新的h5蛋白、其編碼核酸、載體及它們的醫藥用途的製作方法

2023-05-30 03:16:11 4

專利名稱：：新的h5蛋白、其編碼核酸、載體及它們的醫藥用途的製作方法
技術領域：
：本發明系關於醫藥領域，優選系關於傳染病領域。尤其，本發明系關於流感蛋白；編碼所述蛋白質的核酸分子及載體；及疫苗。更尤其，本發明系關於所述蛋白質、核酸分子、載體或疫苗中之任一者用於治療及預防流感感染，進一步用於預防流感病毒之種內及種間傳播的用途。
背景技術：
：流感感染仍然為動物及人類之重要感染。流感系由經歷連續抗原性變異/修飾且佔據動物宿主的病毒引起。因此，未來可能發生新的流行病及大流行，且難以實現該疾病之根除。流感病毒是本領域熟知的且詳述於(例如)可供進一步參考之P.Palese，NatureMedicine第10巻，第12期，第S82至S86頁(2004年12月)中。簡而言之，流感A病毒之基因組系由/^個單鏈節段組成，且病毒顆粒在其表面上具有兩種主要糖蛋白血凝素(H)及神經氨酸酶(N)。在流感病毒之間因存在至少16種不同的血凝素(H1至H16)及9種不同的神經氨酸酶(N1至N9)亞型而存在相當多的抗原變異。已證明流感病毒中的H5N1型禽流感病毒可感染禽類、豬及人類。所述病毒亦可自禽類物種直接傳染給人類(Claas等人，Lancet1998，351:472;Suarez等人，J.Virol.1998,72:6678;Subbarao等人，Science1998，279:393;Shortridge，Vaccine1999，17(增刊1):S26-S29)。已知人類臨床病例之死亡率接近約50%。上一個世紀，豬一直為流感大流行之重要媒介。豬、駱駝及海豹(以豬為優選)可充當禽流感病毒之'混合室'，且因此代表一種越過禽類(流感病毒之天然宿主)至哺乳動物之物種障礙之潛在風險因素。這種跨物種傳播常通過易感動物(例如豬)被已知的哺乳動物(豬)流感病毒與禽流感病毒雙重感染而發生。此雙重感染有可能形成能引起人或豬大流行的新重組病毒。然而，最近有跡象表明，當前禽類H5病毒抹與哺乳動物流感病毒之重組不會形成強毒性重組體。另一方面，禽流感病毒可感染豬且藉由自發突變而變得順應於豬。一旦病毒在豬(或其它哺乳動物)群體內引起橫向感染，則將越過關鍵障礙。目前大多數東南亞豬已被鄰近的家禽飼養場的禽(H5)流感病毒林感染。由於這些感染迄今為止都是亞臨床的，因此其僅可藉由實驗室方法診斷並因此常常被忽視。這帶來以下高風險這些亞臨床感染豬為病毒適應哺乳動物系統、在豬群內傳播以及感染人類提供了機會。當前流感疫苗包括亞單位疫苗(Babai等人，Vaccine1999,17(9-10):1223國1238;Crawford等人，Vaccine1999，17(18):2265-2274;Johansson等人，Vaccine1999,17(15-16):2073-2080)、減毒疫苗(Horimoto等人，Vaccine2004,22(17-18):2244-2247)、DNA疫苗(Watabe等人，Vaccine2001,19(31):4434-4444)及滅活流感疫苗(Cao等人，Vaccine1992，10(4):238-242)，其中滅活流感疫苗以商業規模最廣泛使用(Lipatov等人，JVirol2004，78(17):8951-8959)。亞單位疫苗、重組血凝素及神經氨酸酶(Babai等人，Vaccine1999，17(9-10):1223-1238;Crawford等人，Vaccine1999,17(18):2265-2274;Johansson等人，Vaccine1999，17(15-16):2073-2080)有可能成為滅活疫苗的頗受關注的替代物，單目前尚未作為商用疫苗投入使用。這些疫苗製劑顯然比滅活疫苗安全。此外，亞單位疫苗並不對流感病毒內部蛋白產生抗體反應，因此使得能夠區分接種動物和感染動物(Crawford等人，Vaccine1999，17(18):2265-2274)。血凝素蛋白是流感病毒表面與受體結合併與膜融合的糖蛋白，是中和感染力的抗體的攻擊標靶。H5N1的完整血凝素蛋白(HA)系由568個胺基酸組成，分子量為56kDa。HA分子系由HA1及HA2亞單位組成，HA1亞單位介導最初與細胞膜的接觸而HA2負責膜融合(Chizmadzhev,Bioelectrochemistry2004,63(1-2):129-136)。杆狀病毒/昆蟲細胞系統已用於表達從禽流感亞型分離的血凝素基因(Babai等人，Vaccine1999，17(9-10):1223-1238;Crawford等人，Vaccine1999,17(18):2265-2274;Johansson等人，Vaccine1999,17(15-16):2073-2080);New等人，BMCMircobiology2006，6(16):doi:10.1186/1471-2180-6匿16)。然而，這些重組蛋白似乎任何時候都不具有保護性，或者至少對一些物種僅具有較低效力(Treanor等人，Vaccine2001，19:1732-1737)。因此,需要提供更多的改良疫苗及疫苗接種新方法，以便為控制流感感染及對疾病負荷(diseaseload)產生正面影響而提供更好的方法。
發明內容在本發明之實施例之前，應了解，如本文中及隨附申請專利範圍中所使用，單數形式"一"及"該"包括複數提及物，除非上下文另有明確說明。因此，舉例而言，提及"一種製劑"包括複數種所述製劑；提及該"載劑"係指本領域技術人員已知之一或多種載劑及其均等物，諸如此類。除非另外定義，屬技術者通常所了解之含義相同。除非另外指明或本領域技術人員另外得知，否則所有給定範圍及值可變化1至5%，因此術語"約"在本說明書中省去。儘管可在本發明之實施或測試中使用與本文所述所述方法及物質相似或相當的任何方法及物質，但優選的方法、裝置及物質現加以描述。為描述並揭示可配合本發明使用之如出版物中所報導之物質、賦形劑、載劑及認為本文中認可本發明無權優先於先前發明之此類4皮露內容。藉由本說明及申請專利範圍中之特徵性實施例獲得上述技術問題之解決方法。流感蛋白及編碼所述蛋白質的核酸分子本發明涉及流感病毒的H5蛋白，該蛋白具有胺基酸223N及修飾328K+，其中胺基酸位置編號是指SEQIDNO:l所例示的胺基酸位置且其中修飾328K+是指在H5蛋白之胺基酸位置328上插入第二個賴氨酸(K+)。優選地，本發明之該H5蛋白及其它任何H5蛋白為經分離的H5蛋白。已驚人地發現，與在位置223及328/329上不具有相應胺基酸的H5蛋白相比，具有上述修飾的H5蛋白具有更高的抗原性。本文術語"血凝素5(H5)"或"禽流感病毒之H5"或"H5蛋白"是指(但不限於)任何天然存在的H5蛋白及H5蛋白之任何經修飾形式(包括H5蛋白之任何缺失、取代及/或插入突變體)，其中所述H5蛋白具有胺基酸223N及修飾328K+。本文所用H5蛋白的胺基酸位置編號是指SEQIDNO:l所例示的胺基酸位置。SEQIDNO:l代表病毒抹鴨/China/E319-2/03的血凝素的胺基酸序列(但缺少氨基末端信號肽)。換而言之，若提及位置223的胺基酸(胺基酸223)，則是指與SEQIDNO:l中之胺基酸223對應的胺基酸殘基。然而，此並非是指本發明的H5蛋白具有與SEQIDNO:l—致的胺基酸序列。其僅是指本發明H5蛋白的對應胺基酸編碼這裡明確提及的胺基酸殘基。在此情況下，胺基酸223為絲氨酸(S)。例如，術語"223N"或"155N"分別指，位置223及155(根據SEQIDNO:l的胺基酸位置編號)的胺基酸編碼天冬醯胺(N)。換而言之，若提及"具有胺基酸223N的H5蛋白"，則表明，在胺基酸位置223(根據SEQIDNO:l的胺基酸位置編號)，正常情況下編碼絲氨酸的H5胺基酸分子應被天冬醯胺(N)取代。術語"328K+"或"修飾328K+"是指，在H5蛋白之胺基酸位置328(根據SEQIDNO:l的胺基酸位置編號)插入第二個賴氨酸(K+)。天然情況下，位置328及329的胺基酸序列編碼賴氨酸-賴氨酸，未插入其它賴氨酸(K)。然而，大多數已知H5序列在胺基酸位置328及329編碼賴氨酸-精氨酸。在上述任一種情況下，術語328K+修飾是指，應將第二個賴氨酸(K)插入位置328的賴氨酸與位置329的精氨酸之間。於是，修飾後的序列應讀成賴氨酸-賴氨酸-精氨酸(KKR)。因此，本發明系關於H5蛋白及H5蛋白之任何經修飾形式(包括H5蛋白之任何缺失、取代及/或插入突變體)，其中所述H5蛋白具有胺基酸223N及修飾328K+,其中H5蛋白的胺基酸位置編號是指SEQIDNO:l所例示的胺基酸位置且其中修飾328K+是指在H5蛋白之胺基酸位置328上插入第二個賴氨酸(K+)。不言而喻，如本文中所提供之任一種H5蛋白具有抗原性，此是指其在對流感病毒之標準血凝素抑制試驗中展示抗原特性。根據另一實施例，本發明亦系關於H5蛋白之任何部分，此部分是指在標準血凝素抑制試驗中展示抗原特性、且至少具有胺基酸223N及修飾328K+的任何肽片段，其中H5蛋白的胺基酸位置編號是指SEQIDNO:l所例示的胺基酸位置且其中修飾328K+是指在H5蛋白之胺基酸位置328上插入第二個賴氨酸(K+)。若H5蛋白在標準血凝素抑制試驗(例如，如實例2中所述)中抑制凝血，則其展示抗原特性。H5蛋白的該抗原部分通常包含編碼H5蛋白的胺基酸序列中的200、180、160、150、140、130、120、110或最優選105個毗鄰胺基酸，所述H5蛋白是指上述經過修飾或未經修飾、在實例2所述標準血凝素抑制試驗中展示抗原特性的蛋白。標準血凝素抑制試^^例如亦描述於可供進一步參考之Stephenson等人，VirusResearch,第103巻，第91-95頁(2004)中。然而，實施例2所述HI試,瞼應被理解為與本文所述本發明所有方面有關的參考試驗簡而言之，進行HI試驗以衝全測HA特異性抗體之存在。異源H5N2病毒(A/雞/Mexico/232/94)以四個血凝單位[4HA單位]之濃度用於HI試驗中。隨後在U形底微量滴定板中，將PBS中之連續兩倍稀釋血清液與等體積("jxL)(含有4HA單位)之病毒混合，且在室溫(約25°。)培育30分鐘。將PBS中之濃度為0.5%之雞紅細胞添加至含有血清-病毒之孔中且在室溫下培育,40分鐘。以觀測到血凝抑制的最高血清稀釋度之倒數確定HI效價。值得注意的是，Haesebrouck及Pensaert(1986)發現"針對攻擊病毒之HI效價與防禦攻擊之保護之間可能存在關聯"。Haesebrouck及Pensaert(1986)亦測定，HI效價〉40的豬"完全抵抗攻擊且在受攻擊下呼吸道中不發生病毒複製"。因此，在經疫苗接種之豬中形成〉40之HI效價將與保護作用有關。(F.Haesebrouck及M.B.Pensaert,1986)。預先用滅活流感H1N1疫苗免疫之肥育豬之氣管內攻擊的效應(VeterinaryMicrobiology,11(1986)239-249)。須假設等值或至少差不多等值的H5HI效價亦將對豬產生防禦禽流感病毒的完全免疫保護。較低效價至少引起經接種之動物之血清轉化且產生對所述動物之部分免疫保護，此亦可大大降低大流行之風險。此外，本發明的H5蛋白的抗原部分包括(但不限於)H5蛋白之缺失突變體，其包含i.圍繞且包括胺基酸223N之胺基酸序列中之至少35、30、25、20、18、15、13、10、9個或最優選8個毗鄰胺基酸；及ii.圍繞且包括胺基酸修飾328K+之胺基酸序列中之至少35、30、25、20、18、15、13、10、9個或最優選8個毗鄰胺基酸；且iii.其中H5蛋白之該抗原部分中之任一者可在實施例2所述標準血凝素抑制試驗中展示血凝素抑制。優選地，圍繞胺基酸223N及/或328K+之所述胺基酸系由SEQIDNO:l或SEQIDNO:4編碼。此外，本發明之優選H5蛋白為i.上述任一種具有胺基酸223N及修飾328K+的所述H5蛋白；ii.上述任一種具有胺基酸94N/223N及修飾328K+的所述H5蛋白；iii.具有胺基酸223N及修飾328K+的任何禽源H5蛋白，其中禽源是指H5序列來源於一種病毒分離林，該分離林最初是從感染5型禽流感病毒的禽類分離的；或iv.具有胺基酸94N/223N及修飾328K+的任何禽源H5蛋白，其中禽源是指H5序列來源於一種病毒分離抹，該分離抹最初是從感染5型禽流感病毒的禽類分離的；或v.具有胺基酸155N/223N及修飾328K+的任何禽源H5蛋白，其中禽源是指H5序列來源於一種病毒分離抹，該分離林最初是從感染5型禽流感病毒的禽類分離的；或vi.具有胺基酸120N/155N/223N及修飾328K+的任何禽源H5蛋白，其中禽源是指H5序列來源於一種病毒分離林，該分離抹最初是從感染5型禽流感病毒的禽類分離的；或vii.具有修飾94N/223N及修飾328K+的任何H5蛋白；或viii.具有修飾94N/155N/223N及修飾328K+的任何H5蛋白；或；ix.具有修飾94N/120N/155N/223N及修飾328K+的任何H5蛋白；或x.具有修飾223N、修飾328K+及選自以下胺基酸簇(aminoacidclusters)中之一或多者的任何H5蛋白a.aa93-95:GNFb.aa123-125:SDHc.aa128-130:SSGd.aa138-140:GSSe.aa226-228:MDFf.aa270-272:EVEg.aa309-311:NKL;或xi.具有胺基酸223N及修飾328K+及選自以下胺基酸簇中之一或多者的任何H5蛋白a.aa93-95:GNFb.aa128-130:SSGc.aa138-140:GSS;或xii.具有SEQIDNO:4之胺基酸序列的任何H5蛋白。此外，如本文中所提供之優選H5蛋白包括以下文獻所述的H5蛋白Hoffmann等人，PNAS，第106巻，第36期，第12915-12920頁(2005年9月6日)，其中所述H5蛋白包括如上所述之修飾中之一或多者，至少包括胺基酸223N及修飾328K+，其中H5蛋白的胺基酸位置編號是指SEQIDNO:l所例示的胺基酸位置且其中修飾328K+是指在H5蛋白之胺基酸位置328上插入第二個賴氨酸(K+)。該參考文獻之揭示內容將以引用方式全文併入本文中。此外，如本文中所提供之優選H5蛋白包括包含含有胺基酸223N及修飾328K+之肽的H5蛋白，其中H5蛋白的胺基酸位置編號是指SEQIDNO:l所例示的胺基酸位置且其中修飾328K+是指在H5蛋白之胺基酸位置328上插入第二個賴氨酸(K+)，及i.SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5或SEQIDNO:6之胺基酸序列；或ii.具有與i)之多肽至少85%序列同源性、更優選至少約90%序列同源性、甚至更優選至少約95%序列同源性、甚至更優選至少約97%序列同源性、甚至更優選至少約98%序列同源性且甚至更優選至少約99%序列同源性並在如上所述之標準血凝素抑制試驗中展示血凝素抑制的任何肽；或iii.i)或ii)之多肽之任何抗原部分，其包含i)或ii)之肽中之任一者的至少35、30、25、20、18、15、13、10、9或最優選8個毗鄰胺基酸。iv.i)、ii)或iii)之任何肽，其具有胺基酸36T、36K、83A、83T、83D、86A、86V、120N、120S、155N、155S、156A、156T、189R、189K、212K、212R、212E、223N、223N或120N/155N。v.i)、ii)、iii)或iv)之任何肽，其具有選自以下胺基酸簇中之一或多者a.aa93-95:b.aa123-125:c.aa128-130:d.aa138-140:e.aa226-228:f.aa270-272:g.aa309-311:GNFSDHSSGGSS函FEVENKL;或vi.i)、ii)、iii)或iv)之任何肽，a.aa93-95:GNF其具有選自以下胺基酸簇中之一或多者:b.aa128-130:SSGc.aa138-140:GSS。本文所用之"序列同源性"係指測定兩個序列之相關性的方法。為測定序列同源性，將兩個或兩個以上的序列優化對齊，且必要時引入空位(gap)。與序列一致性形成對比，在測定序列同源性時，保守性胺基酸取代視為匹配。換而言之，為獲得具有與參考序列之95%序列同源性的多肽或多核苷酸，參考序列中85%、優選90%、甚至更優選95%之胺基酸殘基或核苷酸必須與其它胺基酸或核苷酸匹配或包含其它胺基酸或核苷酸之保守性取代，或者可將參考序列中全部胺基酸殘基或核苷酸(不包括保守性取代)之至多15%、優選至多10%、甚至更優選至多5%量的胺基酸或核苷酸插入參考序列中。優選地，同源序列包含至少一段50個核苷酸、甚至更優選100個核苷酸、甚至更優選250個核苷酸、甚至更優選500個核苷酸。此對齊後，逐位確定序列同源性，例如，若核苷酸或胺基酸殘基在特定位置處一致，則序列在彼位置上"同源"。接著將所述位置一致之總數除以參考序列中核苷酸或胺基酸殘基之總數以得到序列同源性％。序列同源性可容易地藉由已知方法計算，所述方法包括(但不限於)以下文獻中所述之所述方法ComputationalMolecularBiology,Lesk,A.N.編，OxfordUniversityPress,NewYork(1988),Biocomputing:InformaticsandGenomeProjects,Smith,D.W.編，AcademicPress,NewYork(1993);ComputerAnalysisofSequenceData,第I部分，Griffin,A.M.,及Griffin，H.G.編，HumanaPress,NewJersey(1994);SequenceAnalysisinMolecularBiology,vonHeinge，G.，AcademicPress(1987);SequenceAnalysisPrimer,Gribskov,M.及Devereux，J.編，M.StocktonPress,NewYork(1991);及Carillo,H.及Lipman,D.，SIAMJ.AppliedMath.,48:1073(1988)，所述文獻之教示內容以引用方式併入本文中。設計序列同源性之優選測定方法以使所測試之序列之間達成最大匹配。序列同源性測定方法可編程為可公開獲得之測定指定序列之間的序列一致性的電腦程式。所述程序之實例包括(但不限於)GCG程序套件(Devereux,J.等人，NucleicAcidsResearch,12(1):387(1984))、BLASTP、BLASTN及FASTA(Altschul，S.F.等人，J.Molec,Biol"215:403-410(1990))。BLASTX程序可乂>開獲自NCBI及其它來源(BLASTManual,Altschul,S.等人，NCVINLMNIHBethesda,MD20894,Altschul,S.F.等人，J.Molec.Biol.，215:403-410(1990)，所述文獻之教示內容以引用方式併入本文中)。所述程序利用預設空位;K重使序列最優選對齊，以使指定序列與參考序列之間達成最高水平的序列同源性。此外，優選的H5蛋白包括包含如上所述之328K+修飾及表1中所提供之胺基酸序列的H5蛋白或其任何免疫原部分表1:H5抗原tableseeoriginaldocumentpage13tableseeoriginaldocumentpage14BAE48694、BAE48692、BAE48691、BAE48690、BAE48689、BAE48688、BAE48687、BAE48686、BAE48685、BAE楊84、BAE48683、AAC58999、ABC72082、AAV91149、AAP71993、AAP71992、AAP71991、AAP71990、AAP71989、AAP72011、AAP72010、AAP72009、AAP72008、AAP72007、AAP72006、AAP72005、AAP72004、AAP72003、AAP72002、AAP72001、AAP72000、AAP71999、AAP71998、AAP71997、AAP71996、AAP71995、AAP71994、AAF99718、ABF58847、AAG38534、AAC32102、AAC32099、AAL75847、AAC32101、AAC32098、AAC32088、AAC32078、AAR99628、AAC32亂AAM49555、AAL75843、AAL75839、AAD13573、AAD13568、AAF04720、AAF04719、AAC34263、AAR16155、AAD13574、AAD13570、AAD13575、AAD13572、AAD13569、AAD13567、AAD13566、AAK57506、AAG01225、AAG01215、AAG01205、AAG01195或ABD83813，它們如上述修飾，此是指這些序列包括上述223N及328K+修飾，這些修飾並不是野生型序列的組成部分；或ii.具有與i)之多肽之至少85%序列同源性、更優選至少約90%序列同源性、甚至更優選至少約95%序列同源性、甚至更優選至少約97%序列同源性、甚至更優選至少約98%序列同源性且甚至更優選至少約99%序列同源性且在如上所述之標準血凝素抑制試驗中展示血凝素抑制的任何肽；iii.i)或ii)之肽中之任一者，其具有胺基酸36T、36K、83A、83T、83D、86A、86V、120N、120S、155N、155S、156A、156T、189R、189K、212K、212R、212E、263A、263T或120N/155N;或iv.i)、ii)或iii)之所述肽中之任一者，其具有選自以下胺基酸簇中之一或多者a.aa93-95:GNFb.aa123-125:SDHc.aa128-130:SSGd.aa138-140:GSSe.aa226-228:MDFf.aa270-272:EVEg.aa309-311:NKL;或v.i)、ii)、iii)或iv)之任何肽，其具有選自以下胺基酸簇中之一或多者a.aa93-95:GNFb.aa128-130:SSGc.aa138-140:GSS。根據另一實施例，本發明亦系關於編碼上述H5蛋白中之任一者的核酸分子。優選地，所述核酸分子為RNA、DNA或拷貝(c)DNA分子。因此，本發明系關於核酸分子，優選編碼H5蛋白及H5蛋白之任何修飾形式(包括H5蛋白之任何缺失、取代及/或插入突變體)的cDNA分子，其中所述H5蛋白具有胺基酸223N及修飾328K+,其中H5蛋白的胺基酸位置編號是指SEQIDNO:l所例示的胺基酸位置且其中修飾328K+是指在H5蛋白之胺基酸位置328上插入第二個賴氨酸(K+)。根據另一實施例，本發明亦系關於核酸分子，優選編碼H5蛋白之任何部分的cDNA分子，其是指編碼在上述標準血凝素抑制試驗中展示抗原特性且至少具有胺基酸223N及修飾328K+之任何肽片段的cDNA分子，其中H5蛋白的胺基酸位置編號是指SEQIDNO:1所例示的胺基酸位置且其中修飾328K+是指在H5蛋白之胺基酸位置328上插入第二個賴氨酸(K+)。通常，編碼H5蛋白的抗原部分的所述核酸分子包含編碼上述經修飾或未經修飾且在如本文所述之標準血凝素抑制試驗中展示抗原特性的H5蛋白的核苷酸序列中之600、540、480、450、420、390、360、330或最優選315個毗鄰核香酸。H5蛋白的抗原部分之其它實施例在上文中加以描述。構建任何所述核酸分子(優選編碼上述H5蛋白的抗原部分的cDNA分子)已為本領域技術人員所共知。此亦包括(但不限於)構建編碼上述H5蛋白的抗原部分(包括H5蛋白之缺失突變體)的核酸分子(優選cDNA分子)，其包含i.圍繞且包括編碼胺基酸223N之編碼序列的核苷酸序列中之至少105、90、75、60、48、45、39、30、27或最優選24個毗鄰核苷酸；及ii.圍繞且包括編碼修飾328K+之編碼序列的核苷酸序列中之至少105、卯、75、60、48、45、39、30、27或最優選24個毗鄰核苷酸；且iii.其中H5蛋白之該抗原部分中之任一者在實施例2所述標準血凝素抑制試驗中展示血凝素抑制。優選地，圍繞編碼胺基酸223N及/或328K+之核香酸的所述核苷酸編碼SEQIDNO:l或SEQIDNO:4。此外，本發明之編碼H5蛋白之優選核酸分子為i.上述編碼胺基酸223N及修飾328K+的所述核酸分子中之任一者；ii.上述編碼胺基酸94N/223N及》務飾328K+的所述核酸分子中之任一者；iii.編碼胺基酸223N及修飾328K+的任何禽源核酸分子，其中禽源是指H5序列來源於一種病毒分離抹，所述分離林最初是從感染5型禽流感病毒的禽類分離的；或iv.編碼胺基酸94N/223N及修飾328K+的任何禽源核酸分子，其中禽源是指H5序列來源於一種病毒分離林，所述分離林最初是從感染5型禽流感病毒的禽類分離的；或v.編碼胺基酸155N/223N及修飾328K+的任何禽源核酸分子，其中禽源是指H5序列來源於一種病毒分離抹，所述分離抹最初是從感染5型禽流感病毒的禽類分離的；或vi.編碼具有胺基酸120N/155N/223N及修飾328K+之禽源H5蛋白的任何核酸分子，其中禽源是指H5序列來源於一種病毒分離林，所述分離抹最初是從感染5型禽流感病毒的禽類分離的；或vii.編碼具有修飾94N/223N及修飾328K+的H5蛋白的任何核酸分子；或viii.編碼具有修飾94N/155N/223N及修飾328K+的H5蛋白的任何核酸分子；或ix.編碼具有修飾94N/120N/155N/223N及修飾328K+的H5蛋白的任何核酸分子；或x.編碼具有修飾223N、修飾328K+及選自以下胺基酸簇中之一或多者的H5蛋白的任何核酸分子a.aa93-95:GNFb.aa123-125:SDHc.aa128-130:SSGd.aa138-140:GSSe.aa226-228:MDFf.aa270-272:EVEg.aa309-311:NKL;或xi.編碼具有胺基酸223N、修飾328K+及選自以下胺基酸簇中之一或多者的H5蛋白的任何核酸分子a.aa93-95:GNFb.aa128-130:SSGc.aa138-140:GSS;或xii.編碼具有SEQIDNO:4之胺基酸序列的H5蛋白的任何核酸分子。此外，如本文中所提供之優選H5蛋白包括以下文獻所述的H5蛋白Hoffmann等人，PNAS，第106巻，第36期，第12915-12920頁(2005年9月6日)，其中所述H5蛋白包括如上所述之修飾中之一或多者，至少包括胺基酸223N及修飾328K+，其中H5蛋白的胺基酸位置編號是指SEQIDNO:l所例示的胺基酸位置且其中修飾328K+是指在H5蛋白之胺基酸位置328上插入第二個賴氨酸(K+)。此參考文獻之揭示內容將以引用方式全文併入本文中。因此，根據另一實施例，本發明亦系關於任何核酸分子，優選編碼以下文獻所述之所述蛋白質中之任一者的cDNA分子Hoffmann等人，PNAS,第106巻，第36期，第12915-12920頁(2005年9月6日)，其中所述H5蛋白包括上述修飾中之一或多者，至少包括胺基酸223N及修飾328K+，其中H5蛋白的胺基酸位置編號是指SEQIDNO:l所例示的胺基酸位置且其中修飾328K+是指在H5蛋白之胺基酸位置328上插入第二個賴氨酸(K+)。將上述任何修飾引入核苷酸序列(包括流感病毒的H5蛋白之編碼序列)內的方法是本領域熟知的。完整流感病毒之基因組序列可根據本發明加以修飾，例如根據可供進一步參考之US6，951，754中所述的方法加以修飾。此外，可利用此項技術技能範圍內之傳統分子生物學、微生物學及重組DNA技術修飾編碼本文中所述的抗原的核酸序列。所述技術已詳釋於文獻中。參見例如Sambrook等人,MolecularCloning:ALaboratoryManual,第二版(1989)ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.;DNACloning:APracticalApproach,第I及II巻(D.N.Glover編，1985);OligonucleotideSynthesis(M.J.Gait編，1984);NucleicAcidHybridization[B.D.Hames&S.J.Higgins編(1985)];TranscriptionAndTranslation[B.D.Hames&S.J.Higgins編(1984)];AnimalCellCulture[R.I.Freshney編(1986)];ImmobilizedCellsAndEnzymes[IRLPress,(1986)];B.Perbal,APracticalGuideToMolecularCloning(1984);F.M.Ausubel等人編，CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&Sons,Inc.1994)。根據另一實施例，本發明亦系關於包含上述核酸分子中之任一者的載體。換而言之，本發明系關於包括上述任何該H5蛋白或其部分之編碼序列的載體。優選地，該載體為使上述任何該H5蛋白或其部分得到表達的表達載體。本發明的載體為適於在活體外或活體內轉染或感染細菌、酵母或動物細胞的所述載體。載體及用於製備及/或使用表達載體(或重組體)的方法可依據或類似於以下文獻中所揭示之與DNA表達載體相關的方法美國專利第4,603,112號、第4，769，330號、第5,174,993號、第5,505,941號、第5,338,683號、第5,494,807號、第4，722，848號、第5,942,235號、第5,364,773號、第5,762,938號、第5,770,212號、第5,942,235號、第382,425號；PCT出版物WO94/16716、WO96/39491、WO95/30018;Paoletti,"Applicationsofpoxvirusvectorstovaccination:Anupdate,"PNASUSA93:11349-11353,1996年10月；Moss,"Geneticallyengineeredpoxvirusesforrecombinantgeneexpression,vaccination,andsafety,"PNASUSA93:11341-11348,1996年10月；Smith等人，美國專利第4，745，051號(重組杆狀病毒)；Richardson,C.D.(編者)，MethodsinMolecularBiology39,"BaculovirusExpressionProtocols"(1995HumanaPressInc.);Smith等人，"ProductionofHumanBetaInterferoninInsectCellsInfectedwithaBaculovirusExpressionVector",MolecularandCellularBiology,1983年12月，第3巻，第12期，第2156-2165頁；Pennock等人，"StrongandRegulatedExpressionofEscherichiacoliB-GalactosidaseinInfectCellswithaBaculovirusvector,"MolecularandCellularBiology,1984年3月，第4巻，第3期，第399-406頁；EPA0370573;美國申請案第920,197號(1986年10月16日申請)；EP專利出版物第265785號；美國專利第4,769,331號(重組皰滲病毒)；Roizman，"Thefunctionofherpessimplexvirusgenes:Aprimerforgeneticengineeringofnovelvectors,"PNASUSA93:11307-11312,1996年10月；Andreansky等人，"Theapplicationofgeneticallyengineeredherpessimplexvirusestothetreatmentofexperimentalbraintumors,"PNASUSA93:11313-11318，1996年10月；Robertson等人，"Epstein-BarrvirusvectorsforgenedeliverytoBlymphocytes",PNASUSA93:11334-11340，1996年10月；Frolov等人，"Alphavirus-basedexpressionvectors:Strategiesandapplications,"PNASUSA93:11371-11377，1996年10月；Kitson等人，J.Virol.65,3068-3075,1991;美國專利第5,591，439號、第5,552,143號、WO98/00166;已受理之美國申請案第08/675,556號、第08/675,566號(兩者均於1996年7月3日申請)(重組腺病毒)；Grunhaus等人，1992，"Adenovirusascloningvectors,"SeminarsinVirology(第3巻)，第237-52頁，1993;Ballay等人，EMBOJournal,第4巻，第3861-65頁；Graham,Tibtech8,85-87,1990年4月；Prevec等人，J.GenVirol.70,42434;PCTWO91/11525;Feigner等人，(1994),J.Biol.Chem.269,2550-2561,Science,259:1745-49,1993及McClements等人，"ImmunizationwithDNAvaccinesencodingglycoproteinDorglycoproteinB,aloneorincombination,inducesprotectiveimmunityinanimalmodelsofherpessimplexvirus-2disease",PNASUSA93:11414-11420,1996年10月；及美國專利第5,591,639號、第5,589,466號及第5,580,859號;以及WO90/11092、W093/19183、W094/21797、WO95/11307、WO95/20660;Tang等人，Nature;及Furth等人，AnalyticalBiochemistry等。亦可參見WO98/33510;Ju等人，Diabetologia，41:736-739，1998(豆狀病毒表達系統)；Sanford等人，美國專利第4,945,050號；Fischbach等人(Intracel)，WO90/01543;Robinson等人，seminarsinImmunology第9巻，第271-283頁(1997)(DNA載體系統)；Szoka等人，美國專利第號(將DNA插入活細胞內的方法)；McCormick等人，美國專利第5，677，178號(細胞病病毒之使用)；及美國專利第5,928,913號(用於基因傳遞的載體)以及本文中所引用之其它文件。病毒載體例》。選自豬皰滲病毒(i者i。Aujeszky氏疾病病毒)、豬&泉病毒、和痘病毒(尤其牛痘病毒、禽痘病毒、金絲雀痘病毒及豬痘病毒)。本發明H5蛋白的製備方法根據另一方面，本發明提供製備及/或回收高產量重組H5蛋白的方法i)用含有H5DNA編碼序列的重組病毒載體感染培養中的易感細胞，其中所述重組病毒載體表達H5蛋白；及ii)爾後自細胞培養物中回收H5蛋白。H5蛋白之高產量是指(但不限於)約20嗎/ml細胞培養物以上、優選約25i!g/ml以上、甚至更優選約30昭/ml以上、甚至更優選約40|ig/ml以上、甚至更優選約50|ig/ml以上、甚至更優選約60|ig/ml以上、甚至更優選約80}ig/ml以上、甚至更優選約100(xg/ml以上、甚至更優選約150ng/ml以上、最優選約190ng/ml以上。根據一優選實施例，藉由收穫表達H5蛋白之全(亦即完整)SF+細胞來回收H5蛋白。優選細胞為所述易受含有H5DNA並表達H5蛋白的適當重組病毒載體感染之細胞。優選地，所述細胞為昆蟲細胞，且更優選地，其包括以商標SF+昆蟲細月包(ProteinSciencesCorporation,Meriden,CT)出售的昆蟲細月包。優選的細胞培養物的細胞數約0.3-2.0xl(^個細胞/ml，更優選約0.3-1.9xlS個細胞/ml、甚至更優選約0.4-1.8xl(^個細胞/ml、甚至更優選約0.45-1.7xl06個細胞/ml,最優選約0.5-1.5xl(^個細胞/ml。優選病毒載體包括杆狀病毒，諸如BaculoGold(BDBiosciencesPharmingen,SanDiego，CA)，尤其是在製備細胞為昆蟲細胞的情況下。儘管杆狀病毒表達系統為優選的，但本領域技術人員應了解，其它表達系統可用於本發明之目的，亦即用於使H5表達至細胞培養物之上清液中。所述其它表達系統可能需要使用信號序列以使H5表達至培養基中。適當生長培養基亦可由本領域技術人員確定，優選生長培養基為無血清昆蟲細胞培養基，諸如Excell420(JRHBiosciences,Inc.，Lenexa，KS)及類似培養基。當用於感染易感細胞時，含有H5DNA序列的重組病毒載體優選感染複數(MOI)約0.03-1.5、更優選約0.05-1.3、甚至更優選約0.09-1.1，最優選約0.1-1.0。優選地，上述MOI是針對lmL細胞培養液而言。優選地，本文中所述方法包含用MOI(感染複數)約0.03-1.5、更優選約0.05-1.3、甚至更優選約0.09-1.1、最優選約0.1-1.0的含H5DNA並表達H5蛋白的重組病毒載體感染0.35-1.9xl(^個細胞/ml、甚至更優選約0.4-1.8xl(^個細胞/ml、甚至更優選約0.45-1.7xlG個細胞/ml且最優選約0.5-1.5xl06個細胞/ml。接著將受感染細胞培育至多10天、更優選約2-10天、甚至更優選約4-9天，最優選約5-8天。優選的培育條件包括溫度約22-32°C、更優選約24-30°C、甚至更優選約25-29°C、甚至更優選約26-28°C,最優選約27。C。優選地，接種之後觀測到SF+細胞具有被杆狀病毒誘導的特徵性變異。此種觀測包括感染後監測細胞密度變化及存活力降低。已發現，感染後3-5天觀測到峰值病毒效價，且細胞中的H5蛋白表達在第5天與第8天之間且/或在細胞存活力降至小於10%時達到峰值。因此，本發明一方面提供製備及/或回收重組H5蛋白(優選為上述量)的方法i)用具有上述MOI的重組病毒載體感染培養中的大量易感細胞(見上文)；ii)由重組病毒載體表達H5蛋白；及iii)爾後收集感染後5-8天的細胞，且/或收集細胞存活力降至小於10%之時的細胞，A/v中回收H5蛋白。優選地，重組病毒載體為含有H5DNA編碼序列的重組杆狀病毒且所述細胞為SF+細胞。此外，優選定期檢查培養物受汙染之宏觀及微觀跡象或感染後細胞形態之異常變化。任何呈現任何汙染的培養物應棄去。為回收在免疫原性或免疫組合物(諸如疫苗)中使用的H5蛋白，優選包括滅活步驟以便將病毒載體滅活。"免疫原性或免疫組合物"係指包含至少一種抗原的物質組合物，該抗原可在宿主體內引發對目標組合物或疫苗的免疫反應，是細胞性免疫反應及/或抗體介導之免疫反應。通常，"免疫反應"包括(但不限於)以下效應中之一B細胞、輔助性T細胞、抑制性T細胞及/或細胞毒性T細胞及/或y-ST細胞。優選地，宿主可呈現治療性或保護性免疫反應，以便增強對新感染之抵抗力及/或降低疾病之臨床嚴重程度。此保護作用表現為受感染宿主通常所呈現之症狀減少或消失、恢復時間加快及/或受感染宿主之病毒效價降低。因此，本發明亦系關於製備及/或回收重組H5蛋白(優選為上述量)的方法i)用具有上述MOI的重組病毒載體感染培養中的大量易感細胞(見上文)；ii)由重組病毒載體表達H5蛋白；及iii)爾後收集感染後5-8天的細胞，且/或收集細胞存活力降至小於10%之時的細胞，從中回收H5蛋白；及iv)將重組病毒載體滅活。優選地，此滅活系在即將進行過濾步驟之前進行或在過濾步驟剛結束之後進行，過濾步驟之後為優選滅活時間。任何傳統滅活方法可用於本發明之目的。因此，滅活可藉由化學及/或物理處理來進行。在優選形式中，測定所收穫流體之體積且使溫度介於約32-42。c之間、更優選介於約34-40°c之間且最優選介於約35-39。c之間。優選滅活方法包括添加環化二乙烯亞胺(binaryethylenimine，BEI)，此物質濃度優選為約lmM至約20mM、優選為約2mM至約10mM、甚至更優選為約2mM至約8mM、甚至更優選為約3mM至約7mM、最優選為約5mM。舉例而言，滅活包括將優選為約0.4M之2-溴伸乙基胺氫溴化物溶液(其已在0.3NNaOH中環化為0.2M二乙烯亞胺BEI)添加至流體中以得到最終濃度約5mM之BEI。優選地，接著將流體連續攪拌72-96小時，且可將經滅活之收穫流體在-40。C或-4(TC以下冷凍儲存或在約l-7。C之間儲存。滅活完成後，添加硫代硫酸鈉溶液(優選為1.0M)以中和任何殘餘BEI。優選地，碌u代碌u酸鈉的添加量與滅活之前所添加之BEI的量相當。舉例而言，在添加BEI至最終濃度為5mM之情況下，添加1.0M硫代硫酸鈉溶液以得到最終最小濃度5mM以中和任何殘餘BEI。因此，本發明之另一方面系關於一種如下製備重組H5蛋白(優選為上述量)的方法i)用具有上述MOI的重組病毒載體感染培養中的大量易感細胞(見上文)；ii)由重組病毒載體表達H5蛋白；及iii)爾後收集感染後5-8天的細胞，且/或收集細胞存活力降至小於10%之時的細胞，從中回收H5蛋白；及iv)將重組病毒載體滅活。優選地，重組病毒載體為含有H5DNA編碼序列的杆狀病毒且所述細胞為SF+細胞。優選滅活步驟為上述步驟。優選地，滅活系在約35-39。C且在2mM至8mMBEI存在下、甚至更優選在約5mMBEI存在下進行。根據本發明之另一方面，上述方法亦包括步驟iv)之後的中和步驟。此步驟v)包含添加中和溶液中之滅活劑的等量試劑。優選地，若滅活劑為BEI,則優選添加等量之硫代硫酸鈉。因此，根據另一方面，當滅活劑為BEI時，步驟v)包含添加硫代硫酸鈉溶液直至最終濃度為約1mM至約20mM、優選約2mM至約10mM、甚至更優選約2mM至約8mM、甚至更優選約3mM至約7mM、最優選約5mM。在優選形式中且尤其在以免疫原性組合物(諸如疫苗)使用重組H5蛋白之形式中，每一批所收穫的H5蛋白通過在具有貼壁依賴性、且易被杆狀病毒感染的昆蟲細胞(諸如Sf9細胞)中傳代來測試滅活。在此測試之一優選形式中，將150cn^之適當細胞培養單層用1.0mL經滅活之H5流體接種且在25-29。C下維持14天，期間至少傳代兩次。在維持期結束時，對細胞單層檢查H5桿狀病毒所特有之致細胞病變作用(CPE)。優選地，亦使用陽性病毒對照。此等對照可由以下各物組成一份經未滅活之參考H5桿狀病毒接種之Sf9細胞培養物及一瓶尚未接種之Sf9細胞。培育及傳代之後，經BEI處理之病毒流體中不存在受病毒感染之細胞說明滅活測試令人滿意。經參考病毒接種之對照細胞應呈現H5桿狀病毒所特有之CPE而未接種燒瓶應不呈現任何H5桿狀病毒CPE跡象。或者，在維持期結束時，可收集上清液樣本且將其接種於Sf996孔板上，該孔板已裝載Sf9細胞，接著在25-29°C下維持5-6天。接著將孔固定，用偶聯FITC的抗-H5抗體或抗杆狀病毒特異性蛋白(亦即gp64)的任何標記抗體染色。經BEI處理之病毒流體中不存在CPE、H5表達或杆狀病毒特異性蛋白(亦即gp64)之表達說明滅活測試令人滿意。經參考病毒接種之對照細胞應呈現CPE及IFA活性，而未接種燒瓶應不呈現任何H5桿狀病毒CPE跡象且不含IFA活性。因此，本文所述另一方面系關於用於測定表達H5蛋白之重組病毒載體之滅活有效性的滅活測試，其包含以下步驟i)使含有重組病毒載體之培養流體之至少一部分與優選如上所述之滅活劑接觸；ii)添加優選如上所述之中和劑以中和滅活劑；及iii)藉由如上所述之試驗測定殘餘感染性。滅活之後，可以多種方式測定樣本中重組H5蛋白之相對量。優選量化方法包括SDS-PAGE密度測定法、ELISA及動物接種研究，其使已知疫苗量與臨床結果(血清學等)相關。當利用SDS-PAGE量化時，將含有未知量之重組H5蛋白的樣本物質連同含有各種已知量之重組H5蛋白的樣本一起在凝膠上展開。接著可基於已知樣本形成標準曲線，且可藉由與此標準曲線比較來測定未知樣本中重組H5之量。由於ELISA通常公認為抗原量化之行業標準，因此優選利用ELISA進行量化。包含H5蛋白或編碼所述蛋白質的核酸分子或載體的疫苗根據另一方面，本發明系關於通常包含以下物質的疫苗或藥物組合物i.一或多種本文所述H5蛋白；ii.一或多種如本文所述之編碼任何所述H5蛋白的核酸分子；及/或iii.一或多種本文所述載體，其包含如本文所述之任一種所述核酸分子且編碼如本文所述之任何所述H5蛋白；及iv.可藥用載劑及/或賦形劑。如本文所述之術語"藥物組合物"、"藥物/疫苗組合物"包括(但不限於)用於減少或預防感染的疫苗或用於治療及減輕感染的物質組合物。編碼流感血凝素的基於核酸的疫苗(優選cDNA疫苗)的製備例如描述於以下參考文獻中Deck等人,Vaccine1997;15(1):71-78;Ulmer等人，Science1993;259:1745-1749;Ulmer等人，Vaccine1994;12(16):1541隱1544。任何所述方法可用於製備編碼如本文所述之流感H5蛋白的基於核酸的疫苗，優選CDNA疫苗。此外，包含本文所述H5蛋白或其部分的疫苗可藉由傳統方法製備，例如藉由重組表達技術或藉由生物化學純化及分離技術製備。重組表達技術(包括在昆蟲細胞中表達)是本領域熟知的且例如描述於以下參考文獻中Sambrook等人，MolecularCloning:ALaboratoryManual,第二版(l989)ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.;DNACloning:APracticalApproach,第I及II巻(D.N.Glover編，1985);OligonucleotideSynthesis(M.J.Gait編，1984);NucleicAcidHybridization[B.D.Hames&S.J.Higgins編(1985)];TranscriptionAndTranslation[B.D.Hames&S.J.Higgins編(1984)];AnimalCellCulture[R.I.Freshney編(1986)];ImmobilizedCellsAndEnzymes[IRLPress,(1986)];B.Perbal，APracticalGuideToMolecularCloning(1984);RM.Ausubel等人(編)，CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&Sons,Inc.1994)。成熟的重組表達系統的其它實例有，細菌表達系統如大腸桿菌(E.coli)或枯草芽孢桿菌(B.subtilis);基於酵母之表達系統如釀酒酵母(S.cerevisiae)或粟酒裂殖酵母(S.pombe);或哺乳動物細胞表達系統如基於BHK、CHO及/或NS0的表達系統。所述系統是本領域熟知的且一般可(例如)經由ClontechLaboratories,Inc.4030FabianWay,PaloAlto，California94303-4607,USA購得。其它表達策略例如描述於Liischow等人，Vaccine第19期(2001)，第4249-4259頁或Veit等人，PNAS第103巻(2006)，第8197-8202頁中。此外，重組腺伴隨病毒系統為成熟系統且描述於例如可供進一步參考之US5,436,146或WO200203872中。此外，基於牛痘(痘)病毒之表達系統(例如，如可供進一步參考之US6,265,183中所述)亦為成熟系統且適於製備本發明用的重組抗原、抗原組合物。其它適當表達系統利用重組的乳多空病毒(如SV40)、禽痘病毒、假型3王犬病病毒及逆4t錄病毒。本文所述相關藥物/疫苗組合物亦可包含含有本文所述H5蛋白的滅活病毒，含有本文所述H5蛋白的活病毒的非致病形式、含有本文所述H5蛋白的病毒製劑及/或病毒片段。本領域技術人員已知可以與抗原一起包含於所述組合物/疫苗中的其它組分(參見例如Remington'sPharmaceuticalSciences.(1990),第18版，MackPubl.,Easton)。本領域技術人員可使用已知的生理學上可接受之無菌可注射溶液。需要製備即用溶液(aready-to-usesolution)時，可以很容易地獲得鹽水或相應血漿蛋白溶液之類的等滲水溶液。藥物組合物/疫苗可以是凍幹製劑或乾燥製劑，如組配試劑盒的形式，它們可在無菌條件下於臨用前用已知的注射液重建。此外，本發明之藥物/疫苗組合物可包括一或多種獸醫學上可接受之載劑。本文中，"獸醫學上可接受之載劑"包括(但不限於)任何及所有溶劑、分散介質、包衣、佐劑、穩定劑、稀釋劑、防腐劑、抗細菌劑及抗真菌劑、等滲劑、吸收延遲劑及類似載劑。稀釋劑可包括水、鹽水、葡萄糖、乙醇、甘油及類似物。等滲劑尤其可包括氯化鈉、葡萄糖、甘露糖醇、山梨糖醇及乳糖。穩定劑尤其包括白蛋白及乙二胺四乙酸的石鹹金屬鹽。本文所用之防腐劑係指抗;敞生物活性劑，諸如慶大黴素(Gentamycin)、硫柳汞(Merthiolate)及類似物。具體地，製備一種多劑量組合物最優選添加防腐劑。所述抗微生物活性劑的濃度足以有效防止目標組合物受任何微生物汙染或抑制目標組合物內任何微生物生長。本文所用之"佐劑"可包括氫氧化鋁及磷酸鋁、皂苷(例如QuilA、QS-21(CambridgeBiotechInc.,CambridgeMA)、GPI-0100(GalenicaPharmaceuticals:Inc.,Birmingham,AL))、油包水型乳液、水包油型乳液、水包油包水型乳液。乳液尤其可基於輕質液狀石蠟油(歐洲藥典類型)；類異戊二烯油，諸如角鯊烷或角鯊烯；烯烴(尤其異丁烯或癸烯)之寡聚反應所產生之油；含有直鏈烷基之酸或醇之酯，尤其植物油、油酸乙酯、丙二醇二-(辛酸酯/癸酸酯)、甘油基三-(辛酸酯/癸酸酯)或丙二醇二油酸酯；支鏈脂肪酸或醇之酯，尤其異硬脂酸酯。油可與乳化劑組合使用以形成乳液。乳化劑優選為非離子型表面活性劑，尤其脫水山梨糖醇酯、二縮甘露糖醇酯(例如脫水甘露糖醇油酸酯)、乙二醇酯、聚甘油酯、丙二醇酯及油酸酯、異硬脂酸酯、荒麻酸酯或羥基硬脂酸酯(其視情況經乙氧基化)；及聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段共聚物，尤其Pluronic產品，尤其L121。參見Hunter等人，TheTheoryandPracticalApplicationofAdjuvants(Stewart-Tull編，D.E.S.).JohnWileyandSons,NY，第51-94頁(1995)及Todd等人，Vaccine15:564-570(1997)。適當水包油型乳液之實例為基於Emulsigen的佐劑，諸如EMULSIGEN、EMULSIGEN-D、EMULSIGEN-P、EMULSIGEN-75(MVPLaboratories,Inc.Omaha,NE,USA)。意外發現，包含H5蛋白、優選本文所述重組H5蛋白的藥物/疫苗組合物可以被水包油型乳液，優選為所述基於Emulsigen的佐劑，更優選EMULSIGEN⑧及EMULSIGEN-D⑧有效輔佐。此夕卜，可使用M.Powell及M.Newman所編之"VaccineDesign,TheSubunitandAdjuvantApproach"第147頁所述之SPT乳液及該書第183頁所述之乳液MF59。佐劑之另一實例為選自丙蹄酸或曱基丙烯酸之聚合物及順丁烯二酸酐與鏈烯基衍生物之共聚物的化合物。有益的佐劑化合物為丙烯酸或甲基丙烯酸之聚合物，尤其與糖或多元醇的聚乙烯基醚形成的交聯物。所述化合物稱為卡波姆(carbomer)(Phameuropa第8巻，第2期，1996年6月)。本領域技術人員亦可參考美國專利第2,909,462號，其描述與具有至少3個羥基、優選不超過8個羥基之多羥基化合物交聯的所述丙烯酸聚合物，至少三個羥基中之氫原子可置換為具有至少2個碳原子的不飽合脂族基。優選基團為含有2至4個碳原子的所述基團，例如乙烯基、烯丙基及其它烯鍵式不飽合基團。不飽合基團本身可含有其它取代基，諸如曱基。以商品名Carbopol(BFGoodrich,Ohio,USA)銷售的產品尤其適用。其與烯丙基蔗糖或烯丙基異戊四醇交聯。其中可提及Carbopol9MP、9MP及9"P。最優選為使用Carbopol971P。在順丁晞二酸酐與烯基衍生物之共聚物中，共聚物EMA(Monsanto)為順丁烯二酸酐與乙烯之共聚物。所述聚合物溶解於水中可產生酸溶液，使該酸溶液中和，優選中和至生理pH值，以便得到佐劑溶液，再向其中加入免疫原性、免疫性或疫苗性組合物。其它適當佐劑尤其包括(但不限於)RIBI佐劑系統(RibiInc.)、嵌段共聚物(CytRx,AtlantaGA)、SAF-M(Chiron,EmeryvilleCA)、單磷醯脂質A、阿夫立定(Avridine)脂質胺佐劑、大腸桿菌熱不穩定性腸毒素(重組體或其它形式)、霍亂毒素或胞壁醯二肽。優選地，佐劑以每劑量約IOO嗎至約10mg之量添加。甚至更優選地，佐劑以每劑量約100昭至約10mg之量添加。甚至更優選地，佐劑以每劑量約500嗎至約5mg之量添加。甚至更優選地，佐劑以每劑量約750昭至約2.5mg之量添加。最優選地，佐劑以每劑量約1mg之量添加。藥物/疫苗組合物可進一步包括一或多種其它免疫調節劑，諸如白介素、幹擾素或其它細胞因子。藥物/疫苗組合物亦可包括慶大黴素及>5克柳汞。儘管適用於本發明之上下文中的佐劑及添加劑之量及濃度可易於由本領域技術人員確定，但本發明的組合物可以是，在1ml劑量的疫苗組合物中包含約50[xg至約2000嗎佐劑且優選約250(xg佐劑。在另一優選實施例中，本發明涵蓋包含約l嗎/ml至約60|xg/ml抗生素且更優選小於約30嗎/ml抗生素的疫苗組合物。因此，根據另一實施例，本發明亦系關於藥物/疫苗組合物,其包含i.治療有效量之如本文所述之任一種流感病毒H5蛋白，其中該H5蛋白具有胺基酸223N及修飾328K+，其中H5蛋白的胺基酸位置編號是指SEQIDNO:l所例示的胺基酸位置且其中修飾328K+是指在H5蛋白之胺基酸位置328上插入第二個賴氨酸(K+);及ii.如上所述之可藥用佐劑。優選地，佐劑系選自由以下各物組成之群a)EMULSIGEN⑧一種水包油型乳液(o/w);b)EMULSIGEN-D:—種具有溴化二曱基二-十八烷基銨(DDA)之水包油(o/w)孝L'液；c)Polygen:—種共聚物；d)EMULSIGEN-P,—種具有專有免疫刺激劑的水包油型(o/w)乳液；e)Carbigen為一種交4關聚合物；f)EMULSIGEN-75:—種包含具有交聯聚合物之水包油型(oAv)乳液的雙重佐劑；g)ISA70為一種油包水型(w/o)乳液。最優選地，所述佐劑為水包油型乳液，諸如選自以下的基於emulsigen的佐齊寸EMULSIGEN、EMULSIGEN-D、EMULSIGEN-P、EMULSIGEN-75、EMULSIGEN及EMULSIGEN-P。最優選EMULSIGEN⑧及EMULSIGEN-P⑧用於本發明之配製劑中。根據另一方面，如本文中所提供之藥物/疫苗組合物包含一或多種抗原。優選地，所述抗原為禽類或哺乳動物病原體的抗原。根據另一實施例，所述抗原為其它流感抗原，諸如流感病毒之血凝素H3、H7、H9或其它任何血凝素。該(等)其它抗原可以是純化形式、作為抗原製劑之一部分添加，以經滅殺微生物之形式或以經修飾之活微生物之形式添加。本文術語"抗原"是指(但不限於)肽、多肽、糖肽或多糖，其能夠與免疫系統的抗原識別分子(諸如免疫球蛋白(抗體)或T細胞抗原受體)特異性交互作用以便在該抗原所施用之宿主中引發、活化或刺激針對該抗原的免疫反應。術語"抗原"亦指核酸分子，優選為DNA分子或RNA分子，其各自編碼且表達能夠與免疫系統的抗原識別分子(諸如免疫球蛋白(抗體)或T細胞抗原受體)特異性交互作用的肽、多肽或糖肽，以便引發、活化或刺激針對由該核酸分子所編碼的抗原的免疫反應。用於製備根據本發明使用之藥物組合物的抗原為^f效生物或該;微生物的抗原部分及/或製劑。就此而言，本文術語"免疫"是指(但不限於)任何《1起或增強免疫反應的情況。術語"免疫反應"已於上文中加以描述。流感疫苗之投藥策略是本領域熟知的。滅活病毒疫苗及減毒病毒疫苗之黏膜接種策略也包括在本發明內。儘管黏膜可通過局部傳遞疫苗而被鎖定目標，但多種策略皆已用於將免疫原性蛋白傳遞至黏膜。在具體實施例中，可將疫苗與霍亂毒素(諸如霍亂毒素B或霍亂毒素A/B嵌合體)混合或作為結合型或嵌合型融合蛋白投藥(Hajishengallis,JImmunol,,154:4322-32，1995;Jobling及Holmes,InfectImmun.,60:4915-24,1992)。基於使用霍亂毒素B亞單位之黏膜疫苗已加以描述(Lebens及Holmgren,DevBiolStand82:215-27，1994)。在另一實施例中，可製備與熱不穩定性腸毒素(LT)之混合物用於黏膜接種。其它黏膜免疫策略包括將病毒嚢封於微嚢中(US5,075,109、US5,820,883及US5,853,763)及使用免疫增強性膜質載劑(WO98/0558)。經口投藥之免疫原之免疫原性可藉由使用紅細胞(rbc)或rbc碎片(US5,643,577)或藉由使用藍舌病抗原(US5，690,938)而得以增強。根據另一方面，本發明系關於一種製備如上所述之藥物/疫苗組合物的方法，優選為一種製備包含如上所述之經杆狀病毒表達之重組H5蛋白的疫苗的方法。通常，此方法包括以下步驟i)將構建體轉染至病毒內，其中該構建體包含如本文所述之重組H5cDNA;ii)用經轉染之病毒感染生長培養基中之細胞；iii)使病毒表達如本文所述之重組H5蛋白；iv)自培養物回收經表達的H5蛋白；及v)藉由將經表達的H5蛋白與適當佐劑及/或其它可藥用載劑摻混而製備組合物。優選佐劑為上述佐劑。因此，根據另一方面，用於激發抗流感感染之免疫反應的抗原組合物(諸如疫苗)的製備方法包含i)製備及回收H5蛋白，及ii)將此蛋白與適當佐劑混合。此外，本發明的疫苗組合物亦可包括稀釋劑、等滲劑、穩定劑及/或防腐劑。稀釋劑可包括水、鹽水、葡萄糖、乙醇、甘油及類似物。等滲劑尤其可包括無機鹽或有機鹽(例如氯化鈉)、葡萄糖、甘露糖醇、山梨糖醇及乳糖、糖類、海藻糖、甘露糖醇、蔗糖。穩定劑尤其包括白蛋白及乙二胺四乙酸之鹼金屬鹽。適當佐劑為上述佐劑。所述H5蛋白、核酸分子、載體及疫苗中之任一者之醫藥用途如本文中所提供的H5蛋白、編碼任何所述H5蛋白的核酸分子、包含任何所述核酸分子(編碼本文所述任何H5蛋白)的載體以及包含該H5蛋白、核酸分子或載體中之任一者的任何藥物/疫苗組合物可用作藥物，優選用於治療及預防由流感病毒、最優選由流感A病毒引起的感染。如本文中所提供的H5蛋白、編碼任何所述H5蛋白的核酸分子、包含任何所述核酸分子(編碼如本文所述之任何所述H5蛋白)的載體以及包含如本文所述之該H5蛋白、核酸分子或載體中之任一者之任何藥物/疫苗組合物可用於人類之治療或預防且可用於獸醫藥物中。當用於獸醫藥物中時，優選為治療禽類，優選鳥、雞、鴨、火雞及類似動物；以及哺乳動物，優選豬、牛、馬、海豹、駱駝、狗、貓、倉鼠、小鼠及類似動物。因此，根據另一方面，本發明系關於如本文中所提供的H5蛋白、編碼任何所述H5蛋白的核酸分子、包含任何所述核酸分子(編碼如本文所述之任何所述H5蛋白)的載體以及包含如本文所述之該H5蛋白、核酸分子或載體中之任一者之任何藥物/疫苗組合物的用途，其可用作藥物、優選用作人類藥物及/或獸醫藥物。此外，如本文中所提供的H5蛋白、如本文所述之編碼任何所述H5蛋白的核酸分子、包含任何所述核酸分子(編碼任何該H5蛋白)的載體可用於製備如本文所述之藥物組合物，以便預防或治療由流感病毒引起的感染。如上所述，所述藥物組合物/疫苗組合物可用於人類之治療及/或預防以及動物之治療及/或預防，所述動物諸如禽類，優選鳥、雞、鴨、火雞及類似動物，以及哺乳動物，優選豬、牛、馬、海豹、駱駝、狗、貓、倉鼠、小鼠及類似動物。如本文中所提供的H5蛋白、如本文所述之編碼任何所述H5蛋白的核酸分子、包含任何所述核酸分子(編碼任何所述H5蛋白)的載體可用於製備如本文所述之藥物組合物，該藥物組合物適於治療及預防優選由禽、豬或人類流感病毒或其任何組合或混合之流感病毒感染。根據另一方面，本發明亦系關於一種治療或預防流感病毒感染的方法，其中該方法包含將治療有效量之本文所述H5蛋白投與需要該治療之受檢者。此外，本發明亦系關於一種治療或預防流感病毒感染的方法，其中該方法包含將治療有效量的如本文所述之編碼如本文所述之任何H5蛋白的任何H5核酸分子或載體投與需要該治療之受檢者。此外，本發明亦系關於一種治療或預防流感病毒感染的方法，其中該方法包含將治療有效量之包含如本文所述之任何該H5蛋白、核酸分子或載體的疫苗投與需要該治療之受檢者。有需要之受檢者可為人類以及動物，優選為禽類，甚至更優選為鳥、雞、鴨、火雞；或哺乳動物，優選為豬、牛、馬、海豹、駱駝、狗、貓、倉鼠、小鼠及類似動物。優選地，當對雞進行接種時，可在1日齡時或1日齡之後(例如在10曰齡時，或在1日齡至10日齡時，或在10日齡時或10日齡之後)使用本文所述H5蛋白接種。可藉由投與任何H5蛋白、編碼該任何H5蛋白的核酸分子或載體或如本文所述之任何藥物/疫苗組合物治療的流感感染優選系由禽、豬或人類流感病毒或其任何組合或混合引起。根據另一方面，本發明系關於組配試劑盒，其包含i)如本文所述之該H5蛋白、編碼任何該H5蛋白的核酸分子或載體或包含如本文所述之該H5蛋白、核酸分子或載體中任一者之任何藥物/疫苗組合物中的任一者；及ii)指示該H5蛋白、核酸分子、載體或疫苗用於治療或預防由流感病毒引起的感染之用途的包裝插頁。當對雞進行接種時，可在1日齡時或1日齡之後使用本文所述H5蛋白接種。根據另一實施例，彼組配試劑盒包含禽類或哺乳動物病原體之至少另一種抗原及指示彼另外抗原之醫藥、人類或獸醫學用途的信息。實施例以下實施例闡述本發明之優選物質及方法。然而應了解，所述實施例僅為說明而提供，且不應視為對本發明之整體範圍之限制。實施例1構建編碼及表達HAH5抗原的重組杆狀病毒如下生成含有H5HA抗原的重組杆狀病毒化學合成H5HA(SEQIDNO:2)之編碼序列且將其再克隆入轉移載體pVL1392(BDBiosciencesPharmingen,SanDiego，CA)內。藉由使用寡核苦酸引物及QuikChange⑧定點誘變試劑盒(Stratagene，LaJolla,CA)生成H5HAMutK+(SEQIDNO:4)且將其再克隆入轉移載體pVL1392(BDBiosciencesPharmingen，SanDiego,CA)內。接著用DiamondBac(Sigma)杆狀病毒DNA將含有編碼H5HA抗原共轉染入Sf9昆蟲細胞(BDBiosciencesPharmingen)內以生成含有編碼SEQIDNO:2之基因H5HA及編碼SEQIDNO:4之基因H5HAmutK+的重組杆狀病毒。將含有編碼H5HA(SEQIDNO:2)及H5HAMutK+(SEQIDNO:4)之基因的重組杆狀病毒進行空斑純化，且將主種子病毒(MasterSeedVirus;MSV)於SF+細胞林上繁殖，製成等分試樣且在-7(TC儲存。昆蟲細胞為生成MSV或工作種子病毒(WorkingSeedVirus)的目的而感染了上述H5HA杆狀病毒，結果所述細胞表達H5HA抗原(SEQIDNO:2)及H5HAMutK+抗原(SEQIDNO:4)，這通過用多克隆血清或單克隆抗體經間接焚光抗體試驗或Western印跡法一企測。用適量重組杆狀病毒(分別為H5HA及H5HAMutK+)接種後，接著將含有SF+細胞(ProteinSciences,Inc.,Meriden,CT)的旋轉瓶在27±2。C培育7天，期間以100rpm攪拌。所述旋轉瓶使用通氣蓋以使空氣流動。收穫含有經杆狀病毒感染之SF+細胞的粗製全細胞培養物及各培養物之細胞培養上清液。實施例2製備包含HAH5抗原之藥物組合物(疫苗)收穫由基於杆狀病毒之表達系統在昆蟲細胞中表達的粗製全細胞H5HA蛋白及H5HAMutk+蛋白。將杆狀病毒在5mM環化二乙烯亞胺(BEI)(最終濃度)之存在下、在約32。C-39。C滅活72至96小時。滅活完成後，添加0.3M硫代硫酸鈉溶液直至最終濃度為5mM，以中和任何殘餘BEI。中和後，添加各種佐劑且生成以下疫苗/藥物組合物。tableseeoriginaldocumentpage33上清液。該疫苗輔以Emulsigen-75佐劑。tableseeoriginaldocumentpage34tableseeoriginaldocumentpage35l.引論實施例3對豬進行接種以防禦禽流感此研究之目的系測定含有重組H5血凝素(HA)抗原之粗提取物之實驗性疫苗在豬體內誘導血凝抑制(HI)效價的能力。用H5HA抗原評價各種佐劑。此研究中評價的HAH5原型(prototype)含有來自傳統H5HA或H5HAMutK+的抗原。傳統H5HA系源自A/鴨/China/E319-2/03,而H5HAMutK十是傳統H5HA經改造後在S120N、D150N、S223N及328mutK+含有三個特定胺基酸變異。其亦含有胺基酸94N。H5HAMutK+中之特定胺基酸變異產生更類似於A/HK/213/03之HA的H5HA。目前認為A/HK/213/03之H5HA之胺基酸組成有助於H5HA之抗體識別。2.研究設計表1:研究概述tableseeoriginaldocumentpage35tableseeoriginaldocumentpage36研究開始時，仔豬為3周±5日齡。研究開始時，仔豬在臨床上為健康的。在研究第0日、第21日及第35日獲得血樣。在研究第1日至第35日每日觀測全部研究動物之一般健康狀況。在每次接種後七天，每天查看注射部位且記錄可見到的反應。在研究日第35曰動物研究期結束時，對全部動物施以人道安樂死。3.疫苗用實施例2所述的疫苗501至514進行豬4^種研究。4.血凝素抑制試-瞼在第0日及第21日用含有H5HA之原型對豬進行接種。在第0曰、第21日、第35日收集豬血清以便藉由血凝抑制(HI)試驗進行評價。進行HI試驗以檢測HA特異性抗體之存在。異源H5N2病毒(A/雞/Mexico/232/94)系以四個血凝單位[4HA單位]之濃度用於HI試驗中。隨後在U形底微量滴定板中，將在PBS中連續兩倍稀釋之血清液與等體積(25pL)(含有4HA單位)之病毒混合，且在室溫(約25。C)培育30分鐘。將PBS中之濃度為0.5%之雞紅細胞添加至含有血清-病毒之孔中，室溫培育40分鐘。以觀測到血凝抑制的最高血清稀釋度之倒數確定HI效價。5.結果HI測試使用Mexican政府法定(o伍cial)之H5N1抗原(A/雞/Mexico/232/94)[4HA單位]，接種方案為第0日及第21日1x1mL。tableseeoriginaldocumentpage36tableseeoriginaldocumentpage37BIVH5(來源於流感A病毒(A/鴨/China/E319-2/03(H5N1))BIVH5K+(突變之BIVH5,有S120N、D155N、S223N，且增添328K+)結果證明，大多數疫苗組合物在被接種的豬中引發免疫反應。尤其，大多數疫苗組合物引起血清轉化，這意味著，大多數被接種的豬針對HI試驗所用禽流感病毒產生特異性抗體。總之，這些結果清楚且無疑地證明，本發明極其奏效。藉由用禽流感病毒之相關抗原對豬進行接種，可大大降低豬(即第二物種的動物)被禽流感病毒(即第一物種的病原體)廣泛流行性感染之風險。這已得到清楚證明。此外，依據此接種概念，禽流感病毒向哺乳動物(包括人類)傳播並適應的情況大大減少。豬是禽病原體(包括禽流感病毒)最重要的貯主(reservoir)之一。若病毒在豬體內的複製以及由此而及的禽流感對豬適應的風險大大降低且得以控制，則禽流感病毒對人類適應之風險亦大大降低。在施用抗原產生較低HI效價(是指效價低於30)之情況下，需要用抗原進一步加強免疫，以進一步提高HI效價且增強被接種的豬體內的免疫保護。因此，效價低並不是指無法獲得保護，其僅表明可能需要進一步加強免疫以促進免疫反應。被接種的豬體內可測量到免疫反應，這一事實證明，本發明是極其有效的。換而言之，本文所提供之實驗清楚且無疑地證明，本發明奏效。實施例4對鳥進行接種以防禦禽流感1.引論此研究之目的系測定含有重組H5mutk+血凝素(H5HAmutk+)抗原之粗提取物之實驗性疫苗在雞體內誘導血凝抑制(HI)之能力。用傳統重組H5抗原(H5HA)以及滅;舌疫苗VolvacAI(BoehringerIngelheimVetmedica,Mexico)作為對照。此外，用H5HA抗原評價多種佐劑。2.研究設計1日齡或IO日齡的SPF鳥(15-25隻)各自獨立地用0.5ml不同實驗性疫苗在頸背部藉由皮下途徑接種；實驗期間所有鳥隔離祠養。不限量提供食物及水。接種後第31日或第32日，用H5N2高致病性禽流感病毒抹進行攻擊。接種後第15日、第30日，自鳥頸靜脈放血獲得血清樣本。所得血清在4。C儲存，直至進行實施例3所述血凝抑制(HI)測試以獲得抗體效價。3.疫苗及攻擊病毒獨立評價四種不同配製劑1Z專糹克油乳液H5HAMutk+:4安照BoehringerIngelheimVetmedica的方法，將H5HAmutk+抗原配製在油乳液(弗氏不完全佐劑(Freundincompleteadjuvant))中。2.S印picH5HAMutk+:根據供貨商的建議，將H5HAmutk+抗原與非傳統的佐劑(ISA206，W/0/W，獲自Seppic)—起配製。3.H5HA傳統油乳液:4安照BoehringerIngelheimVetmedica的方法，將H5HA抗原配製在油乳液(弗氏不完全佐劑)中。4.SeppicH5HA:根據供貨商的建議，將H5HA抗原與非傳統的佐劑(ISA206，W/O/W,獲自Seppic)—起配製。用禽流感BoehringerIngelheimVetmedica油乳液疫苗作為對照VolvacAI(BoehringerIngelheimVetmedica,Mexico)。對於經過接種及未經接種的雞，每隻經鼻內途徑接種0.2ml1067CEID的H5N2攻擊病毒進行攻擊。攻擊後，記錄病徵及死亡率。接種後第10日，將所有倖存的雞按照動物實驗程序施以人道安樂死。4.結果tableseeoriginaldocumentpage39陽性血清效價根據OIE標準而考慮log24。基於此標準，血清學結果為陰性，但與基線相比時，觀測到某些陽性值。在l日齡或10日齡接種的鳥體內觀測到，與油佐劑及與H5HAMutk+抗原一起配製的疫苗具有最好的血清學效價。在與Seppic及與H5HA抗原一起配製的原型中觀測到最低的血清學效價。在攻擊研究中觀測到，疫苗原型提供保護作用，用傳統油乳液疫苗與H5HAMutk+抗原一起配製時尤其如此。攻擊研究中觀測到SeppicH5HA具有最低的保護作用，死亡率為68%。相比之下，10日接種的鳥相比於1日齡接種的鳥，觀測到最高的血清學效價。權利要求1.流感病毒H5蛋白，其具有胺基酸223N及修飾328K+，其中該H5蛋白的胺基酸位置編號指SEQIDNO1中所例示之胺基酸位置，且其中該修飾328K+是指在H5蛋白之胺基酸位置328上插入第二個賴氨酸(K+)。2.權利要求1的H5蛋白，其中該H5蛋白具有胺基酸94N。3.權利要求1或2的H5蛋白，其中該H5蛋白具有胺基酸120N。4.權利要求1-3之一的H5蛋白，其中該H5蛋白具有胺基酸155N。5.權利要求1-4之一的H5蛋白，其中該H5蛋白具有一或多個選自下組的胺基酸簇a.aa93-95:GNFb.aa123-125:SDHc.aa128-130:SSGd.aa138-140:GSSe.aa226-228:MDFf.aa270-272:EVEg.aa309-311:NKL。6.權利要求l-5之一的H5蛋白，其中該H5蛋白包含肽，該肽包含i.SEQIDNO:4、SEQIDNO:5或SEQIDNO:6之胺基酸序列；或ii.任何與多肽i)有至少85%序列同源性、且在標準血凝素抑制試驗中有血凝素抑制活性的肽；或iii.多肽i)或ii)中包含至少8個毗鄰胺基酸的任何部分，其在標準血凝素抑制試驗中有血凝素抑制活性；或iv.肽i)、ii)或iii)之任一，其具有以下胺基酸中之一者36T、36K、83A、83T、83D、86A、86V、120S、155S、156A、156T、189R、189K、212K、212R、212E、263A或263T;或v.肽i)、ii)、iii)或iv)之任一，其具有一或多個選自以下的胺基酸簇a.aa93-95:GNFb.aa123-125:SDHc.aa128-130:SSGd.aa138-140:GSSe.aa226-228:MDFf.aa270-272:EVEg.aa309-311:NKL。7.權利要求l-6之一的H5蛋白，其中該H5蛋白來源於禽流感病毒。8.權利要求1-7之一的H5蛋白，其中該H5蛋白包含SEQIDNO:4之胺基酸序列。9.核酸分子，其編碼權利要求1至8之一的H5蛋白。10.載體，其包含權利要求9的核酸分子。11.疫苗，其包含a.權利要求1至8之一的H5蛋白、權利要求9的核酸分子或權利要求10的載體；及b.可藥用載劑及/或賦形劑。12.權利要求11的疫苗，其中該賦形劑為一或多種佐劑。13.權利要求12的疫苗，其中所述佐劑為基於Emulsigen的佐劑。14.權利要求11至13之一的疫苗，其中該疫苗包含一或多種抗原。15.權利要求14的疫苗，其中所述抗原為禽類病原體或哺乳動物病原體的抗原。16.權利要求15的疫苗，其中所述抗原為流感病毒的H3、H7或H9。17.製備權利要求1至8之一的H5蛋白的方法，包括以下步驟a.分離或擴增編碼該H5蛋白的核酸；b.將該H5編碼核酸克隆至表達載體內；c.表達該H5蛋白。18.權利要求17的方法，其中該表達載體為重組杆狀病毒。19.權利要求17或18的方法，其中該H5蛋白在昆蟲細胞中表達。20.製備包含權利要求1至8之一的H5蛋白的疫苗的方法，包括a.獲得權利要求1至9之一的H5蛋白；b.將步驟a)的H5蛋白與可藥用載劑及/或賦形劑混合。21.製備包含權利要求9之H5核酸或權利要求10之載體的疫苗的方法，其中該方法包含以下步驟a.獲得權利要求9的H5核酸分子或權利要求10的載體；b.將步驟a)的H5核酸分子或載體與可藥用載劑及/或賦形劑混合。22.將權利要求1至8之一的H5蛋白用作藥物的用途。23.將權利要求9的核酸分子用作藥物的用途。24.將權利要求10的載體用作藥物的用途。25.將權利要求11至16之一的疫苗用作藥物的用途。26.權利要求1至8之一的H5蛋白用於製備藥物組合物的用途，所述藥物組合物用於預防或治療由病毒性流感引起的感染。27.權利要求9的核酸分子用於製備藥物組合物的用途，所述藥物組合物用於預防或治療由病毒性流感引起的感染。28.權利要求10的載體用於製備藥物組合物的用途，所述藥物組合物用於預防或治療由病毒性流感引起的感染。29.權利要求26至28之一的用途，其中該病毒性流感感染由禽流感病毒、豬流感病毒、或人流感病毒、或它們的任何組合或雜種引起。30.治療或預防流感病毒感染的方法，其包括對需要治療的受試者施用治療有效量的權利要求1-8之一所述H5蛋白。31.治療或預防流感病毒感染的方法，其包括對需要治療的受試者施用治療有效量的權利要求9所述H5核酸或權利要求10所述載體。32.治療或預防流感病毒感染的方法，其包括對需要治療的受試者施用治療有效量的權利要求11-16之一所述包含H5蛋白的疫苗。33.權利要求30-32之一的方法，其中該流感病毒感染由禽流感病毒、豬流感病毒、或人流感病毒、或它們的任何組合或雜種引起。34.組配試劑盒，其包含a.權利要求1至8之一的H5蛋白、權利要求9的核酸分子、權利要求10的載體或權利要求11至16之一的疫苗；及b.包裝插頁，其說明用a)的H5蛋白、核酸分子、載體或疫苗治療或預防由流感病毒引起的感染的用途。35.權利要求34的組配試劑盒，其包含至少一種其它的禽類病原體抗原或哺乳動物病原體抗原。全文摘要本發明系關於新穎的血凝素H5蛋白、編碼所述H5蛋白的核酸及載體，以及包含所述H5蛋白、編碼所述H5蛋白的核酸或載體中之任一者的疫苗。此外，本發明亦系關於所述組合物中之任一者用於人類及動物之醫藥用途。文檔編號A61K39/00GK101553248SQ200780040131公開日2009年10月7日申請日期2007年10月26日優先權日2006年10月27日發明者于爾根·德姆根,保利諾·C·岡薩雷斯-赫爾南德茲,埃裡克·M·沃恩申請人:貝林格爾.英格海姆維特梅迪卡有限公司