馬鈴薯致病疫黴Δ6去飽和酶基因PinD6的克隆及其應用的製作方法

2023-06-10 10:52:41

專利名稱：馬鈴薯致病疫黴Δ6去飽和酶基因PinD6的克隆及其應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及在馬鈴薯致病疫黴(Phytophthora infestans)超長鏈多不飽和脂肪酸合成代謝途徑中Δ6去飽和酶基因PinD6的克隆、功能鑑定與應用，屬於分子生物學和生物技術領域。
背景技術：
超長鏈多不飽和脂肪酸，一般含20-22個碳、4-6個順式雙鍵，例如花生四烯酸 (ΑΑ,20:4Δ5'8'11'14)>ΕΡΑ(20:5Δ8'11'14'17)以及 DH/U226 Δ4』7a°』13』16』19)對人類營養和健康具有重要的作用。經常補食EPA和DHA這類脂肪酸不僅對胎、嬰幼兒大腦皮層及神經元的發育具有重要作用(Crawford，2000)，而且能夠降低心腦血管疾病、高血壓以及炎症等疾病的發病率(Thies et al. ,2003 ；Kinsella et al. , 1990 ；Yamazaki et al.，1992)。目前，這類脂肪酸主要來源於深海魚油。由於過度捕撈，導致海洋野生魚資源日益枯竭，魚油產量已經不能夠滿足人們正迅速增長的需要(Pauly et al.，2003)。此外，由於環境汙染等，導致魚油中重金屬離子與有機氯等有毒物質的含量升高，嚴重影響魚油的食用安全性(Yokoo et al. ,2003 ；Drexler et al.，2003)。因此，迫切需要一條持續、穩定、安全的魚油替代生產途徑。高等植物能夠大量合成亞油酸(LA，18:2A9』12)和亞麻酸(ALA，183 Δ9』12』15)，但是不能夠合成超長鏈多不飽和脂肪酸。一些真菌和微藻等能夠將自身的LA和ALA通過「 Δ 6 去飽和途徑」中的一系列鏈延長酶和去飽和酶催化作用轉化生成EPA和DHA。LA和ALA 在Δ 6去飽和酶的催化作用下，生成Y-亞麻酸(GLA，18:3A6』9』12)和十八碳四烯酸(SDA， 18:4Δ6』9』 2』 5)，然後再在Δ 6鏈延長酶催化作用下生成二高-Y-亞麻酸(DGLAJOJA8』11』 14)和二十碳四烯酸(ΕΤΑ，20:4Δ8』"』14』17)。最後，在Δ5去飽和酶催化作用下生成AA和ΕΡΑ。 EPA經過一次Δ 5鏈延長和一次Δ 4去飽和生成DHA。通過代謝基因工程技術將海洋微藻或真菌中的超長鏈多不飽和脂肪酸合成代謝途徑移植到植物中，從而在植物特別是油料作物種子中生產此類脂肪酸，將是一條理想的魚油替代生產途徑。目前，此合成代謝途徑中的相關基因已經陸續在高等植物、海藻、真菌、 線蟲、苔蘚以及動物等克隆到(Yadav et al.，1993 ；Wallis and Browse, 1999 ；Qi et al.， 2002 ；Michaelson et al.,1998 ；Sayanova et al. ,2006 ；Kajikawa et al. ,2006；Choet al.，1999 ；Sperling et al.，2000 ；Leonard et al.，2000 ；Watts and Browse, 1999)，並都已申請專利保護。儘快發掘克隆這類基因資源，獲得具有自主智慧財產權的基因，為我國通過轉基因技術在油料作物中生產此類保健脂肪酸奠定基礎，是本項發明創造的重要目的。

發明內容
本發明首先提取馬鈴薯致病疫黴總RNA，反轉錄成cDNA後，用引物 5，-ATGGTGGACGGCCCCAAG-3，和 5，-TTACATGGCGGGAAACTC-3，做 PCR，將擴增的片段膠回收後，連接到克隆載體PMD18-T中。生物信息學分析，得到的cDNA片段開放閱讀框部分為1371bp，編碼456個胺基酸的多肽，具備「front-end」去飽和酶所具有的N端細胞色素沾結構域(HPGG)，以及和電子傳遞有關的三個組氨酸框結構域(HxxxH、Hxxffi^nLNxQxxHHLFP)。 該基因cDNA序列如下 序列表
(I)SEQ ID NO. 1 的信息
(a)序列特徵 *長度1371鹼基對 *類型核酸 *鏈型雙鏈 *拓撲結構線性
(b)分子類型cDNA
(c)假設否
(d)反義否
(e)最初來源馬鈴薯致病疫黴(Phytophthorainfestans)(f)序列描述=SEQ IN NO. 1
1 ATGGTGGACGGCCCCAAGACCAAGCGCAAGATCTCGTGGCAGGAGGTCAAGCAGCACGCG
61 TCGTACGACAATGCGTGGATTGTCATCCACCACAAGGTCTACGACATCAGCAAATGGGAC
121GCCCACCCGGGCGGCATGGTCATGCTCTCCCAGGCGGGTGAAGATGCCACGGATATCTTC
181ACTGTGTGCCACCCGACGAGCTCCTGGAAGCAGCTAGAGCAGTTCTACATCGGCGACGTG
241GATGAGAGCACGGCGACGGTCAACGAGGACCTCTCGGAGGAGGAGAAGGCTAAGAAAGCC
301AAGACCGACGAGTTCATCAGCGCGTACCGTCGTCTACGTATCAAGATTAAGGGCATGGGC
361CTCTATGACGCCAGTATGGTCTTCTACGCGTGGAAAATCCTCAGCACGTTCGGTCTCTGG
421ATGGCTTCTGCTGCTATCTGCTGGCACTTTGACAGTTGGCCCATGTACATGCTCGCAGCG
481TGTGTCATGGGTCTCTTCTGGCAGCAATCCGGCTGGCTGGCACACGACGTGCTGCACCAT
541CAAGTGTGGGACAACCACATGATTGGCAACGTCATGGGCGTCATTATCGGTGACGTCTGG
601ATGGGATTCAGTGTGCAGTGGTGGAAGAACAAGCACAACTTCCACCACGCCGTGCCCAAC
661CTTATTGGGGACGAAAAAACAAAGTATTTGGGTGACCCGGACATCGATACCATGCCATTG
721TTGGCTTGGAGCAAGCACATGGCGTCGAAAGCCTACGAGTCGAGCTGGGGTCCGTTCTTT
781GTGGGCCACCAGGCTGTCATCTACTTTCCGTTGCTACTCTTCGCTCGCTTCAGCTGGCTG
841TTGCAGAGTTACTACTACGTCTTCAAAGGCTTCGCGTTCGGTAAATACGACCCCGTGGAT
901CTTCCGAATGGCGAGAAAGTCGGCCTCATGTTGCACTACATTTGGAACGTTATGTTGCCC
961 GTTGTCACGG GCATGTCGGT GGCTCAGGGT CTGGCCTTCT TTATGCTCGC GCAAATGTCG 1021TGTGGCGGCT TCCTGGCTGC TGTCTTTAGT GTGGGCCACA ACGGTATGTC GGTGTATGAG 1081CGTGAAGACA AGCCCGACTT CTGGCAGTTG CAGGTCACCA CTACGCGCAA CATTACGCCG 1141GGCTTCTTCA TGGACTGGTT CTGTGGCGGT CTCAACTATC AGATCGAGCA CCATCTGTTC 1201CCTATGATGC CGCGTCACAA CCTGCAAAAG GTTAACCCAC TGGTCAAGTC GCTGTGCAAG 1261CAGTATGACG TGCGTTTCCA CGAGACGGGA TTCTACCGCG GTCTCGTTGA GGTTGTGGAC 1321GAGCTGGCCG ACATCAGCAA GGAATTCCTG CTCGAGTTTC CCGCCATGTA A (2) SEQ IN NO. 2 的信息
(a)序列特徵
*長度456胺基酸
*類型氨基1g
*鏈型單鏈
*拓撲結構線性
(b)分子類型蛋白質
序列描述
MET Val AspGlyProLysThrLysArgLysIleSerTrpGlnGlu
151015
Val Lys GlnHisAlaSerTyrAsp AsnAlaTrpIleValIleHis
202530
His Lys ValTyrAspIleSerLys TrpAspAlaHisProGlyGly
354045
MET Val METLeuSerGlnAlaGly GluAspAlaThrAspIlePhe
50560
Thr Val CysHisProThrSerSerTrpLysGlnLeuGluGlnPhe
657075
Tyr Ile GlyAspValAspGluSerThrAlaThrValAsnGluAsp
808590
Leu ber GluGluGluLysAlaLys LysAlaLysThrAspGluPhe
95100105
Ile Ser AlaTyrArgArgLeuArgIleLysIleLysGlyMETGly
110115120
Leu iyr AspAlaSerMETValPheTyrAlaTrpLysIleLeuSer
125130135
Thr Phe GlyLeuTrpMETAlaSerAlaAlaIleiysTrpHisPhe
140145150
Asp ber TrpProMETTyrMETLeuAlaAlaiysValMETGlyLeu
155160165
Phe Trp GlnGlnSerGlyTrpLeuAlaHisAspValLeuHisHis
170175180
Gln Val TrpAspAsnHisMETIleGlyAsnValMETGlyValIle
181185190195
Ile Gly AspValTrpMETGlyPheSerValGlnTrpTrpLysAsn
196200205210
Lys His AsnPheHisHisAlaValProAsnLeuIleGlyAspGlu
211215220225
Lys mr LysTyrLeuGlyAspProAspIleAspThrMETProLeu
230235240CN 102191257 A說 明 書4/9頁Leu Ala Trp Ser Lys His MET Ala Ser Lys Ala Tyr Glu Ser Ser245250255Trp Gly Pro Phe Phe Val Gly His Gln Ala Val Ile Tyr Phe Pro260265270Leu Leu Leu Phe Ala Arg Phe Ser Trp Leu Leu Gln Ser Tyr Tyr275280285Tyr Val Phe Lys Gly Phe Ala Phe Gly Lys Tyr Asp Pro Val Asp290295300Leu Pro Asn Gly Glu Lys Val Gly Leu MET Leu His Tyr Ile Trp305310315Asn Val MET Leu Pro Val Val Thr Gly MET Ser Val Ala Gln Gly320325330Leu Ala Phe Phe MET Leu Ala Gln MET Ser Cys Gly Gly Phe Leu335340345Ala Ala Val Phe Ser Val Gly His Asn Gly MET Ser Val Tyr Glu350355360Arg Glu Asp Lys Pro Asp Phe Trp Gln Leu Gln Val Thr Thr Thr36537375Arg Asn Ile Thr Pro Gly Phe Phe MET Asp Trp Phe Cys Gly Gly38038390Leu Asn Tyr Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro MET MET Pro Arg395400405His Asn Leu Gln Lys Val Asn Pro Leu Val Lys Ser Leu Cys Lys410415420Gln Tyr Asp Val Arg Phe His Glu Thr Gly Phe Tyr Arg Gly Leu42543435Val Glu Val Val Asp Glu Leu Ala Asp Ile Ser Lys Glu Phe Leu440445450Leu Glu Phe Pro Ala MET455用HindI和脅31從り1018ゴ載體切下該片段，插入到酵母表達載體り￥￡32中的 6八し1啟動子的下遊。將構建好的酵母表達載體pYES2-PinD6轉入釀酒酵母YPH500。在半 乳糖的誘導下，發現該cDNA編碼的蛋白能夠將LA和ALA分別轉化成GLA和SDA，具有A 6 去飽和酶活性，故將此基因命名為PinD6。根據上述技術，從馬鈴薯致病疫黴中分離到的八6去飽和酶基因？11106，其編碼的 蛋白具有A 6去飽和酶活性，能夠將LA和ALA分別轉化成GLA和SDA，這是通過轉基因技術 利用植物LA和ALA生產EPA、DHA等超長鏈多不飽和脂肪酸的合成代謝途徑中重要ー步反 應。因此，該酶在通過轉基因技術在油料作物中生產超長鏈多不飽和脂肪酸具有重要的應 用價值，可以用在植物特別是油料作物中生產魚油。

圖1是PCR擴增馬鈴薯致病疫黴Δ 6去飽和酶基因PinD6的cDNA瓊脂糖凝膠電泳圖片M代表分子量標記，1代表PinD6cDNA條帶圖2是酵母表達載體pYES_PinD6構建示意圖及酶切驗證圖A代表pYES2-PinD6載體構建示意圖，B代表HindIII和)(bal酶切驗證圖；M代表分子量標記，2代表線性化pYES2載體條帶，3代表PinD6cDNA條帶圖3是釀酒酵母YPH500 (含pYES2-PinD6)添加脂肪酸底物LA (18 2n6)在不誘導 /誘導條件下氣相色譜檢測圖橫坐標表示保留時間，縱坐標表示信號強度；-GAL+LA表示不添加半乳糖誘導但添加脂肪酸底物LA，+GAL+LA表示添加半乳糖誘導並添加脂肪酸底物LA ；色譜峰上的數字表示檢測到的脂肪酸成分，16:0，軟脂酸；16:1，軟油酸；18:0，硬脂酸；18:1，油酸；18:2，亞油酸；18:3, Y-亞麻酸。圖4是釀酒酵母ΥΡΗ500 (含pYES2-PinD6)添加脂肪酸底物ALA (18 3n;3)在不誘導/誘導條件下氣相色譜檢測圖橫坐標表示保留時間，縱坐標表示信號強度；-GAL+ALA表示不添加半乳糖誘導但添加脂肪酸底物ALA，+GAL+ALA表示添加半乳糖誘導並添加脂肪酸底物ALA ；色譜峰上的數字表示檢測到的脂肪酸成分，16:0，軟脂酸；16:1，軟油酸；18:0，硬脂酸；18:1，油酸；18:3， 亞麻酸；18:4，十八碳四烯酸。(五)具體發明實施方式實施例1 馬鈴薯致病疫黴Δ 6去飽和酶基因PIND6的獲得1.馬鈴薯致病疫黴的培養接種馬鈴薯致病疫黴到新鮮的燕麥培養基，20度，黑暗培養。2.總RNA的提取收集生長15天左右的菌絲體，利用TRIZOL法(Invitrogen)提取總RNA。3.取 2 微克總 RNA，用 MMLV Reverse Transcriptase(Promega)反轉錄成單鏈 cDNA。4.以所獲得的馬鈴薯致病疫黴的cDNA為模板，用引物 5，-ATGGTGGACGGCCCCAAG-3，和 5，-TTACATGGCGGGAAACTC-3，做 PCR。PCR 體系ddH20 35. 5 μ 1 ； IOxPCRbuffer (含 Mg2+) 5 μ 1 ； dNTP(2. 5mM)4y 1 ；引物(5 μ Μ)各 2μ 1 ；模板 1 μ 1 ； Taq酶0. 5 μ 1。反應條件94°C預變性3分鐘；94°C變性30秒，58°C退火30秒，72°C延伸1 分鐘，35個循環；72°C延伸10分鐘。將擴增的片段膠回收後，連接到克隆載體PMD18-T中。5.序列測定本工作在上海生工生物工程技術服務有限公司進行。獲得一條 1371bp 的 cDNA 片段。6.同源檢索利用BLAST軟體將上述獲得的cDNA片段編碼的胺基酸序列與基因銀行中的序列進行比較，發現它具有「front-end」去飽和酶的細胞色素沾結構域HPGG和與電子傳遞有關的富含組氨酸的保守區域HxxHH、HxxHH、LNxQxxHHLFP，確定它屬於脂肪酸去飽和酶基因。實施例2 馬鈴薯致病疫黴Δ 6去飽和酶基因PinD6，如下序列(I)SEQ ID NO. 1 的信息
(a)序列特徵*長度1371鹼基對*類型核酸*鏈型雙鏈*拓撲結構線性(b)分子類型cDNA(c)假設否(d)反義否(e)最初來源馬鈴薯致病疫黴(Phytophthora infestans)(f)序列描述=SEQIN NO. 11 ATGGTGGACG GCCCCAAGAC CAAGCGCAAG ATCTCGTGGC AGGAGGTCAA GCAGCACGCG61 TCGTACGACA ATGCGTGGAT TGTCATCCAC CACAAGGTCT ACGACATCAG CAAATGGGAC121GCCCACCCGG GCGGCATGGT CATGCTCTCC CAGGCGGGTG AAGATGCCAC GGATATCTTC181ACTGTGTGCC ACCCGACGAG CTCCTGGAAG CAGCTAGAGC AGTTCTACAT CGGCGACGTG241GATGAGAGCA CGGCGACGGT CAACGAGGAC CTCTCGGAGG AGGAGAAGGC TAAGAAAGCC301AAGACCGACG AGTTCATCAG CGCGTACCGT CGTCTACGTA TCAAGATTAA GGGCATGGGC361CTCTATGACG CCAGTATGGT CTTCTACGCG TGGAAAATCC TCAGCACGTT CGGTCTCTGG421ATGGCTTCTG CTGCTATCTG CTGGCACTTT GACAGTTGGC CCATGTACAT GCTCGCAGCG481TGTGTCATGG GTCTCTTCTG GCAGCAATCC GGCTGGCTGG CACACGACGT GCTGCACCAT541CAAGTGTGGG ACAACCACAT GATTGGCAAC GTCATGGGCG TCATTATCGG TGACGTCTGG601ATGGGATTCA GTGTGCAGTG GTGGAAGAAC AAGCACAACT TCCACCACGC CGTGCCCAAC661CTTATTGGGG ACGAAAAAAC AAAGTATTTG GGTGACCCGG ACATCGATAC CATGCCATTG721TTGGCTTGGA GCAAGCACAT GGCGTCGAAA GCCTACGAGT CGAGCTGGGG TCCGTTCTTT781GTGGGCCACC AGGCTGTCAT CTACTTTCCG TTGCTACTCT TCGCTCGCTT CAGCTGGCTG841TTGCAGAGTT ACTACTACGT CTTCAAAGGC TTCGCGTTCG GTAAATACGA CCCCGTGGAT901 CTTCCGAATG GCGAGAAAGT CGGCCTCATG TTGCACTACA TTTGGAACGT TATGTTGCCC961 GTTGTCACGG GCATGTCGGT GGCTCAGGGT CTGGCCTTCT TTATGCTCGC GCAAATGTCG1021TGTGGCGGCT TCCTGGCTGC TGTCTTTAGT GTGGGCCACA ACGGTATGTC GGTGTATGAG1081CGTGAAGACA AGCCCGACTT CTGGCAGTTG CAGGTCACCA CTACGCGCAA CATTACGCCG1141GGCTTCTTCA TGGACTGGTT CTGTGGCGGT CTCAACTATC AGATCGAGCA CCATCTGTTC1201CCTATGATGC CGCGTCACAA CCTGCAAAAG GTTAACCCAC TGGTCAAGTC GCTGTGCAAG1261CAGTATGACG TGCGTTTCCA CGAGACGGGA TTCTACCGCG GTCTCGTTGA GGTTGTGGAC1321GAGCTGGCCG ACATCAGCAA GGAATTCCTG CTCGAGTTTC CCGCCATGTA A(3) SEQ IN NO. 2 的信息(a)序列特徵*長度456胺基酸*類型胺基酸
0166]*鏈型單鏈
0167]*拓撲結構線性
(b)分子類型蛋白質(c)序列描述 IMET Val Asp Gly Pro Lys Thr Lys Arg Lys lie Ser Trp Gln Glu
0170]1510150171]ValLysGlnHisAlaSerTyrAspAsnAlaTrplieVallieHis0172]162025300173]HisLysValTyrAsplieSerLysTrpAspAlaHisProGlyGly0174]313540450175]METValMETLeuSerGlnAlaGlyGluAspAlaThrAspliePhe0176]465055600177]ThrValCysHisProThrSerSerTrpLysGlnLeuGluGlnPhe0178]616570750179]TyrlieGlyAspValAspGluSerThrAlaThrValAsnGluAsp0180]768085900181]LeuSerGluGluGluLysAlaLysLysAlaLysThrAspGluPhe0182]91951001050183]lieSerAlaTyrArgArgLeuArglieLyslieLysGlyMETGly0184]1061101151200185]LeuTyrAspAlaSerMETValPheTyrAlaTrpLyslieLeuSer0186]1211251301350187]ThrPheGlyLeuTrpMETAlaSerAlaAlalieCysTrpHisPhe0188]1361401451500189]AspSerTrpProMETTyrMETLeuAlaAlaCysValMETGlyLeu0190]1511551601650191]PheTrpGlnGlnSerGlyTrpLeuAlaHisAspValLeuHisHis0192]PheTrpGlnGlnSerGlyTrpLeuAlaHisAspValLeuHisHis0193]1701751800194]GlnValTrpAspAsnHisMETlieGlyAsnValMETGlyVallie0195]1811851901950196]lieGlyAspValTrpMETGlyPheSerValGlnTrpTrpLysAsn0197]1962002052100198]LysHisAsnPheHisHisAlaValProAsnLeulieGlyAspGlu0199]2112152202250200]LysThrLysTyrLeuGlyAspProAsplieAspThrMETProLeu0201]2302352400202]LeuAlaTrpSerLysHisMETAlaSerLysAlaTyrGluSerSer0203]2452502550204]TrpGlyProPhePheValGlyHisGlnAlaVallieTyrPhePro0205]260265270
Leu Leu Leu Phe Ala Arg Phe Ser Trp Leu Leu Gln Ser Tyr Tyr275280285Tyr Val Phe Lys Gly Phe Ala Phe Gly Lys Tyr Asp Pro Val Asp290295300Leu Pro Asn Gly Glu Lys Val Gly Leu MET Leu His Tyr Ile Trp305310315Asn Val MET Leu Pro Val Val Thr Gly MET Ser Val Ala Gln Gly320325330Leu Ala Phe Phe MET Leu Ala Gln MET Ser Cys Gly GlyPhe Leu335340345Ala Ala Val Phe Ser Val Gly His Asn Gly MET Ser Val Tyr Glu350355360Arg Glu Asp Lys Pro Asp Phe Trp Gln Leu Gln Val Thr Thr Thr36537375Arg Asn Ile Thr Pro Gly Phe Phe MET Asp Trp Phe Cys Gly Gly38038390Leu Asn Tyr Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro MET MET Pro Arg395400405His Asn Leu Gln Lys Val Asn Pro Leu Val Lys Ser Leu Cys Lys410415420Gln Tyr Asp Val Arg Phe His Glu Thr Gly Phe Tyr Arg Gly Leu42543435Val Glu Val Val Asp Glu Leu Ala Asp Ile Ser Lys Glu Phe Leu440445450Leu Glu Phe Pro Ala MET455實施例3 酵母表達載體pYES2-PinD6的構建用HindI和》3aI從實施例1中構建的含有PinD6片段的pMD18_T載體切下該片 段，與相同限制性內切酶酶切的酵母表達載體pYES2連接。連接產物轉化大腸桿菌XLlO感 受態細胞，然後在含氨節青黴素的し8固體平板上培養，對菌落進行？〔8蹄選、鑑定和質粒 DNA的酶切分析，獲得帶有？11106的酵母表達載體り￥￡52- 11106。實施例4 酵母誘導表達PinD61.利用醋酸鋰法將酵母表達載體pYES2-PinD6轉化到釀酒酵母YPH500中。2.取陽性酵母克隆於10爪1 SC-U(Synthetic Complete medium without Uracil) 液體培養基中，28で，過夜培養。3.次日，取1. 5ml過夜培養物接種到25ml新鮮的SC_U培養液中(含1 % NP40)， 28°C，180rpm。4.當培養液0D600到0. 4-0. 6之間，添加Iml 50%半乳糖和0. 5M 25 U 1脂肪酸 鈉鹽底物LA或ALA，22°C，180rpm,繼續培養2天。
實施例5 馬鈴薯致病疫黴Δ 6去飽和酶PinD6活性測定1.離心收集誘導後的酵母培養物，先後用含1 %和0. 5% NP40去離子水衝洗一次， 然後再用去離子水衝洗一次，用氮氣吹乾；2.添加Iml甲基化溶液(含甲醇0. 85ml，2，2_ 二甲氧丙烷0. 05ml，鹽酸0. Iml)， 85°C甲基化反應1小時；3.冷卻後，添加氯化鈉1ml，正己烷0. 5ml，漩渦振蕩，然後室溫放置10分鐘或更長時間；4.離心取上層液相。由山東省分析測試中心進行氣相色譜分析，結果表明，在酵母中誘導表達的Δ 6去飽和酶PinD6能夠將添加在培養液中的脂肪酸鈉鹽底物LA和ALA分別催化生成GLA和SDA，平均轉化率分別為6. 9%和2. 2 %，證明該酶具有Δ 6去飽和酶活性。
權利要求
1.一個馬鈴薯致病疫黴△ 6去飽和酶基因PinD6，其特徵在於其具有核苷酸序列如 SEQ ID NO. 1所示；該核苷酸序列編碼胺基酸序列如SEQ ID NO. 2所示。
2.根據權利要求1所述的一個馬鈴薯致病疫黴△6去飽和酶基因PinD6的應用，其特徵在於該基因所編碼的蛋白能夠將超長鏈多不飽和脂肪酸亞油酸和亞麻酸分別轉化成 Y-亞麻酸和十八碳四烯酸，可以用在植物特別是油料作物中生產魚油。
全文摘要
本發明涉及馬鈴薯致病疫黴Δ6去飽和酶基因PinD6的克隆及其應用，屬於分子生物學和生物技術領域。通過RT-PCR的方法，在馬鈴薯致病疫黴中克隆到一個去飽和酶基因的cDNA片段。經過酵母表達鑑定，確定它是一個新的Δ6去飽和酶基因，其編碼的Δ6去飽和酶能夠將亞油酸和亞麻酸分別轉化成γ-亞麻酸和十八碳四烯酸，可以用於植物特別是油料作物中生產魚油。
文檔編號C12N9/02GK102191257SQ20111009105
公開日2011年9月21日 申請日期2011年4月4日 優先權日2011年4月4日
發明者亓寶秀, 孫全喜, 李新徵 申請人:山東農業大學