製備具有端二烯基的環孢素＂a＂類似物的方法

2023-05-28 03:33:21

專利名稱：製備具有端二烯基的環孢素＂a＂類似物的方法
技術領域：
本發明涉及一種新的製備式I環孢素A類似物的方法、用於該方法的中間體及其製備方法 除了1-胺基酸殘基上的修飾外，式I環孢素A類似物與環孢素A結構相同。該類似物在WO99/18120和美國臨時專利申請號60/346,201中公開。該類似物下稱(E)-ISA247。
Tetrahedron Letters，第22卷，第29期，第2751-2752頁，1981公開本發明方法的其中一個名為(E)-1-三甲基甲矽烷基-1-丙烯-3-硼酸頻哪醇酯的中間體，和用其進行烯丙基化的方法。
Tetrahedron Letters，第36卷，第10期，第1583頁，1995公開用酒石酸酯改性的(E)-γ-(三甲基甲矽烷基)烯丙基硼酸酯(boronate)進行烯丙基化的方法。
在第一個方面，本發明提供一種製備式I環孢素A類似物的方法
該方法包括a-i)使式II化合物 ，其中Pg為保護基團，虛線表示該化合物的其餘部分具有與式I化合物相應部分相同的結構，用式III化合物烯丙基化 ，其中R1為氫、C1-8烷基或C3-8環烷基和/或當R1為氫時，其為三聚體；
或a-ii)用其中R2為C1-8烷基或C3-8環烷基的式IV化合物將式II化合物烯丙基化； 或a-iii)用式V化合物將式II化合物烯丙基化 或a-iv)用式VI化合物將式II化合物烯丙基化 或a-v)用式VII化合物將式II化合物烯丙基化 或a-vi)用通過包括以下步驟的方法得到的反應混合物將式II化合物烯丙基化；
i)使烯丙基三甲基矽烷與丁基鋰反應形成三甲基甲矽烷基烯丙基鋰；ii)使三甲基甲矽烷基烯丙基鋰與硼酸三異丙基酯或硼酸三甲酯反應，然後進行水後處理，或a-vii)用通過三甲基甲矽烷基烯丙基鋰與二乙基氯化鋁反應得到的反應混合物將式II化合物烯丙基化，或a-viii)用通過三甲基甲矽烷基烯丙基鋰與四異丙醇鈦或三異丙氧基氯化鈦反應得到的反應混合物將式II化合物烯丙基化，形成式XI化合物； 其中Pg定義同上；和b)使式XI化合物轉化為式I環孢素A類似物。
在第二方面，本發明提供用於上述方法的中間體。
在第三方面，本發明提供製備這些中間體的方法。
另外，在定義同上的方法[下稱(i)]中，優選以下方法(ii)方法(i)，其中步驟b)通過以下過程進行b-i)在酸性條件下將式XI化合物轉化為式XII化合物
其中Pg定義同(i)；和b-ii)將式XII化合物的PgO基團轉化為羥基。
(iii)方法(i)或(ii)，其中Pg為乙醯基。
(iv)方法(iii)，其中步驟a-i)、a-ii)或a-vi)在酒石酸酯的存在下進行。
(v)方法(iii)，其中步驟a-i)、a-ii)或a-vi)在二氯甲烷或甲苯中進行。
(vi)方法(iii)，其中步驟a-iii)在BF3.Et2O、甲酸、乙酸或酒石酸酯的存在下進行。
(vii)方法(vi)，其中步驟a-iii)在水/二氯甲烷或水/甲苯中進行。
(viii)方法(vi)，其中步驟a-iii)和b-i)在二氯甲烷或四氫呋喃中、BF3.Et2O存在下進行。
(ix)方法(vi)，其中步驟a-iii)在乙酸和/或甲酸中進行或在乙酸和/或甲酸與一種或兩種選自二氯甲烷和四氫呋喃的共溶劑的混合物中進行。
(x)方法(ix)，其中步驟a-iii)在乙酸中進行，步驟b-i)通過向該反應混合物加入甲酸進行。
(xi)方法(ix)，其中步驟a-iii)和b-i)在甲酸或乙酸/甲酸中進行。
(xii)方法(i)或(ii)，其中步驟a-iv)在水/二氯甲烷或水/甲苯中進行。
(xiii)方法(iii)，其中步驟a-iv)和b-I)在二氯甲烷、四氫呋喃或甲苯中、BF3.Et2O存在下進行。
(xiv)方法(iii)，其中步驟a-v)在BF3.Et2O存在下進行。
(xv)方法(xiv)，其中步驟a-v)和b-i)在二氯甲烷、四氫呋喃或甲苯中、BF3.Et2O存在下進行。
(xvi)方法(iii)，其中步驟a-v)在甲酸或乙酸存在下進行。
(xvii)方法(xvi)，其中步驟a-v)和b-i)在甲酸或乙酸/甲酸中進行。
(xviii)方法(xvii)，其中步驟a-v)和b-i)在乙酸/甲酸和選自二氯甲烷、甲苯、乙酸乙酯和乙酸異丙酯的共溶劑的混合物中進行。
(xix)方法(xviii)，其中共溶劑為乙酸異丙酯。
(xx)方法(xvi)，其中步驟a-v)在乙酸中進行，步驟b-i)通過向反應混合物加入甲酸進行。
(xxi)方法(iii)，其中步驟a-vii)通過用三甲基甲矽烷基烯丙基鋰和二乙基氯化鋁反應製備的反應混合物將式II化合物烯丙基化進行。
(xxii)方法(iii)，其中步驟a-viii)通過用三甲基甲矽烷基烯丙基鋰和四異丙醇鈦或三異丙氧基氯化鈦反應製備的反應混合物將式II化合物烯丙基化進行。
本說明書和權利要求書中使用的以下術語具有如下含義本文中使用的″Ca-b烷基″表示含a至b個碳原子的直鏈或支鏈烷基。因此，例如″C1-8烷基″表示含1至8個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基或叔丁基。
″C3-8環烷基″指具有3至8個環碳的飽和單價環狀烴基，例如環丙基、環丁基、環己基。
″保護基團″指當與掩蔽分子的活性基團連接時，減少或防止其反應性的一組原子。保護基團的實例可在T.W.Green和P.G.Futs，Protective Groups in Organic Chemistry，(Wiley，第2版1991)和Harrison和Harrison等，Compendium of Synthetic Organic Methods，第1-8卷(John Wiley and Sons，1971-1996)中查到。
在本文提供的結構式中，虛線鍵 表示取代基在紙平面的下方，楔形鍵 表示取代基在紙平面的上方。
除另有說明外，用於本說明書和權利要求書的以下縮寫具有如下含義MTBE 甲基叔丁基醚THF 四氫呋喃DCM 二氯甲烷DMSO 二甲亞碸HMPA 六甲基磷醯胺TMEDA 四甲基乙二胺TMS 四甲基矽烷TMS- 三甲基甲矽烷基Et乙基Me甲基iPr 異丙基Bu丁基Ac乙醯基RT室溫HPLC 高效液相色譜MS質譜TLC 薄層層析NMR 核磁共振波譜2D-COSY 2-維相關光譜2D-TOCSY 2-維全相關光譜HSQC 異核單量子相關Cryst.結晶Cpd 化合物min. 分鐘
h 小時用於本發明方法的原料和試劑可向商品供應商例如AldrichChemical Co.，(Milwaukee，Wisconsin，USA)，Bachem(Torrance，Califoria，USA)，Emka-Chemie或Sigma(St.Louis，Missouri，USA)，Maybridge(DistRyan Scientific，P.O.Box6496，Columbia，SC92960)，Bionet Research Ltd.，(Cornwall PL32 9QZ，UK)，Menai Organics Ltd.，(Gwynedd，N.Wales，UK)，Butt Park Ltd.，(Dist.Interchim，MontluconCedex，France)，Fluka(CH-9471 Buchs，CH)，Acros Organics(B-2440Geel，BE)購買，或通過本領域技術人員已知的方法，根據參考文獻例如Fieser and Fieser′s Reagenys for Organic Synthesis，第1-17卷(JohnWiley and Sons，1991)，Rodd′s Chemistry of Carbon Compounds，第1-5卷及增補本(Elsevier Science Publishers，1989)，Organic Reactions，第1-40卷(John Wiley and Sons，1991)，March′s Advanced OrganicChemistry，(John Wiley and Sons，1992)和Larock′s ComprehensiveOrganic Transformations(VCH Publishers Inc.，1989)中闡述的方法製備。
可使用常規技術，包括但不限於過濾、蒸餾、結晶、層析酌情分離和純化反應原料和中間體。此類物質可用常規方法包括物理常數和光譜數據表徵。
式I化合物可按流程A所示方法製備。本文中又稱為烯丙基化試劑的烯丙基金屬試劑需按一般意義理解，可包括其中金屬部分基於硼的試劑，儘管其本身不為金屬。
流程A (Pg為保護基團，虛線表示化合物剩餘部分具有與式I化合物相應部分相同的結構，R1為氫、C1-8烷基或C3-8環烷基，當R1為氫時，式III化合物包括其三聚體，R2為C1-8烷基或C3-8環烷基。)在步驟a)中，保護的式II環孢素A醛通過式III、IV、V、VI、VII、VIII等γ-甲矽烷基化烯丙基金屬試劑烯丙基化，形成式XI β-甲矽烷基高烯丙醇非對映體混合物(關於烯丙基金屬和醛烯丙基化的一般性論述見W.R.Roush″Allyl Organometallics″(烯丙基有機金屬化合物)，Comprehensive Organic Synthesis，Pergammon Press，第2卷，第1-53頁；Y.Yamamoto，N.Asao″Selective Reactions Using AllylicMetals″(使用烯丙基金屬的選擇性反應)，Chemical Reviews 1993，93，第2207-2293頁)。控制相對反式或順式構型的β-甲矽烷基醇片斷取決於使醛烯丙基化步驟所用的烯丙基金屬試劑和條件(關於γ-甲矽烷基取代的烯丙基金屬試劑的一般性論述見T.H.Chan″SilylallylAnions in Organic SynthesisA Study in Regio-and Stereoselectivity″(在有機合成中的甲矽烷基烯丙基陰離子區域和立體有擇性研究)，Chemical Reviews 1995，95，第1279-1292頁)。一般相信，通過流程B所示椅式6-元環過渡態(又稱為Zimmerman-Traxler過渡態)形成這種醇。
流程B 在這種過渡態中，優選醛側鏈採取假平伏位以使1，3-雙直鍵空間位阻作用最小化。因此，β-甲矽烷基醇片斷的相對構型取決於烯丙基金屬試劑的C-C雙鍵構型。
因此，使用反式或順式-γ-甲矽烷基化烯丙基金屬試劑應分別主要產生反式或順式β-甲矽烷基醇異構體。該規則在通常情況下成立，例如烯丙基-硼、烯丙基-鈦和烯丙基-鋁試劑。
發現該規則的例外情況，例如當在Lewis酸性條件下，γ-甲矽烷基化三烷基烯丙基錫烷試劑與醛加成時，該機理髮不同，反應主要提供順式β-甲矽烷基醇異構體。
在步驟b)中，將式XIβ-甲矽烷基醇轉化為式I(E)-ISA247。
步驟b)可按流程C所示方法進行。
流程C
(Pg和虛線具有定義同上的含義)。
在步驟b-i)中，式XIβ-甲矽烷基醇經歷Peterson消除(關於Peterson消除的一般性論述見D.J.Ager″The PetersonReaction″(Peterson反應)，Synthesis 1984，第384-397頁及其引用的參考文獻)，然後產生內雙鍵，即從β-甲矽烷基醇部分消除甲矽烷醇。
為實現高雙鍵異構體純度，成功實現烯丙基化-Peterson消除順序取決於選擇性引入相對反式或順式構型的β-甲矽烷基醇部分。
已知Peterson消除確實為立體有擇的。當順式異構體在流程D中所述相同條件下產生其它雙鍵異構體時，反式異構體提供一個異構雙鍵。
流程D (Pg和虛線具有定義同上的含義)反式異構體在酸性Peterson消除條件下應生成反式雙鍵，而順式異構體提供順式雙鍵。該反應按其中羥基和甲矽烷基在消除前處於反式構象的機理進行。
當Peterson消除在鹼性條件下進行時，情況相反，如果那樣的話，反應按其中脫質子化羥基和甲矽烷基在消除前處於順式構象的機理進行。
因此，原則上通過控制形成順式或反式相對構型的β-甲矽烷基醇部分，或通過用酸或鹼性Peterson消除條件可得到任一雙鍵異構體。
在本發明中，用反式-γ-甲矽烷基化烯丙基金屬試劑將保護的式II環孢素A醛烯丙基化，形成式XI反式-β-甲矽烷基醇非對映體的混合物。因此，在酸性條件下進行Peterson消除可形成反式雙鍵。
用於酸催化反應的典型酸可包括硫酸、甲酸、鹽酸、甲磺酸四氟硼酸、高氯酸、三氟乙酸和各種Lewis酸。優選的酸為硫酸、甲酸、甲磺酸和BF3.Et2O，尤其為硫酸、甲酸和BF3.Et2O。
該步驟可在反應溫度-70℃至50℃下進行。用於甲酸的優選溫度範圍為0℃至50℃，更優選20℃至40℃。用於硫酸和甲磺酸的優選溫度範圍為0℃至40℃，更優選20℃至30℃。用於BF3.Et2O的優選溫度範圍為-80℃至50℃，優選-80℃至25℃，尤其為-80℃至0℃。
E-乙醯基-ISA247可通過在MTBE中結晶(例如通過將二氯甲烷換為MTBE溶劑)或在MeOH/水混合物中結晶純化。
在步驟b-ii)中，除去保護基團，使該碳上的官能團恢復為醇。使用的條件和試劑取決於所用的本領域技術人員已知的保護基團。可優選使用醯基(R′C(O)-；其中R′為具有1至6個碳原子的直鏈飽和單價烴基，或具有3至6個碳原子的支鏈飽和單價烴基)例如乙醯基、丙醯基、丁醯基、異丁醯基、戊醯基作為保護基團。當保護基團為乙醯基時，可通過例如用K2CO3的甲醇和水溶液處理除去。在這些條件下，保持二烯片段的異構體純度。因此E-ISA247的雙鍵異構體純度反映E-乙醯基-ISA247的雙鍵異構體純度。除碳酸鉀以外的可用於除去保護基團的鹼包括氫氧化鈉、碳酸鈉、醇鈉和醇鉀。
用烯丙基硼試劑合成(E)-ISA247用式III或IV(步驟a-i)和a-il)γ-甲矽烷基化烯丙基硼試劑進行烯丙基化一般而言，在可接受的時間範圍內，需要過量式III或IV試劑完成乙醯基-環孢素A醛(II′)的烯丙基化。通過使用活化劑例如酒石酸酯和/或二氯甲烷為(助)溶劑實現高轉化和快速。與硼酸的一般行為一致，式IIIa試劑可潛在存在環狀三聚體(環硼氧烷(boroxine))或低聚體形式(關於硼酸的這種行為實例見K.Ishihara，H.Kurihara，M.Matsumoto和H.Yamamoto″Design of Bronsted Acid-Assisted ChiralLewis Acid(BLA)Catalyststs for Highly Enantioselective Diels-AlderReactions″(用於高對映選擇性Diels-Alder反應的Bronsted酸助手性Lewis酸(BLA)催化劑的設計)，Journal of the American ChemicalSociety 1998，120，第6920-6930頁)。當用硼酸三異丙基酯製備式IIIa粗試劑溶液時，式IIIa試劑也可含有硼酸二異丙基酯(TMS-CH＝CH-CH2-B(OiPr)2)，該硼酸二異丙基酯用由B(OiPr)3)和混和衍生物例如TMS-CH＝CH-CH2-B(OH)(OiPr)產生的異丙醇製備。該溶液可用作烯丙基化試劑，無需純化。
或者，可優選在酸例如硫酸、鹽酸、乙酸優選乙酸存在下，通過在有機溶劑/水混合物例如二氯甲烷/水、甲苯/水、乙酸乙酯/水、THF/水、氯仿/水混合物優選二氯甲烷/水混合物中水解式V的絡合物產生式IIIa試劑溶液。用剛才描述的方法製備的式IIIa試劑的二氯甲烷溶液使乙醯基-環孢素A醛烯丙基化，採用低至2當量的該試劑可得到高轉化率。在這種情形中，自然不存在異丙基衍生物。
無酒石酸酯活化甲苯可用作這些反應的溶劑，但是，在這些反應中發現明顯的溶劑效應。烯丙基化最好在極性非配位(non-coordinating)溶劑、優選二氯甲烷中進行。
當省略酒石酸酯添加劑時，優選使用濃粗硼酸溶液(＞10％，優選約50％濃度)在二氯甲烷中進行烯丙基化。
優選的其中R1為氫、C1-8烷基或C3-8環烷基的式III試劑和/或當R1為氫時其三聚體為那些以下試劑其中R1為氫、甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基或苄基，更優選R1為氫、甲基、乙基、丙基、異丙基或丁基，進一步優選氫、甲基、乙基、丙基或丁基，尤其優選氫。烯丙基化在有機溶劑中進行，例如乙酸乙酯、THF、甲苯、氯仿或二氯甲烷，優選在乙酸乙酯、甲苯或二氯甲烷，更優選在甲苯或二氯甲烷，尤其在二氯甲烷中進行。
例如，可用式III試劑按流程E中所示方法進行(E)-ISA247的合成。
流程E (R1和虛線具有定義同上的含義)在室溫下、60min內，用10當量約50％硼酸溶液使乙醯基-環孢素(cylcosporine)A醛(II′)在二氯甲烷中烯丙基化達到95％以上的轉化率，得到反式β-三甲基甲矽烷基醇非對映體(XI′)混合物。粗烯丙基化產物水後處理後，可在0℃至室溫下，在THF和硫酸中進行Peterson消除。或者，Peterson消除可通過加入THF和硫酸直接在烯丙基化反應混合物中進行。水後處理和結晶得到(E)-乙醯基-ISA247(XII′)。
水解(E)-乙醯基-ISA247(XII′)得到(E)-ISA247(I)。
酒石酸酯活化如流程F所示，在乾燥劑的存在下，加入酒石酸酯例如L-(+)-酒石酸二甲基酯，通過原位生成相應的硼酸酯活化式IIIa硼酸，該硼酸酯在文獻中已知為表現出極高烯丙基化反應活性的一類試劑。然後反應部分或主要通過生成的提高烯丙基化速度的硼酸酯進行。
流程F (R為C1-8烷基，優選C1-6烷基，更優選甲基、乙基或異丙基，尤其甲基。)採用式IV試劑的烯丙基化在有機溶劑中進行，例如乙酸乙酯、THF、甲苯、氯仿或二氯甲烷，優選在乙酸乙酯、甲苯或二氯甲烷，更優選在甲苯或二氯甲烷，尤其在二氯甲烷中進行。
例如，按流程G中所示方法通過式IV試劑進行(E)-ISA247的合成。
流程G (虛線具有定義同上的含義)在乾燥劑例如分子篩或硫酸鎂優選硫酸鎂的存在下，將式IIIa硼酸溶液與L-(+)-酒石酸二甲基酯混和，經11B和1H NMR分析證實生成式IVa′試劑。
在0℃至室溫下，優選在0℃下，用通過加入L-(+)-酒石酸二甲基酯活化的硼酸試劑使乙醯基-環孢素A醛(II′)原位烯丙基化，得到反式β-甲矽烷基醇非對映體(XI′)的混合物。水後處理後，在THF中用硫酸進行Peterson消除，經後處理和結晶後，得到(E)-乙醯基-ISA247(XII′)。將乙醯基保護基團水解，得到(E)-ISA247(I)。
應注意涉及使用經或不經酒石酸酯活化的粗硼酸溶液的反應應在中性或酸性pH(3至7，優選5至6)中進行。當pH確實超過7時，形成鑑別為式XV乙烯基矽烷的大量副產物。其中加入Et3N胺達到pH9-10的測試性反應(不經酒石酸活化進行)導致幾乎全部形成乙烯基矽烷產物XV(經MS、1H NMR、COSY、TOCSY和HSQC NMR試驗證實)。這種結果完全出乎意料。
(虛線具有定義同上的含義)通過式Vγ-甲矽烷基化烯丙基硼試劑烯丙基化(步驟a-iii))不經活化，式V二乙醇胺絡合物在室溫下、非質子溶劑例如二氯甲烷或THF中不與乙醯基-環孢素A醛反應。但是，式V絡合物代表相應硼酸的穩定來源。
當在水/有機溶劑(例如乙酸乙酯、THF、二氯甲烷或甲苯，優選乙酸乙酯、二氯甲烷或甲苯，更優選二氯甲烷)混合物中，優選在酸例如硫酸、鹽酸或乙酸優選乙酸存在下處理時，二乙醇胺絡合物V被水解，並例如流程H所示釋放出反應性硼酸，然後優選在室溫下，可使其與乙醯基-環孢素A醛(II′)反應。
流程H 在這樣的條件下，使乙醯基-環孢素A醛(II′)烯丙基化得到反式β-三甲基甲矽烷基醇非對映體(XI′)混合物。棄去水相後，將溶劑換成THF，加入硫酸進行Peterson消除。水後處理和結晶得到(E)-乙醯基-ISA247(XII′)。隨後水解得到(E)-ISA247(I)。或者，水後處理後，分離粗反式β-三甲基甲矽烷基醇非對映體，隨後在標準條件下(濃硫酸/THF)通過Peterson消除得到E-乙醯基-ISA247。
例如，可按流程I中所示方法用式V絡合物進行(E)-ISA247的合成。
流程I (虛線具有定義同上的含義)在非水條件下，也可直接用式V絡合物進行乙醯基-環孢素A醛(II′)烯丙基金屬化。質子溶劑例如羧酸確實特別有效。溶劑混合物可以為乙酸和/或甲酸，或乙酸和/或甲酸與共溶劑例如二氯甲烷和THF的組合。烯丙基化最好在乙酸中、室溫至35℃下進行。這可提供反式β-甲矽烷基醇非對映體(XI′)混合物。這些中間體當然可分離，但可通過加至酸例如甲酸、硫酸或甲磺酸優選甲酸反應混合物中，按一鍋法(one pot)進行Peterson消除。水後處理和結晶得到(E)-乙醯基-ISA247(XII′)。隨後水解得到(E)-ISA247(I)。
當在用於烯丙基化的溶劑混合物中有足量的甲酸時，Peterson消除可按一鍋法進行，直接得到(E)-乙醯基-ISA247。
另一種備選方法為在Lewis酸例如BF3.Et2O的存在下，向乙醯基-環孢素A醛(II′)中加入式V絡合物來進行。例如，與BF3.Et2O的反應可在溶劑例如二氯甲烷或THF中，在-40℃至室溫下進行。在這些條件下，烯丙基化後可直接進行Peterson消除，得到預期的(E)-乙醯基-ISA247(XII′)。
使式VIγ-甲矽烷基化烯丙基硼試劑烯丙基化(步驟a-iv)在雙相水/有機溶劑優選水/二氯甲烷混合物或水/甲苯混合物、更優選水/二氯甲烷混合物中，在室溫下使烯丙基三氟硼酸鹽VI和乙醯基-環孢素A醛(II′)反應，得到反式β-三甲基甲矽烷基醇非對映體(XI′)混合物。棄去水相後，在0℃至室溫下，加入THF和硫酸進行Peterson消除，得到(E)-乙醯基-ISA247(XII′)。分離反式β-三甲基甲矽烷基醇非對映體後，Peterson消除也可在標準條件(硫酸/THF)下進行，得到E-乙醯基-ISA247。
也可通過Lewis酸促進烯丙基化。如果那樣的話，烯丙基化和Peterson消除可原位進行。例如，在-70℃下，將過量的BF3.Et2O加入烯丙基三氟硼酸鹽VI(2當量)在乙醯基-環孢素A醛(XII′)的二氯甲烷溶液中的懸浮液中，經60min反應和水後處理後，得到(E)-乙醯基-ISA247(I)。反應溶劑為有機溶劑例如二氯甲烷、THF或甲苯，優選二氯甲烷。
用式VIIγ-甲矽烷基化烯丙基硼試劑進行烯丙基化(步驟a-v)從文獻中得知，用該試劑使醛烯丙基化進行緩慢(在室溫下1至數天)。因此在室溫下，在溶劑例如THF、二氯甲烷、甲苯、DMF和DMSO中，用過量的式VII試劑(5-10當量)使乙醯基-環孢素A醛(II′)烯丙基化進行緩慢。
加熱、使用大量過量試劑或高濃度可增加乙醯基環孢素A醛烯丙基化的速度，但是，通過適當選擇溶劑或者可找到更好的方法。
發現羧酸例如甲酸或乙酸可明顯增加烯丙基化的速度。例如，當在乙酸中進行時，在室溫下、5小時內，用2當量式VI試劑可使乙醯基環孢素A醛(II′)烯丙基化轉化率達到95％以上，得到β-甲矽烷基醇(XI′)。再加入甲酸可促進Peterson消除。經萃取後處理，確定中間體β-甲矽烷基醇的相對反式立體化學後，得到(E)-乙醯基-ISA247(XII′)。在分離反式β-三甲基甲矽烷基醇非對映體後，Peterson消除也可在標準條件(硫酸/THF)下進行，得到(E)-乙醯基-ISA247。
甲酸或優選乙酸和甲酸的組合(例如約1∶1 v/v)也可作為有效溶劑。如果那樣，烯丙基金屬化和隨後的Peterson消除可按一鍋法進行。在乙酸和甲酸的組合(約1∶1 v/v)中，在室溫下、60min內，用1.5當量試劑可使乙醯基-環孢素A醛烯丙基化和隨後的Peterson消除達到90％以上的轉化率。水萃取後處理並結晶，得到(E)-乙醯基-ISA247(XII′)。
也可使用乙酸、甲酸和合適共溶劑的混合物。二氯甲烷、甲苯、乙酸乙酯或乙酸異丙酯優選乙酸異丙酯可用作共溶劑。當使用共溶劑時，可發現反應性降低，但這可通過升高反應溫度得到補償。
用K2CO3的甲醇/水溶液水解乙酸酯保護基團，得到(E)-ISA247(I)。
例如，可按流程J中所示方法用式VI試劑進行(E)-ISA247的合成。
流程J 當在羧酸溶液如乙酸和甲酸中使用時，式VII試劑活性增加的原因可來自這些溶劑的高極性和低絡合能力。可在這些溶劑通過質子化活化醛羰基提供酸性催化烯丙基化的能力中發現另一個效應。
在-70℃至0℃下，在甲苯、THF或二氯甲烷優選甲苯或二氯甲烷、優選二氯甲烷中，可通過Lewis酸例如BF3.Et2O促使乙醯基環孢素A醛(II′)與式VII試劑加成。在烯丙基化反應下，也發生Peterson消除，因此經萃取水後處理後，可得到(E)-乙醯基-ISA247(XII′)。
通過烯丙基鈦試劑合成(E)-ISA247在-80℃至0℃，優選-80℃至-30℃，更優選-80℃至-50℃，尤其-80℃至-60℃下，使乙醯基-環孢素A醛與γ-三甲基甲矽烷基烯丙基鈦試劑在THF中進行反應，該試劑用三甲基甲矽烷基烯丙基鋰和二異丙氧基二氯化鈦、四異丙醇鈦或三異丙氧基氯化鈦，優選四異丙醇鈦或三異丙氧基氯化鈦製備，經水後處理後，得到非對映體反式β-甲矽烷基醇XI′混合物。在標準條件(H2SO4/THF)下進行Peterson消除，得到E-乙醯基-ISA247(XII′)。
用烯丙基鋁試劑合成(E)-ISA247在THF中，在-80℃至0℃，優選-80℃至-30℃，更優選-80℃至-50℃，尤其-80℃至-60℃下，使乙醯基-環孢素A醛與γ-三甲基甲矽烷基烯丙基鋁試劑進行反應，該試劑用三甲基甲矽烷基烯丙基鋰和乙基二氯化鋁或二乙基氯化鋁，優選二乙基氯化鋁製備，經水後處理後，得到非對映體反式β-甲矽烷基醇XI′混合物。在標準條件(H2SO4/THF)下，進行Peterson消除得到E-乙醯基-ISA247(XII′)。
製備γ-甲矽烷基化烯丙基金屬試劑烯丙基金屬化步驟所需的γ-甲矽烷基化烯丙基金屬試劑最好用相應的烯丙基矽烷通過脫質子，用適當的金屬試劑捕集，和任選通過用合適的配體進一步絡合剩餘金屬製得。得到的試劑可原位使用，或分離和儲存，這取決於它們的穩定性和方法。
儘管顯然可使用其它甲矽烷基取代的烯丙基矽烷，但三甲基甲矽烷基衍生物導致的浪費量最小。甲矽烷基片段確實在Peterson消除中發生損失。
用於使烯丙基矽烷脫質子化的許多條件在文獻中已公開，通常在-100℃至室溫下，使用正丁基鋰(或仲-和叔-異構體)的有機溶劑(通常THF)溶液與或不與共溶劑或共試劑例如HMPA、TMEDA或叔丁醇鉀聯合(見例如T.H.Chan″Silylallyl Anions in Organic SynthesisAStudy in Regio-and Stereoselectivty″(用於有機合成的甲矽烷基希丙基陰離子區域選擇性和立體有擇性研究)，Chemical Reviews 1995，95，第1279-1292頁；Kohei Tamao，Eiji Nakajo和Yoshihiko Ito in″Silafunctional compounds in organic synthesis.33.Metalatedallylaminosilanea new，practical reagent for the stereoselective.alpha.-hydroxyallylation of aldehydes to erythro-1，2-diol skeletons″(用於有機合成的矽雜官能的化合物33.金屬化烯丙基氨基矽烷一種用於使醛立體有擇性α-羥基烯丙基化為赤型-1，2-二醇骨架的新實用試劑)，Journal of Organic Chemistry 1987，52，第957-958頁；E.Ehlinger和P.Magnus″Silicon in Synthesis.10.The(Trimethylsilyl)allyl AnionA β-Acyl Anion Equivalent for the Conversion of Aldehydes and Ketones intoγ-Lactones″(用於合成的矽10.(三甲基甲矽烷基)烯丙基陰離子用於將醛和酮轉化為γ-內酯的β-醯基陰離子等價物)，Journal of theAmerican Chemical Society 1980，102，第5004-5011頁；M.Schlosser，L.Franzini″The Regioselectivty of 1，3-Disubstituted Allylmetal SpeciesTowards Electrophiles1-(Trimethylsilyl)alk-2-enylpotassiumCompounds″(傾向於親電體的1，3-二取代烯丙基金屬類的區域選擇性1-(三甲基甲矽烷基)烯-2-基鉀化合物)，Synthesis 1998，第707-709頁；E.Schaumann和A.Kirschning″Ring-opening of oxiranes by silyl-substituted allyl anions.A regiochemical chameleon″(用甲矽烷基取代的烯丙基陰離子使環氧乙烷開環。可變式(chameleon)區域化學)，Tetrahedron Letters 1988，29，第4281-4284頁)。
如流程K中所示方法，在0℃至35℃，優選0℃至25℃下，在30min至最高達3小時內，用正丁基鋰的THF溶液使烯丙基三甲基矽烷脫質子。於是生成三甲基甲矽烷基烯丙基鋰中間體。該中間體在溶液中最可能以反式構型π-烯丙基鋰絡合物存在(T.H.Chan″silylallyl Anions in Organic SynthesisA Study in Regio-andStereoselectivty″(用於有機合成的甲矽烷基烯丙基陰離子區域選擇性和立體有擇性研究)，Chemical Reviews 1995，95，第1279-1292頁；M.Schlosser，O.Desponds，R.Lehmann，E.Moret和G.Rauschschwalbe″Polar Allyl Typer Organometallics as Key Intermediates in Regio-andStereocontrolled ReactionsConformational Mobilities andPreferences″(在區域和立體控制反應中用作關鍵中間體的極性烯丙基型有機金屬化合物構象活動性和參數選擇)，Tetrahedron 1993，49，第10175-10203頁)。然後通常在-80℃至-60℃下，用親電金屬源捕集(金屬轉移化)該陰離子，生成相應的反式烯丙基金屬試劑。使這些試劑與醛原位反應或可分離後使用，這取決於剩餘金屬。為活化用於烯丙基化的試劑或分離它們，也可通過加入合適的試劑將它轉化為另一種絡合物。
流程K (M和M′為包含金屬及其配體的金屬片段)製備烯丙基硼試劑式IIIaγ-甲矽烷基化烯丙基硼試劑使烯丙基三甲基矽烷脫質子化，用硼親電試劑捕集和水後處理後，得到式IIIa粗硼酸溶液。在THF中用丁基鋰在0℃至35℃下，優選0℃至25℃下使烯丙基三甲基矽烷脫質子化反應進行30min至3小時。該硼親電試劑為硼酸三烷基酯例如硼酸三異丙基酯或硼酸三甲基酯，優選硼酸三異丙基酯。在-80℃至-20℃，優選在-60℃以下，用硼酸三異丙基酯捕集三甲基甲矽烷基烯丙基鋰中間體進行30min至2小時。在-80℃至-60℃下，用硼酸三甲基酯捕集三甲基甲矽烷基烯丙基鋰中間體進行30min至2小時。
已知烯丙基硼酸不穩定，因此，粗硼酸保存在溶液中(P.G.M.Wuts和Y.-W.Jung″The Addition of γ-(Trimethylsilyl)allylboronates toImines″(將γ-(三甲基甲矽烷基)烯丙基硼酸酯加成到亞胺)，Journal ofOrganic Chemistry 1991，56，第365-372頁(見製備化合物9的實例注釋)；W.R.Roush，K.Ando，D.B.Powers，A.D.Palkowitz和R.L.Halterman″Asymmetric Synthesis Using Diisopropyl Tartrate Modified(E)-and(Z)-Crotylboronates；Preparation of the Chiral Crotylboronatesand Reactions with Achiral Aldehydes″(用酒石酸二異丙基酯改性的(E)-和(Z)-丁烯基硼酸酯不對稱合成；製備手性丁烯基硼酸酯以及與非手性醛反應)，Journal of the American Chemical Society 1990，112，6339(見參考文獻17))。濃溶液(＞10％濃度，例如約50％濃度)在室溫下不穩定，分解。應該迅速使用它們。如果需要它們應在最高5℃下儲存。根據硼酸的一般表現，式IIIa硼酸原則上也可存在環狀三聚體(又稱為環硼氧烷)或低聚體。因為也可以提供來自硼酸三異丙基酯的異丙醇(取決於方法)，所以也可以提供(混和的)異丙基硼酯(TMS-CH＝CH-CH2-B(OH)(OiPr)和/或TMS-CH＝CH-CH2-B(OiPr)2)。用等體積CD2Cl2稀釋的式IIIa硼試劑濃溶液(約50％)1H MR和11B NMR分析確實表明有幾種硼酸酯存在，儘管反相HPLC分析表明主要為硼酸(在HPLC條件下，低聚體、二聚體和三聚體應該水解轉化為硼酸)。
或者，可在有機溶劑/水混合物例如二氯甲烷/水、甲苯/水、乙酸乙酯/水、THF/水、氯仿/水混合物，優選二氯甲烷/水混合物中，優選在酸例如硫酸、鹽酸、乙酸優選乙酸存在下，通過水解式V絡合物製備式IIIa試劑溶液。
按例如流程L中所示方法進行式IIIa γ-甲矽烷基化烯丙基金屬試劑的製備。
流程L
式IVγ-甲矽烷基化烯丙基硼試劑其中R為C1-8烷基，優選C1-6烷基，更優選甲基、乙基或異丙基，尤其甲基的式IV硼酸酯試劑通過在乾燥劑如分子篩或硫酸鎂優選在硫酸鎂的存在下，用所需的酒石酸酯處理式IIIa硼試劑而製備。
在乾燥劑如分子篩或硫酸鎂優選在硫酸鎂的存在下，通過將式IIIa硼酸溶液與L-(+)-酒石酸二甲基酯混和，製備式IVa′試劑，經11B和1H NMR分析證實。
式IIIγ-甲矽烷基化烯丙基硼試劑可通過在乾燥劑如分子篩或硫酸鎂，優選在硫酸鎂的存在下，用所需的醇處理式IIIa硼試劑製備該試劑。優選的其中R1為C1-8烷基或C3-8環烷基的式IV硼酸酯試劑為以下的那些試劑其中R1為甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基或苄基，優選R1為甲基、乙基、丙基、異丙基或丁基，更優選R1為甲基、乙基、丙基或丁基，尤其優選R1為甲基。
式Vγ-甲矽烷基化烯丙基硼試劑向製備方法如上所述的式IIIa粗硼酸溶液中加入二乙醇胺。將溶劑換為庚烷，結晶，得到式V二乙醇胺絡合物固體。通過絡合物的11B NMR(相對於BF3.Et2O外標，δ＝11ppm)證實，該試劑的特別特徵為存在二乙醇胺片段氮孤對電子與硼原子間的相互作用(即通過硼原子絡合氮原子)。
按例如流程M中所示方法進行式V γ-甲矽烷基化烯丙基金屬試劑的製備
式VIγ-甲矽烷基化烯丙基硼試劑流程N 一般而言，在水/甲醇溶劑混合物中，用3當量KHF2處理相應的硼酸製備烯丙基三氟硼酸鉀鹽(見例如R.A.Batey″Diastereoselective Allylation and Crotylation Reactions of Aldehydeswith Potassium Allyl-and Crotyltrifluoroborates under Lewis acidCatalysis″(醛與烯丙基三氟硼酸鉀和丁烯基三氟硼酸鉀在Lewis酸催化下的非對映選擇性烯丙基化及丁烯化反應)，Synthesis 2000，第990-998頁)。但是，由於反應混合物的酸性pH，直接使用這些方法製備式VI三氟硼酸鹽導致質子脫硼基化(protodeborylation)形成大量烯丙基三甲基矽烷。
為避免該副反應，進行了改進。因此如流程O中所示方法，在室溫下，用2當量KHF2作為氟化物源處理硼酸甲醇溶液。在室溫下，將該懸浮液攪拌60min。將殘餘的有機鹽過濾除去。減壓濃縮三氟硼酸鹽VI的甲醇溶液，產物在0-5℃下結晶。將三氟硼酸鹽VI過濾分離，真空乾燥。
需要的硼酸溶液通過在水/二氯甲烷混合物中，在酸例如乙酸的存在下水解式V二乙醇胺絡合物製備。棄去水相，將溶劑從二氯甲烷換為甲醇。
或者，二乙醇胺絡合物V可直接用作原料。可製備三氟硼酸鹽VI，但不產生結晶。
式VIIγ-甲矽烷基化烯丙基硼試劑向上述製備的式IIIa粗硼酸溶液中加入頻哪醇。在室溫下，攪拌反應混合物，然後減壓濃縮。然後可在低壓下蒸餾頻哪醇絡合物VII，或直接在烯丙基金屬化步驟中使用。按例如流程O中所示方法進行式VII頻哪醇絡合物的製備。
流程O 或者，可用2-異丙氧基-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環戊烷(dioxaborolane)捕集1-三甲基甲矽烷基烯丙基鋰，水後處理後，直接得到式VII硼酸頻哪醇酯。
或者，可通過在室溫下，用丁基鋰使烯丙基三甲基矽烷脫質子化，用硼酸三異丙基酯猝滅該烯丙基鋰中間體(在-80℃至-20℃，優選在-80℃至-30℃下)，加入頻哪醇，然後進行水後處理，從而製備該試劑。
製備烯丙基鈦試劑通過使烯丙基三甲基矽烷脫質子化，形成上述三甲基甲矽烷基烯丙基鋰，原位製備(三甲基甲矽烷基)烯丙基鈦試劑，在-80℃至0℃，優選-80℃至-30℃，更優選-80℃至-50℃，尤其-80℃至-60℃下，使該中間體與二異丙氧基二氯化鈦、四異丙醇鈦或三異丙氧基氯化鈦優選四異丙醇鈦或三異丙氧基氯化鈦反應。用得到的鈦試劑原位使保護的環孢素A醛烯丙基化。提供公認的這些試劑的結構如下 製備烯丙基鋁試劑通過使烯丙基三甲基矽烷脫質子化形成上述三甲基甲矽烷基烯丙基鋰，原位製備(三甲基甲矽烷基)烯丙基鋁試劑，在-80℃至0℃，優選-80℃至-30℃，更優選-80℃至-50℃，尤其在-80℃至-60℃下，使該中間體與二烷基氯化鋁例如二乙基氯化鋁或與烷基二氯化鋁例如乙基二氯化鋁，優選與二乙基氯化鋁反應。用得到的鋁試劑將保護的環孢素A醛原位烯丙基化。
提供這些試劑中一種公認的結構如下 製備保護的環孢素A醛保護的式II環孢素A醛可按流程P中所示方法製備。
流程P
(虛線具有定義同上的含義)在步驟c-i)中，將保護基團引入式XIII環孢素A，保護1-胺基酸殘基側鏈β-位上的羥基。保護基團在有機合成中眾所周知，J.R.Hanson在Protecting Groups in Organic Synthesis(Sheffield AcademicPress，Sheffield，England，1999)，第2章，第24-25頁中″The Protection ofAlcohols，″(保護醇)中有論述。Hanson描述如何通過使羥基轉化為酯或醚來保護它們。乙酸酯可能為最常用的保護羥基的化學類型。有很多種可用於引入乙酸酯基的條件。這些試劑和溶劑包括乙酸酐和吡啶；乙酸酐、吡啶和二甲氨基吡啶(DMAP)乙酸酐和乙酸鈉乙酸酐和對甲苯磺酸、乙醯氯、吡啶和DMAP；和乙烯酮。因為從酸酐形成高反應性N-醯基吡啶鎓鹽，所以DMAP為有用的醯化催化劑。
例如，通過使環孢素A(XIII)與乙醯氯、乙酸乙酯或其組合反應，形成化合物乙醯基環孢素A，將環孢素A的β-醇以乙酸酯形式保護。在另一個實例中，使β-醇經歷親核加成到乙酸酐，形成乙醯基環孢素A和乙酸。這些反應可在二甲氨基吡啶(DMAP)存在下進行，其中過量的乙酸酐作為溶劑使用。
儘管製備乙醯基環孢素A的方法在文獻中已有成熟方法，本領域技術人員將認識到可用非乙酸酯保護基團保護環孢素A的1-胺基酸殘基的β-醇。這些保護基團可包括苯甲酸酯、取代的苯甲酸酯、醚和甲矽烷基醚。在某些反應條件下，乙酸酯保護基團易發生不需要的副反應例如消除和水解。因為在那些同樣反應條件下，苯甲酸酯、醚和甲矽烷基醚時常更抑制此類副反應，最好經常用此類保護基團代替乙酸酯。
在步驟c-ii)中，將保護的式XIV環孢素A轉化為保護的式II環孢素A醛。
該步驟例如可通過使用臭氧氧化劑，隨後通過用還原劑處理形成保護的環孢素A醛(II)進行。臭氧分解步驟在約-80℃至0℃下進行。臭氧分解中使用的溶劑可以為低級醇例如甲醇。還原劑可以為三烷基膦例如三丁基膦、三芳基膦，三烷基胺例如三乙胺，烷基氨基硫化物、硫代硫酸酯或烷基硫醚例如甲硫醚。當三丁基膦用作還原劑時，本領域普通技術人員將知道反應受用量控制(dose-controlled)。
另外，在酮例如乙酸基丙酮或二乙酸基丙酮的存在下，可用單過硫酸鹽，優選過硫酸氫鉀製劑將保護的環孢素A XIV例如乙醯基環孢素A轉化為保護的環孢素A環氧化物製備保護的環孢素A醛(II)。該步驟在有機溶劑中進行，該有機溶劑在這些反應條件下例如乙腈和水中為惰性。加入乙二胺四乙酸二鈉鹽捕集可能存在的任何重金屬離子。優選環氧化反應在pH7以上進行。該環氧化反應後，在酸性條件下，用過碘酸或過碘酸鹽氧化裂解環氧化物。任選氧化和氧化裂解可與後處理步驟組合。Dan Yang等在″A C2SymmetricChiral Ketone for Catalytic Asymmetric Epoxidation of UnfunctionalizedOlefins，″(一種用於催化不對稱環氧化非官能化烯的C2對稱手性酮)J.Am.Chem.Soc.，第118卷，第491-492頁(1996)和″Novel CyclicKetones for Catalytic Oxidation Reactions，″(用於催化氧化反應的新環狀酮)J.Org.Chem.，第63卷，第9888-9894頁(1998)中論述了這些反應。
H.J.Carlsen等在″A Greatly Improved Procedure for RutheniumTetroxide Catalyzed Oxidations of Organic Compounds，″(一種用於四氧化釕催化的有機化合物氧化的顯著改進方法)J.Org.Chem.，第46卷，第19期，第3736-3738頁(1981)論述了基於釕氧化劑的用途。Carlsen等講授歷史上釕金屬的成本提供了開發催化方法的動機，其中最普遍使用的為過碘酸鹽或次氯酸鹽作為化學計量氧化劑。這些研究人員發現在常規使用釕的反應過程中損失催化活性，他們假設這是由於存在羧酸所致。發現在CCl4/H2O/IO4-系統中，向該反應混合物中加入腈，尤其為乙腈可顯著增加氧化裂解烯的速度和程度。
例如，可用保護的環孢素A(XIV)例如乙醯基環孢素A製備保護的環孢素A醛(II)，將其溶於乙腈和水的混合物，然後先加入過碘酸鈉，然後再加入水合氯化釕。醛(II)可用乙酸乙酯萃取。
實施例提供以下製備和實施例以使本領域技術人員能更清楚地理解和實施本發明。它們僅作為本發明的說明和代表，而不應視為限制本發明範圍。
儘管已提供了乙醯基-環孢素A醛烯丙基化-Peterson消除順序的大多數實施例，原則上也可以使用其它保護基團。當然，這受它們與反應條件的相容性和有效除去它們得到(E)-ISA247的可能性的限制。
在以下實施例中，「in ppm rel.to TMS」意指「ppm，相對於TMS」實施例11)製備式III(E)-3-(三甲基甲矽烷基)烯丙基硼酸粗硼酸溶液在室溫下，將20g(169.8mmol，1當量)烯丙基三甲基矽烷(Fluka06073)溶於140ml無水THF(Fluka 87368)。在10min內，加入106.1ml(169.8mmol，1當量)1.6M丁基鋰的己烷(Acros 181270100)溶液，溫度保持在20℃至25℃。反應30min後，將得到的黃色至橙色溶液冷卻至-70℃。在10min內，加入40.24ml(169.8mmol，1當量)硼酸三異丙基酯(Fluka 92085)，保持溫度低於-60℃。在-74℃下反應30min後，將該冷溶液傾入170ml 1M HCL水溶液中。再加入1M HCl水溶液(在該實施例中，26ml)，將pH調節至7-8。加入80ml二氯甲烷進行萃取。水相分離，用80ml二氯甲烷反萃取。有機相繼續用150ml飽和NaCl水溶液洗滌，合併，經Na2SO4乾燥，過濾，減壓濃縮至約40ml。通過加入二氯甲烷將溶液的重量調至53.6g，得到約50％硼酸溶液(以原料烯丙基三甲基矽烷計)。
ii)使乙醯基-環孢素A醛烯丙基化在室溫下，將20g(16.23mmol，1當量)乙醯基-環孢素A醛溶於100ml二氯甲烷。一次性加入25.66g(81.15mmol，5當量)先前製備的硼酸溶液(約50％濃度)。用HPLC監測反應轉化率。在室溫下，反應在1-3小時內完成。得到約85∶15的β-三甲基甲矽烷基醇非對映體混合物。
iii)Peterson消除在反應混合物中直接進行Peterson消除。
加入20ml THF，將反應混合物冷卻至0℃。加入2.7ml(48.69mmol，3當量)濃硫酸。升溫至室溫。反應完成後(約1小時)加入100ml水。分離有機相，用50ml水洗滌2次。水相繼續用50ml二氯甲烷反萃取。合併的有機相經Na2SO4乾燥，過濾，在30℃下減壓濃縮。得到的白色泡沫再溶於250ml MTBE，幾分鐘後開始結晶。在室溫下攪拌15min，在0-2℃下攪拌2小時後，過濾懸浮液。結晶用50ml冷MTBE(-20℃)洗滌，在40-50℃下減壓乾燥，得到19.2g(E)-乙醯基-ISA247，為白色粉末，異構體純度＞98％(400MHz1H NMR)。
可通過在室溫下將固體溶於二氯甲烷，將溶劑換為MTBE(加入MTBE，在40℃下減壓濃縮溶液至原體積一半，重複這些操作2至3次)，重結晶(E)-乙醯基-ISA247。將溶液冷卻至室溫，然後結晶在幾分鐘內開始。懸浮液在室溫下攪拌2h，然後在0℃下攪拌30min。過濾後，分離(E)-乙醯基-ISA247結晶，用MTBE洗滌，在40℃下減壓乾燥。
iv)水解水解E-乙醯基-ISA247，得到(E)-ISA247，雙鍵異構體純度99.5％(用HPLC測定)。
實施例2i)製備式IIIa IIIa(E)-3-(三甲基甲矽烷基)烯丙基硼酸的粗硼酸溶液在室溫下，將6.67ml(40.56mmol，10當量)烯丙基三甲基矽烷溶於33.3ml無水THF。在5min內，加入25.35ml(40.56mmol，10當量)1.6M丁基鋰的己烷溶液，保持溫度在14℃至16℃。在室溫下反應60min後，將得到的黃色至橙色溶液冷卻至-70℃。在10min內，加入9.614ml(40.56mmol，10當量)硼酸三異丙基酯，保持溫度低於-65℃。在-70℃下反應60min後，將該冷溶液傾入35ml 1M HCL水溶液(pH＝7-8)。反應混合物用30ml二氯甲烷萃取。水相分離，用30ml二氯甲烷反萃取。有機相繼續用30ml飽和NaCl水溶液洗滌，合併，經Na2SO4乾燥，過濾，減壓濃縮至約50ml。
ii)製備式IVa′((R，R)-2-[(E)-(3-三甲基甲矽烷基-烯丙基)]-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷-4，5-二甲酸二甲基酯)的硼試劑和使乙醯基-環孢素A醛烯丙基化攪拌下，加入4.88g(40.56mmol，10當量)硫酸鎂二水合物，隨後加入7.23g(40.56mmol，10當量)L-(+)-酒石酸二甲酯。在室溫下攪拌2小時後，將懸浮液冷卻至0℃，一次性加入5g(4.056mmol，1當量)乙醯基-環孢素A醛。反應用HPLC監測(3小時後，約90％轉化)。在0℃下攪拌17小時後，將懸浮液過濾，濾液用50ml半飽和NH4CL水溶液、50ml半飽和NaHCO3水溶液和50ml半飽和NaCl水溶液洗滌。水相用50ml THF反萃取，棄去。合併的有機相經Na2SO4乾燥，過濾，在40℃下減壓濃縮，得到11.1g約75∶25的β-三甲基甲矽烷基醇非對映體混合物，為淺黃色油。
iii)Peterson消除將該粗β-三甲基甲矽烷基醇非對映體混合物(11g，最大4.056mmol)溶於25ml THF。滴加入0.679ml(12.16mmol，3當量)濃硫酸，保持溫度在20℃至25℃。在室溫下2小時後，加入50ml半飽和NaCl水溶液。得到的混合物用50ml MTBE萃取兩次。有機相用50ml半飽和NaCl水溶液洗滌，合併，經Na2SO4乾燥，在40℃下減壓濃縮。將得到的粗E-乙醯基-ISA247再溶於20ml二氯甲烷，減壓濃縮。將粗產物溶於60ml MTBE。結晶在10min內開始。在室溫下，再將懸浮液攪拌15min，在-10℃下攪拌2小時。結晶過濾分離，用20ml冷MTBE(-20℃)洗滌，減壓乾燥，得到3.6g(E)-乙醯基-ISA247，經NMR分析異構體純度約98％。
實施例3i)製備式V2-(E-(3-三甲基甲矽烷基-烯丙基))-[1，3，6，2]二氧雜氮雜硼雜辛環二乙醇胺絡合物將50g(424.5mmol，1當量)烯丙基三甲基矽烷加入反應容器，隨後加入150ml THF。在15min內，向該澄清無色溶液中滴加入165.1ml(445.7mmol，1.05當量)2.7M丁基鋰的庚烷溶液，保持溫度在20℃至26℃。在室溫下反應2小時後，將該橙色溶液冷卻至-78℃。在20min內滴加入105.7ml(445.8mmol，1.05當量)硼酸三異丙基酯，保持溫度低於-60℃。在-70℃下、1小時後，將反應混合物傾入250ml2M鹽酸水溶液(最終pH5-6)。攪拌10min後，水相分離，棄去。將42.4g(403.3mmol，0.95當量)二乙醇胺加入有機相。在室溫下，將溶液攪拌60min。加入750ml庚烷。在40℃下，將該雙相乳液部分減壓濃縮(蒸餾約750ml溶劑)。出現白色沉澱，在室溫下攪拌該懸浮液2小時。將懸浮液過濾。白色固體用125ml庚烷洗滌，在40℃下減壓乾燥過夜，得到85.7g式V二乙醇胺絡合物。
1H NMR(DMSO，in ppm rel.to TMS)6.5(brs，1H)，6.15(dt，1H)5.32.(d，1H)，3.7(m，2H)，3.55(m，2H)，2.95(m，2H)，2.72(m，2H)，1.29(d，2H)，0(s，9H).
11B NMR(DMSO，相對於外標BF3.Et2O)11.1br.s
微量分析(Karl-Fischer滴定測得含0.11當量H2O)計算值C52.43％，H9.71％，N6.12％，B4.72％，Si12.27％實測值C52.04％，H9.63％，N6.36％，B4.79％，Si11.3％ii)烯丙基化在室溫下，將7.375g(32.46mmol，2當量)式V二乙醇胺絡合物、20g(16.23mmol，1當量)乙醯基-環孢素A醛和80ml二氯甲烷加入反應容器中。攪拌下，加入40ml水和2.79ml(48.69mmol，3當量)乙酸。攪拌10min後，得到澄清雙相混合物。反應用HPLC監控。
iii)Peterson消除反應過夜後，有機層分離，棄去水相。將50ml THF加入有機相。溶液在30℃下減壓濃縮至其原體積的一半。加入100ml THF，將溶液濃縮至80ml。用THF將體積調至100ml，將溶液冷卻至0-2℃。在5min內，滴加入1.812ml(32.46mmol，2當量)濃硫酸，保持溫度低於5℃。加入後，撤去反應冷卻浴，溫度升至室溫。反應4小時後，加入40ml水，隨後加入20ml MTBE。水層分離，棄去。有機相用40ml NaHCO3水溶液、20ml飽和NaCl水溶液、40ml飽和NaCl水溶液洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾，在40℃下減壓濃縮。將粗E-乙醯基-ISA247再溶於200ml MTBE，幾分鐘後開始結晶。在室溫下15min，在0℃下2.5小時後，將該懸浮液過濾，結晶用50mlMTBE洗滌，在50℃下減壓乾燥，得到18.45g(E)-乙醯基-ISA247，為白色粉末(經NMR分析異構體純度＞98％)。
iv)水解水解該粗產物，得到(E)-ISA247，經HPLC分析異構體純度為99％。
實施例4i)烯丙基化將按實施例3，i)中所述方法得到的10.02g(44.1mmol，2當量)式V二乙醇胺絡合物和30g(22.05mmol，1當量)乙醯基-環孢素A醛加入反應容器。在室溫下加入36ml乙酸。在室溫下攪拌15min後，得到澄清溶液。反應用HPLC監控。
ii)Peterson消除在室溫下反應約6小時後，加入60ml甲酸，保持溫度低於30℃。在室溫下，將該澄清淺黃色溶液攪拌過夜。加入18ml二氯甲烷和300ml MTBE，隨後加入180ml 10％NaCl水溶液。將水相分離，棄去。有機相用180ml水、300ml 2M NaOH水溶液和90ml水洗滌。有機相在室溫下減壓濃縮。開始結晶，加入300ml MTBE稀釋該懸浮液，濃縮至約330ml。在室溫下攪拌3小時，在0-2℃下攪拌1小時後，將白色懸浮液過濾。結晶用50ml MTBE洗滌，在50℃下減壓乾燥，得到27.4g(E)-乙醯基-ISA247，為白色粉末，NMR分析雙鍵異構體純度＞98％。
iii)水解水解該產物，得到(E)-ISA247，HPLC分析雙鍵異構體純度為99.6％。
實施例5將1g(0.82mmol，1當量)乙醯基-環孢素A醛溶於10ml二氯甲烷，隨後加入369mg(1.62mmol，2當量)按實施例3，i)中所述方法得到的式V二乙醇胺絡合物。將該混濁溶液冷卻至-40℃。加入180μl(369mmol，2當量)乙醚合三氟化硼，保持溫度低於-40℃。在-40℃下、1小時後，撤去冷卻浴，將反應混合物升溫至室溫。在室溫下反應50min後，加入15ml 5％NaHCO3水溶液。使水相分離，用15ml二氯甲烷反萃取。合併的有機相經MgSO4乾燥，過濾，在40℃下減壓濃縮，得到0.99g(E)-乙醯基-ISA247，為雙鍵異構體純度(NMR)＞95％的白色泡沫。
實施例6i)製備式VII4，4，5，5-四甲基-2-(E-(3-三甲基甲矽烷基-烯丙基))-[1.3，2]二氧雜硼雜環戊烷頻哪醇絡合物將20g(169.8mmol，1當量)烯丙基三甲基矽烷溶於60ml THF。在10min內，滴加入69.18ml(186.8mmol，1.1當量)2.7M丁基鋰的庚烷溶液，保持溫度在20℃至26℃。在室溫下反應2小時後，將該黃色溶液冷卻至-78℃。在10min內，滴加入42.26ml(178.3mmol，1.05當量)硼酸三異丙基酯，保持溫度低於-65℃。反應1小時後，將反應混合物傾入100ml 2M鹽酸水溶液(最終pH6-7)。加入20ml二氯甲烷，將水相分離，棄去。有機層經MgSO4乾燥，過濾，濃縮至約100ml。加入20.48g(169.8mmol，1.0當量)頻哪醇，將得到的溶液在室溫下攪拌18小時。將反應混合物在40℃下減壓濃縮，將得到的油在43-50℃、0.2mbar壓力下蒸餾，得到37.2g無色油。
ii)一鍋法烯丙基化/Peterson消除在室溫、攪拌下，將20g(15.06mmol，1當量)乙醯基-環孢素A醛、5.427g(22.59mmol，1.5當量)在i)中得到的頻哪醇絡合物和30ml乙酸加入反應容器。在水浴冷卻下，加入30ml甲酸，保持溫度在20-22℃。在室溫下反應2小時後，加入12ml二氯甲烷和200ml MTBE，隨後加入120ml 10％NaCl水溶液。將水相分離，棄去。有機相用120ml水、204ml 2M NaOH水溶液和60ml水洗滌。將有機相在30℃下濃縮直至開始結晶。加入200ml MTBE，將懸浮液濃縮至約220ml。在室溫下攪拌2小時，在0-2℃下攪拌1小時後，將該懸浮液過濾，固體用30ml MTBE洗滌，在50℃下減壓乾燥，得到18g(E)-乙醯基-ISA247，為雙鍵異構體純度＞98％(NMR)的白色粉末。
iii)水解水解該產物，得到(E)-ISA247，HPLC分析雙鍵異構體純度為99.7％。
實施例7將2g(1.623mmol，1當量)乙醯基-環孢素A醛和779.8mg(3.246mmol，2當量)用實施例6，i)中所述方法得到的硼酸頻哪醇酯溶於20ml二氯甲烷。將溶液冷卻至-70℃，加入1.28ml(10.22mmol，6.30當量)乙醚合三氟化硼。在-70℃下、30min後，將反應混合物緩慢升溫至最高達0℃，使反應0℃下繼續進行60min。加入20ml水。將有機相分離，用20ml 5％NaHCO3水溶液洗滌，經MgSO4乾燥，過濾，在40℃下減壓濃縮，得到2.1g(E)-乙醯基-ISA247，為雙鍵異構體純度＞95％(NMR)的白色泡沫。
實施例8i)製備烯丙基三氟硼酸鹽試劑B-(E-(3-三甲基甲矽烷基-烯丙基))-三氟硼酸鉀在室溫、攪拌下，將5g(21.35mmol，1當量)按實施例3，i)中所述方法得到的二乙醇胺絡合物、20ml二氯甲烷、20ml水和2.44ml(42.70mmol，2當量)乙酸加入反應容器中。攪拌30min後，將水相分離，棄去。將20ml甲醇加入有機相，將溶液在40℃下減壓濃縮至5-10ml。加入40ml甲醇，隨後加入3.34g(42.70mmol，2當量)KHF2。在室溫下攪拌60min後，將剩餘固體過濾，棄去。在40℃下，將濾液減壓濃縮至約25ml。將該溶液冷卻至0-2℃，得到白色懸浮液。在0-2℃下、30min後，將懸浮液過濾，固體用冷甲醇(-20℃)洗滌，在40℃下減壓乾燥，得到3.4g白色粉末。
1H NMR(DMSO，δin ppm rel.to TMS)6.15(1H，dt)，5.15(1H，d)，3.5(2H，br s water)，1.1(2H，m)，0(9H，s).
11B NMR(δppm，相對於BF3.Et2O外標)3.8(q)微量分析C15H13F3BKSi(用Karl-Fischer滴定測得含1.08當量H2O和0.5當量KF)計算值C26.83％，H5.65％，F24.78％，B4.02％，K21.8％，Si10.5％實測值C26.33％，H5.74％，F24.71％，B3.89％，K22％，Si9.93％ii)烯丙基化將2g(1.623mmol，1當量)乙醯基-環孢素A醛溶於10ml二氯甲烷。加入10ml水，隨後加入735mg(3.246mmol，2當量)i)中得到的三氟硼酸鹽。在室溫下攪拌2小時後，將有機相分離，棄去水相。
iii)Peterson消除將5ml THF加入有機相，將該溶液冷卻至0-2℃。加入181μl(3.246，2當量)濃硫酸。將反應混合物升溫至室溫。攪拌過夜後，加入20ml水。將水層分離，棄去。有機相用20ml 5％NaHCO3水溶液洗滌，經MgSO4乾燥，過濾，在40℃下減壓濃縮，得到2g(E)-乙醯基-ISA247，為雙鍵異構體純度＞98％(NMR)的白色泡沫。
實施例9將2g(1.623mmol，1當量)乙醯基-環孢素A醛、735mg(3.246mmol，2當量)按實施例8，i)中所述方法得到的三氟硼酸鹽和20ml二氯甲烷加入反應容器中。將懸浮液冷卻至-70℃，加入1.28ml(10.22mmol，6.3當量)乙醚合三氟化硼。在-70℃下、60min後，加入20ml水。將有機相分離，用20ml 5％NaHCO3水溶液洗滌，經MgSO4乾燥，過濾，在40℃下減壓濃縮，得到2.0g(E)-乙醯基-ISA247，為雙鍵異構體純度＞98％(NMR)的白色泡沫。
實施例10i)用烯丙基鈦試劑烯丙基化將2.67ml(16.23mmol，10當量)烯丙基三甲基矽烷溶於6mlTHF。滴加入10.14ml(16.23mmol，10當量)1.6M丁基鋰的庚烷溶液，保持溫度在14-20℃。在26℃下、30min後，將該橙色溶液冷卻至-75℃。在10min內，滴加入4.8ml(16.23mmol，10當量)四異丙醇鈦，保持溫度低於-68℃。在-77℃下反應1小時後，滴加入2g(1.623mmol，1當量)的6ml THF溶液，保持溫度低於-72℃。在-76℃下，將反應混合物攪拌2小時。緩慢升溫至-40℃，再在-40℃下繼續攪拌2小時。將反應混合物傾入由32.5ml 1M HCL水溶液和20ml MTBE組成的混合物中。加入16.2ml 1M HCL水溶液和25ml水。將水層分離，用25ml MTBE反萃取。有機層用30ml 0.5M HCl水溶液洗滌，合併，經Na2SO4乾燥，過濾，在40℃下減壓濃縮，得到2.26g粗反式β-三甲基甲矽烷基醇非對映體混合物，為白色泡沫。
ii)Peterson消除將粗產物溶於11.15ml THF，加入268μl濃硫酸。將該反應混合物在33℃下加熱1.5小時，然後冷卻至室溫。加入22ml水，反應混合物用22ml MTBE萃取。水相用11ml MTBE反萃取。有機層用11ml水洗滌，合併，經Na2SO4乾燥，過濾，在40℃下減壓濃縮，得到1.89g粗(E)-乙醯基-ISA247，為淺褐色粉末。在室溫下，將粗產物再溶於20ml MTBE。幾分鐘後開始結晶。在室溫下，將懸浮液攪拌30min，在-10℃下攪拌45min，過濾。固體用冷MTBE洗滌，在40℃下減壓乾燥，得到1.02g(E)-乙醯基ISA247，為雙鍵異構體純度約98％(NMR)的白色粉末。
實施例11i)用烯丙基鈦試劑烯丙基化在室溫下，將1.87g(15.85mmol，10當量)烯丙基三甲基矽烷溶於20ml THF。在5min內，滴加入5.87ml(15.85mmol，10當量)2.7M丁基鋰的庚烷溶液，保持溫度在16℃至20℃。在室溫下攪拌1小時後，將該黃色至橙色溶液冷卻至-76℃。在4min內，滴加入4.22g(15.85mmol，10當量)三異丙氧基氯化鈦的10ml THF溶液，保持溫度低於-60℃。在-75℃下，將得到的棕紅色溶液攪拌30min。在5min內，滴加入2g(1.585mmol，1當量)乙醯基-環孢素A醛的10ml THF溶液，保持溫度低於-60℃。在-75℃下、30min後，撤去冷卻浴，在約15min內，將溫度升至-10℃。將反應混合物加入由40ml MTBE和35ml 2M HCL水溶液組成的雙相混合物。將水層分離，棄去。有機相用24ml 1M HCl水溶液、15ml 10％NaCl水溶液、15ml半飽和NaCl水溶液洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾，減壓濃縮，得到2g粗反式β-三甲基甲矽烷基醇非對映體混合物，為固化油狀物。
ii)Peterson消除在室溫下，將粗產物溶於8ml THF。將該溶液冷卻至0-5℃，滴加入200μl濃硫酸。升溫至室溫，將反應混合物攪拌10小時。加入40ml MTBE和15ml水。將水相分離，棄去。有機相用15ml 5％NaHCO3水溶液、15ml半飽和NaCl水溶液洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾，減壓濃縮，得到1.8g粗E-乙醯基-ISA247。將該粗二烯溶於20ml二氯甲烷。加入20ml MTBE，在40℃下，將溶液減壓濃縮至其原體積的一半。最後兩步操作重複進行3次，以便將溶劑自二氯甲烷換為MTBE。將溶液冷卻至室溫，幾分鐘內開始結晶。將該懸浮液在室溫下攪拌2小時，在0℃攪拌30min。懸浮液過濾。固體用15ml MTBE洗滌，在40℃下減壓乾燥，得到1.1g E-乙醯基-ISA247，為雙鍵異構體純度＞95％(NMR)的白色粉末。
實施例12i)用烯丙基鋁試劑進行烯丙基化在室溫下，將1.87g(15.85mmol，10當量)烯丙基三甲基矽烷溶於20ml THF。在5min內，滴加入5.87ml(15.85mmol，10當量)2.7M丁基鋰的庚烷溶液，保持溫度在20℃至25℃。在室溫下攪拌1小時後，將該黃色至橙色溶液冷卻至-75℃。在10min內，加入8.6ml(15.85mmol，10當量)25％二乙基氯化鋁的甲苯溶液，保持溫度低於-55℃。在-75℃下，將得到的澄清無色溶液攪拌30min。在5min內，滴加入2g(1.585mmol，1當量)乙醯基-環孢素A醛的10ml THF溶液，保持溫度低於-60℃。在-75℃下、30min後，撤去冷卻浴，在15min內升溫至-10℃。將反應混合物緩慢加入(在冷水浴冷卻的10℃下)由40ml MTBE和35ml 1M HCl水溶液組成的雙相混合物中。水層分離，棄去。有機相用35ml 1M HCl水溶液、25ml水、25ml飽和NaCl水溶液洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾，減壓濃縮，得到2g粗反式β-三甲基甲矽烷基醇非對映體混合物，為固化油。
ii)Peterson消除在室溫下，將該粗產物溶於10ml THF。將該溶液冷卻至0-5℃，滴加入200μl濃硫酸。升溫至室溫，將反應混合物攪拌過夜。加入40ml MTBE和15ml水。水相分離，棄去。有機相用15ml水、15ml 5％NaHCO3水溶液、15ml半飽和NaCl水溶液洗滌，過濾，減壓濃縮，得到1.8g粗E-乙醯基-ISA247。將該粗二烯再溶於35ml MTBE。幾分鐘內開始結晶。將該懸浮液在室溫下攪拌2小時，在0℃下攪拌30min。將懸浮液過濾。固體用15ml MTBE洗滌，在40℃下減壓乾燥，得到1g E-乙醯基-ISA247，為雙鍵異構體純度＞95％(NMR)的白色粉末。
實施例13製備式IIIa(E)-3-(三甲基甲矽烷基)烯丙基硼酸的硼試劑溶液將2g(8.8mmol，1當量)按實施例3-i)製備的式V二乙醇胺絡合物溶於16ml d2-二氯甲烷(氘代二氯甲烷)。加入759μl(13.2mmol，1.5當量)乙酸，隨後加入4ml水。在室溫下，將該雙相混合物攪拌20min，得到淺黃色澄清雙相混合物。停止攪拌，將水相分離，棄去。有機相(16ml體積)包含式IIIa硼酸溶液，經11B NMR和1H NMR證實。
11B NMR(δppm相對於BF3.Et2O外標)31.71H NMR(CD2Cl2，δppm，相對於TMS)6.1(1H，dt)，5.6(1H，d)，1.77(2H，d)，0(9H，s)。
實施例14製備式IVa′(R，R)-2-[(E)-(3-三甲基甲矽烷基-烯丙基)]-[1，3，2]二氧雜硼雜環戊烷-4，5-二甲酸二甲基酯的硼試劑溶液向4ml(2.2mmol，1當量)按實施例13所述方法製備的式IIIa硼酸溶液中加入396mg(2.2mmol，1當量)L-(+)-酒石酸二甲基酯和265mg(2.2mmol，1當量)硫酸鎂二水合物。在室溫下，將懸浮液攪拌40min，過濾。濾液經NMR分析表明，所含主要產物為式IVa′硼酸酯，經11B和1H NMR信號一致證實。
11B NMR(CD2Cl2，，δppm，相對於BF3.Et2O外標)34.21H NMR(CD2Cl2，δppm，相對於TMS)6.07(1H，dt)，5.64(1H，d)，1.93(2H，d)，0(9H，s)。
實施例15將E-乙醯基-ISA247水解為E-ISA247在室溫下，將15g(11.94mmol，1當量)E-乙醯基-ISA247溶於270ml甲醇。加入14.85g(107.5mmol，9當量)碳酸鉀的60ml水溶液，保持溫度低於27℃。將該白色懸浮液加熱至30℃。反應用HPLC監測。反應22小時後，在40℃下減壓蒸發甲醇。將殘餘物溶於150ml乙酸乙酯。將水相分離，棄去。有機相用45ml 5％檸檬酸水溶液和45ml半飽和NaCl水溶液洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾，在40℃下減壓濃縮，得到15.1g E-ISA247(85％含量)。純化可通過色譜技術如製備HPLC進行。
實施例16i)製備式VII4，4，5，5-四甲基-2-(E-(3-三甲基甲矽烷基-烯丙基))-[1，3.2]二氧雜硼雜環戊烷的頻哪醇絡合物將100g烯丙基三甲基矽烷(1當量)加入反應器1，隨後加入300ml THF。將該溶液冷卻至10-15℃，加入374ml 2.5M丁基鋰的庚烷溶液(1.1當量)，保持溫度低於25℃(約30min)。在20-25℃下、1-2小時後，將該黃色至橙色溶液冷卻至-50℃。滴加入173g硼酸三異丙基酯(1.05當量)，保持溫度低於-40℃(約30-45min)。用25ml THF洗滌滴液漏鬥。在-50℃至-40℃下、30min至1小時後，加入102.4g頻哪醇(1當量)的100ml THF溶液，保持溫度低於-30℃。用25ml THF洗滌滴液漏鬥。在-50℃至-30℃下、30min後，攪拌下將反應器1的內容物傾入61.2g AcOH(1.2當量)和250ml水的混合物(盛在反應器2)中，保持溫度在0-25℃。反應器1用50ml THF洗滌。
停止在反應器2中攪拌，將水相分離，棄去。有機層用250ml水洗滌。將有機相濃縮至約500ml(Ti＝20-40℃，150-200mbar)。加入500ml甲苯，將有機相濃縮至500ml(Ti＝40-50℃，Tj＝50℃，150-40mbar)。加入500ml甲苯，將有機相濃縮至恆定體積(Ti＝40-50℃，Tj＝50℃，150-10mbar)，得到粗頻哪醇絡合物，收率＞90％。該絡合物可直接用於烯丙基化-Peterson消除順序，或可減壓蒸餾(Ti＝約65℃，Tdest＝約50℃，P＝0.05-0.15mbar)。
ii)一鍋法烯丙基化-Peterson消除將40g乙醯基保護的CsA-醛加入加料容器，隨後加入80ml乙酸異丙酯。將該懸浮液轉入反應器中。加料容器用50ml乙酸洗滌，轉入反應器。然後得到澄清溶液。加入頻哪醇絡合物(1.25-1.5當量)。將該澄清溶液加熱至40℃。加入50ml甲酸。經HPLC分析證實烯丙基化和Peterson消除完成後(約15-20小時後)，加入246ml乙酸異丙酯。該反應混合物用200ml水、300g 2M KOH水溶液(將水相pH調至5-8，如需要再加入KOH溶液)和200ml 5％甲酸銨水溶液洗滌兩次。將有機相濃縮至約120ml(Ti＝約40℃，約200mbar)，用300ml甲醇稀釋。將有機相濃縮至約120ml(Ti＝約40℃，200mbar)，用240ml甲醇稀釋(Ti＝約40℃，200mbar)。將有機相濃縮至約280ml。在20-25℃下，約60min內，加入130ml水。在室溫下，將得到的白色懸浮液攪拌60min。將固體過濾分離，用52ml水/甲醇混合物洗滌兩次，真空乾燥(T＝50℃)至恆重，得到E-乙醯基-ISA247(約35g)。
權利要求
1.一種製備式I環孢素A類似物的方法 所述方法包括a-i)使式II化合物 ，其中Pg為保護基團，且虛線表示該化合物的其餘部分具有與式I化合物相應部分相同的結構，用式III化合物烯丙基化 ，其中R1為氫、C1-8烷基或C3-8環烷基和/或當R1為氫時，式III化合物為三聚體或a-ii)用其中R2為C1-8烷基或C3-8環烷基的式IV化合物將式II化合物烯丙基化； 或a-iii)用式V化合物將式II化合物烯丙基化 或a-iv)用式VI化合物將式II化合物烯丙基化 或a-v)用式VII化合物將式II化合物烯丙基化 或a-vi)用通過包含以下步驟的方法得到的反應混合物將式II化合物烯丙基化；i)使烯丙基三甲基矽烷與丁基鋰反應形成三甲基甲矽烷基烯丙基鋰；ii)使三甲基甲矽烷基烯丙基鋰與硼酸三異丙基酯或硼酸三甲酯反應，然後進行水後處理，或a-vii)用通過三甲基甲矽烷基烯丙基鋰與二乙基氯化鋁反應得到的反應混合物將式II化合物烯丙基化，或a-viii)用通過三甲基甲矽烷基烯丙基鋰與四異丙醇鈦或三異丙氧基氯化鈦反應得到的反應混合物將式II化合物烯丙基化，形成式XI化合物； 其中Pg定義同上；和b)將式XI化合物轉化為式I環孢素A類似物。
2.權利要求1的方法，其中步驟b)進行如下b-i)在酸性條件下，將式XI化合物轉化為式XII化合物 其中Pg定義同權利要求1；和b-ii)將式XII化合物的PgO基團轉化為羥基。
3.權利要求1或2的方法，其中Pg為乙醯基。
4.權利要求3的方法，其中步驟a-i)、a-ii)或a-vi)在酒石酸酯的存在下進行。
5.權利要求3的方法，其中步驟a-i)、a-ii)或a-vi)在二氯甲烷或甲苯中進行。
6.權利要求3的方法，其中步驟a-iii)在BF3.Et2O、甲酸、乙酸或酒石酸酯的存在下進行。
7.權利要求6的方法，其中步驟a-iii)在水/二氯甲烷或水/甲苯中進行。
8.權利要求6的方法，其中步驟a-iii)和b-i)在二氯甲烷或四氫呋喃中並在BF3.Et2O存在下進行。
9.權利要求6的方法，其中步驟a-iii)在乙酸和/或甲酸中進行；或在乙酸和/或甲酸與一種或兩種選自二氯甲烷和四氫呋喃的共溶劑的混合物中進行。
10.權利要求9的方法，其中步驟a-iii)在乙酸中進行，且步驟b-i)通過向所述反應混合物中加入甲酸進行。
11.權利要求9的方法，其中步驟a-iii)和b-i)在甲酸或乙酸/甲酸中進行。
12.權利要求1或2的方法，其中步驟a-iv)在水/二氯甲烷或水/甲苯中進行。
13.權利要求3的方法，其中步驟a-iv)和b-i)在BF3.Et2O存在下，在二氯甲烷、四氫呋喃或甲苯中進行。
14.權利要求3的方法，其中步驟a-v)在BF3.Et2O存在下進行。
15.權利要求14的方法，其中步驟a-v)和b-i)在二氯甲烷、四氫呋喃或甲苯中並在BF3.Et2O存在下進行。
16.權利要求3的方法，其中步驟a-v)在甲酸或乙酸存在下進行。
17.權利要求16的方法，其中步驟a-v)和b-i)在甲酸或乙酸/甲酸中進行。
18.權利要求17的方法，其中步驟a-v)和b-i)在乙酸/甲酸和共溶劑的混合物中進行，所述共溶劑選自二氯甲烷、甲苯、乙酸乙酯和乙酸異丙酯。
19.權利要求18的方法，其中共溶劑為乙酸異丙酯。
20.權利要求16的方法，其中步驟a-v)在乙酸中進行，且步驟b-i)通過向所述反應混合物中加入甲酸進行。
21.權利要求3的方法，其中步驟a-vii)通過用反應混合物將式II化合物烯丙基化進行，該反應混合物通過使三甲基甲矽烷基烯丙基鋰與二乙基氯化鋁反應製備。
22.權利要求3的方法，其中步驟a-viii)通過用反應混合物將式II化合物烯丙基化進行，該反應混合物通過使三甲基甲矽烷基烯丙基鋰與四異丙醇鈦或三異丙氧基氯化鈦反應製備。
23.一種製備式IIIa和/或其三聚體的方法， 所述方法包括在二氯甲烷中使式V化合物與水反應。
24.一種式V化合物
25.一種製備式V化合物的方法，所述方法包括i)使烯丙基三甲基矽烷與丁基鋰反應形成三甲基甲矽烷基烯丙基鋰；ii)使三甲基甲矽烷基烯丙基鋰與硼酸三異丙基酯或硼酸三甲基酯反應；iii)進行水後處理；和iv)使iii)中形成的化合物與二乙醇胺反應形成式V化合物。
26.一種式VI化合物
27.一種製備式VI化合物的方法，所述方法包括i)使式V化合物與水反應形成式IIIa化合物 和ii)將步驟i)中得到的反應混合物中分離有機相的溶劑換為甲醇，iii)使步驟ii)中得到的式IIIa化合物溶液與KHF2反應形成式VI化合物。
28.一種式IVa化合物
全文摘要
本發明涉及一種新的製備式I環孢素A類似物的方法，該方法包括，a)用烯丙基金屬試劑將保護的環孢素A醛烯丙基化，和b)將步驟a)得到的化合物轉化為式I環孢素A類似物。具體地講，所述烯丙基試劑為三甲基甲矽烷基－烯丙基硼酸酯或含鋁或鈦的三甲基甲矽烷基－烯丙基有機金屬化合物。
文檔編號C07F5/02GK1798759SQ200480015423
公開日2006年7月5日 申請日期2004年4月2日 優先權日2003年4月8日
發明者J·-M·亞當, M·阿貝爾, S·雅亞拉曼 申請人:伊索技術公司