Rar拮抗劑或反向激動劑在治療化學療法和/或放射療法副作用中的用途的製作方法

2023-05-30 14:56:21 1

專利名稱：Rar拮抗劑或反向激動劑在治療化學療法和/或放射療法副作用中的用途的製作方法
技術領域：
本發明 一般地涉及治療哺乳動物的化學療法和放射療法的副作
用的方法。
2. 相關技術描述
一般地，哺乳動物的正常細胞以有序和可控的方式生長和分裂。 癌是一種其中細胞變得異常(癌細胞)並開始不受控制地增殖，發展 成為被稱為胂瘤的額外的組織塊的疾病。這些癌細胞能夠侵入鄰近的 組織，並通過血流和淋巴系統擴散到身體的其它部分。
目前，四種主要的癌症治療類型是免疫療法、外科手術、放射療 法和化學療法。這些癌症治療可以單獨或相互結合應用。因此，癌症 患者同時可以經受一種或多種治療。 一次治療可以持續一段時期，期
間以不同的時間間隔給予多次治療。免疫療法試圖激發或恢復免疫系 統抵抗疾病的能力。它也可以用來減輕由某些癌症治療導致的免疫系 統相關的副作用。外科手術試圖直接從身體中去除腫瘤。
放射療法，也叫放射線療法，使用來自x-射線、？射線、中子和 其它來源的高能輻射通過損傷細胞的遺傳物質來殺死癌細胞並縮小 腫瘤。儘管癌細胞受到永久損傷並最終死亡，但在放射治療中損傷的 正常細胞能夠自身修復。在放射治療過程中可能發生的副作用包括治療部位的皮膚刺激和毛髮脫落以及骨髓損傷。
化學療法單獨或聯合使用細胞毒藥物來破壞癌細胞。如同放射療 法一樣，癌細胞受到損傷並最終死亡，但在治療過程中受到影響的正 常細胞在化學療法之後能夠自身修復。細胞毒藥物通過幹擾生長中的 細胞分裂和自身複製的能力來發揮作用。因此，除了癌細胞以外，其 它的快速分裂、生長的正常細胞也會受到影響。例如，會影響骨髓中 形成的血細胞，導致骨髓抑制。也會對例如消化道、口腔內層和生殖
系統的細胞產生影響，導致腹瀉和口腔潰瘍；也會對毛嚢產生影響， 導致毛髮脫落。
骨髓抑制是化學療法和放射療法的許多副作用中的 一種。它導致 包括紅細胞、白細胞和血小板在內的血細胞的生成減少。因此，患者 會由於貧血而出現疲勞，由於白細胞減少而變得更容易感染，由於血 小板減少而易於出現瘀傷並在劃傷時更多地出血。 一般用藥物對抗骨 髓抑制副作用。例如，Epogen (促紅細胞生成素(epoietina))已 用來對抗癌症化學療法中的貧血副作用，WinRho SDF ( Rh。 (D)免 疫球蛋白)已用來對抗血小板減少副作用。
預防或者保護癌症患者免遭化學療法和放射療法的副作用，會給 癌症患者帶來巨大的益處。以前對於減少這些副作用的許多努力大多 不成功。對於威脅生命的副作用，工作集中在改變化學療法和放射療 法的藥物劑量和時間表來減少副作用。也可採用其它選擇，如使用粒 細胞集落刺激因子(G-CSF)、粒細胞-巨噬細胞-CSF (GM-CSF)、 表皮生長因子(EGF)、白介素ll (il-ll)、促紅細胞生成素、血小 板生成素、巨核細胞形成和生長因子、pixykines、幹細胞因子、FLT-配體、以及白介素l、 3、 6和7，來在開始化學療法之前增加各種組織 中的正常細胞數。這些因子的保護機制雖然沒有完全理解，但最有可 能與細胞毒藥物或放射療法治療之前正常臨界靶細胞數的增加有關， 而與化放療後細胞存活率的增加無關。
一般地，嗜中性細胞，也被稱為多形核白細胞，是最多的已知作 為粒細胞的血細胞。嗜中性細胞是與急性炎症反應有關的最大的細胞細胞通過包圍並消化(一種稱為吞噬作用的過程)來破化諸如細菌的 外來微粒。嗜中性細胞可以響應細菌感染而增多。當需要許多嗜中性 細胞時，它們作為未成熟細胞從骨髓釋放出來，被稱為條狀或杆狀細 胞。嗜中性細胞減少症是一種特徵為異常低的嗜中性粒細胞數的血液 障礙。因此，患有嗜中性細胞減少症的患者更容易細菌感染，並且這 些狀況可能變得威脅生命。
嗜中性細胞減少症可能繼發於諸如癌症或獲得性免疫缺陷綜合 症(AIDS)的另一種狀況。嗜中性細胞減少症也可能繼發於諸如藥 物治療的事件。因此，嗜中性細胞減少症可能是由直接影響免疫系統 的生理障礙引起的。例如，當白血病、骨髓瘤、淋巴瘤或諸如乳腺癌 或前列腺癌的轉移性實體瘤浸潤並替代骨髓時，導致嗜中性細胞生成 減少。暫時性的嗜中性細胞減少經常與病毒感染有關。慢性嗜中性細 胞減少經常與病毒感染導致的免疫缺陷有關，例如與感染人類免疫缺
陷病毒(HIV)導致的AIDS有關。自身免疫性嗜中性細胞減少可能與
循環的抗嗜中性細胞抗體有關。
嗜中性細胞減少症的一個更常見的原因是藥物治療的副作用，尤 其是治療癌症的化學療法和放射療法和與癌症治療有關的骨髓移植 的副作用。繼發於藥物治療的嗜中性細胞減少症因而可以細分為兩 類。第 一類包括由作為半抗原刺激抗體生成的藥物引起的免疫介導的 嗜中性細胞減少症。急性超敏反應，如由苯妥英和苯巴比妥導致的急 性超敏反應，可能持續幾天。但是，慢性超敏反應可能持續數月或數年。
第二類由藥物誘導的嗜中性細胞減少症包括嚴重的嗜中性細胞 減少症，其可預見性地出現於大劑量的腫瘤細胞滅減性癌症藥物或電 離輻射治療之後。由於噬中性前體細胞的增殖性質和循環嗜中性細胞 的正常的快速更新率，這些細胞毒性治療誘導嗜中性細胞減少症。繼 發於癌症化學治療或放射治療的嗜中性細胞減少症的風險取決於諸 如癌症的類型和階段和癌症治療的類型、劑量和時間表這樣的因素。
18現有的用於提高嗜中性細胞水平的治療主要由非格司亭
(filgrastim (Neupogen ))和更新的非格司亭的更長效的衍生物 pegfilgrastim (Neulasta⑧)組成。非格司亭是人類蛋白質G-CSF的重組形 式，其選擇性地刺激白細胞的生成。G-CSF是目前為治療嗜中性細胞 減少症而選擇的藥物。由於這兩種藥物都是重組蛋白質，它們口服無 活性，必須通過注射給藥。另外，基於蛋白質的藥物通常被快速代謝。 儘管化學治療和放射治療領域具有進展，但是現有技術的藥物和 方法已證明在最小化由化學治療和放射治療引起的副作用方面具有 有限的作用，這樣的副作用例如有化學療法誘導的脫髮、放射療法誘 導的脫髮、化學療法誘導的血小板減少症、放射療法誘導的血小板減 少症、化學療法誘導的白細胞減少症、放射療法誘導的白細胞減少症、 化學療法誘導的嗜中性細胞減少症和放射療法誘導的嗜中性細胞減 少症。因此，希望提供改進的治療哺乳動物中的這些化放療副作用的 方法。
發明概述
根據本發明的 一種實施方式，提供了 一種治療經受化學療法和/ 或方丈射療法的哺乳動物的化學療法和/或力文射療法副作用的方法，該方 法包括向該哺乳動物施用治療有效量的結合RARa、 RAR(3和RARy亞 型受體的視黃酸受體(RAR)拮抗劑或RAR反向激動劑的步驟。
根據本發明的第二種實施方式，提供了一種提高哺乳動物的血小 板產生的方法，該方法包括向該哺乳動物施用治療有效量的結合 RARa、 RAR卩和RARy亞型受體的RAR拮抗劑或RAR反向激動劑的步 驟。
根據本發明的第三種實施方式，提供了 一種治療患有血小板減少 症的哺乳動物的方法，該方法包^l舌向該哺乳動物施用治療有效量的結 合RARa 、 RAR卩和RARy亞型受體的RAR拮抗劑或RAR反向激動劑的步驟。
根據本發明的第四種實施方式，提供了一種治療具有造血相關狀況的哺乳動物的方法，該方法包括向該哺乳動物施用治療有效量的結
合RARa、 RAR(3和RAR7亞型受體的RAR拮抗劑或RAR反向激動劑的 步驟。這樣的狀況包括，但不限於降低的造血功能、降低的免疫功 能、減少的嗜中性細胞計數、降低的嗜中性細胞動員、外周血祖細胞 的動員、膿毒症、嚴重的慢性嗜中性細胞減少症、骨髓移植、傳染病、 白細胞減少症、血小板減少症、貧血、在移植過程中增強的骨髓植入、 在治療輻射、化學或化學治療誘導的骨髓發育不全或骨髓抑制中增強 的骨髓恢復、獲得性免疫缺陷綜合症、等等，及其組合。
附圖簡述


圖1A-1C是在環磷醯胺誘導的白細胞減少症小鼠模型中，VTP 194310對白細胞、嗜中性細胞和淋巴細胞計數的影響的圖示。
圖2A-2D是全-RAR拮抗劑VTP 194310對於ATRA驅動的HL60 細胞的嗜中性細胞分化的阻斷效應的圖示。用100 nM ATRA或100 nM ATRA與IOO nM的全-RAR拮抗劑VTP 1943IO —起處理設置為2.5 x 105細胞/毫升的HL60細胞5天。A顯示通過相差顯微術計數的活細胞 總數。根據細胞減少氮藍四唑的能力測定分化(B),使用單克隆抗 CDllb和FACS測定CDllb的表達(C)，以及在細胞聲波處理液中使 用[3H]-雌酮硫酸酯，然後提取[3H]-雌酮，測定甾類硫酸酯酶的活性 提尚。
圖3A和3B是VTP 194310和G-CSF的單獨或聯合使用對於嗜中性 細胞分化的效應的圖示。人類CD34+ve造血祖細胞(CD34-HPC)經柱 純化至均勻，並在千細胞因子(100ng/ml)和IL3 ( 20 ng/ml) ( ) 和這些條件以及IO nM ( □)和IOO nM ( A)的全特異性RAR拮抗劑 VTP 194310中培養。在幹細胞因子U00ng/ml) 、 IL3 ( 5 ng/ml)和 G-CSF (30ng/ml) ( ▲)中培養CD34-HPC來促進嗜中性細胞和單核 細胞的最佳產生。以一定的間隔通過多色FACS分析確定細胞表型。 一式三份建立培養， 一式兩份地對每個標記物進行多色FACS分析和 單色FACS分析。嗜中性細胞確認為CDllb+ve/CD65+ve和CD15+ve細胞。單核細胞確認為CDllb+ve/CD14+ve細胞。數據以平均值士SD表示。
圖4A-4C是VTP 194310對環磷醯胺誘導的白細胞減少症小鼠模型 中的嗜中性細胞計數和其它參數的影響的圖示。
圖5是VTP 194310對致死性感染金黃色葡萄糖球菌 (57，/^/ococcw awre"5 )的白細胞減少'J 、鼠的存活率的影響的圖示。 圖6A-6E是接受VTP 194310或/和PEG-G-CSF的小鼠的總白細胞 (WBC)、嗜中性細胞、淋巴細胞、紅細胞(RBC)和血小板數的總 變化的圖示。在第-1天至第1天以1或3 mg/kg/天的劑量經口施用載體 或VTP194310，在第0天腹膜內給予150mg/kg的CPM，在第2天皮下給 予PEG-G-CSF。按計劃收集血樣，並用Abbott Cell-DYN 3700確定血 細胞計數。數據代表7-8隻小鼠的平均值士SE。單位是細胞或血小板數 /)al。
圖7是與單獨使用每種藥物相比，使用VTP 194310和PEG-G-CSF 的方案治療白細胞減少症的效果的圖示，其進一步提高了嗜中性細胞 減少小鼠中的嗜中性細胞恢復速度。在第0天給予150 mg/kg CPM使小 鼠的嗜中性細胞減少，給予VTP 194310(在第-l天至第l天，3mg/kg/ 天)或PEG-G-CSF (在第2天，10pg/kg)的單一治療，和這些劑量的 聯合治療。數據代表7-8隻小鼠的平均值± SE。標出了治療組之間具 有統計學意義的/ 值。單位是細胞或血小板數"1。
圖8A-8E是在5-FU誘導的白細胞減少症小鼠模型中，接受VTP 194310或/和PEG-G-CSF的小鼠中的總白細胞(WBC)、嗜中性細胞、 淋巴細胞、紅細胞(RBC)和血小板數的變化的圖示。如圖所示，在 第2天至第4天以3 mg/kg/天的劑量經口施用載體或VTP 194310，在第0 天靜脈內給予150mg/kg 5-FU，並在第5、 6或7天皮下給予PEG-G-CSF。 按計劃收集血樣，並用Abbott Cell-DYN 3700確定血細胞計數。數據 代表8隻小鼠的平均值士SE。單位是細胞或血小板數/pl。
圖9是比較VTP 194310或peg-G-CSF單獨治療和聯合治療對於 5-FU誘導的嗜中性細胞減少小鼠中的嗜中性細胞恢復的效果的圖示。
21在第0天用150 mg/kg 5-FU使'J 、鼠的嗜中性細胞減少，給予VTP 194310 (在第2天至第4天，3 mg/kg/天)或peg-G-CSF(第5、 6或7天，10 pg/kg )
的單一治療，和這些劑量和方案的聯合治療。數據代表8隻小鼠的平 均值士SE。
發明詳述
本發明涉及採用至少 一種結合RARa 、 RAR(3和RARy亞型受體的 視黃酸受體(RAR)拮抗劑和/或反向激動劑(即，該RAR拮抗劑或 RAR反向激動劑結合所有的RARa、 RAR(3和RARy亞型)治療經受化 學療法和/或放射療法(即，化放療)的哺乳動物的化學療法和/或放 射療法副作用的方法。這樣的副作用包括，但不限於化學療法誘導 的脫髮、放射療法誘導的脫髮、化學療法誘導的血小板減少症、放射 療法誘導的血小板減少症、化學療法誘導的白細胞減少症、；故射療法 誘導的白細胞減少症、化學療法誘導的嗜中性細胞減少症、放射療法 誘導的嗜中性細胞減少症、等等，及其組合。
可用於測定RARa、 RAR卩和RARy亞型中的激動劑活性的一種試 驗在Feigner, P丄.和Holm, M., Focus, 11:2, 21+ (1989)和美國專利5 455 265和7 166 726中有描述，本文完整引入以上所有文獻作為參考。
通過Klein等人，J, Biol. Chem. 271， 22692-22696 (1996)的方法檢 測類視黃醇反向激動劑的活性，本文引入其作為參考。
類視黃醇，尤其是全反式視黃酸(ATRA),對於正常的哺乳動 物發育是必要的，因為它們在控制廣泛範圍的細胞類型的生存、增殖 和分化中發揮重要的作用。ATRA和合成的類視黃醇能夠結合併活化 兩種不同的細胞內受體家族，RAR和類一見黃醇X受體(RXR),導致 基因表達的調控。鑑定的第一種視黃酸受體被稱為RARa，用來以配 體依賴的方式調節特定靶基因的轉錄，已經表明對於甾體/曱狀腺激素 細胞內受體超家族的許多成員都是這樣。RARa的轉錄調節活性所依 賴的內源性低分子量配體是ATRA。視黃酸受體介導的基因表達改變 導致細胞表型的特徵性改變，結果在許多組織中表現出對於ATRA的生物學應答。另外兩個與RARa緊密相關的基因被稱為RARP和RARy。 如同RAR,也已知RXR具有至少3個亞型或同工型，即RARa、 RAR卩 和RARy,具有相應的獨特的表達模式(Manglesdorf等人，Genes & Devel.，6: 329-44 (1992))。
相信向哺乳動物施用包含結合RARa、 RARp和RARj亞型受體的 RAR拮抗劑和/或RAR反向激動劑的組合物可以提高血液的嗜中性細 胞和血小板的產生，從而治療諸如化學療法誘導的白細胞減少症和/ 或血小板減少症的化學療法副作用。
結合RARa 、 RAR卩和RARy亞型受體的RAR拮抗劑和反向激動劑 的代表性的例子和其製備方法是本領域內熟知的，例如，美國專利5 776 699和5 958 954和公開號為2002/0193403的美國專利申請，本文完 整引入它們中每一個的內容作為參考。許多下面的化合物包括在這些 申請和/或專利的一個或多個中。
本發明的 一個具體的實施方式是一類可以使用的由通式I代表的 化合物
或其藥學上可接受的鹽；
其中，X為S、 O、 NR，其中R為H或含有l-6個碳的烷基，或 X為[C(R"丄，其中，R^獨立地為H或含有l-6個碳的烷基，且n為 0-2的整數；
R2獨立地為氫、含有l-6個碳的低級烷基、F、 Cl、 Br、 I、 CF3、 氟取代的含有l-6個碳的烷基、OH、 SH、含有l-6個碳的烷氧基或含 有l-6個碳的烷硫基；
23R 獨立地為氫、含有1-6個碳的低級烷基或F;
m為0-3的整悽史；
n為0-4的整數；
o為0-3的整數；
Z為-CONR1—、畫CSNR1—、畫NR^CO-、畫NR^CS畫、畫C三C-、 -C=C-、 -N=N-、 —N二CR1—、 —CR^N畫、畫COO-、 -OCO-、 -OSO畫、腳OCS-或
-(CR^CR1:^,-,其中，n為0-5的整數；
Y為苯基或萘基，或為選自吡啶基、噻吩基、呋喃基、噠嗪基、 嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、噁唑基、咪唑基和吡唑基的雜芳基，該苯 基和雜芳基任選地被一個或兩個W基團取代，或當Z為-(CR產CROn.-且n'為3、 4或5時，Y代表所述(CR^CR2)n,基團和B之間的直接價鍵；
A為(CH2)q (其中q為0-5)、含有3-6個碳的低級支鏈烷基、含有 3-6個碳的環烷基、含有2-6個碳和l或2個雙鍵的烯基、含有2-6個碳和 l或2個叄鍵的炔基；
B為氬、COOH或其藥學上可接受的鹽、COOR8、 CONR9R1、 CH2OH、 CH20R11、 CH20COR11、 CHO、 CH(OR12)2、 CHOR130、畫COR7、 CR7(OR12)2、 017011130或三-低級烷基矽基；
!^為含有l-5個碳的烷基、環烷基或烯基；
Rs為含有l-10個碳的烷基或三曱基矽烷基(其中，烷基含有1-10 個碳)、含有3-10個碳的環烷基、苯基或低級烷基苯基；
W和R"獨立地為氫、含有1-10個碳的烷基、含有3-10個碳的環烷 基、苯基或低級烷基苯基；
R"為低級烷基、苯基或低級烷基苯基；
R^為低級烷基；
R"為含有2-5個碳的二價烷基；
R"為(R、-苯基、(R"X-萘基或(R")r-雜芳基，其中，雜芳基含有 l-3個選自0、 S和N的雜原子，且r為0-5的整數；且
R"獨立地為H、 F、 Cl、 Br、 I、 N02、 N(R8)2 、 N(R8)COR8 、 NR8CON(R8)2、 OH、 OCOR8、 OR8、 CN、含有1-10個碳的烷基、氟取代的含有1-10個碳的烷基、含有2-10個碳和l-3個雙鍵的烯基、含有 2-10個碳和l-3個叄鍵的炔基或三烷基矽基或三烷基矽氧基(其中，烷 基獨立地含有l-6個碳)。
本發明的另 一 個具體的實施方式是 一 類可以使用的由式I代表的 化合物，其中，Z為-CONR1-、 -CSNR1-、 -NR^CO-或-NRtS-,且其中 所有其它變量如上定義。
本發明的另一個具體的實施方式是一類可以使用的由式I代表的 化合物，其中
Rs為含有l-10個碳的烷基或三曱基矽烷基(其中，烷基含有1-10 個碳)、含有5-10個碳的環烷基、苯基或低級烷基苯基；
R、口R"獨立地為氫、含有1-10個碳的烷基、含有5-IO個碳的環烷 基、苯基或低級烷基苯基；且其中所有其它變量如上定義。
本發明的另 一個具體的實施方式是一類可以使用的由通式II代表 的化合物
(R、(R2)m (11)，
或該化合物的藥學上可接受的鹽；
其中，X為-C(R、-或-0-, Ri為H或C!-C6烷基；
R2為C廣C6低級烷基、-F、 -Cl、 -Br、 -1、 -CF3、氟取代的C廣C6烷 基、-OH、 -SH、 C廣C6烷氧基或d-C6烷硫基；
m為0-3的整H;
n為0-4的整lt;
o為0-3的整數；
R 為d-C6烷基或-F;
RS為d-do烷基、d-do三甲基矽烷基、C3-do環烷基、苯基或級烷基苯基；
每個R"獨立地為-H、畫F、 -Cl、 -Br、 -1、 -N02、 -N(R8)2、畫COR8、 -NR8CON(R8)2、 -OCOR8、 -OR8、畫CN、 C廣d。烷基、氟取代的C廣d。 烷基、含有1-3個雙鍵的CVd。烯基、含有l-3個叄鍵的C2-C!o炔基或 d-C6三烷基矽基或三烷基矽氧基；
t為0-5的整數；且
-CONH基處於苯並吡喃和二氫萘環的6或7位。
本發明的另一個具體的實施方式是一類可以使用的由通式II代表 的化合物，其中
W為F; Rs為含有l-10個碳的烷基、三曱基矽烷基(其中，烷基含 有1-10個碳)或含有5-10個碳的環烷基、苯基或低級烷基苯基；且
R"獨立地為H、 F、 Cl、 Br、 I、 N02、 N(R8)2、 COR8、 NR8CON(R8)2、 OCOR8、 OR8、 CN、含有1-10個碳的烷基、氟取代的含有1-10個碳的 烷基、含有l-10個碳和l-3個雙鍵的烯基、含有l-10個碳和l-3個叄鍵 的炔基或三烷基矽基或三烷基矽氧基(其中，烷基獨立地含有l-6個 碳)；且其中所有其它變量如上定義。
本發明的另 一 個具體的實施方式是 一 類可以使用的由通式III代 表的化合物
(III),
或其藥學上可接受的鹽；
其中，X為-C(CH3)2-或-0-; R2為-H或-Br，R2'和R"獨立地為-H或-F; 每個R 獨立地為-H或-CH3;且 118為-H或Q-C6烷基。
本發明的另 一個具體的實施方式是一類可以使用的由通式IV代 表的化合物
(IV),
或其藥學上可接受的鹽；
其中，Xi為-S-或-O-; X2為-CH-或-N-;
R2為-H、 -F、 -CF3或d-C6烷氧基; R2〃為-H、 -F或-CF3; R8為-H或d-C6烷基；
R"為未取代的苯基、噻吩基或吡啶基，或用1-3個R"基團取代的
苯基、瘞吩基或吡啶基；且
每個R"獨立地為d-C6烷基、-Cl、 -CF3或d-Q烷氧基。
本發明的另 一個具體的實施方式是一類可以使用的由通式V代表
的化合物
或其藥學上可接受的鹽;
27其中，x2為-CH-或-N-; R2為-H、 -F或-OCH3; R"為-H或-F; Rs為-H或d-C6烷基；且
R"選自苯基、4-(低級烷基)苯基、5-(低級烷基)-2-噻吩基和6-(低 級烷基)-3-吡啶基，其中，低級烷基含有l-6個碳。
本發明的另 一個具體的實施方式是一類可以使用的由通式VI代 表的化合物
或其藥學上可接受的鹽；
其中，RS為-H或d-Q烷基。
本發明的另 一個具體的實施方式是一類可以使用的由通式VII代 表的化合物
或其藥學上可接受的鹽； 其中，R"為-H或-F; Rs為-H或d-C6烷基；且 R"選自苯基和4-(CrC6烷基)苯基。本發明的另 一個具體的實施方式是一類可以使用的由通式VIII代
表的化合物
或其藥學上可接受的鹽；
其中，RS為H或d-C6烷基。當RS為H時，該化合物被稱為AGN 193109。
本發明的另 一個具體的實施方式是一類可以使用的由通式IX代 表的化合物
或其藥學上可接受的鹽；
其中，X為-C(R、-、 -C(R1)2-C(R1)2-、 -S-、 -O-、 -NR1-, -C(R、-0-、 -(C(R"2-S-或-C(R"2-NR、其中，每個R^獨立地為-H或Q-C6烷基；
每個R2獨立地為d-C6烷基、-F、 -Cl、 -Br、 -1、 -CF3、氟取代的 CrC6烷基、-OH、 -SH、 C廣C6烷氧基或CrC6烷硫基;
m為0-4的整悽i;
n為0-2的整數；
o為0-3的整數；
R3為-H、 C廣C6烷氧基、-F、 -Cl、 -Br或-I;
114為(11 -苯基、(R5)p-萘基或(RS)p-雜芳基，其中，雜芳基為五元
Y(Rz)m-A-B
(IX),
29或六元的，含有l-3個選自氧、硫和氮的雜原子，且其中，p為0-5的整
數；
每個R5獨立地為-F、畫C1、 -Br、國I、 -N02、 -N(R8)2、 -N(R8)COR8、 -N(R8)CON(R8)2、 -OH、 -OCOR8、 -OR8、 -CN、 -COOH、 -COOR8、 d-C,。烷基、含有l-3個雙鍵的d-do烯基、含有l-3個叄鍵的C廣do炔 基、CrC6(三烷基)矽基或d-C6(三烷基)矽氧基；
Y為苯基或萘基，或選自吡啶基、噻吩基、呋喃基、噠嗪基、嘧 啶基、吡嗪基、噻唑基、噁唑基、咪唑基和吡唑基的雜芳基，其中， 所述苯基和雜芳基任選且獨立地被一個或兩個112基團取代，或Y
為-(CR3K:R3)廣； r為l-3的整數；
a為(ch。q、 C3-C6低級支鏈烷基、C3-q環烷基、含有1或2個雙鍵
的CVC6烯基、含有1或2個叄鍵的CVC6炔基，其中，q為0-5的整數, 條件是當Y為-(CR3=CR3)r』t, A為(CH2)q且q為0;
B為-H、畫COOH、 -COOR8、 -CONR9R10、 -CH2OH、 -CHzOR11, -CHbOCOR11,畫CHO、 -CH(OR12)2、畫CHOR130、 -COR7、 -CR7(OR12)2、 畫CR70R"0或-Si(C^—6烷基)3;
R"為含有l-5個碳的烷基、環烷基或烯基；
RS為d-do烷基、CVdo(三曱基矽基)烷基或C5-do環烷基、苯基 或低級烷基苯基；
f^和R"獨立地為-H、 Crd。烷基、Cs-do環烷基、苯基或低級烷
基苯基；
R"為低級烷基、苯基或低級烷基苯基； 1112為低級烷基；且 R"為含有2-5個碳的二價烷基。
本發明的另 一個具體的實施方式是一類可以使用的由通式x代表 的化合物
y3(r4)畫x-y、r"(r2)-z-y2(r2)畫a-b (x),
或其藥學上可接受的鹽；其中，￥1為苯基、萘基，或選自吡啶基、瘞吩基、呋喃基、噠。秦 基、嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、噁唑基、咪唑基和吡唑基的雜芳基，
其中，苯基、萘基和雜芳基任選地被Ri基團取代，且任選地進一步被 1或2個W基團取代；
Ri為d—C1Q烷基、l-金剛烷基、2-四氫吡喃氧基、C廣C6三烷基矽 烷氧基(trialkylsilanyloxy ) 、 -OH 、 C廣d。烷氧基、C廣d。 或-OCH20-(C廣C6烷基)；
R2為C廣C6烷基、畫F、 -Cl、 -Br、畫I、 -CF3、 -CF2CF3、 -OH、 -OR3、
-n02、 -n(r3)2、 -cn、 -n3、 -cor3、 -nhcor3、 -cooi^-coor3;
x為-(c(r3)2)-、 -s國、畫so-、 -s02-、畫o-、畫c(k))-、 -c(=s)-、漏c(:nr1)-、 -c(k:(r"2)-或-nr3畫；
z為陽c^c-、 -n=n-、 -n(o):n畫、-n二n(o)-、 -n=cr3-、 -cr3=n-、 -(cr3=cr3)n-、 -oco-、畫cso-、 -ocs-、 -cocr3=r30-、 -co-nr3-、
-CS-NR3-、 ^尺3畫00-或^113^8-; n為0-5的整數；
每個R 獨立地為-H或C廠C6烷基；
￥2為苯基或萘基，或選自吡啶基、噻吩基、呋喃基、噠嗪基、嘧 啶基、吡。秦基、噻唑基、噁唑基、咪唑基和吡唑基的雜芳基，其中， 苯基、萘基和雜芳基可以未被取代或被1或2個112基團取代；條件是當 Z為-(CR、CR3)n-且n為3、 4或5時，y2代表所述-(CR^CR3)n-基團和B 之間的直接價鍵；
ys為苯基、萘基，或選自吡啶基、噻吩基、呋喃基、噠嗪基、嘧 啶基、吡。秦基、噻唑基、噁唑基、咪唑基和吡唑基的雜芳基，其中，
苯基、萘基和雜芳基任選地被1-5個W基團取代；
每個R"蟲立地為d-do烷基、含有l-3個叄鍵的C2-Cn)炔基、-F、-Cl、 -Br、 -1、 -N02、 N(R3)2、 -N3、 -COOH、畫COO國(C廣C6烷基)、-OH、 -SH、
-0-01-(:6烷基或-8-(:1-(:6烷基；
A為(CH2)q、 CVC6低級支鏈烷基、C3-C6環烷基、含有l-2個雙鍵的
C2-Q烯基、含有1-2個叄鍵的C2-Q炔基，其中，q為0-5的整數；
31B為-H、 -COOH、 -COOR8、 -CONR9!^ -CH2OH、 -CHbOR1: -CH20COR11、 -CHO、 -CH(OR12)2、 -CHOR130、 -COR7、 -CR7(OR12)2、 -CR70R^O或-Si(d-C6烷基)3;
R"為含有l-5個碳的烷基、環烷基或烯基；
Rs為d-C!。烷基、C,-d。三曱基矽基烷基、Qrdo環烷基、苯基或 低級烷基苯基；
119和111獨立地為氫、Crd。烷基、CVdo環烷基、苯基或低級烷 基苯基；
R"為低級烷基、苯基或低級烷基苯基； R"為低級烷基；且 R。為含有2-5個碳的二價烷基。
本發明的另 一個具體的實施方式是一類可以使用的由通式X代表 的化合物，其中，X為-(C(R3)2)-、 -S-、 -SO-、 -S02-、 -0-或-NR3-; Z 為-CO-NR3-、 -CS-NR3-、 -NR3-CO-或-NR3-CS-,且其中所有其它變量 如上定義。
本發明的另 一個具體的實施方式是一類可以使用的由通式X代表 的化合物，其中，X為-C(-O)-、 -C(=S)-、 -C^NJ^^-C^CXR1:^-; Z 為-CO-NR3-、 -CS-NR3-、 -NR3-C0-或-NR3-CS-，且其中所有其它變量 如上定義。
本發明的另 一個具體的實施方式是一類可以使用的由通式X代表
的化合物，其中，f代表的苯基、萘基或雜芳基未被取代或被i-3個
114基團取代；且其中所有其它變量如上定義。
本申請涉及4吏用4壬 一 種作為結合RARa 、 RAR (3和RARy亞型受體 的RAR拮抗劑和/或反向激動劑的化合物，包括在以下美國專利和美 國申請中記載或要求保護的化合物美國專利5 728 846、 5 739 338、
5 763 635、 5 773 594、 5 877 207、 5 952 345、 5 958 954、 5 998 655、
6 008 204、 6 037 488、 6 043 381、 6 087 505、 6 090 810、 6 117 987、 6 211 385、 6 218 128、 6 225 494、 6 228 848、 6 235 923、 6 313 168、 6 521 624、 6 521 641、 6 538 149、 6 555 690、 6 653 483、 6 720 425、6 818 775、 6 942 980、 7 105 566和7 166 726和美國申請10/446 580、 11/016 534、 11/500 277、 11/503 635、 11/607 406和11/643 754。本文
完整引入所有上述參考的專利和專利申請作為參考。
美國專利5 728 846公開了落入說明書內的化合物的非排他性列 表和製備這類化合物的方法，本文引入該專利的內容作為參考。另外， 在序號為08/840 040的美國專利申請(Song等人)中也公開了這些化 合物，這項申請與本申請具有共同的所有權，完整引入本文作為參考。 本發明的方法中使用的一種優選化合物由以下結構代表
或其藥學上可接受的鹽。該化合物被稱為VTP 194310 (以前被稱為 AGN 194310 )。
本發明的方法中使用的另 一種優選化合物由以下結構代表
或其藥學上可接受的鹽。該化合物被稱為VTP 196996。
在序號為08/845 019的美國專利申請(Song等人)中描述了另外 的RAR拮抗劑或反向激動劑，本文將其完整引入作為參考；並且與本 申請具有共同的所有權。另外，在公開號為WO 94/14777的國際申請
,本文
33也將其完整引入作為參考。後 一 申請公開了 RAR拮抗劑。
此外，可在本發明方法中使用的另外的化合物的結構如下:
或其藥學上可接受的鹽；其中，n為l-10的整數;
或其藥學上可接受的鹽；其中，n為l-10的整數;
或其藥學上可接受的鹽;formula see original document page 35
或其藥學上可接受的鹽；和
或其藥學上可接受的鹽。
本文所用的術語"激動劑"可以理解為結合受體並活化它，從而產 生藥理響應(例如，收縮、放鬆、分泌、酶活化等)的化合物。
本文所用的術語"反向激動劑"可以理解為產生與激動劑相反的 效應，但作用於相同受體的化合物。術語"反向激動劑"與術語"負性 拮抗劑"同義。
本文所用的術語"拮抗劑"可以理解為通過結合與激動劑相同的 位點而削弱激動劑的效應，但不活化受體的化合物。
本文所用的術語"化放療"可以理解為化學療法、放射療法或這二者。
本文所用的術語"治療"可以理解為(l)部分或完全預防、減輕哺乳 動物中發展的狀態、疾病、障礙、損傷或狀況的臨床症狀的嚴重性或 延遲其出現，該哺乳動物可能患有或者易患所述狀態、疾病、障礙、 損傷或狀況但是還沒有發生或表現出所述狀態、疾病、障礙、損傷或
狀況的臨床或亞臨床症狀；(2)部分或完全抑制所述狀態、疾病、障礙、 損傷或狀況，即，抑制或減輕所述狀態、疾病、障礙、損傷或狀況或 其至少一種臨床或亞臨床症狀的發展；或(3)部分或完全緩解所述狀態，或減輕所述疾病、障礙、損傷或狀況的嚴重性，即，使所述狀態、 疾病、障礙、損傷或狀況或其至少一種臨床或亞臨床症狀減輕。
本文所用的術語"遞送"應當理解為向哺乳動物內的特定部位提
供治療有效量的能夠結合RARa 、 RAR卩和RARy型受體的RAR拮抗劑 或RAR反向激動劑，導致在特定的部位出現治療有效濃度的結合 RARa、 RAR(3和RARy型受體的RAR拮抗劑或RAR反向激動劑。
本文所用的術語"受試者"、"患者"或"宿主"或"哺乳動物"是指包 括人類的哺乳動物。
單獨使用或作為諸如"烷氧基"和"羥烷基"的較大基團的 一部分使 用的術語"烷基"，是指含有1-10個碳原子的飽和脂肪族基團。代表性 的飽和直鏈烷基包括曱基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基等，而飽 和支鏈烷基包括異丙基、仲丁基、異丁基、叔丁基、異戊基等。術語 "低級烷基"指含有l-6個碳的烷基。烯基和炔基是不飽和脂肪族基團， 且在相鄰的碳原子之間含有至少 一個雙鍵或叄鍵。代表性的直鏈和支 鏈烯基包括乙烯基、丙烯基、l-丁烯基、2-丁烯基、異丁烯基、1-戊 烯基、2-戊烯基、3-曱基-l-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基等，而代表性的 直鏈和支鏈炔基包括乙炔基、丙炔基、l-丁炔基、l-戊炔基、2-戊炔 基、3-曱基-l-丁炔基等。
術語"環烷基"指飽和環烴部分，且包括環丙基、環丁基、環戊基、 環己基。環烷基也可以包括碳環系統，如含有8-10個碳原子的二環和 三環的環系統，如環烷基(例如，環戊烷或環己烷)與一個或多個芳 香碳環(如苯基)或非芳香碳環(如環己烷)稠合。
單獨使用或作為較大基團的一部分使用的術語"雜芳基"、"雜芳 香族"、"雜芳環"和"雜芳基基團"是指一般為5-14元的雜芳香環基團， 包括單環雜芳香環和多環芳香環，其中，單環雜芳香環與一個或多個 其它碳環或雜芳香族芳香環稠和。雜芳基含有一個或多個、 一般為l、 2或3個諸如氮、氧和硫的環雜原子。
本文所述的化合物及其藥學上可接受的鹽、溶劑化物和水合物的 "藥物組合物，，與藥學上可接受的載體或稀釋劑組合可以用於藥物製備。合適的藥學上可接受的載體包括惰性固體填充劑或稀釋劑和無菌 水溶液或有機溶液。SARM化合物在這樣的藥物組合物中的含量將足 以提供在本文描述的範圍內的所需的劑量。本發明的化合物的配製和
施用4支術可以在Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, Mack Publishing Co., Easton, PA (1995)中找到。
也包括藥學上可接受的鹽作為本發明的實施方式。
"藥學上可接受的鹽"是含有任何酸性或鹼性官能團的化合物的 鹽。例如，胺或其它鹼性基團的藥學上可接受的鹽可以通過將化合物 與諸如氯化氫、溴化氬、醋酸、高氯酸等合適的有機酸或無機酸反應 而獲得。這樣的鹽的其它例子包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、甲磺 酸鹽、硝酸鹽、馬來酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、延胡索酸鹽、酒石酸 鹽(例如，(+)-酒石酸鹽、(-)-酒石酸鹽或其混合物，包括外消旋混合 物)、琥珀酸鹽、苯甲酸鹽和與胺基酸(如穀氨酸)的鹽。
含有羧酸或其它酸官能團的化合物的藥學上可接受的鹽，可以通 過與合適的鹼反應來製備。這樣的藥學上可接受的鹽可以用提供藥學 上可接受的陽離子的鹼獲得，包括鹼金屬(尤其是鈉和鉀)鹽、鹼土 金屬(尤其是鈣和鎂)鹽、鋁鹽和銨鹽，以及由諸如三曱胺、三乙胺、 嗎啉、吡啶、哌啶、曱基吡啶、二環己基胺、N,N，-二千基乙二胺、 2-羥乙胺、二-(2-羥乙基)胺、三-(2-羥乙基)胺、普魯卡因、二節基哌 啶、N-千基-P-苯乙胺、脫氫樅胺、N，N，-二脫氫批胺、葡萄糖胺、N-曱基葡萄糖胺、可力丁、奎寧、喹啉和鹼性胺基酸(如賴氨酸和精氨 酸)的生理上可接受的有機鹼製備的鹽。
用於本發明的方法中的結合RARoc 、 RARP和RARy亞型受體的 RA R拮抗劑和RAR反向激動劑可以加入到藥物組合物中。可以預期所 有的給藥模式，例如，經口、直腸、腸胃外、局部，或通過靜脈內、 肌內、胸骨內或皮下注射，或通過吸入的合適的形式。合適的話，制 劑可以方便地為分散劑量單位的形式，並且可以通過藥劑學領域熟知 的任一種方法來製備。根據已知的和已經確定的實踐，化合物通常可 以與一種或多種藥學上可接受的成分一起配劑。因此，藥物組合物可以製成液體、粉末、酏劑、可注射的溶液、懸浮液、栓劑等。
口服使用的製劑可以為片劑或硬膠嚢，其中，化合物與諸如碳酸 鉤、磷酸釣或高呤土的惰性固體稀釋劑混合；或為軟的明膠膠嚢，其
中，活性成分與水或諸如丙二醇、PEG和乙醇的可混溶的溶劑或例如
花生油、液體石蠟或橄欖油的油脂性介質混合。
對於口腔局部給藥，藥物組合物可以採用通過常規方式配製的頰 含片或舌下片、滴劑或錠劑的形式。
對於表皮局部給藥，化合物可以製成霜劑、凝膠、軟膏或洗液或 透皮貼劑。這樣的組合物例如可以使用水性或油性基質通過加入合適 的增稠劑、膠凝劑、乳化劑、穩定劑、分散劑、懸浮劑和/或著色劑來 製備。
化合物也可以製成長效製劑(depot preparation )。這樣的長效作 用製劑可以通過植入(例如，皮下或肌內地)或肌肉注射來施用。因 此，例如，化合物可以與合適的聚合材料或疏水材料(例如，作為在 可接受的油中的乳劑)或離子交換樹脂或微溶性的衍生物例如微溶性 的鹽一起配劑。
化合物可以配製為用於通過注射、方便地靜脈內注射、肌肉內注 射或皮下注射的腸胃外施用，例如，通過快速濃注(bolus injection ) 或持續靜脈內輸注。注射製劑可以是添加有防腐劑的、例如在安瓿或 多劑量容器中的單位劑量形式。藥物組合物可以採取諸如在油性或水 性載體中的懸浮液、溶液或乳狀液的形式，可以含有諸如懸浮劑、穩 定劑和/或分散劑的輔劑。或者，化合物可以為粉末形式，在使用前用 諸如無菌無熱原的水的合適的載體配製。
化合物也可以製成諸如栓劑或保留灌腸劑的直腸組合物，例如， 含有諸如可可脂或其它甘油酯的常規栓劑基質。
對於鼻內給藥，例如，化合物可以作為液體噴霧劑、粉末或以液 滴的形式使用。
對於吸入給藥，化合物可以使用合適的拋射劑從加壓包或噴霧器 中以氣溶膠噴射的形式便利地遞送，合適的拋射劑例如有，二氯二氟
38曱烷、三氯氟曱烷、二氯四氟乙烷、四氟乙烷、七氟丙烷、二氧化碳 或其它合適的氣體。對於加壓氣溶膠，可以通過提供遞送計量量的閥 來確定劑量單位。可以製成用於吸入器或吹入器的例如明膠的膠嚢和
藥嚢(cartridge),其含有類視黃醇化合物和諸如乳糖或澱粉的合適 的粉末基質的粉末混合物。
水性懸浮液可以包含藥學可接受的賦形劑，如懸浮劑，例如，羧 甲基纖維素鈉、曱基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡 咯烷酮、黃蓍膠和阿拉伯樹膠；分散劑或潤溼劑，如天然存在的磷脂， 例如，卵磷脂，或烯化氧和脂肪酸的縮合產物，例如聚氧乙烯硬脂酸 酯，或環氧乙烷和長鏈脂肪醇的縮合產物，例如十七乙烯-氧代十六 醇(heptadecaethylene-oxycetanol),或環氧乙烷和由脂肪酸和己糖醇 生成的部分酯的縮合產物，例如聚氧乙烯山梨醇單油酸酯，或環氧乙 烷和由脂肪酸和己糖醇酐生成的部分酯的縮合產物，例如聚氧乙烯山 梨聚糖單油酸酯。水性懸浮劑也可以含有 一 種或多種例如對羥基苯曱 酸乙酯或對羥基苯曱酸正丙酯的防腐劑、 一種或多種著色劑、 一種或 多種調味劑和一種或多種諸如蔗糖、糖精或環己基氨基磺酸鈉或環己 基氨基磺酸鈣的甜味劑。
除了結合RARa、 RAR卩和RARy亞型受體的RAR拮抗劑和RAR反 向激動劑的化合物以外，至少 一 種其它的藥理活性物質可以與結合 RARa、 RARP和RARy亞型受體的RAR拮抗劑和RAR反向激動劑化合 物一起施用，所述藥理活性物質例如是，非麻醉鎮痛藥，如曲馬朵、 對乙醯氨基酚、阿司匹林、雙氯芬酸、氟苯水楊酸(diflusinal)、依 託度酸、芬布芬、非諾洛芬、氟苯柳、氟比洛芬、布洛芬、吲哚美辛、 酮洛芬、酮咯酸、曱氯芬那酸、甲芬那酸、萘丁美酮、萘普生、奧沙 普秦、保泰松、吡羅昔康、舒林酸、託美丁、佐美酸等及其組合，或 麻醉鎮痛藥，如可待因、羥考酮、雙氫可待因、氫可酮、左啡諾、嗎 啡等及其組合，或其它藥物，如G-CSF、 GM-CSF、 EGF、白介素ll、 促紅細胞生成素、血小板生成素、巨核細胞形成和生長因子、 pixykines、幹細胞因子、FLT-配體、以及白介素l、 3、 6和7等及其組合。
按照本發明以治療有效的量來施用化合物。治療濃度是治療哺乳 動物、優選人類的例如化放療副作用的有效濃度。本領域的技術人員 可以確定這些量。
以下是本發明的非限制性的實施例。這些實施例不應該理解為限 制如權利要求書限定的本發明的範圍。
每個下面的實施例使用Allergan Inc. ( Irvine, CA )合成的 4-2[6-(2,2-二甲基-(1//)-4-(4-乙基苯基)-l-苯並噻喃)乙炔基]苯甲酸 (VTP 194310，以前稱為AGN 194310 ),它是特異性的全-RAR拮抗 劑。VTP 194310的結構見前文。VTP 194310結合RARa、 (3和y的Ki分 別是3、 2和5nM。 VTP 194310在轉移活化分析中沒有顯示活性，但阻 斷了ATRA和其它RAR激動劑誘導的基因轉錄活性。VTP 194310和 ATRA作為在50o/o乙醇/50。/。二甲亞碸(DMSO )中的10mM儲備溶液 保存於-20 。C。
實施例l
在環磷醯胺誘導的白細胞減少症小鼠模型中，嗜中性細胞和淋巴細胞 的恢復
小鼠
從Charles River實驗室(Wilmington, MA)購買的小鼠，以12小 時的晝夜循環單獨飼養在微小隔離籠中。在無病原體條件下飼養這些 小鼠，並隨意接受正常標準食物和水。實驗前,動物在實驗動物管理 i平4古禾口鑑定十辦會(Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC))認可的動物設施(Allergan Inc., Irvine, CA )中適應一周。研究設計由動物管理和使用委員會 (Institutional Animal Care and Use Committee )認可。在每一項研究 的全過程中監測體重。在開始處理當天，小鼠的重量範圍為22-27 g。 小鼠是健康的，以前沒有在其它實驗操作中使用過。體內白細胞減少症模型
在雄性BDF1小鼠(C57B1 x DBA2, 7.5畫12周)中通過腹膜內(i.p.) 注射溶於0.2 ml鹽水的200 mg/kg環磷醯胺(CPM, Sigma-Aldrich， Saint Louis, MO )誘導白細胞減少症。VTP 194310對於白細胞恢復的 效果通過如結果部分指出的給動物口腔強飼l mg/kg的VTP 194310來 評價。用花生油作為載體稀釋VTP 194310 (溶於DMSO)(劑量為5 ml/kg)。對照小鼠單獨給予DMSO和載體。作為陽性對照，在第2天， 對CMP處理的小鼠通過單一皮下注射IO pg/kg的聚乙二醇化的重組蛋 氨醯人類粒細胞集落刺激因子(PEG+metHuG-CSF ) ( Neulasta， Pegfilgrastim; Amgen, Thousand Oaks, CA )來刺激粒細胞生成。進行 三個單獨的實驗。
在麻醉下使用肝素化的毛細管從小鼠的眶後靜脈收集外周血(60
pi),並轉移到EDTA包被的微量採集管(microtainer tubes )中(Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ)。用含有5%的牛血清白蛋白(組分V; Sigma, Saint Louis, MO)的PBS以1: 4稀釋血液，並使用Advia 120 Hematology System (Bayer Health Care Diagnostics Division, Tarrytown: NY),獲得每組至少3隻小鼠的白細胞、嗜中性細胞和淋巴細胞計數。 通過使用PE-和FITC-偶聯的單克隆抗體(Pharmingen, San Diego, CA)的雙重免疫染色在由脾和骨髓(股骨)抽吸物製備的單細胞懸 浮液中鑑定未成熟的(Gr-l"CDllb+ve)和成熟的(Gr-l+v7CDllb+ve) 嗜中性細胞。在使用CellQuest Pro軟體程序為界面的FACS Calibur (Becton Dickinson, San Jose, CA )上分才斤會田月包。
結果
數據顯示，使用VTP 194310提高了環磷醯胺誘導的白細胞減少症 小鼠模型的白細胞恢復。用200 mg/kg的CPM單一劑量處理小鼠在第4 天導致嚴重的白細胞減少和嗜中性細胞減少。在CPM處理的小鼠的血 液中的白細胞和嗜中性細胞計數分別為0.69 ± 0.09 (SEM) x 10Viul和0.09 ± 0.02 x 103/|li1,與之相比，正常小鼠的值分別為8.98 ± 0.33 x 10Viul和1.34士 0.09 x 103/|ul (來自正常對照組的數據未顯示)。如圖l 所示，在CPM處理的小鼠中，白細胞、嗜中性細胞和淋巴細胞計數穩 定上升，在第8天達到平穩值。
在第-4天至第-1天和第0天至第3天向用CMP處理過(在第0天) 的小鼠施用VTP 194310，以兩種方式提高了白細胞恢復。與白細胞減 少症'J、鼠的對照組相比，VT P194310處理的小鼠的白細胞和嗜中性細 胞計數更快地上升。早在CMP處理後第5天，觀察到恢復方面的顯著 差異。在第8天，在VTP 194310處理的白細胞減少症小鼠血液中的白 細胞和嗜中性細胞計數比單獨使用CPM處理的小鼠的血液中的計數 高大約3倍(見圖l)。在第4天至第7天給白細胞減少症小鼠施用VTP 194310,提高了產生的粒細胞和嗜中性細胞的數量，但達到的程度遠 遠低於在更早時給予VTP 194310的情況。使用Peg-r-metHuG-CSF (在 第2天)處理白細胞減少症小鼠，導致血液的嗜中性細胞數量急劇升 高。這些細胞的水平在第7天達到峰值，但到第8天下降到白細胞減少 症小鼠對照組中觀測到的數量(見圖l)。
在第-4天至第-1天和第0天至第3天接受VTP 194310的白細胞 減少症小鼠，與對照白細胞減少症小鼠和已經接受Peg-r-metHuG-CSF 的這些小鼠相比，在血液中顯示增加的淋巴細胞數。在第8天， VTP194310處理的小鼠的淋巴細胞計數為4.53 ± 0.39 x 103/|ul ( VTP 194310，在第-4天至第-l天)和4.49 ± 0.52 x 103/|il ( VTP 194310， 在第0天至第3天)，與之相比，對照恢復小鼠的值為2.38士 0.26 x 103/|al (p值O.Ol )。
實施例2
在人類CD34^祖細胞培養中的嗜中性細胞恢復
HL60細胞的生長和分化評價
在4 ml的含有10 %胎牛血清(FBS, Invitrogen， Paisley， UK)、青黴素(100 U/ml )和鏈黴素(100 |ug/ml )的RPMI1640培養基(Invitrogen, Paisley, UK)中，以2.5 x 105細胞/毫升接種前骨髓細胞系HL60的培 養物。通過細胞減少氮藍四唑的能力、獲得的早期成熟標記CDllb的 表達和提高的甾類硫酸酯酶(一種骨髓成熟的標記)的活性，測定分化。
人類CD34+ve造血祖細胞的分離和培養
倫理學認可的來自成年人的含有動員的幹細胞的血液白細胞分 離細胞(blood leukophoresis cells)在知情同意後由伯明罕地區性國家 血液管理幹細胞實驗室(the regional National Blood Service Stem Cell Laboratory, Birmingham )提供。在CliniMACS》茲力分離器上通過使用 免疫磁珠和抗CD34單克隆抗體純化CD34+ve細胞。
將細胞以5 x 105細胞/毫升的密度接種到96孔微滴定板中的200 )LilRPMI1640培養基中，該培養基含有10。/。的FBS、抗生素(100U/ml 的青黴素和100 pg/ml的鏈黴素)和在結果部分中指出的含量的重組人 幹細胞因子(SCF)、重組人白介素3 (IL3)、重組人粒細胞集落刺 激因子(G-CSF)和全-RAR拮抗劑VTP194310。 SCF、 IL3和G-CSF 從R and D Systems, Abingdon， UK獲得。每一種條件建立3份培養物。 補充和分開培養物，首先進入微滴定孔中，然後作為Costar孔中的2ml 培養物，以保持細胞密度為2.5-10x 105細胞/毫升。細胞在溼潤的培養 箱中在37。C和5 %002氣氛中生長。
100 nM的全-RAR拮抗劑VTP 194310完全阻斷了 100 nM ATRA誘 導HL60細胞的嗜中性細胞分化的能力。用100 nM ATRA處理HL60細 胞5天導致生長停止、獲得減少氮藍四唑的能力、表達CDllb和甾類 硫酸酯酶活性的提高。當共施用100nM的VTP 194310和ATRA時，所 有這些事件消失(見圖2)。
圖3顯示10和100 nM的VTP 194310對於純化的CD34+ve ( 〉 99 % ) 造血祖細胞的生長和自發分化的影響。在確保存活的量的SCF (100 ng/ml)和IL3 ( 20 ng/ml)中培養CD34切e細胞。我們也使用了實驗室
43常規使用的在液體懸浮培養物中由髓樣祖細胞產生最佳數目的嗜中
性細胞和單核細胞的條件。該條件是100ng/ml SCF、 5ng/mlIL3和30 ng/ml G-CSF。
為了確定VTP 194310是否已經阻斷了血清類一見黃醇的任何效應 和RAR，我們針對跨膜糖蛋白CD38的表達對細胞染色。儘管在CD34+ve 細胞分化和CD38誘導中沒有功能相關，但是CD38是在RARa直接控 制之下類視黃醇誘導的，並在骨髓分化過程中增加。Pms等人已經證 明，VTP 194310在體外抑制人類造血細胞表達CD38。 Prus,等人, i e"wo/c」c^if Receptor Jwa^gom.W /"/^'Zj"s 五x/ r&s^s7'ow cw
//"ma/ /fematopoeWc Ce〃s In Vitro， Leukaemia & Lymphoma, 45， 1025-1035 (2004)。第6天，35 士 2 % ( n = 4 )的糹田月包在SCF/IL3 (以20 ng/ml)生長的培養物中表達CD38,而當細胞在這些條件加VTP 194310( 10和100 nM)生長時，為39±4%(11 = 4)。不存在VTP 194310 時，CD38的表達到第15天已上升到50士2。/。 (n = 3),到第27天已上 升到72 ± 1 % (n = 4)。存在VTP 194310 ( IO和IOO nM)時，CD38 的表達到第15天已下降到15士3 %(n = 4),到第27天已下降到6士 1 % (n = 4)。
VTP194310 ( 10和100nM)和G-CSF實質上增加了培養物的壽命 和產生的細胞數。用SCF/IL3處理的培養物到第3 3天幾乎已經終止(細 胞密度為0.6x 105/ml)，而已經用VTP 194310( 10和100 nM )/SCF/IL3 或G-CSF/SCF/IL3處理的培養物仍然產生大量的細胞(圖2A,上圖)。 在第55天，這些培養物中的細胞密度為低水平(0.5-1.5 x 105細胞/毫 升)。加有100nMVTP 194310的培養物比其它培養物以略微慢的速 度產生細胞(見圖3A),在第33天已經產生了比加有IOO nM VTP 194310的培養物(2.9 x 107 ± 0.2, n = 4 )或加有G-CSF的培養物(3.8 x 107±0,5,n = 4)略少的細月包總數(2.9x 107±0.2, n = 4)。
在各種培養條件下和整個實驗中產生的細胞主要是髓樣細胞(見
圖3B,下圖)。類紅細胞區域(血型糖蛋白+v7CD45+ve)較小(第6 天為9-14%)，並且在缺少諸如促紅細胞生成素的合適的生長和存活因子的情況下逐漸消失(圖3B) 。 VTP 194310對於類紅細胞的普遍性 沒有明顯的效果。在這些培養物中沒有觀察到任何有意義的淋巴祖細 胞和成熟淋巴細胞。
到第22天，在SCF/IL3中培養的CD34+ve細胞已經完全成熟，其中 49 ± 4 %的細胞為嗜中性細胞(CD65+v7CDllb+ve和作為CD15+ve)， 53土8%的細胞為單核細胞(CD14+v7CDllb+ve)。到第19天培養物中 仍不存在被鑑定為CD33+V7CD15-v7CD 14,的未成熟髓樣細胞。當在 G-CSF/SCF/IL3中培養細胞時，產生相等數量的嗜中性細胞和單核細 胞，但是比使用SCF/IL3時數量大得多(圖3A)。到第22天， G-SCF/SCF/IL3培養物中主要含有成熟的嗜中性細胞和單核細胞(在 圖3A中，比較細胞總數和嗜中性細胞和單核細胞的數量)。
向使用SCF/IL3的CD34+ve細胞培養物中加入10 nM和lOO nM的 VTP 194310的作用是增加產生的嗜中性細胞^:(比4交圖3A中的下面 兩張圖)。在這方面，10 nM的VTP 194310比100 nM的VTP 194310 更有效。VTP 194310的存在沒有明顯影響單核細胞的累計數量(圖 3A)。在第20天和第30天之間，對VTP 194310處理的培養物的目視 檢查顯示培養物中普遍存在母細胞，標記物分析顯示相當比例的細胞 還沒有成熟為嗜中性細胞或單核細胞。在第19天和第29天之間，嗜中 性細胞以33%±2 ( 10nM的VTP 194310 )和30%±5 ( 100nM的VTP 194310 )的水平存在，單核細胞以32 % ± 4 ( 10 nM的VTP 194310 ) 和21 % 士 5 ( 100 nM的VTP 194310)的水平存在。所有雙重和三重 FACS分析的檢查使我們能夠確認兩個在VTP 194310處理的培養物中 持續存在的細胞群。它們是表達SCF的受體的CD34-ve細胞，和被鑑定 為CD33+ve/CD15-v7CD14—ve的未成熟髓樣細胞(圖3B)。這些細胞群 在IOO nM的VTP 194310處理的培養物中比在10 nM的VTP 194310 處理的培養物中含量更高。VTP 194310沒有影響培養物中的CD34+ve 細胞的數量和持久性(圖3B)。這些標記物分析與以下觀點是一致的 VTP 194310處理的培養物中嗜中性細胞產量的增加與骨髓前體群體 的擴張和嗜中性細胞分化的下降相關。來自VTP 194310處理的小鼠和對照小鼠的成熟粒細胞離體後以 相似的速度經歷細胞凋亡。類似地，當在補充有IO 。/。的FBS的 RPMI1640培養基中培養人外周血白細胞，且該培養基含有IO nM和 100 nM的VTP 194310時，我們觀察到嗜中性細胞以相似的速度經歷細 胞凋亡。在每一種這樣的條件中，在第1天，通過細胞核物質的吖啶 橙染色和螢光顯微法歡察，65 %-70 %的嗜中性細胞凋亡。所有嗜中 性細胞到第2天死亡。
實施例3
環磷醯胺誘導的白細胞減少症小鼠模型中外周和系統嗜中性細胞和 淋巴細胞的恢復
通過觀察脾和骨髓中的嗜中性細胞的水平(Grl+v7CDllb+ve細胞) 來檢查在白細胞減少症小鼠中由VTP 194310引起的嗜中性細胞恢復 是否為系統性的。在相對於CMP治療的第-1天至第2天，給這些小鼠 管飼VTP 194310。
結果
數據所示，在第6天至第8天，與對照恢復小鼠相比，在VTP 194310 處理的小鼠中的嗜中性細胞和淋巴細胞計數明顯升高(見圖4A)。在 第7天至第8天，與對照相比，VTP 194310處理的小鼠的脾重增加。在 第6天至第7天，在VTP 194310處理的小鼠的脾中，Gr-l+v7CDllb+、 胞的絕對數量顯著增加(見圖4B)。另外，在第6天和第7天，在VTP 194310處理的小鼠的脾中，鑑定為Gr-1"CD 11b^的不成熟的粒細胞 增多。在第7天，在VTP 194310處理的小鼠中，這些細胞的絕對數量 為0.93 ± 0.02 x 107，與之相比，對照小鼠為0.46 ± 0.13 x 107( p = 0.02 )。 在VTP 194310處理的小鼠的骨髓中，Gr-l+v7CDllb+ve細胞的普遍性也 提高(見圖4C)。因此，VTP 194310引起的嗜中性細胞恢復是系統性 的。
46實施例4
VTP 194310對白細胞減少症小鼠的金黃色葡萄球菌". )感染
的保護效果的測定
利用從美國典型培養物保藏中心(ATCC) (Rockville， Md.)獲 得的金黃色葡萄球菌29213誘導白細胞減少的雌性BDF1小鼠(20-22 克)的感染。在37 。C下在胰蛋白酶大豆培養液中培養金黃色葡萄球 菌直至半數對數生長期(在600 nm的光密度為0.3),收穫，並用PBS 洗滌。通過使用PBS系列稀釋，在血瓊脂表面上塗布，並在37。C培養 48小時後計數菌落形成單位(CFU)來計算細菌數。將懸浮液調整為 10。 CFU/ml。
通過腹膜內注射200 mg/kg的CPM使小鼠的白細胞減少。通過在 CPM處理4天後給10隻小鼠組成的組靜脈內注射1 x 103-1 x 108 CFU來 確定金黃色葡萄球菌的致死劑量(LD)。計數10天存活者，並通過 概率單位分析計算金黃色葡萄球菌的LD9s。在CPM處理前一天，開始 用VTP 194310處理(以lmg/kg),並再持續3天。在CPM處理4天後， 用200 iil的PBS中的4.1和2.5 x 106 CFU的金黃色葡萄球菌靜脈內感 染動物。在激發後的14天裡，每日記錄存活的動物。每種條件下有12 只小鼠，通過時序才全'驗(Logrank Test) (GraphPad Prism version 3.0, GmphPad Software, Inc.， San Diego， Calif.)確定VTP 194310的4呆護效 果的顯著性。所有實驗均按照相關法律和規定進行，並且經動物保護 和4吏用委員會(Animal Care and Use Committee )批准。
結果
在本實施例中，研究了 VTP 194310處理的白細胞減少症小鼠中提 高的嗜中性細胞恢復是否能夠保護它們在給予致死劑量的金黃色葡 萄球菌後免受感染(見圖5)。在CPM處理前一天、CPM處理同時和 CPM處理後的兩天裡，給予VTP 194310,並在CPM處理之後4天，注 射金黃色葡萄球菌。給予CPM和4.1 x 1(^CFU的金黃色葡萄球菌的小 鼠到第10天全部死亡。接受低劑量的金黃色葡萄球菌的d、鼠只有10 %
47仍然存活，但到第1 l天這些小鼠死亡。在第10天，已經接受VTP 194310 和各劑量的金黃色葡萄球菌的小鼠有83 %仍然存活。實驗在第14天終 止，已經接受VTP 194310和2.5x 106CFU的小鼠有67。/。仍然存活，而 已經接受VTP 194310和更高劑量的細菌的小鼠有42%存活。因此，與 對照相比，用VTP 194310處理對於金黃色葡萄球菌感染具有非常明顯 的保護作用(對於使用4.1 x 106CFU金黃色葡萄球菌感染的小鼠，p 值=0.0031;對於使用2.5x 106CFU金黃色葡萄球菌感染的小鼠，p 值<0扁1 )。
給予金黃色葡萄球菌的VTP 194310處理的小鼠的存活不是由於 VTP 194310對抗金黃色葡萄球菌的活性。在幾個試驗中分析適當濃度 的化合物對抗金黃色葡萄球菌EMRSA-16 252和金黃色葡萄球菌 MSSA 476的活性。加入瓊脂中的2 iuM的VTP 194310,或當50iil的2 )aM VTP 194310加入到瓊脂-孔-擴散分析中時，沒有抑制瓊脂上的細 菌的生長。而且，在含有2 pM VTP 194310的液體培養基中生長過程 中，沒有菌林證明其生長速度有任何改變。
實施例5
VTP 194310和聚乙二醇化G-CSF的單一治療與聯合治療對於CPM誘 導的白細胞減少小鼠的嗜中性細胞恢復的效果的比較
粒細胞集落刺激因子(G-CSF)是引起嗜中性細胞減少症的嗜中 性細胞恢復的關鍵因素，並且可以在臨床上用於治療化學療法誘導的 嚴重的嗜中性細胞減少症。因而，比較VTP 194310單一治療、G-CSF 單一治療與VTP 194310和G-CSF的聯合使用的效果是重要的。與嗜中 性細胞減少的小鼠對照(150 mg/kg的CPM)相比，使用VTP 194310 的單一治療(3mg/kg,第-l天至第l天)和使用聚乙二醇化G-CSF的 單一治療(10 |ag/kg,第2天)提高了嗜中性細胞的恢復。使用VTP 194310和聚乙二醇化G-CSF的這些劑量和方案的聯合治療進一步提 高了嗜中性細胞的恢復速度。VTP 194310和聚乙二醇化G-CSF在提高 血液嗜中性細胞方面的聯合效果略高於加成結果。另外，VTP 194310與G-CSF聯合比單獨使用G-CSF時更持久地提高嗜中性細胞。這些發 現與以下觀點一致VTP 194310和G-CSF在恢復期共同作用。
製劑
通過稱量VTP 194310並溶於DMSO中(25 mg/1.33 ml DMSO )制 備VTP 194310的DMSO儲備溶液。然後，將此儲備溶液與載體(39.2 ml 玉米油+0.8 ml DMSO)混合。
通過混合39.2 1111玉米油+ 0.8 ml VTP 194310的DMSO儲備溶液來 製備3.0 mg/kg VTP 194310溶液。
通過將VTP 194310的DMSO儲備溶液用DMSO以1:3稀釋(例如， 1 ml DMSO + 0.5 ml 4310儲備溶液)，然後合併39.2 1111玉米油+ 0.8 ml 稀釋的VTP 194310儲備溶液，來製備1.0mg/kg VTP 194310溶液。
CPM溶液的製備
通過稱量187.5 mg的5-FU並與10 g鹽水混合來製備150 mg/kg的 CPM溶液。
通過用PBS稀釋6 mg/ml的儲備溶液來製備1和10 |ug/kg的 PEG-G-CSF溶液。
小成
在本實驗中使用雄性BDF1小鼠(C57BlxDBA2， 7-8周齡，出生 日期2006年6月1日)。
血樣
按照預定時間點或在血細胞和血小板完全恢復之前，收集35iul的 血液(通過下頜下靜脈)。在血樣用含有2 y。的BSA(組分V )和0.2 mM 的EDTA的PBS鹽水1:5稀釋後，在Hematology Analyzer Cell-DYN 3700 (Abbott Diagnostics)中分析血樣。結果
使用載體、3 mg/kg的VTP 194310、 1或10iug/kg的PEG-G-CSF 和150mg/kg的CPM處理每組小鼠。圖6顯示獲得的每個處理組的總 白細胞(WBC)、嗜中性細胞、淋巴細胞、紅細胞(RBC)和血小 板的平均數以及數據的標準誤(SE)。如圖6B和圖7顯示，與嗜中性 細胞減少症小鼠對照(在第0天用150 mg/kg CPM誘導)相比，在第 -1天至第1天使用1或3 mg/kg/天的劑量的VTP 194310進行單一治療 和在第2天使用1或10 |ig /kg的劑量的PEG-G-CSF進行單一治療提高 了嗜中性細胞的恢復。與使用VTP 194310或PEG-G-CSF的單一治療 相比，使用VTP 194310和PEG-G-CSF的這些劑量和方案的聯合治療 進一步提高了嗜中性細胞的恢復速度。VTP 194310和PEG-G-CSF在 提高血液嗜中性細胞方面的聯合效果表現為加成效果或者更高。另 外，VTP 194310與PEG-G-CSF聯合比單獨使用PEG-G-CSF時更持久 地提高了嗜中性細胞。總之，在提高CMP誘導的白細胞減少症小鼠 模型的嗜中性細胞恢復方面，VTP 194310的有效性類似於10 |ug/kg 的PEG-G-CSF。 VTP 194310和PEG-G-CSF的聯合處理進一步提高了 恢復。
實施例6
VTP 194310和聚乙二醇化G-CSF的單一治療與聯合治療對於5-FU誘 導的白細胞減少症小鼠的嗜中性細胞恢復的效果的比較
粒細胞集落刺激因子(G-CSF)是引起嗜中性細胞減少症的嗜中 性細胞恢復的關鍵因素，因而可用於治療患者的化學療法誘導的嚴重 的嗜中性細胞減少症。比較VTP 194310單一治療、G-CSF單一治療與 VTP 194310和G-CSF的聯合使用的效果是重要的。這裡，我們使用一 種不同的白細胞減少症小鼠模型(即，通過施用150 mg/kg 5-FU誘導 的)進行實驗。目標是研究VTP194310和PEG-G-CSF在5-FU小鼠模型 上的效果。如同我們以前觀察到的，使用VTP 194310的單一治療(3mg/kg,第2-4天)提高了嗜中性細胞的恢復。在不同日(第5、 6 或7天)施用IO |Lig/kg PEG-G-CSF的單一治療對於提高嗜中性細胞的 恢復幾乎沒有作用。但是，使用VTP 194310和PEG-G-CSF的同樣劑 量和方案的聯合治療明顯提高了嗜中性細胞的恢復速度。
製劑
通過稱量VTP 194310並溶於DMSO ( 25 mg/1.33 ml DMSO )製備 VTP 194310的DMSO儲備溶液。
通過混合39.2 ml玉米油+ 0.8 ml DMSO製備載體溶液。
通過混合39.2 1111玉米油+ 0.8 ml VTP 194310的DMSO儲備溶液制 備3.0 mg/kg VTP 194310溶液。
通過稱量187.5 mg 5-FU並與10 g鹽水混合製備150 mg/kg的 5-FU溶液。
通過用PBS稀釋6 mg/ml的儲備溶液來製備10 |ag/kg PEG-G-CSF溶液。
小鼠
在本實驗中使用雄性BDF1小鼠(C57BlxDBA2， 9周齡，出生日 期2006年6月26日)。
結果
按照表中所列的方案處理每組小鼠在第0天靜脈注射150 mg/kg 的5-FU,在第2-4天以3 mg/kg/天的劑量經口管飼載體或VTP 194310， 和/或在第5、 6或7天以10 i!g/kg皮下給予PEG-G-CSF。圖8顯示獲得的 每個處理組的總白細胞(WBC )、嗜中性細胞、淋巴細胞、紅細胞(RBC ) 和血小板的平均數以及數據的標準誤(SE)。在第2-4天施用3 mg/kg/ 天的VTP194310三天，比在第5、 6或7天施用10 pg/kg的PEG-G-CSF, 在提高5-FU誘導的白細胞減少症小鼠模型的嗜中性細胞恢復方面更 有效。使用VTP 194310和PEG-G-CSF的聯合治療比使用VTP 194310或PEG-G-CSF的單 一 治療在引起5-FU誘導的白細胞減少症小鼠模型 的嗜中性細胞恢復方面更有效。
如圖8B和圖9所示，在第2-4天使用3 mg/kg/天的VTP 194310進行 單一治療提高了嗜中性細胞的恢復，這與以前獲得的結果一致 (RT-06-34 )。在第5、 6或7天使用10 pg /kg的PEG-G-CSF的單一治 療，與5-FU誘導的白細胞減少症小鼠對照相比，在提高嗜中性細胞 恢復方面幾乎沒有效果。與使用VTP 194310的單一治療相比，使用 VTP 194310和PEG-G-CSF的同樣劑量和方案的聯合治療進一步提高 了嗜中性細胞恢復速度。
實施例7
VTP 194310 (以前叫作AGN 194310 )的合成 VTP 194310具有如下的化學結構
可以使用常規的有機合成手段來合成該化合物，4-[[4-(4-乙基苯 基)-2,2-二甲基-(2H)-苯並噻喃-6-基]-乙炔基]-苯曱酸。下面的反應路 線是生成該化合物的目前優選的一種方法。
步驟l:向厚壁螺旋蓋管中加入3-曱基-2-丁酸(13.86 g, 138.4 mmol)、 4-曱氧基苯硫酚(20.0 g, 138.4 mmol)和哌咬(3.45 g， 41.6 mmol)。 加熱該混合物至IO 。C保持32小時，冷卻至室溫並溶於EtOAc( 700 mL ) 中。產生的溶液用1 M的HC1水溶液、H20和飽和NaCl水溶液洗滌，然後用Na2S04乾燥。減壓濃縮幹溶液產生油，將其置於冷凍器中得到晶
狀固體。通過用戊烷洗滌晶狀固體分離得到淡黃色結晶3-(4-曱氧基-苯基硫基)-3-曱基-丁酸(27.33 g， 82%) 。 'H NMR (300 MHz， CDC13) 5: 7.48 (2H, d, J=9.0 Hz), 6.89 (2H, d, J=8.9 Hz), 3.83 (3H, s)， 2.54 (2H, s)， 1.40 (6H, s)。
步驟2:室溫下，在30分鐘的時間裡，向250 mL的3-(4-曱氧基-苯基硫 基)-3-曱基-丁酸(20.0 g, 83,2 mmol)的苯溶液中加入IO mL的乙二醯 氯(15.84 g， 124.8 mmol)的苯溶液。4小時後，用冰冷的5。/。的NaOH 水溶液洗滌溶液(注意在這一步驟中會釋放大體積的氣體)，然後 用冰冷的水洗滌，最後用飽和的NaCl水溶液洗滌。溶液經乾燥 (Na2S04)並減壓濃縮，產生澄清的黃色油。該物質無需進一步純化 而用於下一步。& NMR (300 MHz， CDC13) 5: 7.45 (2H， d, J=8.8 Hz), 6.90 (2H, d, J=8.8 Hz)， 3.84 (3H, s), 3.12 (2H, s), 1.41 (6H， s)。
步驟3:在0。C下，向步驟2的醯氯產物(21,5 g， 83.2 mmol)在250 mL 的CH2Cl2中的溶液中逐滴加入30 mL的SnCU ( 21.7 g， 83.2 mmol)的 CH2Cl2溶液。2小時後，通過緩慢加入150 mL 1120結束反應。在用 MgS04乾燥前，用1M的HC1水溶液、5 。/。的NaOH水溶液、1120洗滌 有機層，最後用飽和的NaCl水溶液洗滌。減壓濃縮和真空蒸餾殘餘的 油(球對球，125-135 。C， 5 mm/Hg)產生14,48 g (78 %)的淡黃色 油，6-曱氧基-2，2-二曱基-二氫苯並噻喃-4-酮。力NMR (300 MHz, CDC13) 5: 7.62 (1H, d, J=2.9 Hz), 7.14 (1H, d, J=8.6 Hz), 7.03 (IH, dd, J=2.8, 8.3 Hz), 3.83 (3H, s), 2.87 (2H， s), 1.46 (6H, s)。
步驟4:在20分鐘的時間裡，向冷卻至-23 。C的50 mL的6-曱氧基-2,2-二曱基-二氫苯並噻喃-4-酮(6.0 g, 27 mmol )的CH2Cl2溶液中加入BBr3 (20.0 g, 80.0 mmol; 80.0 mL的1M的CHbCl2溶液)。在-23 。C攪拌5 小時後，將溶液冷卻至-78。C，並通過緩慢加入50 mL的H20中止反應。在加熱至室溫時，用CH2Cl2萃取水層，並用飽和的NaHC03水溶 液、H20和飽和的NaCl水溶液洗滌合併的有機層，然後用MgS04乾燥。 減壓除去溶劑，產生綠棕色的固體，其經過重結晶(Et20/己烷)產生 2.25 g (40 %) 的淺棕色固體，6-羥基-2,2-二曱基二氫苯並噻喃-4-酮。力NMR (300 MHz， CDC13) 5: 7.63 (1H, d， J=2.8 Hz)， 7.15 (1H， d, J=8.5 Hz), 7.01 (1H， dd, J=2.8， 8.5 Hz), 2.87 (2H， s), 1.46 (6H， s)。
步驟5:在0 。C下向5.0 mL的6-羥基-2，2-二甲基二氫苯並噻喃-4-酮 (165.0 mg， 0.79 mmol)的無水吡咬溶液中加入三氟曱磺酸酐(245.0 mg， 0.87 mmol) 。 4小時後，在0。C下濃縮溶液，將殘餘的油溶於Et20 中，用1120洗滌，然後用飽和的NaCl水溶液洗滌，並經過MgS04乾燥。 減壓除去溶劑，經柱色i普(5。/oEtOAc/己烷)產生126.0 mg (47%) 的無色固體，2，2-二甲基-4-氧-二氫苯並噻喃-6-基三氟曱磺酸酯。& NMR (300 MHz， CDC13) S: 7.97 (1H, s), 7.32 (2H, s), 2.90 (2H, s)， 1.49 (6H, s)。
步驟6:用氬清潔2,2-二甲基-4-氧-二氫苯並噻喃-6-基三氟曱磺酸酯 (2.88 g, 8.50 mmol)在10 mL Et3N和20.0 mL DMF中的溶液10分鐘。 向此溶液中加入三曱基矽基乙炔(4.15 g, 42.0 mmol)和二(三苯膦)-氯化鈀(II) ( 298.0 mg, 0.425 mmol)。加熱溶液至95 。C 5小時，冷卻 至室溫，並用H20稀釋。用EtOAc萃取，然後用H20和飽和的NaCl水 溶液洗滌合併的有才幾層，並用MgS04乾燥。減壓濃縮幹溶液，通過柱 色i普(3Q/oEtOAc/己烷)分離產物獲得2.23g (91 %)的橙色油，2,2-二甲基-6-三曱基矽烷基乙炔基-二氬苯並p塞喃-4-酮。^ NMR (300 MHz, CDC13) 5: 8.18 (1H， d， J=1.9 Hz)， 7.34 (1H, dd, J=1.9, 8.1 Hz), 7.15 (1H， d, J=8.1 Hz), 2.85 (2H， s峰)，1.45 (6H， s)， 0.23 (9H, s)。
步驟7:室溫下過夜攪拌2,2-二甲基-6-三甲基矽烷基乙炔基-二氫苯並 漆喃一4-酮(110.0 mg, 0.38 mmol) ,。K2C03 ( 40.0 mg, 0.29 mmol)在
5410.0 mL MeOH中的溶液。用仏0稀釋溶液，並用Et20萃取。用仏0 和飽和的NaCl水溶液洗滌合併的有機層，並用MgS04乾燥。減壓除去 溶劑，產生81 mg (99 %)的橙色油，6-乙炔基-2,2-二甲基二氫苯並 p塞喃-4-酮。H NMR (300 MHz, CDC13) 5: 8.20 (1H， d, J二1.9 Hz), 7.46 (1H, dd， J=1.9, 8.1 Hz), 7.18 (1H， d, J=8.1 Hz), 3.08 (1H， s), 2.86 (2H， s): 1.46 (6H， s)。
步驟8:用氬清潔6-乙炔基-2,2-二甲基二氫苯並噻喃-4-酮(82.0 mg, 0.38 mmol)和4-碘苯曱酸乙酉旨(104.9 mg， 0.38 mmol) "0mLEt3N 中的溶液10分鐘。向此溶液中加入二(三苯膦)-氯化鈀(II) (88.0 mg, 0.12 mmol)和碘化銅(I) ( 22.9 mg, 0.12 mmol)。再用氬清潔5分鐘之 後，於室溫下過夜攪拌該溶液。通過Celite襯過濾反應混合物，用Et20 洗滌。減壓濃縮過濾液，殘餘固體經過柱色i脊，產生100mg(72。/) 的黃色固體，4-[(2,2-二曱基-4-氧-二氫苯並噻喃-6-基)乙炔基]-苯甲酸 乙酯。iHNMR(300 MHz, CDC13) 5: 8.25 (1H, d, J=1.8 Hz), 8.00 (2H， d, J=8.4 Hz), 7.55 (2H， d, J=8.4 Hz), 7.53 (1H, dd， J=1.8， 8.2 Hz), 7.21 (IH， d， J=8.2 Hz), 4.37 (2H， q， J=7.1 Hz)， 2.88 (2H， s)， 1.47 (6H， s), 1.39 (3H, t, J=7.1 Hz)。
步驟9:將二(三曱矽烷基)醯胺鈉(1.12 g, 6.13 mmol)在16.2mLTHF 中的溶液冷卻至-78 。C,並緩慢加入15.0 mL 4-(2，2-二曱基-4-氧-二氫 苯並噻喃-6-基-乙炔基)-苯曱酸乙酯(1.86 g, 5.10 mmol)溶液。30分 鍾後，加入10 mL的2-[N,N-二(三氟曱磺醯基)氨基]-5-吡啶(2.40 g, 6.13mmo1)的THF溶液。5分鐘後，加熱溶液至室溫，並攪拌過4復。 通過加入飽和NH4C1水溶液終止反應，並用EtOAc萃取。用5 。/。的NaOH 水溶液和H20洗滌合併的有機層，然後乾燥(MgS04)和減壓濃縮。 通過柱色譜(2。/。EtOAc/己烷)分離獲得產物，1.53 g (61 %)的黃 色固體，4-[(2，2-二曱基-4-三氟甲磺醯氧基-(2H)-苯並噻喃-6-基)乙炔 基]-苯甲酸乙酯。& NMR (300 MHz, CDC13) 5: 8.03 (2H, d， J=8.4 Hz),7,61 (1H, d, J=1.8 Hz), 7.59 (2H， d, JN8.4 Hz), 7.41 (1H， dd, J=1.8， 8.1 Hz), 7.29 (IH, d， J-8.1 Hz)， 5.91 (IH, s), 4.39 (2H， q, JN7.1 Hz), 1.53 (6H， s), 1.41 (3H, t， J=7.1 Hz)。
步驟10:將4.0mL的4-乙基溴苯(670.9 mg， 3.63 mmol)的THF溶液冷 卻至—78 °C,並加入4又丁基鋰(464.5 mg， 7.25 mmol, 4.26 mL的1.7 M 的戊烷溶液)產生黃色溶液。30分鐘後，通過插管緩慢加入8.0mL的 ZnCl2 ( 658.7 mg, 4.83 mmol)的THF溶液。將產生的溶液加熱至室 溫，並通過插管轉移到8.0 mL的4-(2,2-二曱基-4-三氟曱磺醯氧基 -(211)-苯並噻喃-6-基乙炔基)-苯曱酸乙酉旨(1.20 g, 2.42 mmol)和四(三 苯膦)釔(O)( 111.7 mg， 0.097 mmol )THF溶液中。將此溶液加熱至50 。C l小時，冷卻至室溫，並通過加入飽和NH4C1水溶液終止反應。用EtOAc 萃取溶液，用H20和飽和NaCl水溶液洗滌合併的有機層，然後乾燥 (MgS04)和減壓濃縮。通過柱色語(5。/oEtOAc/己烷)分離獲得無 色油狀產物，4-[[4-(4-乙基苯基)-2，2-二曱基-(2H)-苯並噻喃-6-基]-乙炔 基]-苯曱酸乙酯。丄H NMR (300 MHz, CDC13) 5: 7.99 (2H, d， J=8.2 Hz), 7.52 (2H, d, J=8.4 Hz), 7.40 (5H, m)， 7.35 (2H, m)， 5.85 (1H， s), 4.38 (2H, q, J=7.1 Hz), 2.72 (2H， q, J=7.6 Hz)， 1.48 (6H, s)， 1.40 (3H， t， J==7.1 Hz)， 1.30 (3H, t, J=7.6 Hz)。
步驟ll:向溶於IO.O mLTHF和5.0mLEtOH的4-[[4-(4-乙基苯基)-2，2-二甲基-(2H)-笨並噻喃-6-基]-乙炔基]-苯曱酸乙酯(940.0 mg, 2.08 mmol)的溶液中加入NaOH (416.0 mg, 10.4 mmol, 5.2 mL的2M水溶 液)。在室溫下攪拌產生的溶液過夜。用10 。/。的HC1水溶液酸化反應 混合物，並用EtOAc萃取。用1120、飽和的NaCl水溶液洗滌合併的有 機層，並乾燥(MgS04)，然後減壓除去溶劑。從CH3CN中重結晶剩 餘的固體，產生786.0 mg ( 89 %)無色固體，4-[[4-(4-乙基苯基)-2，2-二曱基-(2H)-苯並噻喃-6-基]-乙炔基]-苯甲酸。& NMR (300 MHz, d6-丙酮)5: 8.01 (2H， d, J=8.3 Hz), 7.60 (2H, d， J=8.5 Hz), 7.42 (2H, m),7.29 (2H, m)， 7.22 (3H, m)， 5.94 (1H, s)， 2.69 (2H, q， J=7.7 Hz)， 1.47 (6H, s), 1.25 (3H， t, J=7.7 Hz)。該化合物為需要的終產物，命名為VTP 194310。
儘管以上描述含有許多細節，但這些細節不應視為對本發明的限 制，僅是其優選實施方式的示例。本領域的技術人員會在本發明的權 利要求書限定的範圍和精神內想到許多其它的實施方式。
本文完整引入在本申請中引用的任何和所有的專利、專利申請和 其它出版物作為參考。
權利要求
1. 一種治療經受化學療法和/或放射療法的哺乳動物的化學療法和/或放射療法副作用的方法，該方法包括向該哺乳動物施用治療有效量的至少一種結合RARα、RARβ和RARγ亞型受體的視黃酸受體(RAR)拮抗劑或RAR反向激動劑的步驟。
2. 如片又利要求l所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR反向 激動劑對於增加哺乳動物的嗜中性細胞的產生是有效的。
3. —種增加有此需要的哺乳動物的血小板產生的方法，該方法 包括向該哺乳動物施用治療有效量的至少 一 種結合RARa 、 RAR[3和 RARY亞型受體的RAR拮抗劑或RAR反向激動劑的步驟。
4. 如權利要求l-3所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR反 向激動劑具有下面的化學結構或其藥學上可接受的鹽；其中，X為S、 O、 NR,其中R為H或含有l-6個碳的烷基，或 X為[C(R1)2]。，其中，W獨立地為H或含有l-6個碳的烷基，且n為0-2的整數；R2獨立地為氫、含有l-6個碳的低級烷基、F、 Cl、 Br、 I、 CF3、 氟取代的含有l-6個碳的烷基、0H、 SH、含有l-6個碳的烷氧基或含 有l-6個碳的烷硫基；W獨立地為氫、含有1-6個碳的低級烷基或F;m為0-3的整數；n為0-4的整數；o為0-3的整數；Z為-CONR、、 -CSNR1,、 -NRiCO畫、畫NR!CS畫、-C^C-、 -C=C-、 -N=N-、 -N二CR1-、國CR^N隱、-COO-、 -OCO-、 -OSO-、 -OCS-或-(CR'二CR"n，-,其中，n為0-5的整數；Y為苯基或萘基，或為選自吡啶基、噻吩基、呋喃基、噠嗪基、 嘧啶基、吡。秦基、噻唑基、噁唑基、咪唑基和吡唑基的雜芳基，該苯 基和雜芳基任選地被一個或兩個W基團取代，或當Z為-(CR產CR!)n,-且n'為3、 4或5時，Y代表所述(CR^CR2)n,基團和B之間的直接價鍵；A為(CH2)q其中q為0-5、含有3-6個碳的低級支鏈烷基、含有3-6個 碳的環烷基、含有2-6個碳和l或2個雙鍵的烯基、含有2-6個碳和l或2 個叄鍵的炔基；B為氫、COOH或其藥學上可接受的鹽、COOR8、 CONR9R1Q、 CH2OH、 CH2OR、CH20COR1、CHO、 CH(OR12)2、 CHOR130、 -COR7、 CR7(OR12)2、 CR70R"0或三-低級烷基矽基；R"為含有l-5個碳的烷基、環烷基或烯基；R8為含有l-10個碳的烷基或三曱基矽烷基，其中烷基含有1-10個 碳，含有3-10個碳的環烷基，苯基，或低級烷基苯基；R^和R"獨立地為氫、含有1-10個碳的烷基、含有3-10個碳的環烷 基、苯基或低級烷基苯基；R"為低級烷基、苯基或低級烷基苯基；1112為低級烷基；R"為含有2-5個碳的二價烷基；R"為(R、-苯基、(R、-萘基或(R、-雜芳基，其中，雜芳基含有1- 3個選自0、 S和N的雜原子，且r為0-5的整數；且R"獨立地為H、 F、 Cl、 Br、 I、 N02、 N(R8)2、 N(R8)COR8、 NR8CON(R8)2、 OH、 OCOR8、 OR8、 CN、含有1-10個碳的烷基、氟取 代的含有1-10個碳的烷基、含有2-10個碳和l-3個雙鍵的烯基、含有2- 10個碳和l-3個叄鍵的炔基或三烷基矽基或三烷基矽氧基，其中烷基 獨立地含有l-6個石友。
5. 如權利要求4所述的方法，其中RS為含有1-10個碳的烷基或三曱基矽烷基，其中烷基含有1-10個 碳，含有5-10個碳的環烷基，苯基，或低級烷基苯基；且119和111獨立地為氫、含有1-10個碳的烷基、含有5-10個碳的環烷 基、苯基或低級烷基苯基。
6. 如權利要求4或5所述的方法，其中，Z為-CONR1-、 -CSNR1-, -NRCO-或-NRCS-。
7. 如權利要求l-3所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR反 向激動劑具有式II的化學結構或其藥學上可接受的鹽；formula see original document page 4其中，x為-c(R、-或-0-; Ri為H或含有l-6個碳的烷基；R2為含有l-6個碳的低級烷基、F、 Cl、 Br、 I、 CF3、氟取代的含 有l-6個碳的烷基、OH、 SH、含有l-6個碳的烷氧基或含有l-6個碳的 烷硫基；n為0-4的整數；m為0-3的整數；o為0-3的整數；R 為含有l-6個碳的低級烷基或F;Rs為含有l-10個碳的烷基、三甲基矽烷基，其中烷基含有1-10個 碳，或為含有3-10個碳的環烷基，苯基，或低級烷基苯基；R"獨立地為H、 F、 Cl、 Br、 I、 N02、 N(R8)2、 COR8、 NR8CON(R8)2、 ocors、 or8、 cn、含有1-10個碳的烷基、氟取代的含有1-10個碳的 烷基、含有2-10個碳和l-3個雙鍵的烯基、含有2-10個碳和l-3個叄鍵 的炔基或三烷基矽基或三烷基矽氧基，其中烷基獨立地含有l-6個碳；t為0-5的整數；且CONH基處於苯並吡喃和二氫萘環的6或7位。
8. 如權利要求7所述的方法，其中 R2為F;RS為含有1-10個碳的烷基、三甲基矽烷基，其中烷基含有1-10個 碳，或含有5-10個碳的環烷基、苯基或低級烷基苯基；且R"獨立地為H、 F、 Cl、 Br、 I、 N02、 N(R8)2、 COR8、 NR8CON(R8)2、 OCOR8、 OR8、 CN、含有1-10個碳的烷基、氟取代的含有1-10個碳的 烷基、含有l-10個碳和l-3個雙鍵的烯基、含有l-10個碳和l-3個叄鍵 的炔基或三烷基矽基或三烷基矽氧基，其中烷基獨立地含有l-6個碳。
9. 如權利要求l-3所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR反 向激動劑具有式III的化學結構formula see original document page 5或其藥學上可接受的鹽；其中，X為-C(CH3)2-或-0-; R2為-H或-Br; R"和R"'獨立地為-H或-F; 每個R 獨立地為-H或-CH3;且 R8為-H或d-C6烷基。
10. 如權利要求l-3所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR 反向激動劑具有式IV的化學結構或其藥學上可接受的鹽；其中，xi為-S-或-0-; 乂2為-CH-或-N-;R2為-H、 -F、《？3或(^-(:6烷氧基； R2〃為-H、 -F或-CF3; R8為-H或d-C6烷基；且R"為未取代的苯基、噻吩基或吡啶基，或用l-3個R"基團取代的苯基、瘞吩基或吡啶基；且每個R"獨立地為C廣Q烷基、氯、《？3或(^-(:6烷氧基。
11. 如權利要求l-3所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR反向激動劑具有式V的化學結構或其藥學上可接受的鹽； 其中，x2為-CH-或-N-; R2為-H、 -F或-OCH3; R"為-H或-F; R8為-H或C-C6烷基；且R"選自苯基、4-(低級烷基)苯基、5-(低級烷基)-2-噻吩基和6-(低 級烷基)-3-吡啶基，其中，所述低級烷基含有l-6個碳。
12. 如權利要求l-3所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR反向激動劑具有式VI的化學結構:formula see original document page 7(VI),或其藥學上可接受的鹽；其中，R8為-H或C廣C6烷基。
13. 如權利要求l-3所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR反向激動劑具有如下的化學結構或其藥學上可接受的鹽。
14. 如權利要求l-3所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR 反向激動劑具有式VII的化學結構或其藥學上可接受的鹽；其中，R^為-H或-F;R8為-H或d-C6烷基；且R"選自苯基和4-(Q-Q烷基)苯基。
15. 如權利要求l-3所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR反向激動劑具有式VIII的化學結構C02R:(vm),或其藥學上可接受的鹽；其中，R8為-H或C廣C6烷基。
16. 如權利要求l-3所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR 反向激動劑具有式IX的化學結構或其藥學上可接受的鹽；其中，X'為-C(R1)2-、 -C(R1)2-C(R1)2-、 -S-、 -O隱、-NR1-、 -C(R1)2-0-、 -(C(R、-S-或-C(R"2-NR1-;其中，R^獨立地為-H或C廣Q烷基；每個R2獨立地為d-C6烷基、-F、 -Cl、 -Br、 -1、 -CF3、氟取代的 C廣C6烷基、-OH、 -SH、 d-C6烷氧基或Q-C6烷硫基;m為0-4的整數；n為0-2的整數；o為0-3的整數；R 為H、 C廣C6烷氧基、-F、 -Cl、 -Br或-I;W為(RS)p-苯基、(RS)p-萘基或(RS)p-雜芳基，其中，雜芳基為五元 或六元環，含有l-3個選自氧、硫和氮的雜原子，其中，p為0-5的整數； R5的每個例子獨立地為-F、 -Cl、 -Br、 -1、 -N02、 -N(R8)2、-n(r8)cor8、 -N(R8)CON(Rs)2、 -oh、 -OCOR8、 -or8、畫cn、 -cooh、-COOR8、 d-d。烷基、含有l-3個雙鍵的d-d。烯基、含有l-3個叄鍵的C廣d。炔基、C廣C6(三烷基)矽基或d-C6(三烷基)矽氧基；Y為苯基或萘基，或選自吡啶基、噻吩基、呋喃基、噠嗪基、嘧 啶基、吡溱基、噻唑基、噁唑基、咪唑基和吡唑基的雜芳基，其中，所述苯基和雜芳基任選且獨立地被一個或兩個112基團取代，或Y 為-(CR3《R3》畫； r為l-3的整數；A為(CH2)q、 CVC6低級支鏈烷基、CrC6環烷基、含有1或2個雙鍵的CVC6烯基、含有1或2個叄鍵的C2-Q炔基，其中，q為0-5的整數， 條件是當Y為-(CR3=CR3)r』t ， A為(CH2)q且q為0;B為-H、 -COOH、 -COOR8、 -CONR9R10、 -CH2OH、 -CH2ORn、 一CH20COR11、 -CHO、 -CH(OR12)2、腸CHOR130、 -COR7、 -CR7(OR12)2、 -017011130或-81((:1.6烷基)3;R"為含有l-5個碳的烷基、環烷基或烯基；RS為d-C。烷基、d-d。(三曱基矽基)烷基、Cs-do環烷基、苯基 或低級烷基苯基；p^和R"各自獨立地為-H、 C廠d。烷基、C5-C!o環烷基、苯基或低 級烷基苯基；R"為低級烷基、苯基或低級烷基苯基；R^為低級烷基；且1113為含有2-5個碳的二價烷基。
17. 如權利要求l-3所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR 反向激動劑具有式x的化學結構y3(r4)-x-y乂r"(r2)國z-y2(r2)-a畫b (x),或其藥學上可接受的鹽；其中，Y'為苯基、萘基，或選自吡啶基、噻吩基、呋喃基、噠。秦 基、嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、噁唑基、咪唑基和吡唑基的雜芳基， 其中，苯基、萘基和雜芳基任選且獨立地被Ri基團取代，且任選地進 一步被l或2個f基團取代；R^為d-do烷基、l-金剛烷基、2-四氫吡喃氧基、C廣C6三烷基矽烷氧基、-OH、 d-C^。烷氧基、Crdo烷硫基或-OCH20-(d-C6烷基)； 每個R2獨立地為C廣C6烷基、曙F、 -Cl、 -Br、 -1、 -CF3、 -CF2CF3、 —oh、國or3、 -N02、 -n(r3)2、誦gn、 -n3、 -cor3、 -nhcor3、畫cooh 或-coor3;x為-(c(r3)2)-、 -s畫、-so畫、-s02-、 -o-、 -c(二o)-、 -c(-s)-、 -c(二nr1)-、 -c(k:(r、)-或-nr3-;z為-c三c-、 -n=n-、 -n(0)=n-、 -n=n(0)-、 -n=cr3-、 -cr3=n-、 —(cr3=cr3)n—、 -oco—、 -cso—、 -ocs—、 -cocr3=r30—、畫co一nr3—、-CS-NR3-、 "NR3-C0-或-NR3-CS-; n為0-5的整數；每個r^蟲立地為h或c廠C6烷基；￥2為苯基、萘基，或選自吡啶基、噻吩基、呋喃基、噠嗪基、嘧 啶基、吡嗪基、噻唑基、噁唑基、咪唑基和吡唑基的雜芳基，其中， 苯基、萘基和雜芳基未被取代或被l或2個ie基團取代；或當z 為-(CR^CR3)n-且n為3、 4或5時,Y2代表所述-(CR^CR3)n-基團和B之間的直接價鍵；ys為苯基、萘基，或選自吡啶基、噻吩基、呋喃基、噠嗪基、嘧 啶基、吡。秦基、噻唑基、噁唑基、咪唑基和吡唑基的雜芳基，其中，苯基、萘基和雜芳基未被取代或被1-5個W基團取代；每個r"蟲立地為d-do烷基、含有l-3個叄鍵的C2-dQ炔基、-F、-Cl、 -Br、 -1、 -N02、 -n(R3)2、 -n3、畫COOH、畫COO-(C廣C6烷基)、-OH、 -sh、 -0曙CrC6烷基或-s-CrC6烷基；A為(CH2)q、 C3-CVf氐級支鏈烷基、CVC6環烷基、含有l-2個雙鍵的 CVC6烯基、含有1-2個叄鍵的C2-C6炔基，其中，q為0-5;b為-h、 -cooh、 -coor8、 -conr9r10、 -ch2oh、 -ci^or11, -ch2ocorn、 -cho、 -ch(or12)2、 -chor130、 -cor7、 -cr7(or12)2、 -CR70R^O或-Si(CL6烷基)3;R7為含有l-5個碳的烷基、環烷基或烯基；R8為d-do烷基、d-do三曱基矽基烷基、C3-do環烷基、苯基或低級烷基苯基；R^和R"獨立地為氫、Crd。烷基、CVdG環烷基、苯基或低級烷 基苯基；Rn為低級烷基、苯基或低級烷基苯基； 1112為低級烷基；且 1113為含有2-5個碳的二價烷基。
18. 如權利要求17所述的方法，其中 x為-(c(r3)2)-、 -s-、 -so-、 -s02-、曙0-或-NR3-;且z為-co-nr3-、 -cs-nr3-、 ^113-(:0-或^113-03曙。
19. 如權利要求17所述的方法，其中x為-c(二o)-、 -c(二s)-、 -<:(="111)畫或-(:(=<:(111)2)-;且z為-co-nr3-、 -cs-nr3-、 ^113-00-或^113-€8-。
20. 如權利要求17-19中的任一項所述的方法，其中，YS代表的 苯基、萘基或雜芳基未被取代或被1-3個r"基團取代。
21. 如權利要求l-3所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR 反向激動劑具有如下的化學結構或其藥學上可接受的鹽。
22. 如權利要求l-3所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR 反向激動劑具有如下的化學結構或其藥學上可接受的鹽；其中，n為l-10的整數。
23. 如權利要求l-3所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR 反向激動劑具有如下的化學結構formula see original document page 12或其藥學上可接受的鹽；其中，n為l-10的整數。
24. 如權利要求l-3所述的方法， 反向激動劑具有如下的化學結構:其中，所述RAR拮抗劑或RARformula see original document page 12或其藥學上可接受的鹽。
25. 如權利要求l-3所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR反向激動劑具有如下的化學結構formula see original document page 13或其藥學上可接受的鹽。
26. 如權利要求l-3所述的方法， 反向激動劑具有如下的化學結構其中，所述RAR拮抗劑或RAR或其藥學上可接受的鹽。
27. 如權利要求l-26所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR 反向激動劑經口、局部、全身、腸胃外、皮下或靜脈內施用。
28. 如權利要求l所述的方法，其中，所述副作用選自造血毒性、 造血祖細胞從骨髓向外周血內的動員減少、貧血、骨髓抑制、全血細 胞減少、血小板減少、嗜中性細胞減少、淋巴細胞減少、白細胞減少、 口炎、脫髮、頭痛、肌肉痛及其組合。
29. 如權利要求l所述的方法，其中，所述副作用為化學療法誘 導的嗜中性細胞減少和/或放射療法誘導的嗜中性細胞減少。
30. 如權利要求13、 21-26中的任一項所述的方法，其中，所述 副作用為化學療法誘導的嗜中性細胞減少和/或放射療法誘導的嗜中 性細胞減少。
31. 如權利要求13、 21-26中的任一項所述的方法，其中，所述 副作用為化學療法誘導的血小板減少和/或放射療法誘導的血小板減少。
32. 如權利要求l所述的方法，其中，在開始化學療法和/或放射 療法之前或同時，或在開始化學療法和/或放射療法之後，開始施用RAR拮抗劑或RAR反向激動劑。
33. 如權利要求l-3所述的方法，其中，RAR拮抗劑或RAR反向 激動劑每天施用一次。
34. —種治療患有血小板減少症的哺乳動物的方法，該方法包括 向需要這種治療的哺乳動物施用治療有效量的結合RARa 、 RAR(3和 RARy亞型受體的RAR拮抗劑或RAR反向激動劑。
35. 如權利要求34所述的方法，其中，所述血小板減少症是由化 學療法或放射療法引起的。
36. 如權利要求34所述的方法，其中，在化學療法或放射療法之 前，向所述哺乳動物施用RAR拮抗劑或RAR反向激動劑。
37. 如權利要求34所述的方法，其中，所述血小板減少症是由骨 髓輸注或造血障礙引起的。
38. 如權利要求34所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR 反向激動劑為4-[[4-(4-乙基苯基)-2,2-二甲基-(2H)-苯並硫吡喃-6-基]-乙炔基]-苯曱酸(VTP 194310)或其藥學上可接受的鹽。
39. 如權利要求34所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR 反向激動劑為4-(3-溴-4-乙氧基-5-(4-曱基苯曱醯基)苯甲醯氨基)苯曱 酸(VTP 196996 )或其藥學上可接受的鹽。
40. —種治療患有造血相關狀況的哺乳動物的方法，該方法包括 向該哺乳動物施用治療有效量的結合RARa、 RAR(3和RARy亞型受體 的RAR拮抗劑或RAR反向激動劑。
41. 如權利要求40所述的方法，其中，所述狀況選自降低的造 血功能、降低的免疫功能、減少的嗜中性細胞計數、降低的嗜中性細 胞動員、外周血祖細胞的動員、膿毒症、嚴重的慢性嗜中性細胞減少 症、骨髓移植、傳染病、白細胞減少、血小板減少、貧血、在移植過 程中增強的骨髓植入、在對輻射、化學或化學治療誘導的骨髓發育不全或骨髓抑制的治療中增強的骨髓恢復、獲得性免疫缺陷綜合症及其組合。
42. 如權利要求40所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR 反向激動劑為4-[[4-(4-乙基苯基)-2,2-二曱基-(2H)-苯並硫吡喃-6-基]-乙炔基]-苯曱酸 (VTP 194310 )或其藥學上可接受的鹽。
43. 如權利要求40所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR 反向激動劑為4-(3-溴-4-乙氧基-5-(4-甲基苯甲醯基)苯甲醯氨基)苯甲 酸(VTP 196996 )或其藥學上可接受的鹽。
44. 一種治療需要治療的哺乳動物中與嗜中性細胞和/或血小板 減少或抑制相關的狀態、疾病、障礙、損傷或狀況的方法，該方法包 括向該哺乳動物施用治療有效量的結合RARa、 RAR(3和RARy亞型受 體的RAR拮抗劑或RAR反向激動劑。
45. 如權利要求44所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR 反向激動劑為4-[[4-(4-乙基苯基)-2，2-二甲基-(2H)-苯並硫吡喃_6-基]-乙炔基]-苯甲酸(VTP 194310)或其藥學上可接受的鹽。
46. 如權利要求44所述的方法，其中，所述RAR拮抗劑或RAR 反向激動劑為4-(3-溴-4-乙氧基-5-(4-曱基苯曱醯基)苯曱醯氨基)苯甲 酸(VTP 196996 )或其藥學上可接受的鹽。
全文摘要
本發明公開了一種治療經受化學療法和/或放射療法的哺乳動物中的化學療法和/或放射療法副作用的方法，該方法包括向該哺乳動物施用治療有效量的結合RARα、RARβ和RARγ亞型受體的RAR拮抗劑或RAR反向激動劑的步驟。這樣的副作用包括化學放射療法誘導的脫髮、化學放射療法誘導的血小板減少、化學放射療法誘導的白細胞減少和化學放射療法誘導的嗜中性細胞減少。
文檔編號A61K31/015GK101472572SQ200780022295
公開日2009年7月1日 申請日期2007年5月16日 優先權日2006年5月16日
發明者R·A·錢德拉拉特納, Y·袁 申請人:生命醫藥公司