因子vii多肽的穩定化固體組合物的製作方法

2023-05-28 15:57:21 4

專利名稱：因子vii多肽的穩定化固體組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及藥盒，所述藥盒包含含有因子VII或因子VII相關多肽的化學和物理上穩定的組合物，使得這些組合物能夠在室溫進行貯藏、操作和使用。
背景技術：
含有多肽的藥物是複雜的組合物。開發這類藥物時需要考慮一系列參數。例如，藥物必須是有效的、安全的、且具有良好患者順應性。此外，可以使用藥物上可接受賦形劑配製成非胃腸道施用的藥物，這必須獲得各種全世界醫學管理機構的批准。為了非胃腸道施用的目的，非常希望製劑是大致等滲的，而且製劑的pH能使得在注射/灌輸後處於生理學合適範圍內，否則它可能導致患者疼痛和不適。關於蛋白質製劑的一般綜述參閱例如Cleland等人，穩定蛋白質製劑的開發對蛋白質聚集、脫醯胺、和氧化的密切關注，CriticalReviews in Therapeutic Drug Carrier Systems，1993，10(4)307-377；和Wang等人，蛋白質和肽的腸胃外製劑穩定性和穩定劑，Journal of Parenteral Science and Technology，1988(增刊)，42(2S)。
然而，對於包含多肽的藥物而言，安全性可能與多肽的物理和化學穩定性直接相關。多肽易受物理降解的影響，包括變性和聚集，諸如形成可溶性或不溶性的二聚體、寡聚物和多聚物形式的聚集體；或者易受化學降解的影響，包括例如水解、脫醯胺、和氧化。因此，所述物理和化學不穩定性可能導致多肽活性的損失、有毒且免疫原性降解產物的形成、在注射降解的多肽後誘發血栓症的嚴重風險、堵塞用於注射的針頭和非均質的風險等。
因此，包含多肽的組合物需要穩定化，從而能夠在環境溫度進行貯藏和操作。將多肽穩定化的一種方法涉及將多肽脫水，例如諸如以凍幹餅的形式提供多肽，即在凍幹處理後獲得的最終物質。然而，凍幹處理自身對多肽有害；在凍幹過程中，首先冷卻多肽溶液直至充分凍結，多肽溶液中大量的水將在此階段形成冰。因此，多肽易受由冷凍誘導的壓力，導致變形和沉澱。在下一步中，即所謂的第一乾燥階段，冰升華；而在第二乾燥階段，在較高溫度下除去吸附或結合水。在此脫水過程中，多肽可能鬆開主要由氫鍵提供的正確構象。
因此，為了在凍幹過程中保持多肽的構象、活性、和穩定性，需要為多肽溶液補充足夠量的具有防凍劑和/或防溶劑特性的適當賦形劑，從而分別保護蛋白質免於由冷凍誘導的壓力和/或脫水過程中的壓力。
US 20010031721 A1(American Home Products)關注高度濃縮、凍幹且液態的因子IX製劑。
WO 97/26909(Genetics Instute)關注適於貯藏和施用的因子IX凍幹製劑。這些製劑可以包含蔗糖或甘露醇作為防凍劑。
WO 95/28954(Genetics Institute)關注適於貯藏和施用的因子IX製劑。這些製劑可以包含蔗糖作為防凍劑。
另外，在提供凍乾產品時，關鍵的特徵涉及凍幹餅的特性。它需要具有在形式和結構方面的優良特性，即它應當不會崩塌，因為這些崩塌塊難以或甚至不可能在使用前溶解(重構)。相反，凍幹餅的物理結構最好不要太松太軟。因此，在凍幹前向蛋白質溶液中加入一種或多種所謂的膨脹劑(bulking agent)。
除了選擇正確的膨脹劑，關鍵是避免賦形劑，其使餅的物理性質不穩定。所述物質的濃度應當儘可能的低。此外，重要的是，重構溶液不能過於低滲或高滲，因為那樣會引起注射不便，或者在注射時甚至引起患者疼痛。因此，通常需要向組合物中加入滲透性。其它賦形劑可為緩衝物質，用於在貯藏期間保持重構溶液的pH穩定。
維生素K-依賴性多肽是一組參與凝血過程的多肽，包括因子VII，因子IX，因子X，因子II，蛋白C，蛋白S，gas6，和骨基質Gla多肽，或可以是選自如下的蛋白酶因子VIIa，因子IXa，因子Xa，因子IIa，和活化的蛋白C。因子VIIa，IXa和Xa是特別有用的蛋白酶。因子VIII是參與凝血的多肽。可通過重組技術獲得或者從血漿中製備，且廣泛用於血友病患者出血事件的治療。
因子VII是參與凝血過程的多肽。目前，因子VIIa可通過重組技術製備(rFVIIa)且廣泛用作促止血物質。因子VII(人野生型)在美國專利4,784,950中有描述。rFVIIa為目前提供了快速且高效的經歷出血之血友病個體中的促止血應答。有利地，rFVIIa可被用於治療由於抗體形成而不能用其它凝固因子產品治療的血友病個體。患有因子VII缺乏的個體或具有正常凝血系統但是仍經歷過量流血的個體可用rFVIIa成功治療。
現在以凍乾產品形式提供的重組生產的FVII多肽意欲貯藏於約2℃-約8℃。對冷卻條件的要求造成了對製造商或供應商以及終端用戶(患者)的負擔和不便。
目前，重組生產的FVII產品有NovoSeven_(Novo Nordisk A/S，丹麥)，它由1.2mg重組人因子VIIa、5.84mg NaCl、2.94mgCaCl2·2H2O、2.64mg甘氨醯甘氨酸、0.14mg聚山梨酸酯80、和60.0mg甘露醇組成。加入2.0ml注射用水(WFI)重構後，pH是5.5，而且由此配製的含FVII溶液足以在室溫穩定24小時。
本發明的研究人員發現，將凍幹的NovoSeven_產品於25℃貯藏6個月後，佔初始含量約6-7％w/w的rFVIIa以聚集體的形式存在。
因此，含有因子VII多肽的組合物需要被穩定從而允許在室溫貯藏和操作。
本發明的一個目的是提供改進的組合物、藥盒和製備它們的方法，其中所述含有多肽的幹組合物對化學和物理降解是穩定的(諸如，例如形成較少的二聚體/寡聚物降解形式)；由於其形式和結構具有凍幹餅的良好性質，即它不應當崩塌；具有凍幹餅的良好和穩定的物理結構；且該幹組合物摒棄了使餅的物理性質不穩定的賦形劑，例如通過降低最低可融化的熔點並因此增加了餅崩塌的風險；其中通過將含幹多肽的組合物在施用載體中溶解重建的組合物是等滲的，或接近等滲的，具有確定的pH(pH-穩定的)。特別的，一個目的是提供含有因子VII多肽而基本上不存在降解產物且不降低因子VII多肽的活性(優選的在室溫條件下長期貯藏後，例如至少6個月)的改進組合物。此外，一個目的是適於非胃腸道施用的穩定組合物，以不引起患者的任何不便。
發明概述本發明人發現，含有多肽的藥物可以藥盒的部分的形式提供，所述藥盒的部分包含第一單元形式，所述第一單元形式由含有多肽和至少一種穩定劑的幹(例如凍幹)組合物和用於容納所述第一單元形式的容器組成，其中所述組合物具有不超過約3％的含溼量；以及在用於容納所述單元的容器中，由施用載體組成的第二單元形式，所述施用載體包含溶解(重建)所述組合物的溶劑和至少一種選自如下的成分(i)當溶於水性溶劑時適於保持所述組合物的pH範圍在3-9的試劑，其中所述試劑以約0.1mM-100mM的量存在，和(ii)以足以使得自溶解第一單元形式的組合物於第二單元形式之施用載體的溶液基本上等滲的張力調節劑。
通常存在於製劑中的物質如緩衝物質和張力調節劑非常容易降低最低可融化的熔點，因此增加餅的崩塌風險。如果在凍幹過程中存在這些物質，在初步乾燥過程中冰的溫度必須被降低，以避免崩塌，因此，用於凍幹的時間延長了。這些凍幹餅中的物質濃度應當儘可能的低，或者它們應當完全避免。相反，它們可有利的加入重建液體。
通過降低這些賦形劑的濃度或者完全除去它們，重建溶液有時候會變得低滲，其需要加入張力調節劑到溶劑中，以獲得具有需要的張力之溶液，如等滲的，或接近等滲的(「基本上等滲的″)。溶劑中另一需要的賦形劑是緩衝物質，以保持重建的溶液之pH在貯藏過程中穩定。
藥盒的部分足夠穩定，以允許在室溫下貯藏約至少8個月。
此外，發現可以在足夠穩定的組合物中提供因子VII多肽，從而能夠在室溫貯藏約至少8個月。研究人員發現，穩定化作用涉及一些藥物上可接受賦形劑的適當組合。
因此，本發明第一方面，涉及一種藥盒(含有藥物/治療)，所述藥盒包含a)在第一單元形式中，含有多肽和至少一種穩定劑的組合物，其中所述組合物具有不超過約3％的含溼量，以及用於容納所述第一單元形式的容器裝置；和b)在第二單元形式中，含有用於重構(溶解)所述組合物的溶劑和至少一種選自如下的成分之施用載體(i)當溶於水性溶劑時適於保持所述組合物的pH範圍在3-9的試劑，其中所述試劑以約0.1mM-100mM的量存在，(ii)以足以使得自溶解第一單元形式的組合物於第二單元形式之施用載體的溶液基本上等滲的量的張力調節劑；和用於容納所述第二單元形式的容器裝置。
第二方面，本發明涉及一種製備多肽的液體製劑的方法，所述方法包括步驟a)提供上述的第一單元形式和第二單元形式；b)將所述第一和第二單元形式混合以提供施用載體中的溶解的組合物液體溶液。
在第三和第四方面，本發明涉及一種治療凝固因子應答性症候群的方法，包括向需要的受試者施用有效量的根據上述方法製備的所述凝固因子之液體製劑，以及涉及所述製劑用於製備呈如上述藥盒形式的用於治療因子VII-應答性症候群的藥物的用途。
在第五方面，本發明涉及一種組合物，其中包含因子VII多肽和至少一種選自下組的穩定劑
a)抗氧化劑與甘露醇的組合；b)甲硫氨酸與多元醇的組合；c)糖與甘露醇的組合；d)蔗糖與多元醇的組合；d)甲硫氨酸；以及約0.06-0.08mg/mL量的聚山梨酸表面活性劑；所述組合物具有不超過約3％的含溼量。
在第六方面，本發明涉及一種製備如上述定義的組合物的方法，包括步驟i)提供溶液中的因子VII多肽，所述溶液包含至少一種選自如下的穩定劑a)抗氧化劑與甘露醇的組合；b)甲硫氨酸與多元醇的組合；c)糖與甘露醇的組合；d)蔗糖與多元醇的組合；和e)甲硫氨酸；以及聚山梨酸酯表面活性劑，其量為約0.06-0.08mg/mL；ii)加工所述溶液以獲得具有含溼量不超過約3％w/w的固體組合物。
在第七和第八方面，本發明涉及一種治療FVII-應答性症候群的方法，包括向需要的受試者施用有效量的如上述定義的組合物，以及涉及因子VII多肽用於製備治療因子VII-應答性症候群的藥物的用途，所述藥物包含上述定義的組合物。
發明詳述本發明涉及包含因子FVIII、維生素K依賴性多肽和因子VII多肽之多肽的貯藏穩定的藥盒和組合物。這些組合物可以在室溫貯藏較長時間而不會引起多肽的顯著降解。室溫指室內環境溫度；它通常的範圍是約5℃-約40℃，諸如約10℃-30℃、或15℃-25℃。
通過特定藥物上可接受賦形劑的適當預定組合，本發明的研究人員提供了包含多肽，特別是因子VII多肽的穩定化組合物，從而能夠將組合物於室溫貯藏較長時間，諸如至少約8個月。有利的是，穩定化組合物不必貯藏於冷卻條件，諸如2℃-8℃。
本發明還關注於在約30℃貯藏至少約8個月時仍穩定的貯藏穩定的組合物。這些組合物優選貯藏於黑暗中。因此，本發明使之有可能將這些組合物貯藏於室溫而不會增加對施用這些組合物的患者的不利事件。有利的是，改進的貯藏穩定性還將使花費降低，因為貯藏不需要特殊的冷卻條件，還使用戶處理組合物更加方便。
待根據本發明配製的多肽包括，但不限於，凝血因子包括維生素K-依賴性多肽，如例如，不限於，因子VIII、因子V、因子XI、因子VII、因子IX、因子X、因子II、蛋白C、蛋白S、gas6、和骨基質Gla多肽；活化的FVIII、因子Va、因子XIa、因子VIIa、因子IXa、因子Xa、因子IIa、和活化的蛋白C。
術語″維生素K依賴性多肽″包括選自如下的多肽因子VII、因子IX、因子X、因子II、蛋白C、蛋白S、gas6、和骨基質Gla多肽或可為選自如下的蛋白酶因子VIIa、因子IXa、因子Xa、因子IIa和活化的蛋白C。因子VIIa、IXa和Xa為特別有用的蛋白酶。
術語″因子VII多肽″意指任何在防止或治療出血中有效的因子VII多肽。包括來自血液或血漿的，或由重組方法產生的因子VII多肽。
在用於本文時，″因子VII多肽″涵蓋但不限於因子VII以及因子VII相關多肽。術語″因子VII″意欲涵蓋但不限於具有野生型人因子VII胺基酸序列第1-406位(公開於美國專利號4,784,950)的多肽，以及由其它物種衍生的野生型因子VII，諸如牛、豬、犬、鼠、和鮭魚，所述因子VII是由血液或血漿衍生的，或者是通過重組技術生產的。它還涵蓋個體之間可能存在或發生的因子VII天然等位基因變異。同樣，糖基化或其它翻譯後修飾的程度和位置可能隨所選宿主細胞和宿主細胞環境的性質而變化。術語″因子VII″還意欲涵蓋處於未切割(酶原)形式的因子VII多肽，以及經過蛋白水解加工而生成的相應生物活性形式，這可以稱為因子VIIa。通常，因子VII在第152位與第153位之間得到切割而生成因子VIIa。
術語「因子VII衍生物″如此處所用，意在指顯示與野生型因子VII基本上相同或改善的生物學活性的FVII多肽，其中親本肽的一個或多個胺基酸被基因工程和/或化學和/或酶學修飾，例如通過烷基化、糖基化、PEG化、醯化、酯形成或醯胺形成等。這包括但不限於PEG化的人因子VIIa，半胱氨酸-PEG化的人因子VIIa及其變異體。因子VII衍生物的非限定性實例包括GlycoPeg化的FVII衍生物，如WO 03/31464和美國申請 US20040043446，US 20040063911，US20040142856，US 20040137557以及US20040132640中所述NeoseTechnologies，Inc.)；FVII偶聯物如WO 01/04287，US專利申請20030165996，WO 01/58935，WO 03/93465(Maxygen ApS)和WO02/02764，美國專利申請20030211094(University of Minnesota)中所述。
術語「改善的生物活性″是指具有如下性質的FVII多肽i)與重組野生型人因子VIIa相比，具有基本上相同或增加的蛋白水解活性的多肽，或ii)與重組野生型人因子VIIa相比，具有基本上相同或增加的TF結合活性的FVII多肽，或iii)與重組野生型人因子VIIa相比，具有基本上相同或增加的血漿半壽期的FVII多肽。術語″PEG化人因子VIIa″是指人因子VIIa，具有與人因子VIIa多肽偶聯的PEG分子。應當知曉，PEG分子可以與因子VIIa多肽的任一部分相連，包括因子VIIa多肽的任一胺基酸殘基或糖基。術語″半胱氨酸-PEG化的人因子VIIa″是指具有偶聯於導入人因子VIIa的巰基的PEG分子之因子VIIa。
如上所述，術語″因子VII多肽″還意指″因子VII相關多肽″。術語″因子VII相關多肽″意欲涵蓋處於未切割(酶原)形式的這些多肽，以及經過蛋白水解加工而生成的相應生物活性形式。在用於本文時，″因子VII相關多肽″涵蓋但不限於與野生型人因子VII相比展示基本上相同或改進的生物學活性的多肽，其中相對於野生型人因子VIIa，其生物學活性大大降低(如美國專利4,784,950中所公開)。這些多肽包括但不限於因子VII或因子VIIa已被化學修飾，例如通過使因子VII與不可逆抑制劑如有機磷化合物、磺醯氟、肽滷甲基酮或氮雜肽反應，或者非限制性實例被醯化，以及導入了略微改變或改進多肽生物學活性的特定胺基酸序列改變的因子VII變體，諸如例如其中因子VIIa的催化活性通過催化位點或三聯體的化學衍生化被抑制術語″催化位點″或「活性位點″，當此處用於指FVIIa時，是指催化和酶原底物結合位點，包括FVIIa的「S1″位點，該術語如Schecter，I.和Berger，A.所述，(1967)Biochem.Biophys.Res.Commun.7157-162。人和牛因子VII蛋白質的催化位點包括胺基酸Ser344、Asp242和His193(下標表示在序列中的位置編號)，形成所謂的催化「三聯體″。其它哺乳動物的因子VII中的催化位點可以利用現有的技術確定，尤其是包括蛋白質分離和胺基酸序列分析。催化位點也可通過序列與其它絲氨酸蛋白酶的序列比對確定，特別是胰凝乳蛋白酶，其活性位點此前業已確定(Sigler等人，J.Mol.Biol.，35143-164(1968))，由比對確定類似的活性位點殘基。
因子VII相關多肽(包括與野生型因子VIIa相比具有基本上相同或改進的生物學活性的變異體)涵蓋那些在本說明書所述凝結測定法、蛋白水解測定法、或TF結合測定法中的一種或多種方法中進行測試時，與在相同細胞類型中生成的野生型因子VIIa相比展示至少約25％、優選至少約50％、更優選至少約75％、更優選至少約100％、更優選至少約110％、更優選至少約120％、且最優選至少約130％的比活的多肽。
因子VII相關多肽包括變異體，相對於野生型人因子VIIa的活性，其所述生物學活性被大大降低，包括顯示低於約25％，更優選低於約10％，或5％，或3％，或2％，且最優選低於約1％的野生型因子人因子VIIa的比活性的那些多肽，如本說明書中所述在一種或多種凝結測定法、FIXa或FXa產生測定法、氨解或蛋白解測定法中測定。
在有些實施方案中，因子VII多肽是因子VII相關多肽，特別是變異體，其中在″體外水解測定法″(見下文實施例，一般方法)中進行測試時，所述因子VII多肽的活性與天然人因子VIIa(野生型FVIIa)的活性之間的比是至少約1.25；在其它實施方案中，該比是至少約2.0；在還有一些實施方案中，該比是至少約4.0。在本發明的有些實施方案中，因子VII多肽是因子VII相關多肽，特別是變異體，其中在″體外蛋白水解測定法″(見下文實施例，一般方法)中進行測試時，所述因子VII多肽的活性與天然人因子VIIa(野生型FVIIa)的活性之間的比是至少約1.25；在其它實施方案中，該比是至少約2.0；在還有一些實施方案中，該比是至少約4.0；在還有一些實施方案中，該比是至少約8.0。
與野生型因子VII相比具有基本上相同或改進的生物學活性的因子VII變異體的非限制性實例包括S52A-FVII、S60A-FVII(Lino等人，Arch.Biochem.Biophys.352182-192、1998)；L305V-FVII、L305V/M306D/D309S-FVII、L305I-FVII、L305T-FVII、F374P-FVII、V158T/M298Q-FVII、V158D/E296V/M298Q-FVII、K337A-FVII、M298Q-FVII、V158D/M298Q-FVII、L305V/K337A-FVII、V158D/E296V/M298Q/L305V-FVII、V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII、V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII、K157A-FVII、E296V-FVII、E296V/M298Q-FVII、V158D/E296V-FVII、V158D/M298K-FVII、和S336G-FVII；美國專利號5,580,560中公開的展示蛋白水解穩定性增加的FVIIa變異體；在第290位與第291位殘基之間或第315位與第316位殘基之間受到蛋白水解切割的因子VIIa(Mollerup等人，Biotechnol.Bioeng.48501-505，1995)；氧化形式的因子VIIa(Kornfelt等人，Arch.Biochem.Biophys.，36343-54，1999)；PCT/DK02/00189中公開的FVII變異體；WO02/38162(Scripps研究院)中公開的展示蛋白水解穩定性增加的FVII變異體；WO 99/20767，美國專利US6017882和US6747003、美國專利申請20030100506(明尼蘇達大學)和WO00/66753、美國專利申請US2001 0018 414，US2004220106和US200131005，US專利US6762286和US6693075(明尼蘇達大學)中公開的具有經修飾的Gla結構域且展示膜結合增強的FVII變異體；WO 01/58935、美國專利US68060063、美國專利申請20030096338(Maxygen Aps)、WO03/93465(Maxygen，Aps)和WO 04/029091(Maxygen ApS)中公開的FVII變異體；WO 01/83725、WO 02/22776、WO 02/077218、PCT/DK02/00635、丹麥專利申請PA2002 01423、丹麥專利申請PA 2001 01627；WO 02/38162(Scripps研究院)中公開的與野生型FVIIa相比生物學活性增加的FVII變異體；以及JP 2001061479(Chemo-Sero-Therapeutic研究院)中公開的具有增強活性的FVIIa變異體。
具有相對於野生型因子VII明顯降低的生物學活性之因子VII多肽的非限制性實例包括R152E-FVIIa(Wildgoose等人，Biochem 293413-3420，1990)，S344A-FVIIa(Kazama等人，J.Biol.Chem.27066-72，1995)，FFR-FVIIa(Holst等人，Eur.J.Vasc.Endovasc.Surg.15515-520，1998)，和缺乏Gla結構域的因子VIIa(Nicolaisen等人，FEBS Letts.317245-249，1993)。非限制性實例也包括人FVIIa，其在位置341的賴氨酸殘基被另一胺基酸殘基替代；人FVIIa，其在位置344的絲氨酸殘基被另一胺基酸殘基替代；人FVIIa，其在位置242的天冬氨酸殘基被另一胺基酸殘基替代；人FVIIa，其在位置193的組氨酸殘基被另一胺基酸殘基替代；FVII-(K341A)；FVII-(S344A)；FVII-(D242A)；FVII-(H193A)；Phe-Phe-Arg-FVII(FFR-FVII)，D-Phe-Phe-Arg-FVII(D-FFR-FVII)，Phe-Pro-Arg-FVII(FPR-FVII)，D-Phe-Pro-Arg-FVII(D-FPR-FVII)，L-Glu-Gly-Arg-FVII(EGR-FVII)和D-Glu-Gly-Arg-FVII(D-EGR-FVII)，Dansyl-Phe-Phe-Arg-FVII，Dansyl-D-Phe-Phe-Arg-FVII，Dansyl-Phe-Pro-Arg-FVII，Dansyl-D-Phe-Pro-Arg-FVII，Dansyl-L-Glu-Gly-Arg-FVII和Dansyl-D-Glu-Gly-Arg-FVII。化學修飾的因子VII多肽的非限制性實例和序列變異體描述於例如美國專利5,997,864。因子VII或因子VII相關多肽的實例包括但不限於野生型因子VII，L305V-FVII，L305V/M306D/D309S-FVII，L305I-FVII，L305T-FVII，F374P-FVII，V158T/M298Q-FVII，V158D/E296V/M298Q-FVII，K337A-FVII，M298Q-FVII，V158D/M298Q-FVII，L305V/K337A-FVII，V158D/E296V/M298Q/L305V-FVII，V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII，K157A-FVII，E296V-FVII，E296V/M298Q-FVII，V158D/E296V-FVII，V158D/M298K-FVII，和S336G-FVII，L305V/K337A-FVII，L305V/V158D-FVII，L305V/E296V-FVII，L305V/M298Q-FVII，L305V/V158T-FVII，L305V/K337A/V158T-FVII，L305V/K337A/M298Q-FVII，L305V/K337A/E296V-FVII，L305V/K337A/V158D-FVII，L305V/V158D/M298Q-FVII，L305V/V158D/E296V-FVII，L305V/V158T/M298Q-FVII，L305V/V158T/E296V-FVII，L305V/E296V/M298Q-FVII，L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII，L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII，L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII，L305V/V158T/E296V/K337A-FVII，L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII，L305V/V158D/E296V/K337A-FVII，L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII，S314E/K316H-FVII，S314E/K316Q-FVII，S314E/L305V-FVII，S314E/K337A-FVII，S314E/V158D-FVII，S314E/E296V-FVII，S314E/M298Q-FVII，S314E/V158T-FVII，K316H/L305V-FVII，K316H/K337A-FVII，K316H/V158D-FVII，K316H/E296V-FVII，K316H/M298Q-FVII，K316H/V158T-FVII，K316Q/L305V-FVII，K316Q/K337A-FVII，K316Q/V158D-FVII，K316Q/E296V-FVII，K316Q/M298Q-FVII，K316Q/V158T-FVII，S314E/L305V/K337A-FVII，S314E/L305V/V158D-FVII，S314E/L305V/E296V-FVII，S314E/L305V/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158T-FVII，S314E/L305V/K337A/V158T-FVII，S314E/L305V/K337A/M298Q-FVII，S314E/L305V/K337A/E296V-FVII，S314E/L305V/K337A/V158D-FVII，S314E/L305V/V158D/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158D/E296V-FVII，S314E/L305V/V158T/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158T/E296V-FVII，S314E/L305V/E296V/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII，S314E/L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII，S314E/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，S314E/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII，K316H/L305V/K337A-FVII，K316H/L305V/V158D-FVII，K316H/L305V/E296V-FVII，K316H/L305V/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158T-FVII，K316H/L305V/K337A/V158T-FVII，K316H/L305V/K337A/M298Q-FVII，K316H/L305V/K337A/E296V-FVII，K316H/L305V/K337A/V158D-FVII，K316H/L305V/V158D/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158D/E296V-FVII，K316H/L305V/V158T/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158T/E296V-FVII，K316H/L305V/E296V/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII，K316H/L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII，K316H/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，K316H/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII，K316Q/L305V/K337A-FVII，K316Q/L305V/V158D-FVII，K316Q/L305V/E 96V-FVII，K316Q/L305V/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158T-FVII，K316Q/L305V/K337A/V158T-FVII，K316Q/L305V/K337A/M298Q-FVII，K316Q/L305V/K337A/E296V-FVII，K316Q/L305V/K337A/V158D-FVII，K316Q/L305V/V158D/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158D/E296V-FVII，K316Q/L305V/V158T/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158T/E296V-FVII，K316Q/L305V/E296V/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII，K316Q/L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII，K316Q/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，K316Q/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII，F374Y/K337A-FVII，F374Y/V158D-FVII，F374Y/E296V-FVII，F374Y/M298Q-FVII，F374Y/V158T-FVII，F374Y/S314E-FVII，F374Y/L305V-FVII，F374Y/L305V/K337A-FVII，F374Y/L305V/V158D-FVII，F374Y/L305V/E296V-FVII，F374Y/L305V/M298Q-FVII，F374Y/L305V/V158T-FVII，F374Y/L305V/S314E-FVII，F374Y/K337A/S314E-FVII，F374Y/K337A/V158T-FVII，F374Y/K337A/M298Q-FVII，F374Y/K337A/E296V-FVII，F374Y/K337A/V158D-FVII，F374Y/V158D/S314E-FVII，F374Y/V158D/M298Q-FVII，F374Y/V158D/E296V-FVII，F374Y/V158T/S314E-FVII，F374Y/V158T/M298Q-FVII，F374Y/V158T/E296V-FVII，F374Y/E296V/S314E-FVII，F374Y/S314E/M298Q-FVII，F374Y/E296V/M298Q-FVII，F374Y/L305V/K337A/V158D-FVII，F374Y/L305V/K337A/E296V-FVII，F374Y/L305V/K337A/M298Q-FVII，F374Y/L305V/K337A/V158T-FVII，F374Y/L305V/K337A/S314E-FVII，F374Y/L305V/V158D/E296V-FVII，F374Y/L305V/V158D/M298Q-FVII，F374Y/L305V/V158D/S314E-FVII，F374Y/L305V/E296V/M298Q-FVII，F374Y/L305V/E296V/V158T-FVII，F374Y/L305V/E296V/S314E-FVII，F374Y/L305V/M298Q/V158T-FVII，F374Y/L305V/M298Q/S314E-FVII，F374Y/L305V/V158T/S314E-FVII，F374Y/K337A/S314E/V158T-FVII，F374Y/K337A/S314E/M298Q-FVII，F374Y/K337A/S314E/E296V-FVII，F374Y/K337A/S314E/V158D-FVII，F374Y/K337A/V158T/M298Q-FVII，F374Y/K337A/V158T/E296V-FVII，F374Y/K337A/M298Q/E296V-FVII，F374Y/K337A/M298Q/V158D-FVII，F374Y/K337A/E296V/V158D-FVII，F374Y/V158D/S314E/M298Q-FVII，F374Y/V158D/S314E/E296V-FVII，F374Y/V158D/M298Q/E296V-FVII，F374Y/V158T/S314E/E296V-FVII，F374Y/V158T/S314E/M298Q-FVII，F374Y/V158T/M298Q/E296V-FVII，F374Y/E296V/S314E/M298Q-FVII，F374Y/L305V/M298Q/K337A/S314E-FVII，F374Y/L305V/E296V/K337A/S314E-FVII，F374Y/E296V/M298Q/K337A/S314E-FVII，F374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A-FVII，F374Y/L305V/E296V/M298Q/S314E-FVII，F374Y/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，F374Y/V158D/E296V/M298Q/S314E-FVII，F374Y/L305V/V158D/K337A/S314E-FVII，F374Y/V158D/M298Q/K337A/S314E-FVII，F374Y/V158D/E296V/K337A/S314E-FVII，F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII，F374Y/L305V/V158D/M298Q/K337A-FVII，F374Y/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII，F374Y/L305V/V158D/M298Q/S314E-FVII，F374Y/L305V/V158D/E296V/S314E-FVII，F374Y/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII，F374Y/V158T/E296V/M298Q/S314E-FVII，F374Y/L305V/V158T/K337A/S314E-FVII，F374Y/V158T/M298Q/K337A/S314E-FVII，F374Y/V158T/E296V/K337A/S314E-FVII，F374Y/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII，F374Y/L305V/V158T/M298Q/K337A-FVII，F374Y/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII，F374Y/L305V/V158T/M298Q/S314E-FVII，F374Y/L305V/V158T/E296V/S314E-FVII，F374Y/E296V/M298Q/K337A/V158T/S314E-FVII，F374Y/V158D/E296V/M298Q/K337A/S314E-FVII，F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/S314E-FVII，F374Y/L305V/E296V/M298Q/V158T/S314E-FVII，F374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A/V158T-FVII，F374Y/L305V/E296V/K337A/V158T/S314E-FVII，F374Y/L305V/M298Q/K337A/V158T/S314E-FVII，F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，F374Y/L305V/V158D/E296V/K337A/S314E-FVII，F374Y/L305V/V158D/M298Q/K337A/S314E-FVII，F374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A/V158T/S314E-FVII，F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A/S314E-FVII，S52A-因子VII，S60A-因子VII；和P11Q/K33E-FVII，T106N-FVII，K143N/N145T-FVII，V253N-FVII，R290N/A292T-FVII，G291N-FVII，R315N/V317T-FVII，K143N/N145T/R315N/V317T-FVII；從233Thr至240Asn的胺基酸序列中具有取代、添加、或缺失的FVII，從304Arg至329Cys的胺基酸序列中具有取代、添加、或缺失的FVII，以及從Ile153至Arg223的胺基酸序列中具有取代、添加、或缺失的FVII。
為了本發明的目的，可以使用缺乏因子VII的血漿和促凝血酶原激酶通過測量製劑促進血液凝結的能力而將因子VII多肽的生物學活性(″因子VII生物學活性″)定量，例如美國專利號5,997,864中所述。在這種測定法中，生物學活性表述成凝結時間相對於對照樣品的縮短，並且通過與含1U/ml因子VII活性的合併人血清標準品進行比較而轉變成″因子VII單位″。或者，可以通過下列方法而將因子VIIa生物學活性定量(i)在包含TF(包埋在脂膜中)和因子X的系統中測量因子VIIa或因子VIIa相關多肽生成激活的因子X(因子Xa)的能力(Persson等人，J.Biol.Chem.，27219919-19924，1997)；(ii)在水性系統中測量因子X水解(″體外蛋白水解測定法″，見下文實施例，一般方法)；(iii)使用基於表面激元共振(surface plasmon resonance)的儀器測量因子VIIa或因子VIIa相關多肽與TF的物理結合(Persson，FEBS Letts.，413359-363，1997)；(iv)測量因子VIIa和/或因子VIIa相關多肽對合成性底物的水解(″體外水解測定法″，見下文實施例，一般方法)；和(v)在不依賴TF的體外系統中測量凝血酶的生成。
術語″因子VII生物學活性″或″因子VII活性″意在包括生成凝血酶的能力；該術語還包括在缺乏組織因子時在激活的血小板的表面上生成凝血酶的能力。
本說明書詳細描述了可用於測定FVII生物學活性的測定法。
此外，貫穿本說明書，下列術語具有以下含義術語「藥盒″或「部分的藥盒″是指在第一單元中的乾產品(含有多肽和一種或多種穩定劑)；和在第二單元中，由適於溶解第一單元的乾產品之溶劑，結合至少一種緩衝劑(量為約0.1mM-100mM)和/或至少一種張力調節劑組成的施用載體的組合。藥盒含有藥物治療，特別是出血事件。在使用前，第一單元的幹組合物與包含在第二單元的施用載體混合併溶於其中，由此提供了一種可以使用的藥物。
可以使用的藥物是基本上等滲的。
術語「施用載體″意在包括藥物上可接受的，優選適於通過注射單元施用的無菌液體，諸如通過例如靜脈內、皮下或肌肉內注射的輸注或注射。施用載體優選為水性的。施用載體包括適於多肽組合物重構(溶解)的溶劑或溶劑混合物(例如，注射用水/WFI)，和一種或多種當溶於水性溶劑中適於使所述組合物的pH範圍保持在3-9的試劑，其量為0.1mM-100mM；和/或一種或多種張力調節劑，其量足以使通過將第一單元形式的組合物溶於第二單元形式的載體中所得的重構溶液基本上等滲。
施用載體可含有其他物質，諸如鹽例如，鈣鹽和/或鎂鹽，胺基酸，例如甘氨醯甘氨酸。
重構組合物意在用於預防和/或治療的非胃腸道施用。
「有效量″的多肽是指如下多肽的量，當根據本發明施用時，產生本領域普通技術人員知曉的至少一種止血臨床參數中的可測量的改善。
應當知曉多肽的有效量可根據受試者的凝血狀況變化，其反過來可在一種或多種臨床參數中反應，包括例如循環凝固因子的相對水平；失血量；出血速度；紅細胞壓積等等。還應理解單一劑量有效量可根據常規實驗，通過構建數值矩陣和測定矩陣中的不同點，由本領域普通技術人員確定。
術語″穩定化″意欲涵蓋使組合物的貯藏或生產過程中(不溶性的和/或可溶性的)聚集體形成和/或化學降解降至最低，以及維持pH和蛋白質的正確構象，從而實現生物學活性的實質性保持並維持蛋白質穩定性。此外，穩定化還意指在凍幹條件下生產組合物時對蛋白質提供防溶保護(lyoprotection)和防凍保護。
術語″穩定劑″意在包括能夠在貯藏或生產含有所述多肽的組合物的過程中穩定多肽的物質，或物質的混合物。
術語″結構性穩定化″或″結構穩定性″意欲涵蓋形成具有優良特性和外觀的凍幹塊或餅的能力，例如使得它不崩塌且使用前易於溶解。
術語″貯藏穩定的″意欲定義在5℃-40℃貯藏後穩定且在合適時間(常常是幾個月)內保持預定產品規格的產品。
術語因子VII多肽的″物理穩定性″涉及不溶性和/或可溶性的二聚體、寡聚物和多聚物形式的因子VII多肽聚集體的形成，以及該分子的任何結構性變形和變性。
術語″化學穩定性″意指在加速條件下以溶解或固體狀態貯藏後因子VII多肽中任何化學變化的形成，例如水解、脫醯胺、和氧化。具體而言，含硫胺基酸易於氧化而形成相應的亞碸。
術語″防凍劑″在用於本文時通常包括針對由冷凍誘導的壓力為蛋白質提供穩定性的試劑。防凍劑的範例包括多元醇，諸如例如甘露醇，包括糖，諸如例如蔗糖，還包括表面活性劑，諸如例如聚山梨酸酯、泊洛沙姆、或聚乙二醇等。防凍劑也有助於製劑的張力。
術語″防溶劑″(Lyoprotectant)在用於本文時包括在凍幹工藝的乾燥過程後的脫水過程中為蛋白質提供穩定性的試劑，例如維持蛋白質的正確構象。防溶劑的範例包括糖，特別是二糖或三糖。防凍劑也可具有防溶劑的效果。
術語″適於將pH維持在範圍3-9的試劑″涵蓋那些將溶液pH維持在可接受範圍3.0-9.0之間的試劑。能夠將pH維持在3-9範圍內的試劑的典型範例是檸檬酸、醋酸、組氨酸、蘋果酸、磷酸、酒石酸、琥珀酸、MES、HEPES、PIPES、咪唑、TRIS、乳酸、戊二酸、和甘氨醯甘氨酸的酸形式或鹽。應當理解的是，在本發明中還可以使用試劑組合，其中試劑組合適於將pH維持在上文所述範圍內。
術語″凍幹餅″在用於本文時意欲涵蓋在一定條件下加工溶解的或至少部分溶解的組合物後得到的固體組合物，所述條件涉及至少一個將所述溶解的/部分溶解的組合物冷卻至結冰的步驟，和隨後至少一個真空乾燥的步驟。
術語″凍幹″和「冷凍乾燥″涵蓋在一定條件下由溶解或至少部分溶解的組合物除去液體的過程，所述條件涉及至少一個將所述溶解的/部分溶解的溶液冷卻至結冰、隨後真空乾燥的步驟。凍幹是用於製備固體多肽藥物的最常用方法。該方法由兩個主要步驟組成將多肽溶液冷凍和在真空條件下將冷凍的固體乾燥。乾燥步驟還可分成兩個階段初步和次級乾燥。初部乾燥除去凍結水(冰的升華)，次級乾燥除去非凍結的″結合″水(水的解吸附)。對每個凍幹步驟的更詳細分析提供於例如Wang等人，2000，International Journal ofPharmaceutics，2031-60(見第4部分，第16頁及以下)。
通常，通過將組合物裝到瓶中、在凍幹機的架子上冷凍、然後建立真空並加熱架子以執行初步乾燥(或冰的升華)，實現對組合物的凍幹。此後，在較高溫度進行次級乾燥(或吸附水的解吸附)直至完成加工，即組合物的含溼(水)量足夠低。凍幹的方法在本領域是普遍知道的，參閱例如Wang等人，2000，International Journal ofPharmaceutics，2031-60。從業人員憑藉普通技術就能夠在特定組合物的加工過程中將要使用的溫度、每個溫度下的時間、還有壓力方面優化凍幹條件。
術語″含溼量″意欲涵蓋與產品相關的水，包括但不限於吸附形式的水，諸如凍結溶質相捕獲或吸附的非凍結水和/或與無定形相相關的非凍結水或結晶固體吸附的非凍結水。術語″含水量″與″含溼量″可互換使用。期望的殘餘溼氣水平(含溼量)是次級乾燥步驟的持續時間和溫度的函數。本領域知道用於在凍幹過程中測定殘餘含溼量的幾種方法；例如可以使用電子溼度計或殘餘氣體分析儀。可以通過本領域知道的幾種方法來測定凍幹製劑的含溼量，諸如例如乾燥損失、Karl Fischer滴定、熱比重分析(TGA)、氣相層析(GC)、或近IR(參閱例如Wang等人，2000，International Journal ofPharmaceutics，2031-60)。用於測定含水量(含溼量)的方法還描述於歐洲和美國藥典。例如，可以如美國藥典(USP921，Ic)或歐洲藥典(EP2.5.32)中所述通過Karl Fischer電量滴定來進行含水量測定。
簡而言之，該方法如下通過電量滴定測定含水量水的電量測定利用Karl Fischer反應，其依據的是無水介質中水與二氧化硫和碘的定量反應。在反應池中以電化學方式即通過碘化物的氧化生成碘。在陽極生成的碘立即與反應池中所含的水和二氧化硫反應。物質中水的量與電量成正比，直至滴定終點。當池中的水都耗盡時，達到終點，由此出現過量的碘，這可以通過量電法檢測，由此指示終點。然後計算物質中存在的含水量百分比。
可以根據分析時小瓶中的樣品重量(即固體加上存在的水-稱為溼重基數)來定義含溼量，或者可以根據校正樣品中測量到的水(即乾重基數)來進行定義。在具有低含溼量的凍乾產品的情況中，兩種測量方法(溼重基數對乾重基數)產生非常相似的結果。在用於本文時，含溼量是根據固體加上存在的水(即溼重基數)來定義的。
術語″膨脹劑″(bulking agent)通常包括提供優良凍幹餅特性、形成藥物上精緻產品、幫助多肽克服多種壓力(例如與凍幹加工有關的剪切/凍結)、和有助於在凍幹過程及後續貯藏過程中維持多肽活性水平的試劑。膨脹劑的典型範例包括甘露醇、甘氨酸、蔗糖、乳糖。這些試劑可能對製劑的張力也有貢獻。
等滲溶液具有血液、腹水或其它相關體液的生理範圍內的張力。等滲性是指具有相應於0.9％NaCl溶液的滲透壓(＝286mOsM)之滲透壓的溶液。術語″基本上等滲的″意在表示相應於含有約0.7-約1.5％NaCl，諸如例如約0.8-約1.3％，約0.8-約1.1％，約0.8-約1.0％，或約0.9％NaCl的鹽水溶液之滲透壓的張力。
術語″張力調節劑″意指能夠調節組合物的張力、使得在使用時將組合物溶解(或重構)後組合物。顯然，重構的溶液之張力可取決於幹組合物中和重構溶劑中張力調節劑的含量。
張力調節劑包括但不限於選自如下的組分醋酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、甘露醇、甘油、丙二醇，或這些化合物中兩種或多種的混合物。
適於提供具有上述張力的組合物之張力調節劑的量為例如從0-約9mg/ml氯化鈉，從0-約17mg/ml二水合氯化鈣，從0-約51mg/ml甘露醇，從0-約26mg/ml甘油，從0-約21mg/ml丙二醇，取決於是否各個張力調節劑單獨或與一種或多種張力調節劑組合使用。
術語″表面活性劑″通常包括那些保護蛋白質免於由空氣/溶液界面誘導的壓力和由溶液/表面誘導的壓力的影響的試劑。例如，表面活性劑可以保護蛋白質免於聚集。合適的表面活性劑可以包括例如聚山梨酸酯、聚氧乙烯烷基醚諸如Brij35_、或泊洛沙姆諸如吐溫20、吐溫80、或泊洛沙姆188。優選的表面活性劑是泊洛沙姆，例如泊洛沙姆188、泊洛沙姆407；聚氧乙烯烷基醚，例如Brij35_、Cremophor A25、Sympatens ALM/230；和聚山梨酸酯/吐溫，例如聚山梨酸酯20、聚山梨酸酯80。更優選的是泊洛沙姆，例如泊洛沙姆188，和吐溫，例如吐溫20和吐溫80。一般地，所加表面活性劑的量為0.005-5mg/ml。優選的量為0.01-3mg/mol，更優選的0.01～3mg/ml(對於吐溫20和/或吐溫80)和0.05-3.0mg/ml(對於泊洛沙姆188)。
術語″初始含量″指配製時加到組合物中的因子VII多肽的量。本文給出的濃度(mg/ml)指除溼前(例如凍幹前)的因子VII多肽溶液或重構組合物中因子VII多肽的濃度，或者在涉及固體組合物例如凍幹餅中的濃度時表述成％w/w。
在用於本文時，所述量理解為±約10％，因此約50mM包括50mM±5mM，4％包括4％±0.4％，等等。
如上所述，本發明的研究人員對本領域的主要貢獻是將因子VII多肽穩定化從而能夠長時間貯藏而不會引起用戶的風險增加和不便。
本發明的研究人員發現，在將因子VII多肽穩定化時需要調整許多關鍵的參數。一個重要的參數至少部分涉及含溼量，例如水。含溼量應當受到限制。作為另一個重要參數，組合物應當至少包含一種穩定劑。
穩定劑包括但不限於，抗氧化劑、糖、多元醇、表面活性劑和適於在預定範圍內維持pH的試劑。
在一個實施方案中，適當的穩定劑包括選自下組的至少兩組藥物上可接受賦形劑的組合抗氧化劑、糖、和多元醇。糖和多元醇具有防溶劑和/或防凍劑特性，這在將組合物進行凍幹的情況中可能是重要的，至少部分重要。一般而言，可以通過至少兩組賦形劑的適當組合而部分實現穩定性的改進。然而，更具體的說，發現當所述組合包含糖(蔗糖)或抗氧化劑(甲硫氨酸)時，穩定效果可能甚至更加顯著。此外，還令人驚訝的發現甲硫氨酸可預防因子VII多肽的氧化性降解。
如所述，在本發明的一個實施方案中，穩定劑包括組合至少兩組藥物上可接受的賦形劑。
依照本發明，因子VII多肽意欲涵蓋上文所述多肽。在本發明的合適實施方案中，因子VII多肽選自下組人因子VIIa、重組人因子VIIa、和因子VII序列變體。優選的是，因子VII多肽是人因子VIIa或重組人因子VIIa或因子VII相關多肽，其中在本說明書所述「體外蛋白水解測定法″和″體外水解測定法″中的一種或多種方法中進行測試時，所述因子VII相關多肽與野生型因子VII的活性比是至少1.25。
如上所述，含溼量應當受到限制。為了本發明的目的，在大量提供因子VII多肽時，它可以是固體或液體的形式。然而，在大量提供因子VII多肽時，它通常是液體的形式。因此，將大量蛋白質進一步加工以製備組合物時需要添加合適賦形劑並由混合物除去液體的步驟，所述添加賦形劑可以在除去液體之前或之後進行。用於從多肽除去液體的這樣一種方法涉及凍幹。因此，在本發明的一個優選實施方案中，組合物是凍幹餅的形式。然而，本發明不排除適於由大量多肽除去液體以獲得含溼量不超過約3％w/w的固體組合物的其它方法。
此外，依照本發明，含溼量優選不超過約2.5％w/w，更優選不超過約2％w/w，最優選不超過約1.5％w/w。
可以理解，本發明部分涉及在製備過程中(例如在混合賦形劑和除去液體以獲得含溼量最高3％w/w的固體組合物的過程中)限制因子VII多肽的降解，以及由製造至使用(例如直至將組合物施用於患者之時)該固體組合物這段時間裡限制所述降解。
因此，將包含因子VII多肽的組合物穩定化時還有另一個參數，即在溶於水性溶劑，諸如純水或水性緩衝液後，應當將pH維持在pH範圍3-9內。也就是說，除去含溼量之前，例如凍幹前，多肽溶液的pH應當維持在約3-約9內。有利的是，該pH範圍也處於期望的生理範圍內，從而不會在通過腸胃外手段進行施用後對使用者造成傷害。優選的是，溶液的pH是約4.0-約9.0，諸如4.0-8.0，4.0-7.5，4.0-7.0，4.5-7.0，4.5-6.8，4.5-6.5，5.0-7.0，5.0-6.5，5.0-6.0，5.5-6.0，或約5.5-約6.5，諸如約5.5，5.6，5.7，5.8，5.9，6.0，6.1，6.2，6.3，6.4，或6.5。
在合適實施方案中，適於將pH維持在3-9範圍的試劑選自下組檸檬酸、醋酸、組氨酸、蘋果酸、磷酸、酒石酸、琥珀酸、MES、HEPES、咪唑、TRIS、乳酸、戊二酸、PIPES、和甘氨醯甘氨酸的酸或鹽，或至少兩種所列試劑的混合物，其中所述混合物能提供所示範圍的pH值。
此外，用於將pH保持在3-9的適當試劑也可以是至少兩種所列試劑的混合物，其中所述混合物能提供所示範圍的pH值。所述適當試劑的濃度範圍為約0.1mM-100mM；約0.1mM-約50mM；諸如約0.1mM-約40mM；約0.1mM-約35mM；約0.1mm-約30mM；約0.5mM-約25mM；約1mM-約20mM；約1mM-約15mM；約5mM-約20mM；或約5mM-約15mM。
在本發明的一個實施方案中，適於將pH保持在3-9的適當試劑為組氨酸，優選為L-組氨酸。
通過氧化途徑以及通過聚集途徑的因子VII多肽的降解是穩定性的敏感參數。
通常，在終止凍幹後，組合物得到穩定化，使得少於初始含量5％w/w、諸如少於4、3、或2％w/w的因子VII多肽轉變成其氧化形式。因子VII多肽的初始含量即配製組合物之後、凍幹步驟之前添加到組合物中的量。此外，根據常規分析方法(諸如例如本申請實施例中所述方法)的測定，少於初始含量5％w/w、諸如少於4.0％、3.0％、2.5％、2％、1.5％、或少於1％w/w的因子VII多肽轉變成聚集體。
本發明的研究人員發現，因子VII多肽在貯藏於環境溫度後的進一步降解(即計算由終止製造過程時直至於30℃貯藏8個月)很少。發現包含抗氧化劑(甲硫氨酸)的組合物針對因子VII多肽的氧化性降解更加穩定。
因此，依照本發明，合適組合物在於環境溫度貯藏至少8個月後氧化形式的含量增加有限。也就是說，在還有一些實施方案中，組合物是穩定的，從而在終止製造過程(例如凍幹加工)後將組合物於30℃貯藏8個月後不超過初始含量約6％w/w的因子VII多肽被額外降解成氧化形式。在其它合適實施方案中，由終止製造過程時直至於30℃貯藏8個月後計算，不超過約5、4、3、2、或1.5％w/w的因子VII多肽額外轉變成氧化形式。在本發明的這些實施方案中，組合物是穩定的，從而所述組合物於30℃貯藏8個月後不超過初始含量約5％(4、3、2、或1.5％)w/w的因子VII多肽轉變成氧化形式。如上所述，初始含量指配製組合物之後、凍幹步驟之前添加到組合物中的因子VII多肽的量。
如上所述，聚集途徑對因子VII多肽的降解也可看作基本的穩定性指示參數。
因此，本發明的實施方案涉及穩定的組合物，使得將所述組合物於30℃貯藏8個月後，不超過初始含量約5％w/w的因子VII多肽轉變成聚集體。如上所述，所述因子VII多肽的初始含量指配製組合物之後、凍幹步驟之前添加到組合物中的量。通過糖、多元醇、和抗氧化劑含量的適當優化，至少是部分優化，組合物是穩定的，從而所述組合物於30℃貯藏8個月後，不超過初始含量約4.0％、3.0％w/w、諸如2.5、2.0、1.5、或1.0％w/w的因子VII多肽轉變成聚集體。
因此，有利的是，終止製造過程之後(即終止凍幹加工後)，本發明的組合物具有低含量的氧化形式和聚集體，因此，依照本發明的組合物的特徵是在進行貯藏前其中氧化形式和聚集體初始含量較低，例如在終止製造過程後不超過初始含量約5％w/w、諸如4％、3％、或2％w/w的因子VII多肽轉變成氧化形式，而且少於5％w/w、諸如不超過約4.0％、3.0％、2.5％、2％、1.5％、或不超過約1％w/w轉變成二聚體或高級聚合體形式。
此外，有利的是，本發明的組合物是貯藏穩定的，例如在黑暗中於30℃貯藏至少8個月後少於初始含量10％w/w、諸如6％、5％、4％、3％、2％、或1.5％w/w的因子VII多肽轉變成氧化形式，而且少於5％w/w、諸如4％、3％、2.5％、2％、1.5％、或1％w/w轉變成二聚體或高級聚合體形式。
如上所述，所述改進的穩定性涉及特定賦形劑的適當組合。依照本發明，賦形劑應當選自下組糖、多元醇、和抗氧化劑。在合適實施方案中，感興趣的糖是二糖、三糖、和多糖，而且糖可以選自蔗糖、右旋糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、環糊精、麥芽糖糊精、和葡聚糖。此外，在有些實施方案中，多元醇選自甘露醇、山梨醇、和木糖醇。在還有一些實施方案中，抗氧化劑選自同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、穀胱甘肽、以及包含同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、和穀胱甘肽中任意一種的肽。
可以理解，糖和多元醇賦形劑分別還可以是至少兩種所列試劑的混合物。在本發明的一系列實施方案中，所用糖賦形劑是至少兩種二糖、三糖、和/或多糖的組合，諸如例如蔗糖與環糊精的組合、海藻糖與環糊精的組合、蔗糖與葡聚糖的組合、或蔗糖與乳糖的組合。在本發明的一系列實施方案中，所用多元醇賦形劑是至少兩種多元醇的組合，諸如例如甘露醇與山梨醇的組合、甘露醇與木糖醇的組合、或山梨醇與木糖醇的組合。在本發明的一系列實施方案中，所用抗氧化劑賦形劑是至少兩種抗氧化劑的組合，諸如例如甲硫氨酸與同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、穀胱甘肽以及包含同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、和穀胱甘肽中任意一種的肽中一種或多種的組合。
在特別感興趣的實施方案中，抗氧化劑選自同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、和穀胱甘肽以及含有同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、和穀胱甘肽中任一種的肽。在優選的實施方案中，抗氧化劑是甲硫氨酸。
在更加有趣的實施方案中，多元醇存在的量是約5％w/w-約90％w/w。優選的，多元醇存在的量是約18％w/w-約88％w/w，諸如約18％w/w-約83％w/w、25％-80％、30％-65％、30％-80％、40％-80％、50％-80％、30％-75％、40％-75％、50％-75％、或約50％-約70％w/w。
多元醇存在的量是約0.5-75mg/ml，諸如約2-60mg/ml、5mg/ml-55mg/ml、8-45mg/ml、10-40mg/ml、10-30mg/ml、或約2-45mg/ml、5mg/ml-45mg/ml、5-35mg/ml、5-25mg/ml、5-20mg/ml、20-40mg/ml、或諸如約20-30mg/ml。
在其有趣實施方案中以及在本發明的其它一些有趣實施方案中，組合物中糖存在的量是約0-約85％w/w。在其它有趣實施方案中，其存在量是約3％w/w-約80％w/w，諸如約7％w/w-約75％w/w、10％-70％、10％-50％、20％-50％、10％-40％、或約10％w/w-約35％w/w。
糖存在的量應當是約0.5-75mg/ml，諸如約2-60mg/ml、約5mg/ml-55mg/ml、約8-45mg/ml、約10-40mg/ml、約10-30mg/ml、約2-45mg/ml、約5mg/ml-45mg/ml、約5-35mg/ml、約5-25mg/ml、諸如約5-20mg/ml。
應當提供的抗氧化劑的量是約0.05-10mg/ml，優選約0.1-5mg/ml，更優選約0.1mg/ml-2.5mg/ml、甚至更優選約0.1-2mg/ml，最優選約0.1-1mg/ml。
需要適當調節多元醇與糖之間的比率。在本發明的合適實施方案中，所述多元醇相對於所述糖的重量比的範圍是約100∶1-1∶50。在甚至更合適實施方案中，所述重量比是約50∶1-1∶10，更優選約20∶1-1∶5。在其它合適實施方案中，重量比涉及範圍約10∶1-1∶2和約6∶1-1∶2。在非常合適的實施方案中，所述糖醇相對於所述糖的重量比的範圍是約4∶1-1∶1，諸如約4∶1-3∶2或約1∶1-3∶2。
本發明的有些實施方案中，多元醇是甘露醇；在還有一些實施方案中，糖是蔗糖。此外，在還有一些實施方案中，抗氧化劑是甲硫氨酸。
在本發明又一優選的實施方案中，組合物還包含其它用作膨脹劑的藥物賦形劑。即甘露醇之外的膨脹劑包括在組合物中。特別的，膨脹劑包括在通過凍幹製備的組合物中。
在組合物中因子VII多肽的初始濃度優選為約0.6mg/mL-約10.0mg/mL，諸如約0.6mg/mL-約8mg/mL，約0.6mg/mL-約6mg/mL，約0.6mg/mL-約5mg/mL，約0.6mg/mL-約4mg/mL，約0.6mg/mL-約3mg/mL，約1.0mg/mL-約5mg/mL，約1.0mg/mL-約4mg/mL，或約1.0mg/mL-約3mg/mL，例如約1.0mg/mL，約2.0mg/mL，約3.0mg/mL，約4.0mg/mL，或約5.0mg/mL。
在一個實施方案中，包含在藥盒的第一單元形式中的組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖、和聚山梨酸酯，優選聚山梨酸酯20或80，具有不超過約3％的含溼量，而且組合物當溶於水時具有5.0-7.0範圍內的pH。在一個實施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨醯甘氨酸。在一個實施方案中，因子VII多肽是人因子VIIa。
在另一實施方案中，包含在藥盒的第一單元形式中的組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖、甲硫氨酸，和聚山梨酸酯，優選聚山梨酸酯20或80，具有不超過約3％的含溼量，而且組合物當溶於水時具有5.0-7.0範圍內的pH。在一個實施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨醯甘氨酸。在一個實施方案中，因子VII多肽是人因子VIIa。
在另一實施方案中，包含在藥盒的第一單元形式中的組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖、組氨酸和聚山梨酸酯，優選聚山梨酸酯20或80，具有不超過約3％的含溼量，而且組合物當溶於水時具有5.0-7.0範圍內的pH。在一個實施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨醯甘氨酸。在一個實施方案中，因子VII多肽是人因子VIIa。
在另一實施方案中，包含在藥盒的第一單元形式中的組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖、甲硫氨酸、組氨酸和聚山梨酸酯，優選聚山梨酸酯20或80，具有不超過約3％的含溼量，而且組合物當溶於水時具有5.0-7.0範圍內的pH。在一個實施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨醯甘氨酸。在一個實施方案中，因子VII多肽是人因子VIIa。
在另一實施方案中，包含在藥盒的第一單元形式中的組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖和泊洛沙姆188，具有不超過約3％的含溼量，而且組合物當溶於水時具有5.0-7.0範圍內的pH。在一個實施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨醯甘氨酸。在一個實施方案中，因子VII多肽是人因子VIIa。
在另一實施方案中，包含在藥盒的第一單元形式中的組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖、甲硫氨酸和泊洛沙姆188，具有不超過約3％的含溼量，而且組合物當溶於水時具有5.0-7.0範圍內的pH。在一個實施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨醯甘氨酸。在一個實施方案中，因子VII多肽是人因子VIIa。
在另一個實施方案中，包含在藥盒的第一單元形式中的組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖、組氨酸和泊洛沙姆188，具有不超過約3％的含溼量，而且組合物當溶於水時具有5.0-7.0範圍內的pH。
在一個實施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨醯甘氨酸。在一個實施方案中，因子VII多肽是人因子VIIa。
在另一個實施方案中，包含在藥盒的第一單元形式中的組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖、組氨酸、甲硫氨酸和泊洛沙姆188，具有不超過約3％的含溼量，而且組合物當溶於水時具有5.0-7.0範圍內的pH。在一個實施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨醯甘氨酸。在一個實施方案中，因子VII多肽是人因子VIIa。
在一個實施方案中，包含在藥盒的第二單元形式中的施用載體包括水和組氨酸。在一個實施方案中，載體還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨醯甘氨酸。在一個實施方案中，載體包含選自如下的一種或多種成分CaCl2，濃度為約5-15mM；NaCl，濃度為約30-60mM，諸如例如約40mM或約50mM。
在一個優選實施方案中，製備穩定因子VII多肽的方法包括凍幹。凍幹涉及一種方法，其中含有所述因子VII多肽的溶液注入冷凍乾燥管等中。所述因子VII多肽可任選的在開始凍幹前經過無菌過濾。為凍幹小管，對凍幹機的託架降溫，使溶液低於臨界產物溫度。通過導入真空除去水份，水蒸汽在凍幹機的冰冷凝器上冷凝。當產品幹時，通常少於3％的殘留含溼量(例如，通過上述Karl Fischer電量滴定測定)，封閉小管並加帽。製備完成且組合物現在呈凍幹餅的形式。
重構組合物意在用於預防和/或治療性處理的非胃腸道施用。優選的，藥物組合物通過非胃腸道，即靜脈內、皮下或肌肉內施用，或其通過例如連續或脈衝輸注的方式施用。
因此，本發明的一個方面涉及所述固體穩定的組合物用於製備治療凝固因子應答性症候群的藥物的用途。在一個實施方案中，本發明涉及因子VII多肽用於製備治療因子VII應答性症候群的藥物的用途。
在不同的實施方案中，所述因子VII應答性症候群為血友病A、血友病B、因子XI缺乏、因子VII缺乏、血小板減少、von Willebrand氏病、存在凝結因子抑制劑、手術或創傷。此外因子VII應答性症候群可與抗凝劑療法相關。
如所述，本發明的組合物為固體形式。因此，在適合的實施方案中，藥物應當適於被溶解，因此，允許非胃腸道施用所述藥物。當所述組合物施用於患者時，包括在施用步驟前溶解所述組合物於適當液體中的步驟。
此處使用的縮寫FVII凝固因子VII，以其單鏈形式FVIIa凝固因子VII，以其切割的活化的雙鏈形式rFVII(rFVIIa)重組因子VII(重組因子VIIa)實施方案在本發明的一系列實施方案中，藥盒的第一單元形式包括賦型劑，和其量，且具有如製劑1-48所示的pH(表1)
(表1，續)
(表1，續)
(表1，續)
(表1，續)
(表1，續)
(表1，續)
(表1，續)
(表1，續)
(表1，續)
(表1，續)
(表1，續)
在本發明的另一系列實施方案中，藥盒的第一單元形式包括賦形劑，和其量，且具有如製劑100-124所示的pH
(表2)
(表2，續)
(表2，續)
(表2，續)
(表2，續)
(表2，續)
在一系列實施方案中，在任一組合物1-48和100-124中FVII多肽的濃度為約0.6mg/mL-約10.0mg/mL，諸如約0.6mg/mL-約8mg/mL，約0.6mg/mL-約5mg/mL，約0.6mg/mL-約3mg/mL，約1.0mg/mL-約5mg/mL，或約1.0mg/mL-約3mg/mL。
在另一系列實施方案中，在任一組合物1-48和100-124中FVII多肽的濃度選自約0.6mg/mL，約0.7mg/mL，約0.8mg/mL，約0.9mg/mL，約1.0mg/mL，約1.1mg/mL，約1.2mg/mL，約1.3mg/mL，約1.4mg/mL，約1.5mg/mL，約1.6mg/mL，約1.7mg/mL，約1.8mg/mL，約1.9mg/mL，約2.0mg/mL，約2.1mg/mL，約2.2mg/mL，約2.3mg/mL，約2.4mg/mL，約2.5mg/mL，約2.6mg/mL，約2.7mg/mL，約2.8mg/mL，約2.9mg/mL，約3.0mg/mL，約3.1mg/mL，約3.2mg/mL，約3.3mg/mL，約3.4mg/mL，約3.5mg/mL，約3.6mg/mL，約3.7mg/mL，約3.8mg/mL，約3.9mg/mL，和約4.0mg/mL。
在一系列實施方案中，製劑1-48和100-124中聚山梨酸酯的濃度為約0.05-0.08mg/mL，諸如約0.06-0.08mg/mL，或約0.07mg/mL。
在另一系列實施方案中，第一單元形式含有在任一組合物1-48和100-124中所述的組合物，第二單元形式含有如下量的L-組氨酸約0.5mg/mL-3mg/mL，例如約1.0-約2.0mg/mL，或約1.55mg/ML。
在另一系列實施方案中，第一單元形式含有在任一組合物1-48和100-124中所述的組合物，第二單元形式含有約30-約60mM NaCl，諸如約40mM，約45mM，或約50mM NaCl。
在另一系列實施方案中，第一單元形式含有在任一組合物1-48和100-124中所述的組合物，第二單元形式含有約30-約60mM NaCl，諸如約40mM，約45mM，或約50mM NaCl，以及如下量的L-組氨酸約0.5mg/mL-3mg/mL，例如約1.0-約2.0mg/mL，或約1.55mg/ML。
本發明的另一方面，提供了一種組合物，其中包含因子VII多肽和至少一種選自下組的穩定劑
a)抗氧化劑與甘露醇的組合；b)甲硫氨酸與多元醇的組合；c)糖與甘露醇的組合；d)蔗糖與多元醇的組合；和e)甲硫氨酸；以及約0.06-0.08mg/mL量的聚山梨酸表面活性劑；所述組合物具有不超過約3％的含溼量。
在一個實施方案中，抗氧化劑與甘露醇的組合(a)還包含糖。在另一實施方案中，甲硫氨酸和多元醇的組合(b)還包含糖。在另一實施方案中，糖和甘露醇的組合(c)還包含抗氧化劑。在另一實施方案中，其中蔗糖和多元醇的組合(d)還包含抗氧化劑。
在一個有趣的實施方案中，抗氧化劑選自同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、穀胱甘肽、以及包含同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸和穀胱甘肽之任意一種的肽，或其混合物；優選甲硫氨酸，或含有甲硫氨酸的混合物。在另一有趣的實施方案中，所述糖選自蔗糖、右旋糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、環糊精、麥芽糖糊精、和葡聚糖，或其混合物；優選蔗糖，或含有蔗糖的混合物。在另一有趣的實施方案中，所述多元醇選自甘露醇、山梨醇、和木糖醇，或其混合物；優選甘露醇或含有甘露醇的混合物。
組合物可還含有一種當溶於水性溶劑中適於保持所述組合物的pH範圍為3-9的試劑。所述試劑的非限制性實例以及優選的pH範圍如上述。
組合物還可以包含張力調節劑。所述張力調節劑的非限制性實例如上述。
聚山梨酸酯表面活性劑選自聚山梨酸酯20或80，優選聚山梨酸酯80。
在發明的一個實施方案中，新組合物選自
(表3)
在發明的一個實施方案中，組合物選自(表4)
在發明的一個實施方案中，組合物選自(表5)
在一系列實施方案中，製劑I-XVI中的聚山梨酸酯濃度是約0.05-0.08mg/mL，諸如約0.06-0.08mg/mL，或約0.07mg/mL。
在一系列實施方案中，製劑I-XVI中的聚山梨酸酯是聚山梨酸酯20，例如吐溫20TM。在一系列實施方案中，製劑I-XVI中的聚山梨酸酯是聚山梨酸酯80，例如吐溫80TM。
在發明的一個實施方案中，組合物選自(表6)
(表6，續)
(表6，續)
在一系列實施方案中，製劑I-XXVIII還包含一種或多種選自如下的成分Ca2+，優選的量為約5-約15mM，諸如約10mM，和優選的為CaCl2 x2H2O；NaCl，優選的量為約50mM，或約40mM，例如39mM；組氨酸，優選的L-組氨酸，優選的量為約10mM；和甘氨醯甘氨酸，例如，量為約10mM在一系列實施方案中，組合物含有賦形劑，且其量如任一製劑I-XXVIII中所述，但是具有的pH為pH5.5，或5.6，或5.7，或5.8，或5.9，或6.1，或6.2，或6.3，或6.4，或6.5.
在一系列實施方案中，製劑I-XVI中FVII多肽的濃度為約1.0mg/mL。
在一系列實施方案中，製劑I-XXVIII中FVII多肽為野生型人因子VIIa。
在一系列實施方案中，製劑I-XXVIII中FVII多肽為FVII變異體。
在不同系列的實施方案中，製劑I-XXVIII中FVII多肽選自L305V-FVII，L305V/M306D/D309S-FVII，L305I-FVII，L305T-FVII，F374P-FVII，V158T/M298Q-FVII，V158D/E296V/M298Q-FVII，K337A-FVII，M298Q-FVII，V158D/M298Q-FVII，L305V/K337A-FVII，V158D/E296V/M298Q/L305V-FYII，V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII，K157A-FVII，E296V-FVII，E296V/M298Q-FYII，V158D/E296V-FYII，V158D/M298K-FVII和S336G-FVII；在不同系列實施方案中，任一組合物1-48和100-124中的因子VII多肽選自約0.6mg/mL-約10.0mg/mL，諸如約0.6mg/mL-約8mg/mL，約0.6mg/mL-約6mg/mL，約0.6mg/mL-約5mg/mL，約0.6mg/mL-約4mg/mL，約0.6mg/mL-約3mg/mL，約1.0mg/mL-約5mg/mL，約1.0mg/mL-約4mg/mL，約1.0mg/mL-約3mg/mL，約0.6mg/mL，約0.7mg/mL，約0.8mg/mL，約0.9mg/mL，約1.0mg/mL，約1.1mg/mL，約1.2mg/mL，約1.3mg/mL，約1.4mg/mL，約1.5mg/mL，約1.6mg/mL，約1.7mg/mL，約1.8mg/mL，約1.9mg/mL，約2.0mg/mL，約2.1mg/mL，約2.2mg/mL，約2.3mg/mL，約2.4mg/mL，約2.5mg/mL，約2.6mg/mL，約2.7mg/mL，約2.8mg/mL，約2.9mg/mL，約3.0mg/mL，約3.1mg/mL，約3.2mg/mL，約3.3mg/mL，約3.4mg/mL，約3.5mg/mL，約3.6mg/mL，約3.7mg/mL，約3.8mg/mL，約3.9mg/mL，和約4.0mg/mL.
另一方面，本發明提供了一種製備如下表3-6所定義的新組合物的方法，包括步驟i)提供溶液中的因子VII多肽，所述溶液包含至少一種選自如下的穩定劑a)抗氧化劑與甘露醇的組合；b)甲硫氨酸與多元醇的組合；c)糖與甘露醇的組合；d)蔗糖與多元醇的組合；和e)甲硫氨酸；以及ii)加工所述溶液以獲得具有含溼量不超過約3％w/w的固體組合物。
在一個實施方案中，多元醇存在的量的範圍為約0.5-約75mg/ml，優選約2-45mg/ml，諸如約5mg/ml-45mg/ml，約5-35mg/ml，約5-25mg/ml，5-20mg/ml，20-40mg/ml，或約20-約30mg/ml，在一個實施方案中，糖存在的量的範圍為約0.5-75mg/ml，優選約2-45mg/ml，諸如約5mg/ml-45mg/ml，約5-35mg/ml，約5-25mg/ml，或約5-20mg/ml。
在一個實施方案中，抗氧化劑存在的量的範圍為約0.05-10mg/ml，優選約0.1-5mg/ml，更優選約0.1mg/ml-2.5mg/ml，甚至更優選約0.1-2mg/ml，最優選約0.1-1mg/ml。
在一個實施方案中，糖為蔗糖。在一個實施方案中，抗氧化劑為甲硫氨酸。在一個實施方案中，多元醇為甘露醇。在一個實施方案中，加工包括凍幹。
本發明的新組合物用可接受的，優選地無菌的稀釋劑或載體優選為水性載體重構。水性載體的非限制性實例包括注射用水(WFI)以及本說明書(上述)中所述的溶劑，其含有至少一種選自如下的成分(i)當溶於水性溶劑時適於保持所述組合物的pH在3-9之間的試劑，其中所述試劑以約0.1mM-100mM的量存在，和(ii)以足以使重構的溶液基本上等滲的量存在的張力調節劑。在一個實施方案中，所述載體是WFI；在另一實施方案中，所述溶劑包含組氨酸。
發明的實施方案實施方案1一種含有藥物的藥盒，所述藥盒包含a)在第一單元形式中，含有多肽和至少一種穩定劑的組合物，其中所述組合物具有不超過約3％的含溼量，以及用於容納所述第一單元的容器裝置；和，b)在第二單元形式中，含有用於重構(溶解)所述組合物的溶劑和至少一種選自如下的成分之施用載體(iii)當溶於水性溶劑時適於保持所述組合物的pH範圍在3-9的試劑，其中所述試劑以約0.1mM-100mM的量存在，
(iv)以足以使得自溶解第一單元形式的組合物於第二單元形式之施用載體的溶液基本上等滲的量的張力調節劑；和用於容納所述第二單元形式的容器裝置。
實施方案2根據實施方案1的藥盒，其中所述第一單元形式含有至少一種選自表面活性劑、抗氧化劑、糖和多元醇的成分。
實施方案3根據實施方案2或實施方案2的藥盒，其中所述第二單元形式還含有至少一種選自表面活性劑、抗氧化劑、糖和多元醇的成分。
實施方案4根據實施方案1-3中任一項的藥盒，其中所述多肽為凝血因子，諸如因子VIII，因子IX，因子X，因子II，因子V，因子VII。
實施方案5根據實施方案1-3中任一項的藥盒，其中所述多肽為維生素K依賴性多肽，諸如因子VII，因子IX，因子X，因子II，蛋白C，蛋白S，促凝血酶。
實施方案6根據實施方案4或5的藥盒，其中凝固因子多肽選自人因子VIII，人因子VIIa，因子VII-相關多肽，人因子IX，人因子X，活化的人蛋白C。
實施方案7根據實施方案6的藥盒，其中FVII相關多肽是選自如下的因子VII變異體L305V-FVII，L305V/M306D/D309S-FVII，L305I-FVII，L305T-FVII，F374P-FVII，V158T/M298Q-FVII，V158D/E296V/M298Q-FVII，K337A-FVII，M298Q-FVII，V158D/M298Q-FVII，L305V/K337A-FVII，V158D/E296V/M298Q/L305V-FVII，V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII，K157A-FVII，E296V-FVII，E296V/M298Q-FVII，V158D/E296V-FVII，V158D/M298K-FVII，和S336G-FVII。
實施方案8根據實施方案6的藥盒，其中FVII相關多肽是因子VII變異體，其中所述因子VII變異體與人因子VIIa(野生型因子VII)的活性之比至少為1.25(當於如本發明所述的一種或多種「體外蛋白水解測定法″和″體外水解測定法″測定)。
實施方案9根據實施方案1-8中任一項的藥盒，所述″當溶於水性溶劑時適於保持所述組合物的pH範圍在3-9的試劑″存在的量為約0.1mM-約50mM；諸如約0.1mM-約40mM；約0.1mM-約35mM；約0.1mM-約30mM；約0.5mM-約25mM；約1mM-約20mM；約1mM-約15mM；約5mM-約20mM；或約5mM-約15mM。
實施方案10根據實施方案1-9中任一項的藥盒，其中所述″當溶於水性溶劑時適於保持所述組合物的pH範圍在3-9的試劑″選自檸檬酸、醋酸、組氨酸、蘋果酸、磷酸、酒石酸、琥珀酸、MES、HEPES、咪唑、TRIS、乳酸、穀氨酸、PIPES和甘氨醯甘氨酸或至少兩種所列試劑的混合物，其中所述混合物能夠提供所示範圍內的pH值。
實施方案11根據實施方案1-10中任一項的藥盒，其中所述第二單元形式包含試劑，當溶於水性溶劑時其適於保持所述組合物的pH範圍在4-7；優選的範圍在4.5-7.5，諸如5-7，或5.5-6.5。
實施方案12根據實施方案1-11中任一項的藥盒，其中所述第二單元形式包含組氨酸。
實施方案13根據實施方案1-12中任一項的藥盒，其中所述″張力調節劑″選自醋酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、甘露醇、甘油、丙二醇或至少兩種所列調節劑的混合物；優選的選自氯化鈉、氯化鎂、甘露醇、甘油、丙二醇、氯化鈣或其混合物。
實施方案14根據實施方案13的藥盒，其中所述″張力調節劑″包含Ca2+或Mg2+。
實施方案15根據實施方案1-14中任一項的藥盒，其中所述第一和第二單元形式之一或二者還含有防腐劑。
實施方案16根據前述任一實施方案的藥盒，其中所述第一單元形式含有至少一種選自下組的穩定劑a)抗氧化劑與甘露醇的組合；b)甲硫氨酸與多元醇的組合；c)糖與甘露醇的組合；
d)蔗糖與多元醇的組合；和e)甲硫氨酸；和f)表面活性劑；所述組合物具有不超過約3％的含溼量。
實施方案17根據實施方案16的藥盒，其中其中抗氧化劑與甘露醇的組合還包含糖。
實施方案18根據實施方案16的藥盒，其中甲硫氨酸與多元醇的組合還包含糖。
實施方案19根據實施方案16的藥盒，其中糖與甘露醇的組合還包含抗氧化劑。
實施方案20根據實施方案16的藥盒，其中蔗糖與多元醇的組合還包含抗氧化劑。
實施方案21根據實施方案16或17任一項的藥盒，其中抗氧化劑與甘露醇的組合(a)還包含表面活性劑。
實施方案22根據實施方案16或18任一項的藥盒，其中甲硫氨酸和多元醇的組合(b)還包含表面活性劑。
實施方案23根據實施方案16或19任一項的藥盒，其中糖和甘露醇的組合(c)還包含表面活性劑。
實施方案24根據實施方案16或20任一項的藥盒，其中蔗糖和多元醇的組合(d)還包含表面活性劑。
實施方案25根據實施方案16的藥盒，其中所述穩定劑是表面活性劑和甲硫氨酸的組合(e)。
實施方案26根據前述任一實施方案的藥盒，其中抗氧化劑選自同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、穀胱甘肽、以及包含同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸和穀胱甘肽之任意一種的肽。
實施方案27根據前述任一實施方案的藥盒，其中糖選自蔗糖、右旋糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、環糊精、麥芽糖糊精和葡聚糖。
實施方案28根據前述任一實施方案的藥盒，其中多元醇選自甘露醇、山梨醇和木糖醇。
實施方案29根據前述任一實施方案的藥盒，其中所述第一單元形式的組合物是穩定的，從而在將該組合物於30℃貯藏8個月後不超過初始含量約5％w/w、優選不超過約4.0％w/w、3.0％w/w、2.5％w/w、2.0％w/w、1.5％w/w、或不超過約1.0％w/w的因子VII多肽轉變成聚集體。
實施方案30根據前述任一實施方案的藥盒，其中所述第一單元形式的組合物是穩定的，從而在將該組合物於30℃貯藏8個月後不超過初始含量約6％w/w，優選不超過約5％w/w、4.0％w/w、3.0％w/w、2.5％w/w、2.0％w/w、或不超過約1.5％w/w的因子VII多肽轉變成氧化的形式。
實施方案31根據前述任一實施方案的藥盒，其中所述多元醇的量的範圍為約5％w/w-90％w/w，優選約18％w/w-88％w/w，18％-83％，25％-80％，40％-80％，50％-80％，或約50％w/w-70％w/w。
實施方案32根據前述任一實施方案的藥盒，其中所述糖的量的範圍為約0-85％w/w，優選約3％w/w-80％w/w，7％-75％，10％-70％，10％-50％，10％-40％，或約10％w/w-35％w/w。
實施方案33根據前述任一實施方案的藥盒，其中所述多元醇與所述糖的重量比的範圍是約100∶1-1∶50，優選約50∶1-1∶10；20∶1-1∶5；10∶1-1∶2；6∶1-1∶2；4∶1-1∶1；或約4∶1-3∶2。
實施方案34根據前述任一實施方案的藥盒，其中第一單元形式還包含張力調節劑。
實施方案35根據前述任一實施方案的藥盒，其中表面活性劑選自聚山梨酸酯，諸如聚山梨酸酯20或80；聚氧乙烯烷基醚，諸如Brij35_；或泊洛沙姆，諸如泊洛沙姆188或407；以及其它乙烯/聚丙烯嵌段聚合物或聚乙二醇(PEG)，諸如PEG 8000。
實施方案36根據前述任一實施方案的藥盒，其中所述糖為蔗糖。
實施方案37根據前述任一實施方案的藥盒，其中所述多元醇為甘露醇。
實施方案38根據前述任一實施方案的藥盒，其中因子VII多肽存在的濃度為約0.6mg/ml-約10.0mg/ml，諸如約0.6mg/ml-約6mg/ml，約0.6mg/ml-約5mg/ml，或約0.6mg/ml-約4mg/ml。
實施方案39根據前述任一實施方案的藥盒，其中所述含溼量不超過約2.5％w/w，優選不超過約2％w/w，最優選不超過約1.5％w/w。
實施方案40根據前述任一實施方案的藥盒，其中所述第一單元形式為凍幹餅。
實施方案41根據前述任一實施方案的藥盒，其中所述第一單元形式包含因子VII多肽，甘露醇，蔗糖，和選自如下的表面活性劑聚山梨酸酯或泊洛沙姆，諸如吐溫80_或泊洛沙姆188_。
實施方案42根據實施方案41的藥盒，其還含有甲硫氨酸。
實施方案43根據實施方案41或42的藥盒，其中所述第二單元形式含有L-組氨酸，其量為約0.1mM-約50mM；諸如約0.1mM-約40mM；約0.1mM-約35mM；約0.1mM-約30mM；約0.5mM-約25mM；約1mM-約20mM；約1mM-約15mM；約5mM-約20mM；或約5mM-約15mM。
實施方案44根據實施方案41-43任一項的藥盒，所述第二單元形式含有一種或多種選自如下的成分CaCl2，NaCl，和甘氨醯甘氨酸。
實施方案45一種製備多肽的液體製劑的方法，所述方法包括步驟a)提供實施方案1-44中任一項所述的第一單元形式和第二單元形式；b)將所述第一和第二單元形式混合以提供施用載體中的溶解的組合物液體溶液。
實施方案46一種治療凝固因子應答性症候群的方法，包括向需要的受試者施用有效量的根據實施方案45的方法製備的所述凝固因子之液體製劑。
實施方案47根據實施方案46的方法，其中所述凝固因子應答性症候群是血友病，且所述凝固因子是因子VIII或因子IX；或者所述症候群為膿毒症，且所述凝固因子是蛋白C或活化的蛋白C。
實施方案48根據實施方案46用於治療FVII應答性症候群的方法，包括向需要的受試者施用有效量的由實施方案45方法製備的所述生物試劑的液體製劑。
實施方案49根據實施方案48的方法，所述症候群選自血友病A、獲得性或先天性血友病B、因子XI缺乏、因子VII缺乏、血小板減少、von Willebrand氏病、存在凝結因子抑制劑、手術、創傷、稀釋性凝血症和抗凝劑療法。
實施方案50因子VII多肽用於製備呈實施方案1-44中任一項定義的藥盒形式的藥物的用途，用於治療因子VII應答性症候群。
實施方案51一種組合物，其包含因子VII多肽和至少一種選自下組的穩定劑a)抗氧化劑與甘露醇的組合；b)甲硫氨酸與多元醇的組合；c)糖與甘露醇的組合；d)蔗糖與多元醇的組合；和e)甲硫氨酸；以及約0.06-0.08mg/mL量的聚山梨酸表面活性劑；所述組合物具有不超過約3％的含溼量。
實施方案52根據實施方案51的組合物，其中抗氧化劑與甘露醇的組合還包含糖。
實施方案53根據實施方案51的組合物，其中甲硫氨酸與多元醇的組合還包含糖。
實施方案54根據實施方案51的組合物，其中糖與甘露醇的組合還包含抗氧化劑。
實施方案55根據實施方案51的組合物，其中蔗糖與多元醇的組合還包含抗氧化劑。
實施方案56根據前述實施方案51-55中任一項的組合物，其中抗氧化劑選自同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、穀胱甘肽、以及包含同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、和穀胱甘肽之任意一種的肽實施方案57根據前述實施方案51-56中任一項的組合物，其中糖選自蔗糖、右旋糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、環糊精、麥芽糖糊精、和葡聚糖。
實施方案58根據前述實施方案51-57中任一項的組合物，其中多元醇選自甘露醇、山梨醇、和木糖醇。
實施方案59根據前述實施方案51-58中任一項的組合物，其中所述組合物是穩定的，從而在將該組合物於30℃貯藏8個月後不超過初始含量約5％w/w、優選不超過約4.0％w/w、3.0％w/w、2.5％w/w、2.0％w/w、1.5％w/w、或不超過約1.0％w/w的因子VII多肽轉變成聚集體。
實施方案60根據前述實施方案51-59中任一項的組合物，其中所述組合物是穩定的，從而在將該組合物於30℃貯藏8個月後不超過初始含量約6％w/w、優選不超過約5％w/w、4.0％w/w、3.0％w/w、2.5％w/w、2.0％w/w、或不超過約1.5％w/w的因子VII多肽轉變成氧化的形式。
實施方案61根據前述實施方案51-60中任一項的組合物，其中所述多元醇的量的範圍為約5％w/w-90％w/w，優選約18％w/w-88％w/w，18％-83％，25％-80％，40％-80％，50％-80％，或約50％w/w-70％w/w。
實施方案62根據前述實施方案51-61中任一項的組合物，其中所述糖的量的範圍為約0-85％w/w，優選約3％w/w-80％w/w，7％-75％，10％-70％，10％-50％，10％-40％，或約10％w/w-35％w/w。
實施方案63根據前述實施方案51-62中任一項的組合物，其中所述多元醇與所述糖的重量比為約100∶1-1∶50，優選約50∶1-1∶10；20∶1-1∶5；10∶1-1∶2；6∶1-1∶2；4∶1-1∶1；或約4∶1-3∶2。
實施方案64根據前述實施方案51-63中任一項的組合物，其中還包含試劑，當溶於水性溶劑時其適於保持所述組合物的pH在3-9之間；優選的pH範圍為4-7，更優選的範圍為4.5-6.5，甚至更優選的範圍為5.5-6.5。
實施方案65根據實施方案64的組合物，其中所述試劑選自檸檬酸、醋酸、組氨酸、蘋果酸、磷酸、酒石酸、琥珀酸、MES、HEPES、咪唑、TRIS、乳酸、穀氨酸、PIPES和甘氨醯甘氨酸或至少兩種所列試劑的混合物，其中所述混合物能夠提供所示範圍內的pH值。
實施方案66根據前述實施方案51-65中任一項的組合物，其中還包含張力調節劑。
實施方案67根據實施方案66的組合物，其中所述張力調節劑選自醋酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、甘露醇、甘油和丙二醇實施方案68根據前述實施方案51-67中任一項的組合物，其中所述表面活性劑選自聚山梨酸酯20或80，優選聚山梨酸酯80。
實施方案69根據前述實施方案51-68中任一項的組合物，其中所述糖是蔗糖。
實施方案70根據前述實施方案51-69中任一項的組合物，其中所述多元醇是甘露醇。
實施方案71根據前述實施方案51-70中任一項的組合物，其中所述因子VII多肽選自人因子VIIa，重組人因子VIIa和因子VII序列變異體。
實施方案72根據實施方案71的組合物，其中所述因子VII多肽是人因子VIIa或重組人因子VIIa。
實施方案73根據前述實施方案51-72中任一項的組合物，其中所述因子VII多肽是因子VII相關多肽，其中所述因子VII相關多肽與野生型因子VII的活性之比至少為1.25，當於如本發明所述的一種或多種「體外蛋白水解測定法″和″體外水解測定法″測定。
實施方案74根據前述實施方案51-73中任一項的組合物，其中因子VII多肽存在的濃度為約0.6mg/ml-約10.0mg/ml，諸如約0.6mg/ml-約6mg/ml，約0.6mg/ml-約5mg/ml，或約0.6mg/ml-約4mg/ml。
實施方案75根據前述實施方案51-74中任一項的組合物，其中所述含溼量不超過約2.5％w/w，優選不超過約2％w/w，最優選不超過約1.5％w/w。
實施方案76根據前述實施方案51-75中任一項的組合物，其中，組合物是凍幹餅。
實施方案77根據前述實施方案中任一項的組合物，所述組合物包含因子VII多肽，甘露醇，蔗糖，和泊洛沙姆80，諸如吐溫80_。
實施方案78根據實施方案77的組合物，其還包含甲硫氨酸。
實施方案79根據前述實施方案77-78中任一項的組合物，其還含有L-組氨酸。
實施方案80根據前述實施方案77-79中任一項的組合物，其中還含有一種或多種選自如下的成分CaCl2，NaCl，和甘氨醯甘氨酸。
實施方案81根據前述實施方案51-80中任一項的組合物，選自
實施方案82根據實施方案81的組合物，選自
實施方案83根據前述實施方案81或82中任一項的組合物，其含有聚山梨酸酯80，量為0.07mg/mL。
實施方案84根據前述實施方案81-83中任一項的組合物，其含有FVIIa多肽，量為1.0mg/mL。
實施方案85根據前述實施方案81-84中任一項的組合物，其還含有至少一種選自如下的組分Ca2+，量為約10mM，優選為CaCl2 x2H2O；NaCl，量為約50mM或約40mM，例如39mM；組氨酸，優選L-組氨酸，量為約10mM。
實施方案86根據前述實施方案81-85中任一項的組合物，其具有的pH為5.5，或5.6，或5.7，或5.8，或5.9，或6.0，或6.1，或6.2，或6.3，或6.4，或6.5。
實施方案87一種製備如實施方案51-86中所定義的組合物的方法，包括步驟i)提供溶液中的因子VII多肽，所述溶液包含至少一種選自如下的穩定劑a)抗氧化劑與甘露醇的組合；b)甲硫氨酸與多元醇的組合；c)糖與甘露醇的組合；d)蔗糖與多元醇的組合；e)甲硫氨酸；以及聚山梨酸酯表面活性劑，量為約0.06-0.08mg/mLii)加工所述溶液以獲得具有含溼量不超過約3％w/w的固體組合物。
實施方案88根據實施方案87的方法，其中所述抗氧化劑選自同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、穀胱甘肽、以及包含同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸和穀胱甘肽之任意一種的肽。
實施方案89根據實施方案87的方法，其中所述糖選自蔗糖、右旋糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、環糊精、麥芽糖糊精和葡聚糖。
實施方案90根據實施方案87的方法，其中所述多元醇選自甘露醇、山梨醇和木糖醇。
實施方案91根據實施方案87的方法，其中所述多元醇存在的量為約0.5-約75mg/ml，優選約2-45mg/ml，諸如約5mg/ml-45mg/ml，約5-35mg/ml，約5-25mg/ml，5-20mg/ml，20-40mg/ml，或約20-約30mg/ml。
實施方案92根據實施方案87的方法，其中所述糖存在的量範圍為約0.5-75mg/ml，優選約2-45mg/ml，諸如約5mg/ml-45mg/ml，約5-35mg/ml，約5-25mg/ml，或約5-20mg/ml。
實施方案93根據實施方案87的方法，其中所述抗氧化劑的量範圍為約0.05-10mg/ml，優選約0.1-5mg/ml，更優選約0.1mg/ml-2.5mg/ml，甚至更優選約0.1-2mg/ml，最優選約0.1-1mg/ml。
實施方案94根據實施方案87的方法，其中所述，其中所述糖為蔗糖。
實施方案95根據實施方案87的方法，其中所述抗氧化劑為甲硫氨酸。
實施方案96根據實施方案87的方法，其中所述多元醇為甘露醇。
實施方案97根據實施方案87的方法，其中所述加工包括凍幹。
實施方案98一種治療FVII應答性症候群的方法，包括向需要的受試者施用有效量的根據實施方案51-86中任一項所定義的組合物實施方案99根據實施方案98的方法，其中所述症候群選自血友病A、獲得性或先天性血友病B、因子XI缺乏、因子VII缺乏、血小板減少、von Willebrand氏病、存在凝結因子抑制劑、手術、創傷、稀釋性凝血症和抗凝劑療法。
實施方案100因子VII多肽用於製備治療因子VII應答性症候群的藥物的用途，所述藥物含有實施方案51-86中任一項所定義的組合物。
實施方案101根據實施方案100的用途，其中所述症候群選自血友病A、獲得性或先天性血友病B、因子XI缺乏、因子VII缺乏、血小板減少、von Willebrand氏病、存在凝結因子抑制劑、手術、創傷、稀釋性凝血症和抗凝劑療法。
下述實施例以示例方式提供，而不意在限制實施例一般方法實施例1用於測定穩定性指示參數的分析方法A.通過反相HPLC(RP-HPLC)測定氧化形式HPLC柱用粒度5μm且孔徑300_的丁基鍵合矽石填充4.5×250mm柱。柱溫70℃。洗脫液A水99.9％v/v和三氟乙酸0.1％v/v。洗脫液B乙腈80％v/v、三氟乙酸0.09％v/v和水19.91％v/v。用30分鐘X％B-(X+13)％B的線性梯度對柱進行洗脫。流速1.0ml/min。檢測214nm。
氧化形式是因子VII多肽的甲硫氨酸亞碸。例如，FVII的兩種主要衍生物是Met(O)298FVII和Met(O)306FVII。
氧化形式的含量表述成配製後組合物中以氧化形式回收的因子VII佔因子VII初始量的百分比。
B.通過高效凝膠滲透層析(GP-HPLC)測定因子VII多肽的聚集體在7.5×300mm的Waters多肽Pak 300 SW柱上進行GP-HPLC，使用含5％異丙醇的0.2M硫酸銨pH7.0作為流動相。流速0.5ml/min。檢測215nm。
聚集體的含量表述成配製後組合物中以二聚體、寡聚物和多聚物形式回收的因子VII佔因子VII初始量的百分比。
實施例2測試因子VII多肽的生物學活性的測定法因子VIIa活性的測試可以通過簡單的初步體外測試(″體外水解測定法″)來測試因子VIIa活性從而選擇合適因子VIIa變體的合適測定法。
體外水解測定法可以測定天然(野生型)因子VIIa和因子VIIa變體(二者在下文中都稱為″因子VIIa″)的比活。可以進行平行測定，從而直接比較它們的比活。該測定法是在微量滴定板(MaxiSorp，Nunc，丹麥)中進行的。向因子VIIa(終濃度100nM，溶於含有0.1M NaCl、5mMCaCl2、和1mg/ml牛血清清蛋白的50mM Hepes pH7.4)中加入呈色底物D-Ile-Pro-Arg-對硝基苯胺(S-2288，Chromogenix，瑞典)至終濃度1mM。在SpectraMaxTM340讀板儀(Molecular Devices，美國)中連續測量405nm的吸光率。將保溫20分鐘期間形成的吸光率減去不含酶的空白孔的吸光率，用於計算變體與野生型因子VIIa的活性之間的比率比率＝(因子VIIa變異體的405nm吸光率)/(野生型因子VIIa的405nm吸光率)。
據此，可鑑定出與天然因子VIIa相比活性相當或更高的因子VIIa變異體，諸如例如變異體的活性與天然因子VII(野生型因子FVII)的活性之間的比率接近或超過1.0的變異體。
還可以使用生理學底物來測量因子VIIa或因子VIIa變異體的活性，諸如因子X，合適的濃度是100-1000nM，其中在加入合適呈色底物(如S-2765)後測量所生成的因子Xa(″體外蛋白水解測定法″)。另外，活性測定法可以在生理溫度進行。
體外蛋白水解測定法平行測定天然(野生型)因子VIIa和因子VIIa變異體(二者在下文中都稱為″因子VIIa″)，從而直接比較它們的比活。該測定法是在微量滴定板(MaxiSrp，Nunc，丹麥)中進行的。將因子VIIa(10nM)和因子X(0.8μM)(溶於100μl含0.1M NaCl、5mM CaCl2、和1mg/ml牛血清清蛋白的50mM Hepes pH7.4)保溫15分鐘。然後加入50μl含有0.1M NaCl、20mM EDTA、和1mg/ml牛血清清蛋白的50mMHepes pH7.4終止對因子X的切割。加入呈色底物Z-D-Arg-Gly-Arg-對硝基苯胺(S-2765，Chromogenix，瑞典)至終濃度0.5mM，測量所生成的因子Xa的量。在SpectraMaxTM340讀板儀(MolecularDevices，美國)中連續測量405nm的吸光率。將10分鐘內形成的吸光率減去不含FVIIa的空白孔的吸光率，用於計算變異體與野生型因子VIIa的蛋白水解活性之間的比率比率＝(因子VIIa變異體的405nm吸光率)/(野生型因子VIIa的405nm吸光率)。
據此，可鑑定出與天然因子VIIa相比活性相當或更高的因子VIIa變異體，諸如例如變異體的活性與天然因子VII(野生型因子FVII)的活性之間的比率接近或超過1.0的變異體。
凝血酶生成測定法可以在包含生理濃度的所有相關凝集因子和抑制劑以及活化血小板的測定法中測量因子VII或因子VII相關多肽或者因子VIII或因子VIII相關多肽(如變異體)生成凝血酶的能力，如Monroe等人，Brit.J.Haematol.，99542-547，1997的第543頁所述(收入本文作為參考)。
凝結測定法還可以使用一步凝結測定法(測定法4)來測量因子VII多肽的活性，該方法基本上如WO 92/15686或US 5,997,864中所述進行。簡而言之，將待測樣品在50mM Tris(pH 7.5)、0.1％BSA中稀釋，並取100μl與100μl缺乏因子VII的血漿和200μl含10mM Ca2+的促凝血酶原激酶C一起保溫。測量凝結時間，並與使用連續稀釋的參考標準或含檸檬酸鹽的正常人血漿合併液獲得的標準曲線進行比較。
工作實施例實施例3分別帶有和不帶有組氨酸的rFVIIa組合物的穩定性數據可見，不存在組氨酸的凍幹有利，因為形成較少的二聚體/寡聚物。
組合物
對於組合物A1，C1，E1，G1，I1，和K1的重構，使用1.55mg/mL組氨酸溶劑；對於組合物B1，D1，F1，H1，J1，和L1，使用注射用水(WFI)。
實施例4分別帶有和不帶有組氨酸、和/或甘氨醯甘氨酸、和/或NaCl凍幹的rFVIIa組合物的穩定性數據可見，不存在NaCl時凍幹是有利的，因為會降低餅崩塌的風險。
為了重構，使用1.55mg/mL組氨酸溶劑(對於組合物A2，I2和Q2)；對於組合物B2，J2和R2，使用注射用水(WFI)。
為了重構，使用1.55mg/mL組氨酸溶劑(對於組合物C2，K2，和S2)；對於組合物D2，L2和T2，使用注射用水(WFI)。
為了重構，使用1.55mg/mL組氨酸溶劑加NaCl 2.92mg/mL(對於組合物E2，M2和U2)；對於組合物F2，N2和V2，使用生理鹽水2.92mg/mL。
為了重構，使用1.55mg/mL組氨酸溶劑加NaCl 2.92mg/mL(對於組合物G2，O2和X2)；對於組合物H2，P2和Y2，使用生理鹽水2.92mg/mL。
實施例5組合物的製備通常，組合物從純化的大體積溶劑中製備。加入賦形劑，將溶劑稀釋至期望的rFVIIa濃度。所得溶液利用無菌的膜過濾器無菌過濾(0.2微米孔徑或等價物)，填充入無菌玻璃小管將小管凍幹，用橡膠帽封閉，用鋁箔型帽密封。
實施例6比較在凍幹前添加或不添加L-組氨酸製劑中形成的可溶性聚集體的含量製備如下製劑(所有濃度示為mg/ml)
如實施例5所述製備製劑，利用填充體積5.3ml。凍幹後，二聚體、寡聚物和多聚物形式的含量如實施例3所述用GP-HPLC測量。結果如下
結果顯示，凍幹後，不加入L-組氨酸的製劑1和2具有較低的二聚體和寡聚物形式的含量，與含有L-組氨酸的相應製劑3和4相比。
實施例7凍幹的rFVIIa製劑之穩定性製劑含有rFVIIa1.0mg/mlNaCl 2.34mg/mlCaCl2， 2H2O 1.47mg/ml甘氨醯甘氨酸 1.32mg/ml聚山梨酸酯80 0.07mg/mlL-甲硫氨酸0.5mg/ml甘露醇25mg/ml蔗糖 10mg/mlpH6.0利用1.1ml的填充體積通過如實施例5所述製備。
製劑置於25℃和40℃的暗處。根據下表收集樣品。凍乾產品於10mM L-組氨酸溶劑中重構後，如實施例3測定二聚體/寡聚物/聚合物以及氧化形式，而活性通過如實施例4所述一步凝結測定法確定。
n.d.未測定實施例8在因素設計研究中研究了氯化鈉對凍幹餅的可見外觀的影響，可變的參數中有氯化鈉的含量。包括在研究中的四種製劑的結果示於下表中。
所有製劑還含有rFVIIa 1.0mg/mL氯化鈣 1.47mg/mL甘氨醯甘氨酸 1.32mg/mL聚山梨酸酯80 0.1mg/mL甘露醇 40mg/mL蔗糖 10mg/mL此外，製劑1和2含有0.5mg/mL甲硫氨酸。
pH調整為6.0(製劑1和4)
5.0(製劑2和3)實施例9FVII多肽組合物的穩定性數據可見，在25℃貯藏6個月後所述組合物就形成二聚體/寡聚物而言是穩定的。
組合物
對於組合物A-9至H-9的重構，要使用注射用水(WFI)。
對於組合物B-9，D-9，F-9和H-9的重構，也可使用1.55mg/mL組氨酸溶劑。
也製備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9至H-9，但是具有pH4.5。此外，也製備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9至H-9，但是具有pH5.5。
對於組合物A-9-1至H-9-1的重構，要使用注射用水(WFI)。
對於組合物B-9-1，D-9-1，F-9-1和H-9-1的重構，也可使用1.55mg/mL組氨酸溶劑。
也製備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9-1至H-9-1，但是具有pH4.5。此外，也製備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9-1至H-9-1，但是具有pH5.5。
對於組合物A-9-2至H-9-2的重構，要使用注射用水(WFI)。
對於組合物B-9-2，D-9-2，F-9-2和H-9-2的重構，也可使用1.55mg/mL組氨酸溶劑。
也製備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9-2至H-9-2，但是具有pH4.5。此外，也製備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9-2至H-9-2，但是具有pH5.5。
對於組合物A-9-3至H-9-3的重構，要使用注射用水(WFI)。
對於組合物B-9-3，D-9-3，F-9-3和H-9-3的重構，也可使用1.55mg/mL組氨酸溶劑。
也製備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9-3至H-9-3，但是具有pH 4.5。此外，也製備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9-3至H-9-3，但是具有pH 5.5。
對於組合物A-9-4至H-9-4的重構，要使用注射用水(WFI)。
對於組合物B-9-4，D-9-4，F-9-4和H-9-4的重構，也可使用1.55mg/mL組氨酸溶劑。
也製備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9-4至H-9-4，但是具有pH4.5。此外，也製備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9-4至H-9-4，但是具有pH5.5。
對於組合物A-9-5至H-9-5的重構，要使用注射用水(WFI)。
對於組合物B-9-5，D-9-5，F-9-5和H-9-5的重構，也可使用1.55mg/mL組氨酸溶劑。
也製備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9-5至H-9-5，但是具有pH4.5。此外，也製備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9-5至H-9-5，但是具有pH5.5。
權利要求
1.一種含有藥物的藥盒，所述藥盒包含a)在第一單元形式中，含有凝血因子多肽和至少一種選自如下的穩定劑的組合物表面活性劑、抗氧化劑、糖和多元醇，其中所述組合物具有不超過約3％的含溼量，以及用於容納所述第一單元形式的容器裝置；和，b)在第二單元形式中，含有用於重構(溶解)所述組合物的溶劑和至少一種選自如下的成分之施用載體(v)當溶於水性溶劑時適於保持所述組合物的pH範圍在3-9的試劑，其中所述試劑以約0.1mM-100mM的量存在，(vi)足以使得自溶解第一單元形式的組合物於第二單元形式之施用載體所產生的重構溶液基本上等滲的量的張力調節劑；和用於含有所述第二單元形式的容器裝置。
2.權利要求1的藥盒，其中所述第二單元形式還含有至少一種選自表面活性劑、抗氧化劑、糖和多元醇的成分。
3.權利要求1或2的藥盒，其中所述多肽選自人因子VIII，人因子VIIa，人因子IX，人因子X，活化的人蛋白C，或因子VII序列變異體。
4.權利要求1-3中任一項的藥盒，其中所述「當溶於水性溶劑時適於保持所述組合物的pH範圍在3-9的試劑″存在的量為約0.1mM-約50mM；諸如約0.1mM-約40mM；約0.1mM-約35mM；約0.1mM-約30mM；約0.5mM-約25mM；約1mM-約20mM；約1mM-約15mM；約5mM-約20mM；或約5mM-約15mM。
5.權利要求1-4中任一項的藥盒，其中所述″當溶於水性溶劑時適於保持所述組合物的pH範圍在3-9的試劑″選自檸檬酸、醋酸、組氨酸、蘋果酸、磷酸、酒石酸、琥珀酸、MES、HEPES、咪唑、TRIS、乳酸、穀氨酸、PIPES和甘氨醯甘氨酸，或至少兩種所列試劑的混合物，其中所述混合物能夠提供所示範圍內的pH值。
6.權利要求1-5中任一項的藥盒，其中所述第二單元形式包含一種試劑，當溶於水性溶劑時其適於保持所述組合物的pH範圍在4-7；優選的在4.5-7.5，諸如5-7，或5.5-6.5。
7.權利要求1-6中任一項的藥盒，其中所述第二單元形式包含組氨酸，優選的量為約0.1mM-約50mM；諸如約0.1mM-約40mM；約0.1mM-約35mM；約0.1mM-約30mM；約0.5mM-約25mM；約1mM-約20mM；約1mM-約15mM；約5mM-約20mM；或約5mM-約15mM。
8.權利要求1-7中任一項的藥盒，其中所述″張力調節劑″選自醋酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、甘露醇、甘油、丙二醇，或至少兩種所列調節劑的混合物；優選地選自氯化鈉、氯化鎂、甘露醇、甘油、丙二醇、氯化鈣或其混合物。
9.前述任一項權利要求的藥盒，其中所述第一單元形式含有至少一種選自下組的穩定劑a)抗氧化劑與甘露醇的組合；b)甲硫氨酸與多元醇的組合；c)糖與甘露醇的組合；d)蔗糖與多元醇的組合；e)甲硫氨酸；f)表面活性劑；所述組合物具有不超過約3％的含溼量。
10.權利要求9的藥盒，其中抗氧化劑與甘露醇的組合(a)還包含糖。
11.權利要求9的藥盒，其中甲硫氨酸與多元醇的組合(b)還包含糖。
12.權利要求9的藥盒，其中糖與甘露醇的組合(c)還包含抗氧化劑。
13.權利要求9的藥盒，其中蔗糖與多元醇的組合(d)還包含抗氧化劑。
14.權利要求9-13中任一項的藥盒，其還含有表面活性劑。
15.前述權利要求中任一項的藥盒，其中抗氧化劑選自同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、穀胱甘肽、以及包含同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸和穀胱甘肽之任意一種的肽；優選甲硫氛酸。
16.前述權利要求中任一項的藥盒，其中糖選自蔗糖、右旋糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、環糊精、麥芽糖糊精和葡聚糖；優選蔗糖。
17.前述權利要求中任一項的藥盒，其中多元醇選自甘露醇、山梨醇和木糖醇；優選甘露醇。
18.前述權利要求中任一項的藥盒，其中所述第一單元形式的組合物是穩定的，從而在將該組合物於30℃貯藏8個月後，不超過初始含量約5％w/w、優選不超過約4.0％w/w、3.0％w/w、2.5％w/w、2.0％w/w、1.5％w/w、或不超過約1.0％w/w的因子VII多肽轉變成聚集體。
19.前述權利要求中任一項的藥盒，其中所述第一單元形式的組合物是穩定的，從而在將該組合物於30℃貯藏8個月後，不超過初始含量約6％w/w，優選不超過約5％w/w、4.0％w/w、3.0％w/w、2.5％w/w、2.0％w/w、或不超過約1.5％w/w的因子VII多肽轉變成氧化的形式。
20.前述權利要求中任一項的藥盒，其中所述多元醇的存在量範圍是約5％w/w-90％w/w，優選約18％w/w-88％w/w、18％-83％、25％-80％、40％-80％、50％-80％或約50％w/w-70％w/w。
21.前述權利要求中任一項的藥盒，其中所述糖的存在量範圍是約0％w/w-85％w/w、優選約3％w/w-80％w/w、7％-75％、10％-70％、10％-50％、10％-40％、或約10％w/w-35％w/w。
22.前述權利要求中任一項的藥盒，其中所述多元醇與所述糖的重量比的範圍是約100∶1-1∶50，優選約50∶1-1∶10、20∶1-1∶5、10∶1-1∶2、6∶1-1∶2、4∶1-1∶1，或約4∶1-3∶2.
23.前述權利要求中任一項的藥盒，其中所述第一單元形式還包含張力調節劑。
24.前述權利要求中任一項的藥盒，其中所述表面活性劑選自聚山梨酸酯，諸如聚山梨酸酯20或80；聚氧乙烯烷基醚，諸如Brij 35_；或泊洛沙姆，諸如泊洛沙姆188或407；以及其它乙烯/聚丙烯嵌段聚合物或聚乙二醇(PEG)，諸如PEG 8000。
25.前述權利要求中任一項的藥盒，其中因子VII多肽存在的濃度是約0.6mg/ml-約10.0mg/ml，諸如約0.6mg/ml-約6mg/ml、約0.6mg/ml-約5mg/ml、或約0.6mg/ml-約4mg/ml。
26.前述權利要求中任一項的藥盒，其中所述第一單元形式是凍幹餅。
27.前述權利要求中任一項的藥盒，其中所述第二單元形式含有一種或多種選自如下的成分CaCl2，NaCl，和甘氨醯甘氨酸。
28.一種製備凝血因子多肽的液體製劑的方法，所述方法包括步驟a)提供權利要求1-27中任一項所述的第一和第二單元形式；b)將所述第一和第二單元形式混合以提供施用載體中組合物的溶解的液體溶液。
29.一種治療凝固因子應答性症候群的方法，包括向需要的受試者施用有效量的根據權利要求28的方法製備的所述凝固因子之液體製劑。
30.權利要求29的方法，其中所述症候群是FVII應答性症候群且所述凝固因子是因子VII多肽。
31.權利要求30的方法，其中所述症候群選自獲得性或先天性血友病A、獲得性或先天性血友病B、因子XI缺乏、因子VII缺乏、Glanzmann血小板無力症、血小板減少、von Willebrand氏病、存在凝固因子抑制劑，如因子VIII或IX的抑制劑、手術、創傷、稀釋性凝血症和抗凝劑療法。
32.因子VII多肽用於製備呈權利要求1-27中任一項所述形式的藥盒之藥物的用途，所述藥物用於治療因子VII應答性症候群。
33.一種組合物，其包含因子VII多肽和至少一種選自下組的穩定劑a)抗氧化劑與甘露醇的組合；b)甲硫氨酸與多元醇的組合；c)糖與甘露醇的組合；d)蔗糖與多元醇的組合；e)甲硫氨酸；以及約0.06-0.08mg/mL量的聚山梨酸表面活性劑；所述組合物具有不超過約3％的含溼量。
34.權利要求33的組合物，其中抗氧化劑與甘露醇的組合還包含糖。
35.權利要求33的組合物，其中甲硫氨酸與多元醇的組合還包含糖。
36.權利要求27的組合物，其中糖與甘露醇的組合還包含抗氧化劑。
37.權利要求27的組合物，其中蔗糖與多元醇的組合還包含抗氧化劑。
38.前述權利要求27-37中任一項的組合物，其中抗氧化劑選自同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、穀胱甘肽、以及包含同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸和穀胱甘肽之任意一種的肽；優選甲硫氨酸。
39.前述權利要求27-38中任一項的組合物，其中糖選自蔗糖、右旋糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、環糊精、麥芽糖糊精和葡聚糖；優選蔗糖。
40.前述權利要求27-39中任一項的組合物，其中多元醇選自甘露醇、山梨醇和木糖醇；優選甘露醇。
41.前述權利要求27-40中任一項的組合物，其中所述組合物是穩定的，從而在將該組合物於30℃貯藏8個月後，不超過初始含量約5％w/w、優選不超過約4.0％w/w、3.0％w/w、2.5％w/w、2.0％w/w、1.5％w/w、或不超過約1.0％w/w的因子VII多肽轉變成聚集體。
42.權利要求27-51中任一項的組合物，其中所述組合物是穩定的，從而在將該組合物於30℃貯藏8個月後，不超過初始含量約6％、優選不超過約5％w/w、4.0％w/w、3.0％w/w、2.5％w/w、2.0％w/w、或不超過約1.5％w/w的因子VII多肽轉變成氧化的形式。
43.權利要求27-42中任一項的組合物，其還包含當溶於水性溶劑時適於保持所述組合物的pH範圍在3-9，優選的pH範圍在4-7，更優選的範圍在4.5-6.5，甚至更優選的範圍在5.5-6.5的試劑。
44.權利要求43的組合物，其中所述試劑選自檸檬酸、醋酸、組氨酸、蘋果酸、磷酸、酒石酸、琥珀酸、MES、HEPES、咪唑、TRIS、乳酸、穀氨酸、PIPES和甘氨醯甘氨酸，或至少兩種所列試劑的混合物，其中所述混合物能夠提供所示範圍內的pH值。
45.權利要求27-44中任一項的組合物，其還含有張力調節劑。
46.權利要求45的組合物，其中所述張力調節劑選自醋酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、甘露醇、甘油、丙二醇，或至少兩種所列調節劑的混合物；優選地選自氯化鈉、氯化鎂、甘露醇、甘油、丙二醇、氯化鈣或其混合物。
47.權利要求27-46中任一項的組合物，其中所述聚山梨酸酯表面活性劑選自聚山梨酸酯20或80，優選聚山梨酸酯80。
48.權利要求27-47中任一項的組合物，其中所述因子VII多肽選自人因子VIIa、重組人因子VIIa和因子VII序列變異體。
49.權利要求48的組合物，其中因子VII多肽是人因子VIIa或重組人因子VIIa。
50.權利要求27-49中任一項的組合物，其中因子VII多肽是因子VII序列變異體，在本說明書所述「體外蛋白裂解測定法″和″體外水解測定法″的一種或多種方法中進行測試時，所述變異體與野生型因子VII的活性比是至少1.25。
51.權利要求27-50中任一項的組合物，其中因子VII多肽存在的濃度為約0.6mg/ml-約10.0mg/ml，諸如約0.6mg/ml-約6mg/ml，約0.6mg/ml-約5mg/ml，或約0.6mg/ml-約4mg/ml。
52.權利要求27-51中任一項的組合物，選自
53.權利要求52的組合物，選自
54.權利要求52的組合物，選自
55.權利要求52-54中任一項的組合物，其含有聚山梨酸酯80，量為約0.07mg/mL。
56.權利要求52-55中任一項的組合物，其含有FVIIa多肽，量為約1.0mg/mL。
57.權利要求52-56中任一項的組合物，還含有至少一種選自如下的成分量為約10mM的Ca2+，優選為CaC12x2H20；量為約50mM或約40mM，例如39mM的NaCl；組氨酸，優選量為約10mM的L-組氨酸。
58.權利要求52-57中任一項的組合物，具有pH為5.5，或5.6，或5.7，或5.8，或5.9，或6.0，或6.1，或6.2，或6.3，或6.4，或6.5。
59.一種製備權利要求27-58中定義的組合物的方法，包括步驟i)提供溶液中的因子VII多肽，所述溶液包含至少一種選自如下的穩定劑a)抗氧化劑與甘露醇的組合；b)甲硫氨酸與多元醇的組合；c)糖與甘露醇的組合；d)蔗糖與多元醇的組合；和e)甲硫氨酸；以及聚山梨酸酯表面活性劑，其量為約0.06-0.08mg/mL；ii)加工所述溶液以獲得具有含溼量不超過約3％w/w的固體組合物。
60.一種治療FVII-應答性症候群的方法，包括向需要的受試者施用有效量的權利要求27-57中任一項定義的組合物。
61.權利要求60的方法，其中所述症候群選自獲得性或先天性血友病A、獲得性或先天性血友病B、因子XI缺乏、因子VII缺乏、Glanzmann血小板無力症、血小板減少、von Willebrand氏病、存在凝固因子抑制劑，如因子VIII或IX的抑制劑、手術、創傷、稀釋性凝血症和抗凝劑療法。
62.因子VII多肽用於製備治療因子VII-應答性症候群的藥物的用途，所述藥物包含權利要求27-58中任一項定義的組合物。
63.權利要求62的用途，其中所述症候群選自獲得性或先天性血友病A、獲得性或先天性血友病B、因子XI缺乏、因子VII缺乏、Glanzmann血小板無力症、血小板減少、von Willebrand氏病、存在凝固因子抑制劑，如因子VIII或IX的抑制劑、手術、創傷、稀釋性凝血症和抗凝劑療法。
全文摘要
本發明涉及化學上以及物理上穩定的藥盒和組合物，其含有多肽，特別是因子VII或因子VII相關多肽，使得這些組合物能夠在室溫進行貯藏、操作和使用。
文檔編號A61K38/36GK1917861SQ200480037799
公開日2007年2月21日 申請日期2004年12月17日 優先權日2003年12月19日
發明者B·L·漢森, M·B·延森, T·科恩菲爾特 申請人:諾和諾德醫療保健公司