頻率、在基因水平和蛋白質水平表達亢進。在本發明的癌症的診斷或治療中，使用識別EREG蛋白質的抗體。還公開了含有與EREG結合的抗體作為有效成分的藥物組合物、細胞增殖抑制劑和抗癌藥。進一步公開了通過使EREG表達細胞和與EREG結合的抗體接觸，在EREG表達細胞中引發細胞毒的方法和抑制EREG表達細胞的增殖的方法。文檔編號A61P35/00GK101594883SQ20078004591公開日2009年12月2日申請日期2007年10月12日優先權日2006年10月12日發明者伊藤浩孝,吉田賢二,油谷浩幸申請人:株式會社未來創藥研究所;國立大學法人東京大學